一、血液細(xì)胞與分子生物學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展（論文文獻(xiàn)綜述）
雷林子,王耀美,劉玉章,劉麗娜,房佰俊[1]（2022）在《干擾素α聯(lián)合亞砷酸治療JAK2V617F突變陽(yáng)性真性紅細(xì)胞增多癥和原發(fā)性血小板增多癥的療效》文中指出目的:觀察干擾素α（interferon-α,IFN-α）聯(lián)合亞砷酸治療JAK2V617F突變陽(yáng)性的真性紅細(xì)胞增多癥（polycythemia vera, PV）和原發(fā)性血小板增多癥（essential thrombocythemia, ET）患者的有效性及安全性。方法:回顧性分析2015年12月至2021年01月在我院血液科收治的44例PV和ET患者的臨床資料,比較IFN-α聯(lián)合亞砷酸（觀察組）以及單用IFN-α（對(duì)照組）的療效及不良反應(yīng)。結(jié)果:觀察組血液學(xué)總有效率（overall response rate, ORR）為88.5%,高于對(duì)照組。至隨訪截止時(shí),觀察組達(dá)血液學(xué)及分子生物學(xué)緩解的ORR均高于對(duì)照組。并且觀察組并未出現(xiàn)不良反應(yīng)發(fā)生率增加的情況。結(jié)論:亞砷酸能加速并增強(qiáng)IFN-α抗腫瘤作用,二者聯(lián)合治療能提高JAK2V617F突變陽(yáng)性的PV和ET的臨床緩解率和療效持續(xù)時(shí)間,且安全性高。
劉正華,王萍萍,顏曉菁[2]（2022）在《CD68因子在急性髓系白血病患者中的表達(dá)情況及其臨床相關(guān)性研究》文中提出目的:分析急性髓系白血?。ˋML）患者骨髓及外周血血漿中CD68因子的表達(dá)及臨床特點(diǎn)。方法:采用四色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)50例初診AML患者、23例對(duì)照組（非血液系統(tǒng)惡性疾病）的骨髓原始細(xì)胞CD68的表達(dá)情況。采用ELISA法檢測(cè)85例初診期、29例緩解期AML患者與24例對(duì)照組外周血血漿中CD68的表達(dá)情況。分析CD68因子的表達(dá)及其與臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果:非M3型AML患者骨髓白血病細(xì)胞中CD68表達(dá)率中位數(shù)為19.7%,明顯高于對(duì)照組的0.2%（P<0.001）。非M3型AML患者外周血中CD68濃度中位數(shù)為67.97 pg/ml,明顯高于對(duì)照組的29.94 pg/ml（P<0.01）。配對(duì)分析非M3型AML患者初診時(shí)（45.72 pg/ml）與緩解期（55.12 pg/ml）外周血血漿中CD68濃度差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。分別比較非M3型AML骨髓中CD68的表達(dá)率、外周血中CD68濃度與白細(xì)胞計(jì)數(shù)等臨床資料相關(guān)性的結(jié)果表明:骨髓中CD68表達(dá)率越高,外周血白細(xì)胞數(shù)越高,血紅蛋白及血小板數(shù)越低;外周血血漿中CD68濃度越高,外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)越高,完全緩解率越低。結(jié)論:CD68因子在非M3型AML患者骨髓及外周血中的表達(dá)均較對(duì)照組升高。CD68高表達(dá)患者完全緩解率低,CD68表達(dá)水平與治療反應(yīng)具有相關(guān)性。
廖遠(yuǎn)泉[3]（2021）在《輸入性卵形瘧原蟲(chóng)感染實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)的研究進(jìn)展》文中提出輸入性卵形瘧原蟲(chóng)（PO）感染病例時(shí)有報(bào)道。顯微鏡檢PO形態(tài)與間日瘧相似,極易被誤讀為間日瘧原蟲(chóng),是輸入性瘧疾病例漏診或誤診的重要原因,對(duì)國(guó)內(nèi)大部分瘧疾已經(jīng)消除多年地區(qū)的臨床實(shí)驗(yàn)室診斷及其治療是一項(xiàng)新的挑戰(zhàn)。PO感染的檢驗(yàn)技術(shù)主要有厚血膜/薄血膜檢測(cè)、自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的篩檢、巢式PCR等技術(shù)的應(yīng)用。文章就PO實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)和方法的研究進(jìn)展予以綜述。
高嫦娥[4]（2021）在《PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及其體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)的臨床前研究》文中認(rèn)為研究背景與目的靶向T細(xì)胞抑制性檢測(cè)點(diǎn)腫瘤免疫治療是當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)研究的最熱點(diǎn)。研究表明,利用單抗藥物直接作用于PD-1可以有效地阻斷抑制性免疫檢測(cè)點(diǎn),激活T細(xì)胞,增強(qiáng)T細(xì)胞的功能,達(dá)到治療腫瘤的目的。在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中,腸道由于接觸抗原的表面積最大并且免疫細(xì)胞數(shù)量較多,因而被認(rèn)為是體內(nèi)最大的免疫器官[1],發(fā)生于結(jié)直腸的惡性腫瘤與免疫逃逸有關(guān)。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)T細(xì)胞PD-1基因進(jìn)行靶向敲除,采用小鼠結(jié)腸癌模型進(jìn)行PD-1基因敲除的T細(xì)胞的體內(nèi)抗腫瘤作用及其可能機(jī)制研究,采用非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物食蟹猴作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,高度模擬PD-1基因敲除T細(xì)胞在體內(nèi)的安全性評(píng)價(jià),以期建立利用CRISPR/Cas9技術(shù)靶向T細(xì)胞PD-1基因進(jìn)行腫瘤細(xì)胞免疫治療的策略,進(jìn)而為臨床研究的實(shí)施奠定堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。第一章:小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及其機(jī)制研究第一部分:小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞的建立及其體外抑制腫瘤的作用[方法]在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)中查找獲得小鼠PD-1基因序列,設(shè)計(jì)靶向小鼠PD-1基因的sgRNA,構(gòu)建靶向PD-1基因的PX458敲除載體,經(jīng)擴(kuò)增、酶切鑒定及測(cè)序驗(yàn)證,獲得正確的CRISPR/Cas9-sgRNA表達(dá)載體。分離獲得小鼠外周血PBMC,富集細(xì)胞數(shù)量為1×107,加入敲除PD-1基因的PX458敲除載體5μg,采用Lonza-4D電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行電轉(zhuǎn)染,48h后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,采用PCR技術(shù)和T7E1酶切驗(yàn)證PD-1基因的敲除。體外培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞株CT-26,分為:陰性對(duì)照組:CT-26細(xì)胞組、PD-1基因敲除T細(xì)胞組,實(shí)驗(yàn)組:CT-26與PD-1基因敲除T細(xì)胞共培養(yǎng)組,CT-26與未經(jīng)PD-1基因敲除的T細(xì)胞及PD-1單抗共培養(yǎng)組。繪制各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,細(xì)胞殺傷檢測(cè)試劑盒檢測(cè)PD-1基因敲除的T細(xì)胞的殺傷能力,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群比例的變化及體外分泌細(xì)胞因子的水平變化。[結(jié)果]成功獲得了靶向小鼠PD-1基因敲除的sgRNA,構(gòu)建靶向小鼠PD-1基因sgRNA/Cas9表達(dá)載體,建立小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞,對(duì)其體外特性進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示:流式細(xì)胞儀檢測(cè)PD-1基因敲除T細(xì)胞CD3、CD4、CD8比例無(wú)明顯變化;PD-1基因敲除T細(xì)胞與結(jié)直腸癌細(xì)胞株CT-26在不同效靶比作用下體外抑制腫瘤效應(yīng)結(jié)果顯示:各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示:與其他兩組相比,CT-26與PD-1基因敲除T細(xì)胞共培養(yǎng)組,CT-26與未經(jīng)PD-1基因敲除T細(xì)胞及PD-1單抗共培養(yǎng)組,72小時(shí)細(xì)胞活率明顯下降,與其他兩組相比,CT-26與PD-1基因敲除T細(xì)胞共培養(yǎng)組,CT-26與PD-1基因敲除T細(xì)胞及PD-1單抗共培養(yǎng)組,與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)后:IFN-γ、TNF-α、IL-2的水平增加。[結(jié)論]建立了穩(wěn)定的體外定向敲除T細(xì)胞抑制性免疫檢測(cè)點(diǎn)PD-1的技術(shù),獲得了小鼠同種異體PD-1基因敲除T細(xì)胞,體外實(shí)驗(yàn)顯示,可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),為體內(nèi)抗腫瘤的研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分:小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及可能機(jī)制[方法]培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞株CT-26,制備小鼠結(jié)直腸癌移植瘤模型;實(shí)驗(yàn)分組分別為模型對(duì)照組（經(jīng)尾靜脈注射PBS）、陰性對(duì)照組（經(jīng)尾靜脈注射未經(jīng)基因敲除的T細(xì)胞）、PD-1基因敲除T細(xì)胞組（經(jīng)尾靜脈注射PD-1基因敲除的T細(xì)胞）、PD-1單抗組（經(jīng)尾靜脈注射PD-1單抗）,觀察結(jié)直腸癌移植瘤模型中各組小鼠體重,活動(dòng)度,生存期等,繪制小鼠生存率曲線;處死各組中小鼠,分別取肝,肺和腸等組織進(jìn)行病理學(xué)分析;分離MLNs、脾臟淋巴細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MLNs、脾臟CD4+,CD8+T細(xì)胞,Treg細(xì)胞比例,ELISA法檢測(cè)MLNs、血清中腫瘤免疫相關(guān)細(xì)胞因子的分泌水平變化。[結(jié)果]與模型對(duì)照組相比較,同種異體PD-1基因敲除T細(xì)胞可抑制結(jié)直腸癌荷瘤小鼠原位移植瘤的生長(zhǎng)及向肝臟和肺部的轉(zhuǎn)移,延長(zhǎng)了小鼠的存活時(shí)間。PD-1基因敲除T細(xì)胞回輸結(jié)直腸荷瘤小鼠,ELISA結(jié)果顯示,與同模型對(duì)照組、陰性對(duì)照組相比較,PD-1基因敲除T細(xì)胞回輸組MLNs和血清中IFN-y,TNF-α和IL-12的水平增加,IL-6無(wú)明顯變化,IL-17水平減少。在結(jié)直腸癌小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞回輸后,PD-1敲除組小鼠的CD44+CD62L-記憶T細(xì)胞比例明顯提升,CD4+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例降低。[結(jié)論]同種異體PD-1基因敲除T細(xì)胞在結(jié)直腸癌中顯示出體內(nèi)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用,且可能通過(guò)依賴(lài)CD8+T細(xì)胞在結(jié)直腸癌中發(fā)揮抗腫瘤作用。第二章:食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)第一部分:食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞的建立及其生物學(xué)特性[方法]在GENEBANK數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索食蟹猴PD-1基因序列,設(shè)計(jì)靶向食蟹猴PD-1基因的sgRNA,構(gòu)建靶向PD-1基因的PX458敲除載體,經(jīng)擴(kuò)增、酶切鑒定及測(cè)序驗(yàn)證,獲得正確的sgRNA表達(dá)載體;分離培養(yǎng)食蟹猴PBMC,采用Lonza-4D電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行電轉(zhuǎn)染,48h后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,采用PCR技術(shù)及T7E1酶切鑒定PD-1基因的敲除。在細(xì)胞因子刺激下誘導(dǎo)食蟹猴T細(xì)胞增殖,定期觀察細(xì)胞形態(tài)變化及集落形成并計(jì)數(shù),繪制食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,FACS檢測(cè)食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞周期、凋亡,CCK-8法檢測(cè)食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞增殖,以及食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞表面特征分子的表達(dá),通過(guò)ELISA法檢測(cè)食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞分泌的IFN-γ、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2水平。[結(jié)果]成功獲得了靶向食蟹猴PD-1基因敲除的sgRNA,構(gòu)建靶向食蟹猴PD-1基因的敲除重組表達(dá)載體sgRNA/Cas9,成功培養(yǎng)了食蟹猴PD-1基因敲除的T細(xì)胞,細(xì)胞生長(zhǎng)周期為28天,生長(zhǎng)曲線呈S形,符合Logistic生長(zhǎng)曲線。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示,與未經(jīng)敲除PD-1基因的T細(xì)胞相比較,PD-1基因敲除的T細(xì)胞增殖未受到抑制,生長(zhǎng)曲線基本與未經(jīng)敲除PD-1基因的T細(xì)胞相同;流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞表型無(wú)改變,具有殺傷性作用的CD8+T細(xì)胞所占比例有所升高;細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示:與未經(jīng)敲除PD-1基因的T細(xì)胞相比較,PD-1基因敲除的T細(xì)胞G0/G1期,S期,G2/M期比例兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,早期凋亡、死亡細(xì)胞比例兩者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。ELISA法對(duì)細(xì)胞因子IFN-γ、TNFα、IL-10、IL-6、IL-2進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示:PD-1基因敲除的T細(xì)胞釋放細(xì)胞因子與相同培養(yǎng)條件下,未進(jìn)行PD-1敲除的T細(xì)胞釋放細(xì)胞因子量統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異。[結(jié)論]抑制性檢查點(diǎn)基因PD-1的破壞導(dǎo)致PD-1表達(dá)的降低,但在體外培養(yǎng)期間不影響PD-1基因敲除T細(xì)胞的活力、PD-1基因敲除T細(xì)胞特征標(biāo)志物的表達(dá)、PD-1基因敲除T細(xì)胞凋亡和PD-1基因敲除T細(xì)胞周期,且擴(kuò)增的PD-1基因敲除T細(xì)胞也不影響具有細(xì)胞因子表達(dá)的能力,為其體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)奠定基礎(chǔ)。第二部分:食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)[方法]多次富集PD-1基因敲除T細(xì)胞后,經(jīng)靜脈回輸入食蟹猴體內(nèi),參照人細(xì)胞因子誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞回輸有效劑量（2×107/kg）,溶解于100ml 0.9%氯化鈉注射液中,對(duì)照組經(jīng)靜脈注射100ml/（kg·次）0.9%氯化鈉注射液,每3d上午同一時(shí)間給藥1次,共給藥3次,分別在回輸后4h,24h,48h,1w,2w,3w,4w直到100天抽取外周血,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3,PD-1的表達(dá),觀察各組食蟹猴體重,活動(dòng)度等一般情況,監(jiān)測(cè)血常規(guī)、血生化,ELISA法檢測(cè)各組食蟹猴Th1:IL-2、IL-12、IFN-γ;Th2:IL-4、IL-10;炎癥細(xì)胞因子:TNF-α、IL-1β、IL-6等細(xì)胞因子水平的變化,并分別取肝、肺、骨髓、脾臟、胸腺、甲狀腺、垂體、腎上腺、睪丸等組織進(jìn)行病理學(xué)分析,觀察其毒性反應(yīng)。[結(jié)果]將PD-1基因敲除的T細(xì)胞回輸?shù)绞承泛矬w內(nèi),PD-1基因敲除的T細(xì)胞未顯示出對(duì)其體重、活動(dòng)度等一般情況的影響,血液學(xué)檢查指標(biāo):白細(xì)胞數(shù)、單核細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比,均未出現(xiàn)明顯變化;生化學(xué)檢查指標(biāo):總蛋白、白蛋白、球蛋白、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、谷草轉(zhuǎn)移酶、谷丙轉(zhuǎn)移酶、尿素氮、肌酐等與對(duì)照組相比,均未出現(xiàn)明顯變化;組織病理學(xué)分析顯示沒(méi)有與輸注的PD-1基因敲除T細(xì)胞相關(guān)的損傷;流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測(cè)外周血中PD-1基因敲除的T細(xì)胞的體內(nèi)持久性為兩個(gè)月。[結(jié)論]我們的研究結(jié)果證明了食蟹猴用于評(píng)估PD-1基因敲除T細(xì)胞免疫治療安全性的效用,并為基于T細(xì)胞的過(guò)繼免疫治療提供了新的策略。
許濤,張英杰,郝艷梅,禹莉,徐慧,馬芳,曹蘊(yùn),李玉云[5]（2021）在《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課程中“再生障礙性貧血”課堂設(shè)計(jì)與教學(xué)體會(huì)》文中研究指明臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專(zhuān)業(yè)的主干專(zhuān)業(yè)課程,主要是以臨床血液病為研究對(duì)象,涵蓋化學(xué)、物理、免疫和分子生物學(xué)等檢驗(yàn)技術(shù)和方法,為臨床血液病的診斷、治療和預(yù)后判斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[1]。臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)是一門(mén)多學(xué)科交叉課程,具有較強(qiáng)的理論性和實(shí)踐性,是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)所有專(zhuān)業(yè)課程中與臨床實(shí)踐關(guān)聯(lián)性最為緊密的綜合性臨床學(xué)科[2]。課程中涉及大量的血液和骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)知識(shí)和血液系統(tǒng)疾病相關(guān)知識(shí),被學(xué)生公認(rèn)為學(xué)習(xí)難度最大的專(zhuān)業(yè)課程之一[3]。
付立芳,何霞,李佳,張航,鄒琳[6]（2021）在《hsa＿circ＿0001708與IKZF1的比值在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病診斷及分型中的價(jià)值》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的探討hsacirc0001708與IKZF1在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血?。˙-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL）骨髓單個(gè)核細(xì)胞（bone marrow mononuclear cells, BMNC）中的拷貝數(shù)比值及其在兒童B-ALL診斷及分型中的臨床意義。方法利用T-A克隆構(gòu)建包含hsacirc0001708反向剪接位點(diǎn)的重組質(zhì)粒,梯度稀釋重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品建立檢測(cè)hsacirc0001708的絕對(duì)RT-qPCR方法。收集2016年1月至2019年1月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液科初診的159例B-ALL患兒骨髓標(biāo)本為研究對(duì)象。對(duì)照組為同期就診的17例非惡性血液病患兒的骨髓標(biāo)本。采用絕對(duì)RT-qPCR方法檢測(cè)B-ALL患兒和對(duì)照患兒BMNC中hsacirc0001708和IKZF1的絕對(duì)拷貝數(shù),按患者年齡、性別、外周血白細(xì)胞數(shù)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫分型、隨訪期是否復(fù)發(fā)及隨訪期末是否生存等臨床特點(diǎn)進(jìn)行分組?；仡櫺苑治鰄sacirc0001708和IKZF1的比值在各組中的表達(dá)情況及與以上各因素的相關(guān)性。結(jié)果建立精確定量hsacirc0001708拷貝數(shù)的絕對(duì)RT-qPCR方法。與非血液腫瘤對(duì)照患兒相比,hsacirc0001708與IKZF1的比值在兒童B-ALL中升高（P<0.01）,ROC曲線下面積為0.793 6。相關(guān)性分析結(jié)果提示,hsacirc0001708與IKZF1的比值在外周血高白細(xì)胞數(shù)組、外周血高原始細(xì)胞數(shù)組、免疫分型pre-B組和細(xì)胞遺傳學(xué)預(yù)后較差組中升高（P<0.05）。結(jié)論 hsacirc0001708與IKZF1的比值對(duì)兒童B-ALL有潛在診斷價(jià)值,且與B-ALL患兒的MIC分型密切相關(guān)。
崔榮興[7]（2021）在《陰虛津虧模型小鼠唾液腺水通道蛋白AQP1、AQP5的表達(dá)及意義》文中研究指明陰虛證是常見(jiàn)的中醫(yī)臨床基本證候,其核心機(jī)理是津液虧虛,導(dǎo)致陰主濡潤(rùn)的生理功能減退,從而引起諸多癥狀的發(fā)生。本課題組前期通過(guò)制定陰虛證普適性辨證標(biāo)準(zhǔn)量表并形成專(zhuān)家共識(shí):口干是陰虛證診斷的重要辨證要點(diǎn)之一。由于多種因素引起人體內(nèi)陰液虧虛、陰不制陽(yáng),以致陽(yáng)氣相對(duì)亢盛,導(dǎo)致津液無(wú)以上承于口,口失濡潤(rùn)。津液是人體內(nèi)的一切正常水液的總稱(chēng)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí),水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）參與調(diào)節(jié)機(jī)體組織細(xì)胞內(nèi)外水分子的轉(zhuǎn)運(yùn)速率,影響機(jī)體的水液代謝過(guò)程。因此,唾液腺組織AQPs及其相關(guān)分子機(jī)制的異常表達(dá)與陰虛口干之間是否具有相關(guān)性,成為有待解決的問(wèn)題。一、理論探討本章主要對(duì)近年來(lái)陰虛證動(dòng)物模型造模方法的研究進(jìn)展進(jìn)行總結(jié),分析不同造模方法的優(yōu)勢(shì)與不足。同時(shí),對(duì)“陰主濡潤(rùn)”的理論源流與內(nèi)涵以及AQPs相關(guān)研究進(jìn)行深入探討。最后,基于“陰主濡潤(rùn)”理論探討了 AQPs及其相關(guān)分子機(jī)制在唾液分泌中的作用,為闡釋陰虛證辨證要點(diǎn)“口干”癥狀的生物學(xué)基礎(chǔ)提供依據(jù)。本章內(nèi)容為論文設(shè)計(jì)與研究提供了方向與理論基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)研究目的:1.建立陰虛津虧動(dòng)物模型,探討模型評(píng)價(jià)方法。2.探討陰虛津虧模型小鼠腮腺、頜下腺組織AQP1、AQP5表達(dá)變化的意義。3.探討陰虛津虧模型小鼠“口干”癥狀的分子機(jī)制。方法:將18只SPF級(jí)C57BLKS/J雄性小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后,按照隨機(jī)分組原則分為正常組9只、模型組9只。采用“熱盛傷陰”法建立陰虛津虧動(dòng)物模型,模型組每只小鼠每日予以0.1 mL/10 g劑量的傷陰藥灌胃,正常組每只小鼠每日予以等體積的超純水灌胃,造模時(shí)間共計(jì)8周。觀察小鼠日常行為變化,造模結(jié)束后利用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)觀察小鼠中央格穿格次數(shù)、中央格停留時(shí)間百分比、曠場(chǎng)區(qū)運(yùn)動(dòng)總距離和速度。觀察并記錄小鼠肛溫與“五心”溫度、飲水量、唾液流率、攝食量、體質(zhì)量、皮膚含水量、糞便含水量、尿膽紅素等基礎(chǔ)指標(biāo)。采用蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察小鼠腮腺、頜下腺病理變化。運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Western Blotting分子生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)觀察小鼠腮腺、頜下腺組織AQP1和AQP5的表達(dá)變化。利用Western Blotting觀察頜下腺組織p-PKA/PKA、p-CREB/CREB的表達(dá)變化。結(jié)果:（一）陰虛津虧動(dòng)物模型建立與評(píng)價(jià)灌服傷陰藥期間,模型組小鼠活潑喜跳動(dòng),與正常組小鼠比較,更易激惹。造模結(jié)束后的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與正常組小鼠比較,模型組小鼠中央格穿格次數(shù)與停留時(shí)間百分比差異不顯著,曠區(qū)運(yùn)動(dòng)總距離明顯增加（P<0.01）,運(yùn)動(dòng)速度顯著提高（P<0.001）。與正常組小鼠比較,模型組小鼠心前區(qū)溫度、左上肢爪心溫度、左下肢爪心溫度以及右下肢爪心溫度均顯著升高（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01）,肛溫、右上肢爪心溫度變化差異性不顯著;模型組小鼠飲水量明顯增多（P<0.0001）,唾液流率顯著降低（P<0.05）,攝食量顯著降低（P<0.0001）,體質(zhì)量、皮膚含水量、糞便含水量均無(wú)顯著性差異。正常組小鼠尿膽紅素陽(yáng)性例數(shù)1例,陽(yáng)性率11.1%;模型組小鼠尿膽紅素陽(yáng)性例數(shù)6例,陽(yáng)性率66.7%。（二）AQP1、AQP5在陰虛津虧模型小鼠唾液腺中的表達(dá)1.HE染色觀察小鼠腮腺、頜下腺病理變化與正常組小鼠比較,模型組小鼠腮腺組織中腺泡細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)并未發(fā)生明顯改變,腺泡細(xì)胞有所減少,分泌管形態(tài)略微擴(kuò)張;頜下腺組織出現(xiàn)漿液性腺泡細(xì)胞萎縮、分泌管與微血管擴(kuò)張等病理性變化。2.免疫組化結(jié)果（1）腮腺組織中,AQP1分布在腺泡細(xì)胞基底膜以及分泌管上皮細(xì)胞膜,AQP5分布在分泌管、腺泡細(xì)胞頂質(zhì)膜和基底膜。與正常組小鼠比較,模型組小鼠腮腺組織中AQP1和AQP5的表達(dá)呈降低趨勢(shì),組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）頜下腺組織中,AQP1分布在腺泡細(xì)胞基底膜以及分泌管上皮細(xì)胞膜,AQP5分布于腺泡細(xì)胞的頂質(zhì)膜和基底膜,分泌管上皮細(xì)胞頂質(zhì)膜上亦有分布。與正常組小鼠相比,模型組小鼠頜下腺組織中AQP1和AQP5的顯著降低（P<0.001,P<0.01）。3.Western Blotting 結(jié)果與正常組小鼠相比,模型組小鼠腮腺組織中AQP1和AQP5的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05,P<0.05）;模型組小鼠頜下腺組織中AQP1和AQP5的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05,P<0.05）。（三）陰虛津虧模型小鼠“口干”癥狀的分子機(jī)制研究Western Blotting結(jié)果顯示:與正常組小鼠比較,模型組小鼠頜下腺組織p-PKA/PKA、p-CREB/CREB 的表達(dá)水平明顯降低（P<0.05,P<0.001）。結(jié)論:1.“熱盛傷陰”法能夠成功建立陰虛津虧動(dòng)物模型?；陉幪撟C臨床表現(xiàn)“五心煩熱、口干、大便干燥、皮膚干燥、尿赤、形體消瘦”等制定模型評(píng)價(jià)方法,有利于完善陰虛證動(dòng)物模型評(píng)價(jià)體系。2.陰虛津虧動(dòng)物模型“口干”癥狀的發(fā)生與腮腺、頜下腺組織形態(tài)的病理性變化有關(guān)。腮腺、頜下腺組織水通道蛋白AQP1、AQP5表達(dá)水平的降低可能是導(dǎo)致陰虛口干發(fā)生的重要因素。3.陰虛津虧動(dòng)物模型“口干”癥狀的發(fā)生與頜下腺組織形態(tài)的病理性變化關(guān)系尤為密切,并且頜下腺組織AQP5的表達(dá)水平降低可能是導(dǎo)致陰虛口干的重要因素,這一變化過(guò)程可能是由cAMP-PKA-CREB信號(hào)通路所調(diào)控。
趙云[8]（2021）在《視黃醇結(jié)合蛋白4對(duì)豬卵泡顆粒細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究》文中認(rèn)為卵泡發(fā)育不但受“下丘腦-垂體-卵巢軸”分泌的激素調(diào)節(jié),而且受旁分泌和自分泌因子調(diào)控。卵泡顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)體細(xì)胞的主要類(lèi)型,主要功能為合成分泌激素和細(xì)胞因子,為卵母細(xì)胞成熟和卵泡發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。顆粒細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子通過(guò)復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),參與優(yōu)勢(shì)卵泡選擇和卵泡閉鎖的調(diào)控。研究證實(shí),顆粒細(xì)胞凋亡是卵泡閉鎖的潛在機(jī)制。因此,闡明顆粒細(xì)胞凋亡機(jī)制,為提高雌性動(dòng)物繁殖能力和治療卵巢疾病具有重要的科學(xué)意義。視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）屬于載脂蛋白家族成員之一,是視黃醇的特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,負(fù)責(zé)將視黃醇從肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)至外周組織。研究表明,RBP4在許多哺乳動(dòng)物卵巢中表達(dá),血液中RBP4含量與人的胰島素抵抗和多囊卵巢綜合癥相關(guān),豬囊腫卵泡液中有高濃度的RBP4蛋白,推測(cè)RBP4可能參與調(diào)控顆粒細(xì)胞功能。但目前有關(guān)RBP4對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞的調(diào)控研究相對(duì)較少。為了探討RBP4的功能,通過(guò)構(gòu)建RBP4過(guò)表達(dá)載體包裝慢病毒和設(shè)計(jì)干擾RNA,改變豬卵泡顆粒細(xì)胞RBP4的表達(dá)量,采用流式細(xì)胞術(shù)、RT-qPCR和Western blotting等分子生物學(xué)技術(shù),從基因和蛋白表達(dá)水平檢測(cè)RBP4對(duì)豬卵泡顆粒細(xì)胞凋亡和孕酮合成分泌的影響。通過(guò)高通量測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)RBP4處理組差異表達(dá)基因富集在胰島素通路中,結(jié)合胰島素下游通路ERK1/2位點(diǎn)的抑制劑（U0126）處理,闡明RBP4通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路影響顆粒細(xì)胞凋亡和孕酮分泌的分子機(jī)制。本研究主要結(jié)果如下:1.構(gòu)建豬RBP4基因慢病毒表達(dá)載體并成功包裝pLVX-RBP4重組慢病毒,病毒滴度達(dá)到3×108TU/m L;重組慢病毒成功感染原代培養(yǎng)的豬卵泡顆粒細(xì)胞,并且細(xì)胞中RBP4基因的表達(dá)水平顯著升高。過(guò)表達(dá)RBP4能顯著降低BCL2和XIAP的表達(dá)水平,增加BAX的表達(dá)量,促進(jìn)豬卵泡顆粒細(xì)胞凋亡,抑制孕酮分泌。2.設(shè)計(jì)合成RBP4干擾序列,確定siRBP4＿01干擾片段轉(zhuǎn)染顆粒細(xì)胞72 h,能顯著降低RBP4的表達(dá)水平。干擾RBP4能增加細(xì)胞活力,顯著降低CASPASE和BAX表達(dá)量,抑制顆粒細(xì)胞凋亡。3.使用慢病毒處理豬卵泡顆粒細(xì)胞72 h,利用高通量測(cè)序檢測(cè)mRNA表達(dá)圖譜的變化。結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,檢測(cè)到113個(gè)差異基因,71個(gè)基因上調(diào),42個(gè)基因下調(diào);差異基因主要富集在氧化磷酸化通路、胰島素通路、AMPK等16個(gè)信號(hào)通路。4.干擾RBP4能激活ERK1/2通路,siRBP4＿01能減弱U0126對(duì)ERK1/2通路的抑制作用,siRBP4＿01組與siRBP4＿01+U0126組相比,細(xì)胞活力增加,凋亡基因的表達(dá)量顯著下降,抑制顆粒細(xì)胞凋亡。因此,RBP4主要通過(guò)抑制ERK1/2通路激活,調(diào)控顆粒細(xì)胞凋亡,抑制孕酮合成分泌。綜上所述,本研究通過(guò)慢病毒過(guò)表達(dá)和干擾RNA處理豬卵泡顆粒細(xì)胞,利用RT-qPCR、Western blotting以及分子網(wǎng)絡(luò)分析等研究手段,證明了RBP4可通過(guò)抑制ERK1/2信號(hào)通路,促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡基因的表達(dá),降低顆粒細(xì)胞活力,促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡;同時(shí),抑制顆粒細(xì)胞中孕酮合成基因的表達(dá),降低孕酮分泌。本研究的結(jié)果為RBP4在卵泡發(fā)育及顆粒細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中所涉及的調(diào)控機(jī)制提供了新的見(jiàn)解。
李樂(lè),于曉清,李翹楚,于道德,鄒琰,葉海斌,吳海一,刁菁[9]（2021）在《我國(guó)鮭鱒魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖常見(jiàn)流行疫病研究概況》文中認(rèn)為鮭鱒魚(yú)類(lèi)是典型的冷水性魚(yú)類(lèi),經(jīng)濟(jì)價(jià)值高,市場(chǎng)前景廣闊,是世界重要經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一。我國(guó)鮭鱒魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖近年來(lái)蓬勃發(fā)展,產(chǎn)量及規(guī)模不斷提高,養(yǎng)殖模式不斷創(chuàng)新,與此同時(shí),各地鮭鱒魚(yú)類(lèi)流行疾病的暴發(fā)日趨頻繁,國(guó)內(nèi)疫病防控體系與挪威、智利等主產(chǎn)國(guó)仍存在較大差距,嚴(yán)重制約了產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展?；诖?概述了細(xì)菌、病毒及其他病原引起的鮭鱒魚(yú)類(lèi)主要流行性疫病的發(fā)病癥狀、發(fā)病條件等方面的研究成果,系統(tǒng)介紹了相應(yīng)的診斷技術(shù),并重點(diǎn)介紹了國(guó)內(nèi)鮭鱒魚(yú)類(lèi)免疫防控手段,以期為研究人員提供較為系統(tǒng)的鮭鱒魚(yú)類(lèi)常見(jiàn)流行疫病相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)、常用的檢測(cè)技術(shù)以及免疫防控手段,為從業(yè)者和研究人員對(duì)鮭鱒魚(yú)類(lèi)疫病防控提供參考。
方佳成[10]（2021）在《泛實(shí)體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用》文中研究指明癌癥已經(jīng)成為危害人類(lèi)健康的主要疾病,據(jù)世衛(wèi)組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)數(shù)據(jù)顯示,2020年,全球男性和女性將合計(jì)出現(xiàn)約1930萬(wàn)和1000萬(wàn)的新發(fā)病例和癌癥死亡病例,其中的1800萬(wàn)例和930萬(wàn)例將來(lái)自實(shí)體瘤。然而,對(duì)腫瘤治療的系統(tǒng)評(píng)估數(shù)據(jù)顯示,歐洲藥物管理局在2009-2013年度批準(zhǔn)的大多數(shù)抗癌藥物未能對(duì)患者的整體生命質(zhì)量產(chǎn)生重大改善。因此,需要繼續(xù)提高抗腫瘤藥物的臨床療效?？贵w偶聯(lián)藥物（Antibody-Drug Conjugates,ADC）和嵌合抗原受體（Chimeric Antigen Receptor,CAR）T細(xì)胞療法是發(fā)展迅速的腫瘤靶向治療技術(shù),它們通過(guò)特異性識(shí)別在惡性細(xì)胞和正常組織細(xì)胞之間差異過(guò)表達(dá)的靶標(biāo)抗原,達(dá)到辨識(shí)腫瘤和消融腫瘤的目的。ADC和CAR-T實(shí)現(xiàn)安全性與有效性的關(guān)鍵,在于其所識(shí)別的靶標(biāo)抗原是否具備足夠的腫瘤特異性。因而,鑒別出理想的靶標(biāo)抗原至關(guān)重要。理想的靶標(biāo)抗原由惡性細(xì)胞特異性表達(dá),然而腫瘤特異性抗原屈指可數(shù)。腫瘤相關(guān)抗原在腫瘤細(xì)胞上表達(dá)升高,在正常細(xì)胞上限制性表達(dá),這一特性使得它們亦能夠作為有效定位惡性腫瘤的靶標(biāo)分子。目的:以發(fā)現(xiàn)理想的腫瘤相關(guān)抗原為出發(fā)點(diǎn),著力于打造腫瘤相關(guān)抗原發(fā)現(xiàn)新平臺(tái),構(gòu)建全面的泛實(shí)體瘤腫瘤相關(guān)抗原圖譜,為癌癥研究人員和廣泛的科學(xué)與醫(yī)藥界科研工作者提供研究便利。方法:1.使用經(jīng)統(tǒng)一處理的TCGA和GTEx的RNA序列數(shù)據(jù),對(duì)19種類(lèi)型實(shí)體瘤中的20242個(gè)HUGO基因進(jìn)行差異分析;通過(guò)將閾值設(shè)置為Benjamini-Hochberg adjusted p值為0.01,log2Fold Change為1.0,保留那些在腫瘤細(xì)胞群中顯著差異表達(dá)的HUGO基因;結(jié)合蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位信息,排除不具備胞外結(jié)構(gòu)域的蛋白;使用集成了GTEx,HPA和FANTOM5的m RNA表達(dá)信息和HPA和HPM的蛋白質(zhì)豐度信息的數(shù)據(jù)集,獲取在正常組織中受限表達(dá)的蛋白分子;使用公開(kāi)的Blood Spot平臺(tái),發(fā)現(xiàn)那些在骨髓Lin-CD34+CD38-CD90+CD45RA-HSCs和Lin-CD34+CD38-CD90-45RA-MPPs中限制性表達(dá)的蛋白分子。2.將RNA測(cè)序的讀段計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為T(mén)PM格式,并將每個(gè)基因在其配對(duì)適應(yīng)癥和正常組織中的TPM值作為差異表達(dá)分析的輸入數(shù)據(jù)。采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析,計(jì)算并繪制每個(gè)候選靶標(biāo)分子在特定適應(yīng)癥中的表達(dá)相比其在各個(gè)人體正常組織中的表達(dá)的差異表達(dá)譜。3.提取并整理TCGA中泛癌表型數(shù)據(jù)中的癌組織學(xué)分級(jí),病理分級(jí)和TNM分期信息;通過(guò)挖掘MC3（“多中心多癌種突變識(shí)別”）TCGA MAF（“突變注釋格式”）數(shù)據(jù),確定靶標(biāo)基因的非沉默體細(xì)胞突變（SNP和INDEL）。結(jié)合m RNA表達(dá)數(shù)據(jù),匯編用于評(píng)價(jià)靶標(biāo)基因的異質(zhì)表達(dá)模式的綜合數(shù)據(jù)集。4.從TCGA下載并提取靶標(biāo)基因組變異數(shù)據(jù),從Onco KB收集致癌或功能性基因組變異信息,注釋并統(tǒng)計(jì)靶標(biāo)基因的變異類(lèi)型及發(fā)生頻率,確定在臨床上有應(yīng)用價(jià)值的攜帶特異性驅(qū)動(dòng)變異的功能性靶標(biāo)。5.通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備CDH17特異性單克隆抗體,進(jìn)而運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、過(guò)表達(dá)共定位分析、結(jié)合親和力檢測(cè)、抗體測(cè)序和可變區(qū)序列進(jìn)化關(guān)系分析等,多重表征抗體的各項(xiàng)指標(biāo)。通過(guò)偶聯(lián)mc-Val Cit PABC-MMAE,制備CDH17靶向型ADC。結(jié)合體外殺傷實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞內(nèi)化評(píng)估,完成效應(yīng)分子的初篩驗(yàn)證。6.通過(guò)構(gòu)建KM12SM和COLO205結(jié)腸癌細(xì)胞系CDX動(dòng)物模型,綜合評(píng)估chi2E21-MMAE和chi2F12-MMAE的體內(nèi)抗腫瘤活性。通過(guò)制備和人鼠CDH17蛋白交叉反應(yīng)的ADC分子,并對(duì)給藥的荷瘤小鼠的心/肺/肝/腎/結(jié)腸/直腸/脾臟進(jìn)行HE染色,評(píng)估CDH17靶向型ADC對(duì)小鼠的組織毒性。7.通過(guò)慢病毒載體感染CD3+T細(xì)胞,制備LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞。通過(guò)對(duì)CAR-T細(xì)胞進(jìn)行分化檢測(cè),確定其向效應(yīng)細(xì)胞持續(xù)分化的能力。通過(guò)體外細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞因子分泌檢測(cè),研究LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的的特異性殺傷作用。通過(guò)對(duì)荷瘤小鼠循環(huán)血中的CAR-T細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和檢測(cè)腫瘤組織中的T細(xì)胞浸潤(rùn)水平,揭示LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞在小鼠體內(nèi)發(fā)揮持久抗腫瘤作用的機(jī)制。結(jié)果:1.開(kāi)發(fā)專(zhuān)門(mén)的算法和匯編整合有泛實(shí)體瘤和正常組織的大型轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和基因組信息的綜合數(shù)據(jù)集。2.系統(tǒng)地識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原。通過(guò)我們的腫瘤相關(guān)抗原發(fā)現(xiàn)平臺(tái),篩選得到75個(gè)潛在的腫瘤相關(guān)抗原分子。特別是BACE2、CDH17、CELSR1、CELSR2、COL17A1、COL23A1、CRIM1、DSC3、GPR87、LYPD3、MUC17、NOX1、PTPRN2、SCTR、TRPM8、VCAM1等分子值得做進(jìn)一步的臨床前研究。3.基于CDH17蛋白定向開(kāi)發(fā)的ADC分子可以在體內(nèi)顯著消融KM12SM和COLO205異種移植瘤,并對(duì)高表達(dá)CDH17蛋白的結(jié)腸癌病人來(lái)源的異種移植瘤表現(xiàn)出一定的腫瘤抑制效果。chi2F12-MMAE在體外對(duì)高藥敏度的COLO205顯示高水平的細(xì)胞毒性（IC50=60.9p M）,chi2E21-MMAE和chi1A13-MMAE對(duì)COLO205的抑瘤水平相當(dāng)（IC50:925.8 p M vs.998.3 p M）。兩次單藥?kù)o脈注射（Q2W）chi2E21-MMAE或chi2F12-MMAE,均能以劑量依賴(lài)性的方式抑制KM12SM在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng),但無(wú)法完全清除腫瘤。在COLO205 CDX模型中,按同樣的給藥方式靜注chi2F12-MMAE,1.5 mg/kg劑量的第一針治療可以起到平緩異種移植腫瘤增長(zhǎng)的效果,且兩周后的第二針治療亦能繼續(xù)起到溶瘤效果;3 mg/kg的中劑量治療組有部分小鼠的腫瘤在后期出現(xiàn)反彈;6 mg/kg的高劑量治療可以根治異種移植瘤。4.CDH17靶向型ADC在小鼠體內(nèi)具有相對(duì)可控的組織毒性。制備了能和人鼠CDH17蛋白交叉反應(yīng)的ADC分子677-MMAE,觀察到在677-MMAE給藥組小鼠的結(jié)直腸的局部組織中有炎癥反應(yīng),聚集了大量的淋巴細(xì)胞;但在其它組織中沒(méi)有出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。此外,在觀察期內(nèi),小鼠對(duì)chi2E21-MMAE、chi2F12-MMAE或677-MMAE的體內(nèi)耐受良好,用藥期間未有小鼠死亡個(gè)例出現(xiàn),亦沒(méi)有觀察到10%以上的減重。5.LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞能夠在小鼠體內(nèi)對(duì)PC9異種移植腫瘤發(fā)揮持久的抗腫瘤作用。且小鼠對(duì)LYPD3-CAR-T的耐受良好,在觀察期內(nèi)未有小鼠死亡個(gè)例出現(xiàn),亦沒(méi)有觀察到10%以上的減重。進(jìn)一步調(diào)查發(fā)現(xiàn),LYPD3-CAR-T細(xì)胞不僅在小鼠外周血中大量存在,還在高響應(yīng)LYPD3-CAR-T治療的PC9異種移植瘤組織中大量浸潤(rùn)。此外,LYPD3-CAR-T治療組的小鼠脾臟內(nèi)出現(xiàn)大量CD3+T細(xì)胞,但在對(duì)照組中卻沒(méi)有。CAR-T細(xì)胞的記憶表型對(duì)于激發(fā)持久的免疫應(yīng)答至關(guān)重要。數(shù)據(jù)顯示,LYPD3-CAR-T細(xì)胞在輸注前,其中的Tn/Tscm細(xì)胞和Tcm細(xì)胞比例分別高達(dá)52.4%和21.7%,具有良好的向效應(yīng)細(xì)胞分化的潛能。結(jié)論:通過(guò)開(kāi)發(fā)腫瘤相關(guān)抗原識(shí)別算法和整合來(lái)自19種實(shí)體瘤和正常組織的大型轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和基因組數(shù)據(jù),完成了泛實(shí)體瘤相關(guān)抗原的探索。通過(guò)考察CDH17靶向型ADC和LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞在模型小鼠中的抗腫瘤活性,例證了CDH17和LYPD3蛋白分別作為ADC和CAR-T靶標(biāo)開(kāi)發(fā)的可行性。
二、血液細(xì)胞與分子生物學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、血液細(xì)胞與分子生物學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展（論文提綱范文）
（1）干擾素α聯(lián)合亞砷酸治療JAK2V617F突變陽(yáng)性真性紅細(xì)胞增多癥和原發(fā)性血小板增多癥的療效（論文提綱范文）
| 1 資料與方法 |
| 1.1 一般資料 |
| 1.2 治療方法 |
| 1.3 觀察指標(biāo)及相關(guān)定義 |
| 1.4 臨床療效及安全性評(píng)價(jià) |
| 1.5 隨訪 |
| 1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 兩組患者一般情況 |
| 2.2 療效分析 |
| 2.3 安全性分析 |
| 2.4 隨訪結(jié)果 |
| 3 討論 |
（2）CD68因子在急性髓系白血病患者中的表達(dá)情況及其臨床相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 材料和方法 |
| 研究對(duì)象 |
| 研究方法 |
| 試劑與儀器 |
| 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 結(jié) 果 |
| CD68在骨髓細(xì)胞中的表達(dá)率 |
| CD68在骨髓細(xì)胞中的表達(dá)水平與臨床特征的相關(guān)性分析 |
| 不同類(lèi)型AML患者外周血中CD68濃度的比較 |
| CD68因子在初診與緩解期AML中的比較 |
| CD68在外周血中的表達(dá)水平與臨床特征的相關(guān)性分析 |
| 討 論 |
（3）輸入性卵形瘧原蟲(chóng)感染實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 我國(guó)近年消除瘧疾進(jìn)展及輸入性PO感染概況 |
| 2 PO感染的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)與方法 |
| 2.1 病原學(xué)檢測(cè)——厚血膜/薄血膜檢驗(yàn)技術(shù) |
| 2.1.1 厚血膜 |
| 2.1.2 薄血膜 |
| 2.2 血液細(xì)胞分析儀在瘧原蟲(chóng)檢驗(yàn)中的篩選作用 |
| 2.3 分子生物學(xué)技術(shù)在PO檢驗(yàn)中的應(yīng)用 |
| 2.3.1 多重巢式PCR(M-Nest)技術(shù) |
| 2.3.2 實(shí)時(shí)熒光-PCR |
| 2.3.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析 |
| 2.3.4 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù) |
| 2.3.5 高通量基因芯片技術(shù)(high-throughput DNAmicroarray) |
| 2.4 瘧原蟲(chóng)感染的免疫學(xué)檢測(cè) |
| 3 結(jié)語(yǔ)與展望 |
（4）PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及其體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)的臨床前研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 研究背景及立題依據(jù) |
| 一、轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的治療現(xiàn)狀及研究進(jìn)展 |
| 二、靶向PD-1腫瘤細(xì)胞免疫治療的機(jī)制及發(fā)展現(xiàn)狀 |
| 三、大腸癌發(fā)生與腫瘤免疫治療的關(guān)系研究進(jìn)展 |
| 四、本研究的目的及意義 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一章、小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及其機(jī)制研究 |
| 第一部分、小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞的建立及其體外抑制腫瘤的作用 |
| 材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 本部分結(jié)果 |
| 1. 靶向PD1基因sgRNA的設(shè)計(jì)構(gòu)建及鑒定 |
| 2. PCR擴(kuò)增和T7E1酶切鑒定 |
| 3. PD-1基因敲除T細(xì)胞亞群比例檢測(cè) |
| 4. PD-1基因敲除T細(xì)胞體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng) |
| 5. PD-1基因敲除T細(xì)胞與CT-26細(xì)胞株共培養(yǎng)的體外抗腫瘤效應(yīng) |
| 6. PD-1基因敲除T細(xì)胞與CT-26細(xì)胞株共培養(yǎng)的體外細(xì)胞因子分泌 |
| 本部分討論 |
| 本部分結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分、小鼠PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及可能機(jī)制 |
| 材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 本部分結(jié)果 |
| 1. 結(jié)直腸癌小鼠模型中CD8~+細(xì)胞中PD-1表達(dá)顯著升高 |
| 2. 小鼠結(jié)直腸癌移植瘤模型的建立 |
| 3. 小鼠CT-26結(jié)直腸癌移植瘤模型體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng) |
| 4. 小鼠CT-26結(jié)直腸癌模型體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)可能機(jī)制 |
| 本部分討論 |
| 本部分結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章、食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞的體內(nèi)安全性評(píng)價(jià) |
| 第一部分、食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞的建立及其生物學(xué)特性 |
| 材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 本部分結(jié)果 |
| 1. 食蟹猴外周血T細(xì)胞的培養(yǎng) |
| 2. 食蟹猴PD-1敲除T細(xì)胞載體的構(gòu)建及敲除效率的檢測(cè) |
| 3. 食蟹猴PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞增殖的影響 |
| 4. 食蟹猴PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞亞群的影響 |
| 5. 食蟹猴PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞周期的影響 |
| 6. 食蟹猴PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞死亡殖的影響 |
| 7. 食蟹猴PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響 |
| 8. 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) |
| 本部分討論 |
| 本部分結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分、食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞的體內(nèi)安全性評(píng)價(jià) |
| 材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 本部分結(jié)果 |
| 1. 食蟹猴一般情況 |
| 2. 食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞體內(nèi)持續(xù)時(shí)間的檢測(cè) |
| 3. 食蟹猴PD-1基因敲除T細(xì)胞體內(nèi)安全性的評(píng)價(jià) |
| 4. PD-1基因敲除T細(xì)胞回輸對(duì)食蟹猴各組織器官的影響 |
| 本部分討論 |
| 本部分結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 綜述 PDH/PD-L1信號(hào)通路及其相關(guān)抗腫痛免疫療法在結(jié)直腸癌中的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 致謝 |
（5）臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課程中“再生障礙性貧血”課堂設(shè)計(jì)與教學(xué)體會(huì)（論文提綱范文）
| 1 教學(xué)背景與學(xué)情分析 |
| 2 通過(guò)臨床案例導(dǎo)入新課程、調(diào)動(dòng)學(xué)生主觀能動(dòng)性 |
| 3 優(yōu)化課程內(nèi)容，突出重點(diǎn)難點(diǎn) |
| 4 結(jié)合最新科研進(jìn)展，引導(dǎo)學(xué)生科研思維 |
| 5 加強(qiáng)課程思政，回歸教育本質(zhì) |
| 6 總結(jié) |
（6）hsa＿circ＿0001708與IKZF1的比值在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病診斷及分型中的價(jià)值（論文提綱范文）
| 1 資料與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 試劑與儀器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 建立檢測(cè)hsa_circ_0001708拷貝數(shù)的qPCR方法 |
| 1.3.2 骨髓標(biāo)本處理 |
| 1.3.3 標(biāo)本RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄、絕對(duì)定量PCR |
| 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 建立hsa_circ_0001708標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
| 2.2 hsa_circ_0001708與IKZF1在兒童B-ALL中的表達(dá) |
| 2.3 hsa_circ_0001708與IKZF1拷貝數(shù)的比值可作為兒童B-ALL的潛在生物標(biāo)志物 |
| 2.3.1 hsa_circ_0001708與IKZF1拷貝數(shù)的比值對(duì)兒童B-ALL有潛在診斷價(jià)值 |
| 2.3.2 hsa_circ_0001708和IKZF1拷貝數(shù)的比值與B-ALL患兒形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)(MICM)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果的相關(guān)性分析 |
| 2.3.3 hsa_circ_0001708和IKZF1拷貝數(shù)的比值與預(yù)后的相關(guān)性分析 |
| 3 討論 |
（7）陰虛津虧模型小鼠唾液腺水通道蛋白AQP1、AQP5的表達(dá)及意義（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理論探討 |
| 第一節(jié) 陰虛證動(dòng)物模型研究進(jìn)展 |
| 一、模擬病因病機(jī)建立陰虛證動(dòng)物模型 |
| 二、模擬臨床表現(xiàn)建立陰虛證動(dòng)物模型 |
| 三、不足與展望 |
| 第二節(jié) “陰主濡潤(rùn)”的理論源流與內(nèi)涵 |
| 一、“陰主濡潤(rùn)”的理論源流 |
| 二、“陰主濡潤(rùn)”的理論內(nèi)涵 |
| 第三節(jié) AQPs的研究概述 |
| 一、AQPs的分子結(jié)構(gòu) |
| 二、AQPs的分類(lèi)、分布及生理功能 |
| 第四節(jié) 基于“陰主濡潤(rùn)”理論探討AQPs與口干的相關(guān)性 |
| 一、AQPs與陰主濡潤(rùn)的關(guān)系 |
| 二、AQPs與唾液分泌的關(guān)系 |
| 三、AQPs在口干中的應(yīng)用 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 第一節(jié) 陰虛津虧動(dòng)物模型建立與評(píng)價(jià) |
| 一、實(shí)驗(yàn)材料 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 第二節(jié) AQP1、AQP5在陰虛津虧模型小鼠唾液腺中的表達(dá)及意義 |
| 一、實(shí)驗(yàn)材料 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 第三節(jié) 陰虛津虧模型小鼠“口干”癥狀的分子機(jī)制研究 |
| 一、實(shí)驗(yàn)材料 |
| 二、實(shí)驗(yàn)方法 |
| 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 結(jié)語(yǔ) |
| 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 本課題受如下項(xiàng)目資助 |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（8）視黃醇結(jié)合蛋白4對(duì)豬卵泡顆粒細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 第1章 哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育調(diào)控的研究進(jìn)展 |
| 1.1 哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育的特點(diǎn) |
| 1.2 哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育和閉鎖的調(diào)控 |
| 1.3 顆粒細(xì)胞對(duì)哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育和閉鎖的影響 |
| 第2章 RBP4的研究進(jìn)展 |
| 2.1 RBP蛋白簡(jiǎn)介 |
| 2.2 RBP基因簡(jiǎn)介 |
| 2.3 RBP4生物學(xué)功能 |
| 第3章 RBP4在動(dòng)物繁殖中的研究進(jìn)展 |
| 3.1 RBP4的基因多態(tài)性與母豬繁殖性能 |
| 3.2 RBP4在生殖系統(tǒng)中的表達(dá)和定位 |
| 3.3 RBP4與卵巢顆粒細(xì)胞 |
| 第二篇 研究?jī)?nèi)容 |
| 第1章 pLVX-RBP4慢病毒過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建、包裝和鑒定與si RNA干擾效果研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 小結(jié) |
| 第2章 RBP4對(duì)豬卵泡顆粒細(xì)胞凋亡和孕酮分泌的影響 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第3章 RBP4調(diào)控豬卵泡顆粒細(xì)胞功能的分子機(jī)制解析 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第4章 RBP4通過(guò)ERK1/2通路調(diào)控豬卵泡顆粒細(xì)胞凋亡和孕酮分泌的機(jī)制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 導(dǎo)師簡(jiǎn)介 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 攻讀博士期間取得的科研成果 |
| 致謝 |
（9）我國(guó)鮭鱒魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖常見(jiàn)流行疫病研究概況（論文提綱范文）
| 1 主要流行疫病 |
| 1.1 細(xì)菌性疾病 |
| 1.1.1 癤瘡病 |
| 1.1.2 細(xì)菌性敗血癥 |
| 1.1.3 其他細(xì)菌性疾病 |
| 1.2 病毒性疾病 |
| 1.2.1 傳染性造血器官壞死病 |
| 1.2.2 傳染性胰腺壞死病 |
| 1.2.3 病毒性出血性敗血癥 |
| 1.3 其他生物疾病 |
| 1.3.1 魚(yú)虱病 |
| 1.3.2 水霉病 |
| 2 流行疫病診斷技術(shù) |
| 2.1 組織病理學(xué)技術(shù) |
| 2.2 細(xì)菌培養(yǎng)鑒定技術(shù) |
| 2.3 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) |
| 2.4 免疫學(xué)技術(shù) |
| 2.5 分子生物學(xué)技術(shù) |
| 3 免疫防控技術(shù) |
| 3.1 滅活疫苗 |
| 3.2 重組疫苗 |
| 3.3 多聯(lián)疫苗 |
| 3.4 佐劑 |
| 4 展望 |
（10）泛實(shí)體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語(yǔ)對(duì)照表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 抗體偶聯(lián)藥物的知識(shí)現(xiàn)狀 |
| 引言 |
| 1.1.1 ADC發(fā)展簡(jiǎn)史 |
| 1.1.2 獲得監(jiān)管批準(zhǔn)的上市ADC |
| 1.1.3 臨床試驗(yàn)中的在研ADC及其靶標(biāo)圖譜 |
| 1.1.4 抗體骨架和靶標(biāo)的選擇 |
| 1.1.5 連接子類(lèi)型和偶聯(lián)技術(shù) |
| 1.1.6 有效載荷 |
| 1.1.7 ADC在體內(nèi)的工作原理 |
| 1.1.8 ADC對(duì)難治性癌癥的治療 |
| 1.1.9 ADC的毒性問(wèn)題 |
| 1.1.10 ADC耐藥機(jī)制 |
| 1.1.11 未來(lái)展望 |
| 1.2 嵌合抗原受體T細(xì)胞的知識(shí)現(xiàn)狀 |
| 引言 |
| 1.2.1 CAR-T發(fā)展簡(jiǎn)史 |
| 1.2.2 CAR-T細(xì)胞的工作原理 |
| 1.2.3 CAR和T細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu) |
| 1.2.4 獲得監(jiān)管批準(zhǔn)的CAR-T |
| 1.2.5 CAR-T細(xì)胞療法的毒性 |
| 1.2.6 未來(lái)挑戰(zhàn)、機(jī)會(huì)和應(yīng)用 |
| 1.3 本課題的研究目標(biāo) |
| 第二章 基于多組學(xué)構(gòu)建泛實(shí)體瘤相關(guān)抗原圖譜 |
| 引言 |
| 2.1 數(shù)據(jù)采集與分析方法 |
| 2.1.1 正常組織轉(zhuǎn)錄組和蛋白組的數(shù)據(jù)采集 |
| 2.1.2 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位數(shù)據(jù)的采集與編譯 |
| 2.1.3 人體組織器官的重排與映射 |
| 2.1.4 正常組織的表達(dá)及其分級(jí) |
| 2.1.5 基因在腫瘤及其癌旁組織之間的差異表達(dá)分析 |
| 2.1.6 基因在腫瘤與其他正常組織之間的差異表達(dá)分析 |
| 2.1.7 腫瘤組織轉(zhuǎn)錄組、基因組和表型數(shù)據(jù)的編譯 |
| 2.1.8 功能相關(guān)突變的注釋 |
| 2.1.9 預(yù)測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的蛋白過(guò)表達(dá)率 |
| 2.1.10 腫瘤相關(guān)抗原與癌細(xì)胞功能狀態(tài)的相關(guān)性分析 |
| 2.1.11 基因集富集得分分析 |
| 2.1.12 臨床試驗(yàn)的檢索策略 |
| 2.1.13 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2.2 分析結(jié)果 |
| 2.2.1 組裝綜合數(shù)據(jù)集并通過(guò)算法識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原 |
| 2.2.2 腫瘤相關(guān)抗原的表達(dá)譜與差異表達(dá)譜 |
| 2.2.3 腫瘤相關(guān)抗原的異質(zhì)表達(dá)譜 |
| 2.2.4 預(yù)測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的蛋白過(guò)表達(dá)率 |
| 2.2.5 癌癥驅(qū)動(dòng)基因變異全景 |
| 2.2.6 候選腫瘤相關(guān)抗原的組合評(píng)估 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 靶向CDH17 的新型ADC的制備及抗結(jié)直腸癌活性研究 |
| 引言 |
| 3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 TCGA與 GTEx中 CDH17的m RNA數(shù)據(jù)的獲取與分析 |
| 3.3.2 免疫原的設(shè)計(jì)與制備 |
| 3.3.3 制備靶向CDH17 的單克隆抗體的免疫方案 |
| 3.3.4 抗體可變區(qū)基因測(cè)序 |
| 3.3.5 鼠-人嵌合抗體的構(gòu)建與表達(dá)純化 |
| 3.3.6 抗體結(jié)合親和力的測(cè)定 |
| 3.3.7 CDH17 靶向抗體偶聯(lián)vc MMAE |
| 3.3.8 細(xì)胞內(nèi)吞實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.9 細(xì)胞膜蛋白的提取 |
| 3.3.10 免疫沉淀 |
| 3.3.11 免疫沉淀產(chǎn)物的銀染 |
| 3.3.12 蛋白免疫印跡 |
| 3.3.13 免疫組化 |
| 3.3.14 免疫熒光 |
| 3.3.15 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.16 體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.17 體內(nèi)抑瘤活性實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.18 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 CDH17 在消化道腫瘤和正常組織中的表達(dá) |
| 3.4.2 CDH17 靶向抗體的多重表征 |
| 3.4.3 CDH17 靶向ADC的制備與表征 |
| 3.4.4 CDH17 靶向ADC在體外的抗腫瘤活性 |
| 3.4.5 CDH17 靶向ADC在 KM12SM結(jié)腸癌異種移植模型中的抗腫瘤活性 |
| 3.4.6 CDH17 靶向ADC在 COLO205 結(jié)腸癌異種移植模型中的抗腫瘤活性 |
| 3.4.7 荷瘤小鼠對(duì)CDH17 靶向ADC的耐受性 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 第四章 靶向LYPD3的CAR-T細(xì)胞的抗肺腺癌活性研究 |
| 引言 |
| 4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 4.2 試劑耗材及設(shè)備 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 TCGA與 GTEx中 LYPD3 m RNA數(shù)據(jù)的獲取與分析 |
| 4.3.2 抗體人源化 |
| 4.3.3 慢病毒包裝 |
| 4.3.4 CD3+T細(xì)胞的復(fù)蘇與激活 |
| 4.3.5 CD3+T細(xì)胞慢病毒感染 |
| 4.3.6 CAR-T細(xì)胞分化與耗竭的檢測(cè) |
| 4.3.7 CAR-T體外細(xì)胞殺傷 |
| 4.3.8 CAR-T體內(nèi)活性實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.9 細(xì)胞因子的檢測(cè) |
| 4.3.10 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 LYPD3 蛋白在腫瘤和正常組織中的表達(dá) |
| 4.4.2 LYPD3 靶向的CAR-T細(xì)胞的體外抗腫瘤活性 |
| 4.4.3 LYPD3 靶向的CAR-T細(xì)胞在PC9 肺腺癌異種移植模型中抗腫瘤活性 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 本章小結(jié) |
| 第五章 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士期間取得的科研成果 |
| 致謝 |
四、血液細(xì)胞與分子生物學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)展（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]干擾素α聯(lián)合亞砷酸治療JAK2V617F突變陽(yáng)性真性紅細(xì)胞增多癥和原發(fā)性血小板增多癥的療效[J]. 雷林子,王耀美,劉玉章,劉麗娜,房佰俊. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué), 2022
- [2]CD68因子在急性髓系白血病患者中的表達(dá)情況及其臨床相關(guān)性研究[J]. 劉正華,王萍萍,顏曉菁. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志, 2022(01)
- [3]輸入性卵形瘧原蟲(chóng)感染實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 廖遠(yuǎn)泉. 中華臨床實(shí)驗(yàn)室管理電子雜志, 2021(04)
- [4]PD-1基因敲除T細(xì)胞治療結(jié)直腸癌的有效性及其體內(nèi)安全性評(píng)價(jià)的臨床前研究[D]. 高嫦娥. 昆明醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [5]臨床血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課程中“再生障礙性貧血”課堂設(shè)計(jì)與教學(xué)體會(huì)[J]. 許濤,張英杰,郝艷梅,禹莉,徐慧,馬芳,曹蘊(yùn),李玉云. 右江醫(yī)學(xué), 2021(10)
- [6]hsa＿circ＿0001708與IKZF1的比值在兒童急性B淋巴細(xì)胞白血病診斷及分型中的價(jià)值[J]. 付立芳,何霞,李佳,張航,鄒琳. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2021(20)
- [7]陰虛津虧模型小鼠唾液腺水通道蛋白AQP1、AQP5的表達(dá)及意義[D]. 崔榮興. 南京中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [8]視黃醇結(jié)合蛋白4對(duì)豬卵泡顆粒細(xì)胞功能的影響及其機(jī)制研究[D]. 趙云. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [9]我國(guó)鮭鱒魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖常見(jiàn)流行疫病研究概況[J]. 李樂(lè),于曉清,李翹楚,于道德,鄒琰,葉海斌,吳海一,刁菁. 生物技術(shù)進(jìn)展, 2021(04)
- [10]泛實(shí)體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用[D]. 方佳成. 西北大學(xué), 2021(12)