一、阻塞性黃疸病人空腹血清總膽汁酸的檢測意義（論文文獻(xiàn)綜述）
吳欣雨[1]（2021）在《基于靶標(biāo)代謝組學(xué)策略的雄黃誘導(dǎo)肝損傷小鼠膽汁酸類生物標(biāo)志物研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:雄黃（Realgar）含砷,是國務(wù)院在《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》中特別規(guī)定的28種毒性中藥之一。雄黃主要成分為二硫化二砷或四硫化四砷（As2S2或As4S4）,還含有少量三氧化二砷（As2O3,i AsⅢ,即砒霜）。As2S2或As4S4在胃腸道中不易被吸收而直接從糞便中排出,而i AsⅢ易被胃腸道吸收,是雄黃的毒性成分。雄黃中的砷屬于有毒類金屬,且為世界公認(rèn)的致癌物,砷的積累是雄黃產(chǎn)生毒副作用的主要原因。大量的雄黃或含雄黃制劑中毒事件都是由于過量、長期使用和加工不當(dāng)而引起的。所以雄黃及其復(fù)方制劑應(yīng)用的安全性問題一直飽受爭議。肝臟是藥物代謝的主要器官,同時也最易受到藥物毒性的損害。近年來,由中藥引起的肝損傷的報道日益增多。有研究表明雄黃具有明顯的肝毒性。尋找雄黃誘導(dǎo)肝損傷的生物標(biāo)志物對早期采取有效措施預(yù)防雄黃誘導(dǎo)的肝損傷及指導(dǎo)臨床合理用藥,具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。代謝組技術(shù)是目前廣泛用于生物標(biāo)志物篩選的主要技術(shù),是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。膽汁酸是膽汁的主要脂質(zhì)成分,是一類膽烷酸的總稱,能促進(jìn)脂類的吸收與消化,并作為信號分子參與機(jī)體的多種代謝,其質(zhì)與量的變化為肝臟疾病的診斷、鑒別及發(fā)病機(jī)制的研究提供極具價值的信息,同時膽汁酸代謝網(wǎng)絡(luò)的研究對藥物性肝損傷機(jī)制的研究和肝保護(hù)的藥物篩選、評價等具有重要意義。因此,本研究建立超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UHPLC-MS/MS）法測定小鼠肝組織、血漿中14種膽汁酸的分析方法。應(yīng)用靶標(biāo)代謝組學(xué)策略研究暴露于0.15、0.45、1.35g/kg雄黃8周的小鼠肝組織和血漿中膽汁酸譜代謝特征的變化,闡明雄黃誘導(dǎo)肝損傷的膽汁酸生物標(biāo)志物。研究方法:1.小鼠雄黃誘導(dǎo)肝損傷模型的建立:雄性昆明小鼠（kunming mice,KM小鼠）（體重20-30 g）36只,按體重隨機(jī)分為對照組和低、中、高劑雄黃染毒組,每組9只。對照組灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉（carboxy methyl cellulose-Na,CMC-Na）;低、中、高劑量雄黃組分別灌胃給予雄黃混懸液（0.5%CMC-Na為混懸介質(zhì)）0.15 g/kg、0.45 g/kg、1.35 g/kg,連續(xù)灌胃8周后處死取肝臟和全血,制備血漿。2.砷含量的測定:取肝組織約50 mg或全血100μL,加入濃硝酸消化24 h,離心,上清液稀釋加入抗壞血酸、硫脲還原后,采用原子熒光光度儀測定砷含量。3.谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、血清總膽固醇（total cholesterol,TC）和總膽汁酸（total bile acids,TBA）測定:取血漿或肝組織勻漿液100μL,按試劑盒說明書操作。4.肝臟病理形態(tài)觀察:蘇木素-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining,H&E染色法）。5.肝組織氧化損傷參數(shù)測定:取肝組織制備成10%的組織勻漿,按試劑盒說明書操作測定丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽過氧物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和過氧化氫酶（catalase,CAT）水平。6.肝組織和血漿中14種膽汁酸分析方法的建立及方法驗(yàn)證:UHPLC-MS/MS法。7.肝組織中膽汁酸代謝相關(guān)基因的測定:采用實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR）檢測膽汁酸代謝相關(guān)的基因（膽固醇7α-羥化酶（cholesterol 7α-hydroxylase,Cyp7a1）、膽汁酸鹽輸出泵（bile salt export pump,Bsep）、?；悄懰徕c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（sodium taurocholate cotransporting polypeptide,Ntcp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白2（multidrug resistance-associated protein2,Mrp2）、法尼醇X受體（farnesoid X receptor,Fxr））表達(dá)水平。8.生物信息學(xué):肝組織和血漿中膽汁酸濃度數(shù)據(jù)采用Metabo Analyst平臺進(jìn)行偏最小二乘法判別分析（partial leastsquares discriminant analysis,PLS-DA）觀察各組分離情況。T檢驗(yàn)（student’s t-test）用于組間差異分析。篩選同時滿足投影值的可變重要性（variable importance for the projection,VIP）>1且P<0.05的膽汁酸作為候選標(biāo)志物。應(yīng)用SPSS軟件對各樣本進(jìn)行相關(guān)性分析;采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic,ROC）評價膽汁酸生物標(biāo)志物診斷雄黃所致肝損傷的準(zhǔn)確率。9.統(tǒng)計分析:本研究所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件,進(jìn)行統(tǒng)計分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SEM）表示。使用未配對的t檢驗(yàn)和方差分析檢驗(yàn)用來比較雄黃低、中、高劑量染毒組與對照組的各膽汁酸表達(dá)水平。P<0.05時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.對照組小鼠肝組織和全血中未檢測到砷。低、中、高劑量組小鼠的肝砷和血砷含量均明顯高于對照組,有顯著性差異（P<0.01）。2.各組小鼠體重隨飼養(yǎng)時間逐漸增加,肝臟臟器系數(shù)有下降的趨勢。雄黃染毒組小鼠血漿中ALT活力呈上升的趨勢,血漿中AST活力呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢,血漿中TC、TBA濃度有上升的趨勢。病理學(xué)研究結(jié)果顯示雄黃暴露可引起小鼠肝組織形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯變化。3.與對照組相比,雄黃染毒組小鼠肝組織中MDA含量、SOD活力顯著升高（P<0.05）,GSH-Px活力顯著降低（P<0.05）。4.建立了測定小鼠肝組織和血漿中14種膽汁酸的UHPLC-MS/MS分析方法,并用于對照組和雄黃染毒組小鼠肝組織和血漿中膽汁酸的測定。在小鼠肝組織中檢測到了11種膽汁酸,在小鼠血漿中檢測到12種膽汁酸。5.在小鼠血漿和肝組織中三類膽汁酸的百分比都是?；墙Y(jié)合型膽汁酸>游離型>甘氨結(jié)合型。雄黃暴露后小鼠肝組織中游離膽汁酸占比出現(xiàn)增加的趨勢,?；墙Y(jié)合膽汁酸占比出現(xiàn)降低的趨勢;與肝組織相反,雄黃暴露后小鼠血漿中牛磺結(jié)合膽汁酸占比出現(xiàn)升高的趨勢,游離膽汁酸占比出現(xiàn)降低的趨勢,甘氨結(jié)合型膽汁酸占比也出現(xiàn)降低的趨勢。6.與對照組比較,雄黃染毒組小鼠血漿中游離型膽汁酸與甘氨結(jié)合型膽汁酸之間的比值、游離型膽汁酸與牛磺結(jié)合型膽汁酸之間的比值均升高;在肝組織中,游離型膽汁酸與?；墙Y(jié)合型膽汁酸之間的比值降低,初級膽汁酸和次級膽汁酸的比值降低。8.與對照組比較,鵝去氧膽酸（chenodeoxycholic acid,CDCA）、豬去氧膽酸（hyodeoxycholic acid,HDCA）、?；蛆Z去氧膽酸（taurochenodeoxycholic acid,TCDCA）和熊去氧膽酸（ursodeoxycholic acid,UDCA）在雄黃染毒組小鼠肝組織中顯著升高（P<0.05）;甘氨脫氧膽酸（glycodeoxycholic acid,GDCA）在雄黃染毒組小鼠肝組織中顯著降低（P<0.05）。脫氧膽酸（deoxycholic acid,DCA）、?；悄懰幔╰aurocholic acid,TCA）、?；切苋パ跄懰幔╰auroursodeoxycholic acid,TUDCA）、TCDCA在高劑量雄黃染毒組小鼠血漿中顯著升高（P<0.05）。雄黃暴露影響小鼠血漿和肝組織中膽汁酸之間的相關(guān)性,?；墙Y(jié)合膽汁酸之間和游離膽汁酸之間相關(guān)性較好且呈正相關(guān),甘氨結(jié)合型膽汁酸之間呈負(fù)相關(guān)。9.膽汁酸與氧化損傷指標(biāo)的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)雄黃染毒小鼠血漿中TCDCA與SOD呈正相關(guān),在肝組織中TCDCA與GSH-Px呈負(fù)相關(guān)。隨著雄黃染毒劑量的增加,血漿中甘氨結(jié)合型膽汁酸與氧化損傷指標(biāo)的相關(guān)性增強(qiáng)。10.采用PLS-DA對小鼠膽汁酸代謝譜進(jìn)行模式分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)雄黃暴露組與對照組小鼠血漿膽汁酸代謝譜的分離比肝臟膽汁酸代謝譜的分離明顯。采用OPLS-DA、VIP和P值進(jìn)行生物標(biāo)志物篩選,發(fā)現(xiàn)血漿中的TCA、TCDCA和肝組織中的HDCA、TCDCA可以作為雄黃誘導(dǎo)肝損傷的潛在生物標(biāo)志物。11.ROC曲線結(jié)果表明,肝組織中HDCA、TCDCA的AUC<0.3。血漿中TCA、TCDCA的AUC<0.1。12.與對照組比較,雄黃暴露組小鼠肝組織中Cyp7a1、Fxr、Bsep和Mrp2 m RNA表達(dá)升高,Ntcp m RNA顯著降低。結(jié)論:1.雄黃中砷可在小鼠肝組織蓄積導(dǎo)致小鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化、肝功能異常、肝組織氧化損傷。2.雄黃可引起小鼠膽汁酸譜發(fā)生變化,造成膽汁酸代謝異常。3.TCDCA為雄黃誘導(dǎo)小鼠肝損傷的敏感膽汁酸標(biāo)志物。
陳今超[2]（2020）在《基于miR-497/Bcl-2信號通路的水飛薊賓對阻塞性黃疸小鼠肝損傷研究》文中研究指明目的:采用重度阻塞性黃疸KM小鼠為實(shí)驗(yàn)研究模型,觀察水飛薊賓對阻塞性黃疸所致小鼠肝損傷的干預(yù)作用,并探討其通過影響miR-497表達(dá)進(jìn)而調(diào)控Bcl-2/Bax-Caspase-3信號通路相關(guān)因子差異表達(dá)的相關(guān)作用機(jī)制。方法:30只雄性KM小鼠隨機(jī)分為模型組（M）、水飛薊賓治療組（SFJB）、假手術(shù)組（SO）3組,每組10只。M組及SFJB組采用本課題組一種新的膽總管懸掛法構(gòu)建重度阻塞性黃疸肝損傷小鼠模型,SO組手術(shù)方式同M組,但不懸掛膽總管。術(shù)后48小時解除小鼠膽總管梗阻后,SFJB組予以水飛薊賓200mg·kg-1·d-1進(jìn)行灌胃,其余兩組小鼠予以等容量體積生理鹽水灌胃,共7周。在最后一次藥物干預(yù)后,當(dāng)晚對各組小鼠進(jìn)行禁食、禁飲處理,第二日上午予以戊巴比妥鈉麻醉,以摘除眼球取血,測定各組小鼠血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）、總膽汁酸（TBA）、堿性磷酸酶（ALP）含量;取出完整肝臟,對肝組織標(biāo)本進(jìn)行包埋切片后行HE染色,顯微鏡下觀察對比各組小鼠肝臟組織病理改變;免疫組化法檢測肝臟組織Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白差異表達(dá);ELISA測定肝組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)量;qPCR檢測肝組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及miR-497的表達(dá)水平。結(jié)果:（1）一般情況:SO組小鼠一般情況正常;M組小鼠毛發(fā)出現(xiàn)撓痕,精神萎靡,活躍情況減弱,耳尖、尾巴及鞏膜黃染,尿液呈黃色,大便顏色變淺;SFJB組情況較M組明顯改善。（2）血清學(xué):與SO組比較,M組血清中ALT、AST、TBIL、TBA及ALP含量升高（P<0.01）,與M組比較,SFJB組各指標(biāo)含量降低（P<0.01）。（3）HE染色:SO組肝細(xì)胞索及竇狀隙圍繞中央靜脈排列整齊,竇狀隙中存在少量紅細(xì)胞及炎細(xì)胞;M組可見肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死,大量核固縮細(xì)胞,肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)紊亂,竇狀隙中大量紅細(xì)胞及炎性細(xì)胞;SFJB組肝細(xì)胞排列欠整齊,炎性細(xì)胞浸潤減輕,未見壞死細(xì)胞。（4）免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:SFJB組、SO組小鼠肝組織Bax、caspase-3蛋白陽性表達(dá)面積低于M組（P<0.01）,Bcl-2高于M組（P<0.01）。（5）ELISA檢測結(jié)果:與M組比較,SO組、SFJB組Bcl-2蛋白含量升高（P<0.01）,Bax、Caspase-3蛋白含量下降（P<0.01）（6）qPCR結(jié)果顯示:與M組比較,SO組、SFJB組Bcl-2 mRNA表達(dá)升高（P<0.01）,Bax、Caspase-3mRNA表達(dá)及miR-497含量下降（P<0.01）。結(jié)論:水飛薊賓對阻塞性黃疸所致小鼠肝損傷有較好的改善作用,可明顯減輕肝損傷程度。其抗損傷作用機(jī)制可能與通過miR-497調(diào)控Bcl-2/Bax-Caspase-3信號通路相關(guān)因子的差異表達(dá)有關(guān)。
劉元進(jìn)[3]（2019）在《大鼠梗阻性黃疸后不同時間行膽道引流對其肝臟功能及組織病理的影響》文中認(rèn)為研究背景與目的:梗阻性黃疸可導(dǎo)致肝臟以及全身各系統(tǒng)的一系列病理生理改變,損傷肝臟功能,增加手術(shù)風(fēng)險;膽道引流可以解除膽管的梗阻狀態(tài),恢復(fù)肝臟功能。但是膽道引流的效果在不同患者之間存在很大差異,是什么原因造成了這種差異,目前仍沒有完善的解釋。對梗阻性黃疸患者在手術(shù)前應(yīng)用膽道引流進(jìn)行術(shù)前減黃,曾經(jīng)一度被肝膽外科界大力推崇,然而近年來有大量的臨床研究對術(shù)前減黃提出了質(zhì)疑,認(rèn)為它并沒有使患者從中獲益。這其中又存在哪些影響因素,值得探討。關(guān)于膽道梗阻后肝臟損傷的機(jī)制、生化指標(biāo)和肝組織病理變化的規(guī)律,已經(jīng)有大量的動物和臨床實(shí)驗(yàn)做了較為系統(tǒng)的闡述;但是關(guān)于膽道引流后的變化,詳細(xì)的報道較少。本研究通過建立大鼠梗阻性黃疸及膽道引流模型,觀察其肝功能和組織病理的變化過程,探討其在減黃前后的變化規(guī)律。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果有望進(jìn)一步闡明梗阻性黃疸以及膽道引流后肝臟的病理生理變化,有望進(jìn)一步探討影響膽道引流效果以及引流后肝損傷恢復(fù)速度的因素,有望為指導(dǎo)術(shù)前減黃的臨床應(yīng)用提供一些理論依據(jù)。研究方法:55只健康成年SD雄性大鼠,采用結(jié)扎膽總管并放置外引流管的方式建立膽道梗阻及引流模型。動物隨機(jī)分為梗阻3天外引流組（A組）、梗阻7天外引流組（B組）、梗阻14天外引流組（C組）、梗阻21天外引流組（D組）、梗阻28天外引流組（E組）以及對照組。各組于開放引流前,以及引流后第3、7、14、21、28、35天測定血清總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、血清前白蛋白（PA）以及凝血酶原時間（PT）,探討其肝功能變化規(guī)律。同時在不同時段采集肝臟組織標(biāo)本,觀察其病理變化。結(jié)果:隨梗阻時間延長,大鼠TBIL、DBIL、ALT、ALP升高,PA降低,PT延長,表明肝功能損害逐漸加重;肝臟組織病理變化從散在變性、壞死到匯管區(qū)上皮細(xì)胞增生、肝小葉結(jié)構(gòu)破壞漸進(jìn)發(fā)展,并最終導(dǎo)致肝纖維化。開放引流后,肝功能指標(biāo)與組織病理損傷逐漸恢復(fù),但梗阻時間越長恢復(fù)越慢。梗阻時間短的組,其肝功能和組織形態(tài)可以在較短時間內(nèi)恢復(fù)到接近正常水平;而梗阻時間長的組,其各項指標(biāo)和病理損傷即使經(jīng)過較長時間的引流也不能恢復(fù)正常。結(jié)論:膽道梗阻時間的長短是影響肝臟損傷程度以及梗阻解除后恢復(fù)速度的關(guān)鍵因素。在大鼠梗阻性黃疸后不同時間行膽道引流,其肝臟功能和組織病理的恢復(fù)速度有很大差異。梗阻時間達(dá)到一定程度后,即使解除梗阻,其肝臟損傷也可能難以逆轉(zhuǎn)。本研究結(jié)果表明大鼠膽道梗阻2周以內(nèi)膽道引流的效果較好,梗阻時間超過2周膽道引流的效果較差。
張東紅[4]（2019）在《運(yùn)動對阻塞性黃疸小鼠肝臟糖代謝的影響及其機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理研究目的:本研究選取的實(shí)驗(yàn)對象為阻塞性黃疸模型小鼠,以中等強(qiáng)度的有氧訓(xùn)練為干預(yù)方式,探討中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動對小鼠阻塞性黃疸致肝損傷糖代謝的影響,并通過PI3K/AKT/FoxO1信號通路的變化來探討阻塞性黃疸致肝損傷糖代謝的機(jī)制,和有氧運(yùn)動的干預(yù)機(jī)制,為臨床上治療和康復(fù)阻塞性黃疸致肝損傷提供實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。研究方法:選擇24只昆明小鼠,隨機(jī)把它們分成三組,對應(yīng)的組別分別為:空白對照組（n=8）,模型組（n=8）,有氧運(yùn)動組（n=8）,每組8只,給予基礎(chǔ)飼料和自由飲水,模型組和有氧運(yùn)動組進(jìn)行總膽管懸掛至腹壁48小時構(gòu)建阻塞性黃疸小鼠的模型,48小時后有氧運(yùn)動組剪斷膽總管的固定線,在正常飼養(yǎng)7天后才進(jìn)行無負(fù)重跑臺訓(xùn)練。先進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練,適應(yīng)之后采取中等強(qiáng)度無負(fù)重的跑臺訓(xùn)練,跑臺坡度的設(shè)置為0%,以10米每分鐘的速度,訓(xùn)練六周,每天訓(xùn)練60分鐘,每周日休息一天。6周后,在最后一次訓(xùn)練后小鼠取材的前一天晚上禁食,第二天進(jìn)行麻醉,麻醉完全后開始取材,觀察肝臟組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)的病理改變用HE染色法;血液生化檢測血糖,血清總膽紅素（TBIL）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的含量;用Elisa檢測各組小鼠肝臟磷酸酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、叉頭框蛋白1（FoxO1）、肝糖原、葡萄糖6磷酸酶（G6Pase）、糖原合成酶以及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的含量;RT-PCR技術(shù)檢測肝組織中FoxO1、PEPCK、G6PasemRNA的表達(dá)。研究結(jié)果:1、血清學(xué)結(jié)果:與空白對照組相比,模型組小鼠TBIL、ALT、AST的含量顯著增加（P<0.01）;與模型組相比,運(yùn)動組TBIL、ALT、AST的含量顯著下降（P<0.01）;與空白對照組相比,模型組小鼠血糖水平顯著性升高（P<0.05）,與模型組相比,運(yùn)動組小鼠血糖水平有所降低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）2、HE染色結(jié)果顯示:空白組小鼠肝細(xì)胞索顯現(xiàn)出以放射狀的狀態(tài)進(jìn)行排列;模型組小鼠肝細(xì)胞顯現(xiàn)出纖維化,而且纖維排列雜亂無章,間隔加寬,肝血竇有中性粒細(xì)胞的浸潤等;運(yùn)動組小鼠肝細(xì)胞纖維化有所改善,間隔變窄,肝小葉結(jié)構(gòu)變化不大。3、Elisa結(jié)果顯示:與空白對照組相比,模型組小鼠肝糖原的含量顯著上升（P<0.01）。與空白對照組相比較,模型組小鼠肝臟PEPCK、G6Pase的含量顯著上升（P<0.01）;與模型組相比較,運(yùn)動組G6Pase的含量顯著性降低（P<0.05）,PEPCK的含量顯著降低（P<0.01）。與對照組相比,模型組小鼠肝臟PI3K、AKT、FoxO1的含量顯著性下降（P<0.01）,與模型組相比,運(yùn)動組的PI3K、AKT、FoxO1的含量顯著性上升（P<0.01）。4、Realtime-PCR結(jié)果顯示:與空白對照組相比,模型組小鼠肝臟PEPCK、G6PasemRNA表達(dá)量顯著升高（P<0.01）,FoxO1mRNA表達(dá)量顯著降低,且差異有極顯著性（P<0.01）;與模型組相比,運(yùn)動組小鼠肝臟PEPCK、G6PasemRNA表達(dá)量非常顯著性降低（P<0.01）,FoxO1mRNA表達(dá)量非常顯著性升高（P<0.01）。結(jié)論:（1）本研究所復(fù)制的阻塞性黃疸致肝損傷模型的建立是成功的,且有氧運(yùn)動對阻塞性黃疸導(dǎo)致的肝損傷有一定的修復(fù)作用。（2）阻塞性黃疸致肝損傷小鼠在建模成功6周后,肝臟出現(xiàn)糖代謝紊亂,而有氧運(yùn)動對阻塞性黃疸致肝損傷小鼠糖代謝紊亂有改善作用,其機(jī)制是有氧運(yùn)動可能通過激活PI3K/AKT/FoxO1信號通路,改善肝臟糖代謝紊亂。
孟笑炎[5]（2019）在《膽汁酸通過激活TRPV4通道蛋白介導(dǎo)阻塞性黃疸血管低反應(yīng)的研究》文中認(rèn)為研究目的阻塞性黃疸（obstructive jaundice,OJ）是一種由于膽道、胰頭病變,引起肝內(nèi)或者肝外膽管發(fā)生阻塞,導(dǎo)致膽汁排出不暢、淤積反流所引發(fā)的一種臨床癥狀。該患者通常存在不同程度的心血管功能損害,手術(shù)麻醉中通常表現(xiàn)為患者血壓偏低以及對血管活性藥物反應(yīng)性減弱,稱為阻塞性黃疸的血管低反應(yīng)。對于血管反應(yīng)性的研究已超過半個世紀(jì),其中血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性及通透性改變的調(diào)節(jié)機(jī)制受到大量的研究關(guān)注。然而,膽汁淤積患者出現(xiàn)心血管反應(yīng)性受損的病因機(jī)制仍然不確定。據(jù)報道,瞬時受體電位陽離子通道V4（TRPV4）在心血管系統(tǒng)中,特別是在內(nèi)皮細(xì)胞上廣泛表達(dá),并且其可以調(diào)節(jié)下游多種細(xì)胞因子釋放與改變細(xì)胞對Ca2+離子的通透性,廣泛參與到各種病理生理情況下心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。目前,尚無研究報道過阻塞性黃疸時,TRPV4通道蛋白在血管反應(yīng)性的改變中是否發(fā)揮作用。本課題的目的是探索黃疸患者外周循環(huán)中增高的膽汁酸（Bile acids,BAs）通過調(diào)節(jié)大血管內(nèi)皮細(xì)胞上的TRPV4通道蛋白表達(dá),引起內(nèi)皮細(xì)胞Ca2+離子內(nèi)流、激活環(huán)氧合酶2（Cyclooxygenase 2,COX2）等改變,介導(dǎo)阻塞性黃疸的血管低反應(yīng)性發(fā)生。研究方法1、通過大鼠膽管結(jié)扎術(shù)（bile duct ligation,BDL）創(chuàng)建阻塞性黃疸的實(shí)驗(yàn)動物模型。獲取不同時間點(diǎn)的Sprague-Dawley（SD）模型大鼠胸主動脈段,并修剪至3-4毫米血管環(huán),在血管張力儀下測得其血管張力與收縮力,對比分析。檢測不同時間點(diǎn)胸主動脈血管中TRPV4蛋白及其mRNA表達(dá)情況。對張力儀下的血管使用TRPV4激動劑GSK1016790A,進(jìn)一步分析、驗(yàn)證TRPV4筒燈蛋白表達(dá)與BDL時間、血管張力之間的相關(guān)性。2、檢測BDL大鼠血清中膽汁主要成分膽汁酸、膽紅素的水平。體外培養(yǎng)大鼠胸主動脈內(nèi)皮細(xì)胞,分別向培養(yǎng)基中加入膽汁酸、膽紅素,設(shè)置對照組加入等體積的培養(yǎng)基,共同培養(yǎng)細(xì)胞。通過測定不同因素刺激下內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)TRPV4蛋白、mRNA表達(dá)情況,以及觀察TRPV4蛋白與內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)膜上的Dil蛋白免疫熒光共標(biāo)情況,探究阻塞性黃疸時,影響TRPV4蛋白表達(dá)改變的主要原因,以及TRPV4蛋白的表達(dá)部位。3、在不同數(shù)量級的濃度梯度的血管活性藥物乙酰膽堿和去甲腎上腺素的作用下,觀察BDL大鼠胸主動脈血管環(huán)收縮、舒張狀態(tài),以及觀察BDL模型動物同時給予TRPV4抑制劑HC-067047后血管收縮、舒張恢復(fù)情況,分析阻塞性黃疸血管活性藥物低反應(yīng)性的機(jī)制。進(jìn)一步探索TRPV4蛋白激活后的下游機(jī)制,使用藥物吲哚美辛、L-NAME和塞來昔布分別抑制非選擇性環(huán)氧化酶（即COX）、一氧化氮合成酶（即NOS）和選擇性環(huán)氧化酶COX2,觀察大鼠胸主動脈環(huán)在不同濃度血管收縮藥物作用下的收縮情況,并檢測BDL、BDL同時給予HC-067047后下游COX蛋白、mRNA表達(dá)情況。結(jié)果1、通過觀察判斷模型創(chuàng)建成功,獲取目標(biāo)血管。在含有KCL（60mM）的收縮溶液中,大鼠胸主動脈環(huán)的收縮張力隨著BDL時間呈遞減趨勢;胸主動脈環(huán)細(xì)胞中的TRPV4蛋白、mRNA表達(dá)呈時間依賴的遞增趨勢,均在第五天達(dá)到顯著差異。使用TRPV4蛋白激動劑GSK1016790A,胸主動脈環(huán)的舒張程度呈藥物濃度依賴性與模型創(chuàng)建時間依賴性的遞增趨勢。2、BDL模型大鼠血清中膽汁酸、膽紅素水平在第三天后均明顯增加并維持在較高水平。與對照組比較,膽汁酸培養(yǎng)基中的內(nèi)皮細(xì)胞TRPV4蛋白與mRNA表達(dá)顯著增加,而膽紅素培養(yǎng)基中的內(nèi)皮細(xì)胞TRPV4則無明顯的改變。免疫熒光顯示,TRPV4蛋白與內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)膜Dil蛋白完全共標(biāo)。細(xì)胞內(nèi)鈣顯示,膽汁酸培養(yǎng)基中的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子集聚較為明顯。3、大鼠胸主動脈環(huán)舒張程度隨乙酰膽堿濃度增加呈明顯遞增趨勢,使用HC-067047不能明顯減低血管環(huán)擴(kuò)張程度。血管環(huán)收縮程度亦隨去甲腎上腺素的藥物濃度呈遞增趨勢,使用HC-067047可以顯著抑制劑血管收縮。針對TRPV4下游分子使用不同抑制劑,結(jié)果顯示COX抑制劑對血管環(huán)收縮劑的血管收縮反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)作用較為明顯,NOS抑制劑L-NAME則不會對血管收縮產(chǎn)生影響。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),使用HC-067047可以顯著降低COX2蛋白、mRNA的表達(dá)。結(jié)論本研究可得出如下結(jié)論:1、阻塞性黃疸TRPV4蛋白表達(dá)增高與血管反應(yīng)性下降相關(guān)。BDL后大鼠血管環(huán)收縮張力下降;該下降程度與胸主動脈中的TRPV4蛋白升高趨勢相符,提示二者可能存在相關(guān)性;藥理學(xué)激活TRPV4蛋白后引起胸主動脈呈現(xiàn)藥物濃度依賴性舒張反應(yīng),明確了TRPV4蛋白的過表達(dá)參與BDL大鼠胸主動脈收縮張力的調(diào)節(jié)。2、膽汁酸介導(dǎo)主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞TRPV4蛋白表達(dá)增高。阻塞性黃疸時,個體外周血中膽汁酸、膽紅素水平明顯增高。細(xì)胞培養(yǎng)時加入膽汁酸刺激可以引起TRPV4的過表達(dá),且這種現(xiàn)象在膽紅素培養(yǎng)時不明顯,提示膽汁酸是膽汁淤積時引起血管張力改變的關(guān)鍵分子TRPV4蛋白表達(dá)增高的主要成分。細(xì)胞內(nèi)鈣成像結(jié)果佐證了這一結(jié)論,并驗(yàn)證了膽汁酸或是TRPV4通道蛋白引起的內(nèi)皮細(xì)胞鈣離子內(nèi)流的存在。3、TRPV4蛋白通過COX途徑參與黃疸血管低反應(yīng)性。阻塞性黃疸血管低反應(yīng)性表現(xiàn)為對血管收縮劑與血管舒張劑的反應(yīng)能力下降。TRPV4蛋白參與調(diào)控了血管低反應(yīng)性表現(xiàn)為對血管收縮劑不敏感。下游分子篩選時發(fā)現(xiàn),TRPV4-COX2途徑可能發(fā)揮主要作用。
吉日木巴圖[6]（2019）在《殘黃片制備工藝優(yōu)化與退黃作用機(jī)制研究》文中提出目的:殘黃片是由黃連、青黛、白礬、郁金4味藥組成的中藥復(fù)方制劑,是解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學(xué)中心用于治療慢性肝炎伴隨的黃疸持久不退——?dú)埩酎S疸的臨床專用藥,擁有四十余年的應(yīng)用歷史,退黃作用確切。目前,對該方退黃作用機(jī)制尚不明確,且方中青黛和白礬比重懸殊,在制備過程中對藥粉的均勻性和成型片劑的質(zhì)量尚有影響。本研究以解決該品存在的制劑問題和探索其退黃作用機(jī)制為目的,為保障該品質(zhì)量并進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。方法:（1）殘黃片制備工藝的優(yōu)化:篩選方中單藥的最佳超微粉碎工藝,依據(jù)結(jié)果結(jié)合中藥復(fù)合粒子制備方法設(shè)計3種殘黃片超微粉碎工藝并根據(jù)粉碎時間和粒徑分布關(guān)系進(jìn)行優(yōu)化篩選,確定3種工藝的最佳制備條件。進(jìn)而考察3個粉碎工藝制備的藥粉粒徑分布、比表面積、松密度、振密度和休止角,并進(jìn)行電鏡掃描形態(tài)分析和差示量熱法考察粉體熱穩(wěn)定性,綜合對比3種工藝藥粉的特性。在此基礎(chǔ)上制備不同粉碎工藝殘黃片和原粉碎工藝殘黃片各3個批次,考察不同工藝下的殘黃片成型中間體的得率,并對成品進(jìn)行高溫、高濕和強(qiáng)光影響因素試驗(yàn),考察片劑的外觀、片重差、崩解時限、脆碎度和小檗堿含量,評價不同粉碎工藝對殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性的提升貢獻(xiàn),篩選出殘黃片最佳粉碎工藝。（2）基于分子對接技術(shù)的殘黃片退黃作用機(jī)制研究:首先從TCMSP數(shù)據(jù)庫（http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php）中搜集方中黃連、青黛、郁金的成分,設(shè)定口服吸收利用度≥30%、相對分子質(zhì)量≤500、氫鍵供體數(shù)目≤5、氫鍵受體數(shù)目≤10、脂水分配系數(shù)不大于5為條件篩選類藥成分,Discovery Studio 2016（DS 2016）軟件對每個類藥成分進(jìn)行加氫,賦予CHARMm力場,定義為分子對接配體。黃疸治療相關(guān)靶點(diǎn)從CTD數(shù)據(jù)庫（http://ctdbase.org/）以“jaundice”、“cholestatic liver disease”為關(guān)鍵詞獲取黃疸相關(guān)基因,并輸入到Drug-Bank數(shù)據(jù)庫（https://www.drugbank.ca/）中查詢已上市藥物的作用靶點(diǎn)及其PDB ID,再從PDB數(shù)據(jù)庫（http://www.rcsb.org/pdb/home/home.do）中以ID下載治療黃疸相關(guān)靶蛋白,DS 2016軟件刪去原配體以及水分子,去多構(gòu)象,補(bǔ)充氨基酸殘基,加氫,定義為分子對接受體。運(yùn)用DS 2016軟件LibDock模塊設(shè)定對接參數(shù),max hits to save為200、max number of hits為1000、minimum LibDock score為105、conformation method為FAST,將定義的配體成分與受體一一對接評價,結(jié)果以LibDock score打分函數(shù)給出。對LibDock score大于105的成分-靶點(diǎn)名稱進(jìn)行規(guī)范化,將成分-靶點(diǎn)數(shù)據(jù)對導(dǎo)入Gephi 0.9.2軟件,Fruchterman-Reingold布局,刻畫成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò),經(jīng)其數(shù)據(jù)統(tǒng)計模塊分析網(wǎng)絡(luò)的密度、介數(shù)和平均路徑,評價其穩(wěn)定性,明確對網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)定性有重要貢獻(xiàn)的殘黃片成分和靶點(diǎn),并以靶點(diǎn)功能分類闡述殘黃片退黃作用機(jī)制。（3）殘黃片對ANIT誘導(dǎo)黃疸模型大鼠的退黃作用機(jī)制研究:正常組以10 mL·kg-1·d-1灌胃生理鹽水連續(xù)7天,大豆油10 mL·kg-1灌胃模擬造模。模型組以10 mL·kg-1·d-1灌胃生理鹽水連續(xù)7天,α-萘異硫氰酸酯（ANIT）75 mg·kg-1的大豆油溶液灌胃造模。殘黃片（CHP）組以0.315 g·kg-1·d-1劑量灌胃工藝優(yōu)化殘黃片連續(xù)7天,ANIT以75 mg·kg-1的大豆油溶液灌胃造模。殘黃片高劑量（CHP高）組以0.710 g·kg-1·d-1劑量灌胃工藝優(yōu)化殘黃片連續(xù)7天,ANIT以75 mg·kg-1的大豆油溶液灌胃造模。原殘黃片（原CHP）組以0.315 g·kg-1·d-1劑量灌胃原工藝殘黃片連續(xù)7天,ANIT以75 mg·kg-1的大豆油溶液灌胃造模。熊去氧膽酸（UDCA）組以0.135 g·kg-1·d-1劑量灌胃熊去氧膽酸片連續(xù)7天,ANIT以75 mg·kg-1的大豆油溶液灌胃造模。各組大鼠于第5 d給藥2 h后,模型組、CHP組、UDCA組灌胃ANIT復(fù)制黃疸模型,正常組灌胃等體積大豆油模擬造模,于第7 d給藥2 h后腹腔注射20%烏來糖(20 mL·kg-1)溶液麻醉,腹主動脈采血,采集肝和回腸組織。工藝優(yōu)化前后殘黃片退黃保肝作用的比較:通過檢測血清總膽紅素（TBIL）、總膽汁酸（TBA）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和堿性磷酸酶（ALP）水平,比較工藝優(yōu)化殘黃片和原粉碎工藝殘黃片的退黃保肝作用,確定機(jī)制研究組別。并進(jìn)行HE染色觀察大鼠肝組織病變情況。膽汁肝腸循環(huán)角度開展退黃機(jī)制研究:RT-PCR檢測肝組織法尼醇X受體（FXR）、孕烷X受體（PXR）、組成性雄烷受體（CAR）、膽固醇7α-羥化酶（CYP7A1）、葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（UGT1A1）、膽汁酸鹽外排蛋白（BSEP）、多耐藥相關(guān)蛋白2（MRP2）、Na+-牛磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)體（NTCP）、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1A1（OATP1A1）和回腸組織FXR、頂端Na+-膽汁酸協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)體（ASBT）、回腸膽汁酸結(jié)合蛋白（IBABP）、MRP2蛋白的mRNA表達(dá)水平。Western blot檢測肝組織FXR、CYP7A1、UGT1A1、BSEP、MRP2、NTCP、OATP1A1和回腸組織FXR、IBABP、MRP2蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:（1）篩選確定了殘黃片組方單藥的最佳超微粉碎時間:黃連25 min、青黛10 min、白礬5 min、郁金25 min。工藝1最佳粉碎條件為4味藥按比例混合后超微粉碎20 min。黃連郁金粉碎復(fù)合最佳時間為25 min,青黛白礬粉碎復(fù)合最佳時間為10 min,即工藝2最佳粉碎條件為黃連郁金粉碎復(fù)合25 min,青黛白礬粉碎復(fù)合10 min,再將二者混勻。工藝3粉碎條件為黃連郁金粉碎復(fù)合25min,加入青黛粉碎復(fù)合10 min,最后加入白礬粉碎復(fù)合5 min。3種粉碎工藝制備的粉體特性各有差異,粉體電鏡掃描形態(tài)分析上工藝1粉體未見復(fù)合粒子結(jié)構(gòu),分散不均勻,粉體顆粒的大小差異較大。工藝2粉體偶見復(fù)合粒子結(jié)構(gòu),但分散不均勻,局部有分層。工藝3粉體全視野可見結(jié)構(gòu)規(guī)整的蜂窩狀復(fù)合粒子結(jié)構(gòu),粉體分散均勻。粉體熱穩(wěn)定性方面工藝1比熱容為262.1 J·g-1,工藝2比熱容為242.7 J·g-1,工藝3比熱容為295.9 J·g-1,熱穩(wěn)定性工藝3最佳。3種超微粉碎工藝對成型中間體的得率均有提升,高溫、高濕、強(qiáng)光影響因素下工藝2和工藝3片各項檢測合格,提升了殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性。（2）通過殘黃片成分的類藥性篩選共得到了174個成分,其中黃連25個,成分類型主要有異喹啉類生物堿、有機(jī)酸和木脂素類;青黛14個,主要為吲哚類生物堿;郁金135個,主要由倍半萜類和二苯基庚烴（姜黃素）類成分組成。搜集得到治療黃疸相關(guān)靶點(diǎn)共32個,分子對接篩選出作用靶點(diǎn)14個,潛在活性成分共37個。成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)分析得出穆坪馬兜鈴酰胺、corchoroside A、槲皮素、去甲氧基姜黃素、小檗浸堿、榿木酮、黃柏酮、氫化小檗堿、姜黃素、柚皮素共10個成分與單胺氧化酶A、前列腺素合酶2、內(nèi)皮型一氧化氮合酶、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、細(xì)胞色素P450 2E1、GTP環(huán)化水解酶1、法尼醇X受體等7個以上靶點(diǎn)作用,對成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)定性具有重要貢獻(xiàn),可能通過調(diào)節(jié)膽紅素代謝、調(diào)控膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)、抑制免疫與炎癥反應(yīng)、影響肝臟膠原形成等途徑發(fā)揮退黃作用。（3）退黃保肝作用比較結(jié)果顯示,模型組大鼠血清TBIL、TBA、ALT、AST、ALP含量顯著高于正常組（P<0.01）,表明黃疸模型復(fù)制成功。對比模型組,CHP組、原CHP組和UDCA組血清TBIL、TBA、ALT、AST、ALP水平均有顯著降低（P<0.01或P<0.05）,表明殘黃片中劑量(0.315 g·kg-1·d-1)的退黃作用明顯。而CHP高劑量組TBIL、TBA水平高于模型組,有加重黃疸的風(fēng)險。工藝優(yōu)化殘黃片以0.315 g·kg-1·d-1的劑量干預(yù)對降低血清TBIL、TBA、ALT、AST、ALP水平的作用優(yōu)于UDCA（P<0.01）和原CHP,提示殘黃片工藝優(yōu)化后促進(jìn)了退黃保肝作用,且中劑量作用優(yōu)于高劑量。HE染色結(jié)果顯示正常組大鼠肝組織以小葉間靜脈為中心,規(guī)整排列,肝細(xì)胞間緊密連接,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整,細(xì)胞核大而圓,未見壞死或炎性細(xì)胞浸潤。模型組大鼠肝組織病變明顯,肝細(xì)胞排列疏松紊亂,多數(shù)肝細(xì)胞核萎縮且有空泡產(chǎn)生,細(xì)胞間緊密連接被破壞。CHP組肝臟病變不明顯,肝細(xì)胞排列規(guī)整,緊密連接破壞較小,多數(shù)細(xì)胞核大而圓,少見空泡樣變性。RT-PCR和western blot檢測結(jié)果顯示,與模型組比較CHP能激活大鼠肝組織FXR的mRNA和蛋白的表達(dá)升高,顯著降低膽汁酸合成限速酶CYP7A1的mRNA轉(zhuǎn)錄和翻譯（P<0.01）,抑制膽汁酸合成;促進(jìn)PXR和UGT1A1的mRNA表達(dá),顯著提高膽紅素代謝酶UGT1A1的表達(dá)（P<0.01）,促進(jìn)肝內(nèi)膽紅素的親水解毒和易于轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟。殘黃片對肝內(nèi)膽汁成分的外排蛋白BSEP、MRP2的mRNA和蛋白的表達(dá)均有顯著提高作用（P<0.01）,促進(jìn)膽汁酸和膽紅素排出肝臟,緩解肝內(nèi)膽汁淤積;并能明顯抑制膽汁肝臟攝取相關(guān)OATP1A1的表達(dá)（P<0.01）,減輕肝內(nèi)膽汁淤積情況。與模型組比較CHP能提升肝臟NTCP的mRNA和蛋白的表達(dá)。在回腸,與模型組比較CHP和UDCA均能顯著提高FXR的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá)（P<0.01）,明顯抑制ASBT mRNA的轉(zhuǎn)錄,并顯著提高M(jìn)RP2的mRNA和蛋白的表達(dá)（P<0.01）,抑制膽汁酸的腸吸收并促進(jìn)膽紅素等的腸道排出。與模型組比較CHP還能促進(jìn)IBABP的mRNA和蛋白的表達(dá)使其趨于正常水平。結(jié)論:（1）采用復(fù)合粒子制備方法優(yōu)化殘黃片粉碎工藝,使其粉體形成結(jié)構(gòu)規(guī)整、分散均勻、熱穩(wěn)定性好的復(fù)合粒子,解決了青黛白礬混合不均勻和裂片、碎片的問題,并提高了制劑中間體得率,提升了殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性。（2）通過分子對接篩選出殘黃片退黃潛在活性成分37個,作用靶點(diǎn)14個,分析得出其退黃機(jī)制可能與調(diào)節(jié)膽紅素代謝、調(diào)控膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn)、抑制免疫與炎癥反應(yīng)、影響肝臟膠原形成等作用有關(guān)。（3）殘黃片對膽汁的肝腸循環(huán)有調(diào)節(jié)作用,工藝優(yōu)化殘黃片以0.315 g·kg-1·d-1的中劑量干預(yù)黃疸模型大鼠,退黃保肝作用優(yōu)于其高劑量干預(yù)和原粉碎工藝殘黃片的治療作用,表明殘黃片制備工藝的優(yōu)化提升了其退黃保肝作用,且提示高劑量給藥有加重黃疸的風(fēng)險。該品能提高黃疸模型大鼠肝臟FXR的表達(dá),顯著抑制CYP7A1的mRNA轉(zhuǎn)錄和翻譯,減少膽汁酸的合成,緩解膽汁淤積。殘黃片還能明顯抑制OATP1A1的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá),減少膽紅素和部分膽汁酸的肝臟攝取,緩解肝內(nèi)膽汁淤積。同時,殘黃片還提高了肝臟BSEP和MRP2的表達(dá),促進(jìn)了肝內(nèi)膽汁酸、膽紅素的排出,降低了淤積的膽汁成分對肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞的損傷。殘黃片通過激活肝臟FXR、PXR的基因轉(zhuǎn)錄和提高FXR的表達(dá),顯著提升了UGT1A1和MRP2的表達(dá),促進(jìn)了未結(jié)合膽紅素親水解毒和排出肝臟。在回腸殘黃片提高了FXR和MRP2的mRNA和蛋白的表達(dá),促進(jìn)膽汁成分的腸分泌排出。本研究解決了現(xiàn)有工藝中存在的青黛白礬混合不均勻和成品質(zhì)量不穩(wěn)定的問題,提升了殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性,預(yù)測了其潛在活性成分和退黃作用靶點(diǎn),比較了工藝優(yōu)化前后殘黃片退黃保肝作用,并從調(diào)節(jié)膽汁肝腸循環(huán)角度驗(yàn)證了分子對接預(yù)測的退黃作用靶點(diǎn)和機(jī)制。
何航道[7]（2018）在《多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)實(shí)踐研究 ——以文山衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)為例》文中指出目前,中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)生物化學(xué)課程由于自身特點(diǎn)、師生因素等,教學(xué)狀況不容樂觀。本研究的主要目的是在中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)的生物化學(xué)教學(xué)中,以生物化學(xué)知識為基礎(chǔ),通過融合十一門專業(yè)課程相關(guān)知識點(diǎn),有效地構(gòu)架生物化學(xué)與專業(yè)課程之間的聯(lián)系,同時,讓生物化學(xué)知識變得更易于理解,提升學(xué)生學(xué)習(xí)生物化學(xué)的興趣,使學(xué)生重視生物化學(xué),進(jìn)而為后續(xù)專業(yè)課程的學(xué)習(xí)打下一定的基礎(chǔ)。筆者通過調(diào)查法分析了當(dāng)前中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)生物化學(xué)教學(xué)中學(xué)生學(xué)習(xí)狀況、教師教學(xué)狀況,并通過文獻(xiàn)法學(xué)習(xí)了學(xué)科融合教學(xué)的相關(guān)理論。在此基礎(chǔ)上,梳理生物化學(xué)課程與十一門專業(yè)課程有聯(lián)系的知識點(diǎn),將這些知識點(diǎn)體現(xiàn)在新的生物化學(xué)教學(xué)設(shè)計中,并對文山衛(wèi)生學(xué)校兩個實(shí)驗(yàn)班學(xué)生進(jìn)行多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)實(shí)踐。通過行動研究法和實(shí)驗(yàn)法,對教學(xué)設(shè)計進(jìn)行總結(jié)、反思、改進(jìn),最后通過調(diào)查研究法分析實(shí)踐結(jié)果。實(shí)踐證明,在生物化學(xué)教學(xué)中融合十一門專業(yè)課程相關(guān)內(nèi)容,有助于引導(dǎo)學(xué)生搭建學(xué)科間知識的聯(lián)系、建立知識的整體觀,有助于提升學(xué)生學(xué)習(xí)生物化學(xué)的興趣、理論聯(lián)系實(shí)際和綜合分析問題的能力。該研究還使生物化學(xué)能更好的為專業(yè)課程服務(wù),對提高生物化學(xué)知識在學(xué)生入職后的使用度,最終改變中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)生物化學(xué)教學(xué)現(xiàn)狀有重要意義。
安然[8]（2017）在《阻塞性黃疸肝損傷及慢性肝病患者血清肝活素水平測定的臨床意義》文中指出目的:探究肝活素（HPS）在阻塞性黃疸所致肝損傷的診斷以及慢性肝病肝功能評估中的作用。方法:隨機(jī)選擇60例阻塞性黃疸患者、68例慢性肝病患者及30例健康體檢者,ELISA法測定其血清HPS水平,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、血漿白蛋白（ALB）、凝血酶原時間（PT）由我院檢驗(yàn)科檢測。根據(jù)得出的TBIL、ALB、PT綜合有無肝性腦病和腹水對慢性肝病患者中無肝衰竭患者進(jìn)行Child-Pugh分級（CPC）,發(fā)生肝衰竭的患者則根據(jù)衰竭類型分組。68例慢性肝病患者,非肝衰竭者Child A級13例、Child B級21例、Child C級10例,肝衰竭者中CLF者13例,ACLF者11例。分析兩種肝損傷患者與正常人血清HPS水平有無差異;繪制受試者工作特征曲線（ROC）,通過觀察AUC大小判斷HPS對阻塞性黃疸所致肝損傷的診斷價值;對阻塞性黃疸患者血清HPS和ALT進(jìn)行相關(guān)性分析;分析慢性肝病患者HPS與CPC以及肝衰竭之間的關(guān)系。結(jié)果:1.阻塞性黃疸和慢性肝病患者血清HPS水平均顯著高于對照組（均P<0.01）。2.HPS在阻塞性黃疸肝損傷診斷中的曲線下面積達(dá)到0.938,最佳節(jié)點(diǎn)是141.87ng/ml。3.阻塞性黃疸患者血清中HPS與ALT呈正相關(guān),rs=0.914（P<0.01）。4.慢性肝病中非衰竭者Child A、Child B、Child C與慢加急性肝衰竭（ACLF）、慢性肝衰竭（CLF）5組之間兩兩比較,非肝衰竭組中,隨著CPC升高,HPS水平也逐漸升高（均P<0.05）,兩組肝衰竭血清HPS水平均高于非衰竭各組（均P<0.05）,兩組肝衰竭之間HPS水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.58）。結(jié)論:1.阻塞性黃疸肝損傷和慢性肝病患者血清HPS水平升高。2.血清HPS水平測定能夠用于阻塞性黃疸肝損傷的診斷,且具有較高的準(zhǔn)確性和特異性。3.阻塞性黃疸患者血清中HPS與ALT具有較好的正相關(guān)性,綜合HPS本身增殖因子的特性,認(rèn)為其能夠更好地反映肝損傷嚴(yán)重程度。4.慢性肝病患者血清HPS水平隨著病情嚴(yán)重程度的加重而升高,作為一種高特異性血清標(biāo)記物配合CPC有可能對慢性肝病患者肝功能做出更為精確的評估,了解有無惡化趨勢,預(yù)知肝衰竭的發(fā)生;同時配合肝衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn),早期診斷及時治療,對降低肝衰竭患者并發(fā)癥發(fā)生率和死亡率有重要的臨床意義。
龍躍[9]（2015）在《一氧化氮介導(dǎo)阻塞性黃疸alpha腎上腺素能血管低反應(yīng)性的機(jī)制及代謝組學(xué)研究》文中認(rèn)為阻塞性黃（?）血管低反應(yīng)性是其并發(fā)癥發(fā)生和死亡率增高的一個主要機(jī)制。臨床對血管活性藥物治療的反應(yīng)減弱或不反應(yīng),也與血管低反應(yīng)性有關(guān),且嚴(yán)重影響著治療效果。其產(chǎn)生原因可部分解釋為血清前列腺素產(chǎn)生增加、牛膽酸鈉水平增加、內(nèi)毒素血癥、NO過量產(chǎn)生、內(nèi)源性阿片肽水平增加。阻塞性黃疸血管腎上腺素能低反應(yīng)性的發(fā)生可能與血管α1-腎上腺素能受體活性缺失有關(guān),α2-腎上腺素能受體的脫敏作用也可能在膽汁淤積時發(fā)生。目前尚沒有檢索到國內(nèi)外有關(guān)阻塞性黃疸α-腎上腺素受體血管低反應(yīng)性發(fā)生機(jī)制的臨床研究報道。近年來,許多研究證實(shí),阻塞性黃疸可導(dǎo)致體內(nèi)NO合成增多,有證據(jù)表明NO在膽汁淤積引發(fā)的血管低反應(yīng)性中起作用。本研究首先選取了膽道和胰頭部腫瘤引起的膽汁淤積性黃疸患者,ASAI-Ⅱ級,另外,選取ASAI-Ⅱ級,年齡、性別、體重等一般情況相似的非黃疸患者（原發(fā)性肝癌或肝血管瘤等）作為對照組。在手術(shù)開始前,利用Swan-ganz導(dǎo)管等測定基線MAP、HR、CI、SVR和SVRI后,持續(xù)輸注遞增濃度的去甲腎上腺素5min（30、60ng.kg-1 min-1,PE、Dex方法類似,PE濃度為160、320ng.kg-1min-1, Dex濃度為0.5、1、2ug kg-1h-1）,并重復(fù)測量血流動力學(xué)數(shù)據(jù)。在入室后評估血管反應(yīng)性之前收集靜脈血樣本。其次在Sprague Dawley雄性大鼠采用離體血管功能實(shí)驗(yàn)探討了一氧化氮對血管低反應(yīng)性發(fā)生機(jī)制的影響。首先探討了內(nèi)皮、一氧化氮合酶抑制劑L-NAME對血管收縮反應(yīng)的影響,然后根據(jù)結(jié)果利用硝普鈉作為一氧化氮供體探討了一氧化氮引起阻塞性黃疸血管舒張的機(jī)制。首先分別用選擇性鳥苷酸環(huán)化酶抑制劑ODQ、非選擇性K+通道阻斷劑四乙銨TEA（非選擇性IKca通道阻斷劑）,BKCa的特異性阻斷劑iberiotoxin及卡律蝎毒素charybdotoxin,和格列本脲（KATP通道阻斷劑）,4-氨基毗啶4-AP（電壓門控K+通道阻斷劑）和氯化鋇（Kir通道阻斷劑）培育30min,然后加入PE達(dá)到最大收縮幅度。隨后得到SNP（10-9至10-6mol/L）的累積濃度-反應(yīng)曲線。為探討血清中與血管低反應(yīng)性有關(guān)的代謝物,SD雄性大鼠16只,隨機(jī)分為膽總管結(jié)扎組（n=8）和假手術(shù)對照組（n=8）。手術(shù)后3天收集血清使用反相色譜與親水色譜（HILIC）聯(lián)合四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（Q-TOF MS）的方法進(jìn)行代謝組學(xué)分析。并依據(jù)代謝組學(xué)所提示結(jié)果檢測血清中丙二醛（MDA）、總抗氧化力（T-AOC）.谷胱甘肽（GSH）、氧化谷胱甘肽（GSSG）和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性來評估氧化應(yīng)激狀態(tài)。主要研究結(jié)果如下：1.臨床研究：（1）在NA60ng.kg "’min-1持續(xù)泵注5min后,黃疸患者M(jìn)AP增加值顯著低于非黃疸患者（14.77±6.37mmHg VS 18.12±7.35mmHg, p<0.05）,黃疸組和非黃疸組SVR, SVRI均顯著增加,但其增加值兩組間均沒有統(tǒng)計學(xué)差異（SVR 205.23±102.65 dyn.s.cm-5m2 VS 281.47±182.58 dyn.s.cm-5m2, p>0.05; SVRI為326.14±165.99 dyn.s.cm-5m2 VS 434.00±300.23 dyn.s.cm-5m2,p>0.05）.兩組患者給予兩種不同劑量的NA時CI值均沒有顯著的改變。（2）在去氧腎上腺素320ng.kg-1min-1持續(xù)泵注5min后阻塞性黃疸患者M(jìn)AP?SVR、SVRI增加值顯著低于非黃疸組患者（10.11±7.10mmHg VS 16.78±5.71mmHg,p<0.05; SVR 123.67±99.18 dyn.s.cm-5m2 VS 211.83±91.98 dyn.s.cm-5m2, p<0.05; SVRI 206.50±159.67 dyn.s.cm-5m2 VS 369.83±168.92dyn.s.cm-5m2, p<0.05）。兩組患者給予兩種不同劑量的PE時CI值均沒有顯著的改變。（3）7例非黃疸組患者在Dex 0.5ug.kg-1h-1持續(xù)泵注5min后,平均動脈壓（MAP）升高（p<0.05）心指數(shù)（CI）顯著增加（p<0.01）,外周血管阻力（SVR）、外周血管阻力指數(shù)（SVRI）顯著下降（p<0.05）。在Dex2μg.kg-1h-1持續(xù)泵注5min后阻塞性黃疸患者M(jìn)AP、SVR, SVRI增加值均顯著低于非黃疸組患者（MAP8.13±5.80mmHg VS 11.83±4.44mmHg, p<0.05;SVR 115.94±132.19 dyn.s.cm-5m2 VS 244.70±171.58 dyn.s.cm-5m2, p<0.05; SVRI 192.53±206.94 dyn.s.cm-5m2 VS 413.00±287.96dyn.s.cm-5m2, p<0.01）。兩組患者CI值僅在非黃疸患者給予Dex2μg.kg-1h-1持續(xù)泵注5min與基線值相比顯著降低,從3.32±0.53L/min.m2降至3.15±0.61 L/min.m2（p<0.01）。2.離體實(shí)驗(yàn)：（1）SD大鼠膽道結(jié)扎3天后對去甲腎上腺素的血管收縮反應(yīng)明顯減弱,去除內(nèi)皮或使用L-NAME孵育后血管反應(yīng)性明顯恢復(fù)。（2）膽道結(jié)扎7天與假手術(shù)7天組大鼠胸主動脈對SNP的舒張反應(yīng)沒有明顯差異（p>0.05）,使用ODQ孵育后兩組舒張反應(yīng)基本消失（p<0.001）;TEA、iberiotoxin及charybdotoxin孵育后BDL、sham組舒張反應(yīng)均有所減弱,TEA、charybdotoxin孵育后sham7天組大鼠離體胸主動脈環(huán)對累積濃度的SNP的舒張反應(yīng)明顯減弱（p<0.05）;4-AP、Bacl2孵育后舒張反應(yīng)無明顯變化；Gly孵育后舒張反應(yīng)均有所增強(qiáng),其中假手術(shù)組有顯著差異（p<0.05）。3.代謝組學(xué)：膽道結(jié)扎3天后主要改變包括L-苯丙氨酸,L-谷氨酸,L-酪氨酸,犬尿氨酸,L-乳酸,溶血磷脂酰膽堿（LysoPCc（14:0））,甘氨酸和琥珀酸水平升高,L-纈氨酸,磷脂酰膽堿pCb（19：0/0：0）,?；撬?棕櫚酸,L-異亮氨酸和檸檬酸代謝產(chǎn)物降低。膽道結(jié)扎后GSH,T-AOC降低,SOD,GSH-Px活性下降,MDA水平上升。結(jié)論1.阻塞性黃疸患者alpha-1、alpha-2B腎上腺素受體敏感性明顯減弱,可能部分歸因于阻力血管反應(yīng)性降低。alpha-2A腎上腺素受體激動可能對血壓影響小,心功能增強(qiáng),外周血管阻力下降。2內(nèi)皮相關(guān)的NO在阻塞性黃疸血管低反應(yīng)性中起主要作用,NO主要通過非KCa通道引起B(yǎng)DL大鼠胸主動脈舒張。3.阻塞性黃疸大鼠存在廣泛的氧化應(yīng)激,犬尿氨酸水平升高。
尹凱歌,馮志杰[10]（2012）在《膽汁酸的代謝、生理作用及其臨床意義》文中認(rèn)為膽汁酸通過腸肝循環(huán)代謝,具有促進(jìn)脂類消化吸收、防止膽道結(jié)石生成、增加膽汁分泌、排泄等多種生物學(xué)作用.血清膽汁酸測定可反映急性肝炎慢性化、慢性肝炎炎癥和纖維化程度、肝硬化門脈高壓以及重癥肝炎的病情演變,是梗阻性黃疸患者梗阻解除的早期敏感指標(biāo).另外,血清膽汁酸測定對炎癥性腸病、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積、先天性膽道疾病、肝移植等疾病的診斷也有一定價值.
二、阻塞性黃疸病人空腹血清總膽汁酸的檢測意義（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、阻塞性黃疸病人空腹血清總膽汁酸的檢測意義（論文提綱范文）
（1）基于靶標(biāo)代謝組學(xué)策略的雄黃誘導(dǎo)肝損傷小鼠膽汁酸類生物標(biāo)志物研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略語 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要試劑和儀器 |
| 2.1.1 主要試劑 |
| 2.1.2 主要儀器 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)條件的無毒化處理 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.3 測定指標(biāo)及方法 |
| 2.3.1 肝組織和全血中砷含量的測定 |
| 2.3.2 血漿ALT,AST,TC和 TBA的測定 |
| 2.3.3 肝組織病理形態(tài)觀察 |
| 2.3.4 肝組織MDA、GSH-Px、SOD和 CAT水平的測定 |
| 2.3.5 肝組織和血漿中14 種膽汁酸UHPLC-MS/MS分析方法的建立及方法驗(yàn)證 |
| 2.3.6 雄黃誘導(dǎo)肝損傷模型中肝組織和血漿膽汁酸生物標(biāo)志物的篩選 |
| 2.3.7 雄黃誘導(dǎo)肝損傷模型中肝組織中與膽汁酸代謝相關(guān)基因的測定 |
| 2.3.8 數(shù)據(jù)處理 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 雄黃暴露對小鼠全血和肝組織中的砷含量的影響 |
| 3.2 雄黃暴露對小鼠體重、臟器系數(shù)、血漿ALT、AST活力、TBA、TC和肝臟病理形態(tài)的影響 |
| 3.3 雄黃暴露對小鼠肝組織中MDA和抗氧化酶活力的影響 |
| 3.4 雄黃暴露對小鼠肝組織和血漿膽汁酸譜的影響 |
| 3.4.1 方法學(xué)考察結(jié)果 |
| 3.4.2 雄黃暴露對小鼠血漿和肝組織中總膽汁酸、游離膽汁酸和結(jié)合膽汁酸水平的影響 |
| 3.4.3 雄黃暴露對小鼠肝組織和血漿中總膽汁酸、游離膽汁酸和結(jié)合膽汁酸百分比的影響 |
| 3.4.4 雄黃暴露對初級/次級膽汁酸和游離/結(jié)合型膽汁酸比值的影響 |
| 3.4.5 雄黃暴露對小鼠肝組織和血漿中各膽汁酸的影響 |
| 3.5 雄黃對小鼠肝組織和血漿中膽汁酸之間的相關(guān)性的影響 |
| 3.6 雄黃暴露對小鼠肝組織和血漿中膽汁酸與氧化損傷指標(biāo)的相關(guān)性分析 |
| 3.7 雄黃暴露小鼠肝組織和血漿膽汁酸譜的代謝組學(xué)分析 |
| 3.7.1 雄黃對小鼠肝組織和血漿膽汁酸代謝譜的多元分析 |
| 3.7.2 雄黃誘導(dǎo)肝損傷小鼠肝組織和血漿的膽汁酸生物標(biāo)志物的篩選 |
| 3.7.3 雄黃誘導(dǎo)肝損傷小鼠肝組織和血漿膽汁酸生物標(biāo)志物的評價 |
| 3.8 雄黃暴露對小鼠肝組織中膽汁酸代謝相關(guān)基因的影響 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 本研究創(chuàng)新性的自我評價 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 膽汁酸代謝與肝臟疾病的關(guān)系研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 社會實(shí)踐 |
| 攻讀學(xué)位期間獲得的研究成果 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（2）基于miR-497/Bcl-2信號通路的水飛薊賓對阻塞性黃疸小鼠肝損傷研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文縮略詞 |
| 第1章 緒論 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)對象 |
| 2.2 主要試劑及儀器 |
| 2.2.1 主要試劑 |
| 2.2.2 主要儀器 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 實(shí)驗(yàn)分組 |
| 2.3.2 動物模型的構(gòu)建 |
| 2.3.3 給藥方案 |
| 2.3.4 樣品采集與處理 |
| 2.3.5 血清學(xué)指標(biāo)檢測 |
| 2.3.6 病理學(xué)觀察 |
| 2.3.6.1 組織包埋切片 |
| 2.3.6.2 蘇木精-伊紅(HE)染色 |
| 2.3.7 免疫組織化學(xué)染色 |
| 2.3.8 ELISA檢測肝組織Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白 |
| 2.3.9 qPCR技術(shù)檢測肝組織Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及miRNA-497表達(dá) |
| 2.3.9.1 Trizol法提取肝組織mRNA |
| 2.3.9.2 qPCR檢測肝組織Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表達(dá) |
| 2.3.9.3 qPCR檢測肝組織中miR-497 表達(dá) |
| 2.3.10 qPCR數(shù)據(jù)統(tǒng)計 |
| 2.4 質(zhì)量控制 |
| 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 模型的構(gòu)建及一般情況 |
| 3.2 血清指標(biāo)檢測 |
| 3.3 肝臟HE染色形態(tài)學(xué)觀察 |
| 3.4 肝組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 |
| 3.5 肝組織Bcl-2信號通路相關(guān)蛋白含量 |
| 3.6 肝組織Bcl-2 信號通路相關(guān)因子m RNA表達(dá)水平 |
| 3.7 miR-497表達(dá)水平 |
| 第4章 討論 |
| 4.1 阻塞性黃疸小鼠模型構(gòu)建 |
| 4.2 血清指標(biāo)檢測結(jié)果分析 |
| 4.3 肝組織HE染色結(jié)果分析 |
| 4.4 阻塞性黃疸小鼠Bcl-2信號通路相關(guān)因子分析 |
| 4.5 miR-497 的調(diào)控作用分析 |
| 4.6 水飛薊賓對阻塞性黃疸小鼠miR-497/Bcl-2 信號通路的干預(yù)作用 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果 |
| 致謝 |
（3）大鼠梗阻性黃疸后不同時間行膽道引流對其肝臟功能及組織病理的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 一、材料與方法 |
| 二、結(jié)果 |
| 三、討論 |
| 四、結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在讀期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（4）運(yùn)動對阻塞性黃疸小鼠肝臟糖代謝的影響及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 研究背景和研究意義 |
| 2 研究對象與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2 主要試劑 |
| 2.3 主要儀器 |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.4.1 實(shí)驗(yàn)對象分組及模型的構(gòu)建 |
| 2.4.2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖 |
| 2.4.3 實(shí)驗(yàn)取材及處理 |
| 2.4.4 運(yùn)動方案 |
| 2.5 指標(biāo)的測定 |
| 2.5.1 測定血清的指標(biāo) |
| 2.5.2 肝臟組織學(xué)觀察 |
| 2.5.3 測定肝組織蛋白含量 |
| 2.5.4 肝臟PI3K、AKT、FoxO1、PEPCK、G6Pase的測定 |
| 2.5.5 肝臟肝糖原、糖原合成酶的測定 |
| 2.5.6 Real time-PCR技術(shù)檢測PI3K、AKT、FoxO1、PEPCK、G6Pase |
| 的m RNA的表達(dá) |
| 2.6 質(zhì)量控制 |
| 2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 阻塞性黃疸模型小鼠的一般情況 |
| 3.2 各組小鼠肝臟HE染色光鏡觀察 |
| 3.3 各組小鼠血清TBIL、ALT、和AST的含量變化 |
| 3.4 各組小鼠空腹血糖和肝糖原的含量 |
| 3.5 各組小鼠肝臟糖原合成酶、PEPCK、G6Pase的含量的變化 |
| 3.6 各組小鼠肝臟PI3K、AKT、FoxO1 的蛋白含量變化 |
| 3.7 各組小鼠FoxO1、PEPCK、G6Pase的 m RNA的測定結(jié)果 |
| 4 分析與討論 |
| 4.1 阻塞性黃疸致肝損傷模型的建立及有氧運(yùn)動的干預(yù)作用 |
| 4.2 阻塞性黃疸肝臟糖代謝的變化及有氧運(yùn)動的干預(yù)作用 |
| 4.3 PI3K/AKT/FoxO1 在運(yùn)動干預(yù)阻塞性黃疸肝臟糖代謝的作用 |
| 5 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（5）膽汁酸通過激活TRPV4通道蛋白介導(dǎo)阻塞性黃疸血管低反應(yīng)的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 阻塞性黃疸動脈TRPV4 蛋白表達(dá)增高與血管反應(yīng)性下降 |
| 一、實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 第二部分 膽汁酸介導(dǎo)主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增高TRPV4 蛋白表達(dá) |
| 一、實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 第三部分 TRPV4 蛋白通過COX途徑參與阻塞性黃疸血管低反應(yīng)性 |
| 一、實(shí)驗(yàn)儀器與實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 全文小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 碩士期間發(fā)表論文和科研工作情況說明 |
| 致謝 |
（6）殘黃片制備工藝優(yōu)化與退黃作用機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞注釋表 |
| 前言 |
| 第一章 殘黃片制備工藝優(yōu)化 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 藥材與試劑 |
| 2.2 儀器 |
| 3 方法 |
| 3.1 單藥的超微粉碎工藝考察 |
| 3.2 殘黃片超微粉碎工藝的篩選 |
| 3.3 粉體特性的考察 |
| 3.4 殘黃片制備 |
| 3.5 殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性考察 |
| 4 結(jié)果 |
| 4.1 單藥超微粉碎工藝 |
| 4.2 殘黃片超微粉碎工藝的篩選結(jié)果 |
| 4.3 粉體特性的考察 |
| 4.4 殘黃片制備結(jié)果 |
| 4.5 殘黃片質(zhì)量穩(wěn)定性考察結(jié)果 |
| 5 討論 |
| 5.1 粉碎時間與粒徑的關(guān)系 |
| 5.2 粉體混合均勻性的提高 |
| 5.3 粉體熱穩(wěn)定性的提升及DSC的應(yīng)用 |
| 5.4 殘黃片最佳粉碎工藝 |
| 6 小結(jié) |
| 第二章 基于分子對接技術(shù)的殘黃片退黃作用機(jī)制研究 |
| 1 引言 |
| 2 資料和方法 |
| 2.1 數(shù)據(jù)庫 |
| 2.2 軟件 |
| 2.3 黃疸治療靶點(diǎn)的搜集 |
| 2.4 殘黃片類藥成分的篩選 |
| 2.5 分子對接 |
| 2.6 靶點(diǎn)和成分名稱規(guī)范化 |
| 2.7 分子對接結(jié)果分析 |
| 2.8 構(gòu)建成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò) |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 靶點(diǎn)搜集結(jié)果 |
| 3.2 類藥成分篩選結(jié)果 |
| 3.3 分子對接結(jié)果 |
| 3.4 靶點(diǎn)和成分名稱規(guī)范化 |
| 3.5 分子對接結(jié)果分析 |
| 3.6 成分-靶點(diǎn)作用網(wǎng)絡(luò)分析 |
| 4 討論 |
| 4.1 殘黃片調(diào)節(jié)膽紅素代謝 |
| 4.2 殘黃片調(diào)節(jié)膽汁酸合成轉(zhuǎn)運(yùn) |
| 4.3 殘黃片調(diào)控免疫炎癥反應(yīng) |
| 4.4 殘黃片影響膠原形成 |
| 4.5 殘黃片退黃主要成分 |
| 4.6 殘黃片中白礬的作用 |
| 5 小結(jié) |
| 第三章 殘黃片對ANIT誘導(dǎo)黃疸模型大鼠的退黃作用機(jī)制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 藥品與試劑 |
| 2.2 儀器 |
| 2.3 主要溶液的配制 |
| 2.4 動物 |
| 3 方法 |
| 3.1 模型制備及給藥 |
| 3.2 血清和肝腸組織的采集 |
| 3.3 退黃保肝作用的比較 |
| 3.4 肝組織病理學(xué)檢查 |
| 3.5 RT-PCR法檢測肝腸組織膽汁生成轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá) |
| 3.6 Western blot檢測肝腸組織膽汁生成轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白的表達(dá) |
| 3.7 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 4 結(jié)果 |
| 4.1 退黃保肝作用比較結(jié)果 |
| 4.2 肝組織病理學(xué)檢查 |
| 4.3 RT-PCR檢測結(jié)果 |
| 4.4 Western blot檢測結(jié)果 |
| 5 討論 |
| 5.1 殘黃片調(diào)節(jié)膽汁酸生成和膽紅素的代謝 |
| 5.2 殘黃片調(diào)控肝內(nèi)膽汁成分的轉(zhuǎn)運(yùn) |
| 5.3 殘黃片調(diào)節(jié)回腸膽汁成分的轉(zhuǎn)運(yùn) |
| 5.4 殘黃片調(diào)節(jié)肝臟對膽汁成分的攝取 |
| 6 小結(jié) |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 基于膽汁淤積的核受體調(diào)控膽汁形成和轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制 |
| 1 肝內(nèi)膽汁淤積發(fā)病機(jī)制 |
| 1.1 膽汁的形成與轉(zhuǎn)運(yùn) |
| 1.2 膽汁淤積的發(fā)生機(jī)制 |
| 2 核受體對膽汁形成與轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié) |
| 2.1 法尼醇X受體 |
| 2.2 孕烷X受體和組成性雄烷受體 |
| 3 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 殘黃片退黃作用的研究進(jìn)展 |
| 1 殘黃片退黃作用的藥效學(xué)研究 |
| 1.1 利膽退黃作用 |
| 1.2 保肝降酶作用 |
| 1.3 免疫調(diào)節(jié)作用 |
| 2 殘黃片組方單藥的退黃作用及機(jī)制 |
| 2.1 黃連的退黃作用及機(jī)制 |
| 2.2 青黛與白礬的退黃作用及機(jī)制 |
| 2.3 郁金的退黃作用及機(jī)制 |
| 3 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
| 附錄 |
（7）多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)實(shí)踐研究 ——以文山衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)為例（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 第一節(jié) 研究背景 |
| 一、中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)學(xué)生生物化學(xué)學(xué)習(xí)現(xiàn)狀分析 |
| 二、中等衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)生物化學(xué)教學(xué)現(xiàn)狀及研究進(jìn)展 |
| 第二節(jié) 研究意義 |
| 第三節(jié) 研究思路和方法 |
| 第二章 理論研究 |
| 第一節(jié) 學(xué)科融合的概念界定 |
| 第二節(jié) 學(xué)科融合教學(xué)的理論基礎(chǔ) |
| 一、教育心理學(xué)基礎(chǔ) |
| 二、建構(gòu)主義心理學(xué)基礎(chǔ) |
| 三、知識觀理論基礎(chǔ) |
| 第三節(jié) 學(xué)科融合的實(shí)施模式 |
| 第四節(jié) 學(xué)科融合教學(xué)的優(yōu)點(diǎn) |
| 第三章 多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容分析 |
| 第一節(jié) 融合知識點(diǎn)梳理 |
| 一、生物化學(xué)與護(hù)理學(xué)基礎(chǔ)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 二、生物化學(xué)與急救護(hù)理技術(shù)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 三、生物化學(xué)與中醫(yī)護(hù)理的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 四、生物化學(xué)與健康評估的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 五、生物化學(xué)與內(nèi)科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 六、生物化學(xué)與外科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 七、生物化學(xué)與婦產(chǎn)科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 八、生物化學(xué)與兒科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 九、生物化學(xué)與社區(qū)護(hù)理的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 十、生物化學(xué)與五官科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 十一、生物化學(xué)與傳染科護(hù)理學(xué)的融合知識點(diǎn)梳理 |
| 第二節(jié) 生物化學(xué)教學(xué)的定位 |
| 第三節(jié) 專業(yè)素養(yǎng)培養(yǎng)方面的共同目標(biāo) |
| 第四章 多學(xué)科融合教學(xué)的實(shí)踐研究 |
| 第一節(jié) 多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)的課例研究 |
| 一、“蛋白質(zhì)的分子組成、結(jié)構(gòu)功能、理化性質(zhì)”課例研究 |
| 二、“酶和維生素”課例研究 |
| 三、“糖代謝”課例研究 |
| 四、“脂類代謝”課例研究 |
| 五、“氨基酸的分解代謝”課例研究 |
| 六、“物質(zhì)代謝調(diào)節(jié)”課例研究 |
| 七、“核苷酸代謝”課例研究 |
| 八、“細(xì)胞增殖、分化與凋亡的分子基礎(chǔ)”課例研究 |
| 九、“水、無機(jī)鹽代謝與酸堿平衡”課例研究 |
| 十、“肝膽生物化學(xué)”課例研究 |
| 第二節(jié) 調(diào)查研究 |
| 一、調(diào)查對象 |
| 二、調(diào)查方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)班前測和后測問卷調(diào)查結(jié)果分析 |
| 四、實(shí)驗(yàn)班后測和對照班問卷調(diào)查結(jié)果分析 |
| 五、問卷調(diào)查研究總結(jié) |
| 第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 一、實(shí)驗(yàn)對象 |
| 二、實(shí)驗(yàn)過程 |
| 三、實(shí)驗(yàn)班和對照班學(xué)期末成績比較分析 |
| 第五章 研究反思和建議 |
| 第一節(jié) 多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)課堂教學(xué)反饋 |
| 第二節(jié) 反思與建議 |
| 一、積極探索教學(xué)方法,優(yōu)化教學(xué)過程 |
| 二、建立跨學(xué)科教研組,實(shí)施跨學(xué)科聽課制度 |
| 三、教師不斷提升自身素質(zhì)和業(yè)務(wù)水平 |
| 四、圍繞教學(xué)目標(biāo),有效開展多學(xué)科融合教學(xué) |
| 結(jié)束語 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 A 前測調(diào)查表 |
| 附錄 B 后測調(diào)查表 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果 |
| 致謝 |
（8）阻塞性黃疸肝損傷及慢性肝病患者血清肝活素水平測定的臨床意義（論文提綱范文）
| 英文縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
（9）一氧化氮介導(dǎo)阻塞性黃疸alpha腎上腺素能血管低反應(yīng)性的機(jī)制及代謝組學(xué)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 一、阻塞性黃疸血流動力學(xué)危害及其研究進(jìn)展 |
| 二、阻塞性黃疸血管低反應(yīng)性前期研究及研究意義 |
| 三、阻塞性黃疸血管低反應(yīng)性腎上腺素能相關(guān)機(jī)制 |
| 四、本課題的研究方向 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一部分 阻塞性黃疸患者對Alpha腎上腺素受體激動劑的反應(yīng)性受損：Alpha-AR亞型及NO的作用 |
| 一、對象和方法 |
| 二、結(jié)果 |
| 三、討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 一氧化氮通過非KCa途徑引起阻塞性黃疸大鼠離體胸主動脈舒張 |
| 一、材料與方法 |
| 二、結(jié)果 |
| 三、討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 阻塞性黃疸大鼠模型代謝組學(xué)揭示氧化應(yīng)激和犬尿氨酸可能參與了血管低反應(yīng)性的發(fā)生 |
| 一、材料和方法 |
| 二、結(jié)果 |
| 三、討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 博士在讀期間發(fā)表文章和參與的工作 |
| 致謝 |
四、阻塞性黃疸病人空腹血清總膽汁酸的檢測意義（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]基于靶標(biāo)代謝組學(xué)策略的雄黃誘導(dǎo)肝損傷小鼠膽汁酸類生物標(biāo)志物研究[D]. 吳欣雨. 中國醫(yī)科大學(xué), 2021
- [2]基于miR-497/Bcl-2信號通路的水飛薊賓對阻塞性黃疸小鼠肝損傷研究[D]. 陳今超. 南華大學(xué), 2020(01)
- [3]大鼠梗阻性黃疸后不同時間行膽道引流對其肝臟功能及組織病理的影響[D]. 劉元進(jìn). 中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué), 2019(04)
- [4]運(yùn)動對阻塞性黃疸小鼠肝臟糖代謝的影響及其機(jī)制研究[D]. 張東紅. 湖南師范大學(xué), 2019(12)
- [5]膽汁酸通過激活TRPV4通道蛋白介導(dǎo)阻塞性黃疸血管低反應(yīng)的研究[D]. 孟笑炎. 中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué), 2019(11)
- [6]殘黃片制備工藝優(yōu)化與退黃作用機(jī)制研究[D]. 吉日木巴圖. 江西中醫(yī)藥大學(xué), 2019(01)
- [7]多學(xué)科融合背景下的生物化學(xué)教學(xué)實(shí)踐研究 ——以文山衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理專業(yè)為例[D]. 何航道. 云南師范大學(xué), 2018(02)
- [8]阻塞性黃疸肝損傷及慢性肝病患者血清肝活素水平測定的臨床意義[D]. 安然. 安徽醫(yī)科大學(xué), 2017(01)
- [9]一氧化氮介導(dǎo)阻塞性黃疸alpha腎上腺素能血管低反應(yīng)性的機(jī)制及代謝組學(xué)研究[D]. 龍躍. 第二軍醫(yī)大學(xué), 2015(06)
- [10]膽汁酸的代謝、生理作用及其臨床意義[J]. 尹凱歌,馮志杰. 世界華人消化雜志, 2012(35)