一、果樹病毒檢測與脫除技術(shù)的研究進(jìn)展（論文文獻(xiàn)綜述）
朱宜庭,秦士嬌,陳婕,洪霓,王國平[1]（2021）在《梨離體植株中蘋果莖溝病毒的脫除技術(shù)》文中指出為建立蘋果莖溝病毒（ASGV,Apple stem grooving virus）的有效脫除方法,以3個(gè)梨品種的離體植株為材料,比較了4種脫毒方法對ASGV的效果。結(jié)果顯示,3個(gè)梨品種的離體植株在莖尖培養(yǎng)、莖尖病毒醚處理、莖尖變溫?zé)崽幚砗颓o尖病毒醚加變溫?zé)崽幚砗?其平均脫毒率分別為50.0%、70.8%、69.6%和98.2%。莖尖病毒醚處理對植株生長的影響與單獨(dú)莖尖培養(yǎng)基本一致,莖尖變溫?zé)崽幚砗颓o尖病毒醚加變溫?zé)崽幚韺χ仓觊L勢和增殖的影響與單獨(dú)莖尖培養(yǎng)存在差異,但對植株總體生長狀況和存活率的影響不大。結(jié)果表明,采用莖尖病毒醚加變溫?zé)崽幚砻摮鼳SGV的效果最佳,可用于梨無病毒苗木的生產(chǎn)。
呂林芳[2]（2021）在《大海紅果組織培養(yǎng)的研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理本論文以大海紅果休眠枝水培后獲得的幼嫩莖段作為外植體,通過試驗(yàn)消毒、抑制褐化、初代培養(yǎng)、初脫毒、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽煉苗等的研究,確定了外植體消毒方法和初脫毒方法,建立組織培養(yǎng)體系。為大海紅果優(yōu)質(zhì)苗木生產(chǎn)提供了技術(shù)保障。研究結(jié)果如下:1.最佳的水培方法為采集粗度0.8-1.3cm、長度35cm的一年生枝條,采集時(shí)間在春季萌芽前的3月,萌芽率95%。2.最佳的消毒方法為75%乙醇30 s+0.1%氯化汞5 min+2%次氯酸鈉3 min組合,其消毒滅菌效果最好,獲得了最高的萌芽率,較低的污染率和褐化率,污染率16.67%,褐化率16.67%,萌芽率83.33%。3.最適宜的初代培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+2g/LPVP。4.初脫毒培養(yǎng)最適宜的方法為無菌組培苗進(jìn)行變溫?zé)崽幚?成活率70.00%,然后結(jié)合抗病毒劑利巴韋林進(jìn)行脫毒處理,最適宜用量為20μg/m L,組培苗成活率最高92.22%。5.增殖培養(yǎng)最適宜培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA+0.3 mg/LGA3,增殖效果最好,增殖系數(shù)達(dá)到3.00。6.誘導(dǎo)生根最適宜培養(yǎng)基為1/2MS+0.8 mg/LIBA+0.1 mg/LNAA,生根率最高95.56%,根系較粗壯、無愈傷。7.煉苗移栽最適宜方法為進(jìn)行室內(nèi)室外分別煉苗,移栽栽培成活率最高的分層栽培基質(zhì)是腐殖土:蛭石=3:1,成活率最高為95.56%;移栽后噴灑濃度1.0 mg/L水楊酸保水,成活率最高,達(dá)到85.00%。
陳龍[3]（2021）在《外施褪黑素促進(jìn)蘋果脫毒的技術(shù)與機(jī)理研究》文中認(rèn)為病毒病害是制約蘋果產(chǎn)業(yè)高效、持續(xù)發(fā)展的重要因素。與真菌病害和細(xì)菌病害不同,植物一旦感染病毒病害,難以用其他方法治愈。栽培無毒苗是目前生產(chǎn)上防治病毒病害的有效方法。建立簡易、高效的脫毒技術(shù)是培育和栽培無毒苗的必要條件。對蘋果危害最大的潛隱病毒有三種,它們是蘋果褪綠葉斑病毒（apple cholorotic leafsopt virus,ACLSV）,蘋果莖痘病毒（apple stem pitting virus,ASPV）和蘋果莖溝病毒（apple stem grooving virus,ASGV）。ASPV不能侵染頂端分生組織,容易脫除,而ASGV能侵染頂端分生組織,難以脫除。褪黑素可以調(diào)控植物的生長發(fā)育,增強(qiáng)植物對非生物脅迫（如干旱、低溫、鹽堿等）和生物脅迫（如真菌和細(xì)菌）的抗性,但在增強(qiáng)植物對病毒抗性和脫毒方面極少有報(bào)道。本研究旨在:（1）以模式植物為材料,研究外施褪黑素對煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV）的抗性。通過病毒相對含量、防御基因表達(dá)量和抗病相關(guān)因子含量測定,初步探究外施褪黑素促進(jìn)植物抗病毒的機(jī)理,并將獲得的結(jié)果在蘋果植株上驗(yàn)證;（2）測試外施褪黑素脫除蘋果ASGV和ASPV的效果,通過測定抗病相關(guān)因子和病毒相對含量及病毒在莖尖的定位,揭示褪黑素促進(jìn)病毒脫除的機(jī)理;（3）測試褪黑素介導(dǎo)植物增強(qiáng)對病毒抗性的關(guān)鍵因子（SA和NO）脫除ASGV和ASPV的效果,建立脫毒新方法。獲得的主要研究結(jié)果如下:（1）以心葉煙（Nicotiana glutinosa）、普通煙草（N.tabacum）和番茄（Solanum lycopersicum）模式植物為試材,研究了外施褪黑素對煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV）抗性的效應(yīng)。心葉煙（N.glutinosa）根部外施褪黑素,增強(qiáng)了植株對TMV局部侵染的抗性,以100μM褪黑素施用兩次效果最佳,枯斑抑制率達(dá)37.4%。RT-q PCR檢測結(jié)果表明,番茄根部外施褪黑素后,PR1和PR5基因表達(dá)上調(diào),TMV相對含量下降,以100μM褪黑素施用兩次時(shí)效果最顯著。Dot-ELISA對TMV的測定結(jié)果也驗(yàn)證了外施褪黑素降低TMV的含量。根部外施褪黑素促進(jìn)了番茄帶毒植株中水楊酸（SA）和一氧化氮（NO）的積累,但對H2O2含量沒有明顯影響。外施NO供體硝普鈉（SNP）和亞硝基谷胱甘肽（GSNO）可以上調(diào)PR1和PR5的表達(dá),降低帶毒植株中的病毒濃度。外施一氧化氮抑制劑c PTIO,明顯降低褪黑素誘導(dǎo)的對TMV的抗性。以轉(zhuǎn)水楊酸羥化酶基因（nah G）的普通煙草（N.tabacum cv.Xanthi-nn）為材料,接種TMV后發(fā)現(xiàn),nah G煙草更易感病,接種3天后病毒濃度為野生型煙草的3倍,外施100μM褪黑素對nah G煙草的TMV相對濃度沒有明顯影響。以上研究表明,褪黑素介導(dǎo)的TMV抗性很可能依賴于NO和SA途徑。（2）以單感ASGV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,培養(yǎng)在添加0-20μM褪黑素的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。結(jié)果表明,10-20μM褪黑素明顯促進(jìn)莖的增殖,10-15μM褪黑素明顯促進(jìn)莖的伸長。外施褪黑素明顯提高試管苗內(nèi)源吲哚乙酸（IAA）含量,以15μM褪黑素處理的效果最為明顯。在含有15μM褪黑素的增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)4周后,取0.5 mm帶有2片葉原基的莖尖進(jìn)行培養(yǎng),莖尖培養(yǎng)的成活率與對照沒有明顯差異,再生率由對照組的47%提高至85%,脫毒率由對照組的0%提高到95%。外施15μM褪黑素明顯促進(jìn)試管苗內(nèi)源SA和NO積累。RT-q PCR對病毒的定量檢測表明,褪黑素處理顯著降低帶毒植株的病毒含量,病毒相對濃度下降約60%。免疫組織化學(xué)法對病毒定位研究發(fā)現(xiàn),褪黑素處理抑制ASGV在莖尖的轉(zhuǎn)運(yùn),擴(kuò)大莖尖的無毒區(qū)。（3）以復(fù)合感染ASGV和ASPV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,取葉片外殖體培養(yǎng)在含有0-30μM褪黑素的再生培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)不定芽。從不定芽取莖尖（0.3-0.5 mm、帶2-3個(gè)葉原基）培養(yǎng)獲得完整試管苗。結(jié)果表明,再生培養(yǎng)基中添加15-30μM褪黑素明顯提高葉片不定芽再生力。對照組的不定芽發(fā)生率和不定芽數(shù)分別為81.6%和3.9。15μM和30μM褪黑素處理的不定芽發(fā)生率和不定芽數(shù)分別為100%和5.8與5.2,顯著高于對照組。再生培養(yǎng)基中添加褪黑素（15-30μM）能提高莖尖的再生率及脫毒率,以15μM褪黑素處理對ASGV和ASPV脫毒率最高,分別達(dá)到53%和100%。免疫組織化學(xué)法對病毒定位研究發(fā)現(xiàn),外施褪黑素?cái)U(kuò)大莖尖的無毒區(qū),促進(jìn)莖尖培養(yǎng)脫除病毒。（4）以復(fù)合感染ASGV和ASPV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,培養(yǎng)在添加了SA和NO供體硝普鈉（SNP）的培養(yǎng)基培養(yǎng)4周后,取莖尖（0.3-0.5mm、帶2-3個(gè)葉原基）培養(yǎng)獲得完整試管苗。結(jié)果表明,低濃度的SA（10μM）與SNP（10μM和50μM）對試管苗的伸長和增殖無顯著影響,高濃度SA（100μM）與SNP（70μM）明顯抑制試管苗的生長,但明顯提高ASGV和ASPV的脫毒率。本研究首次揭示了外施褪黑素能明顯提高植物對TMV的抗性。外施褪黑素、SA及NO供體硝普鈉（SNP）能有效脫除ASGV和ASPV,并初步揭示了外施褪黑素提高脫毒率的機(jī)理。本研究為植物脫毒開辟了新的途徑,具有重要的理論和應(yīng)用研究價(jià)值。
陳沖,曹貴壽,王國平,劉偉,樊新平,霍辰思,史華平[4]（2021）在《果樹脫毒技術(shù)研究進(jìn)展》文中研究指明果樹病毒病是無藥可治的系統(tǒng)性病害,嚴(yán)重威脅果樹的生長發(fā)育和果業(yè)生產(chǎn)。綜述了果樹病毒的種類,并將脫毒方法總結(jié)為五大類進(jìn)行闡釋:物理脫毒法,化學(xué)脫毒法,生物組織脫毒法,變溫、抗病毒劑、超低溫與莖尖組培結(jié)合脫毒法和抗病毒基因工程脫毒法。并對果樹脫毒的發(fā)展趨勢進(jìn)行了分析。
張健,袁嘉瑋,王璐,張鵬飛,王愛玲,王玉香,田時(shí)敏,梁哲軍[5]（2020）在《蘋果主要病毒脫除技術(shù)研究進(jìn)展》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理我國是世界上最大的蘋果生產(chǎn)國,但在生產(chǎn)上卻存在重產(chǎn)量輕品質(zhì)的弊病,其中植株帶毒是造成我國蘋果單產(chǎn)低、品質(zhì)差的主要原因,嚴(yán)重影響了我國蘋果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本文闡述了莖尖培養(yǎng)、微體嫁接、熱處理、化學(xué)處理和超低溫處理病毒脫除技術(shù),分析了各方法的優(yōu)點(diǎn)與弊病,以及適合其脫除病毒的種類,以期為我國蘋果病毒脫除研究提供參考。
楊潔萍[6]（2020）在《基于轉(zhuǎn)錄組與小RNA測序的庫爾勒香梨病毒檢測》文中研究表明目的:通過高通量測序技術(shù)對庫爾勒香梨花朵進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序和Small RNA測序,篩選出與植物病毒相關(guān)的基因序列作為候選病毒分析,并通過RT-PCR技術(shù)對篩選到有關(guān)病毒的基因序列進(jìn)行驗(yàn)證。探索分析庫爾勒香梨病毒的基因序列相關(guān)信息的新方法,為庫爾勒香梨病毒的檢測、病毒防治和培育無病毒苗木奠定基礎(chǔ)。方法:將2014年、2017年、2018年4月中旬,采集的庫爾勒香梨花朵分別于當(dāng)年送至諾禾致源公司,委托其利用Illumina HisSeqTM2500測序平臺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。將獲得的原始序列過濾剔除低質(zhì)量數(shù)據(jù)得到干凈序列后,采用Trinity軟件對干凈序列進(jìn)行拼接。Trinity拼接得到的轉(zhuǎn)錄本序列,Corset利用比對到轉(zhuǎn)錄本的序列和表達(dá)模式對轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行層次聚類,以Corset層次聚類后最長Cluster序列進(jìn)行基因功能注釋,篩選出注釋為植物病毒的長片段序列作為候選病毒,對候選病毒病毒序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證;將2014年所獲得的小RNA測序數(shù)據(jù),所得的原始序列進(jìn)行測序數(shù)據(jù)過濾,得到的為干凈序列。在NCBI的GenBank數(shù)據(jù)庫下載各種植物病毒的參考序列,將干凈序列用本地BLAST程序與核酸數(shù)據(jù)庫、蛋白數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,篩選出和植物病毒序列相似性比較高的序列,從而得到候選病毒進(jìn)行分析。研究結(jié)果如下:1、庫爾勒香梨轉(zhuǎn)錄組測序分析根據(jù)三組轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)分析結(jié)果,對分別篩選出的66條、202條、921條注釋為植物病毒的基因序列和1條注釋為植物類病毒的基因序列分析,發(fā)現(xiàn)有3種是已報(bào)道的侵染梨的病毒和1種類病毒,分別是蘋果莖痘病毒分離物PA66、蘋果莖溝病毒分離物P-209、蘋果莖溝病毒韓國分離物、蘋果褪綠葉斑病毒、啤酒花矮化類病毒,一種未報(bào)道的病毒蕓薹黃化病毒。根據(jù)設(shè)計(jì)的特異性引物,隨機(jī)采集的庫爾勒香梨枝條樣品利用RT-PCR技術(shù)對篩選出的4種病毒進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證,只有蘋果莖痘病毒和蘋果莖溝病毒擴(kuò)增出目的片段。2、庫爾勒香梨Small RNA測序分析運(yùn)用BLAST程序?qū)@得的干凈序列分別與NCBI的核酸數(shù)據(jù)庫和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,篩選出了22條注釋為植物病毒的基因序列和32條注釋為植物類病毒的基因序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)2種已報(bào)道的侵染梨的病毒和1種類病毒,分別為蘋果莖痘病毒、蘋果莖溝病毒和蘋果銹果類病毒。
楊鴦[7]（2019）在《輸液滴干對蘋果花葉病毒病的防效及果實(shí)品質(zhì)的影響》文中研究表明近年來,邯鄲地區(qū)蘋果種植面積在不斷擴(kuò)大,然而蘋果病毒病是制約蘋果產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要障礙之一。如何有效地控制病毒病的發(fā)生、發(fā)展和蔓延一直是生產(chǎn)上亟待解決的問題。本研究對不同藥劑和不同施用方法對蘋果病毒病和果實(shí)品質(zhì)的影響進(jìn)行探索,旨在保證蘋果品質(zhì)和產(chǎn)量的前提下,探討蘋果病毒病防治的新途徑和切實(shí)可行的技術(shù)方案。研究結(jié)果如下:1.2014-2016年邯鄲地區(qū)蘋果樹的種植面積呈逐年增長趨勢,2016年總種植面積占全市果樹面積的37%。蘋果花葉病毒病的發(fā)生程度與蘋果栽培品種和果園管理關(guān)系密切,富士和七月紅較抗病,中秋王、紅星、金帥易感病。2.本研究采用6%阿泰靈、2%嗎啉胍·銅、10%病毒唑3種藥劑處理攜帶花葉病毒的蘋果樹干,對蘋果花葉病毒病的防效均具有非常顯著的效果,阿泰靈、嗎啉胍·銅處理濃度≤1000倍液,病毒唑≤1500倍液的濃度下,隨著處理濃度的升高對蘋果花葉病的防治效果越來越顯著,且阿泰靈（1000倍液）>病毒唑（1500倍液）>嗎啉胍·銅（1000倍液）。其中阿泰靈的病情指數(shù)為0.0444,防治效果最為顯著,達(dá)78%;病毒唑的防治效果次之,病情指數(shù)為0.0572,防效效果為72%;嗎啉胍·銅的病情指數(shù)為0.0604,防效效果為71%,由此可見使用這3種藥劑對蘋果花葉病毒病有較明顯的防效效果。3.采用輸液滴干、環(huán)施和噴霧3種方法施用6%阿泰靈、2%嗎啉胍·銅和10%病毒唑3種藥劑以探索不同藥劑不同施用方式對蘋果果實(shí)品質(zhì)的影響。結(jié)果表明,與環(huán)施和噴霧藥劑處理相比,輸液滴干能夠顯著提高果實(shí)品質(zhì),阿泰靈處理效果優(yōu)于嗎啉胍·銅和病毒唑,且阿泰靈輸液滴干技術(shù):（1）可有效提高果實(shí)可溶性糖含量,尤其是果糖含量效果顯著;（2）可明顯提高果實(shí)亮度等色澤,故推測阿泰靈可能對果實(shí)內(nèi)葉綠素具有降解效果;（3）對蘋果果實(shí)的生長發(fā)育以及內(nèi)在品質(zhì)的提高具有一定的促進(jìn)效果,果實(shí)單果重和單株產(chǎn)量得到顯著提高;（4）對于果形和果實(shí)硬度的調(diào)整具有積極作用;（5）有效提高蘋果果實(shí)內(nèi)可溶性固形物含量,降低果實(shí)酸度。因此阿泰靈有利于提高果實(shí)可溶性固形物的形成,對于果實(shí)的內(nèi)在品質(zhì)的提高大有裨益。
焦楠[8]（2019）在《西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究》文中認(rèn)為西番蓮（Passiflora caerulea L.）屬西番蓮科（Passiflora ceae）西番蓮屬（Passiflora L.）,是亞熱帶地區(qū)的一種多年生常綠攀援植物。其果實(shí)富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì),果汁氣味馥郁,故有“百香果”的美名,在世界飲品市場占據(jù)重要席位。近年來隨著西番蓮的大量引種種植,病毒病害侵染情況愈發(fā)嚴(yán)重,使西番蓮果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)大幅下降,嚴(yán)重阻礙了我國乃至世界西番蓮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此,對西番蓮進(jìn)行優(yōu)質(zhì)種苗快速繁育以及病毒苗木的脫毒工作尤為重要。本研究建立并優(yōu)化了西番蓮離體再生體系,將獲得的無菌苗進(jìn)行煉苗及移栽管理;針對侵染西番蓮的兩種病毒建立了TeMV和CMV雙重RT-PCR病毒檢測體系,進(jìn)一步對反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化,同時(shí)建立了微量直接RT-PCR檢測方法;通過構(gòu)建CP-GFP的表達(dá)載體對TeMV外殼蛋白展開亞細(xì)胞定位研究,進(jìn)一步對感病西番蓮體內(nèi)的TeMV表達(dá)特性進(jìn)行定量分析;以感病西番蓮莖尖為材料,通過建立的小滴玻璃化法進(jìn)行超低溫脫毒處理,探究了影響脫毒效果的主要因素,并對脫毒過程進(jìn)行優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:1西番蓮快繁體系的建立及優(yōu)化以西番蓮帶腋芽的莖段為外植體材料,對不同消毒劑種類和消毒時(shí)間進(jìn)行篩選,優(yōu)化外植體滅菌體系。結(jié)果表明:西番蓮?fù)庵搀w的最佳滅菌方法為使用75%乙醇浸沒處理30s,隨后轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2溶液中消毒12min,可以顯著降低外植體的污染率和褐化率,接種后可獲得較高的存活率。以腋芽發(fā)育得到的無菌苗為材料,采用正交法研究6-BA和NAA兩種外源激素對西番蓮增殖效果的作用。結(jié)果顯示,兩種激素存在顯著的交互效應(yīng),將2.0mg/L6-BA和0.1mg/LNAA加入增殖培養(yǎng)基時(shí),西番蓮的增殖系數(shù)最高,為5.09。對四周苗齡的西番蓮試管苗進(jìn)行生根誘導(dǎo)時(shí),探究了IBA和NAA兩種激素對植株生根的影響。由試驗(yàn)結(jié)果得知,1.5mg/LIBA和0.5mg/LNAA組合為最佳誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基,平均可誘導(dǎo)生根數(shù)為5.53。對根系生長健壯且達(dá)到34條主根的無菌苗進(jìn)行移栽管理,根據(jù)移栽苗的成活率及生長勢可以判斷最適移栽基質(zhì)為草炭土和珍珠巖混合比為4:1的營養(yǎng)基質(zhì),移植后植株成活率達(dá)93%,生長勢也明顯優(yōu)于其他試驗(yàn)組。2西番蓮相關(guān)病毒的檢測技術(shù)研究以感染病毒病的西番蓮葉片為試驗(yàn)材料,對四種西番蓮常見病毒進(jìn)行分子生物學(xué)檢測,結(jié)果表明:在采集的西番蓮樣葉中,可檢測到黃瓜花葉病毒（CMV）、夜來香花葉病毒（TeMV）、東亞西番蓮病毒（EAPV）和西番蓮木質(zhì)化病毒（PWV）四種病毒侵染的情況。在此基礎(chǔ)上針對復(fù)合感染TeMV和CMV的西番蓮建立了雙重RT-PCR檢測體系,并且對反應(yīng)參數(shù)中的引物濃度、退火溫度及循環(huán)次數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。改良后的雙重RT-PCR檢測系統(tǒng)反應(yīng)參數(shù)為:最佳引物濃度比為TeMV:CMV=1:4,即TeMV反應(yīng)終濃度為2.0mmol/L,CMV終濃度為8.0mmol/L;最佳退火溫度為57℃;最佳循環(huán)次數(shù)為35次。針對優(yōu)化后的雙重RT-PCR檢測體系進(jìn)行靈敏度檢驗(yàn),結(jié)果顯示,當(dāng)樣葉cDNA稀釋到原液的10-5時(shí),仍能夠擴(kuò)增出特異性條帶,檢測靈敏度等同于10-5mg組織量。將優(yōu)化后的雙重RT-PCR體系應(yīng)用于36份西番蓮樣葉進(jìn)行檢測,結(jié)果表明,來自不同產(chǎn)區(qū)的樣品中,有8份樣品復(fù)合感染TeMV及CMV,18份樣品單感TeMV或CMV。本研究還建立了西番蓮微量直接RT-PCR檢測體系,針對不同取樣部位和不同尺寸的針頭進(jìn)行試驗(yàn)。由檢測結(jié)果可知,選擇尺寸為23G（0.6×25TW LB）的注射器針頭,以健壯的莖段或葉片為檢測部位可以對PWV病毒達(dá)到較好的檢測效果,此研究可為西番蓮的田間檢測提供便利。3 TeMVCP基因克隆、亞細(xì)胞定位及表達(dá)特性分析以感染TeMV的西番蓮植株為試驗(yàn)材料,對TeMV外殼蛋白進(jìn)行克隆驗(yàn)證。通過構(gòu)建CP-GFP融合載體并轉(zhuǎn)化至煙草植株進(jìn)行亞細(xì)胞定位試驗(yàn),定位結(jié)果表明:TeMVCP蛋白定位于葉綠體中,與網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果一致,由此推測TeMV感染西番蓮后作用位點(diǎn)位于葉片的葉綠體處。為研究TeMV在西番蓮寄主體內(nèi)的表達(dá)特點(diǎn),對不同西番蓮品種以及不同組織部位進(jìn)行RNA提取和反轉(zhuǎn)錄操作,以eIF-5A作為內(nèi)參基因,進(jìn)行定量表達(dá)分析。定量結(jié)果顯示:TeMV在感病西番蓮不同部位的表達(dá)量差異顯著,在葉片部位表達(dá)量最高,花藥處表達(dá)量最低,具有明顯的組織表達(dá)特異性。對“福建百香果一號”和“福建百香果三號”兩個(gè)感病品種進(jìn)行定量表達(dá)分析后發(fā)現(xiàn),前者較后者具有顯著高表達(dá)的情況,表達(dá)量約為后者的三倍,推測“福建百香果三號”具備較強(qiáng)的抗病性。4西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)研究及脫毒苗遺傳穩(wěn)定性檢測以攜帶TeMV病毒的西番蓮組培苗莖尖為材料,運(yùn)用小滴玻璃化法對西番蓮莖尖采取超低溫處理。針對影響小滴玻璃化法的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和脫水時(shí)間兩個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn),優(yōu)化后的小滴玻璃化法操作程序?yàn)?剝?nèi)?mm的西番蓮莖尖投入液體預(yù)培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)24h,隨后轉(zhuǎn)入PVS2脫水劑中50min進(jìn)行脫水處理,在1×4cm大小的鋁箔紙上制作PVS2小滴并轉(zhuǎn)入脫水后的莖尖,將鋁箔紙轉(zhuǎn)移至液氮凍存1h,凍存結(jié)束后進(jìn)行卸載處理并轉(zhuǎn)移莖尖至再生培養(yǎng)基上恢復(fù)培養(yǎng)。根據(jù)優(yōu)化后的小滴玻璃化法對西番蓮莖尖進(jìn)行超低溫脫毒研究,設(shè)置不同的莖尖大小研究不同尺寸的莖尖對超低溫脫毒效果的影響。設(shè)置不同的莖尖大小研究不同尺寸的莖尖對超低溫脫毒效果的影響。試驗(yàn)結(jié)果證明,當(dāng)剝?nèi)〉那o尖尺寸在0.81.0mm時(shí),經(jīng)超低溫脫毒后莖尖存活率和再生率最高,分別為83.3%和60%,脫毒率達(dá)100%。對超低溫脫毒后的組培苗進(jìn)行ISSR擴(kuò)增,結(jié)果顯示:試驗(yàn)共擴(kuò)增得到2550條條帶,每組引物可擴(kuò)增出49條條帶,與母株對照組相比,試驗(yàn)組脫毒苗無特異性條帶產(chǎn)生,超低溫脫毒后的再生苗未發(fā)生遺傳變異。
張?jiān)?sup>[9]（2019）在《蘋果新品種（系）組培苗脫毒體系的優(yōu)化》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理蘋果是我國第一大栽培果樹,在我國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展過程中占有重要的地位。但蘋果病毒病嚴(yán)重制約著蘋果的發(fā)展,減緩果樹生長,降低果實(shí)產(chǎn)量及果實(shí)品質(zhì)。目前,還未發(fā)現(xiàn)高效的防治方法。因此,進(jìn)行無毒化栽培是未來果樹生產(chǎn)的方向?！?D2-36’是本課題組最新選育的重要優(yōu)系,有望進(jìn)一步培育成新品種;‘秦月’是最新選育的新品種,為此培育新品種（系）‘秦月’、‘5D2-36’的無病毒苗木具有重要意義。本試驗(yàn)以‘蜜脆’、‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’4個(gè)品種（系）為試驗(yàn)材料,在對現(xiàn)有的脫毒體系進(jìn)行優(yōu)化的基礎(chǔ)上,通過莖尖培養(yǎng)與熱處理、超低溫、化學(xué)藥劑等相結(jié)合的不同脫毒方式對4個(gè)品種（系）進(jìn)行脫毒試驗(yàn),以期獲得幾個(gè)品種（系）的無病毒苗木。結(jié)果如下:1.通過對砂藏的‘蜜脆’、‘秦月’、‘5D2-36’枝條嫩芽進(jìn)行無菌處理,成功得到3個(gè)品種的無菌外植體。2.通過對4個(gè)品種（系）進(jìn)行繼代、生根培養(yǎng)。獲得了最佳繼代、生根培養(yǎng)基的配方:‘秦月’和‘蜜脆’適宜的繼代培養(yǎng)基濃度配比為6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.03mg·L-1;‘5D2-36’和‘王林’適宜的繼代培養(yǎng)基濃度配比則分別為6-BA 0.8 mg·L-1+IBA0.03 mg·L-1和6-BA 0.75 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1?！卦隆ⅰ?D2-36’和‘王林’最適宜的生根IBA的濃度為0.5 mg·L-1;‘蜜脆’則為0.7 mg·L-1。3.通過運(yùn)用RT-PCR法對4個(gè)品種（系）潛隱性病毒病進(jìn)行檢測,成功檢測出脫毒前組培苗攜帶病毒的情況,其中‘秦月’、‘5D2-36’、‘蜜脆’和‘王林’均攜帶ASGV、ACLSV,但不攜帶ASPV。4.對4個(gè)品種（系）進(jìn)行脫毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn):4個(gè)品種（系）剝?nèi)∏o尖大小約為1.0 mm,熱處理莖尖再生率最高,超低溫再生率極低,化學(xué)處理對莖尖成活有一定的影響,但再生率較超低溫高。經(jīng)熱處理（45 d）脫毒后,ACLSV脫毒率為100%;經(jīng)熱處理（35-45d）超低溫脫毒后,4個(gè)品種（系）的ASGV在66.7-100%之間;經(jīng)熱處理（25 d）與化學(xué)處理(20μg·mL-1)結(jié)合脫毒后,ASGV和ACLSV脫毒率最高,在70-90%之間。‘蜜脆’的ASGV較其它3個(gè)品種難脫除。因此,從脫毒率上考慮,‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’最佳處理組合建議為熱處理45 d（ACLSV）+超低溫（ASGV）;從莖尖再生率上考慮,‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’最佳處理組合建議為熱處理35 d（ACLSV）+化學(xué)處理20μg·mL-1（ASGV）。‘蜜脆’的最佳處理組合建議均為熱處理35 d（ACLSV）+化學(xué)處理20μg·mL-1（ASGV）。
王李芳[10]（2018）在《蘋果新品種脫毒快繁體系的建立及檢測體系的優(yōu)化》文中提出病毒病已成為蘋果產(chǎn)業(yè)亟待解決的突出問題之一,其主要通過嫁接傳播。目前我國蘋果正在進(jìn)行大規(guī)模的更新?lián)Q代,這種轉(zhuǎn)變主要通過嫁接才能快速高效地實(shí)現(xiàn)。故無病毒苗木的生產(chǎn)對促進(jìn)蘋果產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展具有重要意義。本試驗(yàn)旨在利用病毒檢測、病毒脫除、組培快繁等技術(shù)得到‘伊美’、‘魔笛’、‘中秋王’、‘玉華早富’4個(gè)蘋果新優(yōu)品種的無病毒苗木,并通過相關(guān)技術(shù)對無病毒蘋果苗木生產(chǎn)體系進(jìn)行優(yōu)化。取得的主要研究結(jié)果如下:1.以蘋果新優(yōu)品種伊美、魔笛、中秋王和玉華早富為試材,建立無菌外植體。對砂藏冬季休眠枝上抽生的嫩芽做常規(guī)的殺菌處理,接種于每升附加2.0 g PVP的MS培養(yǎng)基。試驗(yàn)成功得到4個(gè)品種的無菌外植體。2.4個(gè)品種（伊美、魔笛、中秋王和玉華早富）在組培快繁試驗(yàn)中,繼代培養(yǎng)適宜6-BA/NAA的濃度配比分別為1.1/0.05 mg·L-1、1.0/0.05 mg·L-1、1.1/0.05 mg·L-1和1.0/0.05 mg·L-1（基本培養(yǎng)基為MS,每升附帶2.0 g PVA）;生根培養(yǎng)適宜IAA/IBA的濃度配比為0.5/1.0 mg·L-1、0.75/0.5 mg·L-1、0.5/1.0 mg·L-1、0.5/1.0 mg·L-1（基本培養(yǎng)基為1/2 MS）;生根苗煉苗移栽的適宜基質(zhì)均為苔蘚,其移栽成活率分別為92.4%、88.3%、91.3%和94.5%。3.運(yùn)用兩步單重RT-PCR對各品種脫毒處理前的組培苗進(jìn)行病毒檢測,其中伊美、魔笛和中秋王攜帶ASPV、ASGV、ACLSV,而玉華早富僅攜帶ASGV、ACLSV。4.將繼代兩周的組培苗熱處理4/5/6周后,取0.050.2 mm范圍內(nèi)大小的莖尖,采用熱處理+莖尖培養(yǎng)和熱處理+超低溫+莖尖培養(yǎng)的脫毒方法進(jìn)行脫毒。試驗(yàn)結(jié)果表明,隨著處理時(shí)間的延長,4個(gè)品種兩種脫毒處理的莖尖成活率基本均呈下降的趨勢,脫毒率基本均呈上升趨勢。經(jīng)過超低溫處理的莖尖其成活率大大低于僅熱處理的莖尖,脫毒率較熱處理高。5.將原先采用的兩步單重檢測體系優(yōu)化為一步多重檢測體系,優(yōu)化后的反應(yīng)體系為:Prime Script 1 Step Enzyme Mix 1.0 ul;2×1 Step Buffer（Dye Plus）12.5 ul;各病毒的上下游引物（10μM）各1.0 ul;Template RNA 1.0 ul;RNase Free ddH2O 4.5 ul。反應(yīng)程序?yàn)?反轉(zhuǎn)錄50℃20 min;預(yù)變性94℃2 min;進(jìn)入30個(gè)循環(huán)（變性94℃30 s,退火53-56℃30 s,延伸72℃30 s）,與之前研究不同的是無需進(jìn)行終延伸。
二、果樹病毒檢測與脫除技術(shù)的研究進(jìn)展（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、果樹病毒檢測與脫除技術(shù)的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
（1）梨離體植株中蘋果莖溝病毒的脫除技術(shù)（論文提綱范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 供試植物及培養(yǎng)方法 |
| 1.2 脫毒處理方法 |
| 1.2.1 莖尖培養(yǎng) |
| 1.2.2 莖尖病毒醚處理（R25) |
| 1.2.3 莖尖變溫?zé)崽幚恚═) |
| 1.2.4 莖尖病毒醚加變溫?zé)崽幚恚≧25+T) |
| 1.3 病毒檢測 |
| 1.4 計(jì)算公式 |
| 1.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 脫毒方法對梨離體植株生長與增殖的影響 |
| 2.1.1 離體植株表型 |
| 2.1.2 離體植株株高 |
| 2.1.3 離體植株增殖系數(shù) |
| 2.2 梨離體植株中ASGV的脫除效果 |
| 3 討論 |
（2）大海紅果組織培養(yǎng)的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 縮略語表 |
| 1 引言 |
| 1.1 植物組織培養(yǎng) |
| 1.1.1 植物組織培養(yǎng)概念 |
| 1.1.2 木本植物組織培養(yǎng)再生途徑 |
| 1.2 蘋果屬的組織培養(yǎng)研究 |
| 1.2.1 蘋果屬的組織培養(yǎng)的優(yōu)勢 |
| 1.2.2 蘋果屬植物組織培養(yǎng)的進(jìn)展 |
| 1.2.3 蘋果屬植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵因素 |
| 1.3 植物組織培養(yǎng)中的褐化抑制 |
| 1.3.1 褐化的概念 |
| 1.3.2 外植體褐化的影響因素 |
| 1.3.3 外植體材料的選取 |
| 1.3.4 外植體材料的預(yù)處理 |
| 1.3.5 選擇合適方法進(jìn)行外植體消毒 |
| 1.3.6 選用適宜的培養(yǎng)基 |
| 1.3.7 選擇適宜的防褐劑 |
| 1.4 果樹病毒的侵染和危害 |
| 1.4.1 果樹病毒的危害和影響 |
| 1.4.2 果樹病毒的傳播途徑 |
| 1.4.3 果樹病毒的檢測技術(shù) |
| 1.4.4 果樹脫毒的意義 |
| 1.4.5 果樹的脫毒技術(shù) |
| 1.5 海紅果 |
| 1.5.1 海紅果分布 |
| 1.5.2 海紅果植物學(xué)特征 |
| 1.5.3 海紅果結(jié)果表現(xiàn) |
| 1.5.4 海紅果營養(yǎng)成分 |
| 1.5.5 海紅果的應(yīng)用和研究方向 |
| 1.6 大海紅果 |
| 1.6.1 大海紅果的性狀介紹 |
| 1.6.2 大海紅果的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 |
| 1.6.3 大海紅果組織培養(yǎng)的問題 |
| 1.6.4 研究大海紅果組織培養(yǎng)的目的和意義 |
| 1.7 研究大海紅果的技術(shù)路線 |
| 2 試驗(yàn)材料與方法 |
| 2.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.2 試驗(yàn)試劑及器材 |
| 2.3 試驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 水培獲得外植體的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.2 不同消毒劑處理外植體的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.3 初代培養(yǎng)的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.4 初脫毒培養(yǎng)的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.5 初脫毒組培苗增殖培養(yǎng)的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.6 初脫毒組培苗生根培養(yǎng)的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.7 初脫毒生根苗移栽煉苗的試驗(yàn)方法 |
| 2.3.8 移栽后噴灑水楊酸的試驗(yàn)方法 |
| 2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 水培獲得外植體的結(jié)果 |
| 3.2 不同消毒時(shí)間處理對外植體的影響 |
| 3.3 不同激素濃度對初代培養(yǎng)的影響 |
| 3.4 熱處理對組培苗成活率的影響 |
| 3.5 不同濃度利巴韋林對組培苗成活率的影響 |
| 3.6 不同激素處理對增殖培養(yǎng)的影響 |
| 3.7 不同激素濃度對生根培養(yǎng)的影響 |
| 3.8 不同栽培基質(zhì)對移栽煉苗的影響 |
| 3.9 不同水楊酸濃度對移栽煉苗的影響 |
| 4 討論與結(jié)論 |
| 4.1 討論 |
| 4.1.1 不同消毒時(shí)間處理外植體 |
| 4.1.2 初脫毒方法及無病毒植株的確認(rèn)和使用 |
| 4.1.3 初脫毒組培苗的增殖培養(yǎng) |
| 4.1.4 初脫毒組培苗的生根培養(yǎng) |
| 4.2 結(jié)論 |
| 4.2.1 不同消毒時(shí)間處理外植體 |
| 4.2.2 利用熱處理結(jié)合利巴韋林進(jìn)行初脫毒 |
| 4.2.3 初脫毒組培苗的增殖培養(yǎng) |
| 4.2.4 初脫毒組培苗生根培養(yǎng) |
| 4.2.5 SA對生根苗移栽煉苗 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介 |
（3）外施褪黑素促進(jìn)蘋果脫毒的技術(shù)與機(jī)理研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 蘋果生產(chǎn)概況與病毒病害對蘋果生產(chǎn)的影響 |
| 1.2 蘋果脫毒技術(shù)的研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 莖尖培養(yǎng) |
| 1.2.2 熱療法 |
| 1.2.3 化學(xué)療法 |
| 1.2.4 莖尖嫁接 |
| 1.2.5 莖尖超低溫療法 |
| 1.3 褪黑素在植物中的研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 褪黑素的概況 |
| 1.3.2 褪黑素調(diào)控植物生長發(fā)育的功能 |
| 1.3.3 褪黑素增強(qiáng)植物對非生物脅迫的抗性 |
| 1.3.4 褪黑素增強(qiáng)植物對生物脅迫抗性的研究 |
| 1.3.5 褪黑素增強(qiáng)植物對生物脅迫抗性的機(jī)理 |
| 1.4 本研究的目的和意義 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究意義 |
| 1.5 本研究的思路和技術(shù)路線 |
| 第二章 褪黑素增進(jìn)植物抗病毒的機(jī)理研究 |
| 2.1 試驗(yàn)材料、儀器和試劑 |
| 2.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 主要試驗(yàn)儀器和設(shè)備 |
| 2.1.3 主要試驗(yàn)試劑 |
| 2.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 TMV病毒粒子的提純 |
| 2.2.2 外施褪黑素對煙草TMV局部侵染抗性的影響 |
| 2.2.3 外施褪黑素對番茄TMV系統(tǒng)侵染抗性的影響 |
| 2.2.4 外施褪黑素對番茄葉片SA含量的影響 |
| 2.2.5 外施褪黑素對番茄葉片H_2O_2含量的影響 |
| 2.2.6 外施褪黑素對番茄葉片NO含量的影響 |
| 2.2.7 外施NO供體對番茄TMV抗性的影響 |
| 2.2.8 內(nèi)源SA對番茄TMV抗性的影響 |
| 2.2.9 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析 |
| 2.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.1 外施褪黑素對煙草TMV局部侵染抗性的影響 |
| 2.3.2 外施褪黑素對番茄TMV系統(tǒng)侵染抗性的影響 |
| 2.3.3 外施褪黑素對番茄葉片中SA含量的影響 |
| 2.3.4 外施褪黑素對番茄葉片中H_2O_2含量的影響 |
| 2.3.5 外施褪黑素對番茄葉片NO含量的影響 |
| 2.3.6 NO對番茄TMV抗性影響 |
| 2.3.7 內(nèi)源SA對番茄TMV抗性影響 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 外施褪黑素結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫除ASGV的研究 |
| 3.1 試驗(yàn)材料、儀器與試劑 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 3.1.3 主要試劑 |
| 3.2 試驗(yàn)方法 |
| 3.2.1 帶毒試管苗的建立與保持 |
| 3.2.2 外施褪黑素對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 3.2.3 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源IAA含量的影響 |
| 3.2.4 外施褪黑素對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 3.2.5 再生苗的溫室移栽 |
| 3.2.6 病毒的反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測 |
| 3.2.7 病毒的指示植物法與DAS-ELISA檢測 |
| 3.2.8 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源SA與NO含量的影響 |
| 3.2.9 外施褪黑素對帶毒試管苗病毒含量的影響 |
| 3.2.10 外施褪黑素對病毒在莖尖分布的影響 |
| 3.2.11 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析 |
| 3.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.1 外施褪黑素對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 3.3.2 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源IAA含量的影響 |
| 3.3.3 外施褪黑素對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 3.3.4 病毒RT-PCR檢測結(jié)果 |
| 3.3.5 病毒的指示植物法與DAS-ELISA檢測結(jié)果 |
| 3.3.6 外施褪黑素對帶毒試管苗病毒含量的影響 |
| 3.3.7 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源SA和NO含量的影響 |
| 3.3.8 外施褪黑素對病毒在莖尖分布的影響 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 外施褪黑素結(jié)合葉片不定芽莖尖培養(yǎng)脫除蘋果病毒的研究 |
| 4.1 試驗(yàn)材料、試劑與主要儀器設(shè)備 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 4.1.3 主要藥品和試劑 |
| 4.2 試驗(yàn)方法 |
| 4.2.1 帶毒試管苗的建立與保持 |
| 4.2.2 外施褪黑素對帶毒試管苗葉片不定芽再生的影響 |
| 4.2.3 外施褪黑素結(jié)合不定芽莖尖培養(yǎng)的脫毒效果 |
| 4.2.4 病毒的RT-PCR檢測 |
| 4.2.5 外施褪黑素影響葉片再生不定芽的組織學(xué)觀察和病毒定位 |
| 4.2.6 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析 |
| 4.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.3.1 外施褪黑素對帶毒試管苗葉片不定芽再生的影響 |
| 4.3.2 外施褪黑素結(jié)合葉片再生不定芽莖尖培養(yǎng)的脫毒效應(yīng) |
| 4.3.3 外施褪黑素對葉片再生不定芽影響的組織學(xué)觀察和病毒定位 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 褪黑素介導(dǎo)植物增強(qiáng)對病毒抗性的關(guān)鍵因子在促進(jìn)病毒脫除中的應(yīng)用研究 |
| 5.1 試驗(yàn)材料、試劑與主要儀器設(shè)備 |
| 5.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 5.1.2 主要試驗(yàn)儀器和設(shè)備 |
| 5.1.3 主要試驗(yàn)試劑 |
| 5.2 試驗(yàn)方法 |
| 5.2.1 帶毒試管苗的建立和保持 |
| 5.2.2 外施SNP與SA對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 5.2.3 外施SNP與SA對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 5.2.4 病毒的RT-PCR檢測 |
| 5.2.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析 |
| 5.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 5.3.1 外施SNP與SA對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 5.3.2 外施SNP與SA對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 本研究的結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡歷 |
（4）果樹脫毒技術(shù)研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 概述 |
| 2 果樹脫毒技術(shù) |
| 2.1 物理脫毒法 |
| 2.1.1 熱處理法 |
| 2.1.2 超低溫脫毒 |
| 2.2 化學(xué)脫毒法 |
| 2.3 生物組織脫毒法 |
| 2.3.1 莖尖培養(yǎng)脫毒法 |
| 2.3.2 微體嫁接脫毒法 |
| 2.3.3 珠心組織脫毒法 |
| 2.3.4 花藥或花粉培養(yǎng)脫毒 |
| 2.4 變溫、抗病毒劑、超低溫與莖尖組培結(jié)合脫毒法 |
| 2.5 抗病毒基因工程 |
| 3 展望 |
（5）蘋果主要病毒脫除技術(shù)研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 我國蘋果病毒防控現(xiàn)狀 |
| 2 蘋果苗木脫毒方法 |
| 2.1 莖尖培養(yǎng) |
| 2.2 微體嫁接法 |
| 2.3 熱處理脫毒 |
| 2.4 化學(xué)試劑處理法 |
| 2.5 超低溫法 |
| 3 展望 |
（6）基于轉(zhuǎn)錄組與小RNA測序的庫爾勒香梨病毒檢測（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符號表 |
| 引言 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 植物病毒檢測技術(shù)研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 生物學(xué)測定法 |
| 1.1.2 電子顯微鏡檢測法 |
| 1.1.3 血清學(xué)檢測法 |
| 1.1.4 分子生物學(xué)檢測法 |
| 1.1.5 第二代測序檢測法 |
| 第二章 庫爾勒香梨轉(zhuǎn)錄組測序的分析 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 主要的儀器和試材 |
| 2.1.3 轉(zhuǎn)錄組測序及序列分析 |
| 2.1.4 總RNA提取 |
| 2.1.5 RT-PCR驗(yàn)證 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 提取RNA檢測結(jié)果 |
| 2.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果 |
| 2.2.3 病毒相關(guān)序列注釋 |
| 2.2.4 RT-PCR驗(yàn)證 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 第三章 庫爾勒香梨小RNA測序的分析 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 小RNA測序 |
| 3.2.2 篩選候選病毒 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 結(jié)論 |
| 第四章 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
| 石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表 |
（7）輸液滴干對蘋果花葉病毒病的防效及果實(shí)品質(zhì)的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 蘋果病毒病的危害 |
| 1.1.1 蘋果病毒病的危害 |
| 1.1.2 蘋果病毒種類及癥狀特點(diǎn) |
| 1.2 蘋果病毒病的傳播方式 |
| 1.3 病毒的檢測方法 |
| 1.3.1 指示植物法 |
| 1.3.2 酶聯(lián)免疫法 |
| 1.3.3 分子生物學(xué)技術(shù) |
| 1.3.4 電鏡技術(shù) |
| 1.4 蘋果病毒病在我國的發(fā)生情況 |
| 1.5 蘋果病毒病的防治方法 |
| 1.6 本研究的內(nèi)容、目的和意義 |
| 第2章 邯鄲市蘋果生產(chǎn)樹黃化情況調(diào)查 |
| 2.1 邯鄲市蘋果生產(chǎn)樹黃化情況調(diào)查方法 |
| 2.2 邯鄲市蘋果樹產(chǎn)量及分布情況 |
| 2.3 邯鄲市蘋果生產(chǎn)樹黃化情況調(diào)查 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第3章 幾種藥劑對蘋果花葉病毒病的防治效果研究 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試驗(yàn)材料與地點(diǎn) |
| 3.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 3.1.3 測定內(nèi)容與方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 不同藥劑對花葉病毒病的防治效果 |
| 3.2.2 不同藥劑對花葉病毒病葉片百葉重百葉厚的影響 |
| 3.2.3 不同藥劑對花葉病毒病葉片葉綠素含量的影響 |
| 3.2.4 不同藥劑對果樹光合特征的影響 |
| 3.2.5 不同藥劑對丙二醛含量及抗氧化酶活性的影響 |
| 3.3 本章小結(jié) |
| 第4章 不同藥劑處理對蘋果果實(shí)品質(zhì)的影響 |
| 4.1 材料及方法 |
| 4.1.1 試驗(yàn)材料與地點(diǎn) |
| 4.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 不同處理對果實(shí)可溶性糖含量的影響 |
| 4.2.2 不同處理對果實(shí)果皮色澤的影響 |
| 4.2.3 不同處理對果實(shí)外觀品質(zhì)的影響 |
| 4.2.4 不同處理對果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)的影響 |
| 4.3 本章小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介 |
（8）西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究（論文提綱范文）
| 縮寫詞 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1 西番蓮離體培養(yǎng)研究進(jìn)展 |
| 1.1 外植體類型 |
| 1.2 培養(yǎng)基類型對西番蓮離體培養(yǎng)的影響 |
| 1.3 激素對西番蓮離體培養(yǎng)的影響 |
| 1.4 西番蓮組培苗的生根與移栽 |
| 2 西番蓮病毒病研究進(jìn)展 |
| 2.1 西番蓮病毒病的種類 |
| 2.2 西番蓮病毒病的侵染特性及傳播途徑 |
| 3 植物病毒檢測方法研究進(jìn)展 |
| 3.1 指示植物法 |
| 3.2 電鏡檢測法 |
| 3.3 血清學(xué)檢測法 |
| 3.4 分子生物學(xué)檢測法 |
| 4 病毒外殼蛋白(Coat protein,CP)功能及定位研究 |
| 4.1 CP的功能研究進(jìn)展 |
| 4.2 CP的亞細(xì)胞定位研究進(jìn)展 |
| 5 脫毒技術(shù)研究進(jìn)展 |
| 5.1 熱處理脫毒 |
| 5.2 化學(xué)療法脫毒 |
| 5.3 組織培養(yǎng)脫毒 |
| 5.4 超低溫脫毒 |
| 6 本研究的意義和內(nèi)容 |
| 6.1 研究意義 |
| 6.2 研究內(nèi)容 |
| 第二章 西番蓮快繁體系的建立 |
| 第一節(jié) 西番蓮?fù)庵搀w消毒體系的建立 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計(jì)算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 消毒劑種類對西番蓮再生的影響 |
| 2.2 不同消毒時(shí)間對外植體的影響 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 不同濃度激素組合對西番蓮增殖的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計(jì)算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) 不同濃度激素組合對西番蓮組培苗生根的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計(jì)算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第四節(jié) 西番蓮組培苗的煉苗與移栽 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第三章 西番蓮相關(guān)病毒檢測技術(shù)研究 |
| 第一節(jié) 西番蓮多種病毒的單重RT-PCR檢測 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 西番蓮Te MV和 CMV雙重RT-PCR檢測體系的建立及應(yīng)用 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 部分感病西番蓮樣品表型 |
| 2.2 RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果 |
| 2.3 雙重RT-PCR擴(kuò)增 |
| 2.4 應(yīng)用雙重RT-PCR檢測西番蓮樣品Te MV和 CMV感染情況 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) 西番蓮微量直接RT-PCR(Microtissue direct RT-PCR)檢測體系的建立及優(yōu)化 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 不同針頭尺寸對微量直接RT-PCR檢測的影響 |
| 2.2 不同部位對微量直接RT-PCR檢測的影響 |
| 3 討論 |
| 第四章 西番蓮Te MV_CP基因克隆、亞細(xì)胞定位及表達(dá)分析 |
| 第一節(jié) Te MV外殼蛋白基因克隆及生物信息學(xué)分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 TeMV_CP基因克隆驗(yàn)證 |
| 2.2 TeMV_CP蛋白同源性分析及蛋白保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測 |
| 2.3 TeMV_CP蛋白理化性質(zhì)分析 |
| 2.4 TeMV_CP蛋白跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸化位點(diǎn)預(yù)測 |
| 2.5 TeMV_CP蛋白二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析 |
| 2.6 TeMV_CP系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建與分析 |
| 2.7 TeMV_CP蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) Te MV_CP蛋白亞細(xì)胞定位研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 目的基因酶切位點(diǎn)分析 |
| 2.2 目的片段及線性化載體的回收 |
| 2.3 重組載體的鑒定 |
| 2.4 TeMV_CP蛋白亞細(xì)胞定位 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) Te MV病毒表達(dá)特性分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 TeMV在西番蓮不同組織部位的表達(dá)分析 |
| 2.2 TeMV在不同品種西番蓮中的表達(dá)分析 |
| 3 討論 |
| 3.1 侵染西番蓮的Te MV具有組織表達(dá)特異性 |
| 3.2 TeMV在西番蓮上的表達(dá)具有品種差異性 |
| 第五章 西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)研究 |
| 第一節(jié) 莖尖超低溫處理體系的建立及優(yōu)化 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 不同預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對超低溫處理效果的影響 |
| 2.2 不同脫水處理時(shí)間對超低溫脫毒效果的影響 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 西番蓮莖尖超低溫脫毒效果檢測 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第六章 西番蓮脫毒苗ISSR遺傳穩(wěn)定性分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第七章 小結(jié)與展望 |
| 1 小結(jié) |
| 1.1 西番蓮離體快繁體系的建立與優(yōu)化 |
| 1.2 西番蓮主要病毒檢測及雙重RT-PCR檢測體系的建立 |
| 1.3 侵染西番蓮的Te MV_CP蛋白亞細(xì)胞定位研究及表達(dá)分析 |
| 1.4 西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)的研究 |
| 1.5 西番蓮脫毒苗ISSR遺傳穩(wěn)定性檢測 |
| 2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士期間的學(xué)術(shù)論文與研究成果 |
| 致謝 |
（9）蘋果新品種（系）組培苗脫毒體系的優(yōu)化（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 蘋果病毒病的概述 |
| 1.1.1 蘋果花葉病毒 |
| 1.1.2 蘋果銹果類病毒 |
| 1.1.3 蘋果綠皺果病毒 |
| 1.1.4 蘋果莖痘病毒 |
| 1.1.5 蘋果莖溝病毒 |
| 1.1.6 蘋果褪綠葉斑病毒 |
| 1.2 植物病毒的脫毒技術(shù)原理 |
| 1.2.1 莖尖培養(yǎng)法脫毒 |
| 1.2.2 化學(xué)處理法脫毒 |
| 1.2.3 超低溫冷凍法脫毒 |
| 1.2.4 微體嫁接法脫毒 |
| 1.2.5 熱處理法脫毒 |
| 1.3 植物病毒病的主要鑒定方法 |
| 1.3.1 指示植物鑒定法 |
| 1.3.2 血清學(xué)鑒定植物病毒病法 |
| 1.3.3 分子生物學(xué)鑒定植物病毒病法 |
| 1.4 研究的目的和意義 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.2 試驗(yàn)內(nèi)容及方法 |
| 2.2.1 幾個(gè)蘋果品種(系)外植體的建立 |
| 2.2.2 繼代培養(yǎng)基的篩選 |
| 2.2.3 生根培養(yǎng)基的篩選 |
| 2.2.4 試管苗的RT-PCR檢測 |
| 2.2.5 病毒的脫除技術(shù) |
| 2.2.6 脫毒苗的病毒檢測 |
| 2.2.7 數(shù)據(jù)分析 |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 3.1 外植體的建立 |
| 3.2 繼代培養(yǎng)基的篩選結(jié)果 |
| 3.3 不同IBA濃度對試管苗生根培養(yǎng)的影響 |
| 3.4 試管苗的RT-PCR檢測結(jié)果 |
| 3.5 脫毒方法與脫毒效果 |
| 3.5.1 熱處理+莖尖組知培養(yǎng) |
| 3.5.2 熱處理+超低溫+莖尖組織培養(yǎng) |
| 3.5.3 熱處理+化學(xué)處理+莖尖組織培養(yǎng) |
| 3.6 脫毒苗的RT-PCR病毒檢測 |
| 3.7 4個(gè)品種(系)的最佳脫毒處理組合 |
| 第四章 討論 |
| 4.1 外植體的建立 |
| 4.2 繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng) |
| 4.3 病毒RT-PCR檢測 |
| 4.4 脫毒體系的優(yōu)化 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡歷 |
（10）蘋果新品種脫毒快繁體系的建立及檢測體系的優(yōu)化（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 蘋果在我國的經(jīng)濟(jì)地位 |
| 1.2 蘋果病毒病的種類、特點(diǎn)及癥狀 |
| 1.2.1 蘋果莖溝病毒 |
| 1.2.2 蘋果莖痘病毒 |
| 1.2.3 蘋果褪綠葉斑病毒 |
| 1.3 病毒檢測技術(shù) |
| 1.3.1 指示植物法 |
| 1.3.2 電子顯微鏡技術(shù) |
| 1.3.3 血清學(xué)方法 |
| 1.3.4 分子生物技術(shù) |
| 1.4 病毒脫除技術(shù) |
| 1.4.1 莖尖培養(yǎng)脫毒法 |
| 1.4.2 熱處理脫毒法 |
| 1.4.3 熱處理+莖尖培養(yǎng)脫毒法 |
| 1.4.4 花藥培養(yǎng)脫毒法 |
| 1.4.5 抗病毒藥劑 |
| 1.4.6 超低溫+莖尖培養(yǎng)脫毒法 |
| 1.5 組培快繁技術(shù) |
| 1.6 試驗(yàn)?zāi)康募耙饬x |
| 第二章 病毒脫除及組培快繁體系的建立 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 外植體的建立 |
| 2.1.2 繼代培養(yǎng)基的篩選 |
| 2.1.3 生根培養(yǎng)基的篩選 |
| 2.1.4 煉苗移栽基質(zhì)的篩選 |
| 2.1.5 試管苗的病毒檢測 |
| 2.1.6 病毒脫除 |
| 2.1.7 脫毒苗的病毒檢測 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 各品種外植體的建立情況 |
| 2.2.2 6-BA濃度對各品種繼代培養(yǎng)的影響 |
| 2.2.3 IAA/IBA濃度配比對各品種生根培養(yǎng)的影響 |
| 2.2.4 不同煉苗基質(zhì)對各品種生根苗移栽成活率的影響 |
| 2.2.5 各品種試管苗的帶毒情況 |
| 2.2.6 不同脫毒處理對各品種莖尖成活率的影響 |
| 2.2.7 各品種不同脫毒處理所得脫毒苗的帶毒情況 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 檢測體系的優(yōu)化 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試驗(yàn)材料與試劑 |
| 3.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 一步多重引物組合的篩選 |
| 3.2.2 一步單重RT-PCR檢測 |
| 3.2.3 一步兩重RT-PCR檢測 |
| 3.2.4 一步三重RT-PCR檢測與測序 |
| 3.2.5 一步三重檢測體系的優(yōu)化 |
| 3.2.6 檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的驗(yàn)證 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
四、果樹病毒檢測與脫除技術(shù)的研究進(jìn)展（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]梨離體植株中蘋果莖溝病毒的脫除技術(shù)[J]. 朱宜庭,秦士嬌,陳婕,洪霓,王國平. 中國植保導(dǎo)刊, 2021(07)
- [2]大海紅果組織培養(yǎng)的研究[D]. 呂林芳. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2021(01)
- [3]外施褪黑素促進(jìn)蘋果脫毒的技術(shù)與機(jī)理研究[D]. 陳龍. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2021
- [4]果樹脫毒技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 陳沖,曹貴壽,王國平,劉偉,樊新平,霍辰思,史華平. 果樹資源學(xué)報(bào), 2021(01)
- [5]蘋果主要病毒脫除技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 張健,袁嘉瑋,王璐,張鵬飛,王愛玲,王玉香,田時(shí)敏,梁哲軍. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2020(08)
- [6]基于轉(zhuǎn)錄組與小RNA測序的庫爾勒香梨病毒檢測[D]. 楊潔萍. 石河子大學(xué), 2020(08)
- [7]輸液滴干對蘋果花葉病毒病的防效及果實(shí)品質(zhì)的影響[D]. 楊鴦. 河北工程大學(xué), 2019(02)
- [8]西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究[D]. 焦楠. 福建農(nóng)林大學(xué), 2019(04)
- [9]蘋果新品種（系）組培苗脫毒體系的優(yōu)化[D]. 張?jiān)? 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2019(08)
- [10]蘋果新品種脫毒快繁體系的建立及檢測體系的優(yōu)化[D]. 王李芳. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2018(11)