一、紅細胞、內(nèi)毒素對淋病病人中性粒細胞吞噬功能影響的實驗研究（論文文獻綜述）
齊家龍[1]（2021）在《抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的抗耐藥菌感染活性及其機制》文中指出敗血癥是病原菌感染導(dǎo)致全身性的急性器官功能損傷乃至危及生命的不受控制的炎癥反應(yīng)。據(jù)世界衛(wèi)生組織的報道,每年死于敗血癥的病患達到30萬人以上。敗血癥多為細菌感染,也有部分為真菌或者病毒感染所致。20世紀(jì)最偉大的發(fā)明之一是抗生素的發(fā)現(xiàn)和使用,抗生素在臨床的使用大大的提高了感染性疾病患者的生活質(zhì)量,然而抗生素的濫用也導(dǎo)致了耐藥菌株的出現(xiàn),甚至多重耐藥的“超級細菌”。耐藥菌感染導(dǎo)致的敗血癥不僅加重了醫(yī)療資源的浪費,對社會經(jīng)濟的發(fā)展帶來了極大的負面影響,更重要的是其嚴(yán)重影響了病患的生命健康安全。因此,研發(fā)有效的控制耐藥菌的治療手段刻不容緩?？咕氖且环N具有抑菌活性的小分子多肽,大多數(shù)的抗菌肽分子量小,結(jié)構(gòu)相對簡單,對細菌的殺傷能力強,是宿主抵抗病原菌感染的一道重要防線?？咕牡囊志δ苤饕瞧茐募毦さ姆€(wěn)定性和干擾細菌的繁殖。更加全面的了解抗菌肽的作用機理、新的作用靶點和其與免疫系統(tǒng)的相互作用對開發(fā)新的耐藥菌治療方案具有重要的意義。因此,本研究通過對不同結(jié)構(gòu)抗菌肽的抑菌效果進行篩選,尤其注重對臨床分離的多重耐藥菌株的抑菌作用,以期獲得新的抑菌作用位點和作用模式,為開發(fā)耐藥菌抑菌藥物研發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究前期通過對不同結(jié)構(gòu)抗菌肽的抑菌作用進行篩選,發(fā)現(xiàn)抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF對多株臨床分離的多重耐藥菌都有很好的抑菌效果,并且毒性較低,在血清的穩(wěn)定性好。1)抗菌肽Tachyplesin Ⅲ可以高效地破壞細菌膜的穩(wěn)定性、改變細菌的形態(tài)。低劑量的Tachyplesin Ⅲ可導(dǎo)致部分細菌死亡并主要結(jié)合在細菌胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)上。轉(zhuǎn)錄組結(jié)果顯示,Tachyplesin Ⅲ處理后,耐藥菌的非飽和脂肪酸合成途徑發(fā)生顯著的改變。進一步的分析表明,Tachyplesin Ⅲ可以競爭性的結(jié)合FabG與NADPH作用的酶活性中心,并抑制其對NADPH的消耗從而達到抑菌的效果。體內(nèi)實驗顯示,混合多重耐藥菌感染比單一的耐藥菌感染臨床表現(xiàn)更差,炎癥情況更加嚴(yán)重,小鼠死亡率更高。而Tachyplesin Ⅲ能有效地保護小鼠免受混合的耐藥菌感染,提高小鼠生存率,此外還可以有效的提高巨噬細胞的吞噬能力。2)抗菌肽Cathelicidin BF在1/4最小抑菌濃度的劑量處理下并不能完全導(dǎo)致細菌的死亡,但是可以穿過細胞膜結(jié)構(gòu)并作用于細菌的內(nèi)部位點。進一步的蛋白組學(xué)的結(jié)果表明其參與了 RNA轉(zhuǎn)錄的過程。而4 MIC的高劑量處理也可以破壞所有細菌的膜完整性從而達到殺傷細菌的作用。本研究更加側(cè)重的分析了 Cathelicidin BF的免疫調(diào)節(jié)能力,尤其是其對中性粒細胞外捕獲網(wǎng)的調(diào)控作用。Cathelicidin BF可以在體外刺激NETs的形成,呈現(xiàn)劑量依賴的趨勢。體內(nèi)的結(jié)果表明,Cathelicidin BF可以有效的募集中性粒細胞和巨噬細胞進入肺部組建免疫防線。耐藥菌感染后中性粒細胞形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)捕獲和殺傷細菌,巨噬細胞的吞噬細菌能力也被增強,在二者共同的作用下增強了小鼠抗耐藥菌感染的能力,這整個的過程受到了細胞自噬的調(diào)控。本研究還初步探討了 NETs形成過程中關(guān)鍵通路RIPK3-MLKL在宿主抗耐藥菌感染過程中的作用。綜上所述,本研究的結(jié)果初次揭示了 Tachyplesin Ⅲ的全新作用位點及機制,以及以此為靶點開發(fā)新的抑菌藥物的潛力。此外,我們還分析了抗菌肽Cathelicidin BF通過調(diào)動宿主的免疫系統(tǒng)抗耐藥菌感染的作用機理。我們的研究揭示了兩種不同作用模式的抗菌肽的抑菌機制,提示以抗菌肽作用機理為基礎(chǔ)進行多重耐藥菌感染引起的敗血癥藥物研發(fā)具有明顯的潛力。
章宏雨[2]（2020）在《MiR-150通過中性粒細胞對小鼠細菌感染發(fā)病的影響》文中進行了進一步梳理目的探討Micro RNA-150通過中性粒細胞對小鼠細菌感染發(fā)病的影響。方法利用兩組小鼠,一組去除Micro RNA-150基因的小鼠（Micro RNA-150knock-out,Mi R-150KO）及另外一組正常野生型WT-C57BL/6J小鼠（Wild typeC57BL/6J,WT-C57BL/6J）進行如下實驗:1提取mi R-150敲除小鼠和野生型WTC57BL/6J小鼠鼠尾基因組采取PCR擴增技術(shù)檢測基因型;2 mi R-150基因敲除做real-time-PCR鑒定;3 mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠血常規(guī)和流式細胞測定中性粒細胞;4制備細菌感染模型:選擇（6-10周）匹配的雄性mi R-150敲除和WT-C57BL/6J小鼠,分組為150KO對照組、150KO實驗組、WTC57BL/6J對照組、WT-C57BL/6J實驗組。實驗組經(jīng)過尾靜脈分別給予大腸桿菌生理鹽水溶液100μL,同時對照組100μL無菌生理鹽水尾靜脈注射;每隔4小時觀察記錄一次,總共觀察24h,記錄小鼠一般表現(xiàn),mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠感染后24h存活率對比;5感染后mi R-150基因敲除小鼠和野生型WT-C57BL/6J小鼠骨髓和外周血PMN流式細胞分析;6感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠血培養(yǎng)菌落計數(shù);7感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN瑞氏染色;8 mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠外周血PMN體外吞噬試驗;9感染后mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠肺臟組織切片和HE染色。結(jié)果1.mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠鼠尾基因組DNA經(jīng)過PCR擴增,分別產(chǎn)生了262bp和866bp長度片段,明確基因型無誤。2.mi R-150基因敲除小鼠和WT-C57BL/6J小鼠胸腺和脾臟細胞進行real-time-PCR,mi R-150基因敲除小鼠對于mi R-150基因的表達明顯低于WT-C57BL/6J小鼠。3.常規(guī)血球計數(shù)和流式結(jié)果顯示:mi R-150基因敲除小鼠外周血白細胞、中性粒細胞和中性粒細胞百分比都顯著高于WT-C57BL/6J小鼠,骨髓做流式細胞分析發(fā)現(xiàn)兩組小鼠中性粒細胞沒有明顯差異。4.感染存活實驗結(jié)果為對照組mi R-150基因敲除小鼠和WTC57BL/6J小鼠全部存活,存活率為100%;實驗組mi R-150基因敲除小鼠存活率為（73.3±3.3）%,實驗組WT-C57BL/6J小鼠存活率為（46.7±2.5）%,存活率前者顯著高于后者。5.感染后外周血和骨髓流式細胞術(shù)分析結(jié)果:實驗組mi R-150基因敲除小鼠外周血PMN顯著高于WT-C57BL/6J小鼠,而骨髓中性粒細胞明顯低于WT-C57BL/6J小鼠,兩種小鼠骨髓中性粒細胞均較各自對照組明顯下降。6.載菌血培養(yǎng)實驗:對照組兩種小鼠血培養(yǎng)平板均無菌落生成,實驗組小鼠外周菌血培養(yǎng)12h生成明顯白色濕潤,邊緣整齊,圓形有特殊氣味菌落;WT-C57BL/6J小鼠菌血培養(yǎng)形成的菌落數(shù)目（4.20±0.18）×103/20μL外周血,mi R-150基因敲除小鼠計數(shù)菌落（0.48±0.01）×103/20μL外周血,mi R-150基因敲除小鼠單位體積外周血活菌含量明顯較WT-C57BL/6J小鼠少。7.瑞氏染色結(jié)果顯示:對照組mi R-150基因敲除小鼠比WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN數(shù)量多,形態(tài)無明顯差別,多為3～5分葉核中性粒細胞;實驗組mi R-150基因敲除小鼠比WT-C57BL/6J小鼠外周血PMN數(shù)量多,前者多為分葉核中性粒細胞,并且出現(xiàn)PMN的破碎顆粒,后者PMN中桿狀核比例增高。8.PMN體外吞噬實驗結(jié)果顯示:mi R-150KO小鼠PMN吞噬百分率（95.0±5.8）%,WT-C57BL/6J小鼠PMN吞噬百分率（87.0±3.6）%,mi R-150KO小鼠中性粒細胞吞噬能力高于WT-C57BL/6J小鼠。9.肺臟組織切片HE染色:對照組肺臟組織切片可見肺臟無水腫,無出血,肺泡壁結(jié)構(gòu)完整,形態(tài)正常,肺泡腔清晰,無明顯的滲出物,肺泡和間質(zhì)無炎性細胞浸潤。實驗組Mi R-150KO小鼠肺泡體積增大,肺泡間隔有所增寬,肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)炎性細胞,但完整性尚未遭到破壞。實驗組WT-C57BL/6J小鼠肺泡腔明顯大小不等,肺泡間隔增寬,肺泡壁變薄,完整性部分遭破壞,肺泡周圍浸潤了較多炎癥細胞。結(jié)論1.mi R-150的缺失導(dǎo)致小鼠中性粒細胞數(shù)量明顯增高。2.mi R-150的缺失可以可以降低細菌感染后血液中活菌數(shù)目,提高小鼠存活率。3.mi R-150的缺失可以減輕細菌感染造成的肺臟損傷。4.mi R-150的缺失可以增強小鼠細菌感染發(fā)病致死的抵抗能力。圖13幅;表7個;參142篇。
呂萃[3]（2020）在《多能干細胞分化再生T細胞的體內(nèi)抗腫瘤評估及再生可移植髓系細胞研究》文中認為從多能干細胞誘導(dǎo)分化出可移植、有功能的血液及免疫細胞一直是再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點和難點。本文第一部分證明小鼠胚胎干細胞分化來源、體內(nèi)成熟的T細胞可以結(jié)合CAR-T技術(shù)改造實現(xiàn)體內(nèi)清除腫瘤的目的,第二部分初步實現(xiàn)誘導(dǎo)小鼠胚胎干細胞獲得可移植的髓系祖細胞種子,移植后可在體內(nèi)短期再生髓系細胞（包括粒細胞、單核-巨噬細胞）。本研究為再生T細胞以及可移植髓系細胞的轉(zhuǎn)化研究提供了技術(shù)借鑒。嵌合抗原受體 T 細胞（Chimeric Antigen Receptor T cells,CAR-T）療法已成為臨床上治療血液腫瘤的有效手段。通常CAR-T細胞是通過分離患者外周血來源的T細胞在體外進行基因編輯而制備,但是患者自身的T細胞數(shù)量有限且經(jīng)常出現(xiàn)功能異常或耗竭,因此需要探索T細胞新的來源。本研究基于課題組已開發(fā)的定向誘導(dǎo)T細胞技術(shù),利用Runx1-Hoxa9條件性表達的多能干細胞系誘導(dǎo)分化出可植入免疫缺陷鼠（B-NDG）的造血祖細胞（induced hematopoietic progenitorcells,iHPCs）,移植B-NDG小鼠5周后,從脾臟中分離出再生的T細胞（induced T cells,iT）,通過將iT細胞感染CD19-CAR逆轉(zhuǎn)錄病毒制備CD19-CAR iT細胞。為了驗證CD19-CAR iT細胞在體內(nèi)針對B淋巴瘤細胞的殺傷功能,本研究首先通過移植表達熒光素酶（luciferase）的B淋巴瘤細胞（Ka539-luciferase）構(gòu)建了基于C57BL/6的腫瘤負荷鼠模型,隨后分別將CD19-CAR iT細胞和Ctrl-CARiT細胞（陰性對照）過繼移植到腫瘤模型中,流式檢測發(fā)現(xiàn)CD19-CAR iT細胞可以持久抑制外周血中CD19+B細胞的產(chǎn)生,這表明了其具有針對特異抗原的直接殺傷能力。同時小鼠活體成像實驗證實CD19-CAR iT細胞可以有效緩解腫瘤模型鼠的腫瘤負荷,并且相比于對照組,經(jīng)過CD19-CAR iT細胞治療的腫瘤鼠能夠顯著延長生存時間（>70天）。其次,CD19-CAR iT細胞在體內(nèi)接受到CD19抗原刺激后能夠快速增殖,并且可被大量激活（CD44+CD62L-）,從側(cè)面印證了 CD19-CARiT細胞功能的有效性。以上結(jié)果說明CD19-CAR iT細胞可以有效清除B淋巴瘤細胞,也驗證了由多能干細胞誘導(dǎo)再生的iT細胞可以用于制備CAR-T細胞,這為T細胞療法的新細胞來源提供了技術(shù)參考。與此同時,髓系細胞,特別是粒細胞和單核-巨噬細胞,是天然免疫系統(tǒng)重要成員,在吞噬、殺菌和抗病原體感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此,再生有功能的髓系細胞對移植和化療后的抗感染治療具有重要的臨床意義。本研究發(fā)現(xiàn),Runx1-Hoxa10二因子條件性誘導(dǎo)表達的mES細胞系（iR10 mESCs細胞系）可誘導(dǎo)分化獲得可移植的造血細胞種子,移植后體內(nèi)再生出髓系細胞,包括粒細胞和單核-巨噬細胞。具體而言,首先通過形成擬胚體（Embryoid bodies,EBs）的方式模擬胚胎發(fā)育早期階段,隨后通過誘導(dǎo)Runx1和Hoxa10的表達和添加特定造血細胞因子進行培養(yǎng)獲得誘導(dǎo)型生血內(nèi)皮細胞（iHECs,CD31+CD41lowCD45-c-Kit+CD201hi）。生成的iHECs再和OP9-DL1基質(zhì)細胞共培養(yǎng)獲得誘導(dǎo)型造血祖細胞（induced hematopoietic progenitor cells,iHPCs）,這些 iHPCs 植入半致死輻照后的Rag1-/-小鼠后成功再生髓系細胞（CD11b+）。PCR測序結(jié)果證明體內(nèi)再生的髓系細胞確實插入了目的基因Runx1和Hoxa10。此外,在骨髓和脾臟組織中均檢測到再生的髓系細胞,包括粒細胞（CD11b+Gr1+）、單核細胞（CD11b+Gr1-F4/80-）和巨噬細胞（CD11b+F4/80+）。最后,iHPCs在移植入半致死輻照后的野生型受體鼠后也成功再生髓系細胞。結(jié)合再生髓系細胞的功能實驗結(jié)果,本研究將為再生人髓系細胞提供技術(shù)參考,也有望為臨床上抗感染細胞療法等提供新的細胞來源。
張猛猛[4]（2019）在《瑪咖根部多糖的結(jié)構(gòu)鑒定及免疫調(diào)節(jié)活性的研究》文中研究指明瑪咖雖然原產(chǎn)地是秘魯,但我國自引種瑪咖以來已成為世界上的瑪咖主要出產(chǎn)國。然而近些年來,我國的瑪咖市場陷入了低谷。造成這一結(jié)果的原因之一就是對于瑪咖的物質(zhì)組成和生理活性沒有正確而全面的認識。瑪咖多糖作為瑪咖的活性成分之一,在近年來逐漸受到關(guān)注。但是目前的研究多以我國的瑪咖為主,對于原產(chǎn)地秘魯瑪咖中多糖的結(jié)構(gòu)解析和生理活性的探索還很缺乏。因此本文以秘魯瑪咖干根為原料,從中分離出兩種多糖,對這兩種多糖的基本結(jié)構(gòu)和生理活性進行了研究。主要研究結(jié)果如下:（1）作者首先研究了實驗中所用的秘魯瑪咖中的纖維素、淀粉、蛋白質(zhì)、脂類等基本組成成分的含量。另外,采用水提法提取瑪咖多糖,通過單因素法優(yōu)化了瑪咖多糖的提取工藝,確定了最佳提取條件為料液比1:30,提取溫度100℃,提取時間2 h,提取次數(shù)為一次。最終使用最佳提取條件所得到的瑪咖多糖的得率為6.13%。之后通過離子交換柱層析和葡聚糖凝膠柱層析純化出三種瑪咖多糖MC-1、MC-2和MC-3。選取MC-1和MC-2為后續(xù)實驗的研究對象。MC-1和MC-2的多糖純度分別為97.5%和98.3%。之后通過紫外光譜掃描和內(nèi)毒素檢測確認MC-1和MC-2中不含核酸、蛋白質(zhì)和內(nèi)毒素等雜質(zhì)。通過TG-DSC發(fā)現(xiàn)MC-1和MC-2具有良好的熱穩(wěn)定性,其中MC-2的熱穩(wěn)定性要好于MC-1。（2）然后通過高效凝膠滲透色譜、紅外光譜掃描、氣相質(zhì)譜、甲基化分析、核磁共振和剛果紅實驗等解析了MC-1的基本結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)MC-1的分子量11.3 kDa,主要是由阿拉伯糖（26.21%）,甘露糖（11.81%）和葡萄糖（53.66%）和半乳糖（8.32%）組成,主要的糖苷鍵類型是（1→5）-α-L-Ara,（1→3）-α-L-Man,（1→2,6）-α-L-Man,（1→）-α-D-Glc,（1→4）-α-D-Glc,（1→6）-α-D-Glc and（1→6）-β-D-Gal。作者以小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞為模型,研究了MC-1的免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)果表明MC-1可以增強小鼠巨噬細胞細胞的吞噬能力,增加NO,TNF-α和IL-6的表達和分泌,說明MC-1具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性。此外,MC-1在RAW 264.7細胞膜表面的識別受體為TLR2,CR3和MR。（3）作者用同樣的方法對MC-2的基本結(jié)構(gòu)進行了鑒定。結(jié)果表明MC-2是一種分子量為9.83kDa的多糖,其主要由阿拉伯糖（20.9%）,甘露糖（4.5%）,葡萄糖（71.9%）和半乳糖（2.7%）組成。MC-2的主要糖苷鍵連接類型是（1→5）-α-L-Ara,（1→3）-α-L-Man,（1→）-α-D-Glc,（1→4）-α-D-Glc,（1→6）-α-D-Glc和（1→6）-β-D-Gal,而且MC-2具有三螺旋的空間構(gòu)象。在以RAW 264.7細胞為模型的免疫活性評價試驗中,MC-2表現(xiàn)出比MC-1更高的對免疫調(diào)節(jié)活性。此外,MC-2不僅可以誘導(dǎo)M0型巨噬細胞向M1型極化,還可以使M2型巨噬細胞轉(zhuǎn)化為M1表型。盡管MC-2不能將巨噬細胞從M1型轉(zhuǎn)為M2型,但它仍然可以抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。而MC-2是通過TLR2,TLR4,CR3和MR四種受體來激活巨噬細胞的。（4）在以Caco2細胞單層膜為模型的研究中,發(fā)現(xiàn)MC-1和MC-2難以被小腸吸收。但是MC-1和MC-2可以促進Caco2細胞分泌IL-8、IL-10、IL-12和INF-γ等細胞因子,并能夠通過Caco2細胞單層膜促進RAW264.7細胞分泌TNF-α、IL-6和NO等細胞因子。此外,MC-1和MC-2還可以通過調(diào)節(jié)TLR4受體的轉(zhuǎn)錄水平來調(diào)節(jié)ZO-1和occludin等蛋白的表達,進而改善LPS導(dǎo)致的Caco2單層膜致密性的損傷。同時MC-1和MC-2還可以抑制LPS引起的Caco2細胞的TNF-α、IL-8和INF-γ等炎癥因子的分泌,并提高IL-10等抗炎因子的分泌。（5）作者還對MC-1和MC-2抗腫瘤、抗氧化、抗病毒和抗脂肪肝等生理活性進行了初步探索。發(fā)現(xiàn)MC-1和MC-2擁有較弱的直接抑制腫瘤細胞增殖的能力,但MC-1和MC-2能通過激活巨噬細胞展現(xiàn)較強的抑制腫瘤增殖的活性;MC-1和MC-2的自由基清除能力和還原力都很弱,但MC-1和MC-2能夠很好的保護AAPH產(chǎn)生的自由基對紅細胞和肝細胞的氧化損傷;MC-1和MC-2幾乎沒有抗HBV的活性,僅MC-2在較高濃度時對HBeAg有一定的抑制作用;MC-1對于油酸和棕櫚酸誘導(dǎo)的肝細胞的脂肪變性沒有緩解作用,而MC-2對此展現(xiàn)出了較好的改善能力。以上的研究結(jié)果表明,MC-1和MC-2是一種新的瑪咖多糖,其對巨噬細胞和腸道免疫系統(tǒng)具有顯著的免疫調(diào)節(jié)活性,并且在抗腫瘤、抗氧化和抗脂肪肝方面表現(xiàn)出一定的潛力。這些結(jié)果為瑪咖多糖更深入的研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
史昭[5]（2019）在《NLRP3炎癥小體信號通路在脾虛肝郁型盆腔炎性疾病反復(fù)發(fā)作中的作用機制研究》文中研究表明目的通過觀察盆腔炎性疾病反復(fù)發(fā)作（Recurrent pelvic inflammatory disease,RPID）脾虛肝郁證患者與健康女性單個核細胞核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）mRNA表達量的差異性,及血清中胱天蛋白酶-1（cysteine aspartate protease-1,Caspase-1）、白細胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白細胞介素-18（interleukin-18,IL-18）的差異,RPID患者中醫(yī)證候、體征評分、病程、病情等級、病原體感染與NLRP3炎癥小體信號通路相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性,探討NLRP3炎癥小體信號通路在RPID中的作用機制。方法選擇就診于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院2016年9月—2018年11月婦科門診診斷為RPID、中醫(yī)辨證為脾虛肝郁證,符合病例納入標(biāo)準(zhǔn)的患者22例作為觀察組,同期體檢的健康婦女18例作為對照組,在獲得知情同意后的當(dāng)天采集血液樣本,抽取肘靜脈血3ml,其中1ml存于EDTA抗凝采血管,采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）檢測外周血單個核細胞中目的基因NLRP3mRNA表達水平;另一份2ml存于血清管制成血清標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測血清中Caspase-1,IL-1β,IL-18的含量,同時觀察組填寫癥狀體征評分表,根據(jù)患者意愿取宮頸管分泌物病原體培養(yǎng)支原體,RT-PCR法檢測衣原體和淋球菌。結(jié)果1.實驗室指標(biāo)檢查結(jié)果1.1 RT-PCR檢查外周血單核細胞NLRP3 mRNA的表達水平:觀察組NLRP3mRNA表達水平為0.187±0.171,對照組的NLRP3 mRNA表達水平為0.096±0.109。觀察組的NLRP3mRNA表達水平高于對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。1.2 ELISA檢測血清中Caspase-1,IL-1β,IL-18的含量1.2.1外周血清Caspase-1的表達水平:觀察組的Caspase-1的表達水平為12.355±7.515ng/ml,對照組的Caspase-1的表達水平為15.148±9.594 ng/ml。觀察組的Caspase-1的表達水平稍低于對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。1.2.2外周血清IL-1β的表達水平:觀察組的IL-1β的表達水平為7.053±2.217pg/ml,對照組的IL-1β的表達水平為7.958±3.752 pg/ml。觀察組的IL-1β的表達水平稍低于對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。1.2.3外周血清IL-18的表達水平:觀察組的IL-18的表達水平為19.617±3.704pg/ml,對照組的IL-18的表達水平為39.544±9.870 pg/ml。觀察組的IL-18的表達水平顯著低于對照組,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。2.相關(guān)性分析2.1 NLRP3炎癥小體信號通路相關(guān)因子間相關(guān)性分析2.1.1觀察組各指標(biāo)間相關(guān)性分析:觀察組中,NLRP3mRNA與Caspase-1呈正相關(guān)（r=0.141）,NLRP3mRNA與IL-1β、IL-18的表達呈負相關(guān)（r=-0.213、-0.104）,相關(guān)性均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。2.1.2對照組各指標(biāo)間相關(guān)性分析:在對照組中,NLRP3mRNA與Caspase-1、IL-1β、IL-18的表達均呈正相關(guān)。其中NLRP3mRNA與IL-1β呈正相關(guān)（r=0.505）,相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;NLRP3mRNA與Caspase-1、IL-18呈正相關(guān),（r=0.205、0.139）,相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;Caspase-1與IL-1β呈正相關(guān)（r=0.575）,相關(guān)性具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.2 NLRP3炎癥小體信號通路相關(guān)因子與中醫(yī)證候評分、體征評分、病程相關(guān)分析觀察組NLRP3mRNA表達水平與患者中醫(yī)證候評分、體征評分、病程呈正相關(guān)（r=0.098、0.219、0.010）;Caspase-1與中醫(yī)證候評分、病程呈負相關(guān)（r=-0.153、-0.194）,與體征評分呈正相關(guān)（r=0.112）;IL-1β與中醫(yī)證候評分呈負相關(guān)（r=-0.209）,與體征評分、病程呈正相關(guān)（r=0.042,0.296）;IL-18與中醫(yī)證候評分、病程呈負相關(guān)（r=-0.104、-0.238）,與體征評分呈正相關(guān)（r=0.015）,但相關(guān)性均不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。2.3 NLRP3炎癥小體信號通路相關(guān)指標(biāo)與病情等級、支原體感染相關(guān)分析觀察組NLRP3mRNA表達水平與患者病情等級、支原體感染呈正相關(guān)（r=0.113、0.430）;Caspase-1與病情等級呈負相關(guān)（r=-0.252）,與支原體感染呈正相關(guān)（r=0.233）;IL-1β與病情等級、支原體感染呈負相關(guān)（r=-0.051、-0.465）;IL-18與病情等級幾乎無相關(guān)性（r=-0.003）,與支原體感染呈正相關(guān)（r=0.072）。以上均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論1.NLRP3mRNA、Caspase-1、IL-1β組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義,NLRP3炎癥小體信號通路相關(guān)指標(biāo)與患者中醫(yī)證候評分、體征評分、病程、病情等級、支原體感染無明顯相關(guān)性,NLRP3炎癥小體信號通路在脾虛肝郁證RPID中的作用尚不確切。2.觀察組IL-18的表達水平顯著低于對照組,提示RPID可能與IL-18的低表達有關(guān)。3.在對照組中,NLRP3mRNA轉(zhuǎn)錄水平與IL-1β、Caspase-1與IL-1β均呈顯著正相關(guān),但在觀察組中,各指標(biāo)間無明顯相關(guān)性。一定程度上提示RPID與患者機體免疫功能失衡有關(guān)。
馬潔[6]（2018）在《扶正透邪解毒化瘀方對MDRPA的抑菌作用及免疫損傷的部分干預(yù)機制研究》文中指出目的:通過觀察扶正透邪解毒化瘀方及其含藥血清聯(lián)合抗生素對MDRPA的體外抑制作用和該方對MDRPA感染所致老年肺炎大鼠的體內(nèi)保護作用與免疫炎性損傷的影響,揭示該方抗MDRPA的作用機制。方法:采用試管稀釋法、K-B紙片法觀察扶正透邪解毒化瘀方及其含藥血清聯(lián)合抗生素對MDRPA的體外抑制作用,并在透射電鏡下觀察該方對MDRPA形態(tài)學(xué)超微結(jié)構(gòu)的影響。采用經(jīng)口氣管插管法制備MDRPA肺炎模型,觀察該方及其聯(lián)合抗生素對老年肺炎大鼠的體內(nèi)保護作用以及感染不同時相相關(guān)炎癥指標(biāo)、淋巴細胞增殖能力和肺組織病理損傷的影響。結(jié)果:1測定實驗菌株MDRPA生長曲線,試管稀釋法中,中藥提取物的MIC為0.14 g/ml?？瞻籽鍥]有明顯抑菌作用,不同劑量的中藥含藥血清具有一定的抑菌作用。亞胺培南、亞胺培南聯(lián)合空白血清的MIC均為16 μg/ml,亞胺培南聯(lián)合小劑量、中劑量含藥血清MIC均為8 μg/ml,亞胺培南聯(lián)合大劑量含藥血清的MIC為4μg/ml。頭孢他啶、頭孢他啶聯(lián)合空白血清MIC為128μg/ml,頭孢他啶聯(lián)合小劑量含藥血清MIC為64 μg/ml;頭孢他啶聯(lián)合中劑量、大劑量含藥血清MIC為32 μg/ml。K-B紙片法中,抗生素聯(lián)合含藥血清各組抑菌作用較抗生素、抗生素聯(lián)合空白血清強。抗生素聯(lián)合不同劑量含藥血清各組間比較,無明顯差異。2透射電鏡下觀察,正常的MDRPA呈現(xiàn)出典型的革蘭氏陰性桿菌的形態(tài),經(jīng)過不同劑量的含藥血清聯(lián)合亞胺培南干預(yù)后,細菌的外膜、胞質(zhì)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)等發(fā)生了不同程度的破壞。3采用經(jīng)口氣管插管法建立MDRPA肺炎模型,接種后1 d、3d,實驗組大鼠肺組織勻漿均培養(yǎng)出MDRPA,對照組大鼠肺組織勻漿未培養(yǎng)出MDRPA（P<0.05）。觀察期內(nèi)隨著時間的延長,實驗組大鼠肺組織細菌負荷量呈下降趨勢。接種后5 d、7d,實驗組與對照組大鼠肺組織勻漿均未培養(yǎng)出MDRPA（P>0.05）。肺組織病理為肺炎的病理表現(xiàn)。MDRPA 對老年大鼠的 LD50 為 3.251 × 108 CFU/ml,LD50的 95%可信區(qū)間為 1.340×108 CFU/ml-5.161 X 108 CFU/ml。4篩選最佳有效劑量,空白組分別與模型組、中藥大劑量組、中劑量組、小劑量組的死亡率比較,有顯著差異（P<0.05）?？瞻捉M與模型組、中藥大劑量組、小劑量組的平均生活日比較,有顯著差異（P<0.05）;空白組與中藥中劑量組比較,平均生活日沒有顯著差異（P>0.05）。中藥大劑量組、中劑量組、小劑量組的死亡保護率分別為 22.22%、22.22%、11.11%,生命延長率分別為 45.00%、60.00%、30.00%。體內(nèi)保護作用,空白組分別與模型組、西藥組、中藥組比較,死亡率有顯著差異（P<0.05）;與中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組比較,死亡率沒有顯著差異（P>0.05）?？瞻捉M分別與模型組、中藥組的平均生活日比較有顯著差異（P<0.05）,與西藥組、中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組比較沒有顯著差異（P>0.05）。藥物干預(yù)治療各組,西藥組、中藥組、中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組,各組的死亡保護率為33.33%、22.22%、55.56%、44.44%,生命延長率為 56.00%,24.00%,88.00%,72.00%。5 WBC比較:每個時間點內(nèi),各個組間比較,空白組、模型組以及各藥物干預(yù)組,組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;在不同的時間點,空白組、模型組以及各個藥物干預(yù)組,每個處理組不同時間節(jié)點之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。NE%比較:每個時間點內(nèi)的各組進行縱向比較,NE%在每個時間節(jié)點內(nèi)不同處理組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。空白組NE%在不同時間點進行比較,沒有明顯差異（P>0.05）。各感染組在感染后2h、1d均出現(xiàn)NE%的上升,3d、5d、7d出現(xiàn)下降趨勢。模型組NE%在1d時分別與3d、5 d、7 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,NE%在3 d、5 d、7 d時呈下降趨勢。西藥組NE%在2 h、1 d時分別與3 d、5 d、7d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,NE%在西藥干預(yù)3d、5d、7d時降低;中藥提前給藥組NE%在2h、1d時分別與5d、7d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,中藥提前給藥組在治療5d、7d時降低;中西結(jié)合組NE%在2 h、1 d時分別與5 d、7 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,中西醫(yī)結(jié)合在治療5 d、7 d時NE%下降明顯。LY%比較:各個時間點內(nèi)的各組進行縱向比較,LY%在每個時間節(jié)點內(nèi)不同處理組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）?？瞻捉M大鼠LY%在不同時間點進行比較,沒有明顯差異（P>0.05）。各感染組在感染后3d、5d、7d,LY%出現(xiàn)上升趨勢。模型組LY%在感染后3 d、5 d、7 d與2 h、1 d比較,有上升趨勢,經(jīng)統(tǒng)計,此差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。西藥組LY%在2 h、1 d時分別與3 d、5 d、7 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,在西藥治療3 d、5 d、7 d時LY%升高明顯;中藥提前給藥組的LY%在2 h、1 d時分別與5 d、7 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,在中藥提前給藥組在治療5 d、7 d時LY%明顯升高;中西結(jié)合治療組的LY%在2 h時分別與5 d、7 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,LY%在1 d時與5 d進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,中西醫(yī)結(jié)合治療組在5 d、7d時LY%明顯升高。6 T淋巴細胞增殖能力測定:西藥組、中藥組、中藥提前給藥組分別與空白組比較,西藥組、中藥組和中藥提前給藥組T淋巴細胞增殖能力較空白組降低（P<0.05）;中西醫(yī)結(jié)合組與空白組比較無明顯差異（P>0.05）,中西結(jié)合治療組的T淋巴細胞增殖能力趨于正常。模型組與其他各組比較,模型組T淋巴細胞增殖能力最強（P<0.05）;西藥組分別與中藥組、中藥提前給藥組比較,T淋巴細胞增殖能力沒有明顯差異（P>0.05）;中西醫(yī)結(jié)合組分別與西藥組、中藥組、中藥提前給藥組比較,T淋巴細胞增殖能力不相同（P<0.05）,中西醫(yī)結(jié)合組T淋巴細胞增殖能力較其他各組強。B淋巴細胞增殖能力測定:中藥組、模型組分別與空白組比較,中藥組、模型組B淋巴細胞增殖能力較空白組強（P<0.05）;西藥組、中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組分別與空白組比較,B淋巴細胞增殖能力沒有明顯差異（P>0.05）;模型組分別與其他各組比較,模型組B淋巴細胞增殖能力較其他各組都升高（P<0.05）;西藥組分別與中藥組、中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組比較,B淋巴細胞增殖能力沒有明顯差異（P>0.05）;中藥提前給藥組與中藥組比較,中藥提前給藥組B淋巴細胞增殖能力較中藥組低（P<0.05）。7肺病理:空白組老年大鼠肺組織有輕度慢性炎性,造模后2 h有肺炎表現(xiàn),6 h炎癥逐漸加重,1d、3d炎癥最明顯,呈斑片狀實質(zhì)性浸潤,5 d、7 d炎癥逐漸穩(wěn)定。各藥物干預(yù)治療組,中西醫(yī)結(jié)合組炎癥較輕,其次是中藥提前給藥組,其次是西藥組和中藥組。結(jié)論:1試管稀釋法和K-B紙片法中,含藥血清聯(lián)合抗生素具有協(xié)同抑菌作用,并且透射電鏡下觀察,抗生素聯(lián)合的含藥血清濃度越高,MDRPA超微結(jié)構(gòu)的破壞程度也越嚴(yán)重。2采用經(jīng)口氣管插管法成功建立了 MDRPA肺炎模型,確定了 LD50。中藥提前給藥組和中西醫(yī)結(jié)合治療組,可以降低大鼠死亡率,延長存活日期,具有保護作用。3大鼠血常規(guī)WBC在各個時間點、不同處理組之間WBC沒有明顯變化。模型組、西藥組、中藥提前給藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組NE%在治療5 d時呈下降趨勢,LY%呈升高趨勢。4中西醫(yī)結(jié)合治療組能降低T、B淋巴細胞增殖能力,糾正感染早期大鼠機體的免疫紊亂狀態(tài),使免疫狀態(tài)趨于正常。5肺組織病理變化:各藥物治療組,中西醫(yī)結(jié)合治療組治療效果最好,肺部炎癥程度較輕,實質(zhì)性浸潤較少,肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度較輕。
秦魏婷[7]（2018）在《膿毒癥時中性粒細胞過度浸潤的機制研究及CORM-2的干預(yù)作用》文中指出研究背景膿毒癥被定義為對感染的系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合征,嚴(yán)重時會伴隨器官功能的障礙,如組織低灌注、缺氧,乳酸血癥,少尿,腦功能改變等。盡管運用抗生素治療,充足的液體復(fù)蘇,儀器器官支持,膿毒癥的死亡率仍然很高,大約為35%。細菌是膿毒癥的主要感染源,膿毒癥病人通常都會發(fā)生肺功能障礙,心血管功能失調(diào)及腎臟功能障礙。中性粒細胞是機體免疫系統(tǒng)的第一道防線,在抵御細菌感染中具有重要作用。然而,當(dāng)中性粒細胞過度激活時也會導(dǎo)致機體組織的損傷。通常感染時機體為了更有效的增強自我防御,需要中性粒細胞高效的到達目標(biāo)感染部位。事實上,機體在正常情況下在此過程中是可以通過合理的對誘導(dǎo)刺激發(fā)生反應(yīng),并在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的中性粒細胞并快速、有效的向炎癥區(qū)域移動的。為了完成這一高效的反應(yīng),中性粒細胞需要對細胞外的化學(xué)梯度識別,并向更高濃度區(qū)域遷移。在此過程中,趨化物在空間時間上對中性粒細胞的遷移起調(diào)節(jié)作用?？偟膩碚f,中性粒細胞對這些趨化信號是以一種層級的方式反應(yīng)的,換句話說就是對某些趨化信號具有優(yōu)先作用。依據(jù)這個概念,趨化物可以進一步分成兩大類:“end target”（終末靶向趨化物）,如N-frmylated peptides（f MLP）,C5a（補體成分5a）,“intermediary”（中間趨化物）:脂質(zhì)介質(zhì)和趨化因子,其中終末趨化物的作用要優(yōu)先于中間趨化物。通過層級趨化,中性粒細胞可以快速到達感染部位通過其對病原菌的殺傷作用,在機體發(fā)生膿毒癥時對機體具有一定的保護作用,此外它還具有一些不良的作用。研究發(fā)現(xiàn)隨著膿毒癥的進展,系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致循環(huán)中中性粒細胞的激活,滯留于毛細血管床,堵塞管腔造成組織缺血。此外,中性粒細胞還可以遷移至重要的器官,釋放溶菌素,促炎細胞因子等,導(dǎo)致器官損傷,甚至多器官功能衰竭。對多器官功能衰竭的病人進行病理檢查,發(fā)現(xiàn)大量中性粒細胞在局部組織器官浸潤,從腎血管到肺臟器官均發(fā)現(xiàn)了大量的中性粒細胞的浸潤。膿毒癥時,機體還易伴隨急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）的發(fā)生,相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)中性粒細胞的浸潤程度與肺功能的損傷密切相關(guān),在支氣管肺泡灌洗液中檢測出高濃度的中性粒細胞蛋白水解酶也進一步驗證了此觀點。此外相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn),與膿毒癥時循環(huán)中中性粒細胞CXCR2（C-X-C趨化因子受體-2）表達分布不同,臟器中CXC趨化因子釋放,中性粒細胞可在CXCR2作用下在肺臟浸潤。因而中性粒細胞的遷移過程對膿毒癥時的器官損傷意義重大,對于中性粒細胞遷移,研究發(fā)現(xiàn)與其趨化受體表達、分布相關(guān)。在最近的研究中,有兩種MAPKs（絲裂原激活蛋白激酶）（ERK、p38）信號分子被發(fā)現(xiàn)參與終末信號f MLP對細胞運動、停止的調(diào)控。f MLP通過與FPR1（甲酰肽受體-1）相互作用,激活三聚體G蛋白分子,誘導(dǎo)細胞遷移;此外f MLP還可通過GRK（G蛋白偶聯(lián)受體激酶）促進FPR的磷酸化,導(dǎo)致FPR的脫敏、內(nèi)化,從而終止中性粒細胞的遷移,這一過程是受上述兩種MAPKs分子調(diào)控的。CORMs（一氧化碳釋放分子）是CO釋放發(fā)生在溶劑中,通過與溶質(zhì)或是溶劑中的配體發(fā)生交換介導(dǎo)產(chǎn)生,CORM-2是釕羰基復(fù)合物,使用DMSO（二甲基亞砜）溶解,再加入到水溶性溶液中。以往研究發(fā)現(xiàn),不管是LPS（內(nèi)毒素）還是CLP（盲腸結(jié)扎穿孔）誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥模型,CORM-2干預(yù)可以緩解多形核白細胞、中性粒細胞的遷移,積聚,抑制NF-kB（核因子活化B細胞k輕鏈增強子）,ICAM-1（細胞內(nèi)粘附分子-1）,ROS（活性氧族）的產(chǎn)生,此外更重要的是CORM-2的使用可以增加膿毒癥小鼠的生存率。本研究中,采用LPS腹腔注射建立體內(nèi)小鼠膿毒癥模型,LPS刺激中性粒細胞建立體外模型,并使用CORM-2進行干預(yù),觀察膿毒癥小鼠中性粒細胞臟器浸潤情況,LPS刺激中性粒細胞體外遷移改變,及對CORM-2改善中性粒臟器浸潤的相關(guān)機制進行探索。研究方法本研究中體內(nèi)采用LPS腹腔注射,建立小鼠膿毒癥模型,并使用CORM-2進行干預(yù),觀察小鼠生存率改變,病理切片HE染色觀察小鼠肝臟、肺臟病理損傷,中性粒細胞浸潤情況,MPO（髓過氧化物酶）試劑盒檢測肝臟、肺臟中性粒細胞的浸潤,ELISA試劑盒檢測肝肺細胞因子（TNF-a（腫瘤壞死因子-a）,IL-1b（白介素-1b））表達情況,MDA（丙二醛）試劑盒檢測肝肺MDA表達情況。本研究中體外采用LPS體外刺激中性粒細胞,CORM-2體外干預(yù),利用瓊脂糖下趨化模型,觀察中性粒細胞在單一趨化物或是不同趨化物環(huán)境中的趨化改變;使用基因芯片、蛋白芯片對趨化過程中中性粒細胞的趨化受體改變及MAPK信號通路活化情況進行相關(guān)檢測;使用RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）,western blot,流式細胞術(shù)對相應(yīng)受體的表達,關(guān)鍵信號分子的表達進行進一步驗證;使用激光共聚焦顯微鏡對趨化受體,GRK2的分布情況進一步驗證;使用流式細胞術(shù)對中性粒細胞的吞噬功能及凋亡情況進行了檢測;此外還使用相位成像技術(shù)對中性粒細胞的相位改變進行了觀察。研究結(jié)果對體內(nèi)的研究發(fā)現(xiàn),LPS刺激小鼠后肝臟、肺臟炎癥反應(yīng)（TNF-a,IL-1b,MDA表達,病理損傷）嚴(yán)重,中性粒細胞浸潤增加（病理切片,MPO水平）,使用CORM-2干預(yù),可以改善肝臟、肺臟的炎癥反應(yīng),降低中性粒細胞的過量浸潤,改善小鼠生存率。對體外的研究發(fā)現(xiàn),LPS刺激中性粒細胞后,中性粒細胞層級趨化增強,并且與p38-膜受體相關(guān);中性粒細胞在單一趨化物（f MLP）條件下,LPS刺激后趨化增強,FPR1表達m RNA水平增高,蛋白水平無改變,提示是轉(zhuǎn)錄后,翻譯后水平的改變,對其分布進一步分析,發(fā)現(xiàn)FPR1在趨化過程中主要分布于胞膜上,使用CORM-2干預(yù)可以抑制LPS刺激的中性粒細胞趨化增強,這一結(jié)果與中性粒細胞本身活力改變無關(guān),主要是通過對FPR1受體內(nèi)化的調(diào)節(jié),并且這一改變受p38的調(diào)節(jié),而不是GRK2的調(diào)節(jié)。研究結(jié)論LPS刺激后,中性粒細胞趨化受體FPR1表達上調(diào)可能是其在重要臟器過度浸潤的原因;LPS促進中性粒細胞層級趨化與p38-趨化膜受體相關(guān);LPS增強中性粒細胞向FPR1配體（f MLP）趨化,CORM-2抑制LPS刺激的中性粒細胞趨化是對FPR1的調(diào)控,而這一結(jié)果受p38調(diào)控。
謝亮亮[8]（2017）在《慢病毒介導(dǎo)的TREM1及LBP基因沉默對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞基因表達分子調(diào)控機制初步研究》文中指出革蘭氏陰性菌種類繁多,以大腸桿菌、痢疾桿菌、布氏桿菌等為代表,由此引發(fā)的家畜炎癥疾病可導(dǎo)致敗血癥、乳腺炎、生殖系統(tǒng)感染等,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來極大損失。內(nèi)毒素又名脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜的主要毒力因子,能激活細胞膜上多種受體如TLRs進行跨膜及胞內(nèi)信號傳導(dǎo),釋放炎性介質(zhì),誘發(fā)機體過度炎癥損傷。髓系細胞觸發(fā)受體-1（TREM1）是一種細胞膜模式識別受體,通過TREM1/DAP12信號通路放大LPS炎癥反應(yīng)。脂多糖結(jié)合蛋白（LBP）具有LPS高親和力,屬于TLR4信號通路上游關(guān)鍵蛋白。TREM1和LBP均能級聯(lián)擴大炎癥信號,對LPS信號傳導(dǎo)至關(guān)重要。研究表明,沉默或敲除TREM1或LBP基因表達,可顯著降低炎性介質(zhì)表達并控制過度炎癥,且TREM1與TLR4信號通路存在協(xié)同互作。為了深入了解水牛TREM1和LBP基因在LPS致炎反應(yīng)中的作用及其致炎信號傳導(dǎo)分子調(diào)控機制,本研究以水牛外周血單核巨噬細胞為材料,以慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾和轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)為主要手段,研究體外抑制TREM1或LBP基因表達對LPS誘導(dǎo)下相關(guān)基因表達的影響及其分子調(diào)控機制,為提高水牛抗病能力奠定理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果:1、原代水牛外周血單核巨噬細胞的分離培養(yǎng)為了獲取生長狀態(tài)良好的水牛原代單核巨噬細胞,首先對其進行分離純化,比較自體血清濃度對細胞貼壁生長狀況的影響,利用墨汁吞噬、流式及qRT-PCR方法對純化后細胞進行鑒定。結(jié)果顯示,細胞在含有2.5%自體血清培養(yǎng)液中貼壁能力高于5%、7.5%;純化細胞特異性表達TREM1及CD14基因,且流式鑒定細胞表面抗原CD14和MHC-Ⅱ 陽性率達98.50%。2、抑制TREM1基因表達對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞炎癥相關(guān)基因表達的影響為了探討抑制TREM1基因表達對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞炎癥相關(guān)基因表達的影響,首先對TREM1-shRNA294重組質(zhì)粒進行慢病毒包裝,摸索靶細胞感染適宜條件,之后qRT-PCR和ELISA方法進行檢測。結(jié)果顯示,在病毒滴度>4×108IU/mL、感染指數(shù)（MOI）為300、感染時間為7d的條件下,細胞感染效率超過50%。與LPS對照組相比,感染組TREM1基因表達量降低69%,DAP12、TLR4、MYD88、TNF-α、IL-1β等基因表達顯著降低（P<0.05）。TREM1-shRNA 組的 TNF-α含量（418.23 pg/mL）顯著低于對照組（604.92 pg/mL,P<0.05）,且 IL-1β含量（230.65 pg/mL）亦顯著低于對照組（387.12pg/mL,P<0.05）。3、抑制LBP基因表達對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞炎癥相關(guān)基因表達的影響為了探討抑制LBP基因表達對LPS誘導(dǎo)下炎癥相關(guān)基因的表達,采用上述相同方法,另以TREM1-sh294和LBP-sh774慢病毒聯(lián)合感染細胞。結(jié)果顯示,純化病毒滴度>5 × 108IU/mL;與LPS組相比,感染組LBP、CD14、TLR4、TNF-α、IL-1β、IL-8等基因表達顯著降低（P<0.05）。上清液TNF-α、IL-1β及可溶性LBP（sLBP）的蛋白分泌含量均顯著低于LPS組（P<0.05）。不同比例病毒組TREM1和LBP shRNA共同抑制實驗結(jié)果表明:與LPS組相比,各比例組中TNF-α、IL-1β基因表達及蛋白分泌水平均顯著降低（P<0.05）;當(dāng)2:1聯(lián)合感染時,Bcl-2基因表達顯著降低而Caspase-3顯著升高（P<0.05）;。4、TREM1/LBP基因表達下調(diào)的水牛單核巨噬細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析為了更全面解析TREM1/LBP基因沉默對LPS致炎信號傳導(dǎo)的分子調(diào)控機制,利用RNA-seq方法對TREM1-sh、LBP-sh和NC（LPS單獨刺激）3個微量細胞樣本測序,應(yīng)用生物信息學(xué)方法對差異表達基因分析,并對其進行qRT-PCR驗證。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與NC組比較,TREM1-sh和LBP-sh組的差異表達顯著變化基因分別為1355和897個;與LBP-sh組相比,TREM1-sh有2536個（P<0.001）。GO及KEGG富集分析,差異基因主要在細胞免疫、免疫過程、抗原遞呈等生物進程,NF-kB、細胞因子互作等代謝路徑富集;TREM1-sh亦富集于JAK/STAT、抗原遞呈等。3個組兩兩比較中共同差異表達基因182個,其中9個與炎癥反應(yīng)相關(guān),即NFKBIB、TNFRSF13B、TNFRSF17、IL-26、C5AR1、HIF1A、IL2RA、IL-8、MMP-9,可能通過參與 HIF-1A/C5AR1/細胞因子互作、STAT/TNFSF/NF-kB/IL-8/MMP-9、LBP/TREM1互作等信號傳導(dǎo)路徑來發(fā)揮聯(lián)合抑制作用。以上結(jié)果表明,抑制TREM1/LBP基因表達可以有效降低LPS誘導(dǎo)下單核巨噬細胞炎癥相關(guān)基因的表達,調(diào)控LPS炎癥反應(yīng),TREM1信號通路與LBP信號傳導(dǎo)路徑之間存在協(xié)同互作關(guān)系。
張嘉曄[9]（2017）在《坤復(fù)康膠囊對盆腔炎性疾病后遺癥紅細胞免疫影響》文中進行了進一步梳理目的:盆腔炎性疾病后遺癥（Chronic pelvic inflammatory disease,CPID）是婦科臨床的常見病,以下腹痛,腰酸,白帶異常為主要表現(xiàn),可最終導(dǎo)致慢性盆腔痛、不孕癥、異位妊娠等并發(fā)癥,嚴(yán)重影響婦女健康,增加家庭與社會經(jīng)濟負擔(dān)。西醫(yī)抗生素、物理治療等對于慢性炎癥療效不佳。中醫(yī)采用口服中藥、中成藥、中藥灌腸等治療,取得一定效果。臨床上本病以濕熱瘀阻證多見,以活血化瘀、清熱利濕為治法的坤復(fù)康膠囊在長期臨床應(yīng)用中療效顯著。本研究試以闡明坤復(fù)康膠囊對濕熱瘀結(jié)型CPID紅細胞免疫功能的影響以及調(diào)節(jié)機理,同時為進一步揭示本病發(fā)病機制提供線索,為中醫(yī)藥治療本病提供生物學(xué)的作用機理。方法:收集2016年3月至2016年10月于廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門診診斷為濕熱瘀結(jié)證型CPID患者70例,隨機數(shù)字表法分2組,觀察組35例,對照組35例,脫落6例,完成觀察64例。觀察組予口服坤復(fù)康膠囊,3粒,一日三次;對照組口服花紅片,4粒,一日三次。20天為一療程,治療2療程,經(jīng)期停藥。觀察治療前后患者臨床癥狀及體征的變化;治療前后分別測定外周血細胞、血漿血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）、6-酮前列腺素（6-Ketoprostaglandin F1a,6-K-PG1a）、紅細胞 C3b 受體花環(huán)率（erythrocyte C3b receptor rosette rate,E-C3bRR）、紅細胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（erythrocyte immune complexes rosette rate,E-ICR）、紅細胞免疫粘附促進因子活性（rosette forming enhancing rate of erythrocyte C3b receptor,RFER）、抑細胞免疫粘附抑制因子活性（rosette forming inhibitory rate of erythrocyte C3b receptor,RFIR）、血漿白介素-8（Interleukine-8,IL-8）、白介素-10（Interleukine-10,IL-10）、紅細胞Duffy 抗原/趨化因子受體（Duffy antigen/receptor for chemokine,DARC）、紅細胞超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、血漿丙二醛（malondialdehyde,MDA）、紅細胞CD59,觀察其治療前后變化。結(jié)果:1.臨床療效觀察:治療后觀察組中醫(yī)證候積分、體征積分均明顯低于對照組（P<0.05）。兩組各自治療前后比較,治療后中醫(yī)證候積分、體征積分均明顯低于治療前（P<0.01）。觀察組與對照組比較,觀察組體征療效、綜合療效明顯優(yōu)于對照組（P<0.01）,中醫(yī)證候療效無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。2.外周血細胞檢測:觀察組與對照組比較,治療前后外周血細胞計數(shù)均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。觀察組治療前后比較,治療后中性粒細胞計數(shù)降低、淋巴細胞計數(shù)升高、中性粒細胞/淋巴細胞比值（Neutrophil/Lymphocyte ratio,NLR）降低（P<0.05）;對照組治療前后比較,治療后NLR降低（P<0.05）。3.血漿TXB2、6-P-KG1a檢測:治療后TXB2觀察組明顯低于對照組（P<0.05）。觀察組治療前后比較,治療后TXB2降低、6-P-KG1a升高（P<0.01）;對照組治療前后比較,治療后TXB2降低（P<0.01）,6-P-KG1a無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。4.E-C3bRR、E-ICR、REER、RFIR檢測:治療后E-C3bRR觀察組明顯高于對照組,E-ICR觀察組明顯低于對照組（P<0.05）。觀察組治療前后比較,治療后E-C3bRR升高、E-ICR降低、REER升高（P<0.01）;對照組治療前后比較,治療后E-C3bRR升高、E-ICR降低（P<0.05）,REER無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。觀察組與對照組比較,兩組各自前后及組間比較RFIR均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。E-C3bRR與NLR、TXB2存在負性相關(guān),相關(guān)系數(shù)絕對值接近0,說明密切程度不大。5.紅細胞CD59檢測:治療后紅細胞CD59觀察組明顯高于對照組（P<0.05）。觀察組治療前后比較,治療后紅細胞CD59升高（P<0.01）;對照組治療前后比較,紅細胞CD59無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。6.血漿IL-8、IL10、IL-8/IL10、紅細胞DARC檢測:治療后IL-8/IL10觀察組明顯低于對照組,紅細胞DARC觀察組明顯高于對照組（P<0.05）。觀察組治療前后比較,治療后IL-8降低、IL10升高、紅細胞DARC升高（P<0.05）;對照組治療前后比較,治療后IL-8降低（P<0.05）。紅細胞DARC與IL-8、IL-8/IL10存在負相關(guān)關(guān)系（P<0.05）,與IL-10存在正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。IL-8與IL10存在正相關(guān)關(guān)系存在正性關(guān)系（P<0.01）,但相關(guān)系數(shù)絕對值均接近0,說明密切程度不大。7.紅細胞SOD、血漿MDA檢測:治療后SOD觀察組明顯高于對照組（P<0.01）,MDA兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。觀察組治療前后比較,治療后SOD升高（P<0.01）;對照組治療前后比較,治療后SOD升高（P<0.05）。兩組各自前后比較MDA均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。SOD、MDA存在負相關(guān)關(guān)系（P<0.01）。8.濕熱瘀結(jié)型CPID綜合評分與實驗指標(biāo)相關(guān)性分析:NLR、TXB2、E-C3bRR、E-ICR、SOD、CD59、IL-8、IL-8/IL-10、紅細胞DARC與濕熱瘀結(jié)型CPID綜合評分存在相關(guān)性。其中E-C3bRR與之相關(guān)系數(shù)的絕對值最接近1,說明相關(guān)密切程度最大。結(jié)論:1.在臨床研究中,坤復(fù)康膠囊有改善濕熱瘀結(jié)型CPID患者下腹疼痛、腰酸、帶下異常、經(jīng)行腹痛、月經(jīng)失調(diào)（月經(jīng)量多或經(jīng)期延長）等臨床癥狀（總有效率100%）,緩解盆腔局部體征（總有效率100%）的作用,對于濕熱瘀阻證型CPID有良好治療效果（綜合總有效率100%）,且后兩者坤復(fù)康膠囊效果優(yōu)于對照藥物花紅片。2.坤復(fù)康膠囊通過降低濕熱瘀結(jié)型CPID患者外周血NLR,升高TXB2、降低6-P-KG1a從而改善血管因子情況;可提高紅細胞CR1、SOD、CD59、DARC含量及活性,降低促炎性因子IL-8含量,多途徑治療CPID效果良好。且在提高紅細胞免疫功能方面,坤復(fù)康膠囊效果優(yōu)于花紅片。3.NLR、TXB2、E-ICR、IL-8、IL-8/IL-10與濕熱瘀結(jié)型CPID綜合評分存在正性相關(guān);6-P-KG、E-C3bRR、SOD、CD59、紅細胞DARC與濕熱瘀結(jié)型CPID綜合評分存在負性相關(guān)。其中E-C3bRR與之相關(guān)密切程度最大,提示紅細胞CR1免疫功能在對濕熱瘀結(jié)型CPID機制研究中具有重要理論及應(yīng)用價值。
徐慶青[10]（2016）在《粒/單核細胞吸附對膿毒癥性急性腎損傷大鼠的療效及機制研究》文中提出目的:膿毒癥（sepsis）是機體對感染的特異性反應(yīng)所致危及生命的器官功能障礙。流行病學(xué)調(diào)查顯示,近年來,抗感染治療,早期液體復(fù)蘇及臟器支持治療等不斷發(fā)展,但膿毒癥仍以其高發(fā)病率及高死亡率嚴(yán)重威脅患者的健康生命。嚴(yán)重膿毒癥合并急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）在危重癥患者中的發(fā)病率高達50%,和其他原因所致AKI相比,膿毒癥所致的AKI表現(xiàn)為血流動力學(xué)更加不穩(wěn)定,需要更多升壓藥物和更高比例的機械通氣患者,疾病嚴(yán)重度評分更高,死亡率也更高。膿毒癥的發(fā)生與炎癥反應(yīng)有千絲萬縷的關(guān)系。炎癥是機體對損傷性傷害的防御性反應(yīng),炎癥反應(yīng)啟動的特征是參與炎癥反應(yīng)的細胞的激活,主要包括中性粒細胞,單核-巨噬細胞,內(nèi)皮細胞等。中性粒細胞及單核細胞在炎癥早期具有吞噬及抗原提呈的作用,構(gòu)成炎癥反應(yīng)的防御環(huán)節(jié)。適度的炎癥反應(yīng)對人體有益,但當(dāng)炎癥過程中機體自身的調(diào)節(jié)能力下降,就會導(dǎo)致炎癥失控,使其發(fā)生級聯(lián)的放大效應(yīng),炎癥細胞產(chǎn)生大量促炎介質(zhì),活性氧,溶酶體酶等,導(dǎo)致遠隔器官的受損。粒/單核細胞吸附（Granulocyte/Monocyte Apheresis,GMA）是以醋酸纖維素串珠為吸附載體的血液凈化吸附柱,即全血與吸附珠相接處,選擇性地吸附血液中的粒細胞及單核細胞,而對于紅細胞,血小板及淋巴細胞無吸附作用。為探索通過吸附炎癥反應(yīng)的源頭來治療膿毒癥性急性腎損傷的方法,本課題組選用盲腸結(jié)扎穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）大鼠膿毒癥性急性腎損傷模型,予粒/單核細胞吸附（Granulocyte/Monocyte Apheresis,GMA）干預(yù),觀察其療效及機制。探索血清前白蛋白對住院期間發(fā)生急性腎小管損傷壞死（acute tubular necrosis）所致急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）患者的預(yù)后影響。方法:大鼠行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）后20小時建立體外循環(huán),血液流速控制在0.8-1.0ml/min。在體外粒/單核細胞吸附（GMA）干預(yù)組,體外循環(huán)全血與吸附柱內(nèi)醋酸纖維素串珠充分接觸,再輸回至體內(nèi)。該循環(huán)持續(xù)進行2小時。同時,以假性循環(huán)治療組（Sham GMA）做為對照,即CLP術(shù)后20小時建立相同體外循環(huán),全血接觸無醋酸纖維素串珠的吸附柱,其后再輸回至體內(nèi)。另設(shè)假手術(shù)組（Control）,即僅行開腹手術(shù),暴露分離盲腸后關(guān)腹,不行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù),術(shù)后20小時暴露分離相應(yīng)血管,但不建立體外循環(huán)。CLP術(shù)后48小時處死一部分大鼠,留取血液及相關(guān)組織標(biāo)本,進行相關(guān)數(shù)據(jù)分析;另一部分大鼠連續(xù)觀察7天,進行生存分析。前瞻性入選自2012年02月至2014年06月在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院住院期間發(fā)生急性腎損傷患者。采用Cox比例風(fēng)險模型來評估血清前白蛋白與急性腎損傷患者90天死亡風(fēng)險的關(guān)系。結(jié)果:體外粒/單核細胞吸附（GMA）干預(yù)可以改善大鼠膿毒癥的進程。GMA干預(yù)組在循環(huán)2小時后外周血白細胞數(shù)低于循環(huán)初始時（（4.14±1.30）×109/L vs（9.65±2.13）×109/L,p<0.05）,并且低于假性治療組（（4.14±1.30）×109/L vs（8.36±3.02）×109/L,p<0.05）。其中,中性粒細胞及單核細胞的絕對計數(shù)明顯下降（p<0.05）。通過檢測外周血白細胞中CD11b+表達強度,發(fā)現(xiàn)在干預(yù)2小時后,GMA組CD11b+的平均熒光強度明顯下降,提示干預(yù)后循環(huán)中活性粒細胞及單核細胞量減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。CLP術(shù)后假性治療組大鼠的7天生存率僅為46.7%,經(jīng)GMA干預(yù)后其7天生存率可以提高至73.3%（p<0.05）。同時,GMA干預(yù)后,谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及尿素氮水平明顯下降（p<0.05）;腎臟及肝臟病理學(xué)評分示組織損傷減輕（p<0.05）。肺組織的急性損傷病理學(xué)評分示組織損傷明顯減輕（p<0.05）,GMA干預(yù)后減少肺臟的炎癥細胞浸潤,浸潤至肺組織的中性粒細胞較對照組的31.28±11.12%下降至22.11±10.02%（p<0.05）,組織中的巨噬細胞浸潤明顯下降（p<0.05）。同樣,支氣管肺泡灌洗液中有核細胞總數(shù)較假性治療組顯著減少（p<0.05）。此外,GMA干預(yù)可以改善肺血管通透性,減輕肺臟炎癥反應(yīng)。支氣管肺泡灌洗液的總蛋白濃度可降至335.14±102.09μg/mL,而Sham GMA組的總蛋白濃度仍高達563.92±374.61μg/mL（p<0.05）。支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10及IL-1β水平均呈現(xiàn)下降（p<0.05）,血清中炎癥因子IL-6、IL-10及IL-1β水平均呈現(xiàn)顯著性下降（p<0.05）,TNF-α有下降趨勢。GMA干預(yù)不改變脾臟和外周血中CD4+T、CD8+T淋巴細胞的比例。入選住院期間急性腎損傷患者348例,根據(jù)全體患者血清前白蛋白的中位數(shù),分為低血清白蛋白組(<13.6mg/dl組（8）和高血清白蛋白組（≥13.6mg/dl組）,低血清前白蛋白組90天死亡率為48.3%,而高血清前白蛋白組為21.4%（χ2=13.622,P<0.001）。在校正了年齡、性別、C反應(yīng)蛋白水平、血清白蛋白、血紅蛋白、Liano評分和膽固醇后,Cox比例風(fēng)險模型顯示,低血清前白蛋白組住院AKI患者的90天全因死亡的風(fēng)險比（Harazd ratio,HR）為1.784（95%CI:1.059-3.006,P=0.029）。并且每增加5mg/dl血清前白蛋白,90天死亡率降低24.6%（HR=0.754;95%CI:0.606-0.938 P=0.011）。結(jié)論:體外粒/單核細胞吸附（GMA）干預(yù)對膿毒癥性急性腎損傷大鼠具有一定的治療作用,通過吸附粒細胞及單核細胞,特別是活化的中性粒細胞,減少促炎因子的分泌、減輕中性粒細胞及巨噬細胞浸潤,從而延長大鼠生存時間,改善臟器功能。血清前白蛋白是住院期間發(fā)生AKI患者全因死亡的獨立危險因素。
二、紅細胞、內(nèi)毒素對淋病病人中性粒細胞吞噬功能影響的實驗研究（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、紅細胞、內(nèi)毒素對淋病病人中性粒細胞吞噬功能影響的實驗研究（論文提綱范文）
（1）抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的抗耐藥菌感染活性及其機制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1. 敗血癥(sepsis)的流行現(xiàn)狀 |
| 1.1 敗血癥全球流行狀況 |
| 1.2 敗血癥的生物標(biāo)志物 |
| 1.2.1 與感染相關(guān)的指標(biāo) |
| 1.2.2 與天然免疫相關(guān)的指標(biāo) |
| 1.2.3 其他成分 |
| 1.3 敗血癥的危害 |
| 2. 耐藥菌的產(chǎn)生、進化和治療 |
| 2.1 耐藥菌的耐藥性產(chǎn)生機制 |
| 2.1.1 先天性耐藥 |
| 2.1.2 適應(yīng)性耐藥 |
| 2.1.3 獲得性耐藥 |
| 2.2 耐藥菌感染的治療新方法 |
| 3. 抗菌肽的分類與作用 |
| 3.1 Tachyplesin Ⅲ抗菌肽研究進展 |
| 3.2 Cathelicidin BF抗菌肽研究進展 |
| 4.研究思路、目的及意義 |
| 第一部分 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的結(jié)構(gòu)、毒性及抑菌活性 |
| 1 引言 |
| 2 實驗材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 多肽、菌株、細胞株、及實驗動物 |
| 2.1.2 實驗試劑及耗材 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 耐藥菌的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 2.2.2 多肽的最小抑菌濃度(MIC)鑒定 |
| 2.2.3 多肽的血清穩(wěn)定性鑒定 |
| 2.2.4 細胞的復(fù)蘇、傳代及凍存 |
| 2.2.5 XTT測定多肽對細胞毒性 |
| 2.2.6 多肽的溶血性檢測 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的化學(xué)結(jié)構(gòu) |
| 3.2 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的抑菌廣譜性及最小殺菌濃度 |
| 3.3 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的血清穩(wěn)定性 |
| 3.4 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的溶血性 |
| 3.5 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的細胞毒性分析 |
| 4 討論 |
| 4.1 抗菌肽是有效的抑制耐藥菌手段之一 |
| 4.2 不同化學(xué)結(jié)構(gòu)對抗菌肽的作用機制 |
| 4.3 納米遞送載體應(yīng)用 |
| 5 小結(jié) |
| 第二部分 抗菌肽Tachyplesin Ⅲ通過調(diào)控FabG活性抵抗多重混合耐藥菌感染 |
| 1 引言 |
| 2. 實驗材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 實驗多肽合成 |
| 2.1.2 實驗動物 |
| 2.1.3 實驗所用的抗體 |
| 2.1.4 實驗所需的主要試劑及耗材 |
| 2.1.5 實驗所需的主要實驗儀器 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建及蛋白表達純化 |
| 2.2.2 共聚焦顯微鏡觀察多肽在細菌的定位情況 |
| 2.2.3 PI染色鑒定細胞膜的完整性 |
| 2.2.4 轉(zhuǎn)錄組測序分析 |
| 2.2.5 RT-PCR鑒定多肽處理后基因表達情況 |
| 2.2.6 siRNA電轉(zhuǎn)敲低細菌的FabG表達 |
| 2.2.7 Biacore3000檢測多肽與FabG結(jié)合的親和力 |
| 2.2.8 NADPH消耗實驗 |
| 2.2.9 AutoDock分子對接模擬 |
| 2.2.10 小鼠耐藥菌肺炎感染模型 |
| 2.2.11 肺泡灌洗液細菌載量測定 |
| 2.2.12 肺泡灌洗液分離及細胞因子檢測 |
| 2.2.13 肺組織H&E染色 |
| 2.2.14 中性紅吞噬實驗 |
| 2.2.15 ELISA檢測細胞因子濃度 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 Tachyplesin Ⅲ的破膜劑量及活死細菌染色 |
| 3.2 Tachyplesin Ⅲ的胞內(nèi)定位情況分析 |
| 3.3 Tachyplesin Ⅲ處理后對不飽和脂肪酸生物合成途徑的影響 |
| 3.4 Tachyplesin Ⅲ通過調(diào)控FabG的表達及生物活性達到抑菌的作用 |
| 3.5 Tachyplesin Ⅲ通過抑制FabG的生物學(xué)活性中心抑制其活性作用 |
| 3.6 耐藥菌混合感染肺炎模型顯著降低了小鼠的生存率 |
| 3.7 Tachyplesin Ⅲ提高小鼠的生存率,降低了肺部的感染情況 |
| 3.8 Tachyplesin Ⅲ提高了巨噬細胞的吞噬能力 |
| 4. 討論 |
| 4.1 Tachyplesin Ⅲ的抗菌作用機制分析 |
| 4.2 FabG抑菌作用機制及應(yīng)用潛力 |
| 4.3 以Tachyplesin Ⅲ為模板開發(fā)抗菌涂層用以醫(yī)療器械 |
| 4.4 耐藥菌混合感染的機制研究 |
| 5. 小結(jié) |
| 第三部分 抗菌肽Cathelicidin BF通過調(diào)控NETs的形成產(chǎn)生抑菌的效果 |
| 1 引言 |
| 2 實驗材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 中性粒細胞分離、鑒定及培養(yǎng) |
| 2.1.2 實驗試劑及耗材 |
| 2.2 實驗動物 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 乳酸脫氫酶釋放(LDH)檢測 |
| 2.3.2 細胞凋亡檢測 |
| 2.3.3 免疫印記實驗 |
| 2.3.4 免疫熒光分析 |
| 2.3.5 掃描電鏡觀察細菌被巨噬細胞吞噬情況 |
| 2.3.6 流式細胞術(shù) |
| 2.3.7 細菌蛋白提取 |
| 2.3.8 細菌蛋白消化及iTRAQ標(biāo)記 |
| 2.3.9 蛋白多肽樣品純化制備 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 Cathelicidin BF的破膜劑量及PI染色 |
| 3.2 Cathelicidin BF的胞內(nèi)定位情況分析 |
| 3.3 Cathelicidin BF的胞內(nèi)靶點預(yù)測分析 |
| 3.4 假單胞綠膿桿菌感染肺炎模型建立 |
| 3.5 P.aeruginosa感染導(dǎo)致的中性粒細胞外捕獲網(wǎng)形成 |
| 3.6 Cathelicidin BF通過調(diào)節(jié)細胞自噬影響NETs的形成過程 |
| 3.7 巨噬細胞的吞噬能力依賴細胞自噬的發(fā)生 |
| 3.8 Cathelicidin BF預(yù)處理招募并促進了巨噬細胞的死亡 |
| 3.9 細胞壞死調(diào)控細菌感染引起過激的NETs導(dǎo)致的炎癥性死亡 |
| 3.10 Cathelicidin BF在體內(nèi)的作用模式預(yù)測 |
| 4. 討論 |
| 4.1 Cathelicidin BF的抗菌作用機制研究 |
| 4.1.1 Cathelicidin BF抗菌肽的改造及應(yīng)用 |
| 4.1.2 CathelicidinBF及其家族在病原菌感染的作用 |
| 4.1.3 Cathelicidin BF及其家族的免疫調(diào)節(jié)作用 |
| 4.2 先天免疫細胞在抗耐藥菌的關(guān)鍵作用分析 |
| 4.2.1 巨噬細胞在抗菌的作用 |
| 4.2.2 中性粒細胞的抗菌作用 |
| 4.3 中性粒細胞外捕獲網(wǎng)的特異性及誘導(dǎo)機制 |
| 4.3.1 耐藥菌感染誘導(dǎo)中性粒細胞外捕獲的機制 |
| 4.3.2 中性粒細胞外捕獲網(wǎng)的雙面性 |
| 4.3.3 細胞自噬在NETs形成過程中的作用 |
| 4.4 細胞死亡“crosstalk”在病原菌感染的作用 |
| 4.4.1 PANoptosis研究進展 |
| 4.4.2 細胞死亡的“crosstalk”與宿主抗耐藥菌感染 |
| 4.4.3 細胞壞死在宿主抗耐藥菌感染及NETs過程中的作用 |
| 4.5 噴霧鼻腔給藥方式優(yōu)勢 |
| 5. 小結(jié) |
| 展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（2）MiR-150通過中性粒細胞對小鼠細菌感染發(fā)病的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 實驗研究 |
| 1.1 實驗材料 |
| 1.1.1 實驗動物 |
| 1.1.2 遺傳物質(zhì)提取所需試劑 |
| 1.1.3 流式細胞術(shù)所需要準(zhǔn)備材料 |
| 1.1.4 細菌培養(yǎng)材料 |
| 1.1.5 主要緩沖液和培養(yǎng)液配制 |
| 1.1.6 試驗儀器 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.2.1 miR-150 敲除小鼠(miR-150KO)的基因型鑒定 |
| 1.2.2 Real-time PCR驗證miR-150 基因敲除 |
| 1.2.3 MiR-150 KO和 WT-C57BL/6J小鼠外周血計數(shù)和流式細胞分析 |
| 1.2.4 小鼠細菌感染模型的制備 |
| 1.2.5 小鼠存活率的比較 |
| 1.2.6 MiR-150 KO和 WT-C57BL/6J小鼠骨髓和外周血流式分析 |
| 1.2.7 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血載菌數(shù)目分析 |
| 1.2.8 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血中性粒細胞瑞氏染色分析 |
| 1.2.9 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠PMN體外吞噬實驗分析. |
| 1.2.10 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠肺臟組織HE染色分析.. |
| 1.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.3.1 miR-150KO小鼠基因鑒定 |
| 1.3.2 Real-time PCR驗證小鼠有無miR-150 基因表達 |
| 1.3.3 miR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血血常規(guī)計數(shù)和流式檢測 |
| 1.3.4 miR-150KO和 WT-C57BL/6J小鼠大腸桿菌感染后存活率比較 |
| 1.3.5 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠骨髓和外周血流式 |
| 1.3.6 MiR-150KO小鼠和WT-C57BL/6J小鼠外周血細菌定植量 |
| 1.3.7 MiR-150和WT-C57BL/6J小鼠外周血中性粒細胞瑞氏染色 |
| 1.3.8 miR-150KO和 WT-C57BL/6J小鼠中性粒細胞體外吞噬實驗 |
| 1.3.9 MiR-150KO和WT-C57BL/6J小鼠肺臟組織固定和HE染色 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 小結(jié) |
| 參考文獻 |
| 結(jié)論 |
| 第2章 綜述 microRNA調(diào)控細菌感染 |
| 2.1 microRNA簡介 |
| 2.2 循環(huán)miRNA與細菌感染 |
| 2.2.1 miR-146a在感染性中作用 |
| 2.2.2 miR-155在感染性中作用 |
| 2.2.3 MicroRNA223 在感染性中作用 |
| 2.2.4 miR-16在感染性中作用 |
| 2.2.5 miR-125b在感染性中作用 |
| 2.2.6 miR-143在感染性中作用 |
| 2.2.7 .其他一些miRNA在感染性炎癥中作用 |
| 2.2.8 .microRNA在其他疾病中作用 |
| 2.3 粒細胞簡介 |
| 2.4 中性粒細胞與microRNA |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間研究成果 |
（3）多能干細胞分化再生T細胞的體內(nèi)抗腫瘤評估及再生可移植髓系細胞研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 多能干細胞分化再生的T細胞體內(nèi)抗腫瘤評估 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 癌癥細胞免疫療法概述 |
| 1.1.2 CAR-T細胞免疫療法概述 |
| 1.1.3 再生T細胞的研究進展 |
| 1.2 實驗材料和實驗方法 |
| 1.2.1 實驗動物 |
| 1.2.2 實驗試劑 |
| 1.2.3 實驗器材 |
| 1.2.4 實驗方法 |
| 1.3 實驗結(jié)果 |
| 1.3.1 iR9 mESCs體外定向分化獲得造血祖細胞iHPCs |
| 1.3.2 iR9 mESCs來源的iHPCs移植免疫缺陷鼠再生T淋巴細胞 |
| 1.3.3 CD19-CAR iT細胞體內(nèi)腫瘤殺傷功能驗證策略 |
| 1.3.4 CD19-CAR iT可有效清除腫瘤模型鼠外周血中的B淋巴細胞 |
| 1.3.5 CD19-CAR iT可有效消除腫瘤模型鼠的腫瘤負荷 |
| 1.3.6 CD19-CAR iT可有效延長腫瘤模型鼠的生存期 |
| 1.3.7 CD19-CAR iT細胞在小鼠體內(nèi)顯示出增殖和激活能力 |
| 1.4 總結(jié)和討論 |
| 第2章 多能干細胞再生可移植髓系細胞研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.1.1 髓系細胞的發(fā)育和調(diào)控 |
| 2.1.2 再生髓系細胞的現(xiàn)狀和進展 |
| 2.1.3 髓系細胞再生新思路 |
| 2.2 實驗材料和方法 |
| 2.2.1 實驗動物 |
| 2.2.2 實驗試劑 |
| 2.2.3 實驗器材 |
| 2.2.4 實驗方法 |
| 2.3 實驗結(jié)果 |
| 2.3.1 iRunx1-P2A-Hoxa10-EGFP mES打靶細胞系(iR10 mESCs)構(gòu)建成功 |
| 2.3.2 iR10 mESCs體外誘導(dǎo)分化生成造血祖細胞 |
| 2.3.3 基質(zhì)細胞OP9-DL1較MS5-DL1更能促進造血祖細胞產(chǎn)生 |
| 2.3.4 iR10 mESCs來源iHPCs移植Rag1~(-/-)小鼠能夠再生髓系細胞 |
| 2.3.5 受體鼠各組織中能檢測到再生髓系細胞 |
| 2.3.6 受體鼠骨髓中檢測到再生的髓系祖細胞 |
| 2.3.7 iR10 mESCs來源髓系細胞在體內(nèi)短期存在 |
| 2.3.8 野生型受體鼠體內(nèi)再生髓系細胞 |
| 2.4 總結(jié)和討論 |
| 參考文獻 |
| 附錄 縮略詞 |
| 致謝 |
| 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果 |
（4）瑪咖根部多糖的結(jié)構(gòu)鑒定及免疫調(diào)節(jié)活性的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 瑪咖的營養(yǎng)成分及功能 |
| 1.2.1 營養(yǎng)成分 |
| 1.2.2 瑪咖的生物活性 |
| 1.3 瑪咖多糖的研究現(xiàn)狀 |
| 1.3.1 瑪咖多糖的提取純化 |
| 1.3.2 瑪咖多糖的結(jié)構(gòu)鑒定 |
| 1.3.3 瑪咖多糖的生理活性 |
| 1.4 植物多糖對巨噬細胞的激活作用 |
| 1.4.1 作用機制 |
| 1.4.2 構(gòu)效關(guān)系 |
| 1.4.3 研究難點 |
| 1.5 本課題的立題依據(jù)及主要研究內(nèi)容 |
| 1.5.1 立題依據(jù)及意義 |
| 1.5.2 主要研究內(nèi)容 |
| 1.5.3 技術(shù)路線 |
| 第二章 瑪咖多糖的分離純化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗材料與儀器 |
| 2.2.1 主要實驗材料及試劑 |
| 2.2.2 主要實驗儀器 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 瑪咖根基本成分的測定 |
| 2.3.2 瑪咖多糖提取流程 |
| 2.3.3 瑪咖多糖提取條件的優(yōu)化 |
| 2.3.4 陰離子交換柱層析純化瑪咖多糖 |
| 2.3.5 葡聚糖凝膠柱層析純化瑪咖多糖 |
| 2.3.6 紫外光譜分析 |
| 2.3.7 內(nèi)毒素含量檢測 |
| 2.3.8 瑪咖多糖的熱穩(wěn)定性分析 |
| 2.3.9 統(tǒng)計分析及作圖 |
| 2.4 結(jié)果與討論 |
| 2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
| 2.4.2 瑪咖根的基本成分 |
| 2.4.3 提取條件的優(yōu)化 |
| 2.4.4 瑪咖多糖的陰離子交換柱層析 |
| 2.4.5 瑪咖多糖的葡聚糖凝膠柱層析 |
| 2.4.6 紫外光譜掃描 |
| 2.4.7 內(nèi)毒素檢測 |
| 2.4.8 熱穩(wěn)定性分析 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 MC-1的結(jié)構(gòu)鑒定及其對巨噬細胞的激活作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗材料 |
| 3.2.1 主要試劑 |
| 3.2.2 主要儀器設(shè)備 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 分子量的測定 |
| 3.3.2 紅外光譜掃描(FTIR) |
| 3.3.3 單糖組成分析 |
| 3.3.4 高碘酸氧化和Smith降解 |
| 3.3.5 甲基化分析 |
| 3.3.6 核磁共振分析 |
| 3.3.7 剛果紅實驗 |
| 3.3.8 MC-1對RAW264.7 細胞的毒性 |
| 3.3.9 RAW264.7 細胞吞噬能力的檢測 |
| 3.3.10 細胞因子的測定 |
| 3.3.11 實時熒光定量PCR(QPCR) |
| 3.3.12 MC-1在RAW264.7 細胞表面的膜受體 |
| 3.3.13 統(tǒng)計分析及作圖 |
| 3.4 結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 MC-1 的分子量 |
| 3.4.2 MC-1的FTIR圖譜 |
| 3.4.3 MC-1 的單糖組成 |
| 3.4.4 高碘酸氧化和Smith降解 |
| 3.4.5 MC-1 的甲基化分析 |
| 3.4.6 MC-1的NMR分析 |
| 3.4.7 剛果紅實驗 |
| 3.4.8 MC-1對RAW264.7 細胞存活率的影響 |
| 3.4.9 MC-1對RAW264.7 細胞的吞噬能力和胞飲能力的影響 |
| 3.4.10 MC-1對RAW264.7 細胞分泌細胞因子的作用 |
| 3.4.11 MC-1在RAW264.7 細胞表面的膜受體 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第四章 MC-2的結(jié)構(gòu)鑒定及其對巨噬細胞極化的影響 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗材料與儀器 |
| 4.2.1 實驗材料 |
| 4.2.2 主要實驗設(shè)備 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 MC-2 的結(jié)構(gòu)鑒定 |
| 4.3.2 MC-2對RAW264.7 細胞存活率的影響 |
| 4.3.3 MC-2對M0型RAW264.7 細胞分泌IL-6和IL-10 的影響 |
| 4.3.4 MC-2對M0型RAW264.7 細胞分泌細胞因子的影響 |
| 4.3.5 RAW264.7 細胞的極化 |
| 4.3.6 MC-2在RAW264.7 細胞表面的膜受體 |
| 4.3.7 統(tǒng)計分析及作圖 |
| 4.4 結(jié)果與討論 |
| 4.4.1 MC-2 的分子量 |
| 4.4.2 MC-2的FTIR圖譜 |
| 4.4.3 MC-2 的單糖組成 |
| 4.4.4 MC-1 的甲基化分析 |
| 4.4.5 MC-2的NMR分析 |
| 4.4.6 MC-2 的剛果紅實驗 |
| 4.4.7 MC-2對RAW264.7 細胞存活率的影響 |
| 4.4.8 MC-2對M0型RAW264.7 細胞極化的影響 |
| 4.4.9 MC-2對M1型RAW264.7 細胞極化的影響 |
| 4.4.10 MC-2對M2型RAW264.7 細胞極化的影響 |
| 4.4.11 MC-2在RAW264.7 細胞表面的膜受體 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第五章 瑪咖多糖對腸道免疫的影響 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 實驗材料與儀器 |
| 5.2.1 實驗材料及主要試劑 |
| 5.2.2 主要實驗儀器 |
| 5.3 實驗方法 |
| 5.3.1 體外小腸吸收模型的建立 |
| 5.3.2 瑪咖多糖在Caco2 單層膜中的轉(zhuǎn)運實驗 |
| 5.3.3 瑪咖多糖對Caco2 細胞分泌免疫因子的影響 |
| 5.3.4 瑪咖多糖通過Caco2 單層膜對RAW264.7 細胞分泌細胞因子的作用 |
| 5.3.5 瑪咖多糖對LPS誘導(dǎo)的Caco2 單層膜炎癥損傷的作用 |
| 5.3.6 統(tǒng)計分析及作圖 |
| 5.4 結(jié)果與討論 |
| 5.4.1 Caco2 細胞單層膜致密性檢測 |
| 5.4.2 瑪咖多糖在Caco2 細胞單層膜中的吸收 |
| 5.4.3 瑪咖多糖對Caco2 細胞分泌免疫因子的影響 |
| 5.4.4 瑪咖多糖通過Caco2 單層膜對RAW264.7 細胞分泌細胞因子的作用 |
| 5.4.5 瑪咖多糖對LPS誘導(dǎo)的Caco2 單層膜致密性損傷的作用 |
| 5.4.6 瑪咖多糖對LPS誘導(dǎo)的Caco2 細胞分泌細胞因子的作用 |
| 5.5 本章小結(jié) |
| 第六章 瑪咖多糖其他生理活性的初步探索 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 實驗材料與儀器 |
| 6.2.1 主要實驗材料及試劑 |
| 6.2.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 6.3 實驗方法 |
| 6.3.1 瑪咖多糖抑制腫瘤細胞增殖活性的測定 |
| 6.3.2 瑪咖多糖通過人單核巨噬細胞THP-1抑制腫瘤細胞增殖的活性 |
| 6.3.3 瑪咖多糖的自由基清除能力 |
| 6.3.4 瑪咖多糖的CAA實驗 |
| 6.3.5 瑪咖多糖對AAPH誘導(dǎo)的紅細胞溶血的保護作用 |
| 6.3.6 瑪咖多糖抑制HBV的作用 |
| 6.3.7 瑪咖多糖對LO2 細胞脂肪變性的影響 |
| 6.3.8 統(tǒng)計分析及作圖 |
| 6.4 結(jié)果與討論 |
| 6.4.1 瑪咖多糖對腫瘤細胞增殖的直接抑制活性 |
| 6.4.2 瑪咖多糖通過激活THP-1細胞抑制腫瘤細胞增殖的作用 |
| 6.4.3 瑪咖多糖的自由基清除能力 |
| 6.4.4 瑪咖多糖的細胞抗氧化 |
| 6.4.5 瑪咖多糖抑制紅細胞的氧化溶血 |
| 6.4.6 瑪咖多糖抗HBV的作用 |
| 6.4.7 瑪咖多糖對肝細胞脂肪變性的影響 |
| 6.5 本章小結(jié) |
| 結(jié)論與展望 |
| 參考文獻 |
| 攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
| 附件 |
（5）NLRP3炎癥小體信號通路在脾虛肝郁型盆腔炎性疾病反復(fù)發(fā)作中的作用機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文縮略詞表 |
| 引言 |
| 1 文獻研究 |
| 1.1 RPID的中醫(yī)病因病機認識 |
| 1.1.1 古文獻病因病機記載 |
| 1.1.2 現(xiàn)代中醫(yī)名家對本病的病因病機認識 |
| 1.2 西醫(yī)對RPID的認識 |
| 1.2.1 流行病學(xué) |
| 1.2.2 危險因素 |
| 1.2.3 病因分析及病理改變 |
| 1.2.4 RPID對女性生殖身心的影響 |
| 1.3 RPID與機體免疫失衡密切相關(guān) |
| 2 試驗研究 |
| 2.1 課題病例來源 |
| 2.2 疾病診斷標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.3 中醫(yī)脾虛肝郁證辨證標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.4 納入標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.4.1 觀察組納入標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.4.2 對照組納入標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.5 排除標(biāo)準(zhǔn) |
| 3 研究思路與方法 |
| 3.1 試驗分組 |
| 3.1.1 分組依據(jù) |
| 3.1.2 樣本含量 |
| 3.2 標(biāo)本采集 |
| 3.3 材料與方法 |
| 3.3.1 RT-PCR法檢測目的基因NLRP3mRNA表達 |
| 3.3.2 Caspase-1,IL-1β,IL-18 定量酶聯(lián)檢測 |
| 3.4 觀測指標(biāo) |
| 3.4.1 一般資料 |
| 3.4.2 生命體征 |
| 3.4.3 實驗室檢測指標(biāo) |
| 3.4.4 癥狀、體征分級量化 |
| 3.4.5 病情程度分級 |
| 3.4.6 病程 |
| 3.4.7 病原學(xué)檢測指標(biāo) |
| 3.5 觀測時間 |
| 3.5.1 一般情況及生命體征 |
| 3.5.2 實驗室檢測指標(biāo) |
| 3.5.3 癥狀、體征分級評分、病情程度等級、病程 |
| 3.5.4 病原學(xué)檢測指標(biāo) |
| 4 統(tǒng)計分析 |
| 4.1 分析數(shù)據(jù)集 |
| 4.2 統(tǒng)計分析的內(nèi)容 |
| 4.3 統(tǒng)計分析方法 |
| 5 結(jié)果 |
| 5.1 病例分布 |
| 5.2 基線一致性分析 |
| 5.2.1 人口學(xué)特征 |
| 5.2.2 生命體征 |
| 5.3 患者一般情況 |
| 5.3.1 患者年齡 |
| 5.3.2 患者病程 |
| 5.4 患者中醫(yī)證候、體征評分 |
| 5.5 患者病情等級 |
| 5.6 患者特殊病原體感染情況 |
| 5.7 指標(biāo)檢測結(jié)果 |
| 5.7.1 NLRP3mRNA組間比較結(jié)果 |
| 5.7.2 Caspase-1 組間比較結(jié)果 |
| 5.7.3 IL-1β組間比較結(jié)果 |
| 5.7.4 IL-18 組間比較結(jié)果 |
| 5.8 NLRP3 炎癥小體信號通路指標(biāo)間相關(guān)性分析 |
| 5.8.1 觀察組NLRP3 炎癥小體及相關(guān)因子相關(guān)性分析 |
| 5.8.2 對照組NLRP3 炎癥小體及相關(guān)因子相關(guān)性分析 |
| 5.9 NLRP3 炎癥小體及相關(guān)因子與患者病情資料相關(guān)性分析 |
| 5.9.1 NLRP3 炎癥小體及相關(guān)因子與中醫(yī)證候評分、體征評分、病程相關(guān)分析 |
| 5.9.2 NLRP3 炎癥小體及相關(guān)因子與病情等級、支原體感染相關(guān)分析 |
| 6 討論 |
| 6.1 “土壅木郁,氣機失暢,濕瘀互結(jié)”的病因病機的提出 |
| 6.1.1 土壅木郁乃病機之本 |
| 6.1.2 氣機失暢,濕瘀互結(jié)乃病機之標(biāo) |
| 6.2 NLRP3 炎癥小體信號通路在RPID中的作用 |
| 6.2.1 NLRP3 的特性 |
| 6.2.2 Caspase-1 的特性 |
| 6.2.3 IL-1β、IL-18 的特性 |
| 6.2.4 NLRP3 炎癥小體信號通路與疾病的關(guān)系 |
| 6.2.5 NLRP3 炎癥小體相關(guān)因子與RPID的關(guān)系 |
| 7 結(jié)論 |
| 8 主要工作與創(chuàng)新 |
| 8.1 主要工作 |
| 8.2 創(chuàng)新 |
| 9 問題與展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄一:綜述—中醫(yī)藥治療SPID在調(diào)節(jié)免疫、抗炎方面的研究 |
| 參考文獻 |
| 附錄二:在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果 |
（6）扶正透邪解毒化瘀方對MDRPA的抑菌作用及免疫損傷的部分干預(yù)機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 第一部分 文獻綜述 |
| 綜述一 中藥抗菌和逆轉(zhuǎn)細菌耐藥性研究進展 |
| 1 中藥的抗菌作用 |
| 1.1 單味中藥和單體成分對耐藥菌的抑制作用 |
| 1.2 中藥復(fù)方的抗耐藥菌作用 |
| 1.3 中藥復(fù)方聯(lián)合抗菌藥物的抗耐藥菌作用 |
| 2 中藥逆轉(zhuǎn)細菌耐藥機制研究 |
| 2.1 對細菌質(zhì)粒的消除作用 |
| 2.2 抑制菌體內(nèi)酶的活性 |
| 2.3 抑制細菌外排泵系統(tǒng) |
| 2.4 抑制細菌生物被膜的形成 |
| 3 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻 |
| 綜述二 老年耐藥菌肺炎免疫損傷機制研究 |
| 1 耐藥菌肺炎 |
| 1.1 定義 |
| 1.2 常見耐藥菌種類 |
| 1.3 耐藥菌流行病學(xué)介紹 |
| 1.4 耐藥菌肺炎的感染途徑和危險因素 |
| 1.5 定植與條件致病菌 |
| 1.6 多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥機制 |
| 1.7 多重耐藥菌肺炎的預(yù)防與控制 |
| 2 衰老與免疫 |
| 2.1 衰老對固有免疫細胞的影響 |
| 2.2 衰老對胸腺的影響 |
| 2.3 衰老對適應(yīng)性免疫的影響 |
| 3 老年肺炎與免疫 |
| 4 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻 |
| 前言 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 實驗研究 |
| 實驗一 扶正透邪解毒化瘀方含藥血清聯(lián)合抗生素對MDRPA的體外抑制作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗二 扶正透邪解毒化瘀方對MDRPA肺炎大鼠的保護作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗三 扶正透邪解毒化瘀方對MDRPA肺炎大鼠免疫炎性損傷的部分干預(yù)作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 參考文獻 |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（7）膿毒癥時中性粒細胞過度浸潤的機制研究及CORM-2的干預(yù)作用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮寫檢索 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 中性粒細胞對感染的控制 |
| 1.1.1 中性粒細胞產(chǎn)生 |
| 1.1.2 中性粒細胞從骨髓中釋放 |
| 1.1.3 中性粒細胞向感染部位遷移 |
| 1.1.4 中性粒細胞對病原菌的殺傷 |
| 1.2 膿毒癥時中性粒細胞發(fā)生的遷移損傷 |
| 1.2.1 中性粒細胞的趨化 |
| 1.2.2 中性粒細胞的趨化的調(diào)節(jié) |
| 1.2.3 膿毒癥時中性粒細胞遷移損傷 |
| 1.3 中性粒細胞誘導(dǎo)的器官損傷 |
| 1.3.1 系統(tǒng)炎癥反應(yīng)與器官損傷 |
| 1.3.2 中性粒細胞趨化作用與器官功能的損傷 |
| 1.3.3 中性粒細胞NETs與器官損傷 |
| 1.4 CORM-2對膿毒癥的保護作用 |
| 1.4.1 CO是一種細胞保護分子 |
| 1.4.2 CORMs的發(fā)展 |
| 1.4.3 CORMs臨床應(yīng)用及CORM-2對膿毒癥的保護作用 |
| 1.5 本研究的目的、方法、實驗設(shè)計和意義 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究方法 |
| 1.5.3 實驗設(shè)計 |
| 1.5.4 研究意義 |
| 第二章 CORM-2改善膿毒癥時重要臟器炎癥損傷及中性粒細胞過度浸潤 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗儀器與耗材、試劑 |
| 2.2.1 實驗儀器與耗材 |
| 2.2.2 實驗試劑 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 小鼠處理 |
| 2.3.2 小鼠骨髓中性粒細胞提取 |
| 2.3.3 生存率分析 |
| 2.3.4 小鼠肝臟、肺臟病理損傷及中性粒細胞浸潤情況 |
| 2.3.5 小鼠肝臟、肺臟炎癥反應(yīng)的評價 |
| 2.3.6 中性粒細胞(小鼠)瓊脂糖下趨化實驗研究 |
| 2.3.7 中性粒細胞(小鼠)吞噬功能檢測研究 |
| 2.3.8 統(tǒng)計分析 |
| 2.4 實驗結(jié)果 |
| 2.4.1 CORM-2干預(yù)可以提高LPS誘導(dǎo)的膿毒癥小鼠生存率 |
| 2.4.2 CORM-2改善膿毒癥小鼠肝肺炎癥反應(yīng) |
| 2.4.3 CORM-2改善膿毒癥小鼠中性粒細胞的過度浸潤 |
| 2.4.4 CORM-2改善LPS刺激的中性粒細胞趨化 |
| 2.4.5 CORM-2對LPS刺激的中性粒細胞的吞噬功能的影響 |
| 2.5 討論 |
| 第三章 中性粒細胞趨化因子受體FPR1介導(dǎo)LPS刺激的中性粒細胞趨化增強 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗儀器和耗材、試劑 |
| 3.2.1 實驗儀器和耗材 |
| 3.2.2 實驗試劑 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 中性粒細胞的趨化檢測 |
| 3.3.2 中性粒細胞的提取 |
| 3.3.3 基因芯片分析 |
| 3.3.4 RT-PCR |
| 3.3.5 磷酸化-MAPK蛋白芯片 |
| 3.3.6 Westernblotting |
| 3.3.7 膜趨化受體表達 |
| 3.3.8 激光共聚焦顯微鏡 |
| 3.3.9 統(tǒng)計分析 |
| 3.4 實驗結(jié)果 |
| 3.4.1 LPS促進中性粒細胞趨化 |
| 3.4.2 FMLP誘導(dǎo)的趨化信號覆蓋其他的趨化信號：層級趨化 |
| 3.4.3 LPS促進中性粒細胞趨化：層級趨化 |
| 3.4.4 中性粒細胞全基因組分析 |
| 3.4.5 基因芯片分析LPS對中性粒細胞趨化受體表達的影響 |
| 3.4.6 LPS刺激的中性粒細胞MAPKs通路的活化 |
| 3.4.7 p38通過對LPS刺激的中性粒細胞的趨化受體表達調(diào)控層級趨化 |
| 3.4.8 p38通過對LPS刺激的中性粒細胞的趨化受體分布調(diào)控層級趨化 |
| 3.4.9 LPS通過活化p38促進中性粒細胞層級趨化 |
| 3.5 討論 |
| 第四章 CORM-2通過促進FPR1內(nèi)化抑制LPS刺激的中性粒細胞趨化增強 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗儀器和耗材、試劑 |
| 4.2.1 實驗儀器和耗材 |
| 4.2.2 實驗試劑 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 相位顯微鏡技術(shù) |
| 4.3.2 中性粒細胞凋亡檢測 |
| 4.3.3 Westernblotting |
| 4.3.4 激光共聚焦顯微鏡 |
| 4.3.5 瓊脂糖趨化實驗 |
| 4.3.6 統(tǒng)計分析 |
| 4.4 實驗結(jié)果 |
| 4.4.1 CORM-2對LPS刺激的中性粒細胞相位的影響 |
| 4.4.2 CORM-2對LPS刺激的中性粒細胞活力的影響 |
| 4.4.3 CORM-2對LPS刺激的中性粒細胞FPR1表達的影響 |
| 4.4.4 CORM-2對LPS刺激的中性粒細胞FPR1分布的影響 |
| 4.4.5 CORM-2對LPS刺激中性粒細胞TLR4表達的影響 |
| 4.4.6 CORM-2通過GRK2對LPS刺激的中性粒細胞趨化的影響 |
| 4.4.7 CORM-2通過p38對LPS刺激的中性粒細胞趨化的影響 |
| 4.4.8 CORM-2通過p38對LPS刺激的中性粒細胞FPR1的影響 |
| 4.5 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及其他科研成果 |
（8）慢病毒介導(dǎo)的TREM1及LBP基因沉默對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞基因表達分子調(diào)控機制初步研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 髓樣細胞觸發(fā)受體1的研究進展 |
| 1.1.1 TREM1的結(jié)構(gòu) |
| 1.1.2 TREM1相關(guān)信號通路 |
| 1.1.3 抑制TREM1實驗研究 |
| 1.1.4 TREM1的功能 |
| 1.1.5 TREM1與炎癥性疾病關(guān)系 |
| 1.2 脂多糖結(jié)合蛋白的研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 LBP的結(jié)構(gòu) |
| 1.2.2 LBP的信號通路 |
| 1.2.3 LBP的功能 |
| 1.2.4 LBP在感染及炎癥中的作用 |
| 1.2.5 LBP多態(tài)性臨床研究 |
| 1.3 慢病毒載體介導(dǎo)RNA干擾的應(yīng)用及前景 |
| 1.3.1 該技術(shù)的發(fā)現(xiàn) |
| 1.3.2 該技術(shù)分子機制 |
| 1.3.3該技術(shù)的應(yīng)用 |
| 1.3.4 基于慢病毒載體的RNAi |
| 1.4 本研究目的及意義 |
| 第二章 原代水牛單核巨噬細胞的分離培養(yǎng) |
| 引言 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 實驗方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 原代PBMC細胞分離效果比較 |
| 2.2.2 不同血清濃度培養(yǎng)對細胞生長的影響 |
| 2.2.3 單核巨噬細胞的原代培養(yǎng) |
| 2.2.4 水牛單核巨噬細胞鑒定 |
| 2.2.5 水牛單核巨噬細胞TREM1及CD14基因表達水平 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 第三章 抑制TREM1基因表達對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞炎癥相關(guān)基因表達影響的研究 |
| 引言 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 實驗方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 水牛TREM1-shRNA慢病毒包裝及滴度測定 |
| 3.2.2 LPS不同濃度及刺激時間對單核巨噬細胞的影響 |
| 3.2.3 TREM1-shRNA慢病毒感染單核巨噬細胞條件優(yōu)化 |
| 3.2.4 基因沉默TREM1對單核巨噬細胞相關(guān)基因表達的影響 |
| 3.2.5 TREM1基因沉默對TNF-α及IL-1β細胞因子分泌水平的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 結(jié)論 |
| 第四章 抑制LBP基因表達對LPS誘導(dǎo)下水牛單核巨噬細胞相關(guān)基因表達影響的研究 |
| 引言 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 實驗方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 LBP-shRNA慢病毒載體包裝及滴度測定 |
| 4.2.2 LBP-shRNA慢病毒感染細胞最佳條件的摸索 |
| 4.2.3 LBP基因沉默對單核巨噬細胞LBP基因及相關(guān)基因表達的影響 |
| 4.2.4 ELISA檢測相關(guān)基因的蛋白表達水平 |
| 4.2.5 TREM1和LBP雙基因慢病毒聯(lián)合感染對水牛單核巨噬細胞的影響 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 結(jié)論 |
| 第五章 TREM1/LBP基因表達下調(diào)的水牛單核巨噬細胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析 |
| 引言 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 實驗儀器設(shè)備及試劑 |
| 5.1.2 實驗試劑 |
| 5.1.3 微量樣品處理及收集 |
| 5.1.4 測序基本流程 |
| 5.1.5 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估 |
| 5.1.6 基因表達數(shù)據(jù)分析 |
| 5.1.7 熒光定量PCR驗證差異基因 |
| 5.1.8 ELISA檢測外源蛋白 |
| 5.1.9 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.2.1 總RNA質(zhì)量檢測 |
| 5.2.2 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估 |
| 5.2.3 參考序列比對分析 |
| 5.2.4 基因表達水平分析 |
| 5.2.5 RNA-seq相關(guān)性分析 |
| 5.2.6 基因差異表達分析 |
| 5.2.7 差異基因功能分析 |
| 5.2.8 qRT-PCR驗證表達差異基因準(zhǔn)確性 |
| 5.2.9 ELISA檢測外源蛋白分泌情況 |
| 5.3 討論 |
| 5.4 結(jié)論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況 |
| 附錄 |
（9）坤復(fù)康膠囊對盆腔炎性疾病后遺癥紅細胞免疫影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文獻研究 |
| 1.1 中醫(yī)學(xué)對CPID的研究概況 |
| 1.1.1 關(guān)于命名 |
| 1.1.2 病因病機 |
| 1.1.3 中醫(yī)治療 |
| 1.2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對CPID的研究概況 |
| 1.2.1 發(fā)病因素 |
| 1.2.2 CPID分類及病理改變 |
| 1.2.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.2.4 治療 |
| 1.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對CPID的實驗研究 |
| 1.4 紅細胞免疫研究概況 |
| 1.4.1 紅細胞CR1功能 |
| 1.4.2 紅細胞CD59功能 |
| 1.4.3 紅細胞SOD功能 |
| 1.4.4 紅細胞DARC功能 |
| 1.5 坤復(fù)康膠囊研究概況 |
| 第二章 研究方法 |
| 2.1 研究對象 |
| 2.1.1 病例來源 |
| 2.1.2 樣品量估算 |
| 2.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.2 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.4 納入標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.5 排除標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.6 病例的剔除 |
| 2.2.7 病例的脫落 |
| 2.2.8 終止試驗標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.2.9 研究方法 |
| 2.3 檢測器材與方法 |
| 2.3.1 材料 |
| 2.3.2 設(shè)備儀器 |
| 2.3.3 檢測方法 |
| 2.4 統(tǒng)計方法 |
| 第三章 研究結(jié)果 |
| 3.1 兩組病例分布情況 |
| 3.1.1 分組 |
| 3.1.2 兩組病歷完成及脫落情況 |
| 3.2 基線資料比較析 |
| 3.2.1 年齡、病程比較 |
| 3.2.2 兩組一般情況比較 |
| 3.3 臨床療效觀察 |
| 3.3.1 兩組治療前后中醫(yī)證候積分情況 |
| 3.3.2 兩組治療前后CPID局部體征評分 |
| 3.3.3 兩證型綜合療效比較 |
| 3.4 不良事件情況 |
| 3.5 隨訪情況 |
| 3.6 實驗室觀察 |
| 3.6.1 外周血細胞情況 |
| 3.6.2 血漿TXB_2、6-K-PG_(la) |
| 3.6.3 紅細胞CR1 |
| 3.6.4 紅細胞CD59 |
| 3.6.5 血漿IL-8、IL10、紅細胞DARC |
| 3.6.6 紅細胞SOD及血漿MDA |
| 3.7 相關(guān)性分析 |
| 第四章 討論 |
| 4.1 理論依據(jù) |
| 4.1.1 CPID主要病因病機 |
| 4.1.2 CPID臨床證候依據(jù) |
| 4.1.3 前期實驗研究 |
| 4.2 CPID治法探討 |
| 4.3 方藥分析 |
| 4.3.1 坤復(fù)康膠囊方藥分析 |
| 4.3.2 花紅片方藥分析 |
| 4.3.3 臨床療效結(jié)果分析 |
| 4.4 坤復(fù)康膠囊對CPID的實驗室研究 |
| 4.4.1 外周血細胞計數(shù) |
| 4.4.2 血漿TXB2、6-K-PG_(la)含量 |
| 4.4.3 紅細胞免疫功能 |
| 4.5 濕熱瘀結(jié)型CPID綜合評分與實驗指標(biāo)相關(guān)性 |
| 結(jié)語 |
| 1 主要結(jié)論 |
| 2 創(chuàng)新點 |
| 3 問題與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 附錄1: 英文縮略語 |
| 附錄2: 人紅細胞花環(huán) |
| 附錄3: 觀察記錄表 |
| 附錄4: 不良反應(yīng)記錄表 |
| 附錄5: 受試者知情同意書 |
| 附錄6: 倫理批件 |
| 在校期間發(fā)表論文情況 |
| 統(tǒng)計學(xué)審核證明 |
| 致謝 |
（10）粒/單核細胞吸附對膿毒癥性急性腎損傷大鼠的療效及機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 緒論 |
| 第一部分 粒/單核細胞吸附治療膿毒癥性急性腎損傷大鼠的療效及機制研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料與方法 |
| 3.結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 第二部分 血清前白蛋白預(yù)測急性腎小管壞死患者預(yù)后的前瞻性隊列研究 |
| 1.前言 |
| 2.對象與方法 |
| 3.統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 4.結(jié)果 |
| 5.討論 |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 學(xué)術(shù)論文與科研成果目錄 |
四、紅細胞、內(nèi)毒素對淋病病人中性粒細胞吞噬功能影響的實驗研究（論文參考文獻）
- [1]抗菌肽Tachyplesin Ⅲ和Cathelicidin BF的抗耐藥菌感染活性及其機制[D]. 齊家龍. 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2021(02)
- [2]MiR-150通過中性粒細胞對小鼠細菌感染發(fā)病的影響[D]. 章宏雨. 華北理工大學(xué), 2020(02)
- [3]多能干細胞分化再生T細胞的體內(nèi)抗腫瘤評估及再生可移植髓系細胞研究[D]. 呂萃. 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué), 2020(01)
- [4]瑪咖根部多糖的結(jié)構(gòu)鑒定及免疫調(diào)節(jié)活性的研究[D]. 張猛猛. 華南理工大學(xué), 2019(01)
- [5]NLRP3炎癥小體信號通路在脾虛肝郁型盆腔炎性疾病反復(fù)發(fā)作中的作用機制研究[D]. 史昭. 成都中醫(yī)藥大學(xué), 2019
- [6]扶正透邪解毒化瘀方對MDRPA的抑菌作用及免疫損傷的部分干預(yù)機制研究[D]. 馬潔. 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2018(01)
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- [9]坤復(fù)康膠囊對盆腔炎性疾病后遺癥紅細胞免疫影響[D]. 張嘉曄. 廣州中醫(yī)藥大學(xué), 2017(01)
- [10]粒/單核細胞吸附對膿毒癥性急性腎損傷大鼠的療效及機制研究[D]. 徐慶青. 上海交通大學(xué), 2016(03)