一、細(xì)胞因子在登革病毒感染中的作用（論文文獻(xiàn)綜述）
譚偉龍,張燕,江芳毅[1]（2021）在《登革病毒致病機(jī)制研究進(jìn)展》文中研究指明登革熱仍然是世界上危害最為嚴(yán)重的蟲(chóng)媒傳染病之一。本文從ADE效應(yīng)、細(xì)胞因子效應(yīng)、氧化應(yīng)激狀態(tài)損傷、基質(zhì)金屬蛋白酶損傷、TLR2誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)和其他一些最新研究證據(jù)入手,綜述了最新登革病毒致病機(jī)制,為登革病毒研究與防治提供理論參考。
張琛,宋正然,王培剛[2]（2022）在《細(xì)胞焦亡在黃病毒致病機(jī)制中的作用》文中研究表明黃病毒（flavivirus）是一類(lèi)具有包膜的單股正鏈RNA病毒,經(jīng)蚊蟲(chóng)叮咬傳播,是新發(fā)突發(fā)傳染性疾病的重要病原體,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。盡管不同黃病毒引起的臨床疾病不同,但是它們的臨床癥狀卻有一些相似之處,發(fā)熱是黃病毒感染后最常見(jiàn)的癥狀,而且往往表現(xiàn)為高熱。研究發(fā)現(xiàn),寨卡病毒和日本腦炎病毒感染中存在胱天蛋白酶1 （caspase1）依賴(lài)的炎性反應(yīng),而這一過(guò)程與細(xì)胞焦亡（pyroptosis）的部分機(jī)制相吻合。細(xì)胞焦亡是一種依賴(lài)于胱天蛋白酶（caspases）的炎性細(xì)胞程序性死亡類(lèi)型,其特征有焦孔素（gasdermin）介導(dǎo)的孔形成、細(xì)胞腫脹破裂和炎性細(xì)胞因子釋放。本文對(duì)黃病毒感染引起的固有免疫中巨噬細(xì)胞的焦亡現(xiàn)象進(jìn)行綜述,對(duì)細(xì)胞焦亡的分子機(jī)制、細(xì)胞焦亡的重要組分作用進(jìn)行總結(jié),分析了細(xì)胞焦亡與代表性黃病毒之間的關(guān)系,以期為細(xì)胞焦亡在黃病毒致病機(jī)制的后續(xù)研究提供參考,為抗病毒感染治療提供新的思路。
張娟[3]（2021）在《外泌體在Ⅲ型登革病毒感染THP-1細(xì)胞中的作用研究》文中研究指明[目的]外泌體是多囊體（MVBS）與細(xì)胞質(zhì)膜融合后釋放的胞外小泡,它們起源于MVB形成過(guò)程中的腔內(nèi)囊泡（ILVS）。外泌體被證明含有功能蛋白、脂質(zhì)和RNA,介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間的通訊,從而在健康和疾病的有機(jī)體的生理學(xué)中發(fā)揮作用。據(jù)報(bào)道,登革病毒在感染過(guò)程中具有多種細(xì)胞功能,如外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞通訊,這種功能是通過(guò)將攜帶病毒或抗病毒成分的胞外載體傳遞給宿主細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)的。因此,研究外泌體在病毒感染中的特性和作用,將有助于了解其在病毒-宿主相互博弈中的作用,為抗病毒治療提供新的靶點(diǎn)。[方法]對(duì)目前外泌體的分離和純化方法進(jìn)行評(píng)估,包括超速離心法、試劑盒法、超濾濃縮結(jié)合試劑盒法、碘克沙醇密度梯度離心法和免疫磁珠親和法,并通過(guò)透射電鏡、蛋白免疫印跡（Western blot）、納米顆粒追蹤分析（NTA）鑒定外泌體表征,比較提取的外泌體質(zhì)量;將Ⅲ型登革病毒（DENV-3）感染人單核細(xì)胞（THP-1）細(xì)胞,通過(guò)NTA和Western blot檢測(cè)病毒感染后外泌體釋放量變化,利用RT-PCR、Western bolt、間接免疫熒光、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù)分析DENV-3感染THP-1宿主細(xì)胞釋放的外泌體的特性及作用,驗(yàn)證其是否能包裹病毒核酸和蛋白在BHK-21和C6/36細(xì)胞上建立增殖性感染,逃避中和抗體的影響,使用GW4869外泌體抑制劑抑制細(xì)胞分泌外泌體后,檢測(cè)細(xì)胞上清病毒拷貝數(shù)變化,分析外泌體在病毒感染中的作用;通過(guò)高通量測(cè)序?qū)ENV-3感染THP-1后其上清外泌體miRNA的表達(dá)譜進(jìn)行分析,篩選出差異表達(dá)的miRNA,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)顯著差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。[結(jié)果]三種方法均能提取到外泌體,電鏡下可觀察到直徑為30-150 nm,具有圓盤(pán)狀和杯狀結(jié)構(gòu)的圓形或橢圓形囊泡,與試劑盒法和超濾濃縮結(jié)合試劑盒相比,超速離心法提取的外泌體背景清晰,雜質(zhì)較少。Western blot均能檢測(cè)到外泌體標(biāo)志蛋白Alix、CD63和CD81的表達(dá)。NTA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)三種方法提取的外泌體粒徑分布無(wú)明顯差異,均為單一峰值。超濾結(jié)合試劑盒法與超速離心法相比,提取的外泌體濃度和總蛋白量較高,且操作步驟簡(jiǎn)捷,耗時(shí)較少;DENV感染會(huì)引起宿主細(xì)胞外泌體釋放量增加,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),DENV-3病毒核酸和病毒E蛋白存在于外泌體中,同時(shí),DENV-3感染THP-1細(xì)胞釋放的外泌體可以介導(dǎo)C6/36細(xì)胞和BHK-21細(xì)胞感染,逃避中和抗體的影響。隨后,使用外泌體抑制劑GW4869抑制細(xì)胞外泌體釋放后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞上清中DENV病毒載量也隨之降低,表明外泌體可能參與了 DENV的傳播過(guò)程;通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)登革病毒主細(xì)胞釋放的外泌體中差異性miRNA做進(jìn)一步篩選和鑒定,發(fā)現(xiàn)107種miRNA明顯富集,其中,有96種miRNA在病毒感染細(xì)胞釋放的外泌體中表達(dá)上調(diào),11種表達(dá)下調(diào)。隨后,利用對(duì)差異miRNAs的靶基因進(jìn)行GO及KEGG富集分析,顯示這些miRNA的靶基因主要富集于宿主免疫/炎癥反應(yīng)相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路中,包括 Pathways in cancer、Ras signaling pathway、Rap1 signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathway等信號(hào)通路,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)顯著差異表達(dá)的6個(gè)miRNA進(jìn)行驗(yàn)證,與測(cè)序結(jié)果一致,它們可能在登革病毒感染過(guò)程中起作用。[結(jié)論]超高速離心法、試劑盒法、超濾結(jié)合試劑盒法均能從細(xì)胞上清中提取到外泌體,碘克沙醇密度梯度離心法和免疫磁珠法可以將外泌體從DENV感染細(xì)胞上清中純化出來(lái)而無(wú)病毒粒子的污染;攜帶登革病毒組分的外泌體可以進(jìn)入靶細(xì)胞進(jìn)建立有效感染,外泌體抑制劑GW4869的加入可抑制登革病毒在細(xì)胞中的傳播;DENV感染改變了 THP-1細(xì)胞分泌的外泌體中宿主miRNA的種類(lèi)和含量。
鄭寶嘉[4]（2020）在《lncRNA在登革病毒感染中調(diào)控血管內(nèi)皮屏障通透性的研究》文中指出研究目的登革病毒（Dengue virus,DENV）是一種有包膜的單正鏈RNA病毒,屬于黃病毒科、黃病毒屬,有4個(gè)血清型,主要通過(guò)埃及伊蚊和白紋伊蚊等蟲(chóng)媒傳播。登革病毒感染引起登革熱（Dengue Fever,DF）,可進(jìn)一步引發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥即登革出血熱/登革休克綜合征（Dengue Hemorrhagic Fever/Dengue Shock Syndrome,DHF/DSS）,其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明,病死率可高達(dá)50%。人類(lèi)基因中只有約2%能夠編碼蛋白,其余為轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件和非編碼RNA。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs,lnc RNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA,占非編碼RNA的80%。研究發(fā)現(xiàn),病毒感染可引起宿主細(xì)胞內(nèi)lnc RNA的表達(dá)異常,參與調(diào)控疾病的發(fā)生發(fā)展。本研究擬通過(guò)分析人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）感染DENV-1前后lnc RNA的表達(dá)變化情況,從中篩選與血管通透性有關(guān)的lnc RNA并研究其調(diào)控功能,探索導(dǎo)致血管通透性改變的分子機(jī)制,為揭示DHF/DSS發(fā)病機(jī)制和發(fā)展分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)和新的思路。研究?jī)?nèi)容及方法HUVEC感染DENV-1后進(jìn)行RNA高通量測(cè)序分析。通過(guò)生物學(xué)信息分析、敲減轉(zhuǎn)染技術(shù)、熒光定量PCR、蛋白免疫印跡、間接免疫熒光、鬼筆環(huán)肽染色、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell法檢測(cè)該lnc RNA的調(diào)節(jié)功能;通過(guò)生物信息分析、RNA熒光原位雜交和雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證該lnc RNA可能的作用靶點(diǎn)。研究結(jié)果及結(jié)論DENV-1感染HUVEC 24 h后測(cè)序,發(fā)現(xiàn)共有2623個(gè)lnc RNAs表達(dá)顯著差異。通過(guò)GO、KEGG和共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析,表達(dá)差異的lnc RNAs調(diào)控預(yù)測(cè)靶基因主要參與抗原加工呈遞、細(xì)胞凋亡、Ι和Ⅱ型干擾素信號(hào)通路、細(xì)胞粘附等過(guò)程。進(jìn)一步篩選到由DENV-1特異性誘導(dǎo)產(chǎn)生的、與血管通透性有關(guān)的lnc RNA,因與轉(zhuǎn)錄因子ERG表達(dá)呈相關(guān)性,命名為ERG-associated lnc RNA（ERGAL）。ERGAL在感染后表達(dá)升高。在敲減ERGAL后,轉(zhuǎn)錄因子ERG及細(xì)胞間關(guān)鍵連接蛋白VE-cadherin和claudin5的表達(dá)均受到抑制,并且可干擾細(xì)胞骨架重塑、促進(jìn)細(xì)胞凋亡和提高單層細(xì)胞通透性。RNA熒光原位雜交結(jié)果顯示ERGAL位于細(xì)胞質(zhì),且其序列含有多個(gè)mi RNAs的結(jié)合位點(diǎn),其中預(yù)測(cè)結(jié)合的mi R-183-5p在DENV感染后表達(dá)增加,可調(diào)節(jié)細(xì)胞連接蛋白表達(dá)和細(xì)胞骨架重塑。雙熒光素酶驗(yàn)證ERGAL與mi R-183-5p相互結(jié)合,可能是ERGAL的作用靶點(diǎn)之一。綜上所述,DENV-1感染HUVEC后可使細(xì)胞內(nèi)大量RNA表達(dá)差異,預(yù)測(cè)這些差異表達(dá)的lnc RNA參與誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能改變或受損死亡的生理過(guò)程;從中篩選到的lnc RNA-ERGAL可與mi R-183-5p結(jié)合調(diào)節(jié)細(xì)胞間關(guān)鍵連接蛋白和細(xì)胞骨架重塑,在DENV感染時(shí)能夠促進(jìn)維護(hù)血管內(nèi)皮屏障完整性和穩(wěn)定性,與DHF/DSS發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。
潘攀[5]（2019）在《登革病毒誘導(dǎo)血管滲漏相關(guān)分子機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理登革病毒屬于黃病毒科黃病毒屬的一個(gè)血清型亞群,根據(jù)其抗原性的不同可以分為5個(gè)不同的血清型。同一血清型中又可因?yàn)榭乖缘牟町惙譃椴煌幕蛐?。登革病毒是一種蟲(chóng)媒病毒,其主要通過(guò)埃及伊蚊和白紋伊蚊進(jìn)行傳播。登革病毒主要流行于熱帶和亞熱帶地區(qū),在亞洲,太平洋群島及中、南美洲等許多國(guó)家均已造成嚴(yán)重的威脅。登革病毒感染人體后主要引起登革熱以及發(fā)病率和死亡率都很高的登革出血熱和登革休克綜合征。其中登革熱的癥狀主要是發(fā)熱,頭痛,皮疹以及肌肉和關(guān)節(jié)疼痛,人體在感染同一血清型之后會(huì)獲得終生免疫。但是不同血清型所造成的二次感染卻會(huì)造成嚴(yán)重危及生命的登革出血熱和登革休克綜合征,這種現(xiàn)象被稱(chēng)作“抗體依賴(lài)性增強(qiáng)作用”。其主要的臨床癥狀是低血壓,血容量減少及血管通透性的改變。其中血管通透性的改變是其主要的研究熱點(diǎn),但是具體的機(jī)制還不是太清楚。臨床研究發(fā)現(xiàn)登革病毒感染會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量的炎癥因子,并且和登革疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。在登革病毒感染的過(guò)程中,炎癥因子參與調(diào)節(jié)宿主的體內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡以及參與疾病的發(fā)生。IL-1β,是宿主體內(nèi)產(chǎn)生的一類(lèi)非常重要的炎癥因子,其主要由炎性小體激活產(chǎn)生。NLRP3炎性小體在宿主天然免疫系統(tǒng)識(shí)別病原體入侵,特別是RNA病毒感染的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)了NLRP3蛋白識(shí)別登革病毒感染從而促進(jìn)炎性小體組裝的一個(gè)新機(jī)制,并且還創(chuàng)新性的將NLRP3炎性小體和登革病毒感染引起的血管滲漏癥狀直接的聯(lián)系在了一起。首先,我們證明了登革病毒感染可以產(chǎn)生大量的IL-1β,接著我們證明了登革病毒的復(fù)制和蛋白合成在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。接著我們通過(guò)蛋白篩選發(fā)現(xiàn)了登革病毒M蛋白可以直接和NLRP3相互作用并促進(jìn)了炎癥小體的組裝。接下來(lái)我們通過(guò)AAV-9載體系統(tǒng)使M蛋白在小鼠體內(nèi)大量表達(dá),發(fā)現(xiàn)其通過(guò)上調(diào)器官中的IL-1β水平導(dǎo)致器官的血管通透性發(fā)生了顯著性的改變。但是當(dāng)我們使用AAV9-M感染NLRP3-/-小鼠時(shí),相比于AAV9-M感染正常小鼠,器官中的IL-1β水平顯著降低,器官的血管通透性得到明顯回復(fù)。最后我們使用重組IL-1β活性蛋白直接刺激正常小鼠,發(fā)現(xiàn)小鼠器官血管通透性發(fā)生了顯著性的改變。以上實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了登革病毒M蛋白激活NLRP3炎性小體產(chǎn)生的IL-1β在誘導(dǎo)血管滲漏過(guò)程中發(fā)揮了直接的作用。登革病毒的NS1蛋白可以直接誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的改變從而導(dǎo)致血管滲漏,之前的研究發(fā)現(xiàn)NS1蛋白一方面可以作為PAMP通過(guò)TLR4導(dǎo)致炎癥因子的釋放從而來(lái)破壞內(nèi)皮細(xì)胞的完整性從而導(dǎo)致血管滲漏,另一方面NS1蛋白可以通過(guò)破壞細(xì)胞表面的多糖蛋白復(fù)合物來(lái)導(dǎo)致血管通透性的改變。因?yàn)镹S1蛋白本身不具備這種破壞作用,所以其中具體的分子機(jī)制還不是很清楚。在接下來(lái)的研究中,我們首先發(fā)現(xiàn)了登革病毒感染免疫細(xì)胞促進(jìn)了MMP-9的產(chǎn)生,接著我們發(fā)現(xiàn)登革病毒的NS1蛋白可以通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)MMP-9的分泌,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)NS1蛋白可以通過(guò)和MMP-9的相互作用,從而把免疫細(xì)胞中的MMP-9招募到內(nèi)皮細(xì)胞中,從而破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的交聯(lián)分子來(lái)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞通透性的改變。最后通過(guò)MMP9-/-小鼠實(shí)驗(yàn),我們進(jìn)一步證明了MMP9在NS1誘導(dǎo)血管通透性方面的重要作用。綜上所述,我們揭示了NS1通過(guò)招募MMP-9來(lái)破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的交聯(lián)從而誘導(dǎo)血管滲漏的一個(gè)新機(jī)制。綜上所述,我們的研究通過(guò)不同的方向闡明了登革病毒感染誘導(dǎo)血管滲漏的具體分子機(jī)制,從而為治療登革病毒感染引起的DHF/DHS癥狀提供了新的治療策略和研究靶點(diǎn)。
胡廣[6]（2019）在《交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞在抗腫瘤和抗病毒中的作用》文中認(rèn)為隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步以及免疫學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展,人類(lèi)的生活水平有了很大的改善。然而當(dāng)前,人類(lèi)健康仍然受到腫瘤以及諸如黃病毒等病原體的威脅。腫瘤是一種高死亡率的全球化的疾病。面對(duì)越來(lái)越高的發(fā)病率,現(xiàn)有的腫瘤治療手段已經(jīng)很難達(dá)到理想的效果。腫瘤免疫治療被認(rèn)為是治療,甚至是治愈腫瘤的希望。近年來(lái),這一領(lǐng)域快速發(fā)展,已經(jīng)引發(fā)了全球性的關(guān)注。由于多數(shù)腫瘤抗原屬于自身抗原,受中樞耐受等機(jī)制的影響,機(jī)體對(duì)腫瘤抗原的免疫反應(yīng)水平較低。因此,誘導(dǎo)抗原交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的產(chǎn)生,或許是一種有效的治療腫瘤的策略。本文第一部分對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞的免疫策略進(jìn)行了探究,并DCs根據(jù)優(yōu)化的免疫策略,對(duì)其應(yīng)用于腫瘤治療的情況進(jìn)行了研究,并發(fā)現(xiàn)CCL3細(xì)胞因子具有增強(qiáng)疫苗免疫反應(yīng)的作用。寨卡病毒作為一種“新興”的黃病毒,因其感染與孕婦分娩的胎兒小頭畸形癥以及成人格林巴列綜合征的發(fā)生有關(guān),受到越來(lái)越多的關(guān)注。對(duì)登革病毒的研究表明,異源化的登革病毒感染產(chǎn)生的登革病毒抗原特異的交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞介導(dǎo)對(duì)之后寨卡病毒感染的保護(hù)性作用。那么同樣作為黃病毒的日本腦膜炎病毒,在免疫后,產(chǎn)生的交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞是否同樣能介導(dǎo)對(duì)寨卡病毒感染的保護(hù)性作用呢?在本論文中的第二部分,我們對(duì)此進(jìn)行了研究,初步結(jié)果表明,日本腦膜炎病毒免疫產(chǎn)生的CD8陽(yáng)性T細(xì)胞具有保護(hù)小鼠對(duì)抗之后寨卡病毒感染的趨勢(shì)。仍然需要更多的研究進(jìn)行證實(shí)這一結(jié)果。
鄭媛菲,劉鳳輝,陳偉峰,巫慧文,張韻秦,周冰璇,鄭碧英[7]（2018）在《IL-17與登革病毒感染致病關(guān)系的研究進(jìn)展》文中提出登革病毒由伊蚊傳播,引起登革熱、登革出血熱和登革休克綜合征,其致病機(jī)制尚未明了。早期研究發(fā)現(xiàn)登革病毒感染引起細(xì)胞因子過(guò)度分泌,從而形成細(xì)胞因子風(fēng)暴。不同的細(xì)胞因子在登革病毒感染中作用不同,加劇或抑制病變的進(jìn)展,影響疾病的轉(zhuǎn)歸。白細(xì)胞介素-17（IL-17）作為一種重要的促炎細(xì)胞因子,由Th17細(xì)胞分泌,能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的聚集和增殖,從而有效地介導(dǎo)了組織的炎性反應(yīng),與多種病毒感染致病有關(guān)。本文綜述了登革病毒感染與細(xì)胞因子風(fēng)暴,IL-17的免疫機(jī)制,以及IL-17與登革病毒感染之間的關(guān)系。
李碩馳[8]（2017）在《PD-1、Tim-3及細(xì)胞因子在急性登革病毒顱內(nèi)感染患兒中表達(dá)水平的研究》文中研究指明目的:調(diào)查郴州市兒童醫(yī)院急性登革病毒（Dengue virus,DENV）顱內(nèi)感染患兒的臨床特點(diǎn),檢測(cè)其外周血中程序性細(xì)胞死亡受體1（PD-1,Programed death-1）、T細(xì)胞免疫球蛋白和黏蛋白結(jié)構(gòu)域3（Tim-3,T cell immuno-globulin and mucin domain 3）以及相關(guān)炎性細(xì)胞因子和腦脊液中相關(guān)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)情況。對(duì)象與方法:收集2014年5月至2015年9月郴州市兒童醫(yī)院（即郴州市第一人民醫(yī)院北院）臨床診斷為急性病毒性腦炎、腦膜炎和腦膜腦炎住院兒童的血液和腦脊液（Cerebrospinal fluid,CSF）標(biāo)本,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）和聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction,PCR）/逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）方法在CSF標(biāo)本中檢測(cè)DENV,并通過(guò)懸液芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)急性DENV顱內(nèi)感染患兒血液和CSF標(biāo)本及健康對(duì)照兒童血液標(biāo)本中的G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-10、IL-12（p70）、IL-13、IL-17、IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、MCP-1、TNF-α、MIP-1β共17種細(xì)胞因子,最后通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)患兒外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的PD-1和Tim-3表達(dá)水平。查閱相關(guān)病例與文獻(xiàn)資料,結(jié)合檢測(cè)結(jié)果,對(duì)其臨床特點(diǎn)、PD-1、Tim-3以及相關(guān)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果:1.本研究期間收集了急性病毒性腦炎、腦膜炎和腦膜腦炎住院兒童標(biāo)本245例,使用ELISA和PCR/RT-PCR方法檢出DENV共26例,其中DENV-Ⅰ型感染有25例（96.2%）,DENV-Ⅱ型感染有1例（3.8%）。2.急性DENV顱內(nèi)感染患兒血漿中的IFN-γ濃度（p=0.049）比健康對(duì)照兒童中的濃度低;IL-10濃度（p=0.040）、G-CSF濃度（p=0.018）比健康對(duì)照兒童中的濃度高,而其他細(xì)胞因子的濃度兩組間無(wú)明顯差異。3.急性DENV顱內(nèi)感染患兒CSF中的IL-6濃度（p=0.005）,IL-8濃度（p=0.004）,G-CSF濃度（p=0.000）,GM-CSF濃度（p=0.003）和MCP-1濃度（p=0.000）比血漿中的濃度高。其他細(xì)胞因子的濃度兩組間無(wú)明顯差異。4.急性DENV顱內(nèi)感染患兒外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的PD-1、Tim-3的表達(dá)水平較健康體檢兒童明顯升高（p均≤0.05）。5.急性DENV顱內(nèi)感染患兒血漿中IFN-γ與IL-10表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)趨勢(shì)（r=-0.440,p=0.040）。6.急性DENV顱內(nèi)感染患兒血漿中IFN-γ表達(dá)水平與CD4+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平、CD8+T細(xì)胞PD-1表達(dá)水平、CD8+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平、NK細(xì)胞PD-1表達(dá)水平和NK細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.651,p=0.001;r=-0.576,p=0.005;r=-0.506,p=0.016;r=-0.475,p=0.026;r=-0.423,p=0.045）;血漿中IL-10表達(dá)水平與CD8+T細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平、NK細(xì)胞Tim-3表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.475,p=0.021;r=0.492,p=0.011）。結(jié)論:1.急性DENV顱內(nèi)感染患兒血漿中IL-10、G-CSF濃度升高,腦脊液中IL-6、IL-8、G-CSF、GM-CSF、MCP-1濃度升高,而血漿中IFN-γ濃度降低,可能與其感染免疫調(diào)控機(jī)制有關(guān)。2.急性DENV顱內(nèi)感染患兒外周血中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的PD-1、Tim-3表達(dá)水平明顯升高,PD-1和Tim-3的表達(dá)可能與IFN-γ和IL-10的表達(dá)有相關(guān)性。
趙令齋[9]（2017）在《登革病毒基因變異、病毒載量及機(jī)體固有免疫與登革熱嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究》文中研究指明登革熱（DF）是由登革病毒（DENV）經(jīng)蚊媒傳播的一種急性傳染病,DENV依抗原性不同可分為四種血清型（DENV-1DENV-4）,每個(gè)血清型都可引起從無(wú)癥狀感染到致死性疾病的一系列廣泛的臨床表現(xiàn)譜。2009年世界衛(wèi)生組織將有癥狀的DENV感染簡(jiǎn)單分為DF和重癥登革熱（SD）,DF為疾病的輕癥形式,表現(xiàn)為一種發(fā)熱性自限性疾病,主要癥狀有高熱、頭痛、乏力、皮疹等,病程持續(xù)一周左右,而SD特征為在熱退后出現(xiàn)以嚴(yán)重出血、血漿滲漏和器官損傷為特征的重癥表現(xiàn),病死率較高,但SD的發(fā)病機(jī)制尚未闡明,目前認(rèn)為主要與二次異型DENV感染、病毒毒力和免疫病理等因素有關(guān)。廣東省尤其是廣州市是我國(guó)登革熱的高發(fā)區(qū),每年都有登革病例報(bào)告,3至5年出現(xiàn)一個(gè)發(fā)病高峰,以DENV-1為主。近幾年來(lái)流行趨勢(shì)加重,2013-2014年連續(xù)兩年爆發(fā)流行,尤其是2014年,為廣州史上最嚴(yán)重的登革熱疫情,出現(xiàn)較多的重癥病例,DENV流行的本地化問(wèn)題一直沒(méi)有得到解決,且我國(guó)DF患者的臨床及實(shí)驗(yàn)室特征與東南亞等流行區(qū)不同。在東南亞及南美洲等國(guó)家和地區(qū),DF通常被認(rèn)為是一個(gè)兒科疾病,較少侵襲成人,重癥也主要發(fā)生在兒童和青少年病例,目前對(duì)SD發(fā)病機(jī)制的理解基本都來(lái)源于東南亞兒童SD的研究;而我國(guó)DF病例以成人為主,SD發(fā)生機(jī)制可能與流行區(qū)不同,但目前尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。因此,研究我國(guó)成人DF患者病原特點(diǎn)和免疫反應(yīng)規(guī)律,闡明SD的發(fā)病機(jī)制,尋求SD預(yù)警指征從而對(duì)SD進(jìn)行早期診斷、預(yù)防和治療以降低SD的病死率是亟待解決的問(wèn)題。目的:分析2013-2014年廣州流行的DENV-1分子特征,探討DENV本地流行的分子學(xué)證據(jù);分析DENV基因變異、病毒載量和機(jī)體固有免疫與DF嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討我國(guó)SD患者的發(fā)病機(jī)制,從而為SD的臨床救治提供科學(xué)依據(jù)。方法:應(yīng)用Ion Torrent深度測(cè)序法對(duì)廣州2013-2014年流行的DENV-1進(jìn)行全基因組測(cè)序,與Genbank中報(bào)道的有全基因序列的DENV-1毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,探討此次DENV爆發(fā)和流行的分子學(xué)依據(jù);對(duì)DF和SD患者來(lái)源的DENV-1全基因序列進(jìn)行基因位點(diǎn)多態(tài)性、基因表達(dá)差異和遺傳多樣性比較,分析DENV基因序列變異對(duì)疾病嚴(yán)重程度的影響。應(yīng)用DENV IgM和IgG抗體捕獲ELISA試劑盒檢測(cè)住院患者IgM和IgG抗體水平了解我國(guó)患者初次感染及二次感染分布情況,比較DF和SD患者之間的二次感染百分率差異以分析其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討二次異型DENV感染機(jī)制在我國(guó)SD發(fā)生中的作用。應(yīng)用熒光定量RT-PCR對(duì)患者發(fā)病第1-10天的血清進(jìn)行DENV血清型分型和載量檢測(cè),觀察病毒載量在疾病過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律、比較DF和SD患者病毒載量差異,以了解疾病進(jìn)程中DENV與機(jī)體的相互作用,探討其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。應(yīng)用Luminex多因子檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)DF和SD患者疾病進(jìn)程中不同時(shí)間點(diǎn)的外周血中炎癥介質(zhì)和粘附分子水平探討機(jī)體炎癥反應(yīng)與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。應(yīng)用PCR array檢測(cè)患者病程中外周血單個(gè)核細(xì)胞中模式識(shí)別受體及其信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)水平,分析其與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性,探討固有免疫分子機(jī)制在DF尤其是SD發(fā)病中的作用。結(jié)果:（1）2013-2014年廣州流行的DENV-1有兩種基因型,即基因I型和III型,其中基因III型DENV-1在2013年首次出現(xiàn),其特征是在3’-UTR末端高變區(qū)發(fā)生21個(gè)核苷酸的缺失,遺傳進(jìn)化分析推測(cè)其可能是在2013年由新加坡傳入廣州并造成2014年廣州登革大流行。（2）基因I型DENV-1序列遺傳多樣性在DF和SD患者中存在差異,但基因III型DENV-1序列沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的差異。（3）登革患者IgM抗體水平隨著病程進(jìn)展迅速升高,至第6天時(shí)陽(yáng)性百分率即達(dá)95%以上;IgG抗體水平較IgM上升相對(duì)緩慢,陽(yáng)性百分率也相對(duì)較低;我國(guó)登革患者以初次感染為主,DF和SD患者二次感染百分率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（4）DENV載量在發(fā)病起始時(shí)達(dá)到峰值,隨疾病恢復(fù)快速下降,SD患者病毒載量在發(fā)熱期與DF患者并無(wú)明顯差異,但極期時(shí)顯著高于DF患者;初次感染患者較二次感染者有更高的病毒載量。（5）與健康對(duì)照相比,登革患者炎癥介質(zhì)和血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子水平顯著升高,但DF和SD患者表現(xiàn)出不同的動(dòng)力學(xué)變化特征,DF患者隨病情恢復(fù)水平逐漸下降,但SD患者高水平炎癥介質(zhì)持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。（6）登革熱患者基因表達(dá)水平較健康對(duì)照顯著升高,隨病情恢復(fù),表達(dá)水平逐漸下降,與病程進(jìn)展有明顯的相關(guān)性;機(jī)體主要通過(guò)TLR7/8、RIG-I和MDA5受體識(shí)別病毒來(lái)源分子,激活相應(yīng)的信號(hào)通路,引起IFN-I和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生以抵抗病毒感染;SD患者基因表達(dá)水平低于DF患者。結(jié)論:廣州DENV流行可能已經(jīng)從單一輸入模式轉(zhuǎn)變?yōu)檩斎牒捅镜亓餍泄泊娴哪Ｊ?病毒基因變異和二次異型DENV感染不是我國(guó)SD發(fā)病的最主要因素;但機(jī)體固有免疫反應(yīng)與疾病嚴(yán)重程度有明顯相關(guān)性,在SD發(fā)病中起重要作用。
趙玉嬌[10]（2016）在《登革熱流行病學(xué)調(diào)查及重癥登革熱病理機(jī)制研究》文中指出本研究首先對(duì)中國(guó)的登革熱流行病學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)描繪,并從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中篩查出所有分離自中國(guó)的登革基因序列共749條,進(jìn)行進(jìn)化發(fā)育分析。結(jié)果顯示,自1978年至2014年間,我國(guó)共計(jì)報(bào)告登革熱感染病例累計(jì)達(dá)735735例。1978年～1991年間疫情主要集中在廣東省和海南省,自1991年后集中在廣東、云南、浙江和福建四省,占全國(guó)感染病例的90%以上。死亡人數(shù)有507人,多數(shù)在1988年以前。感染人群的年齡分布呈扇形,集中在20～45歲之間。流行的登革毒株主要為Ⅰ型和Ⅱ型,呈交叉循環(huán)或共同感染模式。存在本地循環(huán)傳播和各省跨時(shí)空循環(huán)傳播交替出現(xiàn)的特點(diǎn),也存在同一毒株的本地延續(xù)性傳播。將2013年云南登革流行株全基因序列與Ⅲ型登革病毒標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)比,確定共有62個(gè)氨基酸突變,與其親緣關(guān)系最近的為2013年海南流行株及2002年孟加拉國(guó)流行株。2015年獲得的17個(gè)登革全基因序列經(jīng)內(nèi)部比對(duì),共找到217處堿基突變位點(diǎn),其中非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)域共有213處。將42個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因序列與Ⅱ型標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行比對(duì),共發(fā)現(xiàn)36個(gè)氨基酸突變產(chǎn)生。進(jìn)化分析顯示,該流行株與2004年斯里蘭卡流行株及2001年印度流行株屬于同一進(jìn)化分支。對(duì)375例登革熱患者進(jìn)行臨床病理分析,發(fā)現(xiàn)患者普遍存在不同程度的炎癥反應(yīng)、血管滲漏和肝損傷。血清中病毒載量并不是導(dǎo)致重癥登革熱的唯一原因,NSl含量、補(bǔ)體的合成和消耗與重癥登革熱具有相關(guān)性。利用Ⅱ登革病毒及其同型別前膜蛋白prM抗體建立人全血ADE模型,發(fā)現(xiàn)ADE感染組病毒拷貝數(shù)高于普通感染組2.94倍,補(bǔ)體C3水平降低61.5%。兩個(gè)登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產(chǎn)生,補(bǔ)體C3bBb含量也明顯升高,其中ADE組高于普通感染組2.6倍,而C1q含量變化不大,證明補(bǔ)體旁路途徑過(guò)度激活是ADE感染過(guò)程中的效應(yīng)機(jī)制之一。最后利用陰性分離的單核細(xì)胞建立抗體依賴(lài)增強(qiáng)感染體外模型。兩個(gè)登革感染組上清中均有大量C3a、C5a產(chǎn)生,伴隨IL-10的表達(dá)升高。經(jīng)免疫共沉淀、質(zhì)譜鑒定及Western Blot驗(yàn)證,證明膜輔助蛋白CD46與NS1具有相互作用。與單核細(xì)胞ADE模型共培養(yǎng)后免疫熒光染色檢測(cè)HuVEC表面C5b-9的形成,伊紅染色觀察細(xì)胞骨架改變。結(jié)果ADE組HuVEC有明顯的病理?yè)p傷,提示補(bǔ)體過(guò)度激活可能是導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和血管滲漏的原因之一。綜合上述研究結(jié)果,我們提出了“補(bǔ)體風(fēng)暴”假說(shuō)。即登革病毒NS1在細(xì)胞中大量復(fù)制并游離至血液中,循環(huán)遷移到全身各處。通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合補(bǔ)體調(diào)控因子CD46,使CD46散失或部分抑制對(duì)補(bǔ)體的調(diào)控作用,引起補(bǔ)體旁路途徑過(guò)度活化,產(chǎn)生大量補(bǔ)體裂解片段,導(dǎo)致類(lèi)似超敏反應(yīng)的全身性臨床癥狀。
二、細(xì)胞因子在登革病毒感染中的作用（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、細(xì)胞因子在登革病毒感染中的作用（論文提綱范文）
（1）登革病毒致病機(jī)制研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 登革病毒的主要結(jié)構(gòu) |
| 2 登革病毒的傳播 |
| 3 登革病毒的致病機(jī)制 |
| 3.1 ADE效應(yīng) |
| 3.2 非結(jié)構(gòu)蛋白NS1通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子風(fēng)暴 |
| 3.3 氧化應(yīng)激狀態(tài)損傷 |
| 3.4 基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)在感染過(guò)程中的作用 |
| 3.5 TLR2誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子表達(dá) |
| 3.6 其他可能的作用 |
| 4 結(jié)語(yǔ) |
（2）細(xì)胞焦亡在黃病毒致病機(jī)制中的作用（論文提綱范文）
| 1 細(xì)胞焦亡 |
| 1.1 細(xì)胞焦亡的發(fā)現(xiàn) |
| 1.2 細(xì)胞焦亡的分子機(jī)制 |
| 1.2.1 細(xì)胞焦亡的caspase1依賴(lài)性途徑 |
| 1.2.2 細(xì)胞焦亡的caspase4/5/8/11依賴(lài)性途徑 |
| 1.2.3 細(xì)胞焦亡的caspase3依賴(lài)性途徑 |
| 1.3 炎癥小體 |
| 1.4 caspase家族 |
| 1.5 GSDMD |
| 1.6 GSDMD抑制劑 |
| 2 黃病毒感染與細(xì)胞焦亡 |
| 2.1 黃病毒簡(jiǎn)介 |
| 2.1.1 寨卡病毒與細(xì)胞焦亡 |
| 2.1.2 登革病毒與細(xì)胞焦亡 |
| 2.1.3 日本腦炎病毒與細(xì)胞焦亡 |
| 2.2 其他黃病毒感染與細(xì)胞焦亡 |
| 3 黃病毒感染引起細(xì)胞焦亡的機(jī)制 |
| 4 總結(jié)與展望 |
（3）外泌體在Ⅲ型登革病毒感染THP-1細(xì)胞中的作用研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一章 DENV感染THP-1細(xì)胞源外泌體的分離純化及鑒定 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 第二章 外泌體在登革病毒感染細(xì)胞中的作用 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 第三章 DENV感染改變外泌體miRNA表達(dá)譜 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| References |
| 綜述 外泌體在登革病毒中的研究進(jìn)展 |
| References |
| 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 致謝 |
（4）lncRNA在登革病毒感染中調(diào)控血管內(nèi)皮屏障通透性的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 技術(shù)路線(xiàn) |
| 第一部分 :感染Ⅰ型登革病毒的血管內(nèi)皮細(xì)胞中l(wèi)ncRNA共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果 |
| 1.實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 4.討論 |
| 第二部分 :lncRNA-ERGAL與 miR-183-5p結(jié)合在登革病毒感染中調(diào)控血管內(nèi)皮屏障通透性 |
| 引言 |
| 1.實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 全文總結(jié) |
| 創(chuàng)新性 |
| 展望 |
| 附錄一 :中英文縮略詞表 |
| 附錄二 :附圖 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 碩士期間發(fā)表及待發(fā)表的文章 |
| 致謝 |
（5）登革病毒誘導(dǎo)血管滲漏相關(guān)分子機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 登革病毒概述 |
| 1.1.1 登革病毒的流行病毒學(xué) |
| 1.1.2 登革病毒的分子病毒學(xué) |
| 1.1.3 登革病毒的臨床癥狀和致病機(jī)制 |
| 1.1.4 登革的早期診斷和治療 |
| 1.1.5 登革疫苗的研發(fā)和展望 |
| 1.2 炎性小體概述 |
| 1.2.1 NLRP1 炎性小體 |
| 1.2.2 NLRC4 炎性小體 |
| 1.2.3 AIM2 炎性小體 |
| 1.2.4 NLRP3 炎性小體 |
| 1.2.5 非經(jīng)典的炎性小體 |
| 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 病毒 |
| 2.1.2 細(xì)胞系、細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞因子 |
| 2.1.3 抗體 |
| 2.1.4 表達(dá)載體 |
| 2.1.5 生化試劑 |
| 2.1.6 核酸操作及檢測(cè)試劑盒 |
| 2.1.7 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 登革病毒的擴(kuò)增和檢測(cè) |
| 2.2.2 細(xì)胞系培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.3 THP-1 細(xì)胞刺激分化為巨噬細(xì)胞 |
| 2.2.4 克隆構(gòu)建 |
| 2.2.5 RNA提取和qRT-PCR實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.6 Western-blot |
| 2.2.7 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(CO-IP) |
| 2.2.8 GST pull-down實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.9 免疫熒光實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.10 ASC多聚化檢測(cè) |
| 2.2.11 HEK293T體外構(gòu)建NLRP3 炎性小體體系 |
| 2.2.12 MMP-9 明膠酶活檢測(cè) |
| 2.2.13 跨內(nèi)皮細(xì)胞電阻檢測(cè)(TEER) |
| 2.2.14 小鼠器官血管滲漏檢測(cè) |
| 2.2.15 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) |
| 第三章 登革病毒M蛋白通過(guò)激活NLRP3 炎性小體誘導(dǎo)血管滲漏機(jī)制的研究 |
| 3.1 研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.1 登革病毒通過(guò)激活NLRP3 炎性小體來(lái)誘導(dǎo)IL-1β的分泌 |
| 3.2.2 登革病毒M蛋白通過(guò)和NLRP3 相互作用促進(jìn)NLRP3 炎性小體的組裝 |
| 3.2.3 登革病毒通過(guò)上調(diào)器官中的IL-1β水平來(lái)誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏 |
| 3.2.4 登革病毒M蛋白通過(guò)激活NLRP3 炎性小體誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏 |
| 3.2.5 IL-1β可以直接誘導(dǎo)小鼠器官中的血管滲漏的發(fā)生 |
| 3.3 本章小結(jié)和討論 |
| 第四章 登革病毒NS1 蛋白通過(guò)招募MMP-9 蛋白誘導(dǎo)血管滲漏機(jī)制的研究 |
| 4.1 研究背景與立項(xiàng)依據(jù)概述 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.2.1 登革病毒感染誘導(dǎo)MMP-9 的產(chǎn)生和分泌 |
| 4.2.2 登革病毒NS1 蛋白可以和MMP-9 相互作用 |
| 4.2.3 登革病毒NS1 蛋白通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)MMP-9 的分泌 |
| 4.2.4 登革病毒NS1 蛋白通過(guò)招募MMP-9 蛋白來(lái)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞通透性改變 |
| 4.2.5 登革病毒NS1 蛋白通過(guò)招募MMP-9 蛋白來(lái)破壞內(nèi)皮細(xì)胞間的交聯(lián) |
| 4.2.6 登革病毒NS1 蛋白促進(jìn)MMP-9 和交聯(lián)分子的相互作用 |
| 4.2.7 MMP-9 蛋白在NS1 誘導(dǎo)小鼠血管滲漏過(guò)程中發(fā)揮重要作用 |
| 4.3 本章小結(jié)和討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 博士期間發(fā)表和待發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（6）交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞在抗腫瘤和抗病毒中的作用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分 交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞在抗腫瘤中的應(yīng)用 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 GP100、TRP2 相關(guān)序列及合成情況 |
| 2.2 試劑及常用溶液 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 2.4 DCS的培養(yǎng)及小鼠免疫方法 |
| 2.5 LPS與 CPG作為聯(lián)合佐劑免疫小鼠 |
| 2.6 脾臟細(xì)胞的體外刺激實(shí)驗(yàn) |
| 2.7 流式細(xì)胞分析法檢測(cè) |
| 2.8 數(shù)據(jù)分析與整理 |
| 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 |
| 3.1 DCS荷載GP100 相關(guān)多肽進(jìn)行小鼠免疫后的免疫反應(yīng) |
| 3.2 DCS在不同溫度下,與多肽進(jìn)行孵育免疫小鼠后,小鼠的免疫應(yīng)答情況 |
| 3.3 DCS-PEP免疫小鼠一次與兩次的免疫反應(yīng)的比較 |
| 3.4 LPS與CPG作為聯(lián)合佐劑與N4 多肽混合后免疫小鼠 |
| 3.5 炎癥性細(xì)胞因子增強(qiáng)DCS-PEP疫苗的研究 |
| 3.6 DCS-PEP疫苗與聯(lián)合佐劑疫苗結(jié)合后增強(qiáng)小鼠免疫反應(yīng)的情況 |
| 3.7 DCS-PEP疫苗與聯(lián)合佐劑疫苗結(jié)合后用于治療小鼠黑色素瘤的研究 |
| 3.8 TRP2 多肽結(jié)合DCS疫苗與聯(lián)合佐劑用于小鼠腫瘤治療情況 |
| 4.討論和展望 |
| 5.參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞在抗病毒中的研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料與方法 |
| 2.1 小鼠及倫理 |
| 2.2 多肽合成 |
| 2.3 病毒、細(xì)胞以及試劑 |
| 2.4 小鼠感染實(shí)驗(yàn) |
| 2.5 脾臟細(xì)胞的體外刺激實(shí)驗(yàn) |
| 2.6 細(xì)胞染色以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子的產(chǎn)生情況 |
| 2.7 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn) |
| 2.8 過(guò)繼性轉(zhuǎn)移細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn) |
| 2.9 數(shù)據(jù)分析與整理 |
| 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論 |
| 3.1 HLA限制性的JEV以及ZIKV表位預(yù)測(cè)情況 |
| 3.2 通過(guò)IFNg的ELISPOT實(shí)驗(yàn)篩選免疫優(yōu)勢(shì)的多肽表位 |
| 3.3 通過(guò)細(xì)胞內(nèi)因子的染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證篩選的免疫優(yōu)勢(shì)表位 |
| 3.4 JEV免疫對(duì)ZIKV感染的影響 |
| 3.5 JEV免疫能否介導(dǎo)對(duì)之后ZIKV感染的保護(hù)性作用呢? |
| 4.討論和展望 |
| 5.參考文獻(xiàn) |
| 第三部分專(zhuān)業(yè)綜述 黃病毒科病毒交叉免疫應(yīng)答對(duì)寨卡病毒感染的影響 |
| 1.前言 |
| 2.黃病毒交叉反應(yīng)性抗體對(duì)寨卡病毒感染的影響 |
| 3.黃病毒交叉反應(yīng)性T細(xì)胞對(duì)寨卡病毒感染的影響 |
| 4.討論與展望 |
| 5.參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（7）IL-17與登革病毒感染致病關(guān)系的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 登革病毒感染與細(xì)胞因子的關(guān)系 |
| 2 IL-17的免疫機(jī)制 |
| 3 IL-17在登革病毒感染的致病機(jī)制中的作用 |
| 4 小結(jié) |
（8）PD-1、Tim-3及細(xì)胞因子在急性登革病毒顱內(nèi)感染患兒中表達(dá)水平的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要英文縮略語(yǔ)索引 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 PD-1、Tim-3 及細(xì)胞因子在急性登革病毒顱內(nèi)感染患兒中表達(dá)水平的研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 結(jié)果 |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 5. 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 碩士期間發(fā)表的文章 |
| 致謝 |
（9）登革病毒基因變異、病毒載量及機(jī)體固有免疫與登革熱嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 英文摘要 前言 第一章 |
| 2013-2014 |
| 年廣州流行的1型登革病毒進(jìn)化特征分析及病毒變異與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 材料與方法 結(jié)果 討論 第二章 |
| 二次感染與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 材料與方法 結(jié)果 討論 第三章 |
| 登革病毒載量與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 材料與方法 結(jié)果 討論 第四章 |
| 炎癥因子水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性 材料與方法 結(jié)果 討論 第五章 |
| 模式識(shí)別受體及其信號(hào)通路在登革熱發(fā)病中的作用 材料與方法 結(jié)果 討論 全文總結(jié) 參考文獻(xiàn) 綜述 參考文獻(xiàn) 在學(xué)期間發(fā)表的登革熱文章 致謝 |
（10）登革熱流行病學(xué)調(diào)查及重癥登革熱病理機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 Abstract 第一部分 登革熱分子流行病學(xué)研究 |
| 前言 |
| 1 登革病毒的生物學(xué)特征 |
| 1.1 登革病毒的分子結(jié)構(gòu)和基因組 |
| 1.2 登革病毒的復(fù)制和傳播途徑 |
| 1.3 世界范圍內(nèi)登革熱的流行概況 |
| 2 中國(guó)歷年登革熱流行情況的回顧性研究 |
| 2.1 研究方法概述 |
| 2.2 中國(guó)歷年登革熱的地理分布 |
| 2.3 中國(guó)歷年登革熱的時(shí)間分布 |
| 2.4 中國(guó)歷年登革熱的人口分布 |
| 2.5 中國(guó)歷年登革熱的型別分布 |
| 2.6 中國(guó)歷年登革熱流行株的進(jìn)化發(fā)育研究 |
| 3 云南省西雙版納州登革熱分子流行病學(xué)研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.3 2013年西雙版納州登革熱流行病學(xué)研究 |
| 3.4 2015年西雙版納州登革熱流行病學(xué)研究 |
| 討論 第二部分 重癥登革熱臨床病理觀察 |
| 前言 |
| 1 研究背景及實(shí)驗(yàn)思路 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 臨床研究設(shè)計(jì)及參與者招募 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 登革熱血清中非結(jié)構(gòu)蛋白NS1含量檢測(cè) |
| 3.2 登革熱血清樣本的常規(guī)血液指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3 登革熱血清中登革熱病毒載量檢測(cè) |
| 3.4 登革熱血清中免疫球蛋白IgG/IgM/IgA水平檢測(cè) |
| 3.5 登革熱血清中補(bǔ)體C3/C4水平檢測(cè) |
| 討論 第三部分 補(bǔ)體與重癥登革熱的相關(guān)性研究 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 白紋伊蚊細(xì)胞培養(yǎng) |
| 1.2 登革病毒毒株擴(kuò)增及鑒定 |
| 1.3 收獲病毒液的滴度測(cè)定 |
| 1.4 人血清抗體依賴(lài)增強(qiáng)補(bǔ)體裂解模型的建立 |
| 1.5 人全血抗體依賴(lài)增強(qiáng)感染模型的建立 |
| 1.6 免疫比濁法測(cè)定補(bǔ)體C3 |
| 1.7 C3裂解產(chǎn)物(C3SP)C3a的定量檢測(cè) |
| 1.8 補(bǔ)體裂解產(chǎn)物C5a、C3bBb、C1q的定量檢測(cè) |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 登革病毒的型別鑒定 |
| 2.2 利用人血清建立抗體依賴(lài)增強(qiáng)補(bǔ)體裂解模型 |
| 2.3 利用人全血建立ADE模型 |
| 2.4 利用人全血ADE模型研究補(bǔ)體活化途徑 |
| 討論 第四部分 補(bǔ)體旁路途徑過(guò)度激活導(dǎo)致重癥登革熱的病理機(jī)制研究 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 人外周血淋巴細(xì)胞（PBMC）分離及培養(yǎng) |
| 1.2 人外周血單核細(xì)胞初步純化（Monocytes） |
| 1.3 美天旎MAC陰性磁珠分選人外周血單核細(xì)胞 |
| 1.4 陰性磁珠分選的人外周血單核細(xì)胞純度鑒定 |
| 1.5 人外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)條件摸索 |
| 1.6 人外周血單核細(xì)胞抗體依賴(lài)增強(qiáng)感染（ADE）模型的建立 |
| 1.7 C3a、C5a含量檢測(cè) |
| 1.8 ELISA法定量檢測(cè)登革熱血清中細(xì)胞因子IL-10含量 |
| 1.9 免疫共沉淀（Co-Immunopredpitation, Co-IP） |
| 1.10 SDS-PAGE鑒定免疫共沉淀收獲液 |
| 1.11 質(zhì)譜鑒定SDS-PAGE中的目標(biāo)蛋白 |
| 1.12 Western Blot定性驗(yàn)證質(zhì)譜結(jié)果 |
| 1.13 利用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行單核細(xì)胞ADE模型-HuVEC共培養(yǎng) |
| 1.14 免疫熒光染色檢測(cè)HuVEC表面的補(bǔ)體膜攻擊復(fù)合物C5b-9 |
| 1.15 伊紅染色顯示與單核細(xì)胞ADE模型共培養(yǎng)后HuVEC細(xì)胞骨架改變 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 流式細(xì)胞術(shù)鑒定磁珠陰性分選的單核細(xì)胞純度 |
| 2.2 單核細(xì)胞最適培養(yǎng)條件 |
| 2.3 利用人外周血單核細(xì)胞建立抗體依賴(lài)增強(qiáng)感染模型 |
| 2.4 C3a、C5a、IL-10含量檢測(cè) |
| 2.5 利用單核細(xì)胞ADE模型進(jìn)行免疫共沉淀 |
| 2.6 目標(biāo)蛋白的質(zhì)譜鑒定 |
| 2.7 Western Blot驗(yàn)證質(zhì)譜鑒定結(jié)果 |
| 2.8 免疫熒光染色檢測(cè)HuVEC表面的補(bǔ)體膜攻擊復(fù)合物C5b-9 |
| 2.9 伊紅染色檢測(cè)HuVEC的細(xì)胞骨架改變 |
| 討論 全文總結(jié) 參考文獻(xiàn) 附錄 致謝 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
四、細(xì)胞因子在登革病毒感染中的作用（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]登革病毒致病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 譚偉龍,張燕,江芳毅. 中華衛(wèi)生殺蟲(chóng)藥械, 2021(05)
- [2]細(xì)胞焦亡在黃病毒致病機(jī)制中的作用[J]. 張琛,宋正然,王培剛. 微生物學(xué)報(bào), 2022(02)
- [3]外泌體在Ⅲ型登革病毒感染THP-1細(xì)胞中的作用研究[D]. 張娟. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [4]lncRNA在登革病毒感染中調(diào)控血管內(nèi)皮屏障通透性的研究[D]. 鄭寶嘉. 暨南大學(xué), 2020(03)
- [5]登革病毒誘導(dǎo)血管滲漏相關(guān)分子機(jī)制研究[D]. 潘攀. 武漢大學(xué), 2019(01)
- [6]交叉反應(yīng)性CD8陽(yáng)性T細(xì)胞在抗腫瘤和抗病毒中的作用[D]. 胡廣. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所), 2019(07)
- [7]IL-17與登革病毒感染致病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 鄭媛菲,劉鳳輝,陳偉峰,巫慧文,張韻秦,周冰璇,鄭碧英. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2018(21)
- [8]PD-1、Tim-3及細(xì)胞因子在急性登革病毒顱內(nèi)感染患兒中表達(dá)水平的研究[D]. 李碩馳. 南華大學(xué), 2017(04)
- [9]登革病毒基因變異、病毒載量及機(jī)體固有免疫與登革熱嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究[D]. 趙令齋. 廣州醫(yī)科大學(xué), 2017(12)
- [10]登革熱流行病學(xué)調(diào)查及重癥登革熱病理機(jī)制研究[D]. 趙玉嬌. 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2016(01)
標(biāo)簽：登革熱論文; 外泌體論文; 細(xì)胞免疫論文; 病毒感染論文;