一、從污水中檢出O_(157)∶H7大腸桿菌（論文文獻(xiàn)綜述）
王純,張若鴻,王曉芳,李曉然,楊洋,崔生輝,郭云昌[1]（2021）在《食源性致病菌活菌檢測方法的應(yīng)用現(xiàn)狀及展望》文中認(rèn)為傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)方法是活體致病菌檢測的"金標(biāo)準(zhǔn)",但往往程序繁雜、耗時(shí)長。該文主要論述基于核酸[熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）和信使PCR檢測法]及噬菌體（噬菌體擴(kuò)增法、噬菌體擴(kuò)增與PCR/q PCR結(jié)合法、免疫測定或酶測定法及電化學(xué)噬菌體生物傳感器法）兩類非細(xì)胞培養(yǎng)的活菌檢測方法,并對其在食源性致病菌活菌檢測方面的應(yīng)用及未來發(fā)展前景進(jìn)行討論,特別是基于噬菌體的方法,與傳統(tǒng)檢測相比在檢測速度、靈敏度和特異性方面具有關(guān)鍵優(yōu)勢。
王純,張若鴻,楊洋,郭云昌[2]（2021）在《電化學(xué)生物傳感器在細(xì)菌病原體檢測中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢》文中提出便攜式生物傳感器可以對病原菌進(jìn)行快速檢測,且特異性強(qiáng)、靈敏度高,檢測效率遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)檢測手段。其中基于生物活性元件的電化學(xué)生物傳感器體積更小、速度更快、檢測靈敏度更高,并且生物活性材料具有選擇性廣、活性強(qiáng),可與換能器相互聯(lián)系等特點(diǎn),已被越來越廣泛地應(yīng)用于微生物的檢測。本文著重介紹了3類電化學(xué)生物傳感器在細(xì)菌檢測領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用情況,并對其所面臨的機(jī)遇與挑戰(zhàn)進(jìn)行了展望。
劉星[3]（2016）在《大腸桿菌O157：H7在土壤組分上的界面作用和存活》文中研究說明全球每年約產(chǎn)生1010t–1011t畜禽糞便,而畜禽糞便中含有大量的病原微生物。若未經(jīng)有效處理,就直接作為糞肥或土壤改良劑施入到農(nóng)田,會(huì)導(dǎo)致土壤生物污染,進(jìn)而引發(fā)人畜共患病的傳播、感染及暴發(fā)。腸出血性大腸桿菌O157:H7是常見的人畜共患病原菌,因其感染劑量低（10個(gè)活細(xì)胞）,并發(fā)癥嚴(yán)重（溶血性尿毒癥）,而備受關(guān)注。該病原菌主要通過畜禽糞便進(jìn)入土壤環(huán)境,可在土壤中存活1年以上,易感染環(huán)境中的動(dòng)物;而感染的動(dòng)物又會(huì)重新產(chǎn)生并釋放病原菌,周而復(fù)始,導(dǎo)致惡性循環(huán)。此外,土壤中的大腸桿菌O157:H7可發(fā)生遷移,不僅會(huì)污染地表水和地下水,也會(huì)污染土壤中種植的蔬菜瓜果等農(nóng)產(chǎn)品,嚴(yán)重威脅人類健康和公共安全。近30年來,全球共暴發(fā)上百次大腸桿菌O157:H7感染性腹瀉事件。其中,免疫功能不全的兒童或老人備受威脅,感染病原菌后的死亡率可高達(dá)15%。因此,本文以大腸桿菌O157:H7和多種土壤組分（不同類型土壤、不同粒徑土壤顆粒、粘土礦物）為材料,采用土壤化學(xué)和分子生物學(xué)方法,如土壤基本性質(zhì)的表征,等溫平衡粘附,細(xì)胞平板計(jì)數(shù),結(jié)晶紫染色法,定量基因擴(kuò)增熒光檢測法等;借助掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡、熒光顯微鏡等現(xiàn)代分析儀器,探究大腸桿菌O157:H7與土壤組分的界面互作和存活機(jī)制,以阻控由病原菌引起的土壤生物污染。主要研究結(jié)果如下:（1）闡明了土壤理化性質(zhì)和大腸桿菌O157:H7粘附行為的相關(guān)性及貢獻(xiàn)程度。一元線性回歸分析表明,大腸桿菌O157:H7的平衡分配系數(shù)（Kd）與土壤有機(jī)質(zhì)的含量呈極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01）,而土壤pH、電導(dǎo)率、粘粒含量、比表面積、陽離子交換量（CEC）和Kd無顯著相關(guān)（P>0.05）。偏相關(guān)分析排除其它因素的干擾,發(fā)現(xiàn)土壤有機(jī)質(zhì)和粘粒共同控制大腸桿菌O157:H7的粘附行為（P<0.05）。通過多元逐步回歸手段,得到Kd和土壤理化性質(zhì)的相關(guān)性方程:Kd=-1.306×OM+0.536×CC+51.036（P<0.01）,表明有機(jī)質(zhì)是最重要的影響因素,對病原菌粘附的貢獻(xiàn)率為66.95%,顯著高于粘粒（33.05%）。因此,土壤有機(jī)質(zhì)和粘粒等固相性質(zhì)調(diào)控大腸桿菌O157:H7的粘附行為,最終影響病原菌在環(huán)境中的遷移和分布。（2）探明了土壤類型（紅壤/棕壤）,顆粒大?。ㄉ傲?、粉粒和粘粒）,氧（氫氧）化鐵/鋁,有機(jī)質(zhì)對大腸桿菌O157:H7在土壤環(huán)境中存活的影響機(jī)制。大腸桿菌O157:H7接種于棕壤顆粒中,3d內(nèi),病原菌的數(shù)量上升0.6 log10CFU/g–1.4 log10 CFU/g（除去有機(jī)質(zhì)粘粒外）。而紅壤顆粒中的大腸桿菌O157:H7數(shù)量快速下降,直到檢測下線;初始6h的失活速率最高,病原菌的數(shù)量下降0.52log10 CFU/g–0.97 log10 CFU/g。去除氧（氫氧）化鐵/鋁后,紅壤顆粒的殺菌性能降低,大腸桿菌O157:H7的存活能力顯著提高。對兩種土壤而言,大腸桿菌O157:H7均在含有機(jī)質(zhì)粘粒中的存活能力最強(qiáng)。相比于砂粒和粉粒,粘粒對大腸桿菌O157:H7的吸附能力更強(qiáng),對病原菌的乙酸代謝途徑相關(guān)基因的影響更顯著（pta上調(diào)6.1倍–9.3倍,ackA下調(diào)63.5%–91.7%）。pta上調(diào)和ackA下調(diào)會(huì)促進(jìn)胞內(nèi)乙酰磷酸的累積,加速細(xì)菌從游離態(tài)向生物被膜形態(tài)的轉(zhuǎn)變。此外,粘粒更有助于大腸桿菌O157:H7保持生理活性。8d后,粘粒中病原菌的腺苷-5′-三磷酸（ATP）的含量（0.36×10-18 mol ATP/CFU–0.39×10-18 mol ATP/CFU）顯著高于砂粒和粉粒中的病原菌ATP含量（0.13×10-18 mol ATP/CFU–0.21×10-18 mol ATP/CFU）。砂粒和粉粒去除有機(jī)質(zhì)后,大腸桿菌O157:H7的生理活性未發(fā)生明顯改變,且病原菌的存活時(shí)間顯著提高,表明有機(jī)質(zhì)的作用不是提供養(yǎng)分。而有機(jī)質(zhì)的去除,會(huì)提高土壤顆粒對病原菌的吸附能力。因此,我們推測難溶性有機(jī)質(zhì)的主要作用是遮蔽土壤顆粒的粘附位點(diǎn),影響細(xì)菌-土壤顆粒的界面作用,阻礙細(xì)菌粘附表型的轉(zhuǎn)變,最終影響病原菌的存活。上述結(jié)果表明,大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒表面的粘附及其相關(guān)代謝途徑是存活優(yōu)勢,幫助細(xì)菌在自然環(huán)境中的長期存活。（3）明確了典型土壤粘土礦物（蒙脫石、高嶺石和針鐵礦）對大腸桿菌O157:H7生長,生物被膜形成和毒性基因表達(dá)的影響機(jī)制。帶負(fù)電的蒙脫石促進(jìn)大腸桿菌O157:H7的生長,抑制生物被膜的形成;邊面帶正電的高嶺石有利于病原菌的粘附,促進(jìn)生物被膜的形成;帶正電的針鐵礦顯著抑制病原菌的生長,促進(jìn)生物被膜的形成。熒光顯微鏡照片顯示,針鐵礦能有效粘附并殺滅大腸桿菌O157:H7,而高嶺石和蒙脫石均不影響病原菌的活性。原子力顯微鏡和掃描電子顯微鏡顯示了大腸桿菌O157:H7和礦物多樣的結(jié)合方式,蒙脫石疏散的分布在病原菌周圍,未發(fā)生有效粘附,高嶺石主要通過邊面和病原菌發(fā)生粘附,而針鐵礦緊密粘附在病原菌表面,形成礦物包被體。和空白對照相比（17.05±2.41nN）,蒙脫石中形成的細(xì)菌生物被膜的粘性顯著降低（10.38±1.29nN）（P<0.05）,高嶺石略為促進(jìn)生物被膜的粘性（19.85±3.34nN）,但不顯著（P>0.05）。而針鐵礦誘導(dǎo)形成高粘性的生物被膜（29.00±4.84nN）,并且生物被膜中的細(xì)菌形貌發(fā)生顯著變化:細(xì)胞變小、粗糙度增加且不規(guī)則?；蚪Y(jié)果進(jìn)一步證實(shí)大腸桿菌O157:H7生物被膜的形成機(jī)制。蒙脫石促進(jìn)病原菌中編碼鞭毛蛋白的基因-fliC的表達(dá),增加細(xì)菌的游動(dòng)性;下調(diào)編碼菌毛蛋白的基因-csgA,阻礙細(xì)菌的不可逆粘附（生物被膜形成的初始階段）;下調(diào)莢膜異多糖（EPS重要組分）組分基因-wcaM,降低生物被膜的粘性,抑制生物被膜的形成和成熟。高嶺石體系中,病原菌的fliC下調(diào),而csgA上調(diào),利于細(xì)菌在界面上的不可逆粘附;wcaM上調(diào),會(huì)提高生物被膜的粘性,有利于生物被膜的形成。此外,pta上調(diào)和ackA下調(diào),導(dǎo)致乙酰磷酸的積聚,進(jìn)一步促進(jìn)菌毛和莢膜異多糖的分泌,加速生物被膜的成熟。針鐵礦不僅促進(jìn)莢膜異多糖的調(diào)控基因（rcsA,rcsB和rcsC）和wcaM的表達(dá),而且誘導(dǎo)病原菌群體密度感應(yīng)信號(hào)分子（Autoinducer-2）的調(diào)控基因-luxS的表達(dá),促進(jìn)生物被膜的形成。生物被膜形成初期,礦物的存在,會(huì)抑制生物被膜的形成,生物被膜量顯著低于純菌體系,但毒性基因的表達(dá)（stxA-1和stxA-2）出現(xiàn)上調(diào)趨勢。生物被膜形成后期,針鐵礦和高嶺石體系中病原菌的生物被膜量顯著高于空白,而stxA-1和stxA-2的表達(dá)低于空白。因此,我們推測生物被膜形成和毒性表達(dá)可能是兩個(gè)互相排斥的過程。粘土礦物的理化性質(zhì)（電化學(xué)特性和形貌）是關(guān)鍵,決定礦物-病原菌的界面作用（結(jié)合方式和粘附強(qiáng)度）,最終影響病原菌在土壤環(huán)境中的歸趨。
陳文靜[4]（2010）在《家禽養(yǎng)殖場廢棄物農(nóng)用安全性的初步研究》文中研究指明對家禽養(yǎng)殖場廢棄物實(shí)現(xiàn)資源化利用,越來越受到廣泛認(rèn)可。但對家禽養(yǎng)殖場廢棄物農(nóng)用的安全性卻缺少系統(tǒng)研究,尤其是對家禽養(yǎng)殖場廢棄物中的大腸桿菌的生態(tài)學(xué)特征還了解不多。大腸桿菌是廣泛存在于各種環(huán)境中的普通原核生物,是人類和多種動(dòng)物腸道中的正常菌群,其部分特殊血清型對人和動(dòng)物有致病性,常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。大腸桿菌可通過人和動(dòng)物的糞便,經(jīng)有機(jī)肥施用或污水排放等途徑而污染水體、土壤環(huán)境,從而廣泛存在于生物圈中。大腸桿菌作為環(huán)境微生物的代表種類,其存在指標(biāo)檢測已被廣泛應(yīng)用于商品有機(jī)肥、生物有機(jī)肥等產(chǎn)品及環(huán)境污染檢測工作中。在環(huán)境微生物學(xué)檢驗(yàn)中,不僅以檢出大腸菌群作為糞便污染的指標(biāo)菌,同時(shí)還以大腸菌群數(shù)量的高低、致病性等,來判斷環(huán)境受污染的程度及對人類和動(dòng)物健康的危害性。本研究主要對家禽養(yǎng)殖場環(huán)境中大腸桿菌的生態(tài)學(xué)特征及其對養(yǎng)殖場廢棄物資源化利用安全性影響等方面進(jìn)行研究。主要研究內(nèi)容包括:（1）家禽養(yǎng)殖場環(huán)境中大腸桿菌存在數(shù)量及增殖動(dòng)態(tài)研究;（2）自具有典型大腸桿菌病病變的病、死家禽中分離到致病性大腸桿菌65株,用陽性血清作玻板凝集試驗(yàn),分析大腸桿菌當(dāng)前流行的優(yōu)勢血清型;（3）采用藥敏試驗(yàn)研究大腸桿菌耐藥譜和耐藥模式;（4）用PCR方法對分離株的14種毒力相關(guān)基因的分布進(jìn)行了分子流行病學(xué)調(diào)查;（5）禽大腸桿菌密度感應(yīng)系統(tǒng)的研究,以了解該細(xì)菌存在生態(tài)學(xué)狀況。通過研究得到如下主要結(jié)果:（1）家禽養(yǎng)殖場環(huán)境中廣泛存在著大腸桿菌,單位質(zhì)量有機(jī)肥中大腸桿菌數(shù)量在培養(yǎng)第4天時(shí)達(dá)到峰值,然后呈逐漸下降趨勢。（2）分離得到致病性大腸桿菌65株。其中,O78占75%,O2占11%,O1占5%,表明在分離的致病性大腸桿菌中O78為主要血清型;（3）分離菌株普遍存在多重耐藥現(xiàn)象,94%以上的分離株對頭孢噻吩等10種抗菌素或藥物耐受,100%的分離株對利福平和紅霉素耐藥,禽致病性大腸桿菌存在廣泛的耐藥性,人藥獸用危害嚴(yán)重。（4）主要毒力基因ompA、pfs和luxs在所有的65株大腸桿菌中均存在,是大腸桿菌的保守基因。同時(shí)證實(shí)了APEC的優(yōu)勢基因型是:iss+iucD+tsh+cvaC+iroC+fimC+ompA+pfs+luxS+基因組合模式。（5）luxS/AI-2型密度感應(yīng)系統(tǒng)參與調(diào)控細(xì)菌眾多的生理功能,細(xì)菌的luxS基因參與信號(hào)分子AI-2合成。通過哈維弧菌（Vibrio harveyi） BB170對大腸桿菌的AI-2信號(hào)分子進(jìn)行檢測,大腸桿菌可以產(chǎn)生AI-2信號(hào)分子。并且發(fā)現(xiàn),AI-2的產(chǎn)生是生長依賴性的,在對數(shù)生長期后期大腸桿菌產(chǎn)生AI-2的量最大。綜上所述,本研究通過對禽場環(huán)境中的大腸桿菌的生長特征、耐藥性、血清型、毒力基因分布及信號(hào)分子AI-2的研究,明確家禽養(yǎng)殖場廢棄物直接利用極不安全,在我國目前的家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)條件下,必須對廢棄物進(jìn)行無害化處理后才能加以利用。
陳智強(qiáng),高仕瑛[5]（2010）在《腸出血性大腸埃希菌O157:H7的分布及特征》文中研究指明目的了解H市外環(huán)境（食品、生活污水及菜地土壤）中腸出血性大腸埃希菌O157∶H7的分布與特性。方法用免疫磁珠富集法進(jìn)行O157:H7分離;按《全國食品污染物監(jiān)測相關(guān)實(shí)驗(yàn)室手冊》（細(xì)菌學(xué)部分）及相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)鑒定分離菌株;標(biāo)準(zhǔn)血清分型;PCR法測定菌株SLT1,SLT2,ereA,hly毒素基因;紙片瓊脂擴(kuò)散（K-B）法測定菌株耐藥性。結(jié)果自H市外環(huán)境標(biāo)本（食品、生活污水、菜地土壤）檢出O157:H7共15株,檢出率1.42%～4.34%,雞肉與生活污水檢出率高;農(nóng)貿(mào)市場食物中O157:H7的檢出率（2.25%）高于超市（0.56%）;它們中有93.33%（14/15）是攜帶SLT1、SLT2、eae、hly毒力基因的高致病菌株;食源性O(shè)157:H7耐藥性嚴(yán)重,耐藥菌株多,僅對哌拉西林、亞胺培南敏感。結(jié)論H市外環(huán)境有O157:H7分布,且檢出的多是高致病性強(qiáng)毒菌株,應(yīng)警惕其流行造成感染的潛在危險(xiǎn)。
陸長勇[6]（2009）在《食源性致病菌多重PCR和基因芯片檢測方法的建立》文中研究表明食源性致病菌是危害食品安全和人類健康的主要因素。常見的食源性致病菌主要包括金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、沙門氏菌、阪崎腸桿菌、志賀氏菌、腸出血性大腸桿菌O157:H7和空腸彎曲桿菌。本研究利用基因組比對方法挖掘食源性致病菌基因組中的特異性序列,建立食源性致病菌檢測靶點(diǎn)篩選庫,設(shè)計(jì)和篩選相關(guān)PCR特異性引物。同時(shí)整合已報(bào)道的檢測靶點(diǎn)和引物,利用篩選和整合的引物建立并優(yōu)化多重PCR體系和基因芯片方法,檢測上述八種食源性致病菌。主要研究結(jié)果如下:1、多重PCR檢測體系。利用篩選的引物nuc-j,Vp2,prs,C20,SG,ial,hly-A和hipO1,建立和優(yōu)化了八種食源性致病菌多重PCR檢測體系,經(jīng)優(yōu)化后確定退火溫度Tm值和Mg2+濃度分別為56oC和1.5 mmol/l,多重基因組DNA檢測靈敏度可達(dá)到10 pg。2、基于單堿基延伸標(biāo)簽反應(yīng)的基因芯片方法。通過多重PCR和基因芯片技術(shù)聯(lián)用,設(shè)計(jì)SBE-tags引物進(jìn)行熒光標(biāo)記反應(yīng),建立八種食源性致病菌的基因芯片檢測方法。芯片多重基因組DNA檢測靈敏度和細(xì)菌純培養(yǎng)物靈敏度分別為0.1 pg和5.0×102 cfu/ml,分離菌株檢測符合率達(dá)到100%。3、管式流動(dòng)芯片檢測方法。應(yīng)用管式流動(dòng)芯片系統(tǒng)驗(yàn)證檢測八種食源性致病菌,檢測高效特異,細(xì)菌純培養(yǎng)物靈敏度可達(dá)到6.2×102 cfu/ml。相比較基于單堿基延伸標(biāo)簽反應(yīng)的基因芯片方法,管式流動(dòng)芯片檢測時(shí)間短,自動(dòng)化程度高。
宋彬[7]（2007）在《致病性大腸桿菌烈性噬菌體的篩選及其生物學(xué)效應(yīng)研究》文中研究表明細(xì)菌性食物中毒和感染性腹瀉是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。其中在魚、肉、蛋以及各類食品的存放、運(yùn)輸和加工過程中,致病性大腸桿菌是引起污染的重要原因之一,不僅給公眾健康造成了嚴(yán)重危害,也使國民經(jīng)濟(jì)遭到巨大損失。食品原料和食品的防腐抗菌技術(shù)一直以來是控制食物中毒的關(guān)鍵技術(shù),急待需要建立和發(fā)展新的方法。鑒于噬菌體應(yīng)用的專一宿主性、環(huán)境親和性、經(jīng)濟(jì)方便和持續(xù)性特點(diǎn),研究人員繼噬菌體技術(shù)在臨床治療的探索研究后,已將噬菌體抗菌技術(shù)擴(kuò)展到環(huán)境凈化和食品抗菌的領(lǐng)域,其結(jié)果令人鼓舞。歐美國家已經(jīng)開始推廣并應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)在食品抗菌領(lǐng)域。因此,篩選得到有價(jià)值的烈性噬菌體已成為開發(fā)應(yīng)用的有力資源和儲(chǔ)備,也是相關(guān)技術(shù)深入研究的基礎(chǔ)。本課題從環(huán)境樣本中分離致病性的大腸桿菌噬菌體,觀察分析噬菌體生物學(xué)特征,并通過觀察噬菌體在營養(yǎng)液中抑制宿主菌的規(guī)律,為營養(yǎng)液儲(chǔ)存的抑菌技術(shù)開發(fā)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),也為其他食品加工、儲(chǔ)存的抑菌技術(shù)探索方法。本課題研究分為兩部分:（1）致病性大腸桿菌噬菌體的篩選及分子生物學(xué)特征;（2）腸侵襲性大腸桿菌噬菌體LSB-1的應(yīng)用探索。相關(guān)研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.通過雙層培養(yǎng)法從污水樣本中分離到4株致病性大腸桿菌的烈性噬菌體。兩株為“多價(jià)”噬菌體,另兩株為“單價(jià)”噬菌體。其中LSB-1對大腸桿菌EIEC8401有專一的高溶解作用。2.通過噬菌體培養(yǎng)、透射電鏡、核酸分離電泳、隨機(jī)序列分析等技術(shù),觀察噬菌斑、超微結(jié)構(gòu)、核酸性質(zhì)及核酸序列。結(jié)果顯示,噬菌體LSB-1的噬菌斑直徑約3～4mm,透明,邊緣清楚,無暈環(huán);其結(jié)構(gòu)是由兩個(gè)大小不同的圓形衣殼體單位組成,似葫蘆狀（約70nm）,其中大衣殼體單位直徑為46nm左右,小衣殼體單位直徑為24nm左右;核酸大約為23000bp,雙鏈DNA,似覆蓋噬菌體科;根據(jù)基因比對結(jié)果,未發(fā)現(xiàn)同源噬菌體株。3.通過活菌計(jì)數(shù)試驗(yàn),觀察噬菌體LSB-1對牛奶中宿主菌的抑制作用,試驗(yàn)顯示,在非營養(yǎng)環(huán)境中,高比配（1:10000）的噬菌體投入在室溫下有一定的抑菌趨勢,但抑菌效率很低;在營養(yǎng)條件下和在4℃的作用溫度下,1:1比配的抑菌效應(yīng)穩(wěn)定,宿主菌滴度降低維持在2個(gè)對數(shù)級(jí)左右;同樣條件在22℃～37℃作用時(shí),數(shù)小時(shí)內(nèi)宿主菌滴度可達(dá)到約4個(gè)對數(shù)級(jí),但抑菌的穩(wěn)定性較差,隨著時(shí)間的延長,抑菌作用明顯減弱;繼續(xù)增加噬菌體投入劑量也將明顯降低抑菌效果。后兩種現(xiàn)象均顯示宿主菌有“免疫性”產(chǎn)生。4.考慮到噬菌體LSB-1的宿主譜相對較窄,而且有宿主菌獲得“免疫性”現(xiàn)象,我們提出引入電磁波協(xié)同處理和開發(fā)噬菌體溶解酶的途徑以擴(kuò)大噬菌體LSB-1在食品及其他領(lǐng)域的抗菌應(yīng)用效率的設(shè)想。
劉軍[8]（2007）在《大腸桿菌O157重組弱毒疫苗的研究》文中研究指明本研究首先建立腸出血性大腸桿菌O157:H7感染的動(dòng)物模型,利用絲裂霉素對小鼠進(jìn)行腹腔注射預(yù)處理,并通過灌胃接種和腹腔注射兩種途徑,建立了O157:H7感染的動(dòng)物模型。然后對EHEC O157:H7 ler/stx基因缺失突變菌株的原噬菌體及其原始整合位點(diǎn)進(jìn)行分析。通過對Stx A亞基毒性活性區(qū)和跨膜區(qū)的定點(diǎn)突變,消除或降低Stx的細(xì)胞毒性,并將Stx的無毒性或弱毒性突變體導(dǎo)入O157:H7 ler/stx基因缺失突變菌株,構(gòu)建O157重組弱毒疫苗菌株。利用小鼠模型和vero細(xì)胞對O157重組弱毒疫苗菌株的vero細(xì)胞毒性、對小鼠的致病性、重組菌株的穩(wěn)定性,以及被動(dòng)免疫和主動(dòng)免疫保護(hù)性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,O157重組弱毒疫苗菌株具有良好的穩(wěn)定性,對vero細(xì)胞的毒性作用降低了約104倍,喪失了對小鼠模型的致病性,能有效縮短小鼠感染O157:H7強(qiáng)毒株后的排毒時(shí)間（免疫組小鼠第6天后糞便內(nèi)即檢測不到強(qiáng)毒株,而未免疫對照組第13天仍可檢測到）。用疫苗菌株對母鼠免疫,免疫母鼠所生的乳鼠通過吸吮母乳,能夠獲得良好的被動(dòng)免疫保護(hù)作用（F25和F105的免疫保護(hù)率分別為75.2%和83.0%）;通過腹腔注射的途徑對小鼠進(jìn)行免疫和攻毒,結(jié)果也表明O157重組弱毒疫苗菌株對小鼠具有良好的免疫保護(hù)作用（F25和F105的免疫保護(hù)作用分別為11/20和14/20）。
陳前進(jìn),曹春遠(yuǎn),王炳發(fā),郭維植,張?jiān)禄?金健潮[9]（2006）在《龍巖市1999～2005年O157大腸桿菌監(jiān)測研究》文中研究表明[目的]為了解龍巖市O157大腸桿菌人的感染、食品污染以及動(dòng)物和媒介昆蟲帶菌情況。[方法]1999～2005年采集腹瀉病人糞便、動(dòng)物糞便以及各類食品、蒼蠅、養(yǎng)殖場污水等標(biāo)本,mEC增菌后用SMAC進(jìn)行分離,純化菌株經(jīng)生化鑒定、血清分型、毒力及特征基因檢測等。[結(jié)果]共檢測2212份標(biāo)本,檢出O157大腸桿菌29株,陽性率為1.31%。其中豬糞為3.42%,牛糞為2.62%,牛肉為2.33%,雞肉為2.06%,養(yǎng)殖場污水為2.27%。其余標(biāo)本均未檢出目的菌。O157∶H718株,O157∶NM6株,O157∶H?5株。對12株O157∶H7,進(jìn)行了rfbO157和fliCH7基因的測定,結(jié)果rfbO157均為陽性,而fliCH7均為陰性。對18株（O157∶H714株、O157∶NM3株、O157∶H?1株）,進(jìn)行了SLT2、SLT1、eaeA、hly4種毒力基因檢測,結(jié)果僅2株O157∶H7eaeA+hly陽性,1株O157∶H7hly陽性,其余菌株均為陰性。檢出菌株對環(huán)丙沙星、氟嗪酸、丁胺卡那、慶大霉素敏感。檢出ESBLs2株。[結(jié)論]我市畜、禽中存在O157大腸桿菌,未檢出含有SLT2、SLT1毒素的菌株,未發(fā)現(xiàn)O157大腸桿菌病例和食物中毒患者,應(yīng)加強(qiáng)宿主動(dòng)物O157大腸桿菌監(jiān)測。
丁紅雷[10]（2006）在《重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的流行病學(xué)調(diào)查》文中指出腸出血性大腸桿菌（EHEC）是世界上食源性疾病的重要誘因。人類感染EHEC具有潛在的重大威脅并可能引起一系列的并發(fā)癥，包括腹瀉、出血性腸炎（HC）、溶血性尿毒綜合征（HUS）等。EHEC的血清型很多，O157∶H7是與人類疾病相關(guān)的最常見的血清型。該菌已經(jīng)在世界上引起多次爆發(fā)。我國江蘇、安徽兩省曾于1999和2000年發(fā)生大腸桿菌O157∶H7感染性腹瀉爆發(fā)流行，并且范圍擴(kuò)大東北、華北及華東地區(qū)。由該菌引起的疾病已成為21世紀(jì)嚴(yán)重威脅人類生命和健康的傳染病，因此對該菌進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，查明該菌的傳染源、傳播途徑和傳播范圍，為該病的預(yù)防和治療提供科學(xué)依據(jù)具有重要的意義。 1．大腸桿菌O157的分離鑒定與表型特征分析 目的 了解重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的家畜帶菌情況及其生化特性和對抗菌藥物的敏感性。方法 采集重慶市六個(gè)區(qū)縣家畜糞便和污水樣品1504份，接種mEC+n增菌肉湯，37℃振搖孵育6h，取增菌液接種CT-SMAC平板，37℃培養(yǎng)18h，挑取可疑菌落，經(jīng)血清學(xué)檢驗(yàn)、PCR擴(kuò)增和微量生化實(shí)驗(yàn)確認(rèn)，最后用藥敏試紙測試其對常用抗生素的敏感性。結(jié)果 在1504份樣品中共檢出11株O157，其中O157∶H7 7株，O157∶H? 4株；對分離菌株做藥物敏感性試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它們對青霉素、氨芐西林、桿菌肽、頭孢呋肟、紅霉素、慶大霉素、四環(huán)素等存在不同程度的耐藥。結(jié)論 本次調(diào)查是首次對重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的家畜帶菌情況進(jìn)行較全面的調(diào)查，查明了該菌的傳染源，對菌株的表型特征進(jìn)行了研究。 2．大腸桿菌O157毒力與黏附相關(guān)基因的檢測 目的 了解分離菌株攜帶毒力及黏附相關(guān)基因的情況。方法 用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增stx1、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因。結(jié)果 所有O157∶H7菌株擴(kuò)增出eaeA、ehxa、EspA和Tccp基因，但沒有擴(kuò)增出stx1和stx2基因；4株O157∶H?菌株，均沒有擴(kuò)增出stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因，且只有BYY119擴(kuò)增出stx1基因。結(jié)論 由于所有菌株缺失stx2基因，重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157致病力相對較低。 3．腸出血性大腸桿菌O157∶H7的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）分析 目的 從基因水平了解分離菌株的多態(tài)性。方法 選用限制性內(nèi)切酶Hinc Ⅱ和EcoR Ⅱ?qū)Ψ蛛x的O157∶H7菌株eaeA基因進(jìn)行酶切，選用限制性內(nèi)切酶HaeⅢ、Hinf Ⅰ、EcoR Ⅱ和Rsa Ⅰ對分離的O157∶H7菌株ehxA基因進(jìn)行酶切，最后對這兩個(gè)基因進(jìn)行PCR-RFLP分析。結(jié)果 所有分離菌株的eaeA基因和ehxA基因選用限制性內(nèi)切酶酶切之后所得酶切片段數(shù)目和大小與標(biāo)準(zhǔn)菌株的eaeA基因和ehxA基因選用限制性內(nèi)切酶酶切之后所得酶切片段數(shù)目和大小相同。結(jié)論 重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157∶H7在基因水平較為保守，多態(tài)性較為單一。 4．產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌（STEC）stx2a和stx2b血清抗體的檢測 目的 了解重慶市及三峽庫區(qū)STEC攜帶stx2基因的情況。方法 在兩個(gè)屠宰場采集商品
二、從污水中檢出O_(157)∶H7大腸桿菌（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級(jí)分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、從污水中檢出O_(157)∶H7大腸桿菌（論文提綱范文）
（1）食源性致病菌活菌檢測方法的應(yīng)用現(xiàn)狀及展望（論文提綱范文）
| 1 基于細(xì)胞培養(yǎng)的方法 |
| 2 非細(xì)胞培養(yǎng)的方法 |
| 2.1 基于核酸的方法 |
| 2.1.1 q PCR檢測法 |
| 2.1.2 m RNA檢測法 |
| 2.2 基于噬菌體的方法 |
| 2.2.1 噬菌體擴(kuò)增方法 |
| 2.2.2 噬菌體擴(kuò)增+q PCR/免疫測定方法 |
| 2.2.3 噬菌體擴(kuò)增+酶測定方法 |
| 2.2.4 電化學(xué)噬菌體生物傳感器 |
| 3 食源性致病菌活菌檢測方法存在的問題及展望 |
| 4 結(jié)論 |
（2）電化學(xué)生物傳感器在細(xì)菌病原體檢測中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢（論文提綱范文）
| 1 電化學(xué)基因傳感器 |
| 2 電化學(xué)免疫傳感器 |
| 3 電化學(xué)適配體傳感器 |
| 4 展望 |
| 5 結(jié)語 |
（3）大腸桿菌O157：H7在土壤組分上的界面作用和存活（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 土壤外源生物污染 |
| 1.3 大腸桿菌O157:H7的健康風(fēng)險(xiǎn) |
| 1.4 大腸桿菌O157:H7在土壤環(huán)境中的存活 |
| 1.4.1 土壤理化性質(zhì)對大腸桿菌O157:H7存活的影響 |
| 1.4.2 外界環(huán)境因子對大腸桿菌O157:H7存活的影響 |
| 1.4.3 土壤生物性質(zhì)對大腸桿菌O157:H7存活的影響 |
| 1.5 大腸桿菌O157:H7在土壤環(huán)境中的遷移 |
| 1.6 土壤礦物的重要性 |
| 1.7 細(xì)菌與固相組分的界面互作 |
| 1.8 研究目的和意義 |
| 第二章 大腸桿菌O157:H7在不同類型土壤中的粘附 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 病原菌 |
| 2.2.2 培養(yǎng)基 |
| 2.2.3 病原菌培養(yǎng)及其性質(zhì)測定 |
| 2.2.4 土壤及其性質(zhì)測定 |
| 2.2.5 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒上的等溫平衡粘附 |
| 2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 大腸桿菌O157:H7的基本性質(zhì) |
| 2.3.2 土壤的基本性質(zhì) |
| 2.3.3 大腸桿菌O157:H7土壤顆粒上的粘附 |
| 2.3.4 土壤性質(zhì)與分配系數(shù)K_d的一元線性回歸分析 |
| 2.3.5 土壤性質(zhì)與分配系數(shù)K_d的偏相關(guān)分析 |
| 2.3.6 土壤性質(zhì)與分配系數(shù)K_d的多元逐步回歸分析 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 第三章 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒中的存活機(jī)制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 病原菌 |
| 3.2.2 培養(yǎng)基 |
| 3.2.3 土壤顆粒分級(jí)及其性質(zhì)測定 |
| 3.2.4 土壤顆粒中鐵/鋁含量的測定 |
| 3.2.5 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒中的存活動(dòng)態(tài) |
| 3.2.6 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒上的粘附 |
| 3.2.7 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒中的ATP動(dòng)態(tài)變化 |
| 3.2.8 土壤顆粒對大腸桿菌O157:H7的乙酸代謝途徑基因表達(dá)的影響 |
| 3.2.9 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 土壤顆粒的基本性質(zhì) |
| 3.3.2 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒中的存活動(dòng)態(tài) |
| 3.3.3 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒上的等溫粘附 |
| 3.3.4 大腸桿菌O157:H7在土壤顆粒中的代謝活性變化 |
| 3.3.5 基因變化 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 結(jié)論 |
| 第四章 粘土礦物對大腸桿菌O157:H7生長、生物被膜形成和毒性基因表達(dá)的影響機(jī)制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 病原菌 |
| 4.2.2 培養(yǎng)基 |
| 4.2.3 粘土礦物 |
| 4.2.4 大腸桿菌O157:H7的生長 |
| 4.2.5 大腸桿菌O157:H7的生物被膜形成 |
| 4.2.6 大腸桿菌O157:H7生物被膜的表面微觀形貌 |
| 4.2.7 細(xì)菌-礦物復(fù)合體制備及形貌掃描 |
| 4.2.8 定量基因擴(kuò)增熒光檢測 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 粘土礦物對大腸桿菌O157:H7生長的影響 |
| 4.3.2 粘土礦物對大腸桿菌O157:H7生物被膜形成的影響 |
| 4.3.3 粘土礦物-大腸桿菌O157:H7復(fù)合體的微觀形貌觀察 |
| 4.3.4 大腸桿菌O157:H7生物被膜的微觀形貌觀察 |
| 4.3.5 粘土礦物對大腸桿菌O157:H7基因表達(dá)的影響 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 結(jié)論 |
| 第五章 研究結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和展望 |
| 5.1 主要結(jié)論 |
| 5.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 5.3 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間撰寫的論文 |
| 致謝 |
（4）家禽養(yǎng)殖場廢棄物農(nóng)用安全性的初步研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符號(hào)說明 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 1 環(huán)境中大腸桿菌概述 |
| 1.1 環(huán)境中的大腸桿菌 |
| 1.2 生物污染的定義 |
| 1.3 大腸桿菌的危害 |
| 1.3.1 對禽畜的危害 |
| 1.3.2 對人類的危害 |
| 1.4 禽致病性大腸桿菌血清型、耐藥性與毒力 |
| 1.5 luxS/AI-2 密度感應(yīng)系統(tǒng) |
| 2 禽場環(huán)境的特殊性與大腸桿菌的存在現(xiàn)狀 |
| 2.1 禽場環(huán)境的特殊性 |
| 2.2 禽場環(huán)境中大腸桿菌的存在現(xiàn)狀 |
| 3 家禽養(yǎng)殖場廢棄物及養(yǎng)殖廢水的處理與利用 |
| 3.1 家禽養(yǎng)殖場廢棄物及養(yǎng)殖廢水的處理與利用方式 |
| 3.1.1 家禽養(yǎng)殖場廢水的工程處理 |
| 3.1.2 家禽養(yǎng)殖場廢水農(nóng)用 |
| 3.1.3 堆肥還田 |
| 3.1.4 生產(chǎn)飼料 |
| 3.1.5 沼氣發(fā)酵 |
| 3.1.6 蚯蚓消解家禽養(yǎng)殖場廢棄物 |
| 3.2 家禽養(yǎng)殖場廢棄物處理與利用中存在的問題與對策 |
| 3.2.1 存在問題 |
| 3.2.2 研究對策 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一章 家禽養(yǎng)殖場糞便中大腸桿菌的分布及其生長特性的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 試驗(yàn)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 禽糞中大腸桿菌的分離 |
| 2.2 禽糞樣品中大腸桿菌的計(jì)數(shù) |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 禽場中致病性大腸桿菌的分離鑒定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病料來源 |
| 1.2 培養(yǎng)基 |
| 1.3 主要試劑 |
| 1.4 大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn) O 因子血清 |
| 1.5 細(xì)菌的分離培養(yǎng) |
| 1.6 革蘭氏染色鏡檢 |
| 1.7 大腸桿菌生化試驗(yàn) |
| 1.8 大腸桿菌 O 血清型鑒定 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 細(xì)菌分離鑒定 |
| 2.2 大腸桿菌 O 血清型鑒定 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三章 禽致病性大腸桿菌分離株耐藥性檢測 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 培養(yǎng)基 |
| 1.3 藥敏試驗(yàn) |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 分離菌株敏感性降低 |
| 2.2 耐藥情況極其嚴(yán)重 |
| 2.3 多重耐藥現(xiàn)象普遍 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四章 禽場環(huán)境中大腸桿菌可能毒力基因的檢測 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 培養(yǎng)基、試劑與儀器設(shè)備 |
| 1.3 細(xì)菌 DNA 模板制備 |
| 1.4 14 種毒力相關(guān)基因的 PCR 擴(kuò)增 |
| 1.4.1 引物設(shè)計(jì) |
| 1.4.2 PCR 檢測14 種毒力相關(guān)基因 |
| 1.4.3 瓊脂糖凝膠電泳鑒定 PCR 產(chǎn)物 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 大腸桿菌基因組的提取以及純度檢測 |
| 2.2 大腸桿菌14 種毒力基因 PCR 引物的特異性檢測 |
| 2.3 各毒力基因在 APEC 分離株中的分布 |
| 2.4 分離株攜帶毒力基因數(shù)比較 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第五章 禽致病性大腸桿菌 LuxS基因克隆與 AI-2信號(hào)分子檢測 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株與載體 |
| 1.2 主要試劑與培養(yǎng)基 |
| 1.3 主要儀器 |
| 1.4 大腸桿菌信號(hào)分子 AI-2 的檢測 |
| 1.4.1 報(bào)告菌 88170 的培養(yǎng) |
| 1.4.2 信號(hào)分子AI-2的制備 |
| 1.4.3 大腸桿菌 AI-2 信號(hào)分子檢測 |
| 1.5 大腸桿菌在不同生長時(shí)期 AI-2 信號(hào)分子檢測 |
| 1.6 AI-2 信號(hào)分子合成基因luxS 的克隆 |
| 1.6.1 引物設(shè)計(jì) |
| 1.6.2 PCR 擴(kuò)增 |
| 1.6.3 PCR 產(chǎn)物的純化、連接、轉(zhuǎn)化和測序 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 大腸桿菌產(chǎn)生 AI-2 樣信號(hào)分子 |
| 2.2 大腸桿菌在不同生長階段 AI-2 信號(hào)分子的檢測 |
| 2.3 AI-2 信號(hào)分子合成基因luxS 的克隆及序列測定 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 結(jié)束語 |
| 附件一 65 株分離株血清型和耐藥情況分布 |
| 附件二 65 株致病性大腸桿菌分離株毒力基因分布 |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（5）腸出血性大腸埃希菌O157:H7的分布及特征（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 食源性O(shè)157:H7 |
| 1.2 其它來源O157:H7 |
| 1.3 O157:H7毒素基因檢測 |
| 1.4 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
（6）食源性致病菌多重PCR和基因芯片檢測方法的建立（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 緒論 |
| 1.1 食源性致病菌及其對食品安全的危害 |
| 1.1.1 食品安全與食源性致病菌 |
| 1.1.2 主要食源性致病菌及其危害 |
| 1.2 食源性致病菌檢測方法 |
| 1.2.1 傳統(tǒng)檢測方法 |
| 1.2.2 快速檢測方法 |
| 1.2.3 常見分子生物學(xué)檢測靶點(diǎn) |
| 1.3 基因芯片 |
| 1.3.1 基因芯片的原理 |
| 1.3.2 基因芯片的制作 |
| 1.3.3 基因芯片在食源性致病菌檢測方面的應(yīng)用 |
| 2 食源性致病菌多重PCR 檢測方法的建立 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌種 |
| 2.1.2 試劑及儀器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 食源性致病菌DNA 的提取和驗(yàn)證 |
| 2.2.2 食源性致病菌DNA 特異性靶點(diǎn)的挖掘和整合 |
| 2.2.3 食源性致病菌多重PCR 引物篩選 |
| 2.2.4 食源性致病菌多重PCR 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.5 食源性致病菌多重PCR 體系優(yōu)化 |
| 2.2.6 食源性致病菌多重PCR 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 食源性致病菌DNA 特異性靶點(diǎn)的挖掘和整合 |
| 2.3.2 多重PCR 引物篩選 |
| 2.3.3 多重PCR 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 2.3.4 多重PCR 體系優(yōu)化 |
| 2.3.5 多重PCR 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 2.4 討論 |
| 3 食源性致病菌基因芯片檢測方法的建立 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 菌種 |
| 3.1.2 試劑和儀器 |
| 3.1.3 芯片引物和探針 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 食源性致病菌DNA 的提取 |
| 3.2.2 多重PCR 反應(yīng)體系 |
| 3.2.3 多重PCR 產(chǎn)物純化 |
| 3.2.4 食源性致病菌基因芯片的點(diǎn)制 |
| 3.2.5 單堿基延伸熒光標(biāo)記反應(yīng)和優(yōu)化 |
| 3.2.6 芯片雜交和洗片 |
| 3.2.7 芯片掃描與數(shù)據(jù)分析 |
| 3.2.8 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 3.2.9 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 3.2.10 實(shí)際分離菌株的檢測 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.3.1 熒光標(biāo)記反應(yīng)退火溫度的優(yōu)化 |
| 3.3.2 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.3 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.4 實(shí)際分離菌株的檢測 |
| 3.4 討論 |
| 4 食源性致病菌的管式流動(dòng)芯片驗(yàn)證檢測 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 菌種 |
| 4.1.2 試劑和儀器 |
| 4.1.3 引物和探針 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 食源性致病菌DNA 的提取 |
| 4.2.2 普通PCR 反應(yīng) |
| 4.2.3 熒光標(biāo)記反應(yīng) |
| 4.2.4 管式流動(dòng)芯片雜交和掃描 |
| 4.2.5 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 4.2.6 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 4.2.7 食品樣品和分離菌株的檢測 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.3.1 特異性實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.2 靈敏度實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.3 食品樣品和分離菌株的檢測 |
| 4.4 討論 |
| 5 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（7）致病性大腸桿菌烈性噬菌體的篩選及其生物學(xué)效應(yīng)研究（論文提綱范文）
| 中英文對照一覽表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 論文正文 致病性大腸桿菌烈性噬菌體的篩選及其生物學(xué)效應(yīng)研究 |
| 前言 |
| 第一部分 致病性大腸桿菌噬菌體的篩選及分子生物學(xué)特征 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 第二部分 腸侵襲性大腸桿菌8401噬菌體LSB-1的應(yīng)用探索 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 全文結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 腸出血性大腸桿菌O157的流行病學(xué)研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 研究生期間發(fā)表的論文 |
（8）大腸桿菌O157重組弱毒疫苗的研究（論文提綱范文）
| 提要 |
| 英文縮寫詞表 |
| 前言 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 A/E 病原性大腸桿菌概述 |
| 第二章 A/E 大腸桿菌 LEE 致病島研究進(jìn)展 |
| 第三章 革蘭氏陰性菌 III 型分泌系統(tǒng)研究進(jìn)展 |
| 第四章 大腸桿菌 O157 疫苗研究進(jìn)展 |
| 第二篇 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 第一章 大腸桿菌 O157 感染小鼠模型的建立 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二章 大腸桿菌 O157 原噬菌體消除菌株的鑒定及整合位點(diǎn)分析 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三章 大腸桿菌 O157 重組弱毒菌株的構(gòu)建 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第四章 大腸桿菌 O157 重組弱毒菌株生物學(xué)和免疫學(xué)特性的研究 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他成果 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 導(dǎo)師簡介 |
| CURRICULUM VITAE |
| 致謝 |
（9）龍巖市1999～2005年O157大腸桿菌監(jiān)測研究（論文提綱范文）
| 1材料與方法 |
| 1.1材料 |
| 1.2方法 |
| 2結(jié)果 |
| 2.1 O157大腸桿菌檢出情況 |
| 2.2菌株鑒定結(jié)果 |
| 2.3毒力及特征基因的測定 |
| 3討論 |
（10）重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的流行病學(xué)調(diào)查（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 大腸桿菌O157的流行概況 |
| 1.1.1 流行特點(diǎn) |
| 1.1.2 大腸桿菌O157在世界的爆發(fā)和散發(fā)情況 |
| 1.1.3 大腸桿菌O157在我國的爆發(fā)和散發(fā)情況 |
| 1.2 大腸桿菌O157的毒力及黏附相關(guān)蛋白與其致病機(jī)理 |
| 1.2.1 志賀毒素(stx) |
| 1.2.2 內(nèi)膜素(intimin) |
| 1.2.3 腸溶血素(ehx) |
| 1.2.4 大腸桿菌分泌蛋白A(EspA) |
| 1.2.5 Ter-細(xì)胞骨架連接蛋白(Tccp) |
| 1.3 大腸桿菌O157的傳統(tǒng)流行病學(xué)研究 |
| 1.3.1 樣品的前增菌 |
| 1.3.2 O157的初步分離與鑒定 |
| 1.3.3 血清學(xué)診斷 |
| 1.3.4 生化鑒定 |
| 1.3.5 藥敏試驗(yàn) |
| 1.4 大腸桿菌O157的分子流行病學(xué)研究概況 |
| 1.4.1 限制性片段長度多態(tài)性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP) |
| 1.4.2 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD) |
| 1.4.3 脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field Gel Electrophoresis,PFGE) |
| 1.4.4 隨機(jī)片斷長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP) |
| 1.4.5 多位點(diǎn)可變數(shù)銜接重復(fù)序列分析(Multiple-Locus Variable Number Tandem Repeats Analysis,MLVA) |
| 1.5 大腸桿菌O157的血清流行病學(xué)研究概況 |
| 1.5.1 大腸桿菌O157的抗體檢測技術(shù) |
| 1.5.2 檢測的抗體種類 |
| 1.5.3 檢測中存在問題 |
| 第二章 前言 |
| 第三章 大腸桿菌O157的分離鑒定與表型特征分析 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 菌株分離情況 |
| 3.2.2 菌株鑒定 |
| 3.2.3 藥物敏感性試驗(yàn) |
| 3.3 討論 |
| 第四章 大腸桿菌O157毒力與黏附相關(guān)基因的檢測 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 stx1基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.2.stx2基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.3.eaeA基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.4.ehxA基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.5.EspA基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.6.Tccp基因擴(kuò)增結(jié)果 |
| 4.2.7.分離菌株攜帶毒力基因與毒力相關(guān)基因的綜合分析 |
| 4.3 討論 |
| 第五章 腸出血性大腸桿菌O157:H7的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.2.1 eaeA基因的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析 |
| 5.2.2 ehxA基因的聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析 |
| 5.3 討論 |
| 第六章 產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)stx2a和stx2b血清抗體的檢測 |
| 6.1 材料與方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 方法 |
| 6.2 結(jié)果 |
| 6.2.1 商品豬血清中STEC stx2a和stx2b血清抗體的檢測結(jié)果 |
| 6.2.2 健康人群血清中STEC stx2a和stx2b血清抗體的檢測結(jié)果 |
| 6.2.3 新鮮牛奶中STEC stx2a和stx2b抗體的檢測結(jié)果 |
| 6.3 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 英文縮略詞表 |
| 致謝 |
| 發(fā)表論文及參加課題一覽表 |
| 發(fā)表論文及專著 |
| 參加課題 |
四、從污水中檢出O_(157)∶H7大腸桿菌（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]食源性致病菌活菌檢測方法的應(yīng)用現(xiàn)狀及展望[J]. 王純,張若鴻,王曉芳,李曉然,楊洋,崔生輝,郭云昌. 食品研究與開發(fā), 2021
- [2]電化學(xué)生物傳感器在細(xì)菌病原體檢測中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢[J]. 王純,張若鴻,楊洋,郭云昌. 衛(wèi)生研究, 2021(01)
- [3]大腸桿菌O157：H7在土壤組分上的界面作用和存活[D]. 劉星. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016(12)
- [4]家禽養(yǎng)殖場廢棄物農(nóng)用安全性的初步研究[D]. 陳文靜. 揚(yáng)州大學(xué), 2010(02)
- [5]腸出血性大腸埃希菌O157:H7的分布及特征[J]. 陳智強(qiáng),高仕瑛. 當(dāng)代醫(yī)學(xué), 2010(04)
- [6]食源性致病菌多重PCR和基因芯片檢測方法的建立[D]. 陸長勇. 上海交通大學(xué), 2009(09)
- [7]致病性大腸桿菌烈性噬菌體的篩選及其生物學(xué)效應(yīng)研究[D]. 宋彬. 第三軍醫(yī)大學(xué), 2007(03)
- [8]大腸桿菌O157重組弱毒疫苗的研究[D]. 劉軍. 吉林大學(xué), 2007(03)
- [9]龍巖市1999～2005年O157大腸桿菌監(jiān)測研究[J]. 陳前進(jìn),曹春遠(yuǎn),王炳發(fā),郭維植,張?jiān)禄?金健潮. 預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇, 2006(06)
- [10]重慶市及三峽庫區(qū)大腸桿菌O157的流行病學(xué)調(diào)查[D]. 丁紅雷. 西南大學(xué), 2006(12)
標(biāo)簽：噬菌體論文; 致病菌論文; 大腸桿菌論文; 土壤改良論文; 土壤結(jié)構(gòu)論文;