一、禽類三種常用生長(zhǎng)曲線淺析（論文文獻(xiàn)綜述）
馬猛,王克華,曲亮,竇套存,郭軍,王星果,胡玉萍[1]（2022）在《不同品種雞生長(zhǎng)曲線擬合及分析》文中研究表明實(shí)驗(yàn)用Logistic、Gompertz和Bertalanffy 3個(gè)模型對(duì)0～7周齡的wod168、wod178、wod188和愛拔益加AA 4個(gè)肉雞品種的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行擬合,旨在探索不同生長(zhǎng)速度的肉雞品種生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律。結(jié)果顯示:wod168的最佳生長(zhǎng)曲線模型是Gompertz模型,模型擬合度（R2）達(dá)到0.999,拐點(diǎn)體重、拐點(diǎn)周齡和最大周增重分別為1 141.44 g、4.91周和377.01 g。wod178、wod188和AA最佳生長(zhǎng)曲線模型均為L(zhǎng)ogistic模型,對(duì)應(yīng)的模型擬合度（R2）均高于0.99。研究表明,3種模型均能較好擬合不同品種雞的生長(zhǎng)曲線,但不同品種對(duì)應(yīng)的最佳生長(zhǎng)曲線模型不同,根據(jù)最佳生長(zhǎng)曲線模型,可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)雞生長(zhǎng)發(fā)育過程中存在的問題,較好地指導(dǎo)家禽日常的飼養(yǎng)管理工作。
鄭嘉輝,冷奇穎,張為露,Ali Hassan NAWAZ,杜炳旺,張麗[2]（2021）在《矮小體型蘆花雞GHR基因突變類型分析及其與正常體型蘆花雞發(fā)育差異研究》文中認(rèn)為矮小雞（Gallus domesticus）由于其體型小,節(jié)約養(yǎng)殖空間等優(yōu)點(diǎn)常被用于雞配套系生產(chǎn)。本研究為明確矮小體型蘆花雞的生長(zhǎng)激素受體（growth hormone receptor, GHR）基因突變類型,探究正常體型蘆花雞和矮小體型蘆花雞間的生長(zhǎng)發(fā)育差異,針對(duì)矮小體型蘆花雞GHR基因常見的4種突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物,以矮小體型蘆花雞的基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,分析其遺傳變異類型。同時(shí)比較分析了正常體型蘆花雞與矮小體型蘆花雞體重和脛長(zhǎng)的發(fā)育特點(diǎn),使用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy 3種數(shù)學(xué)模型擬合分析了其最適模型和擬合參數(shù)。結(jié)果顯示,與正常體型蘆花雞相比,矮小體型蘆花雞GHR基因缺失了1 781 bp的堿基序列。正常體型蘆花雞與矮小體型蘆花雞在1～13周齡期間發(fā)育差異明顯,尤其在體重和脛長(zhǎng)2個(gè)性狀對(duì)比明顯。Logistic是正常體型蘆花雞與矮小體型蘆花雞體重的最優(yōu)擬合模型（R2>0.990）。對(duì)于脛長(zhǎng)而言,在雄性蘆花雞中,正常體型蘆花雞的最佳擬合模型為L(zhǎng)ogistic,矮小體型蘆花雞的最適擬合模型為Von Bertalanffy。在雌性蘆花雞中,正常體型蘆花雞和矮小體型蘆花雞的最佳擬合模型均為Von Bertalanffy。本研究為蘆花雞精細(xì)飼養(yǎng)管理和矮小蘆花雞的分子標(biāo)記輔助育種提供了參考依據(jù)。
李茜[3]（2021）在《APEC O1型E516攝鐵基因c2515和c2516缺失株的生物學(xué)特性及C2515單克隆抗體的研制》文中認(rèn)為禽致病性大腸桿菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）是在禽類中廣泛傳播,可引起禽類嚴(yán)重的局部和/或全身性感染的重要腸道外致病菌,給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。APEC抗原分型復(fù)雜多樣,一般以O(shè)抗原為主要分型依據(jù),常見致病性菌株包括O1、O2、O78等血清型。在腸外環(huán)境中攝取鐵的能力是APEC生存的前提,為了適應(yīng)貧鐵環(huán)境,APEC進(jìn)化出多種鐵攝取系統(tǒng),以滿足對(duì)鐵的需求,包括:SitABCD鐵轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),血紅素,腸菌素、氣桿菌素、沙門菌素和耶爾森菌素等鐵載體系統(tǒng),然而這些鐵攝取系統(tǒng)的許多組成部分功能仍不清楚。前期研究對(duì)本室分離、鑒定、保存的APEC O1型強(qiáng)毒株E516菌株進(jìn)行基因組測(cè)序,以本室分離、鑒定、保存的E058（02）和E522（O78）菌株基因組序列為參考,發(fā)現(xiàn)了只存在于E516菌株而不存在于E058（02）和E522（O78）菌株的兩個(gè)假定的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)基因,由于它們與尿道致病性大腸桿菌CFT073的c2515（768bp）和c2516（1059bp）基因100%同源,因此我們亦將其命名為c2515和c2516。在本研究中,我們構(gòu)建了 E516 c2515和c2516基因缺失株及回補(bǔ)株,并通過體外和體內(nèi)試驗(yàn)研究了它們的生物學(xué)特性和致病性。本研究通過逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）、生長(zhǎng)特性測(cè)定、CAS試驗(yàn)、HD11胞內(nèi)存活試驗(yàn)、致病性試驗(yàn)等方法,分析了c2515、c2516基因功能及各菌株生物學(xué)特性。RT-PCR分析表明破壞目標(biāo)基因閱讀框可終止其轉(zhuǎn)錄;CAS試驗(yàn)顯示E516Δc2515、E516△c2516和E516Δc2515Δc2516產(chǎn)生鐵載體的能力較E516相比有所減弱;生長(zhǎng)曲線顯示各缺失株生長(zhǎng)速度在貧鐵條件下較野生株緩慢,而在補(bǔ)鐵后及普通LB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度基本一致;鐵攝取試驗(yàn)顯示與野生菌E516相比,各缺失株胞內(nèi)鐵含量降低;細(xì)胞感染試驗(yàn)表明,HD11細(xì)胞更容易清除鐵攝取缺陷型的突變株。上述各試驗(yàn)中雙基因缺失株E516Δc2515△c2516與野生株E516相比差異最為顯著,E516Δc2515次之,E516Δc2516差異較小。1日齡SPF雞半數(shù)致死量（LD50）及細(xì)菌體內(nèi)定殖試驗(yàn)顯示,與野生菌株相比,c2515和c2516基因的缺失影響了 E516菌株在雞組織中的定殖能力,并且雙基因缺失株比野生株毒力下降10倍左右。熒光定量PCR（qRT-PCR）結(jié)果表明,在E516Δc2515Δc2516雙基因缺失株中,鐵攝取相關(guān)基因entA,fepC和iutA的轉(zhuǎn)錄水平顯著低于野生株?？傮w而言,c2515和c2516可能參與鐵載體介導(dǎo)的鐵攝取并參與APEC O1菌株E516的致病過程。以上結(jié)果提示c2515基因?qū)516毒力影響更大,為了從蛋白水平研究該基因的功能,我們研制了 C2515蛋白的單克隆抗體（Monoclonalantibody）。通過構(gòu)建原核表達(dá)載體pET11b-c2515-His并導(dǎo)入E.coli BL21（DE3）,誘導(dǎo)表達(dá)后,對(duì)包涵體形式表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行尿素梯度變復(fù)性,純化得到蛋白分子量為28.2 kDa的重組蛋白,與預(yù)期一致。C2515蛋白免疫BALB/c小鼠,經(jīng)過方陣滴定試驗(yàn),確定間接ELISA（Enzyme linked immunosorbent assay）的最佳適包被抗原濃度為:1.5 μg/mL,選擇血清抗體效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合,經(jīng)三次亞克隆篩選出3株能穩(wěn)定分泌C2515特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株:1C4、3D6、4B9,經(jīng)抗體亞類試劑盒鑒定,1C4屬于IgG2b亞類,3D6、4B9屬于IgG1亞類,3株均屬于κ輕鏈。Western blot結(jié)果表示,3株單克隆抗體均可與免疫原C2515蛋白特異性結(jié)合,并只能在E516菌株中檢測(cè)出天然C2515蛋白而在E058和E522中未檢測(cè)出,與PCR檢測(cè)結(jié)果一致。C2515單抗的獲得為其后續(xù)功能研究提供了可靠材料,也為進(jìn)一步研究其在鐵攝取系統(tǒng)中的作用奠定了基礎(chǔ)。
李楠[4]（2021）在《冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雞的致病性及全基因組序列測(cè)定與分析》文中認(rèn)為單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）是一種食源性的胞內(nèi)致病菌,可以感染人類和動(dòng)物,引起腦膜腦炎、流產(chǎn)和敗血癥等疾病,死亡率可高達(dá)20%-30%。各國(guó)每年對(duì)食品LM的污染調(diào)查結(jié)果顯示,雞肉中LM的檢出率在1.1%-5.51%之間,雞肉源LM可能是加工環(huán)境污染,也可能是雞本身攜帶。目的:本試驗(yàn)將研究雞肉源LM對(duì)雞的致病性,以引起食品廠和養(yǎng)禽場(chǎng)對(duì)污染源的重視。并通過全基因組測(cè)序,分析其基因組進(jìn)化和毒力特征,為分離株的致病機(jī)制提供依據(jù)。方法:（1）毒力基因PCR檢測(cè)、溶血價(jià)測(cè)定、改良寇氏計(jì)算法計(jì)算雞胚LD50和稱重得到雞胚肝臟指數(shù),通過結(jié)果對(duì)比17株分離株的毒力。（2）篩選出三株毒力差異顯著的分離株LM925、LM929和LM873肌肉注射感染9日齡雛雞,通過改良寇氏計(jì)算法得到雛雞LD50,研磨肝臟、脾臟和腦組織,平板計(jì)數(shù)法計(jì)算載菌量,觀察雛雞大體和組織病理學(xué)變化等,研究LM對(duì)雛雞的致病性;（3）選擇毒力差異最大的LM925與LM873,在不同溫度、p H、Na Cl濃度和Et OH濃度條件下測(cè)定吸光度OD600得到兩株菌的生長(zhǎng)曲線,微孔板定量法對(duì)不同時(shí)間段生物被膜的形成能力進(jìn)行比較。（4）對(duì)分離株LM925和LM873進(jìn)行全基因組測(cè)序,對(duì)其基因組特點(diǎn),毒力基因,MLST分型和基因組進(jìn)化進(jìn)行分析。結(jié)果:（1）41.2%（7/17）分離株攜帶所檢測(cè)的8個(gè)毒力基因,全部分離株均攜帶對(duì)毒力有決定性作用的lmo2821,17株分離株均溶解綿羊紅細(xì)胞,溶血價(jià)在1:4-1:16之間,17株分離株均可致死雞胚,58.8%的分離株雞胚LD50在1.5和2之間,41.2%分離株雞胚LD50在2和5之間,最強(qiáng)毒株雞胚LD50為1.533,最弱毒株雞胚LD50為4.733,接種LM的雞胚肝臟指數(shù)均顯著增大。（2）雛雞感染實(shí)驗(yàn)表明,三株菌對(duì)雛雞均有致病性。強(qiáng)毒株LM925,LM929的雛雞LD50分別為7.733和8.133,而相對(duì)弱毒株LM873的雛雞LD50為8.733,LM925在各組織中的載菌量最高,LM873最低,雛雞解剖發(fā)現(xiàn)肝臟病變最明顯,其中LM925與LM929所感染的雛雞肝臟可看到明顯的白色壞死灶,而LM925明顯居多,感染LM873的雛雞肝臟無肉眼可見病變。組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),病變主要為肝細(xì)胞壞死,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),淤血和化膿灶,而病變最多的為L(zhǎng)M925,最少為L(zhǎng)M873只觀察到局部淤血。（3）在不同條件下,37℃、p H 7.0、5.0%Na Cl為三株LM生長(zhǎng)的最適條件,4%Et OH為生長(zhǎng)的最低抑制濃度,LM925的生長(zhǎng)趨勢(shì)始終高于LM873,其中在p H 5.0、4.5%Na Cl和4%Et OH條件下兩株菌的生長(zhǎng)趨勢(shì)差異顯著（P<0.05）;利用微孔板定量法測(cè)定不同時(shí)間段該菌生物被膜的形成情況,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)6～24 h有少量LM開始附著和微菌落的形成,LM925與LM873相比,在6h、8h和12h時(shí),生物被膜的形成差異顯著（P<0.05）,10h時(shí)和24h時(shí),LM925與LM873相比,差異極顯著（P<0.01）;36h時(shí)微菌落連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),可形成成熟致密的生物被膜,且LM925較LM873的差異極顯著（P<0.01）,48h生物被膜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)逐漸溶解,LM925與LM873相比均無明顯差異（P>0.05）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LM925具有更強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力及生物被膜形成能力。（4）全基因組注釋分析結(jié)果顯示:LM925基因組全長(zhǎng)2,965,010bp,GC含量37.83%,編碼2928個(gè)蛋白預(yù)測(cè)基因,編碼區(qū)占整個(gè)基因組的91.03%,蛋白平均長(zhǎng)度為872.38個(gè)氨基酸,含有56個(gè)t RNA以及6個(gè)r RNA。LM873基因組全長(zhǎng)2,972,618bp,GC含量37.83%,編碼2928個(gè)蛋白預(yù)測(cè)基因,編碼區(qū)占整個(gè)基因組的91.03%,蛋白平均長(zhǎng)度為862.57個(gè)氨基酸,含有55個(gè)t RNA以及6個(gè)r RNA。在LM925與LM873的分析比較中,兩菌除共同含有的毒力基因外,LM925還含有編碼LIPI-3的基因簇lls B、lls D、lls H、lls X、lls Y、lls G,這些基因編碼溶血素S（LLS）,LM873存在編碼LIPI-4的基因簇esx B和gsp G,這些基因編碼分泌蛋白。將兩株菌的測(cè)序結(jié)果對(duì)照數(shù)據(jù)庫信息,得到LM873的序列分型為ST87,屬于CC87克隆群,LM925為ST386,屬于CC224克隆群。在進(jìn)化分析中,LM873與中國(guó)臨床分離株SHL012和美國(guó)造成人李斯特菌病爆發(fā)的FSLJ1-194存在較近的親緣關(guān)系;LM925與FSLJ1-194,SHL012,美國(guó)食品分離株FSLN1-017和美國(guó)臨床分離株FSLR2-503處于同一進(jìn)化位置,顯示他們是由同一祖先進(jìn)化而來。兩者結(jié)果綜合分析顯示,LM873與LM925均具有引起人李斯特菌病爆發(fā)的潛在可能。結(jié)論:冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雞胚和雛雞均具有致死能力,但是毒力并不相同,感染雞胚和雛雞的肝臟是病變比較明顯的器官。LM冷凍雞肉分離株的環(huán)境適應(yīng)性與生物被膜形成能力與毒力強(qiáng)弱呈正相關(guān)。LM873與LM925均具有引起人李斯特菌病爆發(fā)的潛在可能。
蘇虎[5]（2020）在《817肉雞初生重對(duì)生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)及下丘腦mRNA表達(dá)的影響》文中指出本文旨在研究初生重對(duì)817肉雞生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)以及生長(zhǎng)軸相關(guān)基因m RNA表達(dá)的影響。試驗(yàn)選取0日齡817肉雞雛雞1200只,逐只稱重并佩戴翅號(hào)。根據(jù)初生重分為低初生重組（37.5±1.9g,≦40g）、中初生重組（42.8±0.5g,42.0g-43.6g）、高初生重組（47.9±1.9g,≧46.0g）三組。所有試驗(yàn)雞籠養(yǎng),自由采食,飲水。每7天全群稱重。49日齡,根據(jù)每周體重對(duì)817肉雞生長(zhǎng)曲線進(jìn)行擬合。從三組中分別挑選平均體重附近公雞15只進(jìn)行屠體性能與肉品質(zhì)測(cè)定。分別采取高初生重與低初生重組各3只公雞的下丘腦樣品,提取RNA,建庫測(cè)序進(jìn)行RNA-seq分析。結(jié)果表明:Logistic,Gompertz和Bertallanffy 3種生長(zhǎng)模型的擬合度均高于0.996。其中Logistic模型合效果最佳,其擬合值和實(shí)際測(cè)定值最吻合,擬合度,拐點(diǎn)周齡,拐點(diǎn)體重分別為0.998,4.85周,951.54g。低初生重組公雞生長(zhǎng)速度始終較其他兩組慢（P<0.05）。49日齡時(shí)低初生重組公雞體重分別顯著低于中初生重組與高初生重組101g與114g（P<0.05）。中初生重組公雞與高初生重組體重?zé)o顯著差異（P>0.05）。低初生重組母雞體重只在早期（1-14日齡）低于其他兩組（P<0.05）。中初生重組母雞與與高初生重組體重?zé)o顯著差異（P>0.05）。初生重對(duì)49日齡817肉公雞屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率與腿肌率等屠體性能指標(biāo)無顯著影響（P>0.05）。高初生重組公雞脾臟占體重比率顯著高于中初生重組（P<0.05）。低初生重組公雞十二指腸占體重比顯著大于高初生重組（P<0.05）。三組公雞之間心、肝、肌胃、腺胃、胰腺重、空腸以及回腸占體重比率無顯著差異（P>0.05）。初生重對(duì)滴水損失、蒸煮損失、剪切力以及肉色等指標(biāo)無顯著影響（P>0.05）。以log2|foldchange|>1并且矯正P-value<0.05為閾值共篩選出424差異表達(dá)基因,這些差異表達(dá)基因顯著富集于“生長(zhǎng)激素抑制素信號(hào)通路”,“糖皮質(zhì)激素分泌”等通路。其中低初生重公雞下丘腦中SST與TRH基因表達(dá)顯著上調(diào)。進(jìn)一步q PCR分下發(fā)現(xiàn)與高初生重相比,低初生重組公雞垂體中SSTR2與SSTR5基因表達(dá)顯著上調(diào)而TRHR和GH基因表達(dá)顯著下調(diào)而GHRHR基因表達(dá)無顯著變化。綜上所述,初生重對(duì)屠宰性能與肉品質(zhì)以及817母雞出欄重?zé)o顯著影響。初生重小的817公雞生長(zhǎng)性速度慢,與SST基因高表達(dá)抑制了TRH對(duì)GH刺激分泌有關(guān)。
溫婭婭[6]（2020）在《鷓鴣生長(zhǎng)曲線擬合及MSTN基因表達(dá)與體重和肌纖維發(fā)育的相關(guān)性》文中指出本研究以鷓鴣為對(duì)象,探索了利用分子手段進(jìn)行性別鑒定的方法;利用九種非線性模型對(duì)鷓鴣的生長(zhǎng)體重進(jìn)行生長(zhǎng)曲線擬合,確定適合鷓鴣的生長(zhǎng)曲線模型;以MSTN基因作為影響鷓鴣生長(zhǎng)和肌纖維發(fā)育生長(zhǎng)性狀的候選基因,利用熒光定量PCR技術(shù)揭示了該基因在鷓鴣組織中的表達(dá)特點(diǎn),采取組織學(xué)切片技術(shù)分析鷓鴣肌纖維發(fā)育特征,并分析鷓鴣MSTN基因表達(dá)水平與胸肌肌纖維發(fā)育及體重相關(guān)性。主要研究結(jié)果如下:1.鷓鴣性別分子鑒定本研究通過采集鷓鴣羽毛樣提取DNA,用CHD基因的特異引物對(duì)鷓鴣的CHD基因上的同源序列進(jìn)行特異性擴(kuò)增,從而對(duì)鷓鴣的性別進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示:鷓鴣羽毛可以提取出高質(zhì)量的DNA,CHD基因在公鷓鴣上僅有CHD-Z1條帶（566bp）,而母鷓鴣有CHD-W（416bp）和CHD-Z（566bp）2條帶.性別分子鑒定與解剖結(jié)果一致。2.鷓鴣生長(zhǎng)曲線的擬合分析本研究利用九個(gè)非線性模型對(duì)鷓鴣群體（178只）、公鷓鴣（85只）和母鷓鴣（93只）0-18周齡生長(zhǎng)體重?cái)?shù)據(jù)進(jìn)行擬合分析。除Exponential外,其他模型確定系數(shù)（R2）均大于 0.9,其中 Gompertz、Logistic、von Bertalanffy、Richards和Weibull-type確定系數(shù)（R2）達(dá)到0.99以上。Gompertz、Logistic、von Bertalanffy、Richards和Weibull-type五種模型所得均方差都在100以下,其中Weibull-type模型均方差最小,分別為54.98、21.68、12.76。九種模型預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值間相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.9,其中Weibull-type模型相關(guān)系數(shù)最大,分別為0.9992、0.9993、0.9993。九種模型中Weibull-type所得AIC和BIC值最小,即Weibull-type模型擬合度最優(yōu)。根據(jù)模型參數(shù):確定系數(shù)（R2）、矯正確定系數(shù)（adj.R2）、均方差（MSE）、r（相關(guān)系數(shù)）、赤池信息量準(zhǔn)則（AIC）、貝葉斯信息量準(zhǔn)則（BIC）和Durbin-Watson值可知,就九種模型而言,Weibull-type曲線模型的擬合效果最好,在估計(jì)鷓鴣群體、公鷓鴣和母鷓鴣體重方面更具優(yōu)勢(shì)。3.鷓鴣MSTN基因表達(dá)及其與體重和肌纖維發(fā)育的相關(guān)性本研究利用組織切片技術(shù)對(duì)0到1 8周齡的公、母鷓鴣肌纖維的發(fā)育特征進(jìn)行研究,包括肌纖維直徑、橫截面積和密度等組織學(xué)指標(biāo)。石蠟切片分析結(jié)果顯示,從2周齡到10周齡,鷓鴣胸肌纖維發(fā)育較快,肌纖維直徑、肌纖維橫截面積都隨著周齡增加顯著性增大（P<0.05）,肌纖維密度隨著周齡的增大而不斷下降。12周齡到18周齡肌纖維膨大速度放緩,肌纖維直徑和面積增長(zhǎng)速度有所下降。公、母鷓鴣肌纖維發(fā)育在各個(gè)周齡間無顯著性差異,但各周齡公鷓鴣肌纖維直徑和面積都略大于母鷓鴣。Myostatin（MSTN）是骨骼肌生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)節(jié)因子,在肌肉發(fā)育中起重要作用。在本研究中,我們使用qRT-PCR方法構(gòu)建了鷓鴣MSTN基因在1 1個(gè)組織中的組織表達(dá)譜以及在胸肌中的時(shí)空表達(dá)譜。結(jié)果顯示,MSTN mRNA在胸肌中表達(dá)量最高,在心、肝、脾、肺、腎、腺胃、肌胃、下丘腦、垂體等組織中均有不同程度的表達(dá)。此外,胸肌中MSTN基因表達(dá)量在不同周齡之間存在差異,在胸肌中表達(dá)呈先增后降的趨勢(shì)。分析胸肌中肌纖維直徑,橫截面積,密度與MSTN表達(dá)和體重之間的相關(guān)性。結(jié)果顯示,鷓鴣MSTN表達(dá)與肌纖維直徑（r=0.650）和肌纖維密度（r=-0.721）顯著性相關(guān)（P<0.05）,與體重（r=0.629）和肌纖維面積（r=0.580）無顯著性相關(guān)。0-18周齡體重與肌纖維發(fā)育（肌纖維直徑（r=0.907）、肌纖維面積（r=0.984）和肌纖維密度（r=-0.841））有極顯著性相關(guān)（P<0.01）。肌纖維密度和肌纖維直徑（r=-0.931）與肌纖維面積（r=-0.878）有極顯著性負(fù)相關(guān)（P<0.01）。
王安妮[7]（2019）在《雞鼻氣管鳥桿菌油乳劑滅活苗及外膜蛋白疫苗的研制》文中研究指明鼻氣管鳥桿菌?。∣rnithobacterium rhinotracheale,ORT）是一種嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的呼吸道傳染病,ORT在臨床上常危害3～6周齡的肉雞及火雞,引起急性呼吸道病,近年來給養(yǎng)雞業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。鼻氣管鳥桿菌病的防治主要采用在飼料或飲水中添加抗生素治療以及通過疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防兩種方法。由于抗生素治療存在弊端,目前國(guó)外研發(fā)了包括活疫苗、滅活疫苗和重組疫苗等,用于預(yù)防鼻氣管鳥桿菌病。本研究采用甲醛滅活菌體研制油乳劑滅活苗,同時(shí)應(yīng)用基因工程技術(shù)原核表達(dá)蛋白基因,純化表達(dá)產(chǎn)物,進(jìn)行動(dòng)物免疫保護(hù)試驗(yàn),評(píng)價(jià)兩種疫苗的免疫抗體水平以及免疫保護(hù)率,旨在為鼻氣管鳥桿菌病的防治奠定基礎(chǔ)。1 鼻氣管鳥桿菌生物學(xué)特性研究本研究將實(shí)驗(yàn)室凍存的ORT分離株進(jìn)行復(fù)壯及鑒定,按常規(guī)操作進(jìn)行革蘭氏染色,生化鑒定,PCR鑒定以及動(dòng)物回歸試驗(yàn)所得結(jié)果與國(guó)外報(bào)道的分離株相似,且血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明分離株為血清型A型。而后采用分光光度法及平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定鼻氣管鳥桿菌生長(zhǎng)曲線,并對(duì)16h鼻氣管鳥桿菌OD600nm與CFU的關(guān)系進(jìn)行探討,結(jié)果顯示,繪制的生長(zhǎng)曲線基本一致,由此可得鼻氣管鳥桿菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為2～16h,穩(wěn)定期為16～20h,20h以后進(jìn)入衰亡期,并且建立適用于鼻氣管鳥桿菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的OD60nm與CFU的回歸方程為:y=2.7591x-0.0897（R2=0.9973）。最后進(jìn)行了半數(shù)致死量的測(cè)定,根據(jù)改良寇氏法計(jì)算得LD50=1.19×1010CFU/mL,為了有效地利用和控制鼻氣管鳥桿菌的生長(zhǎng)提供了參考。2 鼻氣管鳥桿菌油乳劑滅活苗的研制本研究利用戊二醛處理聚苯乙烯酶標(biāo)板,將鼻氣管鳥桿菌的全細(xì)胞抗原進(jìn)行干燥包被,通過方陣滴定試驗(yàn)確定最佳抗原包被濃度為108CFU/mL,血清最佳稀釋度為1:100,并且通過試驗(yàn)確認(rèn)其具有較好的特異性以及重復(fù)性。將分離鑒定的鼻氣管鳥桿菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后用0.2%甲醛溶液滅活24h,制備滅活苗,對(duì)疫苗進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn),結(jié)果表明,疫苗乳化效果良好,無菌生長(zhǎng),內(nèi)毒素含量符合要求,將7日齡的SPF肉雞接種疫苗后無不良反應(yīng)。分別在雞7日齡和14日齡接種疫苗,用間接ELISA法檢測(cè)其抗體水平,并在21日齡對(duì)免疫組及攻毒組雞只進(jìn)行攻毒,對(duì)免疫效果及攻毒保護(hù)能力進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果顯示兩次接種疫苗后不同抗原含量的疫苗均有較好的免疫效果,能夠預(yù)防鼻氣管鳥桿菌的感染。3 鼻氣管鳥桿菌外膜蛋白疫苗的研制將實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并凍存的重組菌PGEX-OMA87復(fù)蘇后,大量表達(dá)純化OMA87蛋白,與弗氏佐劑1:1乳化,以7日齡SPF雞為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,對(duì)疫苗進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn),結(jié)果顯示疫苗乳化效果良好,無菌生長(zhǎng),內(nèi)毒素含量符合要求,SPF肉雞接種后無不良反應(yīng)。對(duì)免疫效果及攻毒保護(hù)能力進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果顯示兩次接種疫苗后不同抗原含量的疫苗均有較好的免疫效果,能夠有效預(yù)防鼻氣管鳥桿菌的感染。
羅青平[8]（2019）在《基于蛋白質(zhì)組學(xué)的禽多殺性巴氏桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白的發(fā)掘及功能研究》文中提出禽巴氏桿菌?。ˋvian pasteurellosis）又稱禽霍亂,是由禽多殺性巴氏桿菌引起的主要侵害雞、火雞禽類的一種急性、接觸性、敗血性傳染病。臨床上感染的病禽主要表現(xiàn)為急性死亡,死亡率極高。早期使用磺胺類、氯霉素等抗生素預(yù)防治療禽巴氏桿菌病有一定效果。但隨著抗生素的長(zhǎng)期大量使用,一方面導(dǎo)致禽蛋禽肉等禽產(chǎn)品的藥物殘留,另一方面導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)。預(yù)防控制本病的最有效途徑和發(fā)展趨勢(shì)是免疫預(yù)防。禽多殺性巴氏桿菌（Avian pasteurella,Pm）有15種血清型,用不同血清型的巴氏桿菌制備疫苗免疫,發(fā)現(xiàn)各血清型之間并不能提供交叉保護(hù)。當(dāng)前我國(guó)使用的禽多殺性巴氏桿菌疫苗是滅活疫苗,最好的商業(yè)化滅活疫苗對(duì)同源血清型菌株感染的免疫保護(hù)率不到80%,保護(hù)期短。因此,迫切需要提高滅活疫苗的免疫保護(hù)效果和免疫保護(hù)期,或者研發(fā)新型高效的新疫苗,以滿足產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要。部分學(xué)者對(duì)某些細(xì)菌在限鐵和非限鐵培養(yǎng)進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)的比較分析,發(fā)現(xiàn)限鐵培養(yǎng)的菌液中有大量的免疫原性蛋白,與非限鐵培養(yǎng)的菌液相比呈明顯的上調(diào)表達(dá)?；谶@樣的發(fā)現(xiàn),我們推測(cè)禽巴氏桿菌在限鐵培養(yǎng)條件下也可能會(huì)產(chǎn)生大量的免疫原性相關(guān)蛋白,可挖掘篩選免疫原性強(qiáng)的蛋白制備安全高效的亞單位疫苗,或以此方法培養(yǎng)的細(xì)菌制備疫苗也可能比非限鐵培養(yǎng)的禽巴氏桿菌制備的疫苗會(huì)產(chǎn)生更好更高效的免疫效果。主要的研究?jī)?nèi)容包括如下:1.禽多殺性巴氏桿菌限鐵培養(yǎng)及滅活疫苗研究本研究采用限鐵（PMR）或正常培養(yǎng)基（PMN）培養(yǎng)Pm并監(jiān)測(cè)其生長(zhǎng)情況,繪制了限鐵培養(yǎng)基和正常培養(yǎng)基中Pm的生長(zhǎng)曲線。在培養(yǎng)前2小時(shí),兩種條件下的Pm生長(zhǎng)能力無顯著差異。在正常培養(yǎng)基中,Pm在4小時(shí)后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,在12小時(shí)后達(dá)到平臺(tái)期。但限鐵培養(yǎng)基中Pm的對(duì)數(shù)期和平臺(tái)期較正常培養(yǎng)基延遲2小時(shí)。限鐵培養(yǎng)條件Pm生長(zhǎng)速度低于正常培養(yǎng)基（P<0.05）,說明缺鐵條件明顯抑制了Pm的生長(zhǎng)。研究結(jié)果顯示限鐵培養(yǎng)制備的疫苗免疫保護(hù)率明顯優(yōu)于正常培養(yǎng)菌株制備的疫苗,其攻毒保護(hù)率達(dá)到100%,可有效保護(hù)免疫雞群免受禽巴氏桿菌的感染。但無論是限鐵培養(yǎng)制備的滅活疫苗還是正常培養(yǎng)制備的滅活疫苗,一次免疫與二次免疫產(chǎn)生的抗體水平差異不明顯,二次免疫雞群抗體持續(xù)期相對(duì)較長(zhǎng),限鐵培養(yǎng)制備的滅活疫苗免疫保護(hù)期大于6個(gè)月,顯著高于其他滅活疫苗。2.禽多殺性巴氏桿菌免疫原性相關(guān)蛋白的發(fā)掘本研究模擬動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境,在限鐵環(huán)境中培養(yǎng)Pm。然后通過蛋白質(zhì)組學(xué),利用雙向電泳和質(zhì)譜鑒定技術(shù),鑒定出Pm在限鐵環(huán)境中有262個(gè)差異蛋白點(diǎn),其中99個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量上升,選取其中的13個(gè)顯著上調(diào)蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,共有11個(gè)檢索出蛋白種類,分別代表了4類蛋白質(zhì),其中8個(gè)為外膜蛋白,1個(gè)為天冬氨酸裂解酶,1個(gè)為是30S核糖體蛋白,還有1個(gè)為假想蛋白。選取3種分泌蛋白進(jìn)行克隆表達(dá)并進(jìn)行Western Blotting檢測(cè)免疫原性（外膜蛋白的免疫原性都有大量的報(bào)道,本研究不再重復(fù)）。將純化后的分泌蛋白Asp裂解酶（aspA）、假想蛋白H和30S核糖體S6制備成亞單位疫苗,免疫40日齡雛雞,結(jié)果顯示免疫28天后抗體水平達(dá)到最高,35天后呈下降趨勢(shì),Asp裂解酶、假想蛋白H和核糖體蛋白S6亞單位疫苗攻毒保護(hù)率分別為80%、66.67%、80%,Asp裂解酶和S6亞單位疫苗免疫效果接近于常規(guī)滅活疫苗,而且此外疫苗免疫組免疫部位出現(xiàn)紅腫,剖開免疫部位可見白色的油狀物,可能是滅活疫苗中含有不能被機(jī)體吸收的油佐劑造成的,而亞單位疫苗免疫組沒有出現(xiàn)這種狀況。因此本研究的亞單位疫苗具有較好的開發(fā)前景。3.禽巴氏桿菌aspA基因缺失株的構(gòu)建及其功能的研究以NCBI數(shù)據(jù)庫中的禽巴氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)m70全基因組作為參照對(duì)禽巴氏桿菌Asp裂解酶（aspA）基因進(jìn)行序列比對(duì)和分析。根據(jù)同源重組技術(shù),首先通過融合PCR的方法將禽巴氏桿菌aspA基因的左右同源臂融合,然后將融合片段和卡那抗性基因盒通過雙酶切連接到自殺質(zhì)粒上,再利用電轉(zhuǎn)的方法將重組自殺質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到Pm中,最后通過抗性篩選及PCR鑒定,成功構(gòu)建基因缺失株,與野生型親本株比較結(jié)果顯示:aspA基因的氨基酸分解代謝作用對(duì)禽巴氏桿菌的生長(zhǎng)有重要作用;其可以提高禽巴氏桿菌抗酸能力、厭氧生存能力和限鐵環(huán)境生存能力;然而,aspA基因缺失并沒有顯著降低禽巴氏桿菌的毒力。
田二杰[9]（2019）在《雞源大腸桿菌對(duì)達(dá)氟沙星和安普霉素的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)研究》文中研究指明對(duì)于禽類,一些大腸桿菌能夠通過定植在腸道導(dǎo)致腸內(nèi)感染,同時(shí)也能轉(zhuǎn)移到腸外導(dǎo)致腸外感染,主要感染3～7周齡的雛雞,臨床表現(xiàn)為心包炎、肝周炎、腹膜炎、眼炎等癥狀,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。達(dá)氟沙星（氟喹諾酮類）和安普霉素（氨基糖苷類）是兩種獸醫(yī)專用廣譜抗生素,常用于預(yù)防和治療雞、豬等動(dòng)物的革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌）引起的感染。目前由于抗生素的長(zhǎng)期不規(guī)范使用,大腸桿菌的耐藥性問題愈發(fā)嚴(yán)重。然而國(guó)內(nèi)外尚未建立這兩種藥物對(duì)大腸桿菌的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)。本研究旨在通過建立達(dá)氟沙星和安普霉素的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn),為規(guī)范這兩種藥物在我國(guó)獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。（1）達(dá)氟沙星和安普霉素對(duì)大腸桿菌的野生型臨界值（COWT）的測(cè)定本研究從全國(guó)各大規(guī)?；B(yǎng)雞場(chǎng)采集并分離鑒定了 1412株雞源大腸桿菌,采用微量肉湯稀釋法測(cè)得達(dá)氟沙星和安普霉素的最小抑菌濃度（MIC）。達(dá)氟沙星在0.125～64 μg/mL濃度范圍內(nèi)的MIC呈雙峰分布,峰值分別為0.5μg/mL和8 μg/mL,其中MIC為8μg/mL時(shí)細(xì)菌有215株,占15.7%,分布最多。達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌的MIC50為4μg/mL,MIC90為64μg/mL。而安普霉素在2～256 μg/mL濃度范圍中呈單峰分布,峰值為MIC=8μg/mL,此處細(xì)菌有828株,占60.7%。安普霉素對(duì)大腸桿菌的MIC50為8μg/mL,MIC90為16μg/mL。將兩種藥物的MIC值轉(zhuǎn)換為L(zhǎng)og2MIC,進(jìn)而采用非線性回歸分析、NORMINV和NORMDIST方法建立達(dá)氟沙星和安普霉素的COWT分別為4 μg/mL和16 μg/mL。（2）大腸桿菌對(duì)達(dá)氟沙星和安普霉素的耐藥特點(diǎn)分析選擇不同MIC值的大腸桿菌,用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法檢測(cè)耐藥基因與MIC的相關(guān)性。結(jié)果表明大腸桿菌中達(dá)氟沙星耐藥基因oqxAB、aac（Ib-cr）、qnrAqnrB、qnrS和qepA基因的陽性率在一定程度上隨著MIC值的升高而增大,qnrC和qnrD陽性率為0。同樣,安普霉素耐藥基因aac（3）-Ⅳ和npmA的陽性率也具有MIC值依賴性。采用微量肉湯稀釋法進(jìn)一步篩選到24株達(dá)氟沙星高度耐藥菌和16株安普霉素高度耐藥菌,并使用紙片擴(kuò)散法檢測(cè)這兩類菌株對(duì)17種抗革蘭氏陰性菌常用抗生素的敏感性,結(jié)果表明這兩類菌株均具有多重耐藥性,最低10耐,最高達(dá)15～16耐。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)所有的達(dá)氟沙星耐藥菌株對(duì)阿莫西林、氨芐西林、萘啶酸、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、多西環(huán)素、四環(huán)素和甲氧芐啶均表現(xiàn)出100%耐藥,而對(duì)阿米卡星和磷霉素相對(duì)較敏感。所有的安普霉素耐藥菌株對(duì)阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶和氟苯尼考均表現(xiàn)出100%耐藥。所有安普霉素耐藥菌株都對(duì)慶大霉素耐藥,而對(duì)阿米卡星和大觀霉素相對(duì)較敏感。（3）達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的藥效學(xué)臨界值（COPD）的建立構(gòu)建大腸桿菌感染雞動(dòng)物模型,單次口服給予達(dá)氟沙星5 mg/kg后,分別收集不同時(shí)間點(diǎn)健康組和感染組雞的血樣和4種腸段（十二指腸、空腸、回腸和盲腸）的腸液,并用高效液相色譜熒光法檢測(cè)藥物濃度。4種腸段的群體藥物代謝動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)符合二室模型。健康組雞從十二指腸、空腸到回腸的吸收速率（Ka）、清除率（CL）和分布體積（V）依次下降。而在感染組雞的腸道中,空腸中Ka和V值最高。與健康組相比,感染組雞從十二指腸、空腸到回腸,達(dá)氟沙星的CL依次降低,且均低于健康組雞的相應(yīng)腸段,十二指腸和回腸的Ka顯著降低,空腸和回腸中的V增大。健康組和感染組雞回腸中的F均較高。大腸桿菌078在MH肉湯、回腸液和血漿中的生長(zhǎng)曲線的趨勢(shì)一致。微量肉湯稀釋法檢測(cè)達(dá)氟沙星在肉湯、血漿和4種腸液中對(duì)大腸桿菌078的最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。結(jié)果顯示,達(dá)氟沙星在MH肉湯和血漿中的MIC均為0.016μg/mL,而在4種腸液中MIC值均比血漿中和MH肉湯中的大,其中空腸液中的MIC值最大（6.4 μg/mL）,而在回腸液中的MIC值最?。?.64 μg/mL）。采用平板傾倒計(jì)數(shù)法,繪制達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌078的體外和半體內(nèi)（回腸和十二指腸）殺菌曲線。達(dá)氟沙星的體外和半體內(nèi)殺菌作用均表現(xiàn)出濃度依賴性,因此可選擇PK/PD參數(shù)AUC/MIC來制定COPD。綜合血漿和4種腸段中達(dá)氟沙星的藥動(dòng)學(xué)（PK）和藥效學(xué)（PD）特點(diǎn),最終采用感染組回腸中的數(shù)據(jù)建立COPD。使用Winnonlin軟件分析血漿和回腸的PK數(shù)據(jù),得到達(dá)氟沙星在感染組雞血漿中的平均達(dá)峰時(shí)間（Tmax）、達(dá)峰濃度（Cmax）和藥時(shí)曲線下面積（AUC24）分別為 1 h,0.38 μg/mL 和 2.06 h·μg/mL;在回腸中的 Tmax、Cmax和 AUC 分別為 2.7 h,18.95μg/mL和261.78 h·μg/mL。進(jìn)而用Winnonlin軟件中Sigmoid Emax模型對(duì)回腸的PK/PD數(shù)據(jù)進(jìn)行模擬,選擇E=-3時(shí)AUC/MIC的值為藥效學(xué)目標(biāo)。計(jì)算得到達(dá)氟沙星在回腸中的藥效學(xué)目標(biāo)為421.45。最后使用Crystal ball軟件對(duì)達(dá)氟沙星在回腸中的PK/PD數(shù)據(jù)進(jìn)行蒙特卡洛模擬,得到不同MIC值下AUC/MIC達(dá)到藥效學(xué)目標(biāo)的概率,選擇達(dá)標(biāo)率大于90%的最大MIC為COPD。即回腸液中達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的COPD為0.54 μg/mL。（4）達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的臨床臨界值（COCL）的制定本研究中,達(dá)氟沙星對(duì)雞的臨床治療試驗(yàn)包括感染組、感染治療組和1個(gè)空白對(duì)照組,每組10只雞。攻毒菌株是通過PCR和雛雞攻毒實(shí)驗(yàn)篩選出的5個(gè)不同MIC值的大腸桿菌致病株。每一個(gè)感染組對(duì)應(yīng)三個(gè)感染治療組,治療方案分別為5 mg/kg,2次/天,連續(xù)3天;10mg/kg,2次/天,連續(xù)3天;20mg/kg,1次/天,連續(xù)3天。治療結(jié)果表明,3種治療方案的治愈率無明顯差異。因此,選擇5 mg/kg的治療結(jié)果來制定COCL。首先采用EUCAST推薦的WindoW法,得到達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的COCL范圍為0.5～16 μg/mL。然后用CART分類樹回歸分析法分析得到,當(dāng)POC等于90%時(shí),COCL>2.25μg/mL。因此,推薦4μg/mL為達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的COCL。綜上,本研究中達(dá)氟沙星的COWT=COcL=4μg/mL,COPD為0.54μg/mL。因此,達(dá)氟沙星的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)為4 μg/mL。而安普霉素的COWT為16 μg/mL,其藥效學(xué)和臨床臨界值還有待進(jìn)一步研究和確定。
趙成雪[10]（2019）在《豬星狀病毒天津分離株基因組特征分析及其Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的構(gòu)建》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理豬星狀病毒（Porcine astroviruses,PAstVs）是星狀病毒科哺乳動(dòng)物屬內(nèi)的無囊膜單股正鏈RNA病毒,是引發(fā)仔豬腹瀉、脫水及食欲下降等腸道疾病的重要病原。星狀病毒基因重組、跨物種傳播及適應(yīng)新宿主的能力使星狀病毒成為潛在的人畜共患病原。了解星狀病毒的遺傳進(jìn)化特征及研制安全有效的疫苗對(duì)于防控星狀病毒感染意義重大。本課題的主要研究結(jié)果如下:1.豬星狀病毒的全基因組克隆及其遺傳進(jìn)化特征分析:通過RT-PCR在天津靜海、寧河養(yǎng)殖場(chǎng)的29份豬腹瀉糞便中檢測(cè)到PAstV2（3份）和PAstV4（1份）,PAstV檢出率為13.8%。通過四節(jié)段重疊PCR和RACE方法克隆了PAstV4全基因組序列,將其命名為PAstV4/Tianjin/2018。核苷酸序列分析結(jié)果顯示PAstV4/Tianjin/2018基因組包含典型的星狀病毒科核苷酸基序,核糖體移位信號(hào)和高度保守的亞基因組啟動(dòng)子序列位于ORF1a/1b和ORF1ab/2重疊區(qū)內(nèi)。遺傳進(jìn)化分析表明PAstV4/Tianjin/2018屬于PAstV4亞型,與匈牙利株（WBAstV-1/HUN/2011）進(jìn)化關(guān)系最近?；蛑亟M結(jié)果顯示PAstV4/Tianjin/2018是美國(guó)株P(guān)AstV4/US-IL135（JX556692.1）和日本株P(guān)AstV4/JPN（LC201608.1）的重組毒株,重組位點(diǎn)在ORF1ab/ORF2交界處。2.不同啟動(dòng)子調(diào)控的、高效展示Aga1釀酒酵母宿主菌的構(gòu)建:以釀酒酵母菌株JDY52為出發(fā)菌株,通過醋酸鋰轉(zhuǎn)化法將線性化質(zhì)粒PIU211轉(zhuǎn)入JDY52,利用SD-URA選擇性培養(yǎng)基和基因組PCR篩選陽性轉(zhuǎn)化子,獲得誘導(dǎo)型乳糖啟動(dòng)子LAC調(diào)控的、表面高效展示Aga1酵母宿主菌株ST1814A。PCR克隆GPD啟動(dòng)子,通過反向PCR擴(kuò)增和無縫連接將PIU211 LAC啟動(dòng)子替換為GPD啟動(dòng)子,獲得組成型葡萄糖啟動(dòng)子GPD調(diào)控的、表面高效展示Aga1酵母宿主菌株ST1814G。3.豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母表達(dá)菌株的構(gòu)建:以PAstV4/Tianjin/2018 Cap蛋白作為釀酒酵母表面展示蛋白,應(yīng)用Yeast Fab模塊組裝方法構(gòu)建了GAL1啟動(dòng)子、GPD啟動(dòng)子控制的Aga2-Cap轉(zhuǎn)錄單位（GAL1-Aga2-Cap-ADH1、GPD-Aga2-Cap-ADH1）。依據(jù)酵母同源重組原理通過醋酸鋰轉(zhuǎn)化法將Aga2-Cap代謝途徑（URR1-TU-LEU2-URR2）整合至ST1814A和ST1814G Ⅳ染色體HO基因座（URR1-HIS3-URR2）,通過SD-LEU選擇性培養(yǎng)基和基因組PCR鑒定陽性重組子,獲得豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母表達(dá)菌株ST1814G/Cap和ST1814A/Cap。4.豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株表達(dá)特征及免疫效力分析:利用Western-blot和免疫熒光分析確定Cap蛋白成功表達(dá)且表達(dá)在釀酒酵母細(xì)胞表面。生長(zhǎng)曲線分析表明Cap蛋白的表達(dá)不影響重組釀酒酵母的生長(zhǎng)。通過ELISA檢測(cè)口服免疫小鼠的血清IgG和糞便IgA抗體變化,結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組小鼠的血清Cap特異性IgG和糞便Cap特異性IgA抗體水平顯著高于空白菌株組和PBS組。綜上所述,本研究成功克隆了豬星狀病毒4型天津分離株的全基因組序列,確定了其核苷酸序列及遺傳進(jìn)化特征。構(gòu)建了不同啟動(dòng)子調(diào)控的、表面高效展示Aga1釀酒酵母宿主菌株,可作為外源蛋白肽的表達(dá)、遞送工具。制備了豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母工程菌株,為豬星狀病毒的免疫防控提供了對(duì)策。
二、禽類三種常用生長(zhǎng)曲線淺析（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級(jí)分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、禽類三種常用生長(zhǎng)曲線淺析（論文提綱范文）
（1）不同品種雞生長(zhǎng)曲線擬合及分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料及分組 |
| 1.2 生長(zhǎng)模型的選擇 |
| 1.3 統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 4個(gè)品種體重生長(zhǎng)分析 |
| 2.2 4個(gè)品種生長(zhǎng)曲線擬合分析 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（2）矮小體型蘆花雞GHR基因突變類型分析及其與正常體型蘆花雞發(fā)育差異研究（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 基因組DNA提取及矮小體型蘆花雞GHR基因突變類型分析 |
| 1.3 蘆花雞GHR基因擴(kuò)增 |
| 1.4 擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序 |
| 1.5 蘆花雞體重、體尺數(shù)據(jù)采集 |
| 1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 矮小體型蘆花雞的突變檢測(cè) |
| 2.1.1 矮小體型蘆花雞GHR基因Ⅰ型和Ⅱ型突變檢測(cè) |
| 2.1.2 矮小體型蘆花雞GHR基因Ⅲ型突變檢測(cè) |
| 2.1.3 矮小體型蘆花雞GHR基因Ⅳ型突變檢測(cè) |
| 2.2 矮小與正常體型蘆花雞發(fā)育差異研究 |
| 2.2.1 矮小與正常體型蘆花雞外貌特征差異 |
| 2.2.2 正常和矮小體型蘆花雞體重生長(zhǎng)曲線擬合比較 |
| 2.2.3 正常和矮小體型蘆花雞脛長(zhǎng)生長(zhǎng)曲線擬合比較 |
| 3 討論 |
| 3.1 矮小體型蘆花雞的突變類型 |
| 3.2 體重生長(zhǎng)曲線及擬合分析 |
| 3.3 脛長(zhǎng)生長(zhǎng)曲線及擬合分析 |
| 4 結(jié)論 |
（3）APEC O1型E516攝鐵基因c2515和c2516缺失株的生物學(xué)特性及C2515單克隆抗體的研制（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符號(hào)說明 |
| 第1章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 禽致病性大腸桿菌的研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 病原學(xué) |
| 1.1.2 臨床癥狀與病理變化 |
| 1.1.3 流行病學(xué) |
| 1.1.4 毒力因子 |
| 1.1.5 防治措施 |
| 1.2 攝鐵系統(tǒng)的研究進(jìn)展 |
| 1.2.1 鐵載體的合成 |
| 1.2.2 鐵載體的轉(zhuǎn)運(yùn) |
| 1.2.3 鐵載體對(duì)APEC毒力的影響 |
| 1.2.4 血紅素?cái)z取系統(tǒng) |
| 1.3 單克隆抗體技術(shù)研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展 |
| 1.3.2 單克隆抗體的制備技術(shù) |
| 1.3.3 單克隆抗體的應(yīng)用 |
| 1.4 研究目的及意義 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第2章 c2515、c2516基因缺失株及回補(bǔ)株的構(gòu)建 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 試驗(yàn)菌株、質(zhì)粒和細(xì)胞 |
| 2.1.2 主要試劑及溶液配方 |
| 2.1.3 主要儀器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 PCR方法鑒定c2515、c2516基因在E516、E058、E522中的存在 |
| 2.2.2 c2515、c2516基因缺失株的構(gòu)建 |
| 2.2.3 E516菌株c2515-c2516雙基因回補(bǔ)株的構(gòu)建 |
| 2.2.4 遺傳穩(wěn)定性分析 |
| 2.2.5 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 c2515、c2516基因鑒定結(jié)果 |
| 2.3.2 缺失株和回補(bǔ)株的構(gòu)建 |
| 2.3.3 遺傳穩(wěn)定性分析結(jié)果 |
| 2.3.4 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第3章 E516及其c2515、c2516基因缺失株和回補(bǔ)株的生物學(xué)特性 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 試驗(yàn)菌株和動(dòng)物 |
| 3.1.2 主要試劑及溶液配方 |
| 3.1.3 主要儀器 |
| 3.1.4 分子生物學(xué)軟件及數(shù)據(jù)分析軟件 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR分析 |
| 3.2.2 qRT-PCR |
| 3.2.3 CAS法檢測(cè)鐵載體產(chǎn)出 |
| 3.2.4 鐵攝取檢測(cè) |
| 3.2.5 1日齡雞的半數(shù)致死量(LD50)測(cè)定 |
| 3.2.6 21日齡SPF雞體內(nèi)定居試驗(yàn) |
| 3.2.7 組織病變觀察 |
| 3.2.8 雞巨噬細(xì)胞感染試驗(yàn) |
| 3.2.9 數(shù)據(jù)處理 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.3.1 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.2 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.3 CAS固體培養(yǎng)基檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.4 鐵攝取檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.5 LD_(50)試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.6 體內(nèi)定居試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.7 組織病變觀察結(jié)果 |
| 3.3.8 雞巨噬細(xì)胞感染試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第4章 E516菌株C2515攝鐵蛋白單克隆抗體的研制 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 試驗(yàn)菌株、動(dòng)物和載體 |
| 4.1.2 主要試劑及溶液配方 |
| 4.1.3 主要儀器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 引物設(shè)計(jì)與合成 |
| 4.2.2 pET11b-c2515-His原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定 |
| 4.2.3 C2515-His蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化 |
| 4.2.4 單克隆抗體的制備 |
| 4.2.5 單克隆抗體的特性鑒定 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.3.1 PCR擴(kuò)增及質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果 |
| 4.3.2 C2515-His蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果 |
| 4.3.3 表達(dá)條件的優(yōu)化結(jié)果 |
| 4.3.4 C2515-His蛋白大量表達(dá)與純化結(jié)果 |
| 4.3.5 抗原最適包被濃度和抗體最佳稀釋度 |
| 4.3.6 免疫小鼠血清抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果 |
| 4.3.7 陽性孔雜交瘤細(xì)胞的克隆化結(jié)果 |
| 4.3.8 單抗鑒定結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
（4）冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雞的致病性及全基因組序列測(cè)定與分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第一章 緒論 |
| 1 研究目的與意義 |
| 2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展 |
| 2.1 單增李斯特菌 |
| 2.2 LM的致病機(jī)制 |
| 2.2.1 LM的胞內(nèi)增殖過程 |
| 2.2.2 消化道感染 |
| 2.2.3 胎盤感染 |
| 2.2.4 中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 |
| 2.3 影響單增李斯特菌的致病性因素 |
| 2.4 單增李斯特菌致病性評(píng)估模型 |
| 2.4.1 組織培養(yǎng)測(cè)試 |
| 2.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的測(cè)定 |
| 2.4.3 小鼠模型 |
| 2.4.4 豚鼠模型 |
| 2.4.5 蒙古沙鼠 |
| 2.4.6 其他動(dòng)物 |
| 3 研究?jī)?nèi)容 |
| 3.1 單增李斯特菌冷凍雞肉單增李斯特菌分離株雞胚LD_(50)測(cè)定 |
| 3.1.1 強(qiáng)毒株毒力基因檢測(cè) |
| 3.1.2 17 株LM冷凍雞肉分離株雞胚毒力檢測(cè) |
| 3.1.3 分離菌株溶血活性的測(cè)定結(jié)果 |
| 3.1.4 雞胚肝臟指數(shù) |
| 3.2 冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雛雞致病性試驗(yàn) |
| 3.2.1 雛雞毒力測(cè)定 |
| 3.2.2 剖解變化與組織病理學(xué)變化 |
| 3.2.3 組織載菌量測(cè)定 |
| 3.3 LM冷凍雞肉分離株的環(huán)境適應(yīng)性與生物被膜形成能力研究 |
| 3.3.1 不同環(huán)境對(duì)LM生長(zhǎng)的影響 |
| 3.3.2 LM生物被膜形成量與形成能力的測(cè)定 |
| 3.4 分離株全基因組測(cè)序與分析 |
| 3.4.1 分離株全基因組提取與測(cè)序 |
| 3.4.2 基因組拼接 |
| 3.4.3 毒力基因與MLST分型 |
| 3.4.4 基因組分析與系統(tǒng)進(jìn)化分析 |
| 第二章 試驗(yàn)研究 |
| 試驗(yàn)一 冷凍雞肉單增李斯特菌分離株雞胚LD_(50)測(cè)定及毒力基因檢測(cè) |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng) |
| 1.2.2 強(qiáng)毒株毒力基因檢測(cè) |
| 1.2.3 溶血活性測(cè)定方法 |
| 1.2.4 雞胚毒力測(cè)定 |
| 1.2.5 雞胚肝臟指數(shù)測(cè)定 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 毒力基因檢測(cè) |
| 2.2 分離菌株溶血活性的測(cè)定結(jié)果 |
| 2.3 17 株LM冷凍雞肉分離株雞胚毒力測(cè)定結(jié)果 |
| 2.4 雞胚肝臟指數(shù) |
| 3.討論 |
| 4 小結(jié) |
| 試驗(yàn)二 冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雛雞致病性試驗(yàn) |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng) |
| 1.2.2 雛雞毒力測(cè)定 |
| 1.2.3 剖解變化與組織病理學(xué)變化 |
| 1.2.4 組織載菌量測(cè)定 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 感染雛雞的臨床觀察 |
| 2.2 LD_(50)測(cè)定 |
| 2.3 剖解變化與組織病理學(xué)變化 |
| 2.4 組織載菌量測(cè)定結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 試驗(yàn)三 分離株LM925 與LM873 的環(huán)境適應(yīng)性和生物被膜形成能力測(cè)定 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 不同溫度條件下的生長(zhǎng)曲線 |
| 1.2.2 不同pH條件下生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 |
| 1.2.3 不同EtOH濃度條件下生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 1.2.4 不同NaCI濃度條件下生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 1.2.5 生物被膜形成能力的測(cè)定 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 不同溫度條件下的生長(zhǎng)曲線 |
| 2.2 不同pH條件下生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 |
| 2.3 不同EtOH濃度條件下生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 2.4 不同NaCI濃度條件下生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 2.5 生物被膜形成能力的測(cè)定 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 試驗(yàn)四 分離株LM925 與LM873 基因組進(jìn)化及毒力基因分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株及培養(yǎng)條件 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 基因組提取與全基因組測(cè)序 |
| 1.2.2 MLST分析 |
| 1.2.3 毒力基因分析 |
| 1.2.4 基因組進(jìn)化分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 LM925 與LM873 基因組特點(diǎn) |
| 2.2 分離株LM925與LM873 的毒力基因分析及MLST分型 |
| 2.3 基因組進(jìn)化分析 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三章 全文結(jié)論 |
| 第四章 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 附件 |
（5）817肉雞初生重對(duì)生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)及下丘腦mRNA表達(dá)的影響（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞(Abbreviation) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.我國(guó)肉雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀 |
| 2.肉雞生產(chǎn)性能和肉品質(zhì)的影響因素 |
| 2.1 環(huán)境因素 |
| 2.2 營(yíng)養(yǎng)因素 |
| 2.3 飼養(yǎng)方式與飼養(yǎng)密度 |
| 2.4 遺傳因素 |
| 2.5 神經(jīng)內(nèi)分泌生長(zhǎng)軸 |
| 3.肉雞初生重的研究進(jìn)展 |
| 3.1 肉雞初生重對(duì)生產(chǎn)性能的影響 |
| 3.2 肉雞初生重的影響因素 |
| 4.轉(zhuǎn)錄組的簡(jiǎn)介及家雞功能基因挖掘的應(yīng)用 |
| 5.研究的目的與意義 |
| 1.引言 |
| 2.材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備 |
| 2.3 營(yíng)養(yǎng)與日糧 |
| 2.4 測(cè)定方法 |
| 2.4.1 生產(chǎn)性能的測(cè)定 |
| 2.4.2 屠宰性能的測(cè)定 |
| 2.4.3 肉品質(zhì)的測(cè)定 |
| 2.4.4 總RNA的提取 |
| 2.4.5 RNA質(zhì)量檢測(cè) |
| 2.4.6 RNA-seq的測(cè)定和文庫構(gòu)建 |
| 2.4.7 對(duì)RNA-seq結(jié)果的驗(yàn)證 |
| 2.5 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.結(jié)果與分析 |
| 3.1 初生重表型性狀的分布與生長(zhǎng)曲線擬合 |
| 3.2 初生重對(duì)于生產(chǎn)性能的影響 |
| 3.2.1 初生重對(duì)生長(zhǎng)性能的影響 |
| 3.2.2 初生重對(duì)于公雞屠宰性能的影響 |
| 3.3 不同初生重雞的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序與分析 |
| 3.3.1 RNA質(zhì)量檢測(cè) |
| 3.3.2 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量情況 |
| 3.3.3 差異性表達(dá)基因表達(dá)量 |
| 3.3.4 熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果 |
| 3.3.5 差異性表達(dá)基因通路 |
| 3.3.6 高低初生重雞垂體中生長(zhǎng)軸相關(guān)基因表達(dá)差異 |
| 4.討論 |
| 4.1 肉雞生長(zhǎng)曲線擬合 |
| 4.2 初生重對(duì)于生產(chǎn)性能的影響 |
| 4.3 初生重對(duì)于屠宰性能和肉品質(zhì)影響 |
| 4.4 初生重對(duì)生長(zhǎng)軸相關(guān)基因的影響 |
| 5.結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 A |
| 附錄 B |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（6）鷓鴣生長(zhǎng)曲線擬合及MSTN基因表達(dá)與體重和肌纖維發(fā)育的相關(guān)性（論文提綱范文）
| 縮略詞 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 鷓鴣簡(jiǎn)介 |
| 1.2 鳥類性別鑒定方法 |
| 1.2.1 傳統(tǒng)方法 |
| 1.2.2 分子生物學(xué)方法 |
| 1.3 生長(zhǎng)曲線擬合 |
| 1.4 肌纖維概述 |
| 1.4.1 肌纖維的組織結(jié)構(gòu) |
| 1.4.2 肌纖維的分類 |
| 1.4.3 肌纖維發(fā)育特征及影響因素 |
| 1.5 肌肉生長(zhǎng)抑制素(MSTN)概述 |
| 1.6 研究目的和意義 |
| 第二章 鷓鴣性別分子鑒定研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 樣品采集 |
| 2.2.2 羽毛處理 |
| 2.2.3 DNA樣品濃度測(cè)定 |
| 2.2.4 引物設(shè)計(jì)與合成 |
| 2.2.5 PCR擴(kuò)增 |
| 2.2.6 性腺觀察的形態(tài)學(xué)鑒定 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 電泳結(jié)果 |
| 2.3.2 解剖結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 鷓鴣生長(zhǎng)曲線擬合分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 3.2.2 試驗(yàn)日糧 |
| 3.2.3 飼養(yǎng)管理 |
| 3.2.4 體重測(cè)定 |
| 3.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法和模型表達(dá)式 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 鷓鴣不同周齡體重及變化 |
| 3.3.2 鷓鴣生長(zhǎng)曲線模型的擬合分析 |
| 3.4 討論 |
| 第四章 鷓鴣MSTN基因表達(dá)及其與體重和肌纖維發(fā)育的相關(guān)性 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及樣品采集 |
| 4.2.2 肌纖維發(fā)育特征分析 |
| 4.2.3 MSTN基因表達(dá)檢測(cè) |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 肌纖維切片觀察 |
| 4.3.2 公母鷓鴣肌纖維發(fā)育比較 |
| 4.3.3 MSTN基因時(shí)空表達(dá)譜 |
| 4.3.4 MSTN Western Blot結(jié)果分析 |
| 4.3.5 MSTN基因表達(dá)與體重、肌纖維發(fā)育相關(guān)性分析 |
| 4.4 討論 |
| 第五章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及研究展望 |
| 1 結(jié)論 |
| 2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 3 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（7）雞鼻氣管鳥桿菌油乳劑滅活苗及外膜蛋白疫苗的研制（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 1 病原學(xué) |
| 1.1 病原的發(fā)現(xiàn)與分類 |
| 1.2 血清學(xué)分型 |
| 1.3 致病性 |
| 1.4 流行病學(xué) |
| 1.5 臨床癥狀 |
| 1.6 病理變化 |
| 2 防治 |
| 2.1 藥物治療 |
| 2.2 免疫防治 |
| 3 疫苗研究進(jìn)展 |
| 3.1 疫苗 |
| 3.2 疫苗的分類 |
| 4 研究的目的與意義 |
| 研究一: 鼻氣管鳥桿菌的生物學(xué)特性研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 儀器 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 試驗(yàn)菌株及試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.4 鼻氣管鳥桿菌的復(fù)壯 |
| 1.5 ORT的鑒定 |
| 1.6 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 |
| 1.7 半數(shù)致死量(LD_(50))的測(cè)定 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 鼻氣管鳥桿菌的復(fù)壯與鑒定結(jié)果 |
| 2.2 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果 |
| 2.3 LD50測(cè)定結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 研究二: 鼻氣管鳥桿菌油乳劑滅活苗的研制 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 儀器 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 ELISA相關(guān)試劑 |
| 1.4 菌株、陽性血清及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.5 間接ELISA檢測(cè)方法的建立 |
| 1.6 疫苗的制備與檢驗(yàn) |
| 1.7 疫苗的免疫保護(hù)試驗(yàn) |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 間接ELISA檢測(cè)方法的建立 |
| 2.2 疫苗的制備與檢驗(yàn) |
| 2.3 疫苗的免疫保護(hù)試驗(yàn) |
| 3 討論 |
| 研究三: 鼻氣管鳥桿菌外膜蛋白疫苗的研制 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 儀器 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.4 疫苗的制備與檢驗(yàn) |
| 1.5 疫苗的免疫保護(hù)試驗(yàn) |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 疫苗的制備與檢驗(yàn) |
| 2.2 疫苗的免疫保護(hù)試驗(yàn) |
| 3 討論 |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（8）基于蛋白質(zhì)組學(xué)的禽多殺性巴氏桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白的發(fā)掘及功能研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞(Abbreviation) |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 禽多殺性巴氏桿菌病的危害與防控 |
| 1.1.1 病原學(xué) |
| 1.1.2 禽多殺性巴氏桿菌病流行病學(xué)特點(diǎn) |
| 1.1.3 禽多殺性巴氏桿菌病的致病性 |
| 1.1.4 禽多殺性巴氏桿菌病的臨床癥狀及病理特征 |
| 1.2 禽多殺性巴氏桿菌的耐藥性 |
| 1.3 禽多殺性巴氏桿菌毒力因子及免疫原性蛋白研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 莢膜(Capsule) |
| 1.3.2 脂多糖(LPS) |
| 1.3.3 外膜蛋白(OMP) |
| 1.3.4 多殺性巴氏桿菌毒素(PMT) |
| 1.3.5 菌毛和粘附素 |
| 1.3.6 鐵代謝相關(guān)蛋白(IROMPs) |
| 1.3.7 唾液酸代謝(SAM) |
| 1.4 多殺性巴氏桿菌疫苗研究進(jìn)展 |
| 1.4.1 滅活疫苗 |
| 1.4.2 弱毒活疫苗 |
| 1.4.3 亞單位疫苗 |
| 1.4.4 免疫復(fù)合物疫苗 |
| 1.4.5 基因工程疫苗 |
| 1.5 鐵代謝及其對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響 |
| 1.5.1 宿主阻止鐵吸收的機(jī)制 |
| 1.5.2 細(xì)菌對(duì)鐵元素的吸收 |
| 1.6 蛋白質(zhì)組學(xué)在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用 |
| 1.6.1 蛋白質(zhì)組學(xué)簡(jiǎn)介 |
| 1.6.2 蛋白質(zhì)組學(xué)在病原微生物研究中的應(yīng)用 |
| 第二章 禽多殺性巴氏桿菌限鐵培養(yǎng)及滅活疫苗研究 |
| 2.1 研究的目的和意義 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.1 菌株和試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 禽多殺性巴氏桿菌的培養(yǎng) |
| 2.3.2 疫苗制備 |
| 2.3.3 疫苗質(zhì)量檢驗(yàn) |
| 2.3.4 疫苗免疫和攻毒保護(hù)試驗(yàn) |
| 2.4 結(jié)果 |
| 2.4.1 限鐵環(huán)境中Pm生長(zhǎng)曲線 |
| 2.4.2 疫苗的制備 |
| 2.4.3 疫苗免疫后抗體監(jiān)測(cè) |
| 2.4.4 攻毒試驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.5 討論與小結(jié) |
| 第三章 禽多殺性巴氏桿菌免疫原性相關(guān)蛋白的發(fā)掘 |
| 3.1 研究的目的和意義 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.1 菌株,質(zhì)粒和培養(yǎng)條件 |
| 3.2.2 主要試劑耗材 |
| 3.2.3 主要儀器 |
| 3.2.4 培養(yǎng)基及抗生素的配置 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 禽源巴氏桿菌分泌蛋白提取 |
| 3.3.2 一向等點(diǎn)聚焦 |
| 3.3.3 雙向SDS-PAGE |
| 3.3.4 染色 |
| 3.3.5 分泌蛋白質(zhì)譜分析 |
| 3.3.6 篩選蛋白的動(dòng)物保護(hù)性實(shí)驗(yàn) |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 二維電泳結(jié)果 |
| 3.4.2 質(zhì)譜分析結(jié)果 |
| 3.4.3 篩選蛋白原核表達(dá)檢測(cè) |
| 3.4.4 免疫與攻毒保護(hù)性檢測(cè) |
| 3.5 討論與小結(jié) |
| 第四章 禽巴氏桿菌aspA基因缺失株的構(gòu)建及其功能的研究 |
| 4.1 研究的目的和意義 |
| 4.2 材料 |
| 4.2.1 菌株和質(zhì)粒 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 4.2.3 主要試劑 |
| 4.2.4 主要溶液的配制 |
| 4.2.5 主要儀器設(shè)備 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 引物設(shè)計(jì) |
| 4.3.2 細(xì)菌的培養(yǎng) |
| 4.3.3 細(xì)菌的基因組的提取 |
| 4.3.4 重組質(zhì)粒pBC-SK-?aspA的構(gòu)建 |
| 4.3.5 重組質(zhì)粒pBC-SK-?aspA-kan的構(gòu)建 |
| 4.3.6 多殺性巴氏桿菌C48-1 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備 |
| 4.3.7 自殺性質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化 |
| 4.3.8 △aspA::kan突變株的篩選和鑒定 |
| 4.3.9 突變株的遺傳穩(wěn)定性 |
| 4.3.10 突變株的生化特性 |
| 4.3.11 不同營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 4.3.12 富馬酸對(duì)缺失株生長(zhǎng)速度的影響 |
| 4.3.13 酚紅顯色實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.14 酸性環(huán)境生存實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.15 厭氧環(huán)境生存實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.16 限鐵環(huán)境生存實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.17 aspA基因轉(zhuǎn)錄是否受鐵離子調(diào)控 |
| 4.3.18 限鐵環(huán)境下缺失株對(duì)鐵離子的利用 |
| 4.3.19 限鐵環(huán)境下生物被膜的測(cè)定 |
| 4.3.20 粘附與侵襲實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.21 毒力實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.22 疫苗免疫和攻毒保護(hù)試驗(yàn) |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 aspA基因左右同源臂以及Kana抗性基因的PCR擴(kuò)增 |
| 4.4.2 aspA基因上下游同源臂融合片段的構(gòu)建 |
| 4.4.3 重組質(zhì)粒pBC-SK-?aspA的酶切鑒定結(jié)果 |
| 4.4.4 重組質(zhì)粒pBC-SK-?aspA-kan的酶切鑒定結(jié)果 |
| 4.4.5 △aspA::kan突變株的篩選結(jié)果 |
| 4.4.6 △aspA::kan突變株P(guān)CR鑒定結(jié)果 |
| 4.4.7 遺傳穩(wěn)定性結(jié)果 |
| 4.4.8 突變株的生化特性 |
| 4.4.9 不同營(yíng)養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果 |
| 4.4.10 富馬酸對(duì)缺失株生長(zhǎng)速度的影響 |
| 4.4.11 酚紅顯色實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.12 酸性環(huán)境生存實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.13 厭氧環(huán)境生存實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.14 限鐵環(huán)境生存實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.15 aspA基因轉(zhuǎn)錄受鐵離子調(diào)控 |
| 4.4.16 限鐵環(huán)境下缺失株對(duì)鐵離子的攝取 |
| 4.4.17 限鐵環(huán)境下生物被膜的測(cè)定 |
| 4.4.18 粘附與侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.19 毒力實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.20 免疫攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.5 討論與小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| Publications |
| 致謝 |
（9）雞源大腸桿菌對(duì)達(dá)氟沙星和安普霉素的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 禽大腸桿菌病 |
| 1.2 達(dá)氟沙星的藥理作用及耐藥機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1.3 安普霉素的藥理作用及耐藥機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1.4 耐藥性問題的出現(xiàn)及對(duì)策 |
| 1.5 耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展 |
| 1.5.1 耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的定義及制定組織 |
| 1.5.2 CLSI獸醫(yī)耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的概況 |
| 1.5.3 EUCAST獸醫(yī)耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的概況 |
| 1.5.4 野生型/流行病學(xué)臨界值(CO_(WT)/ECOFFs)的制定 |
| 1.5.5 藥效學(xué)臨界值(CO_(PD))的制定 |
| 1.5.6 臨床臨界值(CO_(CL))研究進(jìn)展 |
| 1.5.7 耐藥判斷標(biāo)準(zhǔn)的確定 |
| 1.6 研究目的意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要儀器及設(shè)備 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 樣品收集 |
| 2.2.2 大腸桿菌的分離和鑒定 |
| 2.2.3 最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定 |
| 2.2.4 野生型臨界值(CO_(WT))的制定 |
| 2.2.5 達(dá)氟沙星和安普霉素耐藥性研究 |
| 2.2.6 達(dá)氟沙星在雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué) |
| 2.2.7 達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的藥效學(xué)研究 |
| 2.2.8 PK/PD數(shù)據(jù)處理及半體內(nèi)PK/PD模型建立 |
| 2.2.9 達(dá)氟沙星的藥效學(xué)臨界值的制定 |
| 2.2.10 達(dá)氟沙星半體內(nèi)PK/PD及劑量預(yù)測(cè) |
| 2.2.11 達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌臨床臨界值的制定 |
| 2.2.12 達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的制定 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 達(dá)氟沙星和安普霉素野生型臨界值的建立 |
| 3.1.1 雞源大腸桿菌的分離純化與鑒定 |
| 3.1.2 樣品來源信息 |
| 3.1.3 達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌MIC測(cè)定結(jié)果 |
| 3.1.4 安普霉素對(duì)大腸桿菌MIC測(cè)定結(jié)果 |
| 3.1.5 達(dá)氟沙星雞大腸桿菌的野生型臨界值 |
| 3.1.6 安普霉素對(duì)大腸桿菌的野生型臨界值 |
| 3.2 達(dá)氟沙星和安普霉素耐藥性研究 |
| 3.2.1 達(dá)氟沙星MIC與耐藥基因的相關(guān)性研究 |
| 3.2.2 達(dá)氟沙星耐藥菌的多重耐藥分析 |
| 3.2.3 安普霉素MIC與耐藥基因的相關(guān)性研究 |
| 3.2.4 安普霉素耐藥菌株多重耐藥分析 |
| 3.3 達(dá)氟沙星的群體藥動(dòng)學(xué)研究 |
| 3.3.1 達(dá)氟沙星的高效液相色譜定量方法學(xué) |
| 3.3.2 大腸桿菌感染雞動(dòng)物模型的構(gòu)建 |
| 3.3.3 血漿中達(dá)氟沙星的藥動(dòng)學(xué) |
| 3.3.4 雞腸道中達(dá)氟沙星的群體藥動(dòng)學(xué) |
| 3.3.5 感染組雞回腸液中達(dá)氟沙星的藥動(dòng)學(xué) |
| 3.4 達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的藥效學(xué)研究 |
| 3.4.1 大腸桿菌的體外和半體內(nèi)生長(zhǎng)曲線 |
| 3.4.2 達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的體外和半體內(nèi)MIC、MBC和MPC |
| 3.4.3 達(dá)氟沙星對(duì)大腸桿菌的體外和半體內(nèi)殺菌曲線 |
| 3.5 達(dá)氟沙星半體內(nèi)PK/PD及藥效學(xué)目標(biāo)的研究 |
| 3.6 達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌的藥效學(xué)臨界值 |
| 3.7 達(dá)氟沙星半體內(nèi)PK/PD及劑量預(yù)測(cè) |
| 3.8 達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌的臨床臨界值測(cè)定 |
| 3.8.1 不同MIC值致病菌株的篩選 |
| 3.8.2 臨床治療結(jié)果統(tǒng)計(jì) |
| 3.8.3 臨床臨界值分析 |
| 3.9 達(dá)氟沙星對(duì)雞大腸桿菌的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn) |
| 4 討論 |
| 4.1 達(dá)氟沙星和安普霉素的野生型臨界值的測(cè)定 |
| 4.2 大腸桿菌對(duì)達(dá)氟沙星的耐藥性 |
| 4.3 大腸桿菌對(duì)安普霉素的耐藥性 |
| 4.4 達(dá)氟沙星的藥效學(xué)臨界值的制定 |
| 4.4.1 大腸桿菌感染模型的建立 |
| 4.4.2 達(dá)氟沙星在雞腸道內(nèi)的群體藥動(dòng)學(xué) |
| 4.4.3 達(dá)氟沙星半體內(nèi)PK/PD模型 |
| 4.4.4 達(dá)氟沙星藥效學(xué)臨界值 |
| 4.5 達(dá)氟沙星的臨床臨界值的制定 |
| 4.6 耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)的制定 |
| 5 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（10）豬星狀病毒天津分離株基因組特征分析及其Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的構(gòu)建（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 星狀病毒 |
| 1.1.1 星狀病毒病原學(xué)特征 |
| 1.1.2 星狀病毒遺傳進(jìn)化 |
| 1.1.3 星狀病毒檢測(cè) |
| 1.2 釀酒酵母表面展示系統(tǒng) |
| 1.2.1 釀酒酵母細(xì)胞壁概述 |
| 1.2.2 常見釀酒酵母表面展示系統(tǒng) |
| 1.2.3 基于釀酒酵母表面展示系統(tǒng)構(gòu)建的病毒疫苗研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.4 釀酒酵母作為口服疫苗遞送載體的優(yōu)勢(shì) |
| 1.3 研究?jī)?nèi)容 |
| 第2章 豬星狀病毒全基因組克隆及其遺傳進(jìn)化分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)載體、病料 |
| 2.2.2 主要試劑、溶液及培養(yǎng)基的配制 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 病料處理 |
| 2.3.2 病毒第一鏈cDNA合成 |
| 2.3.3 PAstV檢測(cè) |
| 2.3.4 PAstV4全基因組擴(kuò)增 |
| 2.3.5 3'RACE擴(kuò)增 |
| 2.3.6 基因組序列特征和遺傳進(jìn)化分析 |
| 2.3.7 GenBank登錄號(hào) |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.1 PAstV檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.4.2 全基因組擴(kuò)增結(jié)果 |
| 2.4.3 基因組序列特征分析 |
| 2.4.4 遺傳進(jìn)化分析 |
| 2.4.5 同源性分析 |
| 2.4.6 遺傳重組分析 |
| 2.4.7 衣殼蛋白特征分析 |
| 2.5 討論 |
| 2.6 本章小結(jié) |
| 第3章 豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的構(gòu)建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株、載體 |
| 3.2.2 主要試劑、溶液及培養(yǎng)基的配制 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 酵母基因組提取 |
| 3.3.2 重組質(zhì)粒PIU211的構(gòu)建 |
| 3.3.3 質(zhì)粒PIU211(GPD)的構(gòu)建 |
| 3.3.4 線性化載體的制備 |
| 3.3.5 表面高效展示Aga1釀酒酵母宿主菌的構(gòu)建 |
| 3.3.6 模塊化釀酒酵母表面展示表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 3.3.7 重組質(zhì)粒POT/Cap的構(gòu)建 |
| 3.3.8 Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的構(gòu)建 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 PIU211及PIU211(GPD)的構(gòu)建結(jié)果 |
| 3.4.2 線性化載體制備結(jié)果 |
| 3.4.3 宿主菌ST1814G和ST1814A的篩選結(jié)果 |
| 3.4.4 紅白斑篩選 |
| 3.4.5 Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的篩選結(jié)果 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 第4章 豬星狀病毒Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株表達(dá)特征及免疫效力分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)載體、動(dòng)物 |
| 4.2.2 主要試劑、溶液及培養(yǎng)基的配制 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 Cap原核表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 4.3.2 Cap原核蛋白表達(dá)及純化 |
| 4.3.3 鼠抗Cap多克隆抗體制備 |
| 4.3.4 重組釀酒酵母誘導(dǎo)表達(dá) |
| 4.3.5 Western-blot |
| 4.3.6 免疫熒光 |
| 4.3.7 重組釀酒酵母生長(zhǎng)曲線測(cè)定 |
| 4.3.8 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 原核載體構(gòu)建及蛋白純化結(jié)果 |
| 4.4.2 Cap蛋白成功表達(dá) |
| 4.4.3 Cap蛋白表達(dá)且位于酵母細(xì)胞表面 |
| 4.4.4 重組釀酒酵母發(fā)酵動(dòng)力學(xué) |
| 4.4.5 重組酵母誘導(dǎo)小鼠體液及粘膜免疫應(yīng)答 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 本章小結(jié) |
| 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說明 |
| 致謝 |
四、禽類三種常用生長(zhǎng)曲線淺析（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]不同品種雞生長(zhǎng)曲線擬合及分析[J]. 馬猛,王克華,曲亮,竇套存,郭軍,王星果,胡玉萍. 中國(guó)畜牧雜志, 2022(01)
- [2]矮小體型蘆花雞GHR基因突變類型分析及其與正常體型蘆花雞發(fā)育差異研究[J]. 鄭嘉輝,冷奇穎,張為露,Ali Hassan NAWAZ,杜炳旺,張麗. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2021(10)
- [3]APEC O1型E516攝鐵基因c2515和c2516缺失株的生物學(xué)特性及C2515單克隆抗體的研制[D]. 李茜. 揚(yáng)州大學(xué), 2021
- [4]冷凍雞肉單增李斯特菌分離株對(duì)雞的致病性及全基因組序列測(cè)定與分析[D]. 李楠. 石河子大學(xué), 2021(02)
- [5]817肉雞初生重對(duì)生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)及下丘腦mRNA表達(dá)的影響[D]. 蘇虎. 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020(04)
- [6]鷓鴣生長(zhǎng)曲線擬合及MSTN基因表達(dá)與體重和肌纖維發(fā)育的相關(guān)性[D]. 溫婭婭. 浙江大學(xué), 2020(01)
- [7]雞鼻氣管鳥桿菌油乳劑滅活苗及外膜蛋白疫苗的研制[D]. 王安妮. 揚(yáng)州大學(xué), 2019(02)
- [8]基于蛋白質(zhì)組學(xué)的禽多殺性巴氏桿菌重要免疫原性相關(guān)蛋白的發(fā)掘及功能研究[D]. 羅青平. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(01)
- [9]雞源大腸桿菌對(duì)達(dá)氟沙星和安普霉素的耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 田二杰. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(01)
- [10]豬星狀病毒天津分離株基因組特征分析及其Cap蛋白表面展示釀酒酵母菌株的構(gòu)建[D]. 趙成雪. 天津大學(xué), 2019(06)
標(biāo)簽：生長(zhǎng)曲線論文; 蘆花雞論文; 基因合成論文; 問題疫苗論文;