一、水稻卷葉性狀與理想株形的關(guān)系（論文文獻(xiàn)綜述）
李蓓,莫?jiǎng)P琴,馬銀花[1]（2021）在《水稻卷葉基因研究進(jìn)展》文中研究說明水稻是禾本科單子葉C3植物,是我國(guó)主要的糧食作物之一。葉片是水稻進(jìn)行光合作用、呼吸、蒸騰等活動(dòng)的重要場(chǎng)所,是決定稻米產(chǎn)量的重要的工藝性質(zhì),而卷葉是水稻的一種特殊性質(zhì)。研究顯示,水稻葉片的適度卷曲對(duì)葉片挺直有利,改善了披捶狀態(tài),增加了光合作用,提高了水稻的產(chǎn)量。該文綜述了水稻葉片卷曲的原因,闡述了水稻葉片卷曲的細(xì)胞學(xué)形成機(jī)制及相關(guān)基因的分子機(jī)制,以期為水稻葉片性狀的研究與應(yīng)用提供參考。
安文靜[2]（2020）在《水稻OsRhoGAP2在種子萌發(fā)和葉片發(fā)育中的功能鑒定》文中指出水稻是全球主要的糧食作物,利用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定水稻基因功能對(duì)揭示植株生長(zhǎng)發(fā)育過程中的分子調(diào)控機(jī)制意義重大。本實(shí)驗(yàn)室前期從水稻幼穗c DNA文庫(kù)中分離了一個(gè)Rho GTP酶激活蛋白編碼基因,命名為OsRhoGAP2,并利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建了OsRhoGAP2過表達(dá)水稻,同時(shí)前期研究顯示,OsRhoGAP2基因的啟動(dòng)子可響應(yīng)非生物脅迫和激素信號(hào),但具體的生物學(xué)功能尚不清楚。為鑒定OsRhoGAP2在水稻生長(zhǎng)發(fā)育過程中的功能,本文以O(shè)sRhoGAP2過表達(dá)水稻與利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建的OsRhoGAP2編輯水稻為實(shí)驗(yàn)材料展開了研究。對(duì)WT和OsRhoGAP2過表達(dá)水稻（T5-1、T5-5、T5-6）葉片表型觀察發(fā)現(xiàn),二者前期葉片表型無差異,在水稻抽穗后期,轉(zhuǎn)基因水稻葉片正卷,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,該時(shí)期WT與3個(gè)過表達(dá)株系的劍葉卷曲度分別為10.86%、27.38%、35.36%和31.07%,劍葉直立指數(shù)分別為95.53%、99.34%、100%和100%,過表達(dá)株系的劍葉卷曲度與葉片治理指數(shù)均極顯著高于WT。水稻抽穗期劍葉石蠟切片統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因水稻劍葉泡狀細(xì)胞面積極顯著小于WT,葉片泡狀細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果與石蠟切片統(tǒng)計(jì)結(jié)果一致,即轉(zhuǎn)基因水稻泡狀細(xì)胞染色面積比WT的小。對(duì)抽穗期水稻葉片的生理指標(biāo)和光合作用相關(guān)指數(shù)進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn),OsRhoGAP2過表達(dá)水稻劍葉的葉綠素水平和凈光合速率顯著高于WT,其氣孔導(dǎo)度與蒸騰速率則極顯著低于WT。說明OsRhoGAP2過表達(dá)可能通過影響水稻葉片泡狀細(xì)胞的大小來改變?nèi)~片形態(tài),進(jìn)而影響水稻的光合作用。對(duì)WT和OsRhoGAP2過表達(dá)水稻種子的萌發(fā)率檢測(cè)發(fā)現(xiàn),WT與3個(gè)過表達(dá)株系的種子萌發(fā)率分別為84.5%、62%、39.5%和28%,α-淀粉酶含量分別為13.82、10.82、9.85和9.66 mg/g·min,且過表達(dá)水稻的種子萌發(fā)率與α-淀粉酶含量均極顯著低于WT,說明OsRhoGAP2過表達(dá)通過下調(diào)α-淀粉酶活性抑制水稻種子萌發(fā)。用1000mg/L GA處理后,能在一定程度上緩解這種抑制。采用液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)內(nèi)源GA含量,結(jié)果顯示,過表達(dá)水稻種子內(nèi)源活性GA1、GA3與GA7的含量均顯著低于WT。q RT-RCR結(jié)果顯示,過表達(dá)水稻種子中的GA合成基因Os CPS1、Os KS1和Os KAO的相對(duì)表達(dá)量低于WT,GA滅活基因Os GA2ox6和Os GA2ox8的相對(duì)表達(dá)量高于WT,4種α-淀粉酶合成基因的相對(duì)表達(dá)量低于WT。說明OsRhoGAP2過表達(dá)降低水稻種子萌發(fā)率的原因可能與通過調(diào)控GA合成和滅活基因的表達(dá),抑制活性GA生成,從而下調(diào)α-淀粉酶活性有關(guān)。對(duì)成熟期WT和3個(gè)過表達(dá)株系的株高進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)現(xiàn)二者的株高分別為92.12、86.5、86.4和89.22 cm,且過表達(dá)水稻的株高極顯著低于WT。進(jìn)一步對(duì)節(jié)間及穗長(zhǎng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),過表達(dá)水稻穗長(zhǎng)與WT無明顯差異,而其第一、二、三節(jié)間長(zhǎng)度短于WT,差異極顯著達(dá)水平。節(jié)間石蠟切片統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,過表達(dá)水稻的節(jié)間細(xì)胞長(zhǎng)度小于WT,單位面積節(jié)間細(xì)胞數(shù)目多于WT,且差異均達(dá)到極顯著水平。提示OsRhoGAP2過表達(dá)通過抑制節(jié)間細(xì)胞伸長(zhǎng),導(dǎo)致過表達(dá)水稻植株的矮化。為采用功能缺失策略鑒定OsRhoGAP2基因的功能,本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了OsRhoGAP2基因編輯水稻,經(jīng)篩選鑒定共獲得兩種純合突變體（株系1和16）。序列比對(duì)顯示,二者在靶位點(diǎn)分別缺失堿基“TC”和“T”,預(yù)期生成的分別是含149與60個(gè)氨基酸的截短蛋白,均沒有典型的RhoGAP結(jié)構(gòu)域。株系1中突變的OsRhoGAP2與WT的CRIB基序僅有3個(gè)氨基酸匹配,株系16中,突變的OsRhoGAP2對(duì)應(yīng)CRIB基序部分完全缺失。水稻抽穗期的葉片與穎殼掃描電鏡結(jié)果顯示,株系1的表面缺乏表皮毛,而株系16與WT表型相似。劍葉光合作用指標(biāo)檢測(cè)顯示,2種突變體的凈光合速率、氣孔導(dǎo)度均顯著高于WT。說明OsRhoGAP2基因缺失提高了水稻的光合作用水平,并且株系1出現(xiàn)的光葉水稻表型提示,該基因的敲除可能還影響了表皮毛的發(fā)育過程。本研究以O(shè)sRhoGAP2過表達(dá)水稻為實(shí)驗(yàn)材料,對(duì)OsRhoGAP2基因在植株生長(zhǎng)發(fā)育過程中的生物功能進(jìn)行鑒定,發(fā)現(xiàn)該基因功能涉及細(xì)胞生長(zhǎng)、種子萌發(fā)、光合作用以及葉片形態(tài)等方面的調(diào)控,且與GA信號(hào)通路相關(guān)。另一方面,本文還構(gòu)建了OsRhoGAP2基因敲除水稻,發(fā)現(xiàn)該基因敲除后不但影響水稻葉片的光合作用,還涉及到表皮毛的發(fā)育。這為后續(xù)探究OsRhoGAP2基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)奠定基礎(chǔ),也為揭示植物RhoGAP基因的功能提供新見解。
史靈敏[3]（2017）在《花生卷葉突變體的遺傳分析及相關(guān)基因克隆研究》文中研究表明花生是世界上最重要的油料作物和經(jīng)濟(jì)作物之一,提高花生產(chǎn)量具有重要的意義。葉片是花生主要的光合作用器官,葉片形態(tài)是花生最重要的農(nóng)藝性狀之一。葉片形態(tài)作為株型育種關(guān)注的重點(diǎn),其改變會(huì)對(duì)花生的光合作用和抗逆性等生理功能產(chǎn)生影響,進(jìn)而影響到花生的生長(zhǎng)發(fā)育乃至產(chǎn)量。研究表明,葉片的適度卷曲有利于植株葉片保持直立不披垂,提高個(gè)體和群體中下部的透光率,增加群體光合面積,提高光能利用率,可以為產(chǎn)量的提高奠定良好的基礎(chǔ),因此研究與葉片卷曲相關(guān)的基因,對(duì)于花生理想株型育種、高產(chǎn)育種及品種改良具有重要意義。本研究以60Co-γ輻射花生品種“豐花1號(hào)”（FH1）干種子獲得的一個(gè)穩(wěn)定遺傳的上卷葉突變體rl1為材料,從遺傳學(xué)、細(xì)胞學(xué)及生理生化方面分析了該突變體的特性,并從轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了差異基因篩選和初步的功能分析。主要結(jié)果如下:1.以rl1為母本,與FH1進(jìn)行雜交,F1植株全部為半卷,F2分離后代中卷葉、半卷葉和正常葉植株的分離比接近1:2:1的遺傳分離比,說明卷葉性狀可能是由一個(gè)不完全顯性核基因控制。2.rl1整個(gè)生育期都表現(xiàn)為極度內(nèi)卷,葉片變窄,植株矮小緊湊,除葉片發(fā)生卷曲之外,葉柄、果針、花柄和根均出現(xiàn)了不同程度的彎曲;對(duì)rl1葉片卷曲度調(diào)查發(fā)現(xiàn),rl1主莖和側(cè)莖的頂葉、倒二葉、倒三葉的卷曲度依次降低;雜種F1代的表型介于FH1和rl1之間。3.通過對(duì)rl1和FH1植株形態(tài)比較發(fā)現(xiàn),rl1株高和莖粗顯著低于FH1;產(chǎn)量性狀統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)rl1的出仁率、飽果率略高于FH1,百仁重、百果重和平均單株產(chǎn)量顯著低于FH1。4.對(duì)rl1、F1代和FH1進(jìn)行石蠟切片,rl1柵欄組織細(xì)胞空隙較大,貯水組織細(xì)胞疏松大小不一,排列凹凸不平,柵貯比最小,葉脈排列混亂,細(xì)脈稠密;rl1和F1代葉柄橫切面端口處的兩個(gè)大維管束附近出現(xiàn)兩個(gè)小維管束,并沿著葉柄彎曲的方向交替消失,而FH1并未出現(xiàn)這種現(xiàn)象;rl1的果針橫切面中維管束大小不均一,而且果針彎曲處兩側(cè)的維管束大小存在差異;rl1的莖橫切面中維管束最不發(fā)達(dá),但根橫切面沒有明顯差異。5.掃面電鏡觀察發(fā)現(xiàn),FH1和rl1葉片上表皮均有蠟質(zhì)覆蓋,而下表皮沒有蠟質(zhì)。FH1的蠟質(zhì)厚而稠密呈長(zhǎng)條狀,rl1的蠟質(zhì)明顯變短呈垂直片狀。FH1下表皮氣孔的密度和表皮毛的密度顯著大于rl1的密度,表皮毛的長(zhǎng)度和寬度略大于rl1,而rl1的氣孔開度略大于FH1。6.葉片葉綠素含量分析發(fā)現(xiàn),rl1植株的葉綠素a、葉綠素b、葉綠素a+b以及類胡蘿卜素的含量顯著高于FH1,葉綠素a/b含量顯著低于FH1。7.基于本實(shí)驗(yàn)室對(duì)rl1和FH1的根和葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,在差異基因中篩選到的轉(zhuǎn)錄本c95764在FH1中的表達(dá)量顯著高于rl1,而且不編碼任何蛋白。將c95764與花生基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中的基因進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)c95764位于Aradu.A03染色體的5519366至5519900處,且在整個(gè)花生基因組中還有多個(gè)相似性在90%以上的序列片段,位于不同染色體的不同位置。通過比對(duì)花生all CDS數(shù)據(jù)庫(kù),發(fā)現(xiàn)c957644與花生B染色體組中的Araip.6T6S8基因相似性達(dá)90.48%,推測(cè)兩者之間可能存在某種關(guān)系,因此選取c95764轉(zhuǎn)錄本做進(jìn)一步研究,并將其命名為c95764基因。8.克隆c95764基因并構(gòu)建正義和反義植物表達(dá)載體,用花生下胚軸轉(zhuǎn)化法分別轉(zhuǎn)化rl1和FH1。經(jīng)卡那霉素抗性篩選得到過表達(dá)抗性植株16株,反義表達(dá)抗性植株20株。經(jīng)PCR分子檢測(cè)后,篩選到過表達(dá)陽性植株1株,反義陽性植株0株。觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因花生部分恢復(fù)正常表型。
李戰(zhàn)朋,吳金霞,張治國(guó)[4]（2016）在《一個(gè)水稻卷葉突變體zw209的遺傳分析與精細(xì)定位》文中研究表明葉片是植物光合作用的主要場(chǎng)所,優(yōu)良的葉片形態(tài)有利于塑造理想株型,提高光合效率。為了研究葉片形態(tài)建成的分子機(jī)制,從水稻T-DNA突變體庫(kù)中篩選到1個(gè)葉片極度卷曲的突變體zw209,突變體有2個(gè)顯著特征:1突變體泡狀細(xì)胞數(shù)量和面積均變小;2突變體的葉綠素含量較高,具有較高的光合效率。遺傳分析表明,zw209的突變性狀由一對(duì)隱性核基因控制。通過圖位克隆,將基因（ZW209）精細(xì)定位到9號(hào)染色體長(zhǎng)臂上,位于In Del136和In Del140之間的92.3 kb區(qū)域內(nèi)。在這個(gè)區(qū)域內(nèi),尚未見報(bào)告已克隆的卷葉基因,很可能是一個(gè)新的基因位點(diǎn)。上述結(jié)果明確了突變體的表型特征及遺傳規(guī)律,為克隆ZW209基因和揭示其作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
李戰(zhàn)朋[5]（2016）在《水稻卷葉突變體zw235的基因克隆與功能分析》文中研究表明葉片是植物光合作用的主要場(chǎng)所,優(yōu)良的葉片形態(tài)有利于塑造理想株型,提高光合效率。植物葉片立體結(jié)構(gòu)對(duì)光合作用的發(fā)揮至關(guān)重要,包括光合作用的光吸收、CO2固定和氣體交換等過程。適宜的葉型是超級(jí)稻一個(gè)重要的理想株型特征。葉片微卷可以使葉片保持直立,有助于增加透光率和光飽和點(diǎn),且不影響光補(bǔ)償點(diǎn),植株整體的光合作用效率得到提高。另外,適當(dāng)?shù)娜~片卷曲能夠減少太陽對(duì)葉片的輻射,降低葉片損傷,減弱缺水條件下葉片的蒸騰作用,減少植株體內(nèi)水分流失,提高植株的抗逆性,增加光合產(chǎn)物積累,有助于提高作物產(chǎn)量。因此,改良葉片形態(tài)一直是育種學(xué)家所關(guān)注的焦點(diǎn)。為了研究葉片形態(tài)建成的分子機(jī)制,從水稻T-DNA突變體庫(kù)中篩選到1個(gè)葉片卷曲的突變體zw235,突變體zw235植株與野生型相比,其株型緊湊,葉片挺直,葉片兩邊緣向內(nèi)卷曲,且伴有矮桿,葉色淺綠等特征,其葉片葉綠素含量與光合效率均顯著低于野生型。水稻葉片石蠟切片觀察,發(fā)現(xiàn)突變體zw235葉片中突變體泡狀細(xì)胞數(shù)量和面積均變小。遺傳分析表明,zw235的突變性狀由一對(duì)隱性核基因控制。通過構(gòu)建F2定位群體,運(yùn)用圖位克隆技術(shù),將基因（ZW235）精細(xì)定位到5號(hào)染色體上一個(gè)長(zhǎng)約23.5 kb的區(qū)間內(nèi),對(duì)候選基因的測(cè)序發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)基因的CDS序列中發(fā)生單堿基突變,導(dǎo)致基因（ZW235）表達(dá)提前終止,功能缺失。通過突變基因ZW235的互補(bǔ)驗(yàn)證與CRISPR-Cas9驗(yàn)證,證明植株葉片正卷的表型確實(shí)由ZW235功能缺失導(dǎo)致。構(gòu)建ZW235-GFP融合蛋白載體并進(jìn)行水稻原生質(zhì)體亞細(xì)胞定位表明ZW235為核定位蛋白。根據(jù)突變基因酵母雙雜交和單雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)查證,初步得出突變基因ZW235通過與KNOX家族Ⅰ類基因OSH6與OSH71表達(dá)蛋白互作,并結(jié)合YAB1基因啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合元件,抑制基因YAB1的表達(dá),進(jìn)而使葉片中泡狀細(xì)胞數(shù)量和面積發(fā)生變化,導(dǎo)致突變體葉片卷曲。本研究明確了突變體zw235的表型特征及遺傳規(guī)律,分離并驗(yàn)證了突變基因ZW235,初步闡釋了該基因的功能,為進(jìn)一步研究水稻葉片發(fā)育與獲得水稻理想株型奠定了基礎(chǔ)。
張俊杰[6]（2015）在《水稻卷葉突變體sll2的遺傳分析及泡狀細(xì)胞發(fā)育調(diào)控研究》文中指出泡狀細(xì)胞是大的,薄壁并且高度液泡化的細(xì)胞,與應(yīng)答干旱和高溫時(shí)葉片卷曲有關(guān)。同時(shí),卷葉是水稻育種中重要的農(nóng)藝性狀。為了了解控制卷葉的分子機(jī)制,本文報(bào)道了一個(gè)卷葉突變體shallot-like 2（sll2）。該突變體從六葉期開始葉片向近軸面極度內(nèi)卷,其光合效率增高,株高和分蘗數(shù)減少。組織學(xué)分析表明,泡狀細(xì)胞皺縮導(dǎo)致內(nèi)卷葉。該突變體是隱性的,回復(fù)突變率9%。卷葉表型是由T-DNA插入引起的。利用TAIL-PCR進(jìn)行位點(diǎn)克隆表明T-DNA插入在LOCOs07g38664的啟動(dòng)子區(qū),出乎意料的是,LOCOs07g38664被35S啟動(dòng)子加強(qiáng)表達(dá)并不是引起卷葉表型的原因。此外,增強(qiáng)子可以長(zhǎng)距離的發(fā)揮作用,包括上調(diào)了幾個(gè)泡狀細(xì)胞相關(guān)基因·在sll2oul1雙突變體中,sll2抑制了oul1的外卷葉表型,我們推測(cè)sll2的卷葉表型可能是多基因綜合效應(yīng),表明泡狀細(xì)胞發(fā)育存在一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。本文主要研究結(jié)果如下:1.與野生型Kitaake相比,突變體的育性良好,種子正常,但是株高降低,分蘗數(shù)減少,葉片較窄并且葉色更加深綠。經(jīng)測(cè)量發(fā)現(xiàn)sll2葉綠素含量和類胡蘿卜素含量顯著提高,光合效率增加。蒸騰速率略有減少,但是差異不顯著。為了研究結(jié)構(gòu)上究竟如何變化引起的內(nèi)卷葉,進(jìn)行組織學(xué)切片分析,發(fā)現(xiàn)突變體沿著葉片近軸面,泡狀細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的萎縮,且泡狀細(xì)胞的面積減少到野生型的60%左右。這導(dǎo)致葉片背面（遠(yuǎn)軸面）和腹面（近軸面）發(fā)育不協(xié)調(diào),從而使葉片向內(nèi)卷成蔥管狀。2.遺傳分析顯示sll2由單個(gè)隱性基因控制,突變體的蔥卷葉表型是由T-DNA插入引起的.采用TAIL-PCR（熱不對(duì)稱性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）方法,我們得到了 T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列,并且發(fā)現(xiàn)T-DNA插入在LOCOs07g38664的5’UTR上游126bp處,T-DNA在與水稻基因組重組中造成左臂（left border）和35S啟動(dòng)子上5’端一個(gè)增強(qiáng)子（enhancer）的缺失。我們檢測(cè)到下游基因LOCOs07g38664表達(dá)量在突變體中顯著性上調(diào)近13倍。該基因含有3個(gè)外元,2個(gè)內(nèi)元,編碼未知功能蛋白。但是構(gòu)建過表達(dá)（轉(zhuǎn)入野生型愈傷組織）和干擾載體（轉(zhuǎn)入突變體愈傷組織）轉(zhuǎn)化后得到的轉(zhuǎn)基因植株與受體表型相同。因此LOCOs07g38664基因不是目的基因。為了進(jìn)一步驗(yàn)證TAIL-PCR的結(jié)果、尋找目的基因,利用sll2與秈稻93-11配組合得到的F2代群體中459個(gè)極端內(nèi)卷葉個(gè)體,將這個(gè)基因定位在第7染色體長(zhǎng)臂上28.6-kb的范圍內(nèi),其中包含了T-DNA插入位點(diǎn)和10個(gè)ORF（開發(fā)閱讀框）,這10個(gè)基因中沒有與已知的控制葉形相關(guān)的基因,但是包含了在突變體中上調(diào)表達(dá)的LOCOs07g38664。對(duì)定位區(qū)間內(nèi)序列進(jìn)行測(cè)序后沒有發(fā)現(xiàn)野生型和sll2之間存在序列差異。研究表明,35S啟動(dòng)子由2個(gè)串聯(lián)重復(fù)的增強(qiáng)子構(gòu)成,它們不僅可以啟動(dòng)下游基因的表達(dá),而且會(huì)影響到更遠(yuǎn)距離的基因表達(dá)。因此我們推測(cè)由于T-DNA上剩余一個(gè)完整35S增強(qiáng)子的存在,導(dǎo)致此增強(qiáng)子會(huì)影響到附近的基因,甚至是定位區(qū)間外的基因。于是進(jìn)行了數(shù)字基因表達(dá)譜分析試圖找到表達(dá)水平發(fā)生變化的基因。有5個(gè)基因,包括LOCOs07g38664,在sll2中上調(diào)了 10倍以上,然而沒有發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致卷葉的基因。3.經(jīng)過兩年的觀察我們發(fā)現(xiàn)在純合的突變體后代中有9%的回復(fù)突變體sll2-Rev。回復(fù)突變體的葉片像野生型一樣是平展的,LRI與WT類似。組織學(xué)切片表明回復(fù)突變體;sll2-Rev中泡狀細(xì)胞回復(fù)成正常大小,泡狀細(xì)胞面積也與野生型中相當(dāng)。此外,其它的農(nóng)藝性狀如株高,分蘗數(shù),千粒重,葉片寬度都回復(fù)到了與野生型Kitaake相當(dāng)?shù)乃健Ｔ诨貜?fù)突變體中檢測(cè)到了T-DNA插入的存在,并且T-DNA插入位置沒有發(fā)生變化。所以推測(cè)可能是T-DNA在特定情況下可以引起目的基因表達(dá)從而產(chǎn)生卷葉表型。但當(dāng)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化后,增強(qiáng)子不能調(diào)控,SLL2,導(dǎo)致回復(fù)突變體sll2-Rev恢復(fù)葉片平展。4.為了研究sll2與oul1外卷葉突變體（該突變體的泡狀細(xì)胞數(shù)量增多和尺寸變大）之間的關(guān)系,構(gòu)建了雙突變體sll2oul1。突變體oul1的外卷葉表型是由于Roc5功能缺失引起的。Roc5是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,編碼一個(gè)擬南芥GL2的同源產(chǎn)物,GL2編碼產(chǎn)物為HD-Zip Ⅳ蛋白家族的一個(gè)成員,是一個(gè)負(fù)調(diào)控泡狀細(xì)胞發(fā)育的基因。在sll2oul1雙突變體中,外卷葉的表型受到了抑制,雙突變體表現(xiàn)明顯的內(nèi)卷葉,組織學(xué)切片顯示,雙突變體中泡狀細(xì)胞的面積明顯減少。因此認(rèn)為,SLL對(duì)Roc5具有上位性。并且在雙突變體sll2oul1中,sll2與oul1互相補(bǔ)足了對(duì)方的劣勢(shì),雙突變體sll2oul1的株高,分蘗較sll2顯著提高,而葉色和結(jié)實(shí)率都較oul1顯著增加。這個(gè)結(jié)果表明,構(gòu)建形態(tài)正常,適度卷葉的理想株型可以通過結(jié)合不同卷葉突變體的優(yōu)勢(shì)以及調(diào)控不同的卷葉相關(guān)的基因來實(shí)現(xiàn)。前人的研究表明PFL很可能是Roc5作用的下游靶基因,因此也檢測(cè)了PFL的表達(dá),結(jié)果顯示,Roc5和PFL在sll2中的表達(dá)量均上調(diào)。有趣的是PFL的表達(dá)水平在雙突變體sll2oul1中下降到了與野生型相當(dāng)?shù)乃?。因?SLL2負(fù)調(diào)控Roc5,相應(yīng)地負(fù)調(diào)控PFL。5.SLL1編碼一個(gè)KANADI轉(zhuǎn)錄因子,sll1-l突變體由于遠(yuǎn)軸面厚壁細(xì)胞發(fā)育存在缺陷,導(dǎo)致內(nèi)卷葉表型。與內(nèi)卷葉突變體sll1-1構(gòu)建了sll1-1sll2雙突變體,可以觀察到sll1-1sl2雙突變體表現(xiàn)為內(nèi)卷葉,sll1-1sll2雙突變體的卷葉指數(shù)（LRI）介于sll1-1和sll2二者之間。除了在葉片彎曲處缺少厚壁細(xì)胞以外,近軸面的泡狀細(xì)胞也數(shù)量減少面積變小。此外,SLL1基因在sll2中以及回復(fù)突變體sll2-Rev中表達(dá)水平只有極微弱的變化,由這些結(jié)果推斷,SLL1和SLL2在調(diào)控泡狀細(xì)胞發(fā)育方面可能是各自獨(dú)立地發(fā)生作用.
朱秋強(qiáng)[7]（2015）在《轉(zhuǎn)基因水稻卷葉突變體表達(dá)譜及蛋白組差異分析》文中指出葉片作為植物光合作用的主要器官,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過程中扮演著重要的角色。在水稻中,葉片的形態(tài)對(duì)于水稻的生長(zhǎng)、株型和結(jié)實(shí)率都有著直接或間接的影響。水稻是世界上最重要的糧食作物之一,尤其對(duì)中國(guó)而言,由于耕地面積有限和人口壓力的矛盾,提高水稻單產(chǎn)就顯得尤為迫切。葉片適度卷曲是水稻理想株型的的一項(xiàng)重要形態(tài)指標(biāo)。因此,探明水稻葉片卷曲的分子機(jī)制是人們了解水稻葉片發(fā)育機(jī)制以及最終實(shí)現(xiàn)通過分子育種改良水稻株型的一項(xiàng)重要的基礎(chǔ)工作。本研究以轉(zhuǎn)基因水稻穩(wěn)定高代中發(fā)現(xiàn)的葉片外卷突變體為材料,進(jìn)行了葉片形態(tài)分析、遺傳分析,以及基于雙向電泳技術(shù)的蛋白組差異分析和基于高通量測(cè)序的數(shù)字化基因表達(dá)譜分析等相關(guān)研究,探索水稻葉片卷曲的分子機(jī)制。主要結(jié)果如下：1.本研究中的水稻卷葉突變體為葉片外卷,葉片卷曲成半筒狀,從苗期第四葉開始出現(xiàn)卷葉性狀。平展的水稻葉片容易導(dǎo)致披垂,而卷葉能保持葉片直立。造成轉(zhuǎn)基因水稻突變體葉片外卷的細(xì)胞學(xué)機(jī)制是葉片上皮層泡狀細(xì)胞數(shù)量增加。2.卷葉突變體的葉片葉綠素含量降低,進(jìn)而導(dǎo)致葉片光合效率降低,最終造成株高、穗長(zhǎng)、結(jié)實(shí)率和千粒重等重要農(nóng)藝性狀指標(biāo)低于葉片正常植株。同時(shí),卷葉突變也影響了水稻籽粒的品質(zhì),造成水稻籽粒氨基酸含量降低。3.遺傳分析結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因卷葉突變體（Rolled）/水稻品種明恢86栽培稻（WT）和WT/Rolled兩種雜交組合的F2代群體葉型平展葉：卷葉的數(shù)量比都符合3：1的比率,判定外卷性狀是隱性單基因突變引起的。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析外源基因3a-HSD在卷葉突變體中的拷貝數(shù),結(jié)果顯示外源基因?yàn)閱慰截?。插入片段與突變性狀的共分離檢測(cè)結(jié)果確認(rèn)T-DNA與卷葉性狀共分離,因此,可以推定卷葉突變是由于T-DNA插入引起的。T-DNA側(cè)翼序列分析結(jié)果表明,T-DNA插入位點(diǎn)位于水稻9號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的7504113bp處,處于非基因區(qū)。距離插入位點(diǎn)最近的基因是下游的Os09g0293400,插入位點(diǎn)前后100kb以內(nèi)共有7個(gè)基因,這些基因都是功能未知的基因。根據(jù)進(jìn)一步分析結(jié)果推測(cè),可能與卷葉突變相關(guān)的基因?yàn)榫幋a一個(gè)泛素結(jié)合酶（E2）蛋白的Os09g0293400基因,編碼一個(gè)含有類蛋白激酶結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)的Os09g0293500基因和編碼半乳糖氧化酶的Os09g0292900基因。4.提取明恢86栽培稻（WT）、轉(zhuǎn)基因水稻穩(wěn)定高代平展葉植株（Unrolled）和轉(zhuǎn)基因卷葉突變體（Rolled）不同時(shí)期的葉片總蛋白進(jìn)行雙向電泳分析,經(jīng)過雙向電泳凝膠圖譜分析發(fā)現(xiàn)共181個(gè)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)。進(jìn)一步比較分析不同時(shí)期不同材料間的差異表達(dá)蛋白,排除外源基因影響產(chǎn)生的差異表達(dá)蛋白,得到34個(gè)與卷葉突變相關(guān)的差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。對(duì)差異蛋白進(jìn)行MS/MS鑒定,最終鑒定成功28個(gè)蛋白。差異蛋白包括16個(gè)核酮糖二磷酸羧化酶大亞基家族的蛋白,光合作用相關(guān)的轉(zhuǎn)酮醇酶1和葉綠體蛋白丙酮酸磷酸二激酶1,碳水化合物代謝相關(guān)的己糖磷酸變位酶和葡萄糖醛酸酶,2個(gè)葉綠體中的ATP合酶亞基共有23個(gè)與能量代謝相關(guān)的蛋白；此外還有蛋白折疊相關(guān)的蛋白肽基脯氨酸順反異構(gòu)酶蛋白,氨基酸代謝相關(guān)的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶,蛋白質(zhì)合成相關(guān)的延伸因子,蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的葉綠體外膜蛋白以及酯類分解代謝相關(guān)的磷酸肌醇磷脂酶C。能量代謝相關(guān)蛋白在卷葉突變體（Rolled）中有5個(gè)下調(diào)表達(dá),9個(gè)上調(diào)表達(dá),2個(gè)不在Rolled中表達(dá),3個(gè)只在Rolled中表達(dá)。其他差異蛋白質(zhì)下調(diào)表達(dá)的有8個(gè),只在Rolled中表達(dá)的1個(gè)。其中,與插入位點(diǎn)附近基因相關(guān)的肽基脯氨酰異構(gòu)酶和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶在卷葉突變體中的的下調(diào)表達(dá),與水稻卷葉性狀相關(guān)的有4個(gè)下調(diào)表達(dá)的蛋白,9個(gè)上調(diào)表達(dá)的蛋白以及4個(gè)只在Rolled中表達(dá)的蛋白。5.在分蘗期分別選取WT、Rolled和Unrolled三個(gè)材料的新長(zhǎng)出來的幼嫩葉片,提取總RNA進(jìn)行基于illumina HiSeq2000技術(shù)測(cè)序平臺(tái)的高通量DGE測(cè)序分析。首先對(duì)測(cè)序獲得的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行一系列質(zhì)量評(píng)估,確保原始數(shù)據(jù)質(zhì)量可以用于后續(xù)分析。然后進(jìn)行參考序列比對(duì)分析、基因表達(dá)水平分析和RNA-seq整體質(zhì)量評(píng)估,確?；虿町惐磉_(dá)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。經(jīng)過差異表達(dá)基因篩選和聚類分析發(fā)現(xiàn),WT和Rolled之間的基因表達(dá)差異比較小,二者與Unrolled之間的差異比較大,說明外源基因?qū)λ救~片的生長(zhǎng)發(fā)育影響比較大,而卷葉突變的影響比較小,差異基因維恩圖進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。對(duì)維恩圖的分析結(jié)果獲得14個(gè)差異表達(dá)基因,經(jīng)過數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,其中4個(gè)沒有檢索到相關(guān)信息,最終得到10個(gè)與卷葉突變相關(guān)的差異基因。其中在卷葉突變體中上調(diào)表達(dá)的差異基因有6個(gè),下調(diào)表達(dá)的4個(gè)。其中,與插入位點(diǎn)附近基因相關(guān)的差異表達(dá)基因有編碼富含脯氨酸蛋白2的PRP2基因,與卷葉性狀相關(guān)的基因有CYP86A1、PRP2, At1g66830、GSTF1、Mg11、At4g26790和BHLH14。對(duì)差異基因的GO富集分析顯示W(wǎng)T和Rolled之間的差異基因主要富集在生物學(xué)過程中的脂肪酸代謝、脂質(zhì)代謝等,分子功能中的酯鍵水解酶活性、氧化還原酶活性；Rolled和Unrolled之間的差異基因主要富集在生物學(xué)過程中的細(xì)胞組分組裝或生物合成、細(xì)胞器組裝等,細(xì)胞組分中的高分子復(fù)合體、細(xì)胞器組分等,分子功能中的核糖體結(jié)構(gòu)組分、分子結(jié)構(gòu)活性。對(duì)差異基因的KEGG富集分析顯示W(wǎng)T和Rolled之間的差異基因主要富集在新陳代謝途徑、次生代謝物合成等代謝途徑；Rolled和Unrolled之間的差異基因主要富集在核糖體、淀粉和蔗糖代謝等代謝途徑。與卷葉性狀相關(guān)的代謝途徑有苯基丙氨酸代謝、苯基丙氨酸合成、苯丙烷合成、甘油酯代謝和角質(zhì)、軟木脂及蠟質(zhì)合成。
龔曉平,況曉明,羅挺,李加勝,趙許兵,趙冰峰,曾勝,楊霞,張致力[8]（2014）在《一個(gè)新的水稻內(nèi)卷葉突變體的光合生理效應(yīng)》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理[目的]明確水稻葉片前平后卷的主要生物學(xué)效應(yīng),為RL（t）在水稻育種中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。[方法]在水稻雜交后代材料中發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的內(nèi)卷葉突變材料,暫時(shí)命名為RL（t）,研究了RL（t）與平展葉姊妹系0731-3-1-1B在葉片受光姿態(tài)、光合效率及細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)的差異。[結(jié)果]RL（t）較平展葉姊妹保持系三片功能葉明顯表現(xiàn)出卷曲度大、挺直度高、葉基角小、披垂角小,相應(yīng)地,提高了卷葉保持系群體各層尤其上部和中部的透光率;三片功能葉的氣孔導(dǎo)度、胞間CO2濃度和劍葉、倒二葉的蒸騰速率顯著高于平展葉姊妹保持系,從而提高了RL（t）劍葉、倒二葉的光合速率;由于卷葉保持系部分泡狀細(xì)胞適度萎縮變小,導(dǎo)致葉片內(nèi)向卷曲。[結(jié)論]該研究為內(nèi)卷葉性狀應(yīng)用于水稻高產(chǎn)育種提供了理論依據(jù)。
張永,王煒,楊正林,凌英華,桑賢春,李云峰,何光華,王貴學(xué),趙芳明[9]（2013）在《不同類型卷葉對(duì)水稻產(chǎn)量及農(nóng)藝性狀的影響》文中研究指明卷葉是理想株型的重要指標(biāo)之一.該研究以6個(gè)EMS誘變縉恢10號(hào)獲得的不同類型卷葉突變體為試驗(yàn)材料,采用二因素隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì),研究了不同卷葉在不同密度下對(duì)其產(chǎn)量及相關(guān)農(nóng)藝性狀的影響.結(jié)果表明:①所有卷葉材料在高密度下（32.65萬株/hm2）均比在低密度下（21.77萬株/hm2）增產(chǎn),但只有細(xì)卷葉增產(chǎn)顯著.②中度卷葉（G1,G3和G4）的產(chǎn)量顯著高于細(xì)卷（G6）、高度卷曲（G5）和中細(xì)卷（G2）.這些結(jié)果說明水稻育種中度卷葉在高密度下具有重要的利用價(jià)值.
李磊[10]（2013）在《水稻卷葉基因rlt的克隆及OsAGO1a的RNAi分析》文中研究說明葉片是植物進(jìn)行光合作用的主要器官,對(duì)植物的發(fā)育起著重要的作用。水稻葉片的姿態(tài)（長(zhǎng)、寬、卷曲度等）影響整個(gè)植株的形態(tài),關(guān)系到群體株型結(jié)構(gòu)的塑造,是高產(chǎn)育種關(guān)心的主要對(duì)象之一。水稻葉片的適度卷曲能提高葉片直立性,進(jìn)而提高群體透光率,改善群體中后期的基部光照條件,有利于水稻產(chǎn)量的提高。然而,過度卷曲的葉片降低了單位面積的光強(qiáng),不利于冠層的光合作用。本文在前人的研究基礎(chǔ)之上,克隆了水稻卷葉rl（t）基因,并研究了水稻葉片的最適卷曲度。此外,本文通過反向遺傳學(xué)方法鑒定了一個(gè)新的水稻卷葉相關(guān)基因OsAG01a。最后,在基因的功能研究過程中,本文探討了一種載體多克隆位點(diǎn)改造的新方法。主要研究結(jié)果如下：1)葉片的適度卷曲是水稻理想株型育種中最重要的農(nóng)藝性狀之一。先前的研究表明：rl（t）基因在雜合狀態(tài)下使葉片適度卷曲（卷曲度約30%）,具有較高的育種利用價(jià)值,能有效地增加水稻產(chǎn)量。本文實(shí)現(xiàn)了rl（t）基因的克隆,并初步研究了其控制葉片卷曲的功能。序列分析表明：在rl（t）基因精細(xì)定位的1lkb區(qū)間內(nèi)僅存在一個(gè)G>T的單堿基替換,該單堿基替換位于定位區(qū)間內(nèi)唯一的預(yù)測(cè)基因Roc5（Rice outermost cell-specific）的3’末端非翻譯區(qū)（3’-UTR）。熒光實(shí)時(shí)定量PCR分析表明突變體中rl（t）基因的表達(dá)量明顯高于野生型。RNA干擾實(shí)驗(yàn)和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)證實(shí)：rl（t）基因的表達(dá)量的高低控制了葉片中泡狀細(xì)胞的小和大,進(jìn)而控制葉片近軸面或遠(yuǎn)軸面卷曲的方向以及葉片卷曲程度的大小。這表明rl（t）基因以劑量效應(yīng)方式控制水稻的卷葉性狀。生物信息學(xué)分析表明：在rl（t）基因以及其他HD-ZIP Ⅳ （homeodomain leucine zipper classV）家族轉(zhuǎn)錄因子的3’末端非翻譯區(qū)中存在一個(gè)高度保守的17個(gè)核苷酸的GU富含區(qū)元件（GU-rich element）?；诓溉閯?dòng)物中GU富含區(qū)元件調(diào)節(jié)mRNA穩(wěn)定性的模型,我們推測(cè)rl（t）基因中GU富含區(qū)元件的單堿基突變導(dǎo)致ri（t）基因的過量表達(dá)進(jìn)而導(dǎo)致葉片近軸面卷曲。本文的研究對(duì)ri（t）基因控制葉片卷曲的分子機(jī)制提供了一個(gè)新的視野。2)通過調(diào)節(jié)水稻卷葉劑量效應(yīng)基因rl（t）的表達(dá)量,獲得葉片近軸面卷曲或遠(yuǎn)軸面卷曲的8個(gè)不同葉片卷曲程度的卷葉近等基因系,借此研究葉片卷曲對(duì)水稻生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：葉片的正卷和反卷均能提高葉片直立度,并通過降低葉片披垂角來降低葉片的披垂度；葉片卷曲度與產(chǎn)量間的模型擬合表明：日本晴的產(chǎn)量與葉片卷曲度之間呈拋物線關(guān)系,當(dāng)葉片卷曲度為5.9%時(shí),產(chǎn)量最高,這說明水稻品種日本晴的葉片最適卷曲度為5.9%左右。討論了采用相同的策略,研究并確定不同類型水稻品種最適卷曲度的可行性。3)AGO蛋白是RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體的核心元件,在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。本研究通過分別特異地?cái)U(kuò)增OsAGO1a基因中第2外顯子和第11-12外顯子的片段,構(gòu)建了兩個(gè)干涉載體OsAGO1aI-1E、OsAGO1aI-2E。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻品種日本晴,抑制OsAGO1a基因的表達(dá),借此研究OsAGO1a的功能及其對(duì)水稻生長(zhǎng)發(fā)育的影響。結(jié)果表明：抑制OsAGO1a的表達(dá)導(dǎo)致葉片的近軸面卷曲而對(duì)其他主要農(nóng)藝性狀的影響不大。4)為了探尋一種快速的、便捷的改造已知載體多克隆位點(diǎn)的方法,我們應(yīng)用一對(duì)5’末端分別添加了多個(gè)酶切位點(diǎn)的引物擴(kuò)增任一已知DNA片段,用兩端的限制性酶酶切后連接至載體多克隆位點(diǎn)中,從而引入兩個(gè)新的酶切位點(diǎn)。我們將這一方法稱為銜接子引物-PCR引入法。酶切結(jié)果證實(shí)：預(yù)先設(shè)計(jì)的酶切位點(diǎn)已替換至載體的多克隆位點(diǎn),且引入的酶切位點(diǎn)能被順利切割。這說明銜接子引物-PCR引入法是一種改造已知載體多克隆位點(diǎn)的可行的方法。
二、水稻卷葉性狀與理想株形的關(guān)系（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級(jí)分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、水稻卷葉性狀與理想株形的關(guān)系（論文提綱范文）
（1）水稻卷葉基因研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 水稻卷葉類型及細(xì)胞學(xué)形態(tài)變化 |
| 1.1 葉片的發(fā)育 |
| 1.2 卷葉類型 |
| 1.3 影響水稻卷葉的因素 |
| 1.3.1 非生物脅迫 |
| 1.3.2 生物脅迫 |
| 1.4 泡狀細(xì)胞及其對(duì)水稻葉片卷曲的作用 |
| 1.5 卷葉基因 |
| 2 泡狀細(xì)胞相關(guān)的分子機(jī)理 |
| 2.1 與泡狀細(xì)胞發(fā)育相關(guān)的基因 |
| 2.2 已經(jīng)定位和克隆的卷葉基因 |
| 3 水稻卷葉性狀與發(fā)育的關(guān)系 |
| 4 問題與展望 |
（2）水稻OsRhoGAP2在種子萌發(fā)和葉片發(fā)育中的功能鑒定（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 植物RhoGAP研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 植物RhoGAP的結(jié)構(gòu)及分類 |
| 1.1.2 植物RhoGAP的作用機(jī)理 |
| 1.1.3 水稻OsRhoGAPs的研究現(xiàn)狀 |
| 1.2 種子萌發(fā) |
| 1.2.1 植物種子萌發(fā)過程 |
| 1.2.2 影響植物種子萌發(fā)的因素 |
| 1.3 水稻葉的發(fā)育 |
| 1.3.1 水稻葉片結(jié)構(gòu) |
| 1.3.2 水稻葉片形態(tài) |
| 1.3.3 卷葉水稻 |
| 1.3.4 水稻卷葉基因的研究進(jìn)展 |
| 1.4 立題依據(jù) |
| 第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株和載體 |
| 2.1.3 酶和試劑 |
| 2.1.4 引物設(shè)計(jì)及合成 |
| 2.1.5 儀器與設(shè)備 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 水稻種植 |
| 2.2.2 OE-GAP2 轉(zhuǎn)基因水稻T5 代的鑒定 |
| 2.2.3 OsRhoGAP2 基因在T5代OE-GAP2 轉(zhuǎn)基因水稻中表達(dá)水平的檢測(cè) |
| 2.2.4 OE-GAP2種子萌發(fā)率的統(tǒng)計(jì) |
| 2.2.5 OE-GAP2種子內(nèi)源赤霉素含量的測(cè)定 |
| 2.2.6 OE-GAP2 種子α-淀粉酶定性及定量檢測(cè) |
| 2.2.7 OE-GAP2種子萌發(fā)過程中相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè) |
| 2.2.8 抽穗期OE-GAP2水稻葉片生理指標(biāo)檢測(cè) |
| 2.2.9 OE-GAP2水稻葉片與節(jié)間細(xì)胞學(xué)檢測(cè) |
| 2.2.10 OsRhoGAP2 基因敲除載體的構(gòu)建 |
| 2.2.11 OsRhoGAP2 基因敲除水稻的構(gòu)建及篩選鑒定 |
| 2.2.12 掃描電鏡觀察 |
| 2.2.13 農(nóng)藝學(xué)性狀統(tǒng)計(jì) |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 3.1 OE-GAP2 轉(zhuǎn)基因水稻T5 代的篩選與鑒定 |
| 3.1.1 OsRhoGAP2 轉(zhuǎn)基因水稻的陽性鑒定 |
| 3.1.2 OsRhoGAP2 在轉(zhuǎn)基因水稻中表達(dá)水平檢測(cè) |
| 3.2 OsRhoGAP2 基因過表達(dá)對(duì)株高及葉片發(fā)育的影響 |
| 3.2.1 株高與葉片表型的檢測(cè) |
| 3.2.2 節(jié)間的細(xì)胞學(xué)分析 |
| 3.2.3 劍葉的細(xì)胞學(xué)分析 |
| 3.2.4 水稻葉片生理指標(biāo)的檢測(cè)與分析 |
| 3.3 OsRhoGAP2 基因過表達(dá)對(duì)水稻種子萌發(fā)的影響 |
| 3.3.1 OsRhoGAP2 基因在OE-GAP2 種子萌發(fā)中的表達(dá)量檢測(cè) |
| 3.3.2 種子萌發(fā)率的統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.3.3 萌發(fā)種子中α-淀粉酶的活性檢測(cè)與分析 |
| 3.3.4 種子內(nèi)源活性赤霉素含量的測(cè)定與分析 |
| 3.3.5 種子萌發(fā)相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)與分析 |
| 3.4 OsRhoGAP2 基因敲除水稻的構(gòu)建 |
| 3.4.1 OsRhoGAP2 基因敲除載體構(gòu)建 |
| 3.4.2 OsRhoGAP2 基因敲除水稻的篩選鑒定 |
| 3.5 OsRhoGAP2 基因敲除水稻的葉片表型 |
| 3.5.1 抽穗期水稻劍葉光合作用指標(biāo)的檢測(cè)與分析 |
| 3.5.2 抽穗期水稻劍葉及穎殼掃描電鏡觀察 |
| 3.6 轉(zhuǎn)基因水稻的農(nóng)藝學(xué)性狀統(tǒng)計(jì) |
| 第四章 討論 |
| 4.1 OsRhoGAP2 過表達(dá)通過影響葉片泡狀細(xì)胞發(fā)育來改變?nèi)~片形態(tài) |
| 4.2 OsRhoGAP2 過表達(dá)通過降低種子中的內(nèi)源活性GA含量和α-淀粉酶活性抑制種子萌發(fā) |
| 4.3 OsRhoGAP2 過表達(dá)通過抑制節(jié)間細(xì)胞伸長(zhǎng)降低水稻株高 |
| 4.4 利用CRISPR/Cas9 技術(shù)編輯OsRhoGAP2 基因不僅影響水稻葉片的光合作用,還得到一種類似光身稻的突變體 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 附錄A 水稻種子RNA提取 |
| 附錄B α-淀粉酶定性及定量檢測(cè)試劑配制 |
| 附錄C α-淀粉酶定性檢測(cè) |
| 致謝 |
| 攻讀碩士期間的研究成果 |
（3）花生卷葉突變體的遺傳分析及相關(guān)基因克隆研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 花生卷葉性狀的研究背景 |
| 1.2 花生葉片的形態(tài)結(jié)構(gòu) |
| 1.3 植物葉片發(fā)育的調(diào)控機(jī)制 |
| 1.4 植物卷葉突變體的研究進(jìn)展 |
| 1.5 本研究的目的及意義 |
| 第2章 卷葉突變體rl1 的遺傳學(xué)分析及表型觀察 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第3章 卷葉突變體rl1 的細(xì)胞學(xué)分析及葉綠素含量的測(cè)定 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第4章 基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序?qū)砣~相關(guān)基因的研究 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第5章 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)歷 |
（4）一個(gè)水稻卷葉突變體zw209的遺傳分析與精細(xì)定位（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.2.1 農(nóng)藝性狀統(tǒng)計(jì) |
| 1.2.2 突變體zw209葉綠素含量和光合參數(shù)測(cè)定 |
| 1.2.3 葉片顯微結(jié)構(gòu)觀察 |
| 1.2.4 遺傳分析和F2定位群體構(gòu)建 |
| 1.2.5 水稻基因組DNA提取和PCR擴(kuò)增體系 |
| 1.2.6 分子標(biāo)記的設(shè)計(jì) |
| 1.2.7 遺傳作圖 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 zw209突變體的形態(tài)學(xué)特征 |
| 2.2 農(nóng)藝性狀比較 |
| 2.3 zw209突變體的葉綠素含量和光合效率測(cè)定 |
| 2.4 突變體zw209葉片顯微結(jié)構(gòu)觀察 |
| 2.5 突變體zw209的遺傳分析 |
| 2.6 突變體zw209的基因定位 |
| 3 討論 |
（5）水稻卷葉突變體zw235的基因克隆與功能分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 水稻葉片發(fā)育過程及結(jié)構(gòu)特點(diǎn) |
| 1.1.1 植物葉片生長(zhǎng)發(fā)育過程 |
| 1.1.2 水稻葉片的構(gòu)造與特點(diǎn) |
| 1.2 水稻卷葉性狀與高產(chǎn)育種的關(guān)系 |
| 1.2.1 水稻卷葉性狀的分類及生理生態(tài)效應(yīng) |
| 1.2.2 水稻卷葉性狀在育種中的作用 |
| 1.3 水稻卷葉性狀分子機(jī)制的研究進(jìn)展 |
| 1.4 水稻泡狀細(xì)胞與卷葉性狀的關(guān)系 |
| 1.4.1 水稻泡狀細(xì)胞發(fā)育過程 |
| 1.4.2 泡狀細(xì)胞變化影響葉片形態(tài) |
| 1.5 研究目的及意義 |
| 第二章 卷葉突變體ZW235的表型觀察與葉片光合參數(shù)的測(cè)定 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料的來源 |
| 2.1.2 水稻的種植與觀察 |
| 2.1.3 農(nóng)藝性狀的統(tǒng)計(jì) |
| 2.1.4 葉片葉綠素含量及光合參數(shù)的測(cè)定 |
| 2.1.5 葉片顯微結(jié)構(gòu)觀察 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 突變體zw235與野生型的形態(tài)學(xué)特征比較 |
| 2.2.2 突變體zw235與野生型農(nóng)藝性狀比較 |
| 2.2.3 突變體zw235與野生型葉片葉綠素含量及光合參數(shù)的測(cè)定分析 |
| 2.2.4 突變體zw235與野生型葉片顯微結(jié)構(gòu)的對(duì)比觀察 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 水稻卷葉突變體ZW235的遺傳分析與基因克隆 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 突變體zw235的遺傳分析 |
| 3.1.3 F2定位群體構(gòu)建 |
| 3.1.4 水稻葉片基因組DNA的提取 |
| 3.1.5 PCR反應(yīng)體系 |
| 3.1.6 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè) |
| 3.1.7 分子標(biāo)記設(shè)計(jì) |
| 3.1.8 突變基因的定位 |
| 3.1.9 遺傳作圖 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 突變體zw235的遺傳分析 |
| 3.2.2 突變體zw235的基因定位 |
| 3.2.3 突變體zw235突變位點(diǎn)的測(cè)定與分析 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 基因ZW235的互補(bǔ)驗(yàn)證與CRISPR-CAS9驗(yàn)證 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)所需材料 |
| 4.1.2 水稻總RNA的提取 |
| 4.1.3 RNA反轉(zhuǎn)錄 |
| 4.1.4 ZW235基因互補(bǔ)載體與CRISPR-Cas9載體的構(gòu)建 |
| 4.1.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化 |
| 4.1.6 農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化水稻愈傷組織 |
| 4.1.7 表型觀察及鑒定 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因陽性植株 |
| 4.2.2 轉(zhuǎn)基因陽性植株形態(tài)學(xué)特征分析 |
| 4.3 討論 |
| 第五章 基因ZW235的表達(dá)蛋白亞細(xì)胞定位 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料的獲得 |
| 5.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑與儀器 |
| 5.1.3 ZW235-GFP載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化 |
| 5.1.4 質(zhì)粒大提 |
| 5.1.5 水稻原生質(zhì)體的制備 |
| 5.1.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體 |
| 5.1.7 激光共聚焦掃描顯微鏡觀察 |
| 5.2 結(jié)果與分析 |
| 5.2.1 ZW235-GFP載體的構(gòu)建 |
| 5.2.2 基因表達(dá)蛋白ZW235的亞細(xì)胞定位 |
| 5.3 討論 |
| 第六章 酵母雙雜交 |
| 6.1 材料與方法 |
| 6.1.1 實(shí)驗(yàn)所需材料 |
| 6.1.1.1 所需載體及酵母菌株 |
| 6.1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)用品及儀器 |
| 6.1.2 ZW235-AD/BD載體構(gòu)建 |
| 6.1.3 誘餌載體ZW235-BD轉(zhuǎn)化酵母Y2H Gold Yeast |
| 6.1.3.1 酵母Y2H Gold Yeast感受態(tài)的制備 |
| 6.1.3.2 ZW235-BD載體轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài) |
| 6.1.4 ZW235基因表達(dá)蛋白的自激活檢測(cè) |
| 6.1.5 誘餌載體ZW235-BD篩庫(kù) |
| 6.1.5.1 轉(zhuǎn)化法酵母篩庫(kù) |
| 6.1.5.2 互作蛋白基因的獲得 |
| 6.1.6 滴點(diǎn)法驗(yàn)證互作關(guān)系 |
| 6.2 結(jié)果與分析 |
| 6.2.1 ZW235-BD誘餌載體構(gòu)建 |
| 6.2.2 ZW235蛋白自激活檢測(cè) |
| 6.2.3 ZW235蛋白互作蛋白的篩選鑒定 |
| 6.3 討論 |
| 第七章 酵母單雜交 |
| 7.1 材料與方法 |
| 7.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 7.1.2 突變體zw235與野生型葉片中YABBY基因表達(dá)量比較 |
| 7.1.3 YABBY基因質(zhì)粒及其酵母菌株的構(gòu)建 |
| 7.1.3.1 構(gòu)建pBait-AbAi質(zhì)粒 |
| 6.1.3.2 獲得含pBait-AbAi質(zhì)粒的酵母菌株 |
| 7.1.4 摸索抑制誘餌菌株生長(zhǎng)的最低AbA濃度 |
| 7.1.5 ZW235蛋白與YABBY基因酵母單雜交 |
| 7.2 結(jié)果與分析 |
| 7.2.1 突變體zw235與野生型葉片中YABBY基因表達(dá)量對(duì)比 |
| 7.2.2 基因YABBY結(jié)合元件與ZW235蛋白互作篩選 |
| 7.3 討論 |
| 第八章 全文結(jié)論 |
| 8.1 結(jié)果 |
| 8.2 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)歷 |
（6）水稻卷葉突變體sll2的遺傳分析及泡狀細(xì)胞發(fā)育調(diào)控研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1 水稻葉的結(jié)構(gòu) |
| 1.1 葉片 |
| 1.1.1 表皮 |
| 1.1.2 氣孔 |
| 1.1.3 葉肉 |
| 1.1.4 葉脈 |
| 1.1.5 泡狀細(xì)胞 |
| 1.2 葉舌和葉耳 |
| 1.3 葉鞘 |
| 2 葉發(fā)育的研究進(jìn)展 |
| 2.1 葉原基的分化和發(fā)育 |
| 2.2 近軸面-遠(yuǎn)軸面極性的建立 |
| 2.3 葉脈的模式建立 |
| 2.4 葉形的形成 |
| 2.5 水稻葉的發(fā)育過程 |
| 3 水稻卷葉的應(yīng)用價(jià)值 |
| 3.1 水稻卷葉性狀的類型 |
| 3.2 卷葉在育種中的應(yīng)用 |
| 3.3 水稻卷葉與理想株型 |
| 3.4 水稻卷葉性狀生理生態(tài)效應(yīng)研究 |
| 3.5 我國(guó)不同地區(qū)利用卷葉性狀存在的差異 |
| 4 水稻卷葉性狀的研究進(jìn)展 |
| 4.1 已經(jīng)定位和克隆的卷葉基因 |
| 4.2 泡狀細(xì)胞對(duì)水稻卷葉的調(diào)控機(jī)制 |
| 5 本研究的目的和意義 |
| 第二章 水稻卷葉突變體sll2的表型與細(xì)胞形態(tài)分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 植物材料來源與田間種植 |
| 1.2 卷葉指數(shù)(LRI)測(cè)定 |
| 1.3 農(nóng)藝性狀調(diào)查 |
| 1.3.1 千粒重測(cè)定 |
| 1.3.2 結(jié)實(shí)率調(diào)查 |
| 1.4 葉綠素及類胡蘿卜素測(cè)定 |
| 1.5 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定 |
| 1.6 光合速率,蒸騰速率,氣孔導(dǎo)率的測(cè)量 |
| 1.7 水稻葉片表皮泡狀細(xì)胞染色 |
| 1.8 水稻葉片組織石蠟切片 |
| 1.9 水稻葉片相對(duì)含水量測(cè)定 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 sll2表型分析 |
| 2.2 sll2生理指標(biāo)分析 |
| 2.2.1 卷葉指數(shù)(LRI)分析 |
| 2.2.2 葉綠素及類胡蘿卜素含量分析 |
| 2.2.3 葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)分析 |
| 2.2.4 光合速率,蒸騰速率,氣孔導(dǎo)率分析 |
| 2.3 sll2卷葉突變體葉片細(xì)胞學(xué)分析 |
| 3 討論 |
| 第三章 水稻卷葉突變體sll2的克隆及轉(zhuǎn)基因驗(yàn)證 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與田間種植 |
| 1.2 sll2遺傳分析 |
| 1.3 TAIL-PCR擴(kuò)增 |
| 1.4 水稻葉片DNA制備 |
| 1.5 分子標(biāo)記檢測(cè) |
| 1.5.1 PCR擴(kuò)增 |
| 1.5.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳和染色 |
| 1.6 分子標(biāo)記的開發(fā) |
| 1.7 水稻內(nèi)卷葉突變基因的初定位 |
| 1.8 精細(xì)定位及區(qū)間內(nèi)候選基因的測(cè)序 |
| 1.9 RNA提取,RT-PCR及Real-time PCR |
| 1.10 轉(zhuǎn)基因互補(bǔ)載體的構(gòu)建 |
| 1.11 轉(zhuǎn)基因干擾載體的構(gòu)建 |
| 1.12 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 1.13 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定 |
| 1.13.1 PCR鑒定 |
| 1.13.2 潮霉素處理抗性鑒定 |
| 1.14 野生型Kitaake和突變體sll2的數(shù)字基因表達(dá)譜分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 sll2的遺傳分析 |
| 2.2 TAIL-PCR結(jié)果分析 |
| 2.3 轉(zhuǎn)基因結(jié)果分析 |
| 2.4 精細(xì)定位結(jié)果分析 |
| 2.5 定位區(qū)間內(nèi)的基因分析 |
| 2.6 回復(fù)突變體的表型,細(xì)胞學(xué)及農(nóng)藝性狀分析 |
| 2.7 數(shù)字基因表達(dá)譜分析 |
| 3 討論 |
| 3.1 T-DNA插入引起了卷葉表型 |
| 3.2 sll2遺傳穩(wěn)定但存在一定頻率的回復(fù)突變 |
| 第四章 雙突變體及泡狀細(xì)胞發(fā)育相關(guān)基因的分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與田間種植 |
| 1.2 泡狀細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)檢測(cè) |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 sll2oull雙突變體分析 |
| 2.2 sll1-1sll2雙突變體分析 |
| 2.3 泡狀細(xì)胞發(fā)育相關(guān)的基因在sll2突變體中表達(dá)分析 |
| 3 討論 |
| 3.1 不同卷葉基因之間的調(diào)控關(guān)系 |
| 3.2 sll2oull雙突變體中sll2與oul1性狀達(dá)到良好互補(bǔ) |
| 第五章 全文結(jié)論 |
| 1 全文結(jié)論 |
| 1.1 sll2是個(gè)隱性內(nèi)卷葉突變體 |
| 1.2 泡狀細(xì)胞皺縮導(dǎo)致葉片內(nèi)卷 |
| 1.3 T-DNA插入到基因LOC_Os07g38664的啟動(dòng)子區(qū),轉(zhuǎn)基因未得到預(yù)期表型 |
| 1.4 圖位克隆將目標(biāo)基因定位在第7染色體長(zhǎng)臂上28.6-kb的區(qū)間內(nèi) |
| 1.5 SLL2對(duì)Roc5具有上位性 |
| 1.6 SLL1與SLL2在調(diào)控泡狀細(xì)胞發(fā)育方面可能是相互獨(dú)立的 |
| 2 本研究的創(chuàng)新之處 |
| 2.1 sll2中可能存在一種新的機(jī)制調(diào)控卷葉表型 |
| 2.2 sll2在育種中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 附圖1 本研究用到的載體圖譜 |
| 在讀期間發(fā)表的論文 |
| 專利申請(qǐng) |
| 致謝 |
（7）轉(zhuǎn)基因水稻卷葉突變體表達(dá)譜及蛋白組差異分析（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 水稻功能基因研究 |
| 1.2.1 植物功能基因組研究 |
| 1.2.2 中國(guó)水稻功能基因組研究 |
| 1.3 水稻蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 水稻組織器官的蛋白質(zhì)組研究 |
| 1.3.2 水稻亞細(xì)胞水平蛋白質(zhì)組研究 |
| 1.3.3 逆境脅迫下的水稻蛋白質(zhì)組 |
| 1.3.4 激素誘導(dǎo)下的水稻蛋白質(zhì)組 |
| 1.3.5 水稻突變體的蛋白質(zhì)組 |
| 1.4 水稻卷葉性狀的研究進(jìn)展 |
| 1.5 本研究的目的和意義 |
| 第二章 水稻卷葉突變體葉片形態(tài)特征及生理生化差異 |
| 2.1 研究材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要研究?jī)x器與試劑 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 水稻葉片形態(tài)觀察及石臘切片組織觀察 |
| 2.2.2 葉綠素含量測(cè)定及光合速率測(cè)定 |
| 2.2.3 農(nóng)藝性狀統(tǒng)計(jì)及分析 |
| 2.2.4 水稻籽粒氨基酸含量分析 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 水稻葉片形態(tài)觀察 |
| 2.3.2 水稻葉片橫截面結(jié)構(gòu)差異分析 |
| 2.3.3 葉綠素含量和光合效率差異分析 |
| 2.3.4 農(nóng)藝性狀統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2.3.5 水稻籽粒氨基酸含量分析 |
| 2.4 小結(jié)與討論 |
| 第三章 水稻卷葉性狀遺傳分析 |
| 3.1 研究材料 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 主要研究?jī)x器與試劑 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 DNA提取 |
| 3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析外源基因拷貝數(shù) |
| 3.2.3 T-DNA側(cè)翼序列擴(kuò)增 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 卷葉性狀的遺傳分析 |
| 3.3.2 外源基因拷貝數(shù)確定 |
| 3.3.3 T-DNA與卷葉性狀的共分離檢測(cè) |
| 3.3.4 TAIL-PCR確定外源基因插入位點(diǎn) |
| 3.4 小結(jié)與討論 |
| 第四章 水稻卷葉突變體蛋白質(zhì)組差異分析 |
| 4.1 研究材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要研究?jī)x器與試劑 |
| 4.2 研究方法 |
| 4.2.1 蛋白質(zhì)雙向電泳分析 |
| 4.2.2 圖像分析 |
| 4.2.3 膠內(nèi)原位酶解 |
| 4.2.4 質(zhì)譜分析 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 雙向電泳圖譜 |
| 4.3.2 蛋白質(zhì)差異分析 |
| 4.3.3 差異表達(dá)蛋白質(zhì)鑒定 |
| 4.3.4 差異表達(dá)蛋白質(zhì)功能分類 |
| 4.4 小結(jié)與討論 |
| 第五章 水稻卷葉突變體表達(dá)譜分析 |
| 5.1 研究材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.2 研究方法 |
| 5.2.1 RNA樣品制備 |
| 5.2.2 DGE測(cè)序 |
| 5.2.3 對(duì)應(yīng)軟件開發(fā) |
| 5.2.4 生物信息學(xué)分析 |
| 5.2.5 DGE技術(shù)方法和路線 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 Total RNA樣品檢測(cè) |
| 5.3.2 原始序列數(shù)據(jù) |
| 5.3.3 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估 |
| 5.3.4 參考序列比對(duì)分析 |
| 5.3.5 基因表達(dá)水平分析 |
| 5.3.6 差異基因GO富集分析 |
| 5.3.7 差異基因KEGG富集分析 |
| 5.4 小結(jié)與討論 |
| 第六章 全文結(jié)論與展望 |
| 6.1 全文結(jié)論 |
| 6.2 創(chuàng)新之處 |
| 6.3 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 附錄1：石蠟切片制作方法 |
| 附錄2 SDS小量法提取水稻DNA |
| 附錄3 CTAB大量法提取水稻DNA |
| 附錄4 水稻葉片雙向電泳分析 |
| 附錄5 蛋白點(diǎn)膠內(nèi)原位酶解 |
| 附錄6 質(zhì)譜檢測(cè) |
| 附錄7 差異基因GO富集DAG圖 |
| 附錄8 富集KEGG通路圖(Rolled vs WT) |
| 致謝 |
（8）一個(gè)新的水稻內(nèi)卷葉突變體的光合生理效應(yīng)（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)材料和田間種植 |
| 1.2 測(cè)量項(xiàng)目及方法 |
| 1.2.1 RL (t) 與平展葉0731-3-1-1B的表型觀察。 |
| 1.2.2 RL (t) 與平展葉0731-3-1-1B葉片的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察。 |
| 1.2.3 卷曲度、挺直度、葉基角、披垂角的測(cè)定。 |
| 1.2.4 光合速率的測(cè)定。 |
| 1.2.5 透光率的測(cè)定。 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 內(nèi)卷葉RL (t) 保持系、平展葉保持系0731-3-1-1B的葉態(tài)變化 |
| 2.2 內(nèi)卷葉RL (t) 保持系與平展葉保持系0731-3-1-1B葉片的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) |
| 2.3 葉片的卷曲度、挺直度、葉基角、披垂角 |
| 2.4 光合速率的表現(xiàn) |
| 2.5 群體透光率 |
| 3 結(jié)論與討論 |
（9）不同類型卷葉對(duì)水稻產(chǎn)量及農(nóng)藝性狀的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 田間實(shí)驗(yàn) |
| 1.3 性狀考查及統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 拔節(jié)期卷葉材料的葉片形態(tài) |
| 2.2 不同卷葉材料重要農(nóng)藝性狀方差分析 |
| 2.4 不同卷葉材料重要農(nóng)藝性狀比較 |
| 3 討 論 |
（10）水稻卷葉基因rlt的克隆及OsAGO1a的RNAi分析（論文提綱范文）
| 目錄 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 水稻卷葉性狀的研究概況 |
| 引言 |
| 1 植物葉片卷曲的機(jī)理 |
| 1.1 非生物脅迫導(dǎo)致葉片卷曲 |
| 1.2 生物脅迫導(dǎo)致葉片卷曲 |
| 1.3 從物理化學(xué)角度解釋葉片卷曲的原因 |
| 1.4 從分子生物學(xué)角度解釋葉片卷曲的原因 |
| 1.4.1 生理結(jié)構(gòu)異常導(dǎo)致葉片卷曲 |
| 1.4.2 極性發(fā)育異常導(dǎo)致葉片卷曲 |
| 1.4.3 小RNA對(duì)卷葉的作用 |
| 2 水稻卷葉性狀的效應(yīng) |
| 2.1 卷葉的物理效應(yīng) |
| 2.2 卷葉的生理生態(tài)效應(yīng) |
| 2.3 卷葉的其他效應(yīng) |
| 3 水稻卷葉的遺傳學(xué)研究 |
| 3.1 干旱脅迫下卷葉基因的QTL定位 |
| 3.2 卷葉主效基因的研究 |
| 3.3 卷葉性狀及其遺傳的復(fù)雜性 |
| 4 水稻卷葉的種質(zhì)資源及其利用價(jià)值 |
| 4.1 水稻卷葉的種質(zhì)資源 |
| 4.2 卷葉資源在育種實(shí)踐中的應(yīng)用 |
| 5 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 水稻卷葉rl_((t))基因的克隆 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 植物材料 |
| 1.2 葉片卷曲度的產(chǎn)量 |
| 1.3 DNA提取 |
| 1.4 RT-PCR分析 |
| 1.5 載體構(gòu)建和遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 1.6 顯微觀察 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 rl_((t))突變體與野生型中編碼同樣的HD-GL2類轉(zhuǎn)錄因子 |
| 2.2 突變體中rl_((t))基因的表達(dá)量高于野生型 |
| 2.3 rl_((t))基因的過量表達(dá)導(dǎo)致葉片近軸面卷曲 |
| 2.4 抑制rl_((t))基因的表達(dá)導(dǎo)致葉片遠(yuǎn)軸面卷曲 |
| 2.5 rl_((t))基因表達(dá)量與葉片卷曲度呈二次相關(guān)關(guān)系 |
| 2.6 rl_((t))基因3’UTR中高度保守的GU富含區(qū)元件中存在一個(gè)單堿基突變 |
| 3 討論 |
| 3.1 卷葉突變體及其育種利用價(jià)值 |
| 3.2 水稻葉片卷曲的機(jī)制 |
| 3.3 rl_((t)基因3’UTR的GU富含區(qū)元件與mRNA穩(wěn)定性的關(guān)系 |
| 4 參考文獻(xiàn) |
| 第三章 不同葉片卷曲度對(duì)水稻產(chǎn)量的影響 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 供試材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 1.3 調(diào)查項(xiàng)目及方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 日本晴背景不同葉片卷曲程度卷葉系的獲得 |
| 2.2 卷葉對(duì)基本農(nóng)藝性狀的影響 |
| 2.3 卷葉對(duì)植株莖蘗動(dòng)態(tài)的影響 |
| 2.4 卷葉對(duì)經(jīng)濟(jì)性狀的影響 |
| 2.5 葉片卷曲度與產(chǎn)量的模型擬合 |
| 3 討論 |
| 4 參考文獻(xiàn) |
| 第四章 卷葉相關(guān)基因OsAGO1a的RNAi分析 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 水稻AGO基因的生物信息學(xué)分析 |
| 1.3 載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 1.4 田間管理及表型鑒定 |
| 1.5 實(shí)時(shí)定量PCR分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 OsAGO1a基因的生物信息學(xué)分析 |
| 2.2 水稻OsAGO1a基因的表達(dá)模式分析 |
| 2.3 抑制OsAGO1a基因的表達(dá)導(dǎo)致葉片卷曲 |
| 2.4 OsAGO1a基因?qū)λ局饕r(nóng)藝性狀的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 OsAGO1基因與葉片極性發(fā)育的關(guān)系 |
| 3.2 未發(fā)現(xiàn)OsAGO1a存在明顯不良的基因多效性 |
| 3.3 關(guān)于OsAGO1a的育種利用價(jià)值 |
| 4 參考文獻(xiàn) |
| 第五章 基因克隆中載體多克隆位點(diǎn)改造方法的探索 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1.2 試劑 |
| 1.1.3 培養(yǎng)基 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 植物表達(dá)載體pCAMBIA1301/Ubi多克隆位點(diǎn)的改造 |
| 2.1.1 銜接子引物的設(shè)計(jì) |
| 2.1.2 擴(kuò)增片段與載體的連接及驗(yàn)證 |
| 2.2 植物表達(dá)載體pCAMBIA2300多克隆位點(diǎn)的改造 |
| 2.2.1 銜接子引物的設(shè)計(jì) |
| 2.2.2 擴(kuò)增片段與載體的連接及驗(yàn)證 |
| 2.2.3 輔助片段的選擇 |
| 3 討論 |
| 4 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 附錄1：TPS法少量提取水稻核基因組DNA |
| 附錄2：RNA完整性的甲醛凝膠電泳檢測(cè) |
| 致謝 |
| 博士研究生期間發(fā)表的論文 |
四、水稻卷葉性狀與理想株形的關(guān)系（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]水稻卷葉基因研究進(jìn)展[J]. 李蓓,莫?jiǎng)P琴,馬銀花. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào), 2021(06)
- [2]水稻OsRhoGAP2在種子萌發(fā)和葉片發(fā)育中的功能鑒定[D]. 安文靜. 河南師范大學(xué), 2020(07)
- [3]花生卷葉突變體的遺傳分析及相關(guān)基因克隆研究[D]. 史靈敏. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué), 2017(02)
- [4]一個(gè)水稻卷葉突變體zw209的遺傳分析與精細(xì)定位[J]. 李戰(zhàn)朋,吳金霞,張治國(guó). 中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào), 2016(05)
- [5]水稻卷葉突變體zw235的基因克隆與功能分析[D]. 李戰(zhàn)朋. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 2016(02)
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- [10]水稻卷葉基因rlt的克隆及OsAGO1a的RNAi分析[D]. 李磊. 揚(yáng)州大學(xué), 2013(01)
標(biāo)簽：水稻論文; 水稻品種論文; 突變理論論文; 基因結(jié)構(gòu)論文; 基因合成論文;