一、組織工程骨的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀（論文文獻(xiàn)綜述）
張旭婧[1]（2021）在《載多聯(lián)抗結(jié)核藥物同軸組織工程骨支架的制備及性能研究》文中研究指明重癥骨結(jié)核病目前采取的治療方案主要為手術(shù)清除顯性病灶后,對(duì)病灶區(qū)域給藥治療及骨缺損植骨重建,但術(shù)中給藥僅在短期內(nèi)起到輔助滅菌作用,不能完全清除結(jié)核桿菌,因此仍需長(zhǎng)期口服或注射大量抗結(jié)核藥物對(duì)病灶進(jìn)行治療。這不僅會(huì)對(duì)患者的臟器及神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生毒副作用,還會(huì)由于血液循環(huán)、藥物代謝及病灶周?chē)Y(jié)締組織對(duì)藥物的阻礙,導(dǎo)致藥物到達(dá)病灶時(shí)濃度偏低,治療效果不佳,使骨結(jié)核病具有潛在的復(fù)發(fā)性。因此,保持病灶區(qū)域的有效藥物濃度可以對(duì)持續(xù)穩(wěn)定的治療起到關(guān)鍵作用。論文采用3D打印技術(shù)搭載INH/SM/RFP三聯(lián)抗結(jié)核原藥和載藥微球,構(gòu)建了一種具有多梯度緩釋結(jié)構(gòu)的可降解載藥組織工程骨支架,將適宜的機(jī)械性能與穩(wěn)定的藥物釋放性能相協(xié)調(diào),延長(zhǎng)藥物的緩釋時(shí)間,為結(jié)核性骨缺損的治愈提供了良好的局部環(huán)境。復(fù)合材料間的性能表現(xiàn)及量效關(guān)系是有效提高載藥支架釋藥穩(wěn)定性,促進(jìn)新骨再生的關(guān)鍵因素。論文根據(jù)絲素蛋白（SF）獨(dú)特的理化特性,應(yīng)用超聲3min及冷凍干燥的物理方式優(yōu)化拓展了SF基復(fù)合材料的特定性能,實(shí)驗(yàn)證明β-折疊含量的有效提高,可使復(fù)合材料的抗壓強(qiáng)度及應(yīng)變能力提升13.91%及29.28%。并根據(jù)同軸支架中絲材結(jié)構(gòu)發(fā)揮的不同作用,選取了藥物負(fù)載率高的復(fù)合材料SF/PVA/H A/β-TCP作為內(nèi)芯載藥基材,骨誘導(dǎo)性能優(yōu)異的復(fù)合材料HA/PVA/β-TCP作為外層包覆材料,并建立了合適的組分配比范圍,使復(fù)合材料具備適配的力學(xué)及降解性能。對(duì)微球的工藝參數(shù)和制備過(guò)程量化控制,實(shí)現(xiàn)了載藥微球成形精度、載藥及釋藥性能的提高。將SF作為藥物載體材料,INH作為藥物模型,應(yīng)用W/O乳化法制備載藥微球,BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)-遺傳算法對(duì)工藝參數(shù)篩選尋優(yōu),結(jié)合響應(yīng)曲面法（R SM）對(duì)比分析,最終確定最佳參數(shù)為油水比例10:1、攪拌溫度45℃、攪拌速度400rpm時(shí),可獲得粒徑均勻分散,完整性好,藥物負(fù)載效率高以及藥物釋放速率穩(wěn)定的載藥微球。根據(jù)親、疏水性載藥微球藥物釋放行為的差異性,建立了與濃度相關(guān)的藥物擴(kuò)散-溶解機(jī)理模型,描述了載藥微球中藥物釋放速率與載體材料、藥物性質(zhì)的關(guān)系。并通過(guò)ANSYS模型對(duì)親、疏水性載藥微球中藥物的分布模型化,獲得親水性藥物更靠近微球表面,藥物釋放主要以擴(kuò)散為主導(dǎo);疏水性藥物更易向微球中心聚集,藥物釋放主要以微球內(nèi)部藥物溶解為主導(dǎo)的結(jié)論。模型擬合結(jié)果的相關(guān)系數(shù)均在0.98以上,說(shuō)明該模型對(duì)親、疏水性藥物的釋放均具有良好的適應(yīng)性,能夠更好地指導(dǎo)微球載體結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)和釋藥性能的優(yōu)化。載藥支架絲材的同軸結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)以及支架整體控形優(yōu)化?；谕S噴頭內(nèi)、外層復(fù)合材料流變特性,建立了料筒供料速率、噴頭筒壁變化、噴頭出絲速率間的關(guān)系模型,內(nèi)、外層噴頭直徑已精確至300μm、600μm,并且打印出的絲材結(jié)構(gòu)同軸度高;通過(guò)綜合分析擠出速度、填充速度、分層高度3個(gè)主導(dǎo)工藝參數(shù)的交互關(guān)系對(duì)支架成形質(zhì)量的影響規(guī)律,能夠精準(zhǔn)有效地對(duì)支架成形過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化控形,應(yīng)用3D打印構(gòu)建了微結(jié)構(gòu)可控的同軸支架模型,為藥物在支架上的搭載方式多樣性和藥物緩釋梯度化提供了基礎(chǔ)。探究藥物在支架上的搭載方式及藥物分布形式對(duì)藥物緩釋性能的影響規(guī)律。將載藥微球作為一級(jí)緩釋載體,內(nèi)芯復(fù)合材料包覆三聯(lián)原藥及載藥微球作為二級(jí)緩釋層,外層包覆層作為三級(jí)緩釋層,3D打印構(gòu)建了三藥聯(lián)合、原藥與微球共混、同軸結(jié)構(gòu)梯度載藥、支架整體成形精度高的功能化組織工程骨支架。通過(guò)力學(xué)、降解和藥物緩釋實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,最終確定載94%三聯(lián)原藥/6%藥物微球的同軸支架為最優(yōu)載藥支架,此支架相比單軸100%原藥支架的力學(xué)強(qiáng)度提高了53.09%;至12周時(shí),載藥同軸支架中的INH、SM、RFP僅釋放了約為53.46%、85.57%、31.38%%,并且有效藥物濃度仍高于最低殺菌濃度。將載藥微球與載藥支架相結(jié)合,使藥物搭載方式多樣化和梯度化,藥物的緩釋性能更加穩(wěn)定,有效延長(zhǎng)了藥物的緩釋時(shí)間。更進(jìn)一步地,此載藥支架不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)三聯(lián)藥物的高效搭載和穩(wěn)定釋藥作用,還實(shí)現(xiàn)了根據(jù)藥物的自身屬性在治療階段梯度緩釋的功能,為以載藥組織工程骨支架為基礎(chǔ)的植入式藥物緩釋系統(tǒng)的研究和應(yīng)用提供了一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
陳俊毅[2]（2021）在《慢病毒介導(dǎo)沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合脫鈣骨基質(zhì)異位成骨的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究說(shuō)明目的:探索沉默P75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體（p75 neurotrophin receptor,P75NTR）聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor,NGF）過(guò)表達(dá)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖活性和復(fù)合脫鈣骨基質(zhì)（demineralized bone matrix,DBM）構(gòu)建組織工程骨異位成骨能力的影響,對(duì)NGF、P75NTR新型復(fù)合基因在組織工程研究具有重要意義,并且為治療骨缺損提供理論依據(jù)和新思路。方法:通過(guò)貼壁分離法培養(yǎng)SD大鼠BMSCs并傳代,流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞表面標(biāo)志物。取第3代BMSCs分別用慢病毒介導(dǎo)沉默P75NTR基因（B組）、NGF過(guò)表達(dá)基因（C組）、沉默P75NTR和NGF過(guò)表達(dá)雙基因（D組）分別傳染BMSCs,以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞作為對(duì)照（A組）。轉(zhuǎn)染7 d后熒光顯微鏡觀(guān)察目的基因熒光蛋白表達(dá)。細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后連續(xù)8 d細(xì)胞的活性。Westen blot檢測(cè)各組P75NTR和NGF蛋白表達(dá)。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡分別觀(guān)察沉默P75NTR和NGF過(guò)表達(dá)雙基因轉(zhuǎn)染后BMSCs與DBM的黏附情況。分別將上述4組轉(zhuǎn)染后BMSCs與DBM共培養(yǎng)制備組織工程骨,埋植于8周齡SD大鼠背側(cè)皮下組織構(gòu)建皮下異位成骨模型（n=6）,術(shù)后4、8周行HE染色,術(shù)后8周ALP染色觀(guān)察鈣結(jié)節(jié)形成情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt-related transcription factor 2,Runx2）、ALP和骨鈣素（osteocalcin,OCN）表達(dá)。結(jié)果:第3代BMSCs呈長(zhǎng)梭形或紡錘形,經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察及CD14、CD29、CD34、CD44、CD45流式細(xì)胞儀鑒定,所培養(yǎng)細(xì)胞為BMSCs。轉(zhuǎn)染7 d A組未見(jiàn)熒光表達(dá),B組呈紅色熒光表達(dá),C組呈綠色熒光表達(dá),D組呈紅綠色復(fù)合熒光表達(dá);目的基因熒光表達(dá)率可達(dá)70%左右。Western blot檢測(cè)示,A、C組P75NTR蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著高于B、D組,C、D組NGF蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著高于A、B組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨時(shí)間推移,各組細(xì)胞增殖活性均上升,其中D組上升最明顯,3～8 d細(xì)胞活性明顯高于A組（P<0.05）。倒置相差顯微鏡和掃描電鏡觀(guān)察示,BMSCs能與DBM形成良好黏附。皮下異位成骨實(shí)驗(yàn)顯示,術(shù)后4周和8周,D組對(duì)比其他三組,有更多的骨組織形成;ALP染色示D組ALP活性最高,有更好的成骨表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)示,與A組比較,D組Runx2、ALP、OCN m RNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論:沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)雙基因共轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合DBM構(gòu)建組織工程骨具有良好的異位成骨能力,通過(guò)提高NGF的水平、關(guān)閉P75NTR凋亡通道,不僅可以提高細(xì)胞活性,還能更好促進(jìn)骨組織再生。
練勝[3]（2021）在《藻酸鹽凝膠細(xì)胞微球與雙相磷酸鈣陶瓷復(fù)合修復(fù)骨缺損的研究》文中研究說(shuō)明研究背景和目的:先天性畸形、創(chuàng)傷、感染及腫瘤等是造成大面積骨缺損的主要原因,大面積骨缺損的治療是臨床上亟需解決的重點(diǎn)和難點(diǎn)。組織工程骨在大面積骨缺損修復(fù)過(guò)程中具有良好的應(yīng)用前景。然而,其還存在種子細(xì)胞存活率低,生物學(xué)功能低以及體內(nèi)血管化差等問(wèn)題。建立合適的培養(yǎng)系統(tǒng)以模擬種子細(xì)胞的生物微環(huán)境,有望解決這些問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并構(gòu)建了藻酸鹽凝膠細(xì)胞微球（AGCMs）與雙相磷酸鈣陶瓷（BCPCs）復(fù)合共培養(yǎng)系統(tǒng),并通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)評(píng)估了其在骨缺損修復(fù)中的有效性。并進(jìn)一步通過(guò)組織學(xué)及分子生物學(xué)等手段評(píng)估該系統(tǒng)在兔骨缺損模型中的修復(fù)效果,為組織工程骨的構(gòu)建提供了進(jìn)一步的參考。研究方法:（1）、新西蘭大耳兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的分離、培養(yǎng)和鑒定。（2）、制備藻酸鹽凝膠微球與AGCMs。（3）、分析BMSCs在藻酸鹽凝膠微球中的細(xì)胞活力。（4）、AGCMs與BCPCs復(fù)合共培養(yǎng)系統(tǒng)檢測(cè)。（5）、構(gòu)建新西蘭大耳兔尺骨缺損模型。（6）、HE染色、Masson染色和免疫組化評(píng)估骨缺損修復(fù)的效果。研究結(jié)果:（1）、BMSCs在藻酸鹽凝膠微球中生長(zhǎng)良好。（2）、AO/EB雙重?zé)晒馊旧珯z測(cè)結(jié)果表明大部分BMSCs在藻酸鹽凝膠微球存活,少量細(xì)胞壞死。（3）、CCK-8試驗(yàn)與茜素紅染色試驗(yàn)結(jié)果顯示:BMSCs在微球內(nèi)的增殖能力和成骨分化潛能無(wú)明顯變化。（4）、免疫組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示:AGCMs和BCPCs復(fù)合共培養(yǎng)構(gòu)建的組織工程骨可以促進(jìn)骨缺損的修復(fù)。結(jié)論:（1）、藻酸鹽凝膠微球包裹的BMSCs的增殖能力和成骨分化潛能無(wú)明顯變化。（2）、通過(guò)AGCMs和BCPCs復(fù)合共培養(yǎng)構(gòu)建的組織工程骨可以促進(jìn)新骨組織的生長(zhǎng)。（3）、AGCMs與BCPCs復(fù)合共培養(yǎng)構(gòu)建的組織工程骨,可在一定程度上修復(fù)新西蘭大耳兔尺骨缺損,具有潛在的應(yīng)用前景。
劉小元,李蕾,張凱,李君,韓祥禎,何惠宇[4]（2021）在《骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架的體內(nèi)成骨》文中研究說(shuō)明背景:馬鹿角粉是一種生物相容性及機(jī)械性能良好的組織工程骨材料。采用細(xì)胞膜片技術(shù)、3D打印技術(shù)構(gòu)建組織工程骨,可實(shí)現(xiàn)極限骨缺損的個(gè)性化治療。目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇骨支架修復(fù)羊下頜骨極限缺損的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培養(yǎng)羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,采用細(xì)胞膜片技術(shù)及3D打印技術(shù)構(gòu)建骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架的組織工程骨。取12只新疆阿勒泰大尾羊,隨機(jī)分為術(shù)后1,2,3個(gè)月組,每組4只,于雙側(cè)下頜骨制備20 mm×3 mm×5 mm骨缺損,每組2只羊一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架,另一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿,每組另外2只羊,一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合納米羥基磷灰石/絲素蛋白/聚乙烯醇支架,另一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿。植入1,2,3個(gè)月末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,取下頜骨標(biāo)本進(jìn)行大體觀(guān)察、錐形束CT、組織學(xué)觀(guān)察及RT-PCR檢測(cè)相關(guān)成骨指標(biāo)。結(jié)果與結(jié)論:（1）錐形束CT觀(guān)察:第1,2個(gè)月末,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇組骨缺損區(qū)呈稀薄云霧狀,支架吸收較多,細(xì)胞膜片復(fù)合納米羥基磷灰石/絲素蛋白/聚乙烯醇組吸收相對(duì)較少;第3個(gè)月末,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇組有大量的新骨形成,密度接近周?chē)琴|(zhì),但細(xì)胞膜片復(fù)合納米羥基磷灰石/絲素蛋白/聚乙烯醇組骨缺損區(qū)未長(zhǎng)滿(mǎn),骨密度較低。細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿組3個(gè)月內(nèi)變化均不明顯,均沒(méi)有新骨生成;（2）組織學(xué)觀(guān)察:第3個(gè)月末,與其他兩組相比,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇組支架材料吸收較多,可見(jiàn)骨小梁排列規(guī)則及成熟板狀骨,細(xì)胞膜片復(fù)合納米羥基磷灰石/絲素蛋白/聚乙烯醇組也有少量新骨形成,細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿組3個(gè)月內(nèi)變化均不明顯;（3）RT-PCR檢測(cè):細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇組骨橋蛋白、骨鈣蛋白、Ⅰ型膠原的mRNA表達(dá)水平均高于其他兩組,在第3個(gè)月時(shí)成骨基因的表達(dá)量達(dá)到最高;（4）結(jié)果表明,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架的組織工程骨能夠修復(fù)羊下頜骨極限骨缺損,可滿(mǎn)足羊頜骨實(shí)驗(yàn)性缺損的修復(fù)重建。
侯建飛[5]（2021）在《部分脫蛋白骨和Ⅰ型膠原制備新型生物工程骨支架研究》文中研究說(shuō)明[目的]本研究采用陽(yáng)離子表面活性劑、硅烷偶聯(lián)劑和浸泡干燥三種方法表面處理制備部分脫蛋白骨（PDPB）,與Ⅰ型膠原制備得到PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合支架,并培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）接種于復(fù)合支架,探討體外構(gòu)建組織工程骨與細(xì)胞復(fù)合的最佳方法,為體內(nèi)構(gòu)建組織工程骨提供理論依據(jù)。[方法]①按文獻(xiàn)方法制備PDPB,隨機(jī)選擇5塊進(jìn)行肉眼和掃描電鏡觀(guān)察;將PDPB隨機(jī)分為3組,浸泡干燥法作為對(duì)照組,陽(yáng)離子表面活性劑與硅烷偶聯(lián)劑為實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行表面改性和修飾,與Ⅰ型膠原復(fù)合制備得到PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合支架,微量凱氏定氮法測(cè)定三種PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合支架的含氮量,萬(wàn)能生物力學(xué)測(cè)試儀檢測(cè)材料的三點(diǎn)抗彎曲、抗壓縮等力學(xué)指標(biāo);②抽取大鼠骨髓,分離、純化BMSCs,進(jìn)行體外培養(yǎng)、鑒定,并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究;③將BMSCs接種到三種方法處理的PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合支架共同培養(yǎng),采用流式測(cè)定法檢測(cè)復(fù)合支架上BMSCs的增殖情況,掃描電鏡下觀(guān)察細(xì)胞在復(fù)合支架上的附著及生長(zhǎng)情況。[結(jié)果]①所制備的PDPB肉眼呈白色,質(zhì)地硬而脆,表面有大量孔隙相互連通,呈蜂窩狀,掃描電鏡下具有原始骨小梁與疏松網(wǎng)孔結(jié)構(gòu),孔壁光滑;三種方法制備的復(fù)合材料的含氮量均隨時(shí)間而增加,其中硅烷偶聯(lián)劑處理的復(fù)合材料的含氮量均顯著高于其他兩組（P<0.05）;三點(diǎn)抗彎曲與抗壓縮實(shí)驗(yàn)中,硅烷偶聯(lián)劑處理72h制備的PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合材料的屈服強(qiáng)度和最大應(yīng)力值與其他兩組相比,均為最高（P<0.05）;②原代培養(yǎng)BMSCs剛接種時(shí),細(xì)胞呈圓形,胞體透亮,都沒(méi)有貼壁,與周?chē)脑煅杉?xì)胞相互混雜,1～2天后部分細(xì)胞開(kāi)始貼壁,3天后完全貼壁,細(xì)胞逐漸變成短梭形,與成纖維細(xì)胞類(lèi)似,形態(tài)均一。5～6天后細(xì)胞形成集落狀,由10～20個(gè)細(xì)胞組成,形態(tài)變?yōu)殚L(zhǎng)梭形或多角形,細(xì)胞排列呈一定的方向性,圍繞中心呈漩渦狀。此后集落逐漸增多,并且集落中的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多,并融合為單層。隨之細(xì)胞大部分融合,長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果示CD29和CD90高表達(dá),CD34和CD45不表達(dá)或表達(dá)極少;ALP染色可見(jiàn)大量細(xì)胞呈ALP陽(yáng)性,細(xì)胞融合成一團(tuán),失去以前的生長(zhǎng)方式,ALP陽(yáng)性的黑色顆粒狀影像相互融合成網(wǎng)狀。鈣化結(jié)節(jié)經(jīng)茜素紅鈣染色呈桔紅色,互相融合,形成大片鈣化影;③掃描電鏡觀(guān)察顯示BMSCs在材料孔隙內(nèi)生長(zhǎng)、分化增殖,細(xì)胞附著最佳的是硅烷偶聯(lián)劑處理72小時(shí)制備的復(fù)合材料;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)硅烷偶聯(lián)劑處理72小時(shí)制備的復(fù)合材料的BMSCs增值情況最佳（P<0.05）。[結(jié)論]①與陽(yáng)離子表面活性劑和單純浸泡干燥相比,硅烷偶聯(lián)劑處理的PDPB更有利于Ⅰ型膠原的粘附,且制備的PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合材料的力學(xué)性能更為優(yōu)異;②本實(shí)驗(yàn)分離出的細(xì)胞是BMSCs,且增殖穩(wěn)定,適合作為骨組織工程種子細(xì)胞;③三種方法制備的PDPB/Ⅰ型膠原復(fù)合支架均不引起明顯的細(xì)胞免疫反應(yīng),細(xì)胞相容性良好,其中最有利于細(xì)胞附著、增殖的是硅烷偶聯(lián)劑處理制備的復(fù)合材料。
劉小元[6]（2021）在《3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架的體內(nèi)成骨實(shí)驗(yàn)研究》文中提出目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/SF/PVA骨支架修復(fù)羊下頜骨缺損的能力及成骨效果。方法:全骨髓法培養(yǎng)羊BMSCs、細(xì)胞膜片技術(shù)及3D FDM技術(shù)構(gòu)建BMSCs細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/SF/PVA組織工程骨支架。選取12只新疆阿勒泰大尾羊,均分為1、2、3月末組、每組4只,于雙側(cè)下頜骨區(qū)制備20 mm×3 mm×5 mm的實(shí)驗(yàn)骨缺損區(qū)。每組2只羊一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印鹿角粉/SF/PVA支架,另一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿對(duì)照,每組另外2只羊,一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架,另一側(cè)植入細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿對(duì)照。植入1、2、3月末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,下頜骨取材進(jìn)行大體、CBCT、HE觀(guān)察及RT-PCR檢測(cè)成骨相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果:（1）原代羊BMSCs,可見(jiàn)梭形等形態(tài)的細(xì)胞散在貼壁,第2代BMSCs表面標(biāo)志物CD44表達(dá)呈陽(yáng)性,第3代BMSCs成功誘導(dǎo)成膜并構(gòu)建組織工程骨。（2）CBCT:第1、2月末,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA植入骨缺損區(qū)呈稀薄云霧狀,支架吸收較多、細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架吸收相對(duì)較少;第3月末,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA有大量的新骨形成,密度接近周?chē)琴|(zhì),但細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架骨缺損區(qū)未長(zhǎng)滿(mǎn),骨密度較低。對(duì)照組3月變化均不明顯。（3）HE:第3個(gè)月末,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA支架與其他兩組相比,細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA支架材料吸收較多,可見(jiàn)骨小梁排列規(guī)則及成熟板狀骨,細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架也有少量新骨形成,細(xì)胞膜片復(fù)合明膠海綿3個(gè)月末變化均不明顯;（4）RT-PCR:細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA支架的OPN、OCN、COL-1的m RNA表達(dá)水平均高于細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架及對(duì)照組,在第3月末時(shí)成骨基因的表達(dá)量達(dá)到最高,同時(shí),在1、2、3月末,同一時(shí)間細(xì)胞膜片復(fù)合馬鹿角粉/SF/PVA支架的OPN、OCN、COL-1的m RNA水平表達(dá)量均顯著高于細(xì)胞膜片復(fù)合n-HA/SF/PVA支架及對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論:3D打印馬鹿角粉/SF/PVA骨支架能夠引導(dǎo)頜骨極限缺損區(qū)形成新骨,可滿(mǎn)足羊頜骨實(shí)驗(yàn)性骨缺損的修復(fù)重建,可能成為一種新的修復(fù)骨缺損的異種骨材料。
張凱[7]（2021）在《3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架體內(nèi)降解性能的研究》文中提出目的:通過(guò)研究3D打印鹿角粉/SF/PVA支架在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的降解情況,探討其作為組織工程骨支架的可行性及其對(duì)骨缺損愈合的影響。方法:體外培養(yǎng)羊BMSCs,分離純化、成膜誘導(dǎo);3D打印鹿角粉/PVA/SF支架及n-HA/SF/PVA支架,用細(xì)胞膜片包裹支架后植入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下頜骨缺損處。實(shí)驗(yàn)組為細(xì)胞膜片包裹馬鹿角粉/SF/PVA支架,對(duì)照組為細(xì)胞膜片包裹n-HA/SF/PVA支架,空白對(duì)照組為細(xì)胞膜片包裹凝膠海綿,分別于術(shù)后1、2、3月末取材,通過(guò)HE染色、實(shí)時(shí)定量PCR、影像學(xué)檢查等方法,評(píng)價(jià)不同支架材料對(duì)骨再生的影響及其自身降解情況。結(jié)果:（1）影像學(xué)結(jié)果顯示:在1月末,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組缺損區(qū)骨密度低于周?chē)９墙M織,但邊界較為模糊,空白對(duì)照組缺損區(qū)邊界較為明顯;在2月末,實(shí)驗(yàn)組骨皮質(zhì)開(kāi)始連續(xù),支架與周?chē)M織開(kāi)始愈合,對(duì)照組缺損區(qū)骨密度高于1月末,但部分支架與骨組織間可見(jiàn)低密度影,空白對(duì)照組缺損區(qū)邊界開(kāi)始模糊;3月末時(shí),實(shí)驗(yàn)組缺損區(qū)骨密度接近正常,骨缺損基本被修復(fù),對(duì)照組骨皮質(zhì)連續(xù),骨密度較周?chē)９墙M織稍低,骨缺損大部分被修復(fù),空白對(duì)照組缺損區(qū)低密度影范圍較1月末時(shí)有所縮小,骨密度也有所增加,但大部分骨缺損仍未修復(fù)。（2）HE染色及大體觀(guān)察:1月末,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組植入?yún)^(qū),可見(jiàn)少量成骨細(xì)胞,材料周?chē)^多破骨樣細(xì)胞及纖維結(jié)締組織;2月末實(shí)驗(yàn)組成骨細(xì)胞較為活躍,有較多新生毛細(xì)血管及骨小梁形成,同時(shí)支架材料的吸收多于對(duì)照組;3月末,實(shí)驗(yàn)組支架材料大部分已經(jīng)吸收、可見(jiàn)骨小梁排列規(guī)則及較為成熟的板狀骨。（3）RT-PCR結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組OPG、TNF-α、RANKL的m RNA表達(dá)水平與對(duì)照組及空白對(duì)照組相比均較高;TNF-α、RANKL表達(dá)量從術(shù)后1月末到3月末逐漸達(dá)到高峰,在2、3月末,同一時(shí)間實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組及空白對(duì)照組（P<0.05）;OPG表達(dá)量自1月末到3月末逐月下降,但同一時(shí)間實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量明顯高于對(duì)照組及空白對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論:鹿角粉/SF/PVA支架能夠促進(jìn)臨界骨缺損的修復(fù),與n-HA//SFPVA支架相比具有更好的促進(jìn)成骨能力及與其骨組織愈合速率相匹配的降解性,有望成為一種具有發(fā)展前景的組織工程骨的支架材料。
熊瑩[8]（2020）在《負(fù)載利福平GO/SF微球的組織工程骨支架制備及釋藥特性研究》文中研究表明骨結(jié)核疾病,是結(jié)核桿菌以血液傳播為主侵入骨或者關(guān)節(jié)組織所引起的破壞性病變。臨床上針對(duì)需“取骨重建”骨結(jié)核疾病的治療,普遍采用手術(shù)清除病灶,再進(jìn)行缺損骨組織的填充,最后配合在病灶放置或長(zhǎng)期口服抗結(jié)核藥物的治療手段。常用的骨缺損填充材料,如自體骨、異體骨等,僅起支撐作用,無(wú)法誘新組織的重建;而放置抗結(jié)核藥物于病灶的方法,不能保證藥物長(zhǎng)期有效的濃度,需多次手術(shù)用藥,加大了病人的治療痛苦;口服用藥也難以保證到達(dá)病灶區(qū)的藥物濃度滿(mǎn)足最佳抑菌濃度,長(zhǎng)此以往會(huì)給其他正常器官帶來(lái)嚴(yán)重的毒副作用。為解決以上問(wèn)題,本研究將性能優(yōu)異的藥物緩釋微球與組織工程骨支架材料相結(jié)合,通過(guò)3D打印技術(shù)制備具有藥物緩釋性能的微球-支架復(fù)合體,使該體系在填充、修復(fù)骨缺損的同時(shí)實(shí)現(xiàn)抗結(jié)核藥物持續(xù)、穩(wěn)定的釋放。本研究包含以下三部分:首先,以GO含量、藥載比、有機(jī)溶劑占比等為主要因素,設(shè)置不同水平,通過(guò)單一因素試驗(yàn)結(jié)合混合水平正交試驗(yàn),以電鏡掃描、粒徑表征、載藥率、包封率等相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為評(píng)斷依據(jù),最終得出載藥量最高組別微球的制備工藝參數(shù),該組微球載藥量為12.3%,包封率為65%,一周內(nèi)的微球中的藥物累計(jì)釋放量在80%左右,符合藥物緩釋微球的藥物釋放的規(guī)律;其次制備不同濃度GO/PVA復(fù)合凝膠,并與納米羥基磷灰石（nHA）進(jìn)行不同比例的復(fù)合,得到不同組別的支架復(fù)合材料,利用電鏡掃描、紅外光譜（FTIR）、X-射線(xiàn)衍射（XRD）及力學(xué)性能等測(cè)試結(jié)果,對(duì)不同配比支架材料的性能進(jìn)行表征,最終確定n HA:0.1%GO/PVA=1g:1.5ml時(shí),復(fù)合材料的力學(xué)性能最優(yōu)且滿(mǎn)足生物安全性要求;最后,參考抗結(jié)核藥物利福平（RFP）的最低抑菌及殺菌濃度,根據(jù)前兩部分得到的試驗(yàn)結(jié)果,通過(guò)計(jì)算確定支架所載微球、藥物及支架各材料間的用量,利用3D打印技術(shù)制備負(fù)載利福平GO/SF微球的組織工程骨支架。并通過(guò)生物體外降解及藥物緩釋實(shí)驗(yàn)對(duì)支架的降解、緩釋性能進(jìn)行評(píng)判,為此類(lèi)藥物緩釋體系的臨床應(yīng)用提供有效實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及支撐。
陳靖元[9]（2020）在《低頻電磁場(chǎng)聯(lián)合VEGF干預(yù)的間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合PCL/HA支架修復(fù)大鼠顱骨缺損的研究》文中研究說(shuō)明目的:1、探索低頻電磁場(chǎng)（EMF）聯(lián)合VEGF干預(yù)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rBMSCs）增殖、成骨成血管分化的影響及可能的分子機(jī)制。2、探究rBMSCs復(fù)合聚己內(nèi)酯（PCL）/羥基磷灰石（HA）支架經(jīng)EMF和VEGF聯(lián)合干預(yù)后,PCL/HA支架上rBMSCs的活性和增殖情況。3、探究rBMSCs復(fù)合PCL/HA支架經(jīng)EMF和VEGF聯(lián)合干預(yù)后形成的組織工程骨EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA用于修復(fù)大鼠顱骨缺損的骨生成效果。方法:1、體外分離培養(yǎng)4周齡大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行三系分化鑒定。取第三代大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)EMF（15Hz,1m T,4h/day）聯(lián)合VEGF（50ng/ml）干預(yù)培養(yǎng)1-7天,觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)變化并使用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。2、選用三代大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)EMF聯(lián)合VEGF干預(yù)培養(yǎng)后,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因OCN、RUNX2、COLI和成血管相關(guān)基因VEGFR2、v WF、CD31的表達(dá),通過(guò)Western-blot檢測(cè)成骨相關(guān)蛋白OPN、RUNX2、COLI和成血管相關(guān)蛋白VEGFR2、v WF、CD31以及Wnt通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。3、將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)EMF聯(lián)合VEGF干預(yù)培養(yǎng)后,以免疫熒光染色檢測(cè)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨成血管的表達(dá)情況。4、采用3D打印技術(shù)將聚己內(nèi)酯（PCL）和羥基磷灰石（HA）打印PCL/HA復(fù)合支架,將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種在PCL/HA支架上,經(jīng)EMF聯(lián)合VEGF干預(yù)培養(yǎng)后,使用live-dead染色檢驗(yàn)支架的細(xì)胞相容性,使用掃描電子顯微鏡（SEM）觀(guān)察大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在PCL/HA支架上的細(xì)胞形態(tài)和增殖情況。5、將rBMSCs接種在PCL/HA支架上,經(jīng)EMF/VEGF干預(yù)培養(yǎng)形成組織工程骨EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA,并構(gòu)建組織工程骨rBMSCs/PCL/HA、EMF/rBMSCs/PCL/HA、VEGF/rBMSCs/PCL/HA和PCL/HA,對(duì)比研究對(duì)大鼠顱骨缺損模型的修復(fù)程度。6、手術(shù)后4周和12周時(shí),對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行micro-CT掃描、組織學(xué)免疫組化染色及組織學(xué)切片評(píng)估缺損部位骨生成及血管生成情況。在手術(shù)12周后進(jìn)行薄片推出（push-out）實(shí)驗(yàn)檢測(cè)骨缺損修復(fù)的力學(xué)效果。結(jié)果:1、大鼠股骨和脛骨骨髓中分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞可以在成骨、成軟骨及成脂誘導(dǎo)基培養(yǎng)下進(jìn)行三系分化。經(jīng)VEGF以及EMF/VEGF干預(yù)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈現(xiàn)出類(lèi)鵝卵石樣形態(tài)。經(jīng)CCK-8檢測(cè)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)7天后經(jīng)EMF或/和VEGF干預(yù)下的細(xì)胞增殖速度較快。2、EMF干預(yù)刺激能上調(diào)基因OCN、RUNX2、COLI和蛋白OPN、RUNX2、COLI、CD31的表達(dá),VEGF干預(yù)刺激能上調(diào)VEGFR2、v WF、CD31基因和蛋白的表達(dá),同時(shí)能輕微上調(diào)基因OCN、RUNX2和蛋白OPN、COLI的表達(dá)。EMF和VEGF干預(yù)刺激均顯示了Wnt1、LRP-6和β-catenin的上調(diào)。3、免疫熒光染色顯示EMF干預(yù)后細(xì)胞表面分子標(biāo)記OCN陽(yáng)性,VEGFR1陰性;相反的VEGF干預(yù)后細(xì)胞表面分子標(biāo)記VEGFR1陽(yáng)性,OCN陰性;共同刺激組均為陽(yáng)性。4、PCL/HA支架細(xì)胞相容性良好,rBMSCs能夠在支架上進(jìn)行正常生長(zhǎng)及增殖,經(jīng)VEGF干預(yù)刺激后細(xì)胞增殖較快,形態(tài)上未見(jiàn)明顯區(qū)別。5、動(dòng)物手術(shù)后12周micro-CT掃描結(jié)果顯示構(gòu)建的EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA組織工程骨新生的骨量增加最為明顯。組織學(xué)免疫組化染色顯示OPN表達(dá)量在EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA組最高,CD34表達(dá)量在VEGF干預(yù)組中明顯升高。HE和MASSON染色可以發(fā)現(xiàn)EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA組支架部分的骨替換度較其余組明顯增多,且有類(lèi)似髓腔樣結(jié)構(gòu)出現(xiàn)。EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA組及VEGF/rBMSCs/PCL/HA組骨缺損處新生血管最為顯著。6、Push-out實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA組能夠承受的最大壓力及載荷最高。結(jié)論:1、獲取的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有分化的潛能。2、EMF能促進(jìn)rBMSCs的成骨分化相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),VEGF能促進(jìn)rBMSCs的成血管分化相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),且均是通過(guò)Wnt/β-catenin通路進(jìn)行調(diào)控。3、PCL/HA支架細(xì)胞相容性良好,rBMSCs在EMF/VEGF干預(yù)下能在PCL/HA支架上增殖良好。4、組織工程骨EMF/VEGF/rBMSCs/PCL/HA具有良好的組織相容性,具有較強(qiáng)的促進(jìn)骨缺損修復(fù)的作用,同時(shí)具有一定的促進(jìn)血管生成的作用,用于骨缺損修復(fù)效果良好,構(gòu)建方法簡(jiǎn)單、有效,具有一定的臨床應(yīng)用前景。
封國(guó)超[10]（2020）在《灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的研究》文中研究表明背景:嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染以及骨腫瘤切除后常導(dǎo)致嚴(yán)重的骨組織缺損,特別是大段骨缺損,不僅增加治療難度,且容易致殘、后期治療困難。修復(fù)大段骨缺損并重建其功能一直是骨科難題及研究熱點(diǎn)。目前臨床上治療大段骨缺損多采用自體骨和異體骨。帶血管自體骨移植修復(fù)大段骨缺損,手術(shù)操作復(fù)雜,患者手術(shù)負(fù)擔(dān)重,況且自體骨畢竟有限。異體骨雖來(lái)源廣泛,但存在免疫排斥及傳播疾病的危險(xiǎn)。隨著骨組織工程快速發(fā)展,組織工程骨有可能成為修復(fù)大段骨缺損較理想的方式。組織工程骨以其來(lái)源充足、生物功能與自體骨相似或更優(yōu),在骨缺損的修復(fù)中顯示出前所未有的優(yōu)越性。骨組織工程的研究是將種子細(xì)胞與骨支架材料復(fù)合后置于預(yù)先設(shè)計(jì)好的生物反應(yīng)器內(nèi),待其完成血管化以及成骨之后,將其移植入體內(nèi)骨缺損處,進(jìn)行缺損組織的再生修復(fù)。本課題分為三部分:（1）采用可溶聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）球模注漿技術(shù)制備可降解連通多孔生物陶瓷人工骨材料（即β-磷酸三鈣,β-tricalcium phosphate,β-TCP）,檢測(cè)其性能表征;（2）采用全骨髓貼壁法從兔骨髓中提取、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,并進(jìn)行傳代及鑒定,將其作為種子細(xì)胞;（3）以灌注型生物反應(yīng)器為載體,將BMSCs接種于β-TCP形成細(xì)胞/材料復(fù)合物,通過(guò)不同灌注流速對(duì)細(xì)胞/材料復(fù)合物進(jìn)行灌注培養(yǎng),評(píng)估其對(duì)BMSCs增殖及成骨分化的影響。第一部分可降解連通多孔生物陶瓷人工骨材料的制備及性能表征目的:制備并檢測(cè)可降解多孔β-TCP支架材料的理化性能,優(yōu)化人工骨材料的制備規(guī)格,研究人工骨材料在體外的理化性能,評(píng)估其應(yīng)用于骨組織工程生物材料的可行性。方法:（1）利用掃描電鏡觀(guān)察多孔β-TCP支架材料表面及內(nèi)部形態(tài);（2）利用掃描電鏡測(cè)量材料實(shí)際孔徑、孔內(nèi)連通徑數(shù)值;（3）利用X射線(xiàn)能譜儀對(duì)多孔β-TCP支架材料表面、橫斷面、縱切面元素進(jìn)行分析;（4）利用接觸角測(cè)量?jī)x對(duì)多個(gè)多孔β-TCP支架材料表面、橫切面、縱切面的接觸角進(jìn)行檢測(cè);（5）利用電子萬(wàn)能材料力學(xué)試驗(yàn)機(jī)對(duì)多孔β-TCP支架材料進(jìn)行抗壓強(qiáng)度測(cè)定;（6）利用重量體積法及Archimedes排水法計(jì)算多孔β-TCP支架材料的孔隙率等,并計(jì)算吸水率。結(jié)果:多孔β-TCP支架材料孔徑均勻,孔徑大小波動(dòng)在500μm左右,各孔隙相互連通,連通徑大小120μm左右,孔隙率大于60%,支架表面微結(jié)構(gòu)粗糙呈顆粒狀,凹凸不平,屬于弱疏水性材料,各支架間吸水性較均一,Ca/P比=1/0.67與天然骨接近,生物力學(xué)結(jié)果顯示多孔β-TCP支架材料與天然松質(zhì)骨類(lèi)似。結(jié)論:采用可溶聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）球模注漿技術(shù)制備可降解連通多孔生物陶瓷人工骨材料性能表征良好,多項(xiàng)指標(biāo)接近天然骨,完全符合骨組織工程材料對(duì)孔徑、孔隙率及力學(xué)性能的要求,可作為構(gòu)建組織工程骨研究理想生物材料。第二部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、培養(yǎng)、傳代及鑒定目的:將BMSCs作為骨組織工程的種子細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行提取、培養(yǎng)、傳代及鑒定,以評(píng)估其純度及鑒定其向成骨和成脂肪分化的能力。方法:采用全骨髓貼壁法將從新西蘭白兔股骨及脛骨骨髓腔提取的骨髓進(jìn)行分離并提純BMSCs。觀(guān)察BMSCs形態(tài)及生長(zhǎng)方式,用成骨成及脂肪誘導(dǎo)試劑盒對(duì)其分別進(jìn)行成骨及成脂肪定向誘導(dǎo)分化,用茜素紅及油紅對(duì)其染色并檢測(cè)BMSCs多向分化的能力,并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物CD29、CD34、CD44、CD45、CD90的表達(dá)情況。結(jié)果:全骨髓貼壁法進(jìn)行BMSCs提取及培養(yǎng)過(guò)程方便快捷。顯微鏡下BMSCs為長(zhǎng)梭形,貼壁牢,呈旋渦狀、魚(yú)群狀或放射狀生長(zhǎng)。成骨誘導(dǎo)3周后茜素紅染色可見(jiàn)鈣化結(jié)節(jié),成脂誘導(dǎo)2周后油紅染色可見(jiàn)胞質(zhì)內(nèi)充滿(mǎn)類(lèi)圓形脂滴。BMSCs表面標(biāo)志物結(jié)果:CD29+、CD44+、CD90+、CD34-、CD45-。結(jié)論:全骨髓貼壁法提取、分離、培養(yǎng)的BMSCs增殖優(yōu)良、形態(tài)好,且具有成骨、成脂肪等多向分化能力,為骨組織工程理想的種子細(xì)胞。第三部分灌注型生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)與構(gòu)建及灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響目的:設(shè)計(jì)及構(gòu)建灌注型生物反應(yīng)器,評(píng)估其灌注流速的穩(wěn)定性及可靠性;利用灌注型生物反應(yīng)器不同流速對(duì)細(xì)胞/材料復(fù)合物進(jìn)行培養(yǎng),觀(guān)察不同灌注流速下β-TCP內(nèi)BMSCs的形態(tài)、增殖及成骨分化的情況,同時(shí)對(duì)不同灌注流速進(jìn)行評(píng)價(jià),從而篩選最佳灌注流速,為體內(nèi)生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)及組織工程骨的培養(yǎng)提供理論參數(shù)。方法:（1）接種后灌注培養(yǎng)1、4、7天后利用細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒（cell counting kit-8,CCK-8）檢測(cè)不同組間細(xì)胞增殖及生物相容性;（2）接種后灌注培養(yǎng)7天利用電子掃描電鏡（scanning electron microscopy,SEM）觀(guān)察不同組間細(xì)胞形態(tài);（3）接種后灌注培養(yǎng)7天利用臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)算不同組間人工骨材料上細(xì)胞的存活率;（4）接種后灌注培養(yǎng)7天利用堿性磷酸酶試劑盒測(cè)定不同組間人工骨材料上細(xì)胞的堿性磷酸酶活力;（5）接種后灌注培養(yǎng)7d、10d后利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)不同組間誘導(dǎo)成骨效應(yīng);（6）接種后灌注培養(yǎng)7d通過(guò)Western blot檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)不同組間成骨相關(guān)蛋白表達(dá)量。結(jié)果:各組CCK-8結(jié)果顯示在培養(yǎng)第4d和7d時(shí),0.01ml/min灌注流速組細(xì)胞增殖快于其他組（P<0.05）,細(xì)胞出現(xiàn)增殖趨勢(shì)說(shuō)明細(xì)胞與材料生物相容性較好。掃描電鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)靜態(tài)培養(yǎng)組（0ml/min）細(xì)胞分布稀疏,呈疏松的簇狀生長(zhǎng);0.01ml/min灌注流速組呈膜片狀聚集生長(zhǎng),并且多數(shù)細(xì)胞伸出偽足分布在連通孔周?chē)?0.05ml/min灌注流速組部分呈膜片狀生長(zhǎng);0.1ml/min多數(shù)呈膜片狀生長(zhǎng)。細(xì)胞存活率檢測(cè)0.01ml/min灌注流速組存活率最高。0.01ml/min灌注流速組成骨相關(guān)基因（Runx2、ALP、OPN、Col-I）及成骨相關(guān)蛋白（Runx2、OPN、Col-I）的表達(dá)水平都明顯高于其它組（P<0.05）,同樣觀(guān)察到0.01ml/min灌注流速組堿性磷酸酶活性最高。結(jié)論:β-TCP材料可誘導(dǎo)BMSCs向成骨分化,隨生物反應(yīng)器灌注流速的降低,可促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成和分布,并可增加成骨相關(guān)基因及相關(guān)蛋白的表達(dá)。其中0.01ml/min低灌注流速最有利于BMSCs的增殖及向成骨分化。
二、組織工程骨的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀(guān)點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀(guān)察法：用自己的感官和輔助工具直接觀(guān)察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、組織工程骨的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀（論文提綱范文）
（1）載多聯(lián)抗結(jié)核藥物同軸組織工程骨支架的制備及性能研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 骨結(jié)核流行病學(xué)背景 |
| 1.1.2 治療方案及瓶頸問(wèn)題 |
| 1.2 骨缺損修復(fù)與骨組織工程 |
| 1.2.1 骨的組成成分 |
| 1.2.2 骨組織工程 |
| 1.2.3 組織工程骨支架 |
| 1.3 植入式藥物控釋系統(tǒng)的研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 藥物的負(fù)載方式 |
| 1.3.2 載藥微球 |
| 1.3.3 載藥組織工程骨支架 |
| 1.4 骨缺損修復(fù)材料的研究現(xiàn)狀 |
| 1.4.1 基體修復(fù)材料 |
| 1.4.2 藥物載體材料 |
| 1.4.3 絲素蛋白作為藥物載體材料 |
| 1.5 藥物載體制備方法的研究現(xiàn)狀 |
| 1.5.1 載藥微球的制備方法 |
| 1.5.2 3D打印應(yīng)用于載藥支架 |
| 1.6 藥物控制釋放動(dòng)力學(xué)模型 |
| 1.7 本論文的研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題 |
| 第二章 同軸載藥支架內(nèi)、外芯材的制備及控性?xún)?yōu)化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 SF/PVA/HA復(fù)合材料的制備及優(yōu)化 |
| 2.2.1 材料及實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.2 SF水溶液的制備 |
| 2.2.3 SF/PVA水凝膠的制備及控性?xún)?yōu)化 |
| 2.2.4 SF/PVA/HA復(fù)合材料的制備及控性?xún)?yōu)化 |
| 2.3 SF/PVA/HA/β-TCP復(fù)合材料的性能分析 |
| 2.3.1 SF/PVA水凝膠的親、疏水性能 |
| 2.3.2 SF/PVA/HA的生物相容性能 |
| 2.3.3 SF/PVA/HA/β-TCP的微觀(guān)形貌 |
| 2.3.4 SF/PVA/HA/β-TCP的 FT-IR分析 |
| 2.3.5 SF溶液優(yōu)化后的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析 |
| 2.3.6 SF/PVA/HA的力學(xué)性能 |
| 2.3.7 β-TCP對(duì)支架力學(xué)性能的影響 |
| 2.4 同軸載藥支架內(nèi)、外芯材的選擇 |
| 2.4.1 內(nèi)、外芯材的體外降解性能 |
| 2.4.2 內(nèi)、外芯材的力學(xué)性能 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 同軸藥芯載藥微球的制備工藝優(yōu)化及表征 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 模型藥物的選擇 |
| 3.2.1 異煙肼 |
| 3.2.2 鏈霉素 |
| 3.2.3 利福平 |
| 3.3 載藥微球的制備工藝 |
| 3.3.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器 |
| 3.3.2 SF水溶液的制備 |
| 3.3.3 載藥微球的制備 |
| 3.4 載藥微球的工藝參數(shù)優(yōu)化 |
| 3.4.1 中心復(fù)合設(shè)計(jì)法 |
| 3.4.2 神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)-遺傳算法優(yōu)化工藝參數(shù) |
| 3.4.3 響應(yīng)曲面法優(yōu)化工藝參數(shù) |
| 3.5 載藥微球的質(zhì)量評(píng)價(jià) |
| 3.5.1 微球的生物相容性能 |
| 3.5.2 微球的形態(tài)表征 |
| 3.5.3 載藥微球的載藥及釋藥性能 |
| 3.5.4 GA-BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及響應(yīng)曲面模型預(yù)測(cè)對(duì)比分析 |
| 3.5.5 載藥微球體外藥物釋放動(dòng)力學(xué)擬合 |
| 3.6 SF溶液的優(yōu)化方式對(duì)載藥微球性能的影響 |
| 3.6.1 SF溶液的后處理 |
| 3.6.2 載藥微球的微觀(guān)形貌 |
| 3.6.3 載藥微球的FT-IR分析 |
| 3.6.4 載藥微球的XRD分析 |
| 3.6.5 載藥微球的載藥性能 |
| 3.6.6 載藥微球的藥物緩釋性能 |
| 3.7 本章小結(jié) |
| 第四章 同軸藥芯載藥微球的釋藥行為分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 負(fù)載親、疏水性藥物微球的FT-IR分析 |
| 4.3 負(fù)載親、疏水性藥物微球的體外釋放行為研究 |
| 4.3.1 親、疏水性藥物微球的載藥性能 |
| 4.3.2 親、疏水性藥物微球的體外藥物釋放擬合 |
| 4.4 微球藥物擴(kuò)散-溶解釋放模型 |
| 4.5 微球藥物釋放有限元模型 |
| 4.5.1 有限元計(jì)算方法 |
| 4.5.2 有限元模型建立及結(jié)果 |
| 4.5.3 載藥量對(duì)藥物釋放的影響 |
| 4.5.4 包封率對(duì)藥物釋放的影響 |
| 4.5.5 藥物本身屬性對(duì)藥物釋放的影響 |
| 4.5.6 三種藥物模型的釋放擬合對(duì)比 |
| 4.6 本章小結(jié) |
| 第五章 3D打印同軸載藥組織工程骨支架 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 同軸組織工程骨支架的建立 |
| 5.2.1 同軸支架模型的建立 |
| 5.2.2 同軸支架的打印原理 |
| 5.3 支架打印過(guò)程中的工藝參數(shù)控制 |
| 5.3.1 同軸絲材的擠出流量控制 |
| 5.3.2 擠出速度對(duì)支架成形質(zhì)量的影響 |
| 5.3.3 平臺(tái)移動(dòng)速度對(duì)支架成形質(zhì)量的影響 |
| 5.3.4 擠出高度對(duì)支架成形質(zhì)量的影響 |
| 5.4 響應(yīng)曲面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程工藝參數(shù) |
| 5.4.1 響應(yīng)曲面法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 |
| 5.4.2 響應(yīng)曲面優(yōu)化結(jié)果分析 |
| 5.5 同軸載藥組織工程骨支架的打印 |
| 5.5.1 同軸載藥支架的成形過(guò)程 |
| 5.5.2 同軸載藥支架的宏、微觀(guān)結(jié)構(gòu) |
| 5.6 本章小結(jié) |
| 第六章 同軸載藥組織工程骨支架的性能研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 同軸載藥支架的建立及性能表征 |
| 6.2.1 藥物含量設(shè)計(jì) |
| 6.2.2 藥物在支架中的搭載方式及分布形式 |
| 6.2.3 載藥支架材料的打印參數(shù) |
| 6.2.4 同軸載藥支架的宏、微觀(guān)表征 |
| 6.3 藥物在支架中搭載方式的性能分析 |
| 6.3.1 載INH支架的力學(xué)、降解及釋藥性能 |
| 6.3.2 載SM、RFP支架的力學(xué)、降解及釋藥性能 |
| 6.4 藥物在支架內(nèi)部分布形式的性能分析 |
| 6.4.1 INH藥物在支架內(nèi)部的分布形式 |
| 6.4.2 SM藥物在支架內(nèi)部的分布形式 |
| 6.4.3 RFP藥物在支架內(nèi)部的分布形式 |
| 6.5 載三聯(lián)藥物/微球支架的性能分析 |
| 6.5.1 載藥支架降解過(guò)程中的宏微觀(guān)形貌 |
| 6.5.2 載藥支架的降解速率 |
| 6.5.3 載藥支架降解過(guò)程中的力學(xué)性能 |
| 6.6 載三聯(lián)藥物/微球支架的體外釋藥行為分析 |
| 6.6.1 INH藥物的體外釋藥行為 |
| 6.6.2 SM藥物的體外釋藥行為 |
| 6.6.3 RFP藥物的體外釋藥行為 |
| 6.6.4 三聯(lián)藥物在支架內(nèi)的釋藥狀態(tài)對(duì)比 |
| 6.6.5 三聯(lián)藥物同軸支架的釋藥擬合 |
| 6.7 本章小結(jié) |
| 第七章 總結(jié)與展望 |
| 7.1 全文總結(jié) |
| 7.2 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果 |
（2）慢病毒介導(dǎo)沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合脫鈣骨基質(zhì)異位成骨的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英漢縮略詞對(duì)照表 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)和主要試劑、儀器 |
| 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 1.2 沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)雙基因轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs觀(guān)測(cè) |
| 1.2.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng) |
| 1.2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定 |
| 1.2.3 基因轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs熒光表達(dá)檢測(cè) |
| 1.2.4 Westernblot檢測(cè)P75NTR和NGF蛋白表達(dá) |
| 1.2.5 CCK-8法檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染對(duì)BMSCs增殖活性的影響 |
| 1.3 組織工程骨的構(gòu)建及體內(nèi)外檢測(cè) |
| 1.3.1 雙基因轉(zhuǎn)染BMSCs種植DBM的體外觀(guān)察 |
| 1.3.2 組織工程骨構(gòu)建 |
| 1.3.3 動(dòng)物皮下異位成骨模型構(gòu)建 |
| 1.3.4 HE染色觀(guān)察 |
| 1.3.5 ALP染色觀(guān)察 |
| 1.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因表達(dá) |
| 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)雙基因轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs觀(guān)測(cè) |
| 2.1.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形狀和生長(zhǎng)狀況 |
| 2.1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的鑒定結(jié)果 |
| 2.1.3 基因轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs熒光表達(dá)檢測(cè) |
| 2.1.4 Westernblot檢測(cè)P75NTR和NGF蛋白表達(dá) |
| 2.1.5 CCK-8法檢測(cè)基因轉(zhuǎn)染對(duì)BMSCs增殖活性的影響 |
| 2.2 組織工程骨的構(gòu)建及體內(nèi)外檢測(cè) |
| 2.2.1雙基因轉(zhuǎn)染BMSCs種植DBM的體外觀(guān)察 |
| 2.2.2 HE染色觀(guān)察 |
| 2.2.3 ALP染色觀(guān)察 |
| 2.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因表達(dá) |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 雙基因介導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)外成骨的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 |
| 致謝 |
（3）藻酸鹽凝膠細(xì)胞微球與雙相磷酸鈣陶瓷復(fù)合修復(fù)骨缺損的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及支架材料 |
| 2.1.2 支架材料的選擇 |
| 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)的試劑 |
| 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)的溶液 |
| 2.1.5 實(shí)驗(yàn)的耗材 |
| 2.1.6 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 新西蘭大耳兔自體BMSCs的獲取、培養(yǎng)與鑒定 |
| 2.2.2 AGCMs的制備及分析 |
| 2.2.3 BCPCs支架的預(yù)備 |
| 2.2.4 AGCMs與 BCPCs復(fù)合體的構(gòu)建 |
| 2.2.5 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建 |
| 2.2.6 取材與組織學(xué)分析 |
| 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 AGCMs與 BCPCs復(fù)合支架的制備情況 |
| 3.1.1 BMSCs的形態(tài)觀(guān)察 |
| 3.1.2 免疫熒光染色法檢測(cè)BMSCs表面標(biāo)志物的結(jié)果 |
| 3.1.3 藻酸鹽凝膠微球與AGCMs的形態(tài)觀(guān)察 |
| 3.1.4 BMSCs在藻酸鹽凝膠微球中的活力分析結(jié)果 |
| 3.1.5 掃描電子顯微鏡下BCPCs支架的表面形態(tài) |
| 3.1.6 掃描電子顯微鏡下AGCMs在 BCPCs內(nèi)的分布情況 |
| 3.2 新西蘭大耳兔尺骨缺損模型的構(gòu)建情況 |
| 3.2.1 新西蘭大耳兔術(shù)后傷口愈合情況 |
| 3.2.2 骨缺損愈合的肉眼大體觀(guān)察情況 |
| 3.3 免疫組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.1 HE染色結(jié)果 |
| 3.3.2 Masson染色結(jié)果 |
| 3.3.3 免疫組化測(cè)定各組標(biāo)本骨鈣素含量和 CD31 表達(dá)結(jié)果 |
| 第4章 討論 |
| 4.1 臨界性骨缺損 |
| 4.2 種子細(xì)胞 |
| 4.3 支架材料 |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 生物活性陶瓷在骨組織工程中的應(yīng)用與進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
（4）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架的體內(nèi)成骨（論文提綱范文）
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 設(shè)計(jì) |
| 1.2 時(shí)間及地點(diǎn) |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4.1 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、傳代及鑒定 |
| 1.4.2 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片的制備 |
| 1.4.3 體外構(gòu)建細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印骨支架的組織工程骨 |
| 1.4.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 |
| 1.4.5 構(gòu)建羊下頜骨極限骨缺損模型及植入組織工程骨 |
| 1.5 主要觀(guān)察指標(biāo) |
| 1.5.1 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片的形態(tài)結(jié)構(gòu) |
| 1.5.2 一般情況 |
| 1.5.3 錐形束CT觀(guān)察骨修復(fù)情況 |
| 1.5.4 組織學(xué)觀(guān)察成骨情況 |
| 1.5.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)成骨基因的表達(dá) |
| 1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果Results |
| 2.1 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、傳代及鑒定結(jié)果 |
| 2.2羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片的形態(tài)結(jié)構(gòu) |
| 2.3 一般情況 |
| 2.4錐形束CT結(jié)果 |
| 2.5 組織工程骨植入后不同時(shí)間點(diǎn)蘇木精-伊紅染色組織學(xué)觀(guān)察 |
| 2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)相關(guān)成骨基因m RNA表達(dá)水平 |
| 3 討論Discussion |
（5）部分脫蛋白骨和Ⅰ型膠原制備新型生物工程骨支架研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 部分脫蛋白骨/Ⅰ型膠原復(fù)合支架的制備和性能檢測(cè) |
| 1.前言 |
| 2.材料與方法 |
| 3.結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 5.結(jié)論 |
| 6.參考文獻(xiàn) |
| 第二章 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)和鑒定 |
| 1.前言 |
| 2.材料與方法 |
| 3.結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 5.結(jié)論 |
| 6.參考文獻(xiàn) |
| 第三章 部分脫蛋白骨/Ⅰ型膠原復(fù)合支架的細(xì)胞相容性研究 |
| 1.引言 |
| 2.材料與方法 |
| 3.結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 5.結(jié)論 |
| 6.參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 綜述 羥基磷灰石表面改性作為組織工程骨支架的應(yīng)用優(yōu)勢(shì) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 致謝 |
（6）3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架的體內(nèi)成骨實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究?jī)?nèi)容與方法 |
| 1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟 |
| 2.1 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 2.2 細(xì)胞膜片的制備 |
| 2.3 3D打印多孔性復(fù)合骨支架 |
| 2.4 構(gòu)建細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印支架組織工程骨 |
| 2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 |
| 2.6 植入體外構(gòu)建的組織工程骨 |
| 2.7 植入前后主要觀(guān)察及檢測(cè)相關(guān)指標(biāo) |
| 3 質(zhì)量控制 |
| 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 5 技術(shù)路線(xiàn) |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 3D 打印復(fù)合 PVA 骨組織工程支架研究現(xiàn)狀 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 導(dǎo)師評(píng)閱表 |
（7）3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架體內(nèi)降解性能的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究?jī)?nèi)容與方法 |
| 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與儀器 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟 |
| 2.1 羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取、培養(yǎng)及成膜誘導(dǎo) |
| 2.2 制備復(fù)合的組織工程骨 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頜骨缺損模型制備、回植及取材 |
| 2.4 組織工程骨支架回植動(dòng)物體內(nèi)后的相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) |
| 3 質(zhì)量控制 |
| 4 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 5 技術(shù)路線(xiàn)圖 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 骨組織工程中3D打印支架材料降解性能的研究現(xiàn)狀 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 導(dǎo)師評(píng)閱表 |
（8）負(fù)載利福平GO/SF微球的組織工程骨支架制備及釋藥特性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 課題來(lái)源 |
| 1.2 選題意義及目的 |
| 1.3 植入型藥物緩釋系統(tǒng)與緩釋微球的研究現(xiàn)狀 |
| 1.3.1 植入型藥物緩釋載體材料 |
| 1.3.2 藥物負(fù)載方式 |
| 1.3.3 微球型藥物緩釋系統(tǒng)簡(jiǎn)介及特征 |
| 1.3.4 微球的制備方法 |
| 1.4 組織工程骨支架制備方式及材料的研究現(xiàn)狀 |
| 1.5 藥物緩釋微球與組織工程骨支架結(jié)合方式的研究現(xiàn)狀 |
| 1.6 論文主要研究?jī)?nèi)容 |
| 1.7 技術(shù)路線(xiàn) |
| 第2章 GO/SF藥物緩釋微球的制備及工藝參數(shù)優(yōu)化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)原料及儀器 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 油包水(W/O)單乳法制備GO/SF緩釋微球 |
| 2.3.2 GO/SF載藥緩釋微球電鏡觀(guān)察及粒徑測(cè)量 |
| 2.3.3 GO/SF載藥緩釋微球的載藥量及包封率測(cè)定 |
| 2.3.4 GO/SF載藥緩釋微球體外藥物緩釋實(shí)驗(yàn) |
| 2.3.5 單一因素水平試驗(yàn)優(yōu)化微球制備工藝參數(shù) |
| 2.3.6 混合水平正交試驗(yàn)優(yōu)化微球制備工藝參數(shù) |
| 2.4 試驗(yàn)結(jié)果分析 |
| 2.4.1 混合水平正交試驗(yàn)結(jié)果分析 |
| 2.4.2 微球形貌及粒徑的表征分析 |
| 2.4.3 最優(yōu)工藝參數(shù)組微球的體外藥物釋放行為分析 |
| 2.4.4 微球載體材料生物安全性分析 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第3章 支架復(fù)合材料的制備及特性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)原料與儀器 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 3.3 GO/PVA復(fù)合凝膠的制備及性能表征 |
| 3.3.1 GO/PVA復(fù)合凝膠的制備 |
| 3.3.2 GO/PVA復(fù)合凝膠生物安全性分析 |
| 3.3.3 GO/PVA復(fù)合凝膠SEM分析 |
| 3.3.4 GO/PVA復(fù)合凝膠XRD分析 |
| 3.3.5 GO/PVA復(fù)合凝膠FTIR分析 |
| 3.4 支架復(fù)合材料配比實(shí)驗(yàn)及復(fù)合材料性能表征 |
| 3.4.1 支架復(fù)合材料配比實(shí)驗(yàn) |
| 3.4.2 支架復(fù)合材料SEM分析 |
| 3.4.3 支架復(fù)合材料力學(xué)性能分析 |
| 3.4.4 支架復(fù)合材料生物安全性分析 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第4章 抗結(jié)核組織工程骨支架制備及釋藥特性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)原料與儀器 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 4.3 擠出型3D打印設(shè)備簡(jiǎn)介 |
| 4.3.1 硬件組成 |
| 4.3.2 軟件 |
| 4.4 組織工程骨支架的制備 |
| 4.5 成型支架的結(jié)構(gòu)分析 |
| 4.5.1 成型支架的宏、微觀(guān)結(jié)構(gòu) |
| 4.5.2 成型支架孔隙率測(cè)定 |
| 4.6 成型支架體外降解性能分析 |
| 4.7 成型支架體外藥物緩釋行為分析 |
| 4.7.1 緩釋過(guò)程中的藥物釋放率分析 |
| 4.7.2 緩釋過(guò)程中的降解行為分析 |
| 4.8 本章小結(jié) |
| 第5章 總結(jié)與展望 |
| 5.1 總結(jié) |
| 5.2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士期間發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（9）低頻電磁場(chǎng)聯(lián)合VEGF干預(yù)的間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合PCL/HA支架修復(fù)大鼠顱骨缺損的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 磁場(chǎng)和 VEGF 對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨成血管的影響 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 組織工程骨的體外構(gòu)建 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四部分 組織工程骨修復(fù)大鼠顱骨缺損的體內(nèi)應(yīng)用 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 總結(jié) |
| 綜述 電磁場(chǎng)在骨組織工程中的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄一 英文縮略詞表 |
| 附錄二 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄 |
| 致謝 |
（10）灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一部分 可降解連通多孔生物陶瓷人工骨材料的制備及性能表征 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑 |
| 1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 多孔β-TCP支架材料的設(shè)計(jì)及制備 |
| 2.2 多孔β-TCP支架材料特性的檢測(cè) |
| 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 多孔β-TCP支架材料的微觀(guān)形貌結(jié)果 |
| 3.2 多孔β-TCP支架材料的元素分析結(jié)果 |
| 3.3 多孔β-TCP支架材料接觸角測(cè)定結(jié)果 |
| 3.4 多孔β-TCP支架材料的吸水率測(cè)定結(jié)果 |
| 3.5 多孔β-TCP支架材料的孔隙率測(cè)定結(jié)果 |
| 3.6 多孔β-TCP支架材料的生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取、培養(yǎng)、傳代及鑒定 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的提取及培養(yǎng) |
| 2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的純化及傳代 |
| 2.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞提取、培養(yǎng) |
| 3.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定 |
| 4 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 灌注型生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)與構(gòu)建及灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響 |
| 第一節(jié) 灌注型生物反應(yīng)器的設(shè)計(jì)與構(gòu)建 |
| 第二節(jié) 灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響 |
| 1.實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)材料及試劑 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的接種及單純?nèi)S動(dòng)態(tài)灌注培養(yǎng) |
| 2.2 細(xì)胞增殖檢測(cè) |
| 2.3 細(xì)胞形態(tài)檢測(cè) |
| 2.4 細(xì)胞存活率檢測(cè) |
| 2.5 細(xì)胞的堿性磷酸酶活力檢測(cè) |
| 2.6 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞成骨分化 |
| 2.7 蛋白印跡(Western-Blot)檢測(cè)細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白表達(dá) |
| 2.8 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 細(xì)胞增殖檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.2 細(xì)胞形態(tài)觀(guān)察結(jié)果 |
| 3.3 細(xì)胞存活率結(jié)果 |
| 3.4 細(xì)胞的堿性磷酸酶活性結(jié)果 |
| 3.5 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞的成骨分化結(jié)果 |
| 3.6 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)細(xì)胞的成骨相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文結(jié)論 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在研期間學(xué)術(shù)成果 |
| 致謝 |
四、組織工程骨的研究及應(yīng)用現(xiàn)狀（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]載多聯(lián)抗結(jié)核藥物同軸組織工程骨支架的制備及性能研究[D]. 張旭婧. 新疆大學(xué), 2021
- [2]慢病毒介導(dǎo)沉默P75NTR聯(lián)合NGF過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)染BMSCs復(fù)合脫鈣骨基質(zhì)異位成骨的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 陳俊毅. 桂林醫(yī)學(xué)院, 2021(01)
- [3]藻酸鹽凝膠細(xì)胞微球與雙相磷酸鈣陶瓷復(fù)合修復(fù)骨缺損的研究[D]. 練勝. 南昌大學(xué), 2021(01)
- [4]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞膜片復(fù)合3D打印馬鹿角粉/絲素蛋白/聚乙烯醇支架的體內(nèi)成骨[J]. 劉小元,李蕾,張凱,李君,韓祥禎,何惠宇. 中國(guó)組織工程研究, 2021(34)
- [5]部分脫蛋白骨和Ⅰ型膠原制備新型生物工程骨支架研究[D]. 侯建飛. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2021
- [6]3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架的體內(nèi)成骨實(shí)驗(yàn)研究[D]. 劉小元. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2021(09)
- [7]3D打印馬鹿角粉/SF/PVA支架體內(nèi)降解性能的研究[D]. 張凱. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2021(09)
- [8]負(fù)載利福平GO/SF微球的組織工程骨支架制備及釋藥特性研究[D]. 熊瑩. 新疆大學(xué), 2020(07)
- [9]低頻電磁場(chǎng)聯(lián)合VEGF干預(yù)的間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合PCL/HA支架修復(fù)大鼠顱骨缺損的研究[D]. 陳靖元. 華中科技大學(xué), 2020(01)
- [10]灌注型生物反應(yīng)器中流速對(duì)β-TCP內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的研究[D]. 封國(guó)超. 甘肅中醫(yī)藥大學(xué), 2020(10)