一、添加不同發(fā)情時期山羊血清對牛胚胎體外發(fā)育的影響（論文文獻綜述）
黃飛,趙建清,陶維昆,劉波,朱文靚,方翟,高慶華[1]（2021）在《綿羊ICSI胚胎培養(yǎng)液中發(fā)情綿羊血清濃度優(yōu)化研究》文中進行了進一步梳理在胚胎培養(yǎng)液中添加適量的發(fā)情綿羊血清（ESS）有利于提高胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）胚胎后期的發(fā)育潛力。為了探討在ICSI胚胎培養(yǎng)液中添加不同濃度的ESS對綿羊ICSI胚胎桑椹胚率的影響及其最優(yōu)的ESS濃度,本試驗采用ICSI技術得到ICSI胚胎,然后在ICSI胚胎培養(yǎng)液中添加不同濃度的ESS（A組0%、B組5%、C組10%、D組15%及E組20%）,進行ICSI胚胎的體外培養(yǎng)。結(jié)果表明:在ICSI胚胎培養(yǎng)液中添加10%的ESS,ICSI胚胎的桑椹胚率為23.78%,顯著高于A組（11.47%）、B組（17.87%）、D組（16.77%）、E組（12.86%）（P<0.05）。說明在ICSI胚胎培養(yǎng)液中添加10%ESS能顯著提升綿羊ICSI胚胎的桑椹胚率。
彭巍[2]（2019）在《牦牛冷暖季卵巢差異分析及添加褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟、胚胎體外發(fā)育的影響》文中研究指明(1)試驗利用組織學和轉(zhuǎn)錄組學技術,對在暖季（W-yak）和冷季（C-yak）的牦牛卵巢狀態(tài)變化進行研究。收集的卵巢樣品分為W-yak和C-yak兩組,分別測定其黃體數(shù)量、卵泡發(fā)育和RNA-Seq分析。結(jié)果表明:（1）W-yak牦牛黃體數(shù)量明顯高于C-yak（P<0.05）,其中8月和9月的牦牛排卵最為集中;（2）C-yak（11月）卵巢中卵泡發(fā)育過程中斷,與W-yak（7月）相比,這是由于竇卵泡的異常積聚所導致;（3）多囊泡現(xiàn)象代表C-yak卵巢竇卵泡內(nèi)顆粒細胞功能紊亂;（4）RNA-seq數(shù)據(jù)顯示,如FST,CYP1A1,GNAI2和PI3K等雌激素分泌和代謝信號通路在C-yak卵巢中是紊亂的,本研究獲得W-yak和C-yak之間卵巢形態(tài)變化和不同基因表達,并提供了與卵巢狀態(tài)相關的試驗數(shù)據(jù)。卵巢功能的這些重要變化與繁殖能力緊密相關。結(jié)果表明季節(jié)和氣候變化不利于雌性生殖健康,并為長期營養(yǎng)缺乏和低溫脅迫下可能導致卵巢功能障礙提供理論依據(jù)。（2）研究在卵母細胞成熟和/或胚胎培養(yǎng)液中添加不同濃度的褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟和胚胎體外發(fā)育的影響;結(jié)果表明,在試驗1中,與對照組相比,IVC+10-9組和IVC+10-11組,卵母細胞成熟率顯著提高（67.9%vs 82.4%,78.4%）,囊胚率形成顯著提高（36.8%,34.4%vs 26.3%）,成熟卵母細胞降低ROS水平、細胞凋亡率和紡錘體錯位與染色體異常的發(fā)生率,提高線粒體膜電位;在試驗2中,在胚胎體外培養(yǎng)中,與對照組相比,IVC+10-9組和IVC+10-11組囊胚率顯著提高（26.3%vs 35.4%,31.8%）。此外,與對照組相比,在IVC+10-9組中觀察到囊胚中凋亡細胞的數(shù)量和百分比降低（6.9±0.6;5.5%vs 3.5±0.4;3.0%）。在試驗3中,IVC+10-9組減少囊胚凋亡細胞數(shù),抗氧化基因（SOD2）和熱休克蛋白（HSPB1）mRNA表達量升高,促凋亡基因p53、Bax和capase-3的表達量降低,抗凋亡基因BCL2L1、Survivin的表達水平顯著高于對照組;與IVM+10-9相比,IVM/IVC+10-9處理組的活性氧物質(zhì)產(chǎn)量升高?？傊?添加10-9M濃度的褪黑素在牦牛胚胎體外生產(chǎn)階段直接影響胚胎發(fā)育能力和質(zhì)量。（3）褪黑素作為一種抗氧化劑在多種細胞中扮演著重要的角色,保護細胞內(nèi)的分子免受氧化應激,褪黑素在牦牛胚胎中的抗氧化作用機制尚不清楚。在H2O2氧化應激下,通過對牦牛胚胎培養(yǎng)過程中添加不同濃度的褪黑素,考察牦牛胚胎發(fā)育過程中卵裂及囊胚形成的影響,并通過檢測受精卵內(nèi)活性氧水平、線粒體膜電位、抗氧化酶活性、細胞數(shù)量及內(nèi)細胞團（ICM）/細胞總數(shù)（TCN）的比值等指標,考察褪黑素在牦牛胚胎中的抗氧化作用機制,結(jié)果表明,牦牛受精卵暴露于褪黑素的環(huán)境下,保護牦牛胚胎發(fā)育免受過氧化氫（H2O2）誘導的氧化應激損傷,保持受精卵線粒體功能穩(wěn)定,T-AOC、GSH-Px、CAT活性升高,降低了H2O2誘導的細胞內(nèi)ROS水平,進一步證明褪黑素通過保存抗氧化酶來保護著床前胚胎免受氧化損傷。這些結(jié)果共同證實了褪黑素對牦牛胚胎發(fā)育過程中的抗氧化作用,顯著提高了牦牛胚胎體外生產(chǎn)中囊胚的數(shù)量和質(zhì)量。（4）褪黑素減少了牦牛SCNT胚胎的細胞凋亡和ROS水平,增加了細胞數(shù)量,ICM細胞數(shù)量,以及ICM與TCN的比例;基因表達分析表明,褪黑素抑制促凋亡基因p53和Bax的表達,并刺激SCNT囊胚中抗氧化基因SOD2和Gpx4,抗凋亡基因BCL2L1和多能性相關基因SOX2的表達。在囊胚期添加褪黑素,SCNT-T組胚胎的全基因組H3K9ac水平高于SCNT組胚胎。結(jié)論,外源性褪黑素可以影響與細胞凋亡,抗氧化功能和發(fā)育相關的基因的表達,減少牦牛SCNT胚胎的細胞凋亡和ROS水平,提高胚泡質(zhì)量,從而最終提高牦牛的克隆效率。（5）探討褪黑素處理成纖維細胞后,將其作為供體細胞對牦牛體細胞核移植隆牦牛胚胎體外發(fā)育能力和質(zhì)量的影響。在10-9 M褪黑素濃度下,顯著增強成纖維細胞（PFF）的增殖,供體細胞甲基化水平H3K9me3、H3K9me2、和H3K18ac顯著升高,促凋亡基因p53、Bax的表達水平明顯降低,抗凋亡基因BCL2L1的表達水平明顯增加,并且在10-9 M褪黑素處理的供體細胞組中囊胚率顯著增加,細胞總數(shù)和ICM細胞數(shù)以及囊胚的ICM:TCN的比率顯著提高;降低囊胚期胚胎凋亡細胞的發(fā)生率和細胞內(nèi)ROS水平,提高的全基因組H3K9ac和H3K18ac乙?；?囊胚中發(fā)育相關基因OCT4和多能性相關基因SOX2,抗氧化基因SOD2、Gpx4和熱應激蛋白HSPB1的表達水平在SCNT-T組中顯著上調(diào),促凋亡基因p53和Bax的表達水平顯著低于SCNT組,抗凋亡基因BCL2L1和Survivin表達水平顯著高于對照組和SCNT組。本研究確定了供體細胞的經(jīng)褪黑素處理可以促進牦牛克隆胚胎的發(fā)育。10-99 M褪黑素的最佳濃度處理的重構(gòu)胚,可以增強牦牛SCNT囊胚的形成和改善胚胎質(zhì)量。
王士勇[3]（2014）在《梅花鹿、水貂、藍狐及貉—牛異種體細胞核移植技術研究》文中認為為了探索梅花鹿-牛異種體細胞核移植技術，為梅花鹿胚胎工程研究奠定技術基礎，本論文對其供核細胞的培養(yǎng)和冷凍保存、受體卵母細胞的體外成熟、顯微操作、重組胚胎外培養(yǎng)等技術環(huán)節(jié)進行了探索研究，并在水貂、藍狐和貉等毛皮動物上驗證了建立的異種體細胞核移植技術體系。主要內(nèi)容如下：（1）梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞（Ear Skin Fibriblasts，ESF）經(jīng)組織塊法原代培養(yǎng)，利用酶消化時間差與貼壁時間差法處理3～5次純化，結(jié)果顯示細胞生長特點為貼壁生長、呈梭形、具偽足，F(xiàn)5代細胞生長曲線呈“潛伏期-對數(shù)生長期-停滯期”的模式。DMSO作為抗凍保護劑時，梅花鹿、水貂、藍狐和貉ESF解凍復蘇后復蘇率分別為89.64%、92.44、91.24和91.04，顯著高于甘油作為抗凍保護劑。結(jié)論：梅花鹿、水貂、藍狐和貉ESF具有典型的皮膚成纖維細胞生長特點，通過酶消化時間與貼壁時間差的方法對其純化可行，冷凍保存時可采用10%DMSO作為抗凍保護劑。（2）牛卵丘-卵母細胞復合體（Cumulus Oocyte Complexes，COCs）經(jīng)22h體外成熟培養(yǎng)之后，LH+FSH和PMSG+HCG組成熟率分別為79.1%和75.2%，差異不顯著，但是兩組成熟率均顯著高于對照組；牛COCs經(jīng)（Brilliant Cresyl Blue, BCB）染色染色90min后卵母細胞著色率為68.1%，顯著高于30、60min組，辨識難度為“中”；牛COCs經(jīng)39μM的BCB染色后，著色率為64.5%，顯著高于13μM組的29.3%；BCB+組和BCB-組的成熟率與對照組比較差異均不顯著；在體外成熟培養(yǎng)液中添加50ng/mL表皮生長因子（Epidermal Growth Factor，EGF）后培養(yǎng)牛的COCs，22h后成熟率為77.4%，顯著高于0、10、20ng/mL組。結(jié)論：在牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng)液中添加國產(chǎn)激素10IU/mL PMSG、15IU/mL HCG和50ng/mL的EGF能顯著提高其體外成熟率；BCB法篩選優(yōu)質(zhì)卵母細胞在本試驗體系下不適用。（3）牛COCs經(jīng)體外成熟20、21、22h后，0.4μg/mL脫羰秋水仙堿（Demecolcine，DEME）誘導顯核率分別為61.0%、65.3%和66.7%，差異不顯著；經(jīng)0.4μg/mL DEME處理60、120min后，顯核率分別為70.0%和71.9%，顯著高于30min組；經(jīng)0.5μg/mL DEME處理60min之后，顯核率為78.9%，顯著高于0.3、0.4μg/mL組；DEME輔助法的去核率為100.0%，顯著高于擠壓法和盲吸法，三種去核方法的去核時間差異不顯著；帶下注核與全細胞胞質(zhì)內(nèi)注核的成功率分別為100%和94.8%，注核時間分別為31.0s和35.1s，與破膜后胞質(zhì)內(nèi)注核比較差異均顯著；一步操作和兩步操作的相同注核方法處理組之間在激活率、卵裂率和囊胚率方面均無顯著差異；0、0.25、0.50和1.00μM白藜蘆醇對梅花鹿-牛ISCNT胚胎卵裂率沒有顯著影響，0.50和1.00μM組囊胚發(fā)育率分別為38.0%和36.7%，顯著高于0、0.25μM組；梅花鹿-牛ISCNT胚胎用體細胞共培養(yǎng)時，水貂ESF組的卵裂率為55.7%，顯著高于對照組，牛卵丘細胞組囊胚發(fā)育率為59.4%，顯著高于對照組和其他兩組。結(jié)論：梅花鹿-牛ISCNT研究可采用下面的技術程序：牛卵母細胞經(jīng)IVM20～22h后，用0.5μg/mL DEME處理60min誘導顯核，Pizeo輔助破膜胞質(zhì)內(nèi)注核的一步顯微操作核移植，激活后的重組胚用牛卵丘細胞共培養(yǎng)。（4）采用Pizeo輔助全細胞胞質(zhì)內(nèi)注核的方法構(gòu)建毛皮動物-牛ISCNT胚胎時，水貂、藍狐和貉ESF作為供核細胞，在注核成功率、卵裂率和囊胚率之間差異不顯著；牛卵丘細胞作為共培養(yǎng)細胞時，水貂、藍狐、貉-牛ISCNT胚胎的囊胚率分別為43.6%、40.1%和42.1%，均顯著高于對照組。結(jié)論：梅花鹿-牛ISCNT技術程序同樣適用于水貂、藍狐和貉等三種毛皮動物與牛的ISCNT。
李佳佳,馬利兵,籍鳳宇,陳秀莉[4]（2012）在《發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟及孤雌胚發(fā)育的影響》文中指出在動物卵母細胞體外成熟及胚胎體外培養(yǎng)體系中添加一定濃度的發(fā)情牛血清可能提高卵母細胞的成熟率及胚胎的發(fā)育率。本研究以屠宰場卵巢來源的綿羊卵母細胞為試驗材料,探討了發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟及孤雌胚發(fā)育的影響。結(jié)果表明,成熟液中添加10%第1天的發(fā)情牛血清能顯著提高綿羊卵母細胞的體外成熟率及孤雌胚卵裂率（P<0.05）;孤雌胚體外培養(yǎng)72h后,向培養(yǎng)液中添加10%第7天的發(fā)情牛血清能顯著提高綿羊孤雌胚的桑囊胚率（P<0.05）。結(jié)果表明,發(fā)情牛血清能夠促進綿羊卵母細胞的體外成熟率及孤雌胚發(fā)育率。
權(quán)富生,劉琴,王麗君,馬會明,王勇勝,張涌[5]（2011）在《β-巰基乙醇和發(fā)情羊血清對牛顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響》文中指出為滿足實驗室卵母細胞體外成熟共培養(yǎng)和胚胎共培養(yǎng)的需要以及進行卵巢顆粒細胞生物學功能等研究的需要,進行牛卵巢顆粒細胞的體外培養(yǎng)研究。在基礎培養(yǎng)液TCM199中分別添加12.5、25、50、100、200μmol/L的β-巰基乙醇（BME）,觀察顆粒細胞生長狀況;在基礎培養(yǎng)液中分別添加體積分數(shù)為10%的發(fā)情山羊第1天血清、體積分數(shù)為10%的發(fā)情山羊第11天血清和體積分數(shù)為10%的胎牛血清,觀察顆粒細胞生長和增殖情況。體外培養(yǎng)顆粒細胞的活細胞率隨著添加BME濃度的增大而增加,在25μmol/L時達到最高,此后隨濃度的增大而降低;發(fā)情山羊第1天的血清組中,顆粒細胞生長和增殖情況最好。BME可以提高顆粒細胞體外培養(yǎng)的活率,最佳添加濃度為25μmol/L;發(fā)情山羊第1天的血清可有效促進顆粒細胞體外培養(yǎng)生長和增殖。
彭輝[6]（2008）在《黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化及體細胞核移植胚構(gòu)建初探》文中研究指明本試驗通過在成熟基礎液中添加不同濃度的HMG（人尿促性素）和ITS（胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒酸鈉）以觀察對黃牛卵母細胞體外成熟率的影響,分析了卵巢運輸過程中保存溫度和時間及卵巢所處性周期階段與黃牛卵母細胞體外成熟及孤雌胚胎體外發(fā)育的關系;探討了培養(yǎng)過程中培養(yǎng)微滴大小、每次換液量、添加血清是否滅活及血清添加時間和添加濃度對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育潛力的影響,并比較了4種培養(yǎng)液的培養(yǎng)效果;研究了有無顆粒細胞單層、不同類型及種屬的顆粒細胞單層、顆粒細胞單層體外培養(yǎng)時間及在不同時間更換培養(yǎng)單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響,旨在優(yōu)化黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)體系;對以黃牛顆粒細胞為核供體,去核卵母細胞為核受體構(gòu)建核移植胚胎進行了初步探討。結(jié)果如下:1.在成熟基礎液中添加0.05IU/mL和0.1IU/mL的HMG卵母細胞成熟率極顯著高于0.025 IU/mL組（71.26%,74.30%/31.52%;P<0.01）;而添加10μL/mL ITS則對卵母細胞體外成熟率和卵裂率影響不大（71.52%/69.47%;84.96%/ 82.42%）,但可以提高卵母細胞孤雌激活后的囊胚發(fā)育率（41.67%/32.0%）;就卵母細胞成熟率和囊胚率而言,卵巢置于20～29℃保存（61.11%/33.33%）與10～19℃（41.18%/17.65%）和30～39℃保存（71.34%/41.84%）無顯著差異（P>0.05）,但后兩組之間差異顯著（P<0.05）;30～39℃中保存1～3h抽出的卵母細胞較保存8～10h抽出的卵母細胞有較高的成熟率、卵裂率和囊胚發(fā)育率（68.57%/32.29%,86.11%/25.81%,40.32%/0;P<0.05）;黃體期無黃體組與有黃體組均低于卵泡期卵母細胞的體外成熟率、卵裂率和囊胚發(fā)育率,但差異不顯著（P>0.05）。2.與50μL組和200μL組相比,黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)在100μL微滴中可以獲得較高的囊胚率,3組之間無顯著差異（43.20%/31.34%/38.82%） （P>0.05）;每次更換培養(yǎng)液體積的1/2組比每次更換1/4組和3/4組更有利于黃牛孤雌胚胎的體外發(fā)育,就囊胚率而言有顯著差異（41.84%/26.39%/25.71%）（P<0.05）;添加的血清是否進行滅活對牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響不大,未滅活組的囊胚率和孵出囊胚率（40.23%/57.14%）略優(yōu)于滅活組（38.95%/51.35%）。在黃牛卵母細胞孤雌激活后的第3d添加血清可得到較高的囊胚率和孵出囊胚率（46.55%/53.70%）,而以孤雌激活后的第3d添加10%FBS囊胚發(fā)育率最高（45.97%）;綜合卵裂率和囊胚發(fā)育率,對4種培養(yǎng)液比較后認為黃牛孤雌胚胎的體外培養(yǎng)液應首選SOFaa。3 .孤雌胚胎體外培養(yǎng)時有顆粒細胞單層組的卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率（85.10%/41.81%/52.70%）較對照組（66.13%/7.32%/0%）均差異顯著（P<0.05）;壁顆粒細胞和丘顆粒細胞單層均能較好地支持黃牛孤雌胚胎的體外發(fā)育,其卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率分別為86.11%/ 83.72%、40.32% /41.67%、52. 0% /53.33%,無顯著差異（P>0.05）;來自黃牛、豬和小鼠的顆粒細胞單層在支持黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育方面無種屬特異性,其卵裂率、囊胚率和孵出囊胚率分別為83.42% / 85.16% / 82.58%、42.17% / 41.67% / 39.45%、54.29% / 52.73% / 48.84%,3組之間無顯著差異（P>0.05）;將培養(yǎng)2d和4d后的顆粒細胞單層分別用于胚胎的體外共培養(yǎng),其卵裂率和囊胚發(fā)育率與對照組相比差異不顯著（P>0.05）,但4d組與對照組之間差異顯著（P<0.05）,3組在孵出囊胚率方面均無顯著差異（P>0.05）;就囊胚發(fā)育率而言,共培養(yǎng)的第3/6d兩次更換單層與共培養(yǎng)的第4d更換單層和始終不更換單層的對照組相比無顯著差異（P>0.05）,但第4d更換單層與對照組相比差異顯著（P<0.05）,3組在孵出囊胚率方面差異不顯著（P>0.05）。4.將卵母細胞在體外成熟培養(yǎng)17～19h、19～21h和21～23h后分別進行去核并構(gòu)建核移植胚胎,3組的卵裂率和囊胚率無顯著差異（P>0.05）,17～19h組和19～21h組的去核率高于21～23h組且差異顯著（P<0.05）,而19～21h組的囊胚發(fā)育率優(yōu)于其它兩組;卵母細胞體外成熟培養(yǎng)19～21h后去核并構(gòu)建核移植胚胎,經(jīng)體外培養(yǎng)1～3h、3～5h和5～7h后再進行激活,結(jié)果表明核移植胚胎在體外培養(yǎng)3～5h進行化學激活可以得到較高的卵裂率（75.0%）和囊胚發(fā)育率（11.46%）。
胡林勇[7]（2008）在《牛體外受精技術體系的優(yōu)化研究》文中研究說明自1982年第一頭牛體外受精后代出生以來,雖然國內(nèi)外學者對牛的體外受精（in vitro fertilization,IVF）技術進行了不斷的完善,但是目前對于一些因素對IVF效率的影響還存爭議。因此,有必要對牛的IVF體系進行優(yōu)化研究。這不僅有助于進一步明確這些因素對IVF的影響,而且對于提高IVF胚胎生產(chǎn)效率及加速IVF技術在生產(chǎn)上的推廣應用都有重要的意義。本研究在目前國內(nèi)外體外受精研究的基礎上,對牛卵母細胞體外成熟（in vitro maturation,IVM）、IVF及早期胚胎的體外培養(yǎng)（in vitro culture,IVC）作了進一步的優(yōu)化研究,并重點研究了葡萄糖對牛IVF及早期胚胎體外培養(yǎng)的影響。旨在建立一套經(jīng)過優(yōu)化的牛IVF技術體系。1.在卵母細胞體外培養(yǎng)中,比較了不同蛋白質(zhì)添加物（胎牛血清,fetal bovine serum,FBS;新生牛血清,newborn calf serum,NCS;牛血清白蛋白,bovine serum albumin,BSA）以及表皮生長因子（epidermal growth factor,EGF）對卵母細胞IVM的影響。結(jié)果表明,與BSA相比,血清可以顯著促進卵母細胞的成熟,而FBS對成熟效果要好于NCS。EGF添加量在20 ng/mL時即明顯促進卵母細胞的成熟率,隨著其濃度的增加,卵母細胞成熟率并未相應增加。2.在精子獲能和受精中,不同公牛個體對體外受精卵裂率、8-細胞胚胎發(fā)育率及囊胚率均有明顯影響,就體外受精卵裂率來講,2號牛（62.3%）和3號牛（67.4%）顯著高于5號牛（35.8%, P<0.01）。精子獲能液中肝素的添加劑量對體外受精的影響僅表現(xiàn)在卵裂率的差異,50 ng/mL組的卵裂率（71.3%）顯著高于10 ng/mL組（62.1%, P<0.05）。就卵裂率及囊胚率來講,獲能液和受精液中的葡萄糖添加與否對IVF無明顯影響。3.受精卵體外培養(yǎng)時,無論在開始進行胚胎培養(yǎng)時就加入葡萄糖,還是先在不含葡萄糖的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48 h后添加葡萄糖,5.6 mmol/L組的囊胚發(fā)育率均明顯低于其他各組。這表明,在體外高濃度的葡萄糖會抑制牛IVF胚胎的體外發(fā)育。在培養(yǎng)開始時即加入3.0 mmol/L葡萄糖時,其8-細胞胚胎發(fā)育率低于不添加葡萄糖組（50.9% vs 60.6%, P<0.05）;而在培養(yǎng)48 h后加入3.0 mmol/L葡萄糖時,其8-細胞胚胎與不添加葡萄糖組無明顯差異（59.8%, 59.3%, P>0.05）,這提示葡萄糖對胚胎發(fā)育的影響與其添加時期有關。在以FBS為蛋白質(zhì)添加物時,添加1.5 mmol/L葡萄糖與否并未顯著影響IVF胚胎的囊胚發(fā)育率;而在以BSA為蛋白質(zhì)添加物時,添加1.5 mmol/L葡萄糖卻明顯促進了IVF胚胎的囊胚發(fā)育率（23.1% vs. 17.3%, P<0.05）。這說明葡萄糖對IVF胚胎體外發(fā)育的影響還與蛋白質(zhì)添加物有關。另外,在培養(yǎng)液中添加1.5 mmol/L葡萄糖時,以FBS為蛋白質(zhì)添加物組的囊胚發(fā)育率顯著高于以BSA作為蛋白質(zhì)添加物組（37.8% vs 23.1%,P<0.05）。這進一步說明FBS可以提高牛IVF體系的胚胎生產(chǎn)效率,在牛IVF體系中具有重要作用。
宋繼梅[8]（2007）在《東北虎體細胞異種核移植》文中指出1.本研究用兩種不同的組織塊培養(yǎng)法進行了東北虎體細胞的原代培養(yǎng),并比較了不同培養(yǎng)基、不同血清濃度及不同濃度的表皮生長因子（EGF）和胰島素（insulin）對第7代東北虎皮膚成纖維細胞生長的影響,結(jié)果表明,用組織塊培養(yǎng)法、冷消化過夜后組織塊培養(yǎng)法,均能成功地進行東北虎皮膚成纖維細胞的原代培養(yǎng);培養(yǎng)基DMEM/F-12及以DMEM/F-12為基礎培養(yǎng)基添加20% （V/V）FBS更適于東北虎皮膚成纖維細胞的培養(yǎng);以含10% FBS的DMEM/F-12為基礎培養(yǎng)基添加1ng/mL EGF、10ng/mL EGF均能顯著促進細胞生長,而添加5μg/mL、50μg/mL insulin對細胞生長無促進作用。2.用組織塊直接培養(yǎng)法和冷消化過夜處理后組織塊培養(yǎng)法,均能成功地分離培養(yǎng)東北虎耳皮膚成纖維細胞。培養(yǎng)的細胞具有正常的成纖維細胞形態(tài)和正常的生長曲線及染色體數(shù)目;通過流式細胞儀檢測細胞周期發(fā)現(xiàn),隨著匯合程度的增加,G0/G1期細胞所占的比例也升高。40%～50%與80%～90%、95%～100%匯合程度的細胞間G0/G1期和S期所占比例顯著差異;80%～90%與95%～100%兩匯合程度的細胞間G0/G1期和S期所占比例差異不顯著。對相同匯合度（80%～90%）的細胞進行0.5%血清饑餓處理組與未處理組比較,饑餓處理組G0/G1期細胞比例略高,但差異不顯著。95%～100%匯合組G0/G1期細胞比例稍高于饑餓組,但差異不顯著。所以在核移植中,供體細胞不必進行常規(guī)血清饑餓處理,當細胞達到80%～90%以上匯合時,單就G0/G1期細胞比例而言,血清饑餓處理完全可以由接觸抑制來代替。3.在基礎成熟液中,添加20%（V/V）發(fā)情當天、3天牛血清（OCSD0、OCSD3）能顯著提高牛卵母細胞的成熟率;添加20%（V/V）發(fā)情第5天、7天牛血清（OCSD5、OCSD7）與對照組（添加20%FBS）相比無顯著差異。添加30ng/mL EGF、50μg/mL insulin及50μg/mL insulin+30ng/mL EGF,與對照組相比,30ng/mL EGF組極顯著地提高了牛卵母細胞成熟率,而添加50μg/mL insulin及50μg/mL insulin+30ng/mL EGF組牛卵母細胞成熟率稍低于對照組,但差異不顯著。添加0.1μg/mL孕酮,成熟率顯著降低;添加有溶血和無溶血的OCSD3,無溶血組顯著提高牛卵母細胞成熟率,溶血組則顯著降低。4.用離子酶素聯(lián)合6D激活牛卵母細胞,卵裂率和囊胚率分別為79%和20%以上,可以滿足體細胞核移植的需要。用7%乙醇、7%乙醇聯(lián)合6D及用離子酶素聯(lián)合6D激活兔卵母細胞其卵裂率分別為75.6%、76.3%、77.8%;囊胚率分別為18.4%、14.3%、18.6%,差異均不顯著,三種方法都可有效地激活兔卵母細胞。5.本研究比較了在成熟液中添加發(fā)情當天的牛血清（OCSD0）、在胚胎培養(yǎng)液中添加EGF、insulin及孕酮、不同時期的發(fā)情牛血清對孤雌激活胚胎發(fā)育潛力的影響。結(jié)果顯示,成熟培養(yǎng)液中添加OCSD0與FBS組相比,囊胚發(fā)育率無顯著差異;培養(yǎng)液中添加EGF、insulin、孕酮與對照組相比,卵裂率和囊胚發(fā)育率均有顯著提高。其中,添加孕酮組,卵裂率最高,為87.9%;添加insulin組,囊胚發(fā)育率最高,為61.3%。培養(yǎng)液中添加不同時期發(fā)情牛血清與對照組相比,卵裂率無顯著差異,發(fā)情當天、3天、5天、7天牛血清組囊胚發(fā)育率顯著高于對照組,7天組為最高,為65.8%。6.分別以處于40%～50%匯合、80%～90%匯合、95%～100%匯合及經(jīng)0.5%的血清饑餓3天處理的東北虎皮膚成纖維細胞（80%～90%匯合）為供體細胞時,四組的重組胚卵裂率、囊胚發(fā)育率均無顯著差異, 95%～100%匯合組,卵裂率和囊胚發(fā)育率均稍高于其它各組。在比較注核與重組胚激活的不同時間間隔（0.5h、1h、2h、3h）對重構(gòu)胚卵裂和囊胚發(fā)育的影響時,結(jié)果發(fā)現(xiàn),重組胚激活前供體細胞在受體卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)停留的時間越長,重組胚的卵裂率越高;而囊胚發(fā)育率則均無顯著差異,但隨著間隔時間的延長,囊胚發(fā)育率有增加的趨勢。表明在核移植時,延長核質(zhì)相互作用時間,可以提高重組胚的卵裂率和囊胚發(fā)育率。7.用培養(yǎng)的東北虎皮膚成纖維細胞以每次1×106細胞/只的量腹腔注射免疫小鼠,每2周1次,共免疫2次。4周后尾靜脈采血分離血清,測定效價為1:256。早期傳代東北虎成纖維細胞及對照牛成纖維細胞以免疫血清為一抗,熒光標記兔抗鼠IgG為二抗,原位染色,熒光顯微鏡觀察,結(jié)果顯示免疫血清對東北虎皮膚成纖維細胞具有特異性,而牛成纖維細胞無特異性反應。東北虎成纖維細胞免疫小鼠血清作為一抗,熒光標記兔抗鼠IgG為二抗,進行熒光染色,檢測不同時期重組克隆胚表面抗原,結(jié)果顯示,桑葚胚之前著色不明顯,桑葚胚以后著色明顯,而對照成熟牛卵母細胞則染色不明顯,說明供體東北虎體細胞表面抗原在重組胚細胞中表達,重組胚中遺傳物質(zhì)來自供體東北虎皮膚成纖維細胞。8.采用生物軟件DNASTAR分析牛東北虎線粒體基因組,利用PCR反應延伸過程中,3′端堿基不配對,PCR反應不能啟動的PCR原理,以?；⒕€粒體基因組中堿基差異較大的位點作為引物的3′端來設計引物,進行PCR擴增,從而分析牛-虎異種克隆胚中線粒體的變化情況。結(jié)果表明,重構(gòu)胚發(fā)育到囊胚時期,來自東北虎的線粒體已經(jīng)檢測不到。
馬學海[9]（2007）在《牛體外成熟卵母細胞與性控精子體外受精的研究》文中研究指明本文研究牛卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)、與性別分離精子體外受精及早期胚胎體外培養(yǎng)程序的優(yōu)化,目的是為建立一套完善的牛性控胚胎體外生產(chǎn)體系,從而為該技術走出實驗室,在實踐中得以應用提供理論依據(jù)。同時為核移植、轉(zhuǎn)基因等胚胎工程后技術的應用奠定基礎。試驗一研究牛卵母細胞體外成熟的培養(yǎng)方法,以提高牛卵母細胞的體外成熟率。通過添加不同激素、以及不同血清,比較不同濃度的激素水平,不同血清及其濃度對牛卵母細胞體外成熟的影響。以期找出在本實驗室條件下,牛卵母細胞IVM所需要添加的適宜的激素濃度,血清種類及濃度。為進一步做IVF、IVC打下基礎。結(jié)果表明,選用胞質(zhì)均一致密,外圍至少有3層以上卵丘細胞包裹的A級卵母細胞。添加10μg/mlFSH、10μg/mlLH、1μg/mlE2,成熟培養(yǎng)22～24h可顯著提高卵母細胞體外培養(yǎng)的成熟率;與添加5%血清相比,添加10%的血清成熟效果更好,單獨添加10%發(fā)情牛血清（OCS）能起到與10%胎牛血清（FCS）在外源激素參與下聯(lián)合培養(yǎng)同等或者更好的效果。說明在牛細胞培養(yǎng)液中只添加10%OCS而不使用激素是完全可行的,在相同效果的前提下可大大降低成本。試驗二研究不同精子獲能添加物、不同精子密度、不同精子獲能液對性別分離精子IVF的影響。目的是優(yōu)化性控精液體外受精條件,篩選出簡便、高效的獲能處理方法。為提高體外成熟卵母細胞的受精質(zhì)量和數(shù)量提供理論基礎。研究表明受精液中同時添加一定濃度的肝素（l0μg/ml）與咖啡因（5mM）,能較好地促進牛分離精子體外獲能與受精;精子密度在1.0×106個/ml左右比較適合牛分離精子IVF;用BO液和TALP液對牛性控精子進行獲能和受精處理,其受精效果差異不顯著（P>0.05）,但BO液對早期胚胎的發(fā)育影響較小。試驗三通過優(yōu)化培養(yǎng)程序,篩選培養(yǎng)液,以建立適合牛胚胎體外發(fā)育的培養(yǎng)體系。通過對共培養(yǎng)體系、不同早期胚胎培養(yǎng)液及分離精子和未分離精子IVF的研究表明,在牛早期胚胎培養(yǎng)過程中,在共培養(yǎng)條件下基礎培養(yǎng)液選用配制簡單的SOF或CR1,添加一定量的BSA,可獲得較高的囊胚發(fā)育率和卵裂率。顆粒細胞與輸卵管上皮細胞間對胚胎的發(fā)育并沒有顯著差異（P>0.05）,但兩組均顯著優(yōu)于非共培養(yǎng)體系（P<0.05）。分離精子和未分離精子在共培養(yǎng)條件下的體外受精效果表明,兩者的卵裂率和囊胚率差異不顯著（P>0.05）,但未分離精子體外受精效果稍好于分離精子。
劉賽[10]（2007）在《牛體外受精卵體外發(fā)育影響因素的研究》文中研究說明本研究的目的是在已有的基礎上對牛卵母細胞體外成熟、體外受精及早期胚胎體外發(fā)育作進一步研究,重點進行了血清的添加濃度和牛胎兒睪丸支持細胞（Sertoli cells, SCs）對牛體外受精卵體外發(fā)育的影響的研究。旨在提高牛體外受精卵的卵裂率和囊胚發(fā)育率。本試驗從以下幾個方面進行研究:1.為了探討在牛受精卵培養(yǎng)液中添加血清替代品對體外受精卵發(fā)育的影響,確定血清在合成輸卵管液（Synthetic oviduct fluid, SOF）中合適的添加濃度及添加時期,以篩選優(yōu)良的牛體外受精卵體外培養(yǎng)體系。在SOF液中分別添加10%新生牛血清（New born bovine serum, NBS）、8 g/L牛血清白蛋白（Bovine serum albumin, BSA）和1 g/L聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol, PVA）進行牛體外受精卵的全程培養(yǎng)。結(jié)果顯示,SOF培養(yǎng)液中添加PVA,BSA替代血清時卵裂率和囊胚發(fā)育率都明顯下降,說明PVA或BSA不能達到血清的效果。在受精卵培養(yǎng)的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培養(yǎng)液時,卵裂率（66.3%）和囊胚發(fā)育率（30.9%）與SOF+10%NBS全程培養(yǎng)組（58.7%, 29.3%）差異不顯著（P>0.05）。說明體外培養(yǎng)時在SOF培養(yǎng)液中添加一定濃度的血清以及改變血清的添加方式,不會影響牛體外受精卵體外發(fā)育效果。比較發(fā)情第7天的母牛血清（7th day oestrus cow serum, OCS）與NBS的效果,結(jié)果SOF+10%NBS組與SOF+10%OCS組的卵裂率、囊胚率差異不顯著,發(fā)情牛血清可替代NBS用于牛早期胚胎的體外培養(yǎng)。2.研究體外不同階段牛胎兒睪丸SCs對牛受精卵體外發(fā)育的影響。從屠宰場采集5～7月齡牛胎兒睪丸,經(jīng)原代和傳代培養(yǎng)制備牛胎兒睪丸SCs單層,對比原代與傳代胎牛睪丸SCs飼養(yǎng)層與牛體外受精卵共培養(yǎng)時受精卵的發(fā)育情況;分別以4×104 /mL與2×104 /mL兩個密度接種傳代胎牛睪丸支持細胞與牛受精卵共培養(yǎng),并設對照組。牛體外受精卵與傳代牛胎兒睪丸SCs共培養(yǎng)組,卵裂率（79.3%）高于原代SCs組（69.2%）,差異不顯著（P>0.05）;囊胚發(fā)育率（41.3%）極顯著高于原代SCs組（16.7%）（P<0.01）。傳代2.0×104 /mL密度SCs共培養(yǎng)組卵裂率與傳代4.0×104 /mL密度SCs共培養(yǎng)組的卵裂率差異不顯著,胚胎發(fā)育率隨著飼養(yǎng)層的密度增大明顯下降。結(jié)論為,傳代牛胎兒睪丸SCs制備的飼養(yǎng)層能有效促進牛體外受精卵的體外發(fā)育,提高囊胚質(zhì)量;傳代接種的牛胎兒睪丸SCs飼養(yǎng)層密度過大,將嚴重影響牛體外受精卵的發(fā)育。
二、添加不同發(fā)情時期山羊血清對牛胚胎體外發(fā)育的影響（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、添加不同發(fā)情時期山羊血清對牛胚胎體外發(fā)育的影響（論文提綱范文）
（1）綿羊ICSI胚胎培養(yǎng)液中發(fā)情綿羊血清濃度優(yōu)化研究（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要試劑 |
| 1.1.2 試劑配制 |
| 1.1.3 主要儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 發(fā)情綿羊血清的制備 |
| 1.2.2 綿羊精液采集 |
| 1.2.3 顯微操作針的制作 |
| 1.2.4 綿羊卵巢采集 |
| 1.2.5 卵丘-卵母細胞復合體的采集與篩選 |
| 1.2.6 COCs的培養(yǎng) |
| 1.2.7 胞漿內(nèi)單精子注射并激活處理 |
| 1.2.8 胚胎體外培養(yǎng) |
| 1.2.9 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（2）牦牛冷暖季卵巢差異分析及添加褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟、胚胎體外發(fā)育的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 牛卵母細胞體外成熟及胚胎體外培養(yǎng)研究進展 |
| 1.1 卵泡分化對卵母細胞體外成熟的影響 |
| 1.1.1 卵母細胞發(fā)育能力的獲得 |
| 1.1.2 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和卵母細胞發(fā)育能力 |
| 1.1.3 卵泡細胞對染色質(zhì)重塑過程的貢獻 |
| 1.2 褪黑素調(diào)控卵母細胞和早期胚胎發(fā)育的機制研究進展 |
| 1.2.1 生殖中的自由基(ROS/RNS) |
| 1.2.2 氧化應激 |
| 1.2.3 氮化應激 |
| 1.2.4 褪黑素和ROS/RNS |
| 1.2.5 褪黑素調(diào)節(jié)合子和體外生產(chǎn)的氧化應激 |
| 1.2.6 褪黑素對抗硝化應激的潛在應用 |
| 1.3 牛胚胎體外培養(yǎng)基因表達及表觀遺傳分析研究進展 |
| 1.3.1 牛胚胎體外生產(chǎn) |
| 1.3.2 輸卵管對胚胎發(fā)育和質(zhì)量的影響 |
| 1.3.3 體外胚胎質(zhì)量評價 |
| 1.3.4 基因表達分析評價移植胚胎質(zhì)量 |
| 1.3.5 早期環(huán)境對胚胎表型的重要性 |
| 1.4 牦牛胚胎體外培養(yǎng)研究進展 |
| 1.5 本研究的目的意義 |
| 第二章 牦牛卵巢活動的關鍵信號調(diào)控網(wǎng)絡分析 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 卵巢采集 |
| 2.1.2 切片制作與HE染色 |
| 2.1.3 免疫組化檢測牦牛卵巢組織中VASA定位 |
| 2.1.4 RNA提取及轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 2.1.5 qRT-PCR驗證分析 |
| 2.1.6 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 母牦牛季節(jié)性排卵特征 |
| 2.2.2 冷季牦牛卵巢從竇狀卵泡向成熟卵泡發(fā)育受阻 |
| 2.2.3 冷季牦牛卵巢竇狀卵泡內(nèi)顆粒細胞功能紊亂 |
| 2.2.4 RNA-Seq數(shù)據(jù)分析 |
| 2.2.5 牦牛卵巢基因表達的季節(jié)性影響 |
| 2.2.6 KEGG通路富集分析 |
| 2.2.7 暖季牦牛卵巢和冷季牦牛卵巢差異基因表達量驗證 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 第三章 褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟及體外受精胚胎的影響 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 卵母細胞的采集與體外成熟 |
| 3.1.2 體外受精與胚胎培養(yǎng) |
| 3.1.3 試驗設計 |
| 3.1.4 卵母細胞內(nèi)ROS、GSH和 DNA損傷的測定 |
| 3.1.5 卵母細胞凋亡水平的測定 |
| 3.1.6 卵母細胞線粒體膜電位的測定 |
| 3.1.7 胚胎內(nèi)ROS和 GSH的測定 |
| 3.1.8 胚胎免疫熒光染色 |
| 3.1.9 胚胎凋亡細胞TUNEL染色分析 |
| 3.1.10 囊胚中相關基因qRT-PCR分析 |
| 3.1.11 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟后胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.2.2 褪黑素對牦牛IVF胚胎發(fā)育質(zhì)量的影響 |
| 3.2.3 培養(yǎng)液中添加褪黑素(10~(-9)M)對牦牛IVM和 IVF胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 結(jié)論 |
| 第四章 褪黑素對牦牛胚胎體外發(fā)育中H2O2 誘導氧化損傷的保護機制研究 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 動物及試劑 |
| 4.1.2 卵母細胞采集與體外成熟 |
| 4.1.3 體外受精和胚胎培養(yǎng) |
| 4.1.4 褪黑素和H2O2 處理 |
| 4.1.5 胚胎凋亡細胞TUNEL染色分析 |
| 4.1.6 胚胎免疫熒光染色 |
| 4.1.7 Caspase-3 活性檢測 |
| 4.1.8 實時熒光定量PCR |
| 4.1.9 細胞內(nèi)ROS的測定 |
| 4.1.10 細胞內(nèi)ATP含量測定 |
| 4.1.11 MMP檢測 |
| 4.1.12 氧化劑及抗氧化能力測定 |
| 4.1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 褪黑素對牦牛胚胎著床前發(fā)育過程中H_2O_2誘導的氧化應激的具有保護作用 |
| 4.2.2 褪黑素對暴露于H2O2 條件下的牦牛受精卵-囊胚發(fā)育階段的胚胎保護作用. |
| 4.2.3 褪黑素降低牦牛受精卵中H2O2 誘導的細胞內(nèi)ROS水平 |
| 4.2.4 褪黑素能抑制受精卵中H2O2 誘導的線粒體功能障礙 |
| 4.2.5 褪黑素保護著床前胚胎免受抗氧化酶的氧化損傷 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 結(jié)論 |
| 第五章 褪黑素對牦牛體細胞核移植胚胎發(fā)育的影響 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 卵母細胞選擇和體外成熟 |
| 5.1.2 體外受精與胚胎培養(yǎng) |
| 5.1.3 供體細胞的準備與牦牛SCNT |
| 5.1.4 胚胎免疫熒光染色 |
| 5.1.5 細胞內(nèi)ROS測定 |
| 5.1.6 胚胎凋亡細胞TUNEL染色分析 |
| 5.1.7 褪黑素對牦牛SCNT胚胎基因表達的影響 |
| 5.1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.2.1 褪黑素對牦牛SCNT胚胎的發(fā)育能力的影響 |
| 5.2.2 褪黑素對牦牛SCNT胚胎質(zhì)量的影響 |
| 5.2.3 褪黑素對牦牛SCNT胚胎囊胚凋亡率的影響 |
| 5.2.4 褪黑素對牦牛SCNT胚胎ROS水平的影響 |
| 5.2.5 褪黑素對牦牛SCNT胚胎表觀遺產(chǎn)修飾的影響 |
| 5.2.6 褪黑素對牦牛SCNT胚胎相關基因表達的影響 |
| 5.3 討論 |
| 5.4 結(jié)論 |
| 第六章 褪黑素處理供體細胞對牦牛體細胞核移植胚胎發(fā)育的影響 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 卵母細胞選擇和體外成熟 |
| 6.1.2 體外受精與胚胎培養(yǎng) |
| 6.1.3 供體細胞的準備與體細胞核移植 |
| 6.1.4 褪黑素對供體細胞表觀修飾的影響 |
| 6.1.5 供體細胞TUNEL染色分析 |
| 6.1.6 褪黑素對供體細胞相關基因的表達分析 |
| 6.1.7 胚胎免疫熒光染色 |
| 6.1.8 細胞內(nèi)ROS測定 |
| 6.1.9 胚胎凋亡細胞TUNEL染色分析 |
| 6.1.10 褪黑素對牦牛SCNT胚胎基因表達的影響 |
| 6.1.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 6.2 結(jié)果 |
| 6.2.1 褪黑素對牦牛供體細胞增殖和凋亡的影響 |
| 6.2.2 褪黑素處理對供體細胞表觀遺傳的影響 |
| 6.2.3 褪黑素處理對供體細胞發(fā)育相關功能基因表達的影響 |
| 6.2.4 褪黑素處理對牦牛SCNT胚胎發(fā)育的影響 |
| 6.2.5 褪黑素對牦牛SCNT胚胎質(zhì)量的影響 |
| 6.2.6 褪黑素對牦牛SCNT囊胚凋亡率的影響 |
| 6.2.7 褪黑素對牦牛SCNT胚胎ROS水平的影響 |
| 6.2.8 褪黑素對牦牛SCNT胚胎表觀遺產(chǎn)修飾的影響 |
| 6.2.9 褪黑素對牦牛SCNT胚胎相關基因表達的影響 |
| 6.3 討論 |
| 6.4 結(jié)論 |
| 全文結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點 |
| 不足之處和進一步研究計劃 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 縮略詞 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
| 攻讀博士學位期間參與的科研項目及發(fā)表論文 |
（3）梅花鹿、水貂、藍狐及貉—牛異種體細胞核移植技術研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 梅花鹿的繁殖特點及繁育生物技術 |
| 1.1.1 梅花鹿的繁殖特點 |
| 1.1.2 梅花鹿的繁育生物技術 |
| 1.2 水貂、藍狐及貉的經(jīng)濟價值與繁育生物技術 |
| 1.2.1 水貂的經(jīng)濟價值與繁育生物技術 |
| 1.2.2 藍狐和貉的經(jīng)濟價值與繁育生物技術 |
| 1.3 異種體細胞核移植技術研究進展 |
| 1.3.1 ISCNT 研究歷史 |
| 1.3.2 ISCNT 關鍵技術環(huán)節(jié) |
| 1.3.3 ISCNT 的研究意義 |
| 1.3.4 ISCNT 研究存在的問題 |
| 1.4 本研究的內(nèi)容、目的及意義 |
| 1.4.1 梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞培養(yǎng)及冷凍保存 |
| 1.4.2 牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng)條件的優(yōu)化 |
| 1.4.3 梅花鹿-牛 ISCNT 技術方法的研究 |
| 1.4.4 水貂、藍狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制備 |
| 第二章 供核細胞培養(yǎng)及冷凍保存 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.3 試驗設計 |
| 2.1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞的生長特性 |
| 2.2.3 DMSO 和甘油對不同供核細胞的冷凍保護效果 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞的培養(yǎng) |
| 2.3.2 梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞的純化 |
| 2.3.3 梅花鹿、水貂、藍狐和貉耳皮膚成纖維細胞的冷凍保存 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 牛卵母細胞體外成熟體系的優(yōu)化 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 測定指標與評定方法 |
| 3.1.4 統(tǒng)計分析 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 不同激素組合對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.2.2 BCB 染色優(yōu)選牛卵母細胞體外成熟 |
| 3.2.3 EGF 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 激素對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3.2 BCB 染色對牛卵母細胞體外成熟的作用 |
| 3.3.3 EGF 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 梅花鹿-牛 ISCNT 技術研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.1.4 統(tǒng)計分析 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 DEME 誘導牛卵母細胞顯核的研究 |
| 4.2.2 梅花鹿-牛 ISCNT 顯微操作的研究 |
| 4.2.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎體外培養(yǎng)的研究 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 DEME 處理對牛卵母細胞顯核的影響 |
| 4.3.2 梅花鹿-牛 ISCNT 顯微操作 |
| 4.3.3 梅花鹿-牛 ISCNT 胚胎體外培養(yǎng) |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 水貂、藍狐及貉-牛 ISCNT 胚胎的制備 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.3 試驗設計 |
| 5.1.4 統(tǒng)計分析 |
| 5.2 結(jié)果與分析 |
| 5.2.1 供核細胞對全細胞胞質(zhì)內(nèi)注射制備 ISCNT 胚胎的影響 |
| 5.2.2 共培養(yǎng)對毛皮動物-牛 ISCNT 胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.3 討論 |
| 5.3.1 供核細胞對全細胞胞質(zhì)內(nèi)注射制備 ISCNT 胚胎的影響 |
| 5.3.2 共培養(yǎng)對水貂、藍狐及貉-牛 ISCNT 胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.4 小結(jié) |
| 第六章 全文結(jié)論 |
| 6.1 結(jié)論 |
| 6.2 研究的創(chuàng)新點 |
| 6.3 后續(xù)研究工作 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（4）發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟及孤雌胚發(fā)育的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試劑 |
| 1.2 發(fā)情牛血清的制備 |
| 1.3 綿羊卵母細胞的采集 |
| 1.4 不同天數(shù)發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟的影響 |
| 1.5 不同濃度發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟的影響 |
| 1.6 不同天數(shù)發(fā)情牛血清對綿羊孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 1.7 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 不同天數(shù)發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.2 不同濃度發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.3 不同天數(shù)發(fā)情牛血清對綿羊孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 3 討論 |
（5）β-巰基乙醇和發(fā)情羊血清對牛顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材 料 |
| 1.1.1 試驗試劑 |
| 1.1.2 卵 |
| 1.1.3 發(fā)情羊血清 (ESS) |
| 1.1.4 顆粒細胞 |
| 1.2 方 法 |
| 1.2.1 顆粒細胞的計數(shù)和存活率評定 |
| 1.2.2 不同濃度BME對顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響 |
| 1.2.3 不同類型血清對顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響 |
| 1.2.4 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 BME對顆粒細胞生長的影響 |
| 2.2 不同類型血清對顆粒細胞生長的影響 |
| 3 結(jié)論與討論 |
（6）黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化及體細胞核移植胚構(gòu)建初探（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文獻綜述 |
| 第一章 哺乳動物卵母細胞體外成熟和早期胚胎體外培養(yǎng)的研究進展 |
| 1.1 哺乳動物卵母細胞體外成熟的研究進展 |
| 1.1.1 卵泡卵母細胞的獲得 |
| 1.1.2 卵母細胞成熟的機理 |
| 1.1.3 卵母細胞成熟的標志 |
| 1.1.4 卵母細胞成熟的判斷 |
| 1.1.5 卵母細胞體外成熟的影響因素 |
| 1.1.6 存在的問題和展望 |
| 1.2 哺乳動物早期胚胎體外培養(yǎng)的研究進展 |
| 1.2.1 研究概況 |
| 1.2.2 早期胚胎的發(fā)育阻滯 |
| 1.2.3 胚胎體外培養(yǎng)方法 |
| 1.2.4 影響早期胚胎體外發(fā)育的因素 |
| 1.2.5 存在的問題與展望 |
| 第二章 哺乳動物體細胞核移植研究進展 |
| 2.1 哺乳動物細胞核移植研究概況 |
| 2.1.1 胚胎細胞核移植 |
| 2.1.2 同種體細胞核移植 |
| 2.2 核移植的基本程序 |
| 2.2.1 供體細胞的選擇 |
| 2.2.2 受體細胞的選擇和去核 |
| 2.2.3 供體細胞與受體細胞重組 |
| 2.2.4 重組胚的激活 |
| 2.2.5 重組胚的體外培養(yǎng) |
| 2.3 哺乳動物核移植相關機理的研究 |
| 2.3.1 供體核與受體胞質(zhì)的相互作用 |
| 2.3.2 供體核的重編程 |
| 2.4 影響核移植效率的因素 |
| 2.4.1 細胞周期同步化對核移植胚的影響 |
| 2.4.2 卵母細胞成熟質(zhì)量對核移植胚的影響 |
| 2.4.3 供體細胞對核移植胚的影響 |
| 2.4.4 去核操作對核移植胚的影響 |
| 2.4.5 融合－激活方案對核移植胚的影響 |
| 2.5 體細胞核移植存在的問題 |
| 2.5.1 總效率低，成本高 |
| 2.5.2 流產(chǎn)率高，產(chǎn)仔率低 |
| 2.5.3 動物出生體重過大，死亡率高 |
| 實驗研究 |
| 第三章 黃牛卵母細胞的體外成熟培養(yǎng) |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 牛卵巢的采集 |
| 3.1.2 主要試劑 |
| 3.1.3 主要儀器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 牛卵丘-卵母細胞復合體的回收 |
| 3.2.2 卵母細胞的體外成熟培養(yǎng) |
| 3.2.3 成熟卵母細胞孤雌激活和孤雌胚的體外培養(yǎng) |
| 3.2.4 試驗設計 |
| 3.2.5 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.3.1 不同濃度HMG 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3.2 ITS 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3.3 卵巢保存溫度對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3.4 卵巢保存時間對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.3.5 卵巢所處性周期階段對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 不同濃度HMG 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4.2 ITS 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4.3 卵巢保存溫度對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4.4 卵巢保存時間對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.4.5 卵巢所處性周期階段對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 牛卵巢的采集 |
| 4.1.2 主要試劑 |
| 4.1.3 主要儀器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 卵丘卵母細胞復合體（COCs）的獲得與體外成熟培養(yǎng) |
| 4.2.2 成熟卵母細胞的孤雌激活和孤雌胚的體外培養(yǎng) |
| 4.2.3 試驗設計 |
| 4.2.4 數(shù)據(jù)處理 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.3.1 不同微滴體積對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.3.2 不同換液體積對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.3.3 血清滅活對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.3.4 不同添加血清時間對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.3.5 不同添加血清濃度對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.3.6 不同培養(yǎng)體系對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 不同微滴體積對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.4.2 不同換液體積對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.4.3 血清滅活對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.4.4 血清添加時間和添加濃度對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.4.5 不同培養(yǎng)體系對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 牛卵巢的采集 |
| 5.1.2 主要試劑 |
| 5.1.3 主要儀器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 卵丘卵母細胞復合體（COCs）的獲得與體外成熟培養(yǎng) |
| 5.2.2 顆粒細胞單層的制備 |
| 5.2.3 成熟卵母細胞的孤雌激活和孤雌胚的體外培養(yǎng) |
| 5.2.4 試驗設計 |
| 5.2.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.3.1 有無顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.3.2 不同類型的顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.3.3 不同種屬的顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.3.4 顆粒細胞單層體外培養(yǎng)時間對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.3.5 不同時間更換單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 有無顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 5.4.2 不同類型顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 5.4.3 不同種屬的顆粒細胞單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.4.4 顆粒細胞單層體外培養(yǎng)時間對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.4.5 不同時間更換單層對黃牛孤雌胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 黃牛體細胞核移植胚的構(gòu)建初探 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 牛卵巢的采集 |
| 6.1.2 主要試劑 |
| 6.1.3 主要儀器 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 卵丘卵母細胞復合體（COCs）的獲得與體外成熟培養(yǎng) |
| 6.2.2 卵母細胞的去核 |
| 6.2.3 供體細胞的準備 |
| 6.2.4 核移植胚的構(gòu)建 |
| 6.2.5 核移植胚的激活 |
| 6.2.6 核移植胚的體外培養(yǎng) |
| 6.2.7 試驗設計 |
| 6.2.8 數(shù)據(jù)處理 |
| 6.3 結(jié)果 |
| 6.3.1 不同成熟時間對核移植胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 6.3.2 不同核/質(zhì)作用時間對核移植胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 6.4 討論 |
| 6.4.1 不同體外成熟培養(yǎng)時間對核移植胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 6.4.2 不同核/質(zhì)作用時間對核移植胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 6.5 小結(jié) |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 縮略詞 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（7）牛體外受精技術體系的優(yōu)化研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 綜述部分 |
| 第一章 牛體外受精技術研究進展 |
| 1.1 體外受精研究概況 |
| 1.2 卵母細胞的體外成熟 |
| 1.2.1 卵母細胞體外成熟和調(diào)節(jié)機制 |
| 1.2.2 卵母細胞的獲取 |
| 1.2.3 卵母細胞成熟的特征 |
| 1.2.4 卵母細胞成熟的判定 |
| 1.2.5 影響卵母細胞成熟的因素 |
| 1.3 精子的體外獲能 |
| 1.3.1 精子獲能的機理 |
| 1.3.2 精子體外獲能的方法 |
| 1.3.3 獲能的基礎培養(yǎng)液 |
| 1.3.4 影響精子體外獲能的因素 |
| 1.4 體外受精 |
| 1.4.1 受精的機理 |
| 1.4.2 多精受精 |
| 1.4.3 影響IVF 的因素 |
| 1.5 受精卵的體外培養(yǎng) |
| 1.5.1 發(fā)育阻滯 |
| 1.5.2 發(fā)育阻滯的克服 |
| 1.5.3 早期胚胎體外培養(yǎng)的方法 |
| 1.5.4 影響胚胎體外培養(yǎng)的因素 |
| 1.6 存在問題及前景展望 |
| 試驗部分 |
| 第二章 血清及EGF 對牛卵巢卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 試驗方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 不同類型的血清或其替代物對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.2.2 EGF 對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 公牛、肝素及葡萄糖對牛體外受精的影響 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 試驗方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 來源于不同公牛的精子對IVF 的影響 |
| 3.2.2 肝素濃度對牛IVF 的影響 |
| 3.2.3 獲能液和受精液中添加葡萄糖對牛IVF 的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 不同濃度葡萄糖對牛體外受精胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 試驗方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 IVF 胚胎培養(yǎng)時即添加不同濃度的葡萄糖對其體外發(fā)育的影響 |
| 4.2.2 IVF 胚胎培養(yǎng)48 h 后添加不同濃度的葡萄糖對其體外發(fā)育的影響 |
| 4.2.3 在不同蛋白添加物條件下葡萄糖對IVF 胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 附圖 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（8）東北虎體細胞異種核移植（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 虎的現(xiàn)況和研究進展 |
| 1.1 虎的現(xiàn)況和瀕危原因 |
| 1.1.1 虎的現(xiàn)況 |
| 1.1.2 虎面臨的危機 |
| 1.2 虎的形態(tài)與分類 |
| 1.2.1 形態(tài)特征 |
| 1.2.2 分類 |
| 1.3 虎的生物學研究進展 |
| 1.3.1 雌性東北虎生殖系統(tǒng)形態(tài)及組織學 |
| 1.3.2 生理生化 |
| 1.3.3 遺傳 |
| 1.4 虎的生態(tài)學研究進展 |
| 1.4.1 分布與數(shù)量 |
| 1.4.2 棲息地 |
| 1.4.3 食性 |
| 1.4.4 行為 |
| 1.5 輔助繁殖技術研究進展 |
| 1.5.1 虎的人工采精技術 |
| 1.5.2 人工授精 |
| 1.5.3 試管內(nèi)授精及胚胎移植 |
| 1.5.4 精子的低溫儲藏 |
| 1.6 拯救措施 |
| 1.6.1 老虎面臨的危機 |
| 1.6.2 世界自然基金會近年來的工作 |
| 1.6.3 國際野生物保護學會近年來的工作 |
| 1.6.4 我國在虎保護方面所做的工作 |
| 1.6.5 展望 |
| 第二章 異種細胞核移植技術研究進展 |
| 2.1 異種細胞核移植技術研究現(xiàn)狀 |
| 2.2 影響種間核移植成功的因素 |
| 2.2.1 不同的雜交組合對雜合重構(gòu)胚胎的發(fā)育率的影響 |
| 2.2.2 胞質(zhì)的量和培養(yǎng)條件的影響 |
| 2.2.3 哺乳動物異種間的胚胎移植后的胚胎附植 |
| 2.3 異種核移植中線粒體的命運 |
| 2.4 異種細胞核移植技術的意義與應用前景 |
| 2.4.1 拯救瀕危動物 |
| 2.4.2 分離克隆人類胚胎干細胞 |
| 2.4.3 研究核質(zhì)互作 |
| 第三章 東北虎體細胞的培養(yǎng) |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試驗試劑及儀器 |
| 3.1.2 東北虎耳部皮塊的采取 |
| 3.1.3 東北虎皮膚成纖維細胞的分離與原代培養(yǎng) |
| 3.1.4 東北虎皮膚成纖維細胞培養(yǎng)液的篩選 |
| 3.1.5 不同血清濃度對東北虎皮膚成纖維細胞傳代細胞的影響 |
| 3.1.6 不同濃度的EGF 和胰島素對東北虎皮膚成纖維細胞傳代細胞的影響 |
| 3.1.7 細胞的凍存 |
| 3.1.8 冷凍細胞的解凍和培養(yǎng) |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 東北虎耳皮膚組織的原代培養(yǎng) |
| 3.2.2 培養(yǎng)液的篩選 |
| 3.2.3 不同的血清濃度對傳代細胞生長的影響 |
| 3.2.4 不同濃度的EGF 和胰島素對傳代細胞生長的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 細胞原代培養(yǎng) |
| 3.3.2 不同培養(yǎng)液對東北虎皮膚成纖維細胞生長的影響 |
| 3.3.3 不同血清濃度對東北虎皮膚成纖維細胞生長的影響 |
| 3.3.4 添加EGF、胰島素對傳代東北虎皮膚成纖維細胞生長的影響 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 東北虎體細胞生物學特性和染色體檢測 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 形態(tài)觀察 |
| 4.1.2 生長曲線 |
| 4.1.3 染色體檢測 |
| 4.1.4 流式細胞儀檢測細胞周期 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 形態(tài) |
| 4.2.2 生長曲線 |
| 4.2.3 染色體檢查 |
| 4.2.4 細胞周期 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 形態(tài)和生長曲線 |
| 4.3.2 染色體核型分析 |
| 4.3.3 細胞周期 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 受體卵母細胞的成熟 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 試驗材料及主要試劑儀器 |
| 5.1.2 操作液 |
| 5.1.3 方法 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.2.1 不同發(fā)情時期牛血清對牛卵母細胞成熟效果的影響 |
| 5.2.2 EGF、胰島素對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 5.2.3 OM 液中添加孕酮對牛卵母細胞體外成熟的影響 |
| 5.2.4 發(fā)情牛血清有無溶血對卵母細胞成熟的影響 |
| 5.3 討論 |
| 5.3.1 卵母細胞成熟在核移植中的作用 |
| 5.3.2 激素和生長因子在卵母細胞成熟中的作用 |
| 5.3.3 不同發(fā)情時期牛血清對牛卵母細胞成熟的影響 |
| 5.4 小結(jié) |
| 第六章 卵母細胞孤雌激活 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 試驗材料及主要試劑儀器 |
| 6.1.2 操作液 |
| 6.1.3 方法 |
| 6.2 結(jié)果 |
| 6.2.1 牛卵母細胞孤雌激活 |
| 6.2.2 不同激活方法對兔卵母細胞激活效果的影響 |
| 6.3 討論 |
| 6.3.1 卵母細胞的激活 |
| 6.3.2 乙醇激活 |
| 6.4 小結(jié) |
| 第七章 孤雌激活早期胚胎的體外培養(yǎng) |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 牛卵巢的采集卵母細胞的采集 |
| 7.1.2 牛卵巢卵母細胞的采集 |
| 7.1.3 牛卵丘-卵母細胞復合體的體外成熟 |
| 7.1.4 成熟卵母細胞的激活 |
| 7.1.5 孤雌激活牛胚胎的體外培養(yǎng) |
| 7.1.6 實驗設計 |
| 7.2 結(jié)果 |
| 7.2.1 OM 液中添加OCSD0 對早期孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 7.2.2 胚胎培養(yǎng)液中添加EGF、胰島素、孕酮對孤雌激活胚胎發(fā)育潛力的影響 |
| 7.2.3 添加不同時期的發(fā)情牛血清對孤雌激活胚胎發(fā)育潛力的影響 |
| 7.3 討論 |
| 7.3.1 在成熟液中添加OCSD0 對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 7.3.2 生長因子和激素對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 7.3.3 不同發(fā)情時期牛血清對牛孤雌胚胎的發(fā)育的影響 |
| 7.4 小結(jié) |
| 第八章 東北虎體細胞的異種核移植 |
| 8.1 材料和方法 |
| 8.1.1 牛卵巢的采集、運輸及卵母細胞的采集 |
| 8.1.2 牛卵母細胞的體外成熟培養(yǎng) |
| 8.1.3 卵母細胞的去核操作 |
| 8.1.4 供體細胞的準備 |
| 8.1.5 供體細胞的注射 |
| 8.1.6 重組胚的激活 |
| 8.1.7 克隆胚胎的體外培養(yǎng) |
| 8.2 結(jié)果 |
| 8.2.1 用不同方法處理的供體細胞對重組胚發(fā)育的影響 |
| 8.2.2 重構(gòu)胚激活前不同培養(yǎng)時間對克隆胚胎發(fā)育潛力的影響 |
| 8.3 討論 |
| 8.3.1 供體細胞不同處理方法對核移植結(jié)果的影響 |
| 8.3.2 核質(zhì)相互作用時間對核移植結(jié)果的影響 |
| 8.4 小結(jié) |
| 第九章 異質(zhì)克隆重組胚的鑒定 |
| 9.1 材料與方法 |
| 9.1.1 材料 |
| 9.1.2 方法 |
| 9.2 結(jié)果 |
| 9.2.1 一抗制備 |
| 9.2.2 核移胚間接熒光免疫 |
| 9.3 討論 |
| 9.4 小結(jié) |
| 第十章 異質(zhì)克隆胚線粒體DNA 的檢測 |
| 10.1 材料和方法 |
| 10.1.1 材料 |
| 10.1.2 工具酶及試劑 |
| 10.1.3 PCR 模板的制備 |
| 10.1.4 引物設計 |
| 10.1.5 引物特異性及不同階段線粒體的檢測 |
| 10.2 結(jié)果 |
| 10.2.1 引物特異性檢測 |
| 10.2.2 不同階段胚胎擴增結(jié)果 |
| 10.3 討論 |
| 10.4 小結(jié) |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（9）牛體外成熟卵母細胞與性控精子體外受精的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 一、哺乳動物體外受精技術研究進展 |
| 1 體外受精技術研究進展 |
| 1.1 國內(nèi)外體外受精技術的研究概況 |
| 1.2 性控精子體外受精研究概況 |
| 2 牛卵母細胞體外成熟培養(yǎng) |
| 2.1 卵母細胞體外成熟研究進展 |
| 2.2 卵母細胞的成熟過程及調(diào)節(jié)機制 |
| 2.3 卵母細胞體外成熟標志 |
| 2.4 卵母細胞的獲取 |
| 2.5 卵母細胞體外成熟的影響因素 |
| 3 分離精子的獲能和體外受精 |
| 3.1 精子分離的原理 |
| 3.2 分離精子的體外獲能（capacitation） |
| 4 早期胚胎體外培養(yǎng)的研究進展 |
| 4.1 胚胎早期發(fā)育阻滯(block of development) |
| 4.2 影響早期胚胎體外發(fā)育的因素 |
| 5 存在問題與前景 |
| 第二章 試驗研究 |
| 實驗一 牛卵母細胞體外成熟的研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 實驗設計 |
| 1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 促性腺激素對卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.2 雌二醇對卵母細胞體外成熟的影響 |
| 2.3 不同血清及其不同濃度對牛卵母細胞成熟的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 促性腺激素與卵母細胞體外成熟 |
| 3.2 雌二醇與卵母細胞體外成熟 |
| 3.3 不同血清及其不同濃度對牛卵母細胞成熟的影響 |
| 4 結(jié)論 |
| 實驗二 獲能液及精子密度對性控精子IVF 的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.3 試驗設計 |
| 1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 獲能液中肝素和咖啡因的添加對卵母細胞IVF 影響 |
| 2.2 不同精子密度對牛卵母細胞IVF 的影響 |
| 2.3 不同受精液對牛卵母細胞IVF 的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 獲能液中咖啡因和肝素的添加對卵母細胞IVF 影響 |
| 3.2 不同性控精子密度對牛卵母細胞IVF 的影響 |
| 3.3 不同受精液對牛性控精子IVF 的影響 |
| 4 結(jié)論 |
| 實驗三 牛性控IVF 胚胎體外培養(yǎng)條件的研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.3 試驗設計 |
| 1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 體細胞共培養(yǎng)對牛IVF 胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 2.2 不同受精卵培養(yǎng)液在共培養(yǎng)系統(tǒng)下對早期胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 2.3 分離和未分離精子在共培養(yǎng)條件下的受精和胚胎發(fā)育情況比較 |
| 3 討論 |
| 3.1 體細胞共培養(yǎng)對牛IVF 胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 3.2 不同受精卵培養(yǎng)液在共培養(yǎng)系統(tǒng)下對早期胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 3.3 分離和未分離精子的受精和胚胎發(fā)育情況的比較 |
| 4 結(jié)論 |
| 附表 |
| 附圖 |
| 致謝 |
| 石河子大學碩士研究生學位論文導師評閱表 |
（10）牛體外受精卵體外發(fā)育影響因素的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 綜述部分 |
| 第一章 牛體外受精研究進展 |
| 1.1 牛體外受精研究簡史 |
| 1.2 牛卵母細胞的采集 |
| 1.3 牛卵母細胞的體外成熟 |
| 1.4 精子的體外獲能 |
| 1.5 精卵共孵育 |
| 1.6 早期胚胎體外培養(yǎng)（IN VITRO CULTURE, IVC） |
| 試驗研究 |
| 第二章 培養(yǎng)液中血清或其替代物對牛體外受精卵體外發(fā)育的影響 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 牛體外受精卵與牛胎兒睪丸支持細胞體外共培養(yǎng)研究 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
四、添加不同發(fā)情時期山羊血清對牛胚胎體外發(fā)育的影響（論文參考文獻）
- [1]綿羊ICSI胚胎培養(yǎng)液中發(fā)情綿羊血清濃度優(yōu)化研究[J]. 黃飛,趙建清,陶維昆,劉波,朱文靚,方翟,高慶華. 塔里木大學學報, 2021(02)
- [2]牦牛冷暖季卵巢差異分析及添加褪黑素對牦牛卵母細胞體外成熟、胚胎體外發(fā)育的影響[D]. 彭巍. 西北農(nóng)林科技大學, 2019(08)
- [3]梅花鹿、水貂、藍狐及貉—牛異種體細胞核移植技術研究[D]. 王士勇. 中國農(nóng)業(yè)科學院, 2014(10)
- [4]發(fā)情牛血清對綿羊卵母細胞體外成熟及孤雌胚發(fā)育的影響[J]. 李佳佳,馬利兵,籍鳳宇,陳秀莉. 中國畜牧獸醫(yī), 2012(04)
- [5]β-巰基乙醇和發(fā)情羊血清對牛顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響[J]. 權(quán)富生,劉琴,王麗君,馬會明,王勇勝,張涌. 西北農(nóng)業(yè)學報, 2011(12)
- [6]黃牛孤雌胚胎體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化及體細胞核移植胚構(gòu)建初探[D]. 彭輝. 西北農(nóng)林科技大學, 2008(11)
- [7]牛體外受精技術體系的優(yōu)化研究[D]. 胡林勇. 西北農(nóng)林科技大學, 2008(11)
- [8]東北虎體細胞異種核移植[D]. 宋繼梅. 西北農(nóng)林科技大學, 2007(01)
- [9]牛體外成熟卵母細胞與性控精子體外受精的研究[D]. 馬學海. 石河子大學, 2007(06)
- [10]牛體外受精卵體外發(fā)育影響因素的研究[D]. 劉賽. 西北農(nóng)林科技大學, 2007(06)