一、GPC3基因和肝癌研究進(jìn)展（論文文獻(xiàn)綜述）
曹獻(xiàn)[1]（2021）在《肝寧方對(duì)小鼠肝癌癌前病變炎癥微環(huán)境影響的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究表明目的:肝寧方在實(shí)際臨床應(yīng)用中,對(duì)肝病患者具有良好的治療效果,具有研究價(jià)值和意義,本研究目的是通過研究肝寧方對(duì)二乙基亞硝胺（diethylnitrosamine,DEN）聯(lián)合四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）誘導(dǎo)建立原發(fā)性肝癌癌前病變小鼠模型炎癥微環(huán)境的影響,以期闡明肝寧方對(duì)肝癌癌前病變的防治作用機(jī)制。方法:60只周齡6-8周,重量為（18±22）g的KM雄性小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為四組（15只）:對(duì)照組、模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組。除對(duì)照組,其余各組進(jìn)行CCl4溶液灌胃和DEN腹腔注射聯(lián)合造模,同時(shí)每天進(jìn)行藥物灌胃。于16周末（肝癌癌前病變期）將小鼠進(jìn)行禁食取材,眼眶采血,摘取脾臟、肝臟。記錄各組間肝的外觀、癌前結(jié)節(jié)的數(shù)目及大小;稱量肝臟、脾臟、體重;檢測小鼠血清肝功能ALT、AST、GGT、TBIL水平;肝臟病理檢查;酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法檢測血清中小鼠血清IL-6、IL-1β、AFP、TNF-α、GPC-3、TSGF和Ki67含量;蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot,WB）檢測TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.一般情況:與對(duì)照組相比,模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組在造模第4周開始出現(xiàn)進(jìn)食量減少,精神萎靡,掉毛,急躁易怒等表現(xiàn),第8周部分出現(xiàn)腹水,尾部出現(xiàn)皮下出血點(diǎn),行動(dòng)遲緩。與模型組相比,肝寧方組和護(hù)肝片組程度均好于模型組,一般狀態(tài)好。2.體重指數(shù):與對(duì)照組相比,模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組體重顯著下降（P<0.01）;與模型組相比,肝寧方組、護(hù)肝片組體重顯著增加（P<0.05）;肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù):與對(duì)照組相比,模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著增加（P<0.01）,與模型組相比,肝寧方組肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著下降（P<0.01）,護(hù)肝片組肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)下降（P<0.05）。3.病理:小鼠肝臟形態(tài),模型組小鼠肝臟組織質(zhì)地粗糙,色澤暗沉,表面密布大小不等白色增生結(jié)節(jié)（0.2-3cm）肉眼可見,與模型組相比,肝寧方組和護(hù)肝片組,結(jié)節(jié)分布密度低,直徑小,肝臟色澤較好。肝組織HE染色,模型組小鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)水腫、壞死,成巢狀,細(xì)胞核出現(xiàn)核異型性（核大、雙核、多核）,細(xì)胞密度增高,匯管區(qū)間質(zhì)增生,纖維組織增多;結(jié)節(jié)包膜明顯,與周邊肝臟組織界限清楚,肝小梁結(jié)構(gòu)不規(guī)則。與模型組相比,肝寧方組細(xì)胞變性壞死程度輕,纖維組織增生程度較輕,細(xì)胞較少出現(xiàn)核異型,護(hù)肝片介于兩者間。4.肝功能:與對(duì)照組相比,模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組肝功能ALT、AST、GGT、TBIL顯著升高（P<0.01）,與模模型組相比,肝寧方組肝功能ALT、AST、GGT、TBIL顯著降低（P<0.01）,護(hù)肝片組肝功能ALT、AST、GGT、TBIL降低（P<0.05）。5.炎癥因子:與對(duì)照組相比模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組IL-6、IL-1β、TNF-α顯著升高（P<0.01）,與模型組相比肝寧方組IL-6、IL-1β、TNF-α水平顯著降低（P<0.01）,護(hù)肝片組IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低（P<0.05）。6.腫瘤相關(guān)因子:與對(duì)照組相比模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組AFP、GPC-3、TSGF和Ki67顯著增高（P<0.01）,與模型組相比肝寧方組、護(hù)肝片組AFP、GPC-3、TSGF和Ki67顯著降低（P<0.05）。7.與對(duì)照組相比模型組、肝寧方組、護(hù)肝片組TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)顯著增加（P<0.01）,與模型組相比,肝寧方和護(hù)肝片組TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)顯著下降（P<0.05）。結(jié)論:1.肝寧方對(duì)DEN誘導(dǎo)的小鼠肝癌癌前病變有抑制作用2.肝寧方可抑制TLR4、NF-κB的表達(dá),改善肝癌癌前病變的炎癥微環(huán)境,其可能通過TLR4/NF-KB信號(hào)通路發(fā)生作用。
陳施翰[2]（2020）在《OATP1B3在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性及生物學(xué)功能分析》文中研究指明背景和目的:肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是肝癌中最常見的類型,發(fā)病率和死亡率極高。HCC本身是一個(gè)多步驟、多階段發(fā)展的疾病,涉及到的調(diào)控機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜,大量基因的異常表達(dá)在HCC進(jìn)展過程中發(fā)揮著重要作用。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B3（organic anion transporter polypeptide 1B3,OATP1B3）是在正常肝組織上表達(dá)的一種膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可轉(zhuǎn)運(yùn)激素、藥物等內(nèi)外源性物質(zhì)。大量研究已報(bào)道OATP1B3在胰腺癌、結(jié)直腸癌、膽管癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中的異常表達(dá)可以作為患者預(yù)后的生物標(biāo)志物,并參與部分腫瘤進(jìn)展。在HCC中,OATP1B3的表達(dá)水平與腫瘤分化程度顯著相關(guān),提示OATP1B3差異表達(dá)可能與HCC進(jìn)展有密切聯(lián)系。因此,本研究將探討OATP1B3在HCC中的表達(dá)與臨床病理學(xué)因素和預(yù)后的相關(guān)性,及其對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響和作用機(jī)制初步探討。方法:1.查詢TCGA數(shù)據(jù)庫,利用Kaplan-Meier法分析OATP1B3 mRNA與302例HCC患者的無瘤生存率和總體生存率的相關(guān)性。免疫組織化學(xué)染色法檢測131例HCC患者癌組織以及89例癌旁正常組織中OATP1B3的表達(dá)情況。qRT-PCR檢測30對(duì)新鮮HCC癌與配對(duì)癌旁正常組織中OATP1B3 mRNA的表達(dá)水平。Western blot檢測34對(duì)新鮮HCC癌與配對(duì)癌旁正常組織中OATP1B3蛋白表達(dá)水平。采集131例HCC患者的臨床病理資料和隨訪信息。χ2檢驗(yàn)分析OATP1B3表達(dá)與HCC患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。通過Kaplan-Meier法分析OATP1B3對(duì)HCC患者預(yù)后評(píng)估的價(jià)值。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析影響HCC患者生存的獨(dú)立預(yù)后因素。2.體外培養(yǎng)MHCC97-H、SMMC-7721、Huh7、Hep G2和L02細(xì)胞,qRT-PCR檢測OATP1B3 mRNA在上述5株細(xì)胞中的表達(dá)情況。選擇OATP1B3 mRNA表達(dá)水平較高的SMMC-7721細(xì)胞構(gòu)建OATP1B3慢病毒干擾模型,對(duì)OATP1B3 mRNA表達(dá)水平較低的Huh7細(xì)胞構(gòu)建OATP1B3質(zhì)粒過表達(dá)模型,并通過qRT-PCR和Western blot技術(shù)對(duì)OATP1B3干擾和過表達(dá)效果進(jìn)行驗(yàn)證。將構(gòu)建好的SMMC-7721和Huh7細(xì)胞進(jìn)行MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察OATP1B3對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力的影響。Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察OATP1B3對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲與遷移能力的影響。利用流式細(xì)胞儀檢測OATP1B3對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡與周期的影響。3.構(gòu)建OATP1B3穩(wěn)定高表達(dá)的Hep G2細(xì)胞和穩(wěn)定低表達(dá)的SMMC7721細(xì)胞。Western blot檢測上述細(xì)胞中OATP1B3對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表達(dá)和Wnt/β-catenin/c-Myc通路活化的影響。將構(gòu)建的Hep G2和SMMC7721細(xì)胞注入裸鼠肝臟包膜下,建立裸鼠肝臟原位癌種植模型,35天后MRI下觀察裸鼠肝臟腫瘤轉(zhuǎn)移情況。記錄各組裸鼠的存活時(shí)間,裸鼠死亡后,解剖并取下肝臟,行肝臟表面大體觀察。最后,將裸鼠肝臟腫瘤組織切片,行HE染色并鏡下觀察。結(jié)果:1.根據(jù)TCGA數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果顯示,OATP1B3 mRNA高表達(dá)的HCC患者總體生存率和無瘤生存率均顯著高于低表達(dá)者（63.9%vs 26.6%,P=0.005;27.6%vs 13.0%,P=0.017）。免疫組織化學(xué)染色法檢測結(jié)果顯示,與癌旁正常組織（25.8%,23/89）相比,OATP1B3在HCC癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)（59.5%,78/131）（P<0.0001）。OATP1B3的表達(dá)水平與腫瘤大小、復(fù)發(fā)、腫瘤分化程度、TNM分期顯著相關(guān)（P<0.05）,而與年齡、性別、腫瘤包膜、HBs Ag、肝硬化、腫瘤數(shù)目、血管侵襲、血清AFP水平無相關(guān)性。OATP1B3高表達(dá)的HCC患者總體生存率和無瘤生存率均顯著高于低表達(dá)者（33.0%vs 12.9%,P=0.001;18.8%vs 5.3%,P<0.0001）。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示OATP1B3、血管侵襲、TNM分期是影響HCC患者總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因素（P<0.05）;OATP1B3和TNM分期是影響HCC患者無瘤生存率的獨(dú)立預(yù)后因素（P<0.05）。2.OATP1B3 mRNA在人永生化正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞和肝癌細(xì)胞SMMC-7721、MHCC97-H、Huh7、Hep G2細(xì)胞中的表達(dá)量依次降低。成功構(gòu)建并轉(zhuǎn)染OATP1B3干擾的SMMC-7721細(xì)胞模型和OATP1B3過表達(dá)的Huh7細(xì)胞模型。MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,上調(diào)OATP1B3可抑制肝癌細(xì)胞增殖和克隆形成率,下調(diào)OATP1B3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和克隆形成率,并呈時(shí)間依賴性。Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,上調(diào)OATP1B3可抑制肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲,下調(diào)OATP1B3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,上調(diào)OATP1B3可降低肝癌細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力,下調(diào)OATP1B3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力。細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,上調(diào)OATP1B3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡,下調(diào)OATP1B3可抑制肝癌細(xì)胞凋亡。細(xì)胞周期結(jié)果顯示,上調(diào)OATP1B3可縮短肝癌細(xì)胞S期,下調(diào)OATP1B3可延長肝癌細(xì)胞S期。3.利用慢病毒構(gòu)建并成功轉(zhuǎn)染Hep G2和SMMC-7721細(xì)胞,分別建立OATP1B3穩(wěn)定過表達(dá)和干擾細(xì)胞模型。上調(diào)OATP1B3表達(dá)后,上皮相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)增加,間質(zhì)相關(guān)標(biāo)志物Vimentin、N-cadherin以及下游蛋白β-catenin和c-Myc表達(dá)降低。下調(diào)OATP1B3表達(dá)后,上皮相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)降低,間質(zhì)相關(guān)標(biāo)志物Vimentin和N-cadherin以及下游蛋白β-catenin和c-Myc表達(dá)增加。裸鼠MRI檢查和生存時(shí)間統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,上調(diào)OATP1B3表達(dá)后,腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力被抑制,裸鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶數(shù)量較少,生存時(shí)間較長;下調(diào)OATP1B3表達(dá)后,腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng),裸鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)移灶較多,生存時(shí)間較短。最后,各組腫瘤組織病理學(xué)切片,HE染色可見大量癌巢。結(jié)論:1.OATP1B3在HCC中表達(dá)下調(diào),其表達(dá)水平與患者腫瘤大小、復(fù)發(fā)、腫瘤分化程度和TNM分期顯著相關(guān),再結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫的分析結(jié)果,提示OATP1B3可作為HCC患者預(yù)后判斷的腫瘤生物標(biāo)志物。2.OATP1B3可抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,縮短細(xì)胞S期比例。3.OATP1B3可能是通過Wnt/β-catenin/c-Myc通路抑制肝癌細(xì)胞的EMT過程。在裸鼠體內(nèi),OATP1B3可抑制肝臟原位種植瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。綜上,OATP1B3可能通過多種途徑在HCC中發(fā)揮抑癌作用,并可作為HCC患者預(yù)后判斷的潛在腫瘤生物標(biāo)志物。
黃成[3]（2020）在《基于生物信息學(xué)分析的肝細(xì)胞癌易感生物靶點(diǎn)篩選》文中研究表明目的:挖掘肝細(xì)胞癌基因芯片數(shù)據(jù),篩選出肝細(xì)胞癌相關(guān)的易感生物靶點(diǎn)分子,初步探索肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的生物功能富集通路,構(gòu)建肝細(xì)胞癌的疾病模塊并進(jìn)行功能分析,為肝細(xì)胞癌患者的病因研究與早期診斷提供依據(jù)。方法:（1）從GEO數(shù)據(jù)庫中檢索出肝細(xì)胞癌基因芯片數(shù)據(jù)集GSE14520,數(shù)據(jù)來自平臺(tái)GPL3921。該數(shù)據(jù)集為人類來源的全基因組RNA表達(dá)芯片,共選取225例肝細(xì)胞癌組織標(biāo)本和220例癌旁正常組織標(biāo)本進(jìn)行后續(xù)研究。（2）利用GEO2R在線分析平臺(tái)對(duì)基因芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理,以|log2FC|>1、P.adjust<0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因。（3）利用DAVID在線分析工具對(duì)篩選出的前250位肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。（4）應(yīng)用String在線分析平臺(tái)構(gòu)建差異表達(dá)基因的蛋白-蛋白交互作用網(wǎng)絡(luò),并利用Cytoscape3.6.1軟件對(duì)蛋白交互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化分析,使用Cytoscape軟件中的MCODE應(yīng)用程序?qū)Φ鞍捉换プ饔镁W(wǎng)絡(luò)進(jìn)行疾病模塊化分析,利用DAVID在線分析平臺(tái)對(duì)疾病模塊中的差異基因進(jìn)行生物通路富集分析,得到各個(gè)模塊所代表的生物學(xué)功能。（5）使用CytoHubba對(duì)蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行核心基因篩選,并根據(jù)連通度（Degree）大小進(jìn)行排序,篩選出核心基因。（6）通過前期的生物信息學(xué)分析和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫檢索,對(duì)得到的肝細(xì)胞癌易感基因與疾病發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系進(jìn)行Meta分析,綜合分析既往研究,達(dá)到生物信息學(xué)研究補(bǔ)充和驗(yàn)證的目的,以期更全面的得到易感基因與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展之間關(guān)系的分析結(jié)果。結(jié)果:（1）對(duì)GSE14520數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析,利用GEO2R篩選得到排序前250位的肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因,其中上調(diào)基因122個(gè),下調(diào)基因128個(gè)。（2）GO功能生物過程分析顯示肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因在有絲分裂細(xì)胞周期過程、細(xì)胞周期過程、細(xì)胞分裂、有絲分裂細(xì)胞周期相變、細(xì)胞對(duì)鋅離子的反應(yīng)、細(xì)胞周期調(diào)控、核分裂,染色體組織通路等過程中發(fā)揮作用;KEGG富集通路顯示肝細(xì)胞癌差異基因在礦物質(zhì)吸收、細(xì)胞周期、DNA復(fù)制、視黃醇代謝、代謝途徑、藥物代謝-其他酶、咖啡因代謝、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂、藥物代謝-細(xì)胞色素P450及其對(duì)異生物的代謝通路等生物途徑中起調(diào)節(jié)作用。（3）構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),共得到195個(gè)基因,通過CytoHubba對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行核心基因篩選,提示CDK1（Degree Score=63）、RFC4（Degree Score=59）、CDC20（Degree Score=58）和CCNB1（Degree Score=57）等基因可能在肝細(xì)胞癌的發(fā)生過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。（4）通過Cytoscape3.6.1軟件的MCODE應(yīng)用程序進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)模塊分析顯示,共有四個(gè)主要的疾病模塊,其中MCODE得分最高的疾病模塊A（MCODE Score=41.143）主要與細(xì)胞周期、DNA復(fù)制、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂、孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟、p53信號(hào)通路和人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ型感染通路相關(guān)。（5）通過Meta分析,中國人群CYP2E1基因型頻率分布與患肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)增加無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián),合并OR=0.67（95%CI:0.39,1.14）,Z=1.48,P=0.14;中國人群PTTG1高表達(dá)與患肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān),且這種關(guān)聯(lián)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,合并OR=7.94（95%CI:1.22,51.85）,Z=2.16,P=0.03。結(jié)論:（1）肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展可能與細(xì)胞周期和有絲分裂的異常進(jìn)程相關(guān),其中CDK1、RFC4、CDC20和CCNB1等基因可能在肝細(xì)胞癌的進(jìn)展中起著較重要作用,可作為肝細(xì)胞癌后續(xù)研究潛在的易感生物靶點(diǎn)。（2）PTTG1基因高表達(dá)可能是肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素。
孟盼盼[4]（2020）在《Glypican-3與FAT1的互作鑒定及其促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移的研究》文中提出
王艷秋[5]（2020）在《基于差異網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)模型篩選肝癌生物分子標(biāo)志物的研究》文中認(rèn)為肝癌（Liver Cancer）有多種類型,常見高發(fā)類型為原發(fā)性肝癌中的肝細(xì)胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）,其發(fā)病通常難以察覺,且一旦發(fā)病則進(jìn)展迅速,容易錯(cuò)過最佳診治時(shí)間而造成癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移或進(jìn)入局部晚期,因此治療起來很困難,并且預(yù)后效果很差,是威脅人們生命健康的重大癌癥。目前其致病機(jī)制不明確,普遍認(rèn)為是由多種致病因素共同作用導(dǎo)致的結(jié)果。鑒于肝癌的發(fā)病特點(diǎn),對(duì)疑似患者的早期診斷十分重要,目前我國的肝癌診斷主要是依據(jù)影像學(xué)檢查與血清分子標(biāo)志物甲胎蛋白檢測,但這兩種方法都存在一些缺陷。近年來也有一些處于研究階段的潛在HCC生物標(biāo)志物,但大都存在特異性低、敏感性低的缺點(diǎn),未達(dá)到理想的檢測效果。因此,尋找新的高敏高特異生物標(biāo)志物來輔助HCC相關(guān)臨床診斷與檢查具有重大的社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益,已是刻不容緩。癌癥因其致病因素多且復(fù)雜,被認(rèn)為是由多生物分子,以及遺傳因素與環(huán)境因素等相互作用而造成的“系統(tǒng)病”,這意味著基于復(fù)雜系統(tǒng)與復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的背景篩選生物標(biāo)志物的正確性。因此本文將基因表達(dá)數(shù)據(jù)結(jié)合基因間相互作用（Gene-Gene Interaction,GGI）網(wǎng)絡(luò),通過研究在疾病在發(fā)病過程中,基因等生物分子在相互作用網(wǎng)絡(luò)中拓?fù)湮恢玫娘@著性變化來篩選生物標(biāo)志物,并對(duì)篩選出的候選標(biāo)志物在多個(gè)層次上進(jìn)行了驗(yàn)證。除此之外,還將本文方法與基于不同網(wǎng)絡(luò)組分篩選生物標(biāo)志物的方法進(jìn)行了對(duì)比研究,給出了對(duì)今后生物標(biāo)志物研究方向的展望。全文主要研究內(nèi)容如下:（1）構(gòu)建了一種篩選生物標(biāo)志物的新模型,主要利用基因表達(dá)數(shù)據(jù)和人類背景基因間相互作用網(wǎng)絡(luò),構(gòu)建疾病與正常兩個(gè)狀態(tài)下特異的基因間相互作用網(wǎng)絡(luò),對(duì)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)進(jìn)行整理與聚類,去掉功能重復(fù)的參數(shù)并選擇本文適用的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)。然后基于基因等生物分子在兩個(gè)基因間相互作用網(wǎng)絡(luò)中所處拓?fù)湮恢玫牟町?挑選出網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)差異變化顯著的基因,對(duì)這些基因構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行聚類,選擇在機(jī)器學(xué)習(xí)模型中分類效果最好的模塊,將該模塊包含的33個(gè)基因作為候選生物標(biāo)志物,稱之為TopMarker。最后對(duì)候選生物標(biāo)志物進(jìn)行功能富集分析,以及其它層次上的有效性驗(yàn)證,結(jié)果表明篩選出的33個(gè)TopMarker具有很好的分類能力,并且與肝癌致病過程存在密切的關(guān)系。（2）為進(jìn)一步說明本文方法的合理性與優(yōu)越性,在網(wǎng)絡(luò)組分的層次上進(jìn)行了不同方法的對(duì)比研究。列舉出網(wǎng)絡(luò)研究中常見的網(wǎng)絡(luò)組分,如節(jié)點(diǎn)、邊、派系、通路,分別基于這些不同的網(wǎng)絡(luò)組分進(jìn)行生物標(biāo)志物的篩選,將所有方法篩選的結(jié)果與本文方法的篩選結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析,進(jìn)一步證明了本文方法的正確性與結(jié)果的可信性。
尹子葉[6]（2020）在《基于Wnt/β-catenin通路的GPC3受體應(yīng)激HepG2細(xì)胞凋亡研究》文中提出隨著人民經(jīng)濟(jì)水平的提高和飲食方式的改變,肝癌已成為一種非常普遍的惡性腫瘤疾病,其中原發(fā)性肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）占所有肝癌的85%以上,而發(fā)生在中國的HCC病例占世界總量的一半以上,已對(duì)人們的身心健康和生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴(yán)重影響。迄今為止,如何對(duì)HCC進(jìn)行有效的預(yù)防和治療,仍然是社會(huì)所關(guān)注的一個(gè)重要科學(xué)問題。因此,開展HCC早期診斷和治療的相關(guān)研究具有重要意義和價(jià)值。作為HCC的模式細(xì)胞之一,HepG2細(xì)胞系的靶向調(diào)控已成為眾多研究者開展HCC預(yù)防和治療策略的基礎(chǔ)。本論文應(yīng)用課題組創(chuàng)新合成的多枝狀金納米海膽星（Multi-branched sea-urchin like gold nanostars,MSGNS）與Anti-Glypican 3抗體組裝的納米顆粒聚合體（MSGNS-aGPC3）,探究HepG2細(xì)胞在其膜表面受體Glypican-3（GPC3）被持續(xù)活化下的應(yīng)激效應(yīng),解釋了基于GPC3受體通路引起HepG2細(xì)胞凋亡的機(jī)制。主要研究內(nèi)容如下:（1）采用改良的種子介導(dǎo)生長法合成了一種具有細(xì)胞膜吸附性的MSGNS。通過透射電鏡、紫外、納米粒度等表征了MSGNS納米材料在不同合成階段的形貌和特性,并分析了MSGNS的生長機(jī)理。采用SH-PEG對(duì)MSGNS進(jìn)行修飾,改善了該材料的穩(wěn)定性和生物相容性,借助CCK-8測試了MSGNS-PEG的細(xì)胞毒性,發(fā)現(xiàn)MSGNS-PEG具有低細(xì)胞毒性。此改良方法與傳統(tǒng)的金種子生長合成方案相比,時(shí)間更短,步驟更簡便,且合成的多枝狀金納米顆粒無表面活性劑,利于材料的后期修飾和應(yīng)用,為后續(xù)偶聯(lián)Anti-GPC3抗體的實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。（2）基于MSGNS-aGPC3納米聚合體在HepG2細(xì)胞膜上的吸附性研究其對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響。將MSGNS-PEG與Anti-GPC3抗體共孵育形成MSGNS-aGPC3,將MSGNS-PEG和MSGNS-aGPC3分別與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)進(jìn)行GPC3受體應(yīng)激凋亡研究。結(jié)果顯示:相較于MSGNS-PEG,MSGNS-aGPC3可以長時(shí)間吸附于細(xì)胞膜上,持續(xù)刺激細(xì)胞膜表面受體GPC3。采用原位熒光觀察發(fā)現(xiàn),MSGNS-aGPC3刺激HepG2細(xì)胞72 h后,HepG2細(xì)胞大量凋亡。采用Western blotting技術(shù)分析MSGNS-aGPC3刺激下HepG2細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路上的β-catenin、Cyclin-D1、GPC3蛋白含量的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn):在GPC3受體刺激下,β-catenin、Cyclin-D1、GPC3的表達(dá)相比對(duì)照組均顯著性下降,且GPC3表達(dá)相比MSGNS-PEG組顯著性下降。此結(jié)果表明,與MSGNS偶聯(lián)的Anti-GPC3抗體保持了其完整的生物活性,且MSGNS-aGPC3通過下調(diào)HepG2細(xì)胞Wnt/β-catenin通路上β-catenin、Cyclin-D1、GPC3的表達(dá)誘發(fā)細(xì)胞凋亡。（3）為深入分析Wnt/β-catenin通路上GPC3受體應(yīng)激引起HepG2細(xì)胞凋亡的機(jī)制,采用KYA1797K和WAY262611分別下調(diào)和上調(diào)Wnt/β-catenin通路的表達(dá)。在不同干預(yù)條件下將MSGNS-aGPC3與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng),通過對(duì)細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）含量、細(xì)胞活性氧含量（Reactive oxygen species,ROS）、Wnt/β-catenin通路上相關(guān)蛋白含量進(jìn)行檢測分析,探討了在Wnt/β-catenin通路被活化或抑制的條件下,GPC3持續(xù)活化后的HepG2細(xì)胞蛋白變化和能量差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在Wnt/β-catenin被阻斷時(shí),MSGNS-aGPC3刺激HepG2細(xì)胞后,其β-catenin表達(dá)顯著下降,GPC3表達(dá)無顯著性差異,ATP含量和ROS含量均顯著性下降,推測當(dāng)Wnt/β-catenin通路被阻斷,GPC3受體應(yīng)激信號(hào)不表達(dá)。繼而采用流式細(xì)胞檢測儀和CCK-8試劑盒檢測Wnt/β-catenin通路被阻斷時(shí)GPC3應(yīng)激下HepG2細(xì)胞的凋亡情況,發(fā)現(xiàn)抑制刺激組和空白組的凋亡率無顯著差異,此結(jié)果表明當(dāng)Wnt/β-catenin通路被阻斷后,繼續(xù)刺激GPC3受體來調(diào)控HCC無法達(dá)到使肝癌細(xì)胞凋亡的效果。
譚曼曼[7]（2020）在《新型多功能金納米棒介導(dǎo)的腫瘤靶向Glypican-3基因沉默聯(lián)合光熱效應(yīng)治療肝癌的應(yīng)用研究》文中研究說明研究背景:肝細(xì)胞癌（HCC）是世界上致死率最高的三大癌癥之一。HCC早期診斷困難,通常發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期,且晚期肝細(xì)胞癌惡行程度高,終末期尚缺乏有效的治療方式,因此總體預(yù)后很差。所以近些年來人們一直致力于開發(fā)抗肝癌的新型治療方案。目的:構(gòu)建一種具有靶向肝癌、攜帶siRNA、同時(shí)保留金納米棒光熱效應(yīng)的三重功效為一體的多功能納米系統(tǒng)GAL-GNR（GAL-MUA-PEI-GNR）。研究該納米系統(tǒng)介導(dǎo)的靶向沉默小鼠肝癌細(xì)胞（Hepa1-6）中的GPC-3基因及對(duì)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)功能影響。研究GAL-GNR的靶向性和光熱效應(yīng),并確定GAL-GNR-siRNA介導(dǎo)的GPC-3基因沉默聯(lián)合光熱效應(yīng)對(duì)小鼠肝癌的治療效果。方法:1.GAL-GNR納米載體的構(gòu)建:采用經(jīng)典的種子溶液生長法合成金納米棒,并對(duì)金納米棒進(jìn)行功能化修飾。通過紫外可見光譜、透射電子顯微鏡、核磁共振氫譜、動(dòng)態(tài)光散射粒度儀檢測功能化修飾前后的金納米棒。2.凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)檢測GAL-GNR對(duì)siRNA的加載能力和在血清中GAL-GNR對(duì)siRNA的保護(hù)作用。3.MTT法和Calcein-AM/PI雙染色法檢測功能化修飾前后的金納米棒的細(xì)胞毒性。4.紅外激光照射法檢測GAL-GNR的光熱轉(zhuǎn)換能力。5.利用Cy3-siRNA檢測GAL-GNR在Hapa1-6細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,qPCR檢測GAL-GNR-siGPC-3對(duì)Hapa1-6細(xì)胞的沉默效果。6.乳糖酸靶向競爭實(shí)驗(yàn)檢測半乳糖結(jié)構(gòu)對(duì)肝癌細(xì)胞的靶向作用。7.MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell、集落克隆檢測沉默GPC-3基因后對(duì)Hepa1-6細(xì)胞增值、侵襲、遷移及克隆形成能力的影響。8.冰凍切片法觀察GAL-GNR-Cy3-siGAPDH在體內(nèi)對(duì)腫瘤靶向作用。9.構(gòu)建C57BL/6小鼠肝癌荷瘤模型,采用尾靜脈注射給藥,觀察小鼠肝癌的治療效果。10.檢測小鼠血清中AST/GOT、ALT/GPT指標(biāo)來評(píng)價(jià)GAL-GNR在小鼠體內(nèi)的肝臟毒性;檢測小鼠血清中肌酐、尿素指標(biāo)來評(píng)價(jià)GAL-GNR在小鼠體內(nèi)的腎臟毒性;檢測小鼠的體重變化評(píng)價(jià)GAL-GNR對(duì)小鼠生命體征影響;HE染色法評(píng)價(jià)GAL-GNR對(duì)小鼠心肝脾肺腎主要臟器的影響。結(jié)果:1.與未經(jīng)修飾的GNR相比,TEM結(jié)果顯示GAL-GNR的尺寸無明顯改變,并且仍然具有良好的分散性;在紫外可見吸收光譜中GAL修飾后的GNR與單獨(dú)的GNR相比發(fā)生了明顯紅移;核磁共振氫譜顯示GNR成功的連接上GAL分子。2.凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)表明GAL-GNR與siRNA的最佳負(fù)載比例為6∶1（質(zhì)量比）;GAL-GNR可有效保護(hù)siRNA在血清中不被降解。3.MTT和Calcein-AM/PI雙染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GAL-GNR的細(xì)胞毒性低,具有更好的生物相容性。4.紅外激光照射實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GAL-GNR具有優(yōu)秀的光熱轉(zhuǎn)換能力,其光熱轉(zhuǎn)換能力與材料濃度以及平均光照密度相關(guān)。5.紅色熒光圖像結(jié)果顯示在GAL-GNR用量為30μg/mL時(shí)可達(dá)到最佳轉(zhuǎn)染率,與陽性對(duì)照組結(jié)果相似,沉默效率約為75%。6.乳糖酸靶向競爭實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示乳糖酸預(yù)處理可使GAL-GNR/Cy3-siRNA與肝癌細(xì)胞的結(jié)合能力明顯變?nèi)酢?.GAL-GNR-siGPC-3可有效沉默肝癌細(xì)胞內(nèi)的GPC-3基因,顯著抑制小鼠肝癌腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和克隆形成能力。8.組織冰凍切片結(jié)果顯示,尾靜脈注射GAL-GNR-Cy3-siGAPDH 24h后,GAL-GNR-Cy3-siGAPDH可明顯蓄積至腫瘤組織。9.體內(nèi)治療結(jié)果顯示,GPC-3基因沉默和光熱效應(yīng)能夠協(xié)同抑制腫瘤的生長和腫瘤體積,減輕腫瘤質(zhì)量。10.在腫瘤治療過程中小鼠體重?zé)o明顯減輕;血清中GOT、GPT、肌酐、尿素指標(biāo)結(jié)果顯示GAL-GNR具有較低的肝腎毒性;HE染色結(jié)果顯示長時(shí)間的GAL-GNR治療未發(fā)現(xiàn)對(duì)主要臟器的明顯損傷,以上結(jié)果表明GAL-GNR具有良好的生物相容性。結(jié)論:1.本研究成功構(gòu)建了一種集腫瘤靶向、基因沉默及光熱轉(zhuǎn)化為一體的新型納米基因載體GAL-GNR-siRNA。2.GAL-GNR可以負(fù)載siRNA,有效保護(hù)其免受降解,且能有效地把siRNA導(dǎo)入Hepa1-6細(xì)胞中起到沉默GPC-3基因的效果,并能顯著抑制肝癌細(xì)胞的增值、侵襲、遷移和克隆形成能力。3.GAL-GNR-siGPC-3介導(dǎo)的siRNA基因沉默聯(lián)合光熱療法可以協(xié)同治療肝癌荷瘤小鼠。
譚根梅[8]（2020）在《血清磷脂酰肌醇聚糖3、Dickkopf相關(guān)蛋白1在原發(fā)性肝癌診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:通過對(duì)乙肝相關(guān)原發(fā)性肝癌、良性肝?。ㄒ腋胃斡不⒙砸倚透窝祝┗颊哐逯械牧字＜〈季厶?（glypican-3,GPC3）、Dickkopf相關(guān)蛋白1（dickkopf related protein 1,DKK1）及臨床中常用的腫瘤標(biāo)志物（甲胎蛋白、脫-γ-羧基凝血酶原（des-γ-carboxy prothrombin,DCP）、糖類抗原199、癌胚抗原）的表達(dá)水平進(jìn)行分析,評(píng)估GPC3、DKK1單獨(dú)或聯(lián)合臨床常用肝癌標(biāo)志物在乙肝相關(guān)性肝癌中的診斷價(jià)值,并進(jìn)一步分析GPC3、DKK1在肝癌TACE治療療效及患者的預(yù)后判斷中的作用。方法:收集華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院感染科2019年3月至2019年9月入院的乙肝相關(guān)性肝病患者的臨床資料及血清樣本。對(duì)篩選出的75例患者,包括原發(fā)性肝癌、肝硬化及慢性肝炎患者的臨床資料及血清中常見腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行分析。同時(shí)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）測定患者血清中GPC3、DKK1的表達(dá)水平,分析各組患者的臨床資料及血清中GPC3、DKK1等指標(biāo)的表達(dá)差異。結(jié)果:1、肝癌初治患者與良性肝病患者相比,年齡、性別、BMI、患者飲酒情況、疾病史（高血壓、糖尿病史）、Child評(píng)分、WBC、Hb、PLT、ALT、TBIL、ALB及膽堿酯酶的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）;肝癌初治患者較良性肝病患者吸煙人數(shù)更多,HBV DNA值更高,γ-GT、ALP的表達(dá)水平更高,而PT更低、PTA更高（P<0.05）。肝癌初治患者與多次經(jīng)TACE治療患者相比,年齡、性別、BMI、患者飲酒情況、肝硬化情況、疾病史（高血壓、糖尿病史）、Child評(píng)分、WBC、Hb、PLT、PTA、ALT、AST、TBIL、ALB、ALP的表達(dá)水平無顯著差異（P>0.05）;肝癌初治患者較多次經(jīng)TACE治療患者HBVDNA定量值更高,膽堿酯酶表達(dá)水平更低（P<0.05）。2、血清GPC3在肝癌初治患者、良性肝病患者中的表達(dá)水平分別為873.8（539.8-1048.8）pg/ml、200.5（146.1-237.1）pg/ml;血清DKK1在肝癌初治患者、良性肝病患者中的表達(dá)水平分別為3.4（2.6-5.4）ng/ml、2.9（2.1-3.4）ng/ml;肝癌患者血清GPC3、DKK1、AFP、DCP、CA199的表達(dá)水平明顯大于良性肝病組（P<0.05）。而兩組患者相比血清CEA水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。3、肝癌初治患者經(jīng)TACE治療后,血清GPC3、AFP、DCP的表達(dá)水平較TACE治療前明顯下降（P<0.05）;而DKK1、CA199、CEA的表達(dá)較TACE治療前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與肝癌初治患者相比,反復(fù)多次經(jīng)TACE治療患者具有更低的AFP、GPC3表達(dá)（P<0.05）。4、GPC3、DKKl、AFP、DCP、CA199、CEA診斷肝癌的靈敏度（95%CI）分別為82.3%（65.5%-93.2%）、47.1%（29.8%-64.9%）、88.2%（72.5%-96.7%）、73.5%（55.6%-87.1%）、64.7%（46.5%-80.3%）、79.4%（62.1%-91.3%）;特異度（95%CI）分別為92.5%（75.7%-99.1%）、88.8%（70.8%-97.6%）、59.2%（38.8%-77.6%）、85.2%（66.3%-95.8%）、77.8%（57.7%-91.4%）、35.7%（18.6%-55.9%）;曲線下面積（95%CI）分別為0.88（0.77-0.95）、0.66（0.53-0.78）、0.72（0.59-0.83）、0.81（0.68-0.89）、0.69（0.56-0.80）、0.57（0.44-0.69）;GPC3對(duì)肝癌的診斷價(jià)值明顯優(yōu)于DKK1、AFP、DCP、CA199、CEA（P<0.05）。5、GPC3、DKKl、AFP、DCP四項(xiàng)聯(lián)合診斷的靈敏度、特異度、約登指數(shù)及曲線下面積分別為88.2%（72.5%-96.7%）、96.4%（81.7%-99.9%）、0.847、0.96（0.87-0.99）,與各項(xiàng)單獨(dú)診斷肝癌相比,四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷可獲得更高的靈敏度、特異度、約登指數(shù)及曲線下面積（P<0.05）。6、肝癌初治患者血清中GPC3的表達(dá)可能與HBVDNA定量相關(guān),HBVDNA定量值越高,GPC3的表達(dá)量可能越大（P<0.05）;而與年齡、性別、BMI、吸煙、飲酒、Child分級(jí)、BCLC分期、腫瘤最大直徑、腫瘤個(gè)數(shù)均未見明顯相關(guān)性（P>0.05）。DKK1的表達(dá)與年齡、性別、BMI、吸煙、飲酒、HBVDNA定量、Child分級(jí)、BCLC分期、腫瘤最大直徑、腫瘤個(gè)數(shù)均無明顯相關(guān)性（P>0.05）。7、生存組與死亡組肝癌患者比較,GPC3、AFP、DCP、CEA表達(dá)無顯著差異（P>0.05）,而死亡組肝癌患者的DKK1、CA199的表達(dá)量較生存組明顯增高（P<0.05）。結(jié)論:1、GPC3、DKKl、AFP、DCP、CA199在肝癌患者中表達(dá)明顯增多,對(duì)肝癌的診斷具有一定參考價(jià)值,其中GPC3診斷效能最大;2、經(jīng)TACE治療可使肝癌患者GPC3表達(dá)水平降低,GPC3可能可以作為肝癌患者TACE治療效果評(píng)估的參考指標(biāo)之一。3、與各指標(biāo)單獨(dú)用于診斷肝癌相比,GPC3、DKKl、AFP、DCP聯(lián)合檢測可以明顯提高肝癌的診斷率。4、尚不能認(rèn)為GPC3的表達(dá)水平與PLC患者的預(yù)后相關(guān),高DKK1、CA199表達(dá)水平可能提示肝癌患者的不良預(yù)后。
童堯堯[9]（2020）在《白藜蘆醇在肝細(xì)胞癌中的作用及機(jī)制研究》文中指出研究背景及目的:肝癌是全球最常見的惡性腫瘤之一,最常見的類型為肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）。HCC是我國癌癥死亡的常見原因之一,對(duì)國家醫(yī)療保健造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。HCC發(fā)病隱匿,多數(shù)患者在疾病中晚期才確診,通常錯(cuò)過了治療的最佳時(shí)期。近年來,盡管已在肝癌的診療方面取得進(jìn)展,但由于肝癌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,尚缺乏有效的治療靶點(diǎn)與分子靶向藥物,導(dǎo)致疾病死亡率居高不下。因此,尋找新的治療藥物對(duì)于肝癌的治療具有重要意義。白藜蘆醇屬于天然多酚類化合物,因具有多種抗腫瘤生物學(xué)活性而被視為極具肝癌治療前景的藥物。大量研究發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等多種生物學(xué)作用。白藜蘆醇通過調(diào)節(jié)p53、SIRT1等多種腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)肝癌的進(jìn)展。然而,其具體機(jī)制尚未研究清楚。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican 3,GPC3）屬于硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族的一員,在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要的功能。GPC3在正常成人組織中不表達(dá),但在大部分肝癌組織中高表達(dá)。此外,肝癌患者預(yù)后與GPC3的表達(dá)水平有關(guān)。因此,GPC3有望成為新的生物標(biāo)志物。研究顯示,GPC3主要通過活化wnt/β-catenin信號(hào)通路參與肝癌的發(fā)生發(fā)展。此外,GPC3的表達(dá)與自噬底物p62存在一定的相關(guān)性,然而其具體機(jī)制尚未研究清楚。自噬是指細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等被包裹入自噬體的雙膜囊泡中,然后將自噬體靶向運(yùn)送到溶酶體進(jìn)行降解的過程。自噬功能失調(diào)與很多疾病有關(guān),包括神經(jīng)退行性疾病、代謝性疾病和腫瘤等。研究發(fā)現(xiàn),在肝細(xì)胞中自噬功能失調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生。在肝癌組織中的研究也發(fā)現(xiàn),其基礎(chǔ)自噬水平明顯低于正常細(xì)胞。多種蛋白和RNA可調(diào)控自噬,包括自噬相關(guān)基因、lnc RNAs等。有研究報(bào)道,GPC3與自噬底物p62的表達(dá)有相關(guān)性,且白藜蘆醇也可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬。然而GPC3是否參與了白藜蘆醇對(duì)HCC的調(diào)節(jié)尚未有研究報(bào)道。因此,本研究旨在探討GPC3與自噬在白藜蘆醇抗HCC的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制,為進(jìn)一步明確白藜蘆醇抗肝癌機(jī)制提供新的理論依據(jù)。方法:采用不同濃度白藜蘆醇（0、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）處理huh7細(xì)胞24h后,MTT檢測細(xì)胞存活率,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡,Western blot檢測GPC3、β-catenin、cyclin D1、c-myc、PARP、caspase3、cleaved-caspase3的表達(dá),免疫熒光技術(shù)檢測GPC3的表達(dá)。采用80μmol/L白藜蘆醇單獨(dú)或聯(lián)合GPC3質(zhì)粒處理huh7細(xì)胞24h后,MTT檢測細(xì)胞存活率,Western blot檢測PARP、caspase3、cleaved-caspase3的表達(dá)。采用不同濃度白藜蘆醇刺激huh7細(xì)胞,western blot檢測自噬標(biāo)記蛋白Beclin1、LC3、p62的表達(dá);huh7細(xì)胞轉(zhuǎn)染m Cherry-GFPLC3質(zhì)粒后再加80μmol/L白藜蘆醇孵育24h,激光共聚焦顯微鏡觀察自噬流的變化;分別采用GPC3質(zhì)粒以及靶向GPC3的si RNA轉(zhuǎn)染huh7細(xì)胞24h后,Western blot檢測Beclin1、LC3、p62、β-catenin、cyclin D1、c-myc的表達(dá);采用靶向β-catenin的si RNA或wnt/β-catenin通路抑制劑XAV-939處理huh7細(xì)胞24h后,Western blot檢測Beclin1、p62、LC3的表達(dá);采用m Cherry-GFP-LC3質(zhì)粒以及靶向GPC3或β-catenin的si RNA共轉(zhuǎn)染huh7細(xì)胞24h后,激光共聚焦顯微鏡觀察自噬流的變化;采用GPC3質(zhì)粒單獨(dú)或聯(lián)合wnt/β-catenin通路抑制劑XAV-939作用于huh7細(xì)胞24h后,Western blot檢測Beclin1、p62、LC3的表達(dá)。結(jié)果:（1）白藜蘆醇可以抑制huh7細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且呈劑量依賴性（p<0.05）。（2）白藜蘆醇可以顯著下調(diào)GPC3的表達(dá)水平,且呈劑量依賴性（p<0.05）。（3）白藜蘆醇可以顯著下調(diào)wnt/β-catenin通路靶蛋白β-catenin、c-myc、cyclin D1的表達(dá)水平,且呈劑量依賴性（p<0.05）。（4）過表達(dá)GPC3可以逆轉(zhuǎn)白藜蘆醇誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖抑制和凋亡作用（p<0.05）。（5）白藜蘆醇可以誘導(dǎo)自噬相關(guān)蛋白p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá)上調(diào),且增強(qiáng)細(xì)胞自噬流（p<0.05）。（6）過表達(dá)GPC3可下調(diào)huh7細(xì)胞p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá)（p<0.05）。（7）干擾GPC3可上調(diào)huh7細(xì)胞p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá),增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)自噬流（p<0.05）。（8）干擾β-catenin可上調(diào)huh7細(xì)胞p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá),增加細(xì)胞內(nèi)自噬流（p<0.05）。（9）XAV-939抑制huh7細(xì)胞wnt/β-catenin通路后,p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá)上調(diào)（p<0.05）。（10）與單獨(dú)轉(zhuǎn)染GPC3組相比,XAV-939聯(lián)合GPC3質(zhì)粒作用組的p62、Beclin1、LC3-II的表達(dá)上調(diào)（p<0.05）。結(jié)論:白藜蘆醇可以通過下調(diào)GPC3/wnt/β-catenin通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞自噬,從而發(fā)揮其抗肝癌作用。
王好好[10]（2020）在《GSG2在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的分析GSG2在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)水平及其與患者臨床病理特征的相關(guān)性。研究GSG2敲減對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移以及細(xì)胞周期的影響。構(gòu)建荷瘤模型,研究GSG2敲減對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤生長發(fā)育的影響。方法1.獲取患者知情同意,收集患者肝癌及癌旁樣本。同時(shí)記錄患者臨床病理資料,主要包括患者年齡、性別、TNM分期、腫瘤病理分級(jí)以及腫瘤分期。應(yīng)用免疫組化測得肝癌及癌旁組織中GSG2的表達(dá)水平,并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件分析GSG2表達(dá)水平與病人臨床資料的相關(guān)性。2.應(yīng)用MTT法檢測GSG2敲減后肝癌細(xì)胞增殖情況,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測GSG2敲減對(duì)肝癌細(xì)胞克隆能力的影響,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測GSG2敲減對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響,流式細(xì)胞法檢測GSG2敲減對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測出細(xì)胞DNA含量,最后軟件分析計(jì)算出細(xì)胞所處周期。3.腫瘤在體內(nèi)的生長發(fā)育:在小鼠前肢腋下注射腫瘤細(xì)胞建立荷瘤模型后,定期記錄并計(jì)算出腫瘤大小、體積及小鼠重量,應(yīng)用小動(dòng)物活體成像儀測量腫瘤的熒光強(qiáng)度。處死小鼠獲得腫瘤組織后,使用免疫組化檢測腫瘤樣本Ki-67表達(dá)水平。結(jié)果1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:179例原發(fā)性肝癌標(biāo)本中GSG2表達(dá)水平低和高的比例分別為:52.0%和48.0%。在20例癌旁組織中,GSG2低表達(dá)率為100.0%。統(tǒng)計(jì)分析得出肝癌組織中GSG2的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織（P<0.05）,進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析顯示GSG2表達(dá)水平與腫瘤分期及腫瘤浸潤深度有相關(guān)性并且呈正相關(guān)（P<0.05）。2.GSG2敲減后,MTT法測得的肝癌細(xì)胞增殖速率顯著減慢（P<0.001）,克隆形成實(shí)驗(yàn)測得的細(xì)胞克隆形成數(shù)目明顯減少（P<0.001）,并且劃痕實(shí)驗(yàn)測得的細(xì)胞遷移率明顯下降（P<0.001）。流式細(xì)胞測得的細(xì)胞凋亡率明顯增加（P<0.001）,細(xì)胞周期停滯于G2期（P<0.001）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.在荷瘤模型中,相較于對(duì)照組,GSG2敲減組的腫瘤熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)酰≒<0.001）,并且敲減組的腫瘤重量與體積都明顯小于對(duì)照組（P<0.01）,Ki-67表達(dá)相較于對(duì)照組降低（P<0.05）。結(jié)論GSG2在肝細(xì)胞肝癌中存在過表達(dá),并且其表達(dá)水平與腫瘤浸潤深度相關(guān)。GSG2敲減抑可制肝癌細(xì)胞增殖、克隆形成、細(xì)胞遷移、導(dǎo)致G2周期停滯以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡,最終抑制肝細(xì)胞肝癌進(jìn)展。
二、GPC3基因和肝癌研究進(jìn)展（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級(jí)分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、GPC3基因和肝癌研究進(jìn)展（論文提綱范文）
（1）肝寧方對(duì)小鼠肝癌癌前病變炎癥微環(huán)境影響的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文獻(xiàn)研究 |
| 1 中醫(yī)對(duì)肝癌癌前病變的認(rèn)識(shí)與研究 |
| 1.1 肝癌癌前病變的病名 |
| 1.2 肝癌癌前病變的病因病機(jī) |
| 1.3 肝癌癌前的辨證與分型 |
| 1.4 中醫(yī)藥治療肝癌癌前病變 |
| 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝癌癌前病變的認(rèn)識(shí)與研究 |
| 2.1 肝癌癌前病變的流行病學(xué) |
| 2.2 肝癌癌前病變的發(fā)病機(jī)制 |
| 2.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝癌癌前病變的診斷 |
| 2.4 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝癌癌前病變的治療 |
| 3 肝癌癌前病變的腫瘤微環(huán)境 |
| 3.1 腫瘤微環(huán)境的定義 |
| 3.2 腫瘤免疫微環(huán)境 |
| 3.3 腫瘤炎癥微環(huán)境 |
| 3.4 中醫(yī)藥調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境 |
| 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 試驗(yàn)藥物及試劑 |
| 1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥物 |
| 1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 動(dòng)物造模方法 |
| 2.2 標(biāo)本采集 |
| 2.3 觀察指標(biāo) |
| 2.3.1 小鼠的一般情況 |
| 2.3.2 體重、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù) |
| 2.3.3 肝臟病理HE染色 |
| 2.3.4 血清肝功能和腫瘤相關(guān)因子檢測 |
| 2.3.5 蛋白質(zhì)印跡法檢測肝組織中TLR4、NF-κB蛋白表達(dá) |
| 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 第三部分 研究結(jié)果與分析 |
| 3.1 小鼠的一般情況 |
| 3.2 各組小鼠體重變化趨勢(shì) |
| 3.3 體重、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)變化情況 |
| 3.4 肉眼可見結(jié)節(jié)大小、數(shù)量、分布情況 |
| 3.5 肝臟病理學(xué)觀察HE染色 |
| 3.6 肝功能 |
| 3.7 血清炎癥相關(guān)因子與腫瘤相關(guān)指標(biāo) |
| 3.8 肝臟TLR4、NF-κB表達(dá)情況 |
| 第四部分 討論 |
| 4.1 肝寧方的研究基礎(chǔ) |
| 4.2 肝寧方的藥物組成成分及研究現(xiàn)狀 |
| 4.3 肝寧方對(duì)DEN/CCl4誘發(fā)的肝癌癌前病變炎癥微環(huán)境影響的評(píng)價(jià) |
| 4.3.1 肝寧方對(duì)小鼠一般情況的影響 |
| 4.3.2 肝寧方對(duì)肝臟指數(shù)/脾臟指數(shù)的影響 |
| 4.3.3 肝寧方對(duì)肝功能的影響 |
| 4.3.4 肝寧方對(duì)肝臟病理的影響 |
| 4.3.5 肝寧方對(duì)肝癌癌前病變相關(guān)炎癥因子的影響 |
| 4.3.6 肝寧方對(duì)肝癌癌前病變相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的影響 |
| 4.3.7 肝寧方對(duì)肝癌癌前病變TLR4、NF-κB蛋白表達(dá)的影響 |
| 4.4 中西結(jié)合防治肝癌及癌前病變的特色與優(yōu)勢(shì) |
| 4.5 不足與展望 |
| 第五部分 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 中醫(yī)藥調(diào)節(jié)肝癌及癌前微環(huán)境中的TLR4/NF-κB信號(hào)通路研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 縮略詞表 |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡歷及攻讀學(xué)位期間獲得的科研成果 |
（2）OATP1B3在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性及生物學(xué)功能分析（論文提綱范文）
| 縮略語表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 OATP1B3在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與患者臨床病理因素及預(yù)后的相關(guān)性研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 OATP1B3在肝癌細(xì)胞中的功能的初步研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 OATP1B3對(duì)裸鼠肝臟原位種植癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述一 有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽在腫瘤中的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述二 肝癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間研究成果 |
| 致謝 |
（3）基于生物信息學(xué)分析的肝細(xì)胞癌易感生物靶點(diǎn)篩選（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要英文縮略詞表 |
| 1.前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 肝細(xì)胞癌 |
| 1.1.2 基因芯片數(shù)據(jù)挖掘 |
| 1.2 研究目的及意義 |
| 1.3 研究內(nèi)容 |
| 2.研究資料與方法 |
| 2.1 研究資料 |
| 2.1.1 基因數(shù)據(jù)庫 |
| 2.1.2 生物信息分析軟件 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 數(shù)據(jù)檢索與標(biāo)準(zhǔn)化處理 |
| 2.2.2 肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因的篩選 |
| 2.2.3 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析 |
| 2.2.4 肝細(xì)胞癌蛋白交互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 |
| 2.2.5 疾病模塊的構(gòu)建以及功能分析 |
| 2.2.6 核心基因篩選 |
| 2.2.7 中國人群肝細(xì)胞癌易感基因多態(tài)性的Meta分析 |
| 2.2.9 研究流程圖 |
| 3.結(jié)果 |
| 3.1 肝細(xì)胞癌差異表達(dá)基因篩選結(jié)果 |
| 3.2 差異基因功能及通路富集分析結(jié)果 |
| 3.3 肝細(xì)胞癌蛋白交互作用網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果 |
| 3.4 疾病模塊構(gòu)建以及功能分析結(jié)果 |
| 3.5 肝細(xì)胞癌核心基因篩選結(jié)果 |
| 3.6 核心基因編碼蛋白三維結(jié)構(gòu)及生物學(xué)功能 |
| 3.7 核心基因在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)情況 |
| 3.8 中國人群肝細(xì)胞癌易感基因多態(tài)性Meta分析結(jié)果 |
| 3.8.1 CYP2E1 基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌易感性Meta分析 |
| 3.8.2 PTTG1 基因與肝細(xì)胞癌易感性Meta分析 |
| 4.討論 |
| 4.1 功能富集分析及網(wǎng)絡(luò)分析 |
| 4.2 核心基因篩選 |
| 4.3 肝細(xì)胞癌易感基因多態(tài)性的Meta分析 |
| 4.4 發(fā)展與展望 |
| 4.5 研究的局限性 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果 |
（5）基于差異網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)模型篩選肝癌生物分子標(biāo)志物的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 研究背景及意義 |
| 1.2 肝癌致病機(jī)制研究現(xiàn)狀 |
| 1.3 生物標(biāo)志物的相關(guān)研究 |
| 1.3.1 生物標(biāo)志物的定義 |
| 1.3.2 肝癌生物標(biāo)志物 |
| 1.3.3 基于網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浜Y選生物標(biāo)志物的原因及其優(yōu)勢(shì) |
| 1.4 研究內(nèi)容及章節(jié)安排 |
| 1.4.1 研究內(nèi)容 |
| 1.4.2 章節(jié)安排 |
| 第2章 研究數(shù)據(jù)及方法 |
| 2.1 研究數(shù)據(jù) |
| 2.1.1 人類基因間相互作用網(wǎng)絡(luò) |
| 2.1.2 基因表達(dá)數(shù)據(jù) |
| 2.2 復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)和網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù) |
| 2.2.1 復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的特性 |
| 2.2.2 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù) |
| 2.3 機(jī)器學(xué)習(xí)算法及分類評(píng)價(jià)方法 |
| 2.3.1 基于隨機(jī)森林的特征選擇 |
| 2.3.2 支持向量機(jī) |
| 2.3.3 分類評(píng)價(jià)方法 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第3章 基于網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)篩選生物標(biāo)志物的過程及結(jié)果 |
| 3.1 篩選過程總體框架 |
| 3.2 尋找合適的拓?fù)鋮?shù) |
| 3.3 構(gòu)建差異網(wǎng)絡(luò) |
| 3.4 候選生物標(biāo)志物篩選 |
| 3.4.1 篩選拓?fù)鋮?shù)差異基因 |
| 3.4.2 篩選差異模塊 |
| 3.5 機(jī)器學(xué)習(xí)篩選 |
| 3.6 功能富集分析 |
| 3.7 二次驗(yàn)證 |
| 3.7.1 其它數(shù)據(jù)集 |
| 3.7.2 與已知生物標(biāo)志物之間的關(guān)系 |
| 3.7.3 在現(xiàn)有文獻(xiàn)中的研究現(xiàn)狀 |
| 3.8 本章小結(jié) |
| 第4章 不同網(wǎng)絡(luò)組分篩選生物標(biāo)志物的效果比較 |
| 4.1 網(wǎng)絡(luò)組分的選擇 |
| 4.2 不同網(wǎng)絡(luò)組分篩選過程及結(jié)果 |
| 4.2.1 節(jié)點(diǎn) |
| 4.2.2 邊 |
| 4.2.3 派系 |
| 4.2.4 通路 |
| 4.3 幾種網(wǎng)絡(luò)組分篩選結(jié)果比較 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第5章 總結(jié)與展望 |
| 5.1 總結(jié) |
| 5.2 創(chuàng)新點(diǎn)及不足 |
| 5.3 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與專利目錄 |
| 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表 |
（6）基于Wnt/β-catenin通路的GPC3受體應(yīng)激HepG2細(xì)胞凋亡研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞索引 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 肝癌的研究現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 肝癌的發(fā)病現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 肝癌的治療方式 |
| 1.2 細(xì)胞凋亡與肝癌的關(guān)系 |
| 1.2.1 細(xì)胞凋亡與腫瘤的關(guān)系 |
| 1.2.2 Wnt/β-catenin信號(hào)通路與治療HCC的研究進(jìn)展 |
| 1.2.3 靶向GPC3 受體治療HCC的研究進(jìn)展 |
| 1.3 多枝狀金納米材料的研究現(xiàn)狀 |
| 1.3.1 多枝狀金納米顆粒合成方法 |
| 1.3.2 多枝狀金納米顆粒特性及其應(yīng)用 |
| 1.3.3 多枝狀金納米材料在治療肝癌中的應(yīng)用 |
| 1.4 立題背景與意義 |
| 1.5 主要研究內(nèi)容 |
| 1.6 技術(shù)路線 |
| 第二章 多枝狀金納米海膽星材料的合成與表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與儀器 |
| 2.2.1 材料與試劑 |
| 2.2.2 設(shè)備和儀器 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 多枝狀金納米海膽星的合成 |
| 2.3.2 多枝狀金納米海膽星的表征 |
| 2.3.3 多枝狀金納米海膽星的修飾 |
| 2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 2.3.5 PEG修飾的MSGNS的細(xì)胞毒性評(píng)價(jià) |
| 2.3.6 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2.4 結(jié)果與討論 |
| 2.4.1 MSGNS合成過程紫外吸收光譜分析 |
| 2.4.2 MSGNS的 TEM表征分析 |
| 2.4.3 MSGNS合成過程粒徑分析 |
| 2.4.4 MSGNS-PEG細(xì)胞毒性評(píng)價(jià) |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 MSGNS-a GPC3 聚合體對(duì)Hep G2 細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與儀器 |
| 3.2.1 材料與試劑 |
| 3.2.2 設(shè)備和儀器 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 3.3.2 實(shí)驗(yàn)分組 |
| 3.3.3 Western blotting |
| 3.3.4 MSGNS-a GPC3 構(gòu)建及粒徑測定 |
| 3.3.5 MSGNS-a GPC3 紅外測定 |
| 3.3.6 金納米球、金納米棒的合成與表征 |
| 3.3.7 時(shí)間分辨細(xì)胞成像測試 |
| 3.3.8 原位熒光檢測 |
| 3.3.9 胞內(nèi)ATP檢測分析 |
| 3.3.10 胞內(nèi)活性氧含量評(píng)價(jià) |
| 3.3.11 細(xì)胞存活率鑒定 |
| 3.3.12 流式細(xì)胞檢測技術(shù)表征 |
| 3.4 結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 MSGNS-a GPC3 的表征 |
| 3.4.2 MSGNS-a GPC3在Hep G2 細(xì)胞膜表面的吸附性分析 |
| 3.4.3 MSGNS-a GPC3 刺激GPC3 受體對(duì)Hep G2 細(xì)胞凋亡的影響 |
| 3.4.4 GPC3 受體應(yīng)激后Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白變化分析 |
| 3.4.5 阻斷Wnt/β-catenin通路GPC3 受體應(yīng)激后蛋白變化分析 |
| 3.4.6 激動(dòng)Wnt/β-catenin通路GPC3 受體應(yīng)激后蛋白變化分析 |
| 3.4.7 干預(yù)Wnt/β-catenin通路GPC3 受體應(yīng)激后ATP、ROS變化測定 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 主要結(jié)論與展望 |
| 主要結(jié)論 |
| 展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄:作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
（7）新型多功能金納米棒介導(dǎo)的腫瘤靶向Glypican-3基因沉默聯(lián)合光熱效應(yīng)治療肝癌的應(yīng)用研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文縮寫一覽表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑與設(shè)備 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株 |
| 2.1.2 主要的實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.1.3 主要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2.1.4 主要的試劑配制 |
| 2.2 金納米棒的合成與修飾 |
| 2.3 體外實(shí)驗(yàn) |
| 2.3.1 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)檢測GAL-MUA-PEI-GNR(GAL-GNR)對(duì)siRNA的加載能力 |
| 2.3.2 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)檢測GAL-MUA-PEI-GNR(GAL-GNR)對(duì)siRNA的血清保護(hù)能力 |
| 2.3.3 GNR與 GNR-MUA-PEI-GAL的光熱效應(yīng) |
| 2.3.4 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 2.3.5 MTT檢測GAL-MUA-PEI-GNR(GAL-GNR)在不同濃度和不同光照密度下對(duì)細(xì)胞的殺傷作用 |
| 2.3.6 MTT檢測修飾前后的GNR對(duì)細(xì)胞的毒性 |
| 2.3.7 Calcein-AM/PI雙染法檢測修飾前后的GNR對(duì)細(xì)胞的毒性 |
| 2.3.8 qPCR檢測GAL-GNR-siGPC-3對(duì)Hepa1-6 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率 |
| 2.3.9 乳糖酸靶向競爭實(shí)驗(yàn)檢測半乳糖結(jié)構(gòu)對(duì)肝癌細(xì)胞的靶向作用 |
| 2.3.10 MTT檢測沉默GPC-3 基因?qū)epa1-6 細(xì)胞增值能力的影響 |
| 2.3.11 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測沉默GPC-3 基因?qū)epa1-6 細(xì)胞遷移能力的影響 |
| 2.3.12 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測沉默GPC-3基因?qū)epa1-6細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響 |
| 2.3.13 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測沉默GPC-3基因?qū)epa1-6細(xì)胞集落形成能力的影響 |
| 2.4 體內(nèi)實(shí)驗(yàn) |
| 2.4.1 冰凍切片方法檢測GAL-MUA-PEI-GNR的體內(nèi)靶向性 |
| 2.4.2 建立小鼠肝癌模型 |
| 2.4.3 沉默GPC-3 聯(lián)合光熱效應(yīng)協(xié)同治療小鼠肝癌 |
| 2.4.4 腫瘤生長監(jiān)測和測量 |
| 2.4.5 qPCR檢測小鼠腫瘤GPC-3 的沉默效果 |
| 2.4.6 小鼠血清的制備 |
| 2.4.7 ELISA檢測小鼠血清中的GPC-3 表達(dá) |
| 2.4.8 腫瘤石蠟切片的制作 |
| 2.4.9 TUNEL法檢測腫瘤組織的凋亡 |
| 2.4.10 小鼠血清中AST/GOT和ALT/GPT的檢測 |
| 2.4.11 小鼠血清中肌酐和尿素的檢測 |
| 2.4.12 HE染色法檢測GAL-GNR對(duì)主要臟器組織的影響 |
| 2.4.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 金納米棒的修飾合成及表征測定 |
| 3.2 GAL-GNR的細(xì)胞毒性 |
| 3.3 GAL-GNR負(fù)載siRNA的能力及其對(duì)siRNA的保護(hù)作用 |
| 3.4 GAL-GNR的光熱效應(yīng) |
| 3.5 GAL-GNR-siGPC3 的體外沉默效果及靶向肝癌的能力 |
| 3.6 GAL-GNR-siGPC-3對(duì)Hepa1-6 增殖、侵襲、遷移和克隆形成能力的影響 |
| 3.7 GAL-GNR體內(nèi)靶向肝癌的能力 |
| 3.8 GAL-GNR-siGPC-3 聯(lián)合光熱療法對(duì)小鼠肝癌的治療效果 |
| 3.9 GAL-GNR治療對(duì)小鼠毒性的評(píng)估 |
| 第4章 討論 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
（8）血清磷脂酰肌醇聚糖3、Dickkopf相關(guān)蛋白1在原發(fā)性肝癌診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值研究（論文提綱范文）
| 英文縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本及患者臨床信息收集 |
| 二、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 |
| 三、實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)步驟 |
| 四、統(tǒng)計(jì)分析 |
| 結(jié)果 |
| 一、患者的臨床資料匯總 |
| 二、各組血清腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平 |
| 三、TACE治療對(duì)患者相關(guān)指標(biāo)的影響 |
| 四、各指標(biāo)對(duì)診斷PLC的ROC曲線分析 |
| 五、GPC3、DKK1與AFP、DCP單獨(dú)或聯(lián)合診斷PLC的ROC曲線分析 |
| 六、PLC 初治患者血清中GPC3、DKK1的表達(dá)與臨床特征間的關(guān)系 |
| 七、各臨床特征及腫瘤指標(biāo)的表達(dá)與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 肝癌早期診斷血清學(xué)標(biāo)志物的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（9）白藜蘆醇在肝細(xì)胞癌中的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞 |
| 引言 |
| 1.試劑和儀器 |
| 2.實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 自噬在肝細(xì)胞癌進(jìn)展和治療中的作用 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（10）GSG2在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文縮略詞對(duì)照表 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 肝細(xì)胞肝癌診斷治療新進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 個(gè)人簡歷、碩士期間發(fā)表文章 |
| 致謝 |
四、GPC3基因和肝癌研究進(jìn)展（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]肝寧方對(duì)小鼠肝癌癌前病變炎癥微環(huán)境影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 曹獻(xiàn). 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [2]OATP1B3在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與預(yù)后相關(guān)性及生物學(xué)功能分析[D]. 陳施翰. 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué), 2020(07)
- [3]基于生物信息學(xué)分析的肝細(xì)胞癌易感生物靶點(diǎn)篩選[D]. 黃成. 湖南師范大學(xué), 2020(01)
- [4]Glypican-3與FAT1的互作鑒定及其促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移的研究[D]. 孟盼盼. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020
- [5]基于差異網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)模型篩選肝癌生物分子標(biāo)志物的研究[D]. 王艷秋. 山東大學(xué), 2020(02)
- [6]基于Wnt/β-catenin通路的GPC3受體應(yīng)激HepG2細(xì)胞凋亡研究[D]. 尹子葉. 江南大學(xué), 2020
- [7]新型多功能金納米棒介導(dǎo)的腫瘤靶向Glypican-3基因沉默聯(lián)合光熱效應(yīng)治療肝癌的應(yīng)用研究[D]. 譚曼曼. 南昌大學(xué), 2020(08)
- [8]血清磷脂酰肌醇聚糖3、Dickkopf相關(guān)蛋白1在原發(fā)性肝癌診斷及預(yù)后判斷中的價(jià)值研究[D]. 譚根梅. 華中科技大學(xué), 2020(01)
- [9]白藜蘆醇在肝細(xì)胞癌中的作用及機(jī)制研究[D]. 童堯堯. 湖北醫(yī)藥學(xué)院, 2020(05)
- [10]GSG2在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究[D]. 王好好. 鄭州大學(xué), 2020(02)
標(biāo)簽：肝癌論文; 腫瘤論文; 肝細(xì)胞論文; 腫瘤生物治療論文; 生物標(biāo)志物論文;