一、Bar基因轉(zhuǎn)化草原1號苜蓿的研究（論文文獻綜述）
林杉[1]（2021）在《共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿的分子鑒定及ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿的耐鹽性評價》文中指出紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是主要的飼用牧草之一,因其具有高蛋白、低纖維、適口性好等特點,被譽為“牧草之王”。但紫花苜蓿的抗逆性較弱,在我國西北干旱半干旱地區(qū)及鹽漬環(huán)境中難以獲得高產(chǎn),將荒漠植物的優(yōu)異抗逆基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中有望改良其抗逆性。多漿旱生植物霸王（Zygophyllum xanthoxylum）兼具較強的抗旱耐鹽性,其液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運蛋白編碼基因ZxNHX1和H+-焦磷酸酶編碼基因ZxVP1-1是提高其抗逆性的關(guān)鍵基因。本課題組前期克隆了霸王ZxNHX1和ZxVP1-1,與抗除草劑基因Bar聚合轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中,獲得了共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿,但對其分子特征尚不清楚。此外,鹽漬環(huán)境中,除Na+外,Cl-在植物細胞質(zhì)中積累過多也會產(chǎn)生毒害作用,但目前大多數(shù)研究主要關(guān)注Na+,對Cl-的研究較少?；哪参锷辰妫≒ugionium cornutum）是一種典型的積氯植物,本課題組前期研究表明,液泡膜Cl-通道基因PcCLCg是沙芥耐氯的關(guān)鍵基因,將PcCLCg與ZxNHX1聚合共同轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中并獲得了抗性植株,但對其耐鹽性尚未進行評定。本研究采用PCR、RT-PCR、Southern Blot、Western Blot和ELISA對共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿的分子特征進行鑒定;并對共表達ZxNHX1-PcCLCg與超表達ZxNHX1紫花苜蓿的耐鹽性進行比較分析。取得如下主要結(jié)果:1.經(jīng)PCR鑒定,共篩選到8株共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿陽性株系。經(jīng)Southern Blot檢測,其中8號株系的目的基因ZxNHX1、ZxVP1-1和標(biāo)記基因Bar均為單一拷貝;Western Blot和ELISA檢測結(jié)果顯示,ZxNHX1和ZxVP1-1蛋白在8號株系整株水平上均能正常表達,葉片中蛋白表達量最高,莖和根中次之。表明外源目的基因ZxNHX1、ZxVP1-1已整合至紫花苜?；蚪M中并在蛋白水平表達。2.經(jīng)PCR鑒定得到16株共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿陽性株系,對其和超表達ZxNHX1紫花苜蓿陽性株系進行RT-PCR檢測,篩選得到ZxNHX1和PcCLCg基因表達量較高和較低的共表達株系各1株（NC-1和NC-2）,以及與NC-1中ZxNHX1表達量相對一致的超表達ZxNHX1株系1株（N-1）,用于后續(xù)耐鹽性分析。3.50和200 mmol/L NaCl處理10 d后,NC-1株系的株高及地上部鮮干重顯著高于N-1株系、空載體及野生型,表明ZxNHX1和PcCLCg的共表達能夠顯著增強紫花苜蓿的耐鹽能力。4.鹽處理下,各株系體內(nèi)的Na+和Cl-含量逐漸增加,K+含量逐漸降低。50mmol/L NaCl處理下,NC-1株系葉片和根中Na+含量分別顯著高于NC-2和N-1株系;NC-1株系葉片和莖中Cl-含量顯著高于N-1株系、空載體及野生型。200mmol/L NaCl處理下,NC-1株系葉片和莖中Na+含量顯著高于NC-2、N-1株系、空載體及野生型,NC-1和N-1株系根中Na+含量均顯著高于NC-2株系、空載體及野生型;NC-1株系葉片、莖和根中Cl-含量分別顯著高于NC-2和N-1株系。表明共表達ZxNHX1和PcCLCg增強了紫花苜蓿中Na+和Cl-的積累能力。5.對照條件下（0 mmol/L NaCl）,所有株系中Na+對葉片滲透勢的貢獻較低且無明顯差異。50和200 mmol/L NaCl處理下,NC-1株系中Na+對葉片滲透勢的貢獻分別顯著高于NC-2和N-1株系。與Na+一致,對照條件下所有株系中Cl-對葉片滲透勢的貢獻較低。50 mmol/L NaCl處理下,NC-1株系中Cl-對葉片滲透勢的貢獻分別顯著高于NC-2和N-1株系。200 mmol/L NaCl處理下,NC-1和NC-2株系中Cl-對葉片滲透勢的貢獻顯著高于空載體和野生型。表明共轉(zhuǎn)ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿通過積累Na+和Cl-有助于增加轉(zhuǎn)基因植株在鹽脅迫下的滲透調(diào)節(jié)能力。6.鹽處理下,N-1株系、空載體及野生型葉片相對質(zhì)膜透性隨著鹽濃度的增加而逐漸升高,NC-1和NC-2株系的葉片相對質(zhì)膜透性保持穩(wěn)定。200 mmol/L NaCl處理下,NC-1株系的葉片滲透勢顯著低于NC-2、N-1株系、空載體及野生型。
王曉龍[2]（2021）在《苜蓿抗寒性鑒定及耐寒種質(zhì)篩選》文中指出紫花苜蓿（Medicago sativa L.）高產(chǎn)優(yōu)質(zhì),適口性好,經(jīng)濟價值高,素有“牧草之王”的美譽。其生態(tài)適應(yīng)性廣,抗逆性較強,在我國西北、華北和東北地區(qū)有大面積栽培。本研究以國外引進和國內(nèi)審定登記的10個苜蓿品種為試驗材料,采用田間觀察測定和室內(nèi)分析測試相結(jié)合的方法,從種子、幼苗、田間植株直至根系入手對材料的形態(tài)特征、生物學(xué)特性、農(nóng)藝性狀、理化特性等進行了系統(tǒng)的鑒定評價,并利用轉(zhuǎn)錄組分析技術(shù)篩選研究與苜?？购韵嚓P(guān)的差異表達基因,旨在探究苜蓿耐寒響應(yīng)機理,為苜蓿耐寒品種選育、種質(zhì)創(chuàng)新及分子育種提供依據(jù)。主要結(jié)果如下:（1）低溫條件下,所有苜蓿材料種子發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、簡化活力指數(shù)、根長和芽長均呈下降趨勢,萌發(fā)高峰期隨溫度降低而后延。6℃的溫度條件為苜蓿材料萌發(fā)的臨界溫度,超過該溫度全部品種發(fā)芽率均高于50%;低于該溫度發(fā)芽率不及或部分達到50%。品種間簡化活力指數(shù)、根長和發(fā)芽率差異顯著,且與萌發(fā)時的溫度條件相關(guān),可以作為評價指標(biāo)鑒定萌發(fā)期苜蓿的抗寒性。依據(jù)這幾個指標(biāo)的表現(xiàn),經(jīng)隸屬函數(shù)篩選分析初步判定龍牧806、龍牧801、草原3號、肇東和公農(nóng)2號苜蓿的耐寒能力較強。（2）苜蓿材料中脯氨酸（Pro）、可溶性蛋白（SP）、可溶性糖（SS）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）活性,隨低溫處理時間延長呈先升后降之勢,丙二醛（MDA）含量和電導(dǎo)率（EC）呈升高趨勢,但不同品種之間差異明顯。低溫處理6h后,品種龍牧801的Pro、SP和SS含量均最高,而草原3號和公農(nóng)2號的SOD、POD活性最高;處理8h后,龍牧801和龍牧806的MDA含量及EC最低,龍牧801的SP和SS含量最高,而龍牧806和肇東苜蓿CAT、POD活性最高。據(jù)此可將全部材料按抗寒性等級分類,龍牧801、龍牧806和肇東苜蓿屬于強抗寒性品種,草原3號、公農(nóng)2號為較強抗性品種,敖漢、中苜1號、皇后苜蓿抗寒性較弱,420、賽迪苜蓿抗寒性較差。（3）品種越冬率與中性洗滌纖維、飼草產(chǎn)量之間存在極顯著正相關(guān)（P<0.01）,與光合速率、葉片水汽壓、可變熒光（Fv）、光化學(xué)淬滅系數(shù)（q P）、光化學(xué)效率（Fv/Fm）、潛在光化學(xué)效率（Fv/Fo）呈顯著正相關(guān)（P<0.05）;越冬率與株高、節(jié)間長、相對飼用價值之間存在顯著負相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。品種草原3號、肇東、龍牧806、龍牧801和中苜1號苜蓿飼草產(chǎn)量較高,龍牧806和中苜1號苜蓿飼用品質(zhì)優(yōu)良,適宜在呼和浩特地區(qū)種植。（4）冬季盡管苜蓿停止生長,但根系內(nèi)部的生理生化活動一直延續(xù)。隨地溫降低,根系內(nèi)Pro、SS、SP、MDA、脫落酸含量和SOD、POD、CAT活性均普遍升高,至最冷的1月（氣溫、地溫均最低）達到峰值,此后隨溫度回升有所下降;而EC也呈先升后降的變化趨勢。秋眠等級越低、越冬率越高的品種,變化趨勢越明顯,且其根系內(nèi)各種內(nèi)含物的含量與活性在最冷時期顯著高于其他品種。簡言之,最冷時期根系內(nèi)含物含量與活性的測定分析是甄別苜蓿品種抗寒性強弱的有效手段,依此排列的品種抗寒強弱順序依次為:龍牧801>龍牧806>肇東>草原3號>公農(nóng)2號>中苜1號>敖漢>皇后>420>賽迪。苜蓿越冬率與根頸大小及位置密切相關(guān),根頸越大、入土越深、則翌年苜蓿越冬率越高。（5）從苜蓿根頸中共獲得4442個差異表達基因（DEGs）,并鑒定出7個低溫響應(yīng)轉(zhuǎn)錄基因和關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路DEGs,分別從屬于植物激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、過氧酶體通路和轉(zhuǎn)錄因子家族（MYB、B3、AP2/ERF、WRKY）,且主要富集在細胞部分（cell part）、細胞膜部分（membrane part）、對刺激反應(yīng)（response to stimulus）和催化活性（catalytic activity）等細胞生理、代謝過程。7個DEGs經(jīng)實時熒光定量（q RT-PCR）得出的結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）結(jié)果趨于一致。論文研究探索出苜蓿種子萌發(fā)的臨界溫度,明確了根頸大小、入土位置與苜蓿越冬相關(guān),提出幼苗期和越冬期苜蓿葉片和根系內(nèi)各種內(nèi)含物含量與活性的變化可以作為品種抗寒性鑒定的重要指標(biāo)。今后將進一步完善并優(yōu)化苜?？购澡b定評價體系,結(jié)合代謝組學(xué)或蛋白組學(xué),深入揭示苜?？购憫?yīng)機理。
馬倩[3]（2021）在《利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯紫花苜蓿CCoAOMT及ALS基因的研究》文中研究指明紫花苜蓿（Medicago sativa）是全世界廣泛栽培的優(yōu)質(zhì)牧草,在我國國民經(jīng)濟中占有重要位置。高木質(zhì)素含量與雜草是制約其產(chǎn)業(yè)持續(xù)高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)發(fā)展的關(guān)鍵因素。目前,商業(yè)化的低木質(zhì)素和抗除草劑紫花苜蓿品種匱乏,精準(zhǔn)的分子設(shè)計育種有助于快速有效的創(chuàng)制紫花苜蓿新種質(zhì)。本研究首次在全基因組水平分析鑒定了紫花苜蓿木質(zhì)素合成途徑中的關(guān)鍵酶咖啡酰輔酶-A-氧甲基轉(zhuǎn)移酶（CCoAOMT）基因家族和除草劑相關(guān)乙酰乳酸合成酶（ALS）基因家族的成員,分析了其基因表達;利用CRISPR/Cas9技術(shù)靶向編輯MsCCoAOMT和MsALS,初步建立了紫花苜蓿基因編輯體系,獲得了靶基因編輯的材料。為降低紫花苜蓿木質(zhì)素含量以改良苜蓿品質(zhì)和培育抗除草劑紫花苜蓿種質(zhì)建立了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.在全基因組水平鑒定了紫花苜蓿CCoAOMT家族。共鑒定出44個MsCCoAOMT家族基因。系統(tǒng)進化樹分析表明其分布在5個進化枝,與蒺藜苜蓿、擬南芥、水稻的CCoAOMT基因有很高相似性。q RT-PCR分析表明MsCCoAOMT家族11個基因在紫花苜蓿幼苗期、營養(yǎng)期莖和葉以及花期莖、葉和花中均有表達,但存在明顯的組織特異性。2.在全基因組水平鑒定了紫花苜蓿ALS家族。共鑒定到31個MsALS基因,分布于紫花苜蓿的19條染色體上,其中有6對串聯(lián)重復(fù)基因。除MsALS23、MsALS29、MsALS30和MsALS31外所有MsALS蛋白均存在TPP enzyme N、TPP enzyme M和TPP enzyme C 3個ALS家族典型保守結(jié)構(gòu)域。在進化樹上,MsALS2、MsALS5、MsALS9、MsALS12和MsALS13與擬南芥ALS（AT3g48560.1）基因親緣關(guān)系較近。q RT-PCR分析表明,MsALS5在花期莖中相對表達量最高,MsALS12在幼苗期葉中相對表達量高。3.初步獲得了MsCCoAOMT基因編輯的突變植株。在MsCCoAOMTs基因保守區(qū)設(shè)計了2個sg RNA,構(gòu)建了能夠同時靶向敲除6個MsCCoAOMTs（MsCCoAOMT6/12/13/14/15/18）基因的CRISPR/Cas9表達載體。共獲得427株轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿植株,陽性率為70.7%,篩選到三株在靶位點有堿基插入的突變體。4.初步獲得了MsALS基因編輯的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿植株。利用CRISPR/Cas9技術(shù)點突變MsALS基因,選取5個MsALSs（MsALS2/5/9/12/13）基因為靶基因,獲得紫花苜蓿陽性轉(zhuǎn)基因植株,利用測序篩選除草劑抗性苗,通過濃度梯度篩選確定煙咪磺隆除草劑對苗期紫花苜蓿的有效作用濃度為600 mg/L;甲咪唑煙酸為1350 mg/L,目前尚未完成除草劑抗性植株篩選。
王雪婷[4]（2020）在《苜蓿種質(zhì)飼草產(chǎn)量及品質(zhì)評價與SSR標(biāo)記分析》文中提出本研究依托“牧草和大豆類作物育種以提高歐盟和中國蛋白質(zhì)自給”項目,以來自國內(nèi)外28份苜蓿（Medicago）種質(zhì)為試材,對其生產(chǎn)性能、品質(zhì)特性、適應(yīng)性及SSR分子標(biāo)記特征進行分析,旨在綜合鑒定評價源自國內(nèi)外不同苜蓿種質(zhì)材料,提高豆科作物的育種效率,為優(yōu)異種質(zhì)篩選及新品種培育提供依據(jù)或參考,結(jié)果如下:（1）在飼草產(chǎn)量方面,第一茬產(chǎn)量最高,第二茬次之,第三茬稍差。參試材料年產(chǎn)量均在10000kg/hm2以上,研究發(fā)現(xiàn)植株高、生長速度快、分枝數(shù)多的品種產(chǎn)量較高,總體來說,生產(chǎn)性能評價最好的品種為草原3號。（2）參試材料CP均在16%以上,最高的品種為龍牧803,達21.21%,最低的為WL323;ADF在23.68%～35.37%之間,其中公農(nóng)1號最高,草原2號最低;NDF在46.43%～35.42%之間,NDF最高的為敖漢苜蓿,最低的為多葉苜蓿;EE含量在1.05～2.50%之間,察北苜蓿的EE最高,隴東苜蓿和中苜1號的最低;Ash在7.30%～8.68%之間,最高的為龍牧803,最低的是中苜1號;莖葉比在1.03～1.25之間,最高的為伊犁苜蓿,最低的為扶風(fēng);干鮮比介于2.81～3.70,最高的為敖漢苜蓿,最低的為公農(nóng)1號。RFV在160.25～120.36之間,最高的為龍牧803,最低的為公農(nóng)1號;綜合來看,龍牧803的各項指標(biāo)表明其營養(yǎng)品質(zhì)特性評價最優(yōu)。（3）供試苜蓿材料生育期在77～79d,生育期長的品種有草原3號、中苜2號等,生育期短的品種有新疆大葉和皇后;28份材料在呼和浩特市地區(qū)均能正常越冬,越冬率均超過75%,其中草原3號、中苜2號等的越冬率高達98%,瑞典苜蓿、多葉苜蓿和三得利苜蓿的越冬率較差,僅為75%;應(yīng)用隸屬函數(shù)值分析株高、產(chǎn)量、營養(yǎng)成分等7個指標(biāo),排在前5位的為草原3號、肇東苜蓿、中苜2號、龍牧803、伊犁苜蓿,均為呼和浩特地區(qū)種植的28份材料中生產(chǎn)性能好、營養(yǎng)價值高的品種,適宜在該地區(qū)種植;總體來說,適應(yīng)性評價中最強的品種為草原3號。（4）10對SSR引物從28個苜蓿品種中共檢測到103個等位基因,等位基因在15～25之間;各引物擴增的有效等位基因數(shù)均值為1.4526;基因多樣性水平均值為14.8856;所有引物PIC值均大于0.5;Shannon信息指數(shù)均值為0.3896;28份種質(zhì)的遺傳距離在0.0600～0.5239之間,遺傳一致度在0.5922～0.9417之間;用Structure將28份苜蓿材料劃分為3個類群,群體的組成與來源地、育成單位不完全相符,結(jié)果的復(fù)雜性說明了在長久的進化及選育的過程中,紫花苜蓿所包含的遺傳多樣性信息較高,其遺傳背景較復(fù)雜。
成啟明[5]（2020）在《紫花苜蓿落葉及營養(yǎng)品質(zhì)調(diào)控機理研究》文中指出優(yōu)質(zhì)苜蓿干草已成為我國畜牧業(yè)安全生產(chǎn)中不可或缺的重要資源,同時苜蓿干草的品質(zhì)是提升我國苜蓿干草國際市場競爭力的關(guān)鍵因素。為了找出影響苜蓿干草品質(zhì)的關(guān)鍵因素,本研究基于轉(zhuǎn)錄組測序,從轉(zhuǎn)錄機理出發(fā),研究苜蓿品種對苜蓿落葉以及生育期對苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)影響的機理,同時研究影響苜蓿干草干燥的關(guān)鍵因素以及苜蓿干草調(diào)制過程中營養(yǎng)指標(biāo)的變化規(guī)律,旨在為我國優(yōu)質(zhì)苜蓿干草的生產(chǎn)提供可借鑒的理論依據(jù)和技術(shù)支持。本研究以5個紫花苜蓿（Medicago sativa L）品種（中苜1號、準(zhǔn)格爾、中苜3號、WL232HQ和WL319HQ）為試驗原料,通過對不同苜蓿品種的落葉性、苜蓿生育期對其營養(yǎng)品質(zhì)影響的機理以及影響苜蓿干草調(diào)制的因素進行了系統(tǒng)全面的研究。得到結(jié)論如下:（1）通過對5個苜蓿品種的產(chǎn)量、落葉性和營養(yǎng)品質(zhì)進行研究發(fā)現(xiàn),WL319HQ苜蓿的干草產(chǎn)量和株高顯著優(yōu)于其他苜蓿品種（P<0.05）,且該品種在生長過程中落葉率較低,而準(zhǔn)格爾苜蓿的產(chǎn)量和株高較差,該品種在生長過程中葉片容易脫落;通過對干草產(chǎn)量、株高、CP、ADF、NDF和Lignin等6項常用指標(biāo)做灰色關(guān)聯(lián)度分析發(fā)現(xiàn):WL319HQ>WL232HQ>中苜3號>中苜1號>準(zhǔn)格爾。（2）通過對篩選出的落葉差異性較大的2個苜蓿品種（準(zhǔn)格爾和WL319HQ）進行落葉關(guān)鍵基因篩選研究,找到1098個差異基因,其中有706個unigene上調(diào),392個unigene下調(diào)（準(zhǔn)格爾-vs-WL319HQ）;有8414個基因注釋到87個KEGG代謝通路中,這些基因中有281個差異基因;從中篩選出控制苜蓿葉片脫落的3條代謝通路,共找到6個控制苜蓿落葉的關(guān)鍵基因;通過qRT-PCR技術(shù)對6個基因進行驗證,其驗證結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的結(jié)果一致,因此初步將這6個基因（ARF、PIF3、ETR、PHYB、CRY和NCED3）確定為控制苜蓿落葉的關(guān)鍵基因。（3）通過對現(xiàn)蕾期、初花期和盛花期的苜蓿（WL319HQ）進行營養(yǎng)品質(zhì)測定和轉(zhuǎn)錄組測序。結(jié)果表明,生育期是影響苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)的關(guān)鍵因子,其中苜蓿不同部位的營養(yǎng)品質(zhì)為葉片>整株>莖稈,隨著生育期推遲,各營養(yǎng)指標(biāo)含量變化如下:其可消化蛋白質(zhì)（CP、SP、RDP）指標(biāo)含量逐漸降低,不可消化蛋白質(zhì)（ADICP、NDICP）指標(biāo)含量逐漸升高;纖維指標(biāo)（Lignin、ADF、NDF）含量逐漸升高,其中LAC11、CCOA OMT1、CCR1、CAD6、HCT、PAL1、COMT1 和4CL等 8 種酶的表達量變化引起苜蓿纖維含量和組成的改變;苜蓿碳水化合物（NSC、ESC、WSC、Starch）指標(biāo)含量逐漸降低,其中SPS3、SUS6、AGPS1、AMY、pgmA、SBE3、WAXY、SS1和ISA2等9種酶的表達量變化導(dǎo)致苜蓿碳水化合物含量和結(jié)構(gòu)的改變;脂肪和脂肪酸指標(biāo)（EE、TFA、UFA、SFA）含量先升高后降低,其中FabG、KCS11、GPAT1、ACACA、FAS2、FAD2、KAS1和FATB等8種酶表達量的變化導(dǎo)致苜蓿脂肪酸含量、結(jié)構(gòu)的變化;不同氨基酸的變化趨勢各異,其中metE、arg12、glnA、serB、cysK、BCAT2、PAH、ACY1、trpB2和TSB酶等10種酶的表達量變化導(dǎo)致苜蓿的氨基酸含量和成分的變化;黃酮和單寧含量呈現(xiàn)出先降低后升高的趨勢,其中CHS4、CHI1、MYB4、FLS、ANS和ANR1等6種酶的表達量變化導(dǎo)致苜蓿黃酮和單寧含量的改變。（4）通過對以上研究中篩選出的品質(zhì)和產(chǎn)量兼優(yōu)且落葉率低的苜蓿品種（WL319HQ）進行干草調(diào)制試驗,研究發(fā)現(xiàn),苜蓿干燥過程中不同植株部位的干燥速率為葉片>整株>莖稈,隨著晾曬時間延長,苜蓿干燥速率和營養(yǎng)品質(zhì)降低速率呈現(xiàn)出先快后慢的規(guī)律,且影響干燥速率的主要環(huán)境因子為大氣水勢（負相關(guān)）>太陽輻射強度（正相關(guān)）>土壤溫度（正相關(guān)）>氣溫（正相關(guān)）>空氣相對濕度（負相關(guān)）;主要的營養(yǎng)指標(biāo)變化規(guī)律為,蛋白質(zhì)指標(biāo)（CP、SP、NDICP和RDP）降低了23.85～69.43%,纖維指標(biāo)（NDF、ADF 和 Lignin）升高了 26.21～61.82%,相對飼用價值（RFV）降低了 34.42%。
王英哲,王一楠,任偉,徐安凱,劉艷芝,郝東云[6]（2019）在《Bar+CP4EPSPS基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究及抗性鑒定》文中研究說明為了提高苜?？钩輨┑哪芰?以"公農(nóng)1號"紫花苜蓿為試驗材料,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將Bar基因和CP4EPSPS基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中,研究了優(yōu)化影響轉(zhuǎn)化的5個主要因子（分別為外植體、農(nóng)桿菌種類、侵染濃度、共培養(yǎng)時間、篩選濃度）,建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的"公農(nóng)1號"紫花苜蓿高效轉(zhuǎn)化體系,獲得轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明:選擇再生苗葉片作為外植體、EHA105農(nóng)桿菌侵染、菌液濃度OD600值為0.8、共培養(yǎng)3 d、轉(zhuǎn)化過程中草銨膦篩選濃度選擇2 mg·L-1為宜,是最佳轉(zhuǎn)化方案。試驗結(jié)合分子檢測和試紙條檢測初步證明目的基因已經(jīng)整合到紫花苜蓿中,最終噴施草甘膦確定12株為轉(zhuǎn)基因植株。
周仂,王英哲,徐博,譚晶,徐安凱[7]（2019）在《轉(zhuǎn)Bar基因紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價》文中研究表明為探究抗除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿（Medicago sativa）的高效雜交種選育技術(shù)。本試驗以‘公農(nóng)1號’作為父母本配置了1個對照組合,以轉(zhuǎn)Bar基因的抗草銨膦除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿作為父本,以雄性不育系MS-GN-1A作為母本,配置了11個雜交組合。對后代植株的抗性進行Bar試紙條、PCR檢測,對產(chǎn)量和品質(zhì)性狀進行評價和篩選,結(jié)果表明,試驗中有7個雜交組合的后代表現(xiàn)優(yōu)異。此試驗以紫花苜蓿雄性不育系作為母本配置雜交種,使抗除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的目標(biāo)性狀高效且穩(wěn)定遺傳,同時在此試驗基礎(chǔ)上篩選出了優(yōu)良雜交后代,為良種繁育提供了一定的理論基礎(chǔ)。
譚晶[8]（2019）在《抗除草劑紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價》文中研究指明我國幅員遼闊,農(nóng)業(yè)發(fā)展迅速。紫花苜蓿營養(yǎng)豐富,對環(huán)境的適應(yīng)能力較強,是牧草之王。伴隨著農(nóng)耕方式的轉(zhuǎn)變,除草劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上得到廣泛的推廣和使用,為降低除草劑對紫花苜蓿生長的影響,對紫花苜蓿進行品種改良是關(guān)鍵。雖然常規(guī)育種方法有可能提高紫花苜蓿的抗性,但可種植面積變少,品種選育時間較長,因此我們力求尋求出一種高效、便捷的方法—抗除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿與雄性不育系雜交法。以紫花苜蓿雄性不育系作為母本,可大幅度縮短選育純合后代的育種年限,很大程度上提高F1代雜交種子生產(chǎn)的有效性。1、本試驗利用轉(zhuǎn)bar基因的候選抗草銨膦紫花苜蓿材料,采用bar試紙條、PCR法對候選材料的外源基因進行了檢測,確定了15株陽性植株,通過除草劑涂抹法確定了能夠區(qū)分抗性紫花苜蓿和非抗性紫花苜蓿的臨界濃度（7‰）,之后采用噴施除草劑法,最終確定了11株具有抗草銨膦特性的陽性株系。2、以公農(nóng)1號作為對照品種,以11株抗除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿作為父本,以雄性不育系作為母本,配置了11個雜交組合。對后代進行了分子及抗除草劑檢測,并對產(chǎn)量和品質(zhì)性狀進行了評價和篩選,篩選出7個雜交組合的后代表現(xiàn)優(yōu)異。綜上可知,利用抗除草劑轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿父本與不育系母本進行雜交,配制雜交種的方法是可行的。通過篩選優(yōu)良的抗除草劑轉(zhuǎn)基因材料,能夠有效地解決紫花苜蓿生產(chǎn)中雜草防除這一難題,為飼草產(chǎn)業(yè)推廣提供更多物質(zhì)基礎(chǔ)。
馬金星[9]（2017）在《新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性和利用潛力分析》文中研究表明紫花苜蓿（Medicago sativa L.）是世界上最重要的豆科牧草,它產(chǎn)量高、適口性好,蛋白質(zhì)含量高,具有極大的生產(chǎn)利用潛力和研究價值。新疆是我國苜蓿種類分布較多的地區(qū),對新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源進行研究,不僅能挖掘我國紫花苜蓿種質(zhì)資源更為豐富的遺傳變異,從中篩選優(yōu)異紫花苜蓿種質(zhì)材料,為我國紫花苜蓿新品種選育奠定重要研究基礎(chǔ),還能指導(dǎo)我國新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源的遺傳多樣性保護,保證資源的永續(xù)利用。本文采用表型、抗逆性和DNA分子水平相結(jié)合的技術(shù)手段,通過對來自中國新疆的20份紫花苜蓿種質(zhì)資源主要形態(tài)學(xué)特征、主要農(nóng)藝性狀、抗寒性（秋眠性、越冬率）、主要營養(yǎng)成分、耐鹽性、抗旱性、以及ISSR、RAPD、SSR 3種DNA分子標(biāo)記的鑒定研究,獲得以下研究結(jié)果:1.來自中國新疆南、北疆地區(qū)的苜蓿種質(zhì)資源,秋眠性差異較大,來自北疆地區(qū)的苜蓿種質(zhì)資源均被鑒定為秋眠類型種質(zhì),大部分種質(zhì)的秋眠性為1級（3級的只有1份種質(zhì)）,未發(fā)現(xiàn)半秋眠類型的種質(zhì);但來自南疆的苜蓿材料中,既有秋眠類型種質(zhì)（1級為主,也有2級和3級的種質(zhì)）,又有半秋眠類型種質(zhì)（4級和5級種質(zhì)）。2.新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源形態(tài)特征在不同居群之間變異較大。其中,葉面積變異幅度較大,變化范圍在0.83-3.10 cm2,種質(zhì)ChangJi葉面積最大。自然高度的變異位居第二,變異范圍在36.20-110.3cm。主要農(nóng)藝性狀指標(biāo)中,種子產(chǎn)量變異最大,來自阿爾泰的種質(zhì)AerTai2種子產(chǎn)量最高,達2221.11kg/hm2。種質(zhì)KuerL總干草產(chǎn)量最高,達38459.22kg/hm2。種質(zhì)HaBHe的越冬率最高,達98.53%。種質(zhì)HaBHe、ChangJi、TaChen、XinY2、FuHai、KuerL、HeT、MinF1 植株高大、草產(chǎn)量和種子產(chǎn)量高、刈割后再生快,越冬率高,綜合農(nóng)藝性狀好、生產(chǎn)性能優(yōu)良,可在苜蓿育種或生產(chǎn)中優(yōu)先利用。3.綜合各種質(zhì)一茬草的粗蛋白、氨基酸和粗纖維含量來看,來自哈巴河的種質(zhì)HaBHe,同時具有粗蛋白（21.28%）和氨基酸（17.15%）含量高、粗纖維（26.32%）含量低的優(yōu)良特性,可在苜蓿品質(zhì)育種中優(yōu)先利用。4.在PEG或鹽脅迫濃度與相對發(fā)芽率的回歸分析中,三次多項式模型的模擬結(jié)果更接近真實情況。20份新疆紫花苜蓿種質(zhì)之間耐鹽性、抗旱性差異顯著,其氯化鈉鹽脅迫半致死濃度變異范圍在0.129%-1.114%之間;PEG脅迫半致死濃度變異范圍在4.751bar-13.704bar之間。種質(zhì)AerTai1抗旱性最強,種質(zhì)KuerL耐鹽性最強。5.SSR、RAPD、ISSR 3種DNA分子標(biāo)記鑒定結(jié)果均表明,來自新疆的紫花苜猜種質(zhì)資源,具有豐富的遺傳多樣性,種群間發(fā)生了較高的遺傳分化。但是,不同分子標(biāo)記技術(shù)鑒定出的遺傳多樣性大小排序不同,而且3種DNA分子標(biāo)記揭示出的種質(zhì)資源之間的親緣關(guān)系相關(guān)性不顯著。6.綜合比較分析形態(tài)特征、農(nóng)藝性狀、營養(yǎng)價值、抗寒性、抗旱性、耐鹽性以及遺傳多樣性研究結(jié)果,篩選出優(yōu)異種質(zhì)HaBHe。該種質(zhì)植株較高,草產(chǎn)量和種子產(chǎn)量高、刈割后再生速度快,越冬率高,生產(chǎn)性能優(yōu)良。其粗蛋白和氨基酸含量高,粗纖維含量低,種子萌發(fā)期抗旱、耐鹽性強,在SSR和ISSR兩種分子標(biāo)記水平上鑒定出的遺傳多樣性在供試材料中居中等水平,該種質(zhì)材料在RAPD分子標(biāo)記水平上表現(xiàn)出的遺傳多樣性低,反映出其綜合性狀的整齊一致性,是一份育種和生產(chǎn)利用價值較高的優(yōu)異紫花苜蓿種質(zhì)材料,可作為雜交親本或直接進行紫花苜蓿新品種培育利用。
陳春艷[10]（2016）在《甘肅紅豆草原花青素合成途徑的兩個關(guān)鍵酶基因的克隆和功能分析》文中研究表明原花青素又稱縮合單寧,其在生物體內(nèi)具有抗紫外線、抗病、抗蟲、清除自由基、調(diào)節(jié)種子休眠和萌發(fā)等重要的生理功能,并影響牧草的適口性和可消化性,兼具保健價值。本研究利用分子生物學(xué)方法,克隆了甘肅紅豆草原花青素合成途徑中的兩個關(guān)鍵酶基因,即花青素還原酶（Anthocyanidin reductase）和無色花青素還原酶（Leucoanthocyanidin reductase）的編碼基因BAN和LAR。采用生物信息學(xué)相關(guān)軟件分析,預(yù)測了二者cDNA序列編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能,構(gòu)建了含有bar和GFP基因的雙標(biāo)記選擇的植物表達載體。利用植物轉(zhuǎn)基因技術(shù),研究了紅豆草原花青素生物合成關(guān)鍵酶基因的功能;通過BAN和LAR表達的定量分析,結(jié)合原花青素及其組分含量的測定,研究了甘肅紅豆草原花青素生物合成相關(guān)酶基因的表達水平與原花青素積累的關(guān)系。本研究的主要研究結(jié)果如下:1)原花青素總量和不溶性原花青素含量在紅豆草葉片中的含量最低,二者在莖和生殖器官的含量較高?？扇苄栽ㄇ嗨卦谌~片中含量最高,而在莖、花、果中的含量較低。葉中原花青素總量、不溶性原花青素和可溶性原花青素含量在營養(yǎng)生長階段高,而在生殖生長階段低,這與莖中三者含量的季節(jié)變化趨勢相反。因此,葉片是原花青素合成的關(guān)鍵器官,但不是主要的貯存器官。甘肅紅豆草花中的花青素含量在生殖器官花蕾、花和果中含量最高。莖和葉花青素含量總體上在生殖生長階段含量高于營養(yǎng)生長階段,這也說明花青素在花色形成或生殖生長過程中發(fā)揮著重要的生理作用。2)以甘肅紅豆草葉片總RNA為模板,通過RT-PCR技術(shù)獲得編碼花青素還原酶的BAN基因,克隆的BAN基因與已知基因序列相似性達到99.41%,其ORF長為1020 bp,編碼339個氨基酸殘基。具有花青素還原酶保守結(jié)構(gòu)域及許多重要功能位點,表明可能具有合成原花青素單體的功能?；蛐蛄幸炎缘紾enBank,序列登錄號為KM924437。以此為靶序列,構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白GFP和抗除草劑bar基因的雙標(biāo)記選擇植物表達載體,將其命名為CPB-BAN-GFP。3)以甘肅紅豆草葉片總RNA為模板,采用RT-PCR法克隆編碼無色花青素還原酶LAR基因,與GenBank已報道LAR基因（登錄號:HM152981）序列相似性達到98.34%,其ORF長為1089 bp,編碼362個氨基酸殘基;其編碼的氨基酸序列與不同屬豆科物種的相似性存在較大的差異?；蛐蛄幸炎缘紾enBank,序列登錄號為KP013623。以此為靶序列,構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白GFP和抗除草劑bar基因的雙標(biāo)記選擇植物表達載體,將其命名為CPB-LAR-GFP。4)以甘肅紅豆草葉片總RNA為模板,采用定量RT-PCR方法,編碼原花青素還原酶的BAN和LAR基因具有較強的組織特異性表達特征,在器官間的表達量差異較大。其中BAN基因表達量的高低順序依次為果、葉、蕾、花、莖,LAR基因表達量的高低順序依次為蕾、果、花、莖、葉。5)直接導(dǎo)入法將植物表達載體CPB-BAN-GFP和CPB-LAR-GFP分別轉(zhuǎn)化至根癌農(nóng)桿菌LBA4404的感受態(tài)細胞中。分別侵染了紫花苜蓿下胚軸,經(jīng)共培養(yǎng)和分化培養(yǎng),熒光鑒定,抗除草劑鑒定和PCR鑒定,證明將BAN和LAR基因已整合到紫花苜蓿愈傷組織中。整合有這兩種基因的愈傷組織中原花青素含量都高于對照。本研究從甘肅紅豆草克隆出原花青素生物合成途徑中的BAN和LAR基因。生物信息學(xué)分析表明,這兩個基因編碼蛋白在序列、結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)域、催化活性位點上都存在較高的保守性,推斷其蛋白功能與其它植物相似。轉(zhuǎn)基因?qū)嶒灡砻?異源表達BAN和LAR基因提高了紫花苜蓿愈傷組織的原花青素含量。從分子生物學(xué)水平解析了甘肅紅豆草原花青素積累與相關(guān)基因之間的關(guān)系。這些研究豐富了原花青素的基礎(chǔ)研究,為紅豆草及其紫花苜蓿品種改良奠定了基礎(chǔ)。
二、Bar基因轉(zhuǎn)化草原1號苜蓿的研究（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、Bar基因轉(zhuǎn)化草原1號苜蓿的研究（論文提綱范文）
（1）共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿的分子鑒定及ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿的耐鹽性評價（論文提綱范文）
| 縮寫詞表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 國內(nèi)外研究進展 |
| 1.1 液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白 |
| 1.1.1 液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白概述 |
| 1.1.2 液泡膜Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運蛋白在植物耐鹽性中的作用 |
| 1.2 液泡膜H~+-焦磷酸酶 |
| 1.2.1 液泡膜H~+-焦磷酸酶概述 |
| 1.2.2 液泡膜H~+-焦磷酸酶在植物耐鹽性中的作用 |
| 1.3 液泡膜Cl~-通道蛋白 |
| 1.3.1 液泡膜Cl~-通道蛋白概述 |
| 1.3.2 液泡膜Cl~-通道蛋白在植物耐鹽性中的作用 |
| 1.4 多基因聚合改良植物抗逆性的研究進展 |
| 1.4.1 抗非生物脅迫 |
| 1.4.2 抗生物脅迫 |
| 1.5 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿研究進展 |
| 1.5.1 抗非生物脅迫 |
| 1.5.2 抗生物脅迫 |
| 1.6 外源基因在受體植物中的整合檢測 |
| 1.6.1 PCR檢測 |
| 1.6.2 外源基因拷貝數(shù)檢測 |
| 1.7 外源基因表達產(chǎn)物檢測 |
| 1.7.1 Western Blot檢測 |
| 1.7.2 酶聯(lián)免疫吸附法 |
| 1.7.3 免疫試紙條法 |
| 第二章 共表達ZxNHX1-VP1-1 紫花苜蓿的分子鑒定 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 植物DNA及質(zhì)粒DNA提取 |
| 2.1.3 PCR檢測 |
| 2.1.4 Southern Blot檢測 |
| 2.1.5 植物總RNA提取及cDNA制備 |
| 2.1.6 RT-PCR檢測 |
| 2.1.7 植物總蛋白提取 |
| 2.1.8 Westhern Blot檢測 |
| 2.1.9 ELISA檢測 |
| 2.1.10 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 共表達ZxNHX1-VP1-1 紫花苜蓿的PCR檢測結(jié)果 |
| 2.2.2 共表達ZxNHX1-VP1-1 紫花苜蓿的Southern Blot檢測結(jié)果 |
| 2.2.3 共表達ZxNHX1-VP1-1 紫花苜蓿的Western Blot檢測結(jié)果 |
| 2.2.4 共表達ZxNHX1-VP1-1 紫花苜蓿的ELISA檢測結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿的耐鹽性評價 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 PCR檢測 |
| 3.1.2 RT-PCR檢測 |
| 3.1.3 鹽處理方案 |
| 3.1.4 生長指標(biāo)的測定 |
| 3.1.5 生理指標(biāo)及測定方法 |
| 3.1.6 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿的分子檢測 |
| 3.2.2 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿長勢的影響 |
| 3.2.3 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿生物量的影響 |
| 3.2.4 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿葉片相對質(zhì)膜透性的影響 |
| 3.2.5 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿葉片滲透勢的影響 |
| 3.2.6 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿Na~+、K~+、Cl~-的影響 |
| 3.2.7 鹽脅迫對共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿根部Na~+和Cl~-凈吸收速率的影響 |
| 3.2.8 鹽脅迫下共表達ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿中Na~+、K~+和Cl~-對葉片滲透勢的貢獻 |
| 3.3 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 在學(xué)期間的研究成果 |
| 致謝 |
（2）苜?？购澡b定及耐寒種質(zhì)篩選（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 苜蓿生態(tài)生物學(xué) |
| 1.2 苜蓿品種適應(yīng)性 |
| 1.3 國內(nèi)外研究進展 |
| 1.3.1 萌發(fā)期耐寒性研究 |
| 1.3.2 幼苗期耐寒性研究 |
| 1.3.3 形態(tài)結(jié)構(gòu)與抗寒性 |
| 1.3.4 秋眠性與抗寒性 |
| 1.3.5 根系性狀與抗寒性 |
| 1.3.6 抗寒基因表達研究 |
| 1.3.7 轉(zhuǎn)錄組研究 |
| 1.4 研究目的與意義 |
| 1.5 技術(shù)路線 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 試驗地概況 |
| 2.2 試驗材料 |
| 2.3 試驗方法 |
| 2.3.1 萌發(fā)期耐寒性 |
| 2.3.2 幼苗期耐寒性 |
| 2.3.3 生物學(xué)特性與農(nóng)藝性狀 |
| 2.3.4 越冬期根系生理 |
| 2.3.5 越冬后期根系性狀 |
| 2.3.6 轉(zhuǎn)錄組測序分析 |
| 2.4 統(tǒng)計分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 萌發(fā)期種子對低溫的響應(yīng) |
| 3.1.1 恒溫梯度下種子萌發(fā)特性 |
| 3.1.2 變溫梯度下種子萌發(fā)特性 |
| 3.1.3 萌發(fā)期抗寒性綜合評價 |
| 3.2 幼苗期生理及基因?qū)Φ蜏氐捻憫?yīng) |
| 3.2.1 苜蓿幼苗對低溫的生理響應(yīng) |
| 3.2.2 幼苗期抗寒性綜合評價 |
| 3.2.3 抗寒基因?qū)Φ蜏氐捻憫?yīng) |
| 3.3 生物學(xué)特性、農(nóng)藝性狀與抗寒性 |
| 3.3.1 生物學(xué)特性及農(nóng)藝性狀 |
| 3.3.2 耦合作用及相關(guān)性分析 |
| 3.3.3 光合熒光特性 |
| 3.4 越冬期根系生理對低溫的響應(yīng) |
| 3.4.1 根系滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)變化 |
| 3.4.2 根系膜系統(tǒng)及酶活性變化 |
| 3.4.3 根系抗寒性綜合評價 |
| 3.5 越冬后期的根系構(gòu)成 |
| 3.5.1 根頸直徑、入土深度及主根直徑 |
| 3.5.2 側(cè)根數(shù)、側(cè)根直徑、位置及根頸干重 |
| 3.5.3 根系表面積、體積、根長及根尖數(shù) |
| 3.5.4 根頸體積和表面積 |
| 3.5.5 地下生物量 |
| 3.5.6 根系構(gòu)成與耐寒相關(guān)性分析 |
| 3.6 轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.6.1 測序及數(shù)據(jù)組裝 |
| 3.6.2 功能注釋 |
| 3.6.3 DEGs鑒定 |
| 3.6.4 差異基因的KEGG通路分析 |
| 3.6.5 轉(zhuǎn)錄因子 |
| 3.6.6 qRT-PCR驗證 |
| 4 討論 |
| 4.1 萌發(fā)期苜?？购?/td> |
| 4.2 幼苗期苜蓿抗寒性 |
| 4.3 生長期苜?？购?/td> |
| 4.3.1 生物學(xué)特性、農(nóng)藝性狀與抗寒性 |
| 4.3.2 光合熒光特性與抗寒性 |
| 4.4 苜蓿根系生理與抗寒性 |
| 4.5 苜蓿根系構(gòu)成與抗寒性 |
| 4.6 轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 4.6.1 抗氧化系統(tǒng)與抗寒性 |
| 4.6.2 轉(zhuǎn)錄因子參與抗寒性 |
| 4.6.3 激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與抗寒性 |
| 5 結(jié)論與展望 |
| 5.1 結(jié)論 |
| 5.2 創(chuàng)新點 |
| 5.3 展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介 |
（3）利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯紫花苜蓿CCoAOMT及ALS基因的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 第二章 國內(nèi)外研究進展 |
| 2.1 咖啡酰輔酶-A-氧甲基轉(zhuǎn)移酶 |
| 2.1.1 植物細胞壁中的木質(zhì)素及其生物合成途徑 |
| 2.1.2 咖啡酰輔酶-A-氧甲基轉(zhuǎn)移酶(CCoAOMT)及其基因功能 |
| 2.1.3 CCoAOMT對木質(zhì)素生物合成的調(diào)控 |
| 2.2 以ALS為靶標(biāo)的除草劑研究現(xiàn)狀 |
| 2.2.1 乙酰乳酸合成酶(ALS)及其基因功能 |
| 2.2.2 ALSase抑制劑類除草劑 |
| 2.2.3 ALS基因的開發(fā)利用 |
| 2.3 CRISPR/Cas9 基因編輯技術(shù) |
| 2.3.1 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)和基本原理 |
| 2.3.2 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組編輯的優(yōu)勢及局限性 |
| 2.3.3 CRISPR技術(shù)在植物中的應(yīng)用 |
| 2.4 紫花苜蓿低木質(zhì)素和抗除草劑種質(zhì)創(chuàng)新研究 |
| 2.4.1 低木質(zhì)素改良 |
| 2.4.2 抗除草劑 |
| 2.5 本研究的目的意義和技術(shù)路線圖 |
| 2.5.1 目的和意義 |
| 2.5.2 技術(shù)路線圖 |
| 第三章 紫花苜蓿CCoAOMT和ALS基因家族的全基因組鑒定 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 MsCCoAOMT和MsALS基因的鑒定 |
| 3.2.3 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及染色體定位分析 |
| 3.2.4 基因結(jié)構(gòu)、保守基序和啟動子元件分析 |
| 3.2.5 系統(tǒng)發(fā)育分類分析 |
| 3.2.6 MsCCoAOMT和MsALS基因家族的表達分析 |
| 3.2.7 紫花苜蓿莖的組織化學(xué)染色 |
| 3.2.8 木質(zhì)素含量的測定 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 MsCCoAOMT與MsALS基因家族成員的鑒定 |
| 3.3.2 基因染色體定位分析 |
| 3.3.3 蛋白結(jié)構(gòu)域及基因結(jié)構(gòu)分析 |
| 3.3.4 基因啟動子順式作用元件分析 |
| 3.3.5 系統(tǒng)進化分析 |
| 3.3.6 基因的表達分析 |
| 3.3.7 紫花苜蓿不同發(fā)育時期莖中木質(zhì)素的含量 |
| 3.4 討論 |
| 第四章 利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯MsCCoAOMT基因 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料與試劑 |
| 4.2.1 植物材料 |
| 4.2.2 菌株、質(zhì)粒和載體 |
| 4.2.3 試劑與儀器 |
| 4.2.4 試劑配制 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 目的基因的克隆 |
| 4.3.2 CRISPR/Cas9載體構(gòu)建 |
| 4.3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的紫花苜蓿葉片轉(zhuǎn)化 |
| 4.3.4 陽性株鑒定 |
| 4.3.5 PCR/RE分析 |
| 4.3.6 基因編輯植株測序鑒定 |
| 4.4 結(jié)果與分析 |
| 4.4.1 MsCCoAOMT12基因的擴增 |
| 4.4.2 靶序列的選擇 |
| 4.4.3 基因編輯載體的檢測 |
| 4.4.4 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿獲得及陽性株鑒定 |
| 4.4.5 轉(zhuǎn)化株系突變檢測及分析 |
| 4.5 討論 |
| 第五章 利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯MsALS基因 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料與試劑 |
| 5.2.1 植物材料 |
| 5.2.2 菌株、質(zhì)粒和載體 |
| 5.2.3 除草劑 |
| 5.3 實驗方法 |
| 5.3.1 CRISPR/Cas9載體構(gòu)建 |
| 5.3.2 除草劑有效作用濃度梯度篩選 |
| 5.4 結(jié)果與分析 |
| 5.4.1 MsALS靶序列分析 |
| 5.4.2 靶序列的選擇 |
| 5.4.3 MsALS基因靶區(qū)域擴增 |
| 5.4.4 基因編輯載體的檢測與轉(zhuǎn)化 |
| 5.4.5 除草劑有效作用濃度梯度篩選 |
| 5.5 討論 |
| 第六章 結(jié)論與展望 |
| 6.1 結(jié)論 |
| 6.2 論文創(chuàng)新點 |
| 6.3 展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 在學(xué)期間的研究成果 |
| 致謝 |
（4）苜蓿種質(zhì)飼草產(chǎn)量及品質(zhì)評價與SSR標(biāo)記分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 苜蓿概述 |
| 1.1.1 我國苜蓿起源及種植利用現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 苜蓿研究的重要性 |
| 1.2 生產(chǎn)性能研究 |
| 1.2.1 株高、生長速度與分枝數(shù) |
| 1.2.2 飼草產(chǎn)量 |
| 1.3 飼用品質(zhì)研究 |
| 1.3.1 莖葉比 |
| 1.3.2 干鮮比 |
| 1.3.3 營養(yǎng)成分 |
| 1.4 適應(yīng)性研究 |
| 1.4.1 生育期 |
| 1.4.2 適應(yīng)性及越冬率 |
| 1.5 分子標(biāo)記與遺傳多樣性 |
| 1.5.1 遺傳多樣性概述 |
| 1.5.2 分子標(biāo)記技術(shù) |
| 1.5.3 分子標(biāo)記在苜蓿遺傳研究中的應(yīng)用 |
| 1.6 研究目的及意義 |
| 1.7 研究內(nèi)容及技術(shù)路線 |
| 1.7.1 研究內(nèi)容 |
| 1.7.2 技術(shù)路線 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 試驗地概況 |
| 2.2 試驗設(shè)計 |
| 2.2.1 供試材料 |
| 2.2.2 田間試驗設(shè)計 |
| 2.3 觀測項目及測定方法 |
| 2.3.1 生產(chǎn)性能測定 |
| 2.3.2 品質(zhì)特性測定 |
| 2.3.3 適應(yīng)性評價 |
| 2.4 SSR分子標(biāo)記 |
| 2.4.1 DNA的提取 |
| 2.4.2 引物篩選與PCR擴增 |
| 2.4.3 PCR產(chǎn)物檢測 |
| 2.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 生產(chǎn)性能評價 |
| 3.1.1 株高 |
| 3.1.2 生長速度 |
| 3.1.3 產(chǎn)量 |
| 3.1.4 分枝數(shù) |
| 3.2 品質(zhì)特性評價 |
| 3.2.1 營養(yǎng)成分 |
| 3.2.2 莖葉比 |
| 3.2.3 干鮮比 |
| 3.2.4 相對飼用價值 |
| 3.3 適應(yīng)性評價 |
| 3.3.1 飼草產(chǎn)量及品質(zhì)綜合評價 |
| 3.3.2 生育期 |
| 3.3.3 越冬率 |
| 3.4 SSR標(biāo)記分析 |
| 3.4.1 基因組DNA檢測 |
| 3.4.2 擴增產(chǎn)物的聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜 |
| 3.4.3 SSR遺傳標(biāo)記特征 |
| 3.4.4 群體結(jié)構(gòu)分析 |
| 4 討論 |
| 4.1 苜蓿的生產(chǎn)性能 |
| 4.2 苜蓿的品質(zhì)特性 |
| 4.3 苜蓿的適應(yīng)性 |
| 4.4 苜蓿的SSR遺傳標(biāo)記特征及其群體結(jié)構(gòu)劃分 |
| 4.4.1 苜蓿SSR標(biāo)記特征 |
| 4.4.2 群體結(jié)構(gòu) |
| 5 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介 |
（5）紫花苜蓿落葉及營養(yǎng)品質(zhì)調(diào)控機理研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語表 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 苜蓿產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及前景展望 |
| 1.2.1 國外苜蓿產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀 |
| 1.2.2 國內(nèi)苜蓿產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀 |
| 1.2.3 前景展望 |
| 1.3 苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)評價指標(biāo) |
| 1.4 影響苜蓿干草產(chǎn)量和品質(zhì)的因素 |
| 1.4.1 品種對苜蓿干草產(chǎn)量和品質(zhì)的影響 |
| 1.4.2 生育期對苜蓿干草產(chǎn)量和品質(zhì)的影響 |
| 1.4.3 苜蓿落葉性對其品質(zhì)的影響 |
| 1.4.4 苜蓿干燥過程中環(huán)境因子對干草品質(zhì)的影響 |
| 1.5 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)(RNA-Seq)在植物中的研究現(xiàn)狀 |
| 1.5.1 RNA-Seq技術(shù)在非模式植物研究中的研究現(xiàn)狀 |
| 1.5.2 RNA-Seq技術(shù)在苜蓿研究中的研究現(xiàn)狀 |
| 1.5.3 RNA-Seq技術(shù)在飼草營養(yǎng)品質(zhì)研究中的研究現(xiàn)狀 |
| 1.6 論文的目的及意義 |
| 1.7 論文整體思路及研究技術(shù)路線 |
| 1.7.1 論文整體思路 |
| 1.7.2 技術(shù)路線 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 試驗地點及其概況 |
| 2.2 試驗材料 |
| 2.3 試驗設(shè)計 |
| 2.4 測定指標(biāo)及方法 |
| 2.5 數(shù)據(jù)整理與數(shù)據(jù)分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 苜蓿品種對干草產(chǎn)量、品質(zhì)和落葉性的綜合評價 |
| 3.1.1 苜蓿品種對干草產(chǎn)量和株高的影響 |
| 3.1.2 苜蓿品種對含葉量的影響 |
| 3.1.3 苜蓿品種對營養(yǎng)品質(zhì)的影響 |
| 3.1.4 苜蓿品種生產(chǎn)性能與品質(zhì)的綜合評價 |
| 3.2 基于轉(zhuǎn)錄組測序的控制苜蓿落葉關(guān)鍵基因篩選 |
| 3.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析 |
| 3.2.2 控制苜蓿落葉的關(guān)鍵基因篩選 |
| 3.2.3 與苜蓿落葉相關(guān)基因的qRT-PCR驗證 |
| 3.3 基于轉(zhuǎn)錄組測序的控制苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)關(guān)鍵基因的篩選 |
| 3.3.1 生育期對苜蓿主要營養(yǎng)指標(biāo)的影響 |
| 3.3.2 生育期對苜蓿氨基酸指標(biāo)的影響 |
| 3.3.3 生育期對苜蓿次級代謝產(chǎn)物的影響 |
| 3.3.4 生育期對苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)的影響機制 |
| 3.4 苜蓿干草品質(zhì)對環(huán)境因子的響應(yīng)機制研究 |
| 3.4.1 苜蓿在干燥過程中的主要環(huán)境因子變化 |
| 3.4.2 苜蓿在干燥過程中的水分和干燥速率變化研究 |
| 3.4.3 苜蓿在干燥過程中的主要營養(yǎng)指標(biāo)變化 |
| 4 討論 |
| 4.1 品種對紫花苜蓿干草產(chǎn)量和品質(zhì)的影響機理探討 |
| 4.2 不同紫花苜蓿品種轉(zhuǎn)錄組測序及其落葉性的機理探討 |
| 4.3 生育期對紫花苜蓿營養(yǎng)品質(zhì)的影響及其機理探討 |
| 4.3.1 生育期對紫花苜蓿主要營養(yǎng)指標(biāo)含量的影響機理 |
| 4.3.2 生育期對紫花苜蓿氨基酸含量的影響機理 |
| 4.3.3 生育期對紫花苜蓿黃酮和單寧含量的影響機理 |
| 4.4 環(huán)境因子對苜蓿干草營養(yǎng)品質(zhì)的影響規(guī)律探討 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 本研究創(chuàng)新 |
| 7 展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 作者簡介 |
（6）Bar+CP4EPSPS基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究及抗性鑒定（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料 |
| 1.1.1 受體材料 |
| 1.1.2 菌種和質(zhì)粒 |
| 1.1.3 試劑與酶 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.2.1 植物表達載體的構(gòu)建 |
| 1.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 1.2.3 轉(zhuǎn)基因苜蓿的草銨膦抗性檢測 |
| 1.2.4 轉(zhuǎn)基因苜蓿的PCR檢測 |
| 1.2.5 轉(zhuǎn)基因苜蓿試紙條檢測 |
| 1.2.6 轉(zhuǎn)基因苜蓿噴施草甘膦除草劑處理 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 植物表達載體的構(gòu)建 |
| 2.2 紫花苜蓿轉(zhuǎn)化體系的建立及優(yōu)化 |
| 2.2.1 外植體類型對愈傷組織誘導(dǎo)的影響 |
| 2.2.2 農(nóng)桿菌菌株類型對轉(zhuǎn)化的影響 |
| 2.2.3 農(nóng)桿菌菌液濃度對轉(zhuǎn)化的影響 |
| 2.2.4 共培養(yǎng)時間對轉(zhuǎn)化的影響 |
| 2.2.5 紫花苜蓿葉片對草銨膦的抗性壓篩選結(jié)果 |
| 2.3 目的基因?qū)ψ匣ㄜ俎＿z傳轉(zhuǎn)化 |
| 2.4 Bar+CP4EPSPS轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的篩選和鑒定 |
| 2.4.1 轉(zhuǎn)Bar+CP4EPSPS基因紫花苜蓿的PCR檢測 |
| 2.4.2 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的草甘膦抗性鑒定 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（7）轉(zhuǎn)Bar基因紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料與試驗器材 |
| 1.1.1 試驗材料 |
| 1.1.2 試劑 |
| 1.1.3 試驗地基本情況 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.2.1 雜交F1代抗除草劑特性的檢測與篩選 |
| 1.2.2 雜交組合產(chǎn)量和品質(zhì)性狀的測定 |
| 1.2.3 灰色關(guān)聯(lián)度分析方法 |
| 1.2.4 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 雜交后代的Bar試紙條檢測 |
| 2.2 雜交后代的PCR檢測 |
| 2.3 F1代農(nóng)藝學(xué)性狀的分析 |
| 2.4 雜交后代農(nóng)藝學(xué)性狀的灰色關(guān)聯(lián)度分析 |
| 2.4.1 原始數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化處理 |
| 2.4.2 各雜交組合的關(guān)聯(lián)度分析 |
| 3 討論 |
| 3.1 紫花苜蓿雜交后代抗性分析 |
| 3.2 紫花苜蓿雜交后代產(chǎn)量及品質(zhì)性狀的分析 |
| 3.3 紫花苜蓿雜交后代產(chǎn)量、品質(zhì)相關(guān)性分析研究 |
| 3.4 F1代產(chǎn)量和品質(zhì)的灰色關(guān)聯(lián)度分析與評價 |
| 3.5 三系配套技術(shù)在轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿育種中的應(yīng)用 |
| 4 結(jié)論 |
（8）抗除草劑紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 草銨膦的概況 |
| 1.2 抗除草劑作物的研究進展 |
| 1.3 轉(zhuǎn)bar基因作物的安全性問題 |
| 1.4 轉(zhuǎn)bar基因植物的篩選及鑒定方法 |
| 1.5 雄性不育系的利用 |
| 1.6 研究的目的和意義 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 試驗材料與試驗地基本情況 |
| 2.1.1 試驗材料 |
| 2.1.2 試驗地基本情況 |
| 2.2 試驗方法 |
| 2.2.1 對候選轉(zhuǎn)基因植株的驗證(bar試紙條鑒定法) |
| 2.2.2 提取紫花苜蓿的DNA |
| 2.2.3 DNA質(zhì)量檢驗 |
| 2.2.4 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的PCR檢測 |
| 2.2.5 草銨膦濃度的篩選 |
| 2.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的抗性測定 |
| 2.2.7 雜交組配親本材料 |
| 2.2.8 F1 代種子的種植與篩選 |
| 2.2.9 雜交組合產(chǎn)量和品質(zhì)性狀的測定 |
| 2.2.10 灰色關(guān)聯(lián)度分析方法 |
| 2.2.11 數(shù)據(jù)分析 |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 3.1 bar試紙條檢測 |
| 3.2 bar基因的PCR檢測 |
| 3.3 草銨膦濃度的篩選 |
| 3.4 轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的抗性測定 |
| 3.5 雜交后代的bar試紙條檢測 |
| 3.6 雜交后代的PCR檢測 |
| 3.7 雜交后代對草銨膦的抗性鑒定 |
| 3.8 F1 代農(nóng)藝學(xué)性狀的分析 |
| 3.9 雜交后代農(nóng)藝學(xué)性狀的灰色關(guān)聯(lián)度分析 |
| 3.9.1 原始數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)化處理 |
| 3.9.2 各雜交組合的關(guān)聯(lián)度分析 |
| 第四章 討論 |
| 4.1 轉(zhuǎn)基因品種的選育 |
| 4.2 紫花苜?？钩輨┢贩N的選育 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介 |
| 致謝 |
（9）新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性和利用潛力分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 1.1 苜蓿的重要價值 |
| 1.2 國內(nèi)外苜蓿種質(zhì)資源研究進展 |
| 1.2.1 世界苜蓿的起源中心說 |
| 1.2.2 中國苜蓿種質(zhì)資源的分布及生態(tài)類型劃分 |
| 1.2.3 國內(nèi)外苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性研究 |
| 1.2.4 苜蓿種質(zhì)資源抗病蟲性研究 |
| 1.2.5 苜蓿種質(zhì)資源的抗旱性研究 |
| 1.2.6 苜蓿種質(zhì)資源的耐鹽性研究 |
| 1.2.7 苜蓿種質(zhì)資源的抗寒性研究 |
| 1.3 本論文研究的背景、目的和意義 |
| 1.4 本論文研究內(nèi)容 |
| 2 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源形態(tài)學(xué)特征和農(nóng)藝性狀鑒定 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 試驗地概況 |
| 2.1.2 試驗材料 |
| 2.1.3 試驗設(shè)計和田間管理 |
| 2.1.4 試驗方法 |
| 2.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 形態(tài)特征多樣性 |
| 2.2.2 形態(tài)特征聚類分析 |
| 2.2.3 形態(tài)特征主成分分析 |
| 2.2.4 形態(tài)特征相關(guān)分析 |
| 2.2.5 農(nóng)藝性狀多樣性 |
| 2.2.6 農(nóng)藝性狀聚類分析 |
| 2.2.7 農(nóng)藝性狀主成分分析 |
| 2.2.8 農(nóng)藝性狀相關(guān)分析 |
| 2.2.9 秋眠性分析 |
| 2.3 小結(jié) |
| 3 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源營養(yǎng)成分分析 |
| 3.1 營養(yǎng)成分分析材料與方法 |
| 3.1.1 試驗材料 |
| 3.1.2 試驗方法 |
| 3.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源粗蛋白含量 |
| 3.2.2 粗纖維含量 |
| 3.2.3 氨基酸含量 |
| 3.3 小結(jié) |
| 4 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源抗旱、耐鹽性鑒定 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 試驗材料 |
| 4.1.2 試驗方法 |
| 4.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源抗旱性鑒定 |
| 4.2.2 新疆紫花苜蓿種質(zhì)的耐鹽性鑒定 |
| 4.3 小結(jié) |
| 5 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源基因組SSR遺傳多樣性鑒定 |
| 5.1 SSR研究材料與方法 |
| 5.1.1 SSR試驗材料 |
| 5.1.2 SSR試驗方法 |
| 5.2 SSR研究結(jié)果與分析 |
| 5.2.1 SSR擴增結(jié)果與多態(tài)性分析 |
| 5.2.2 SSR標(biāo)記鑒定的種質(zhì)遺傳多樣性和遺傳差異分析 |
| 5.2.3 SSR標(biāo)記的遺傳距離 |
| 5.2.4 SSR標(biāo)記聚類分析 |
| 5.3 小結(jié) |
| 6 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源基因組RAPD遺傳多樣性鑒定 |
| 6.1 RAPD研究材料與方法 |
| 6.1.1 RAPD研究試驗材料 |
| 6.1.2 RAPD研究試驗方法 |
| 6.2 RAPD研究結(jié)果與分析 |
| 6.2.1 RAPD擴增結(jié)果與多態(tài)性分析 |
| 6.2.2 RAPD鑒定的種質(zhì)遺傳多樣性和遺傳差異 |
| 6.2.3 RAPD標(biāo)記的遺傳距離 |
| 6.2.4 RAPD標(biāo)記聚類分析 |
| 6.3 小結(jié) |
| 7 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源基因組遺傳多樣性ISSR鑒定 |
| 7.1 ISSR分析材料與方法 |
| 7.1.1 ISSR試驗材料 |
| 7.1.2 ISSR試驗方法 |
| 7.2 ISSR研究結(jié)果與分析 |
| 7.2.1 ISSR擴增結(jié)果與多態(tài)性分析 |
| 7.2.2 ISSR鑒定的種質(zhì)遺傳多樣性和遺傳差異 |
| 7.2.3 ISSR標(biāo)記的遺傳距離 |
| 7.2.4 ISSR標(biāo)記聚類分析 |
| 7.3 小結(jié) |
| 8 討論與結(jié)論 |
| 8.1 討論 |
| 8.1.1 新疆紫花苜蓿種質(zhì)表型水平的可選擇性 |
| 8.1.2 新疆紫花苜蓿種質(zhì)的營養(yǎng)價值分析 |
| 8.1.3 新疆紫花苜蓿種質(zhì)的抗旱、耐鹽性評價 |
| 8.1.4 新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源特性和環(huán)境的關(guān)系分析 |
| 8.1.5 不同分子標(biāo)記鑒定出的親緣關(guān)系的相關(guān)性分析 |
| 8.1.6 SSR分子標(biāo)記鑒定的二維和三維主成分分析 |
| 8.2 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 附圖 |
| 個人簡介 |
| 導(dǎo)師簡介 |
| 致謝 |
（10）甘肅紅豆草原花青素合成途徑的兩個關(guān)鍵酶基因的克隆和功能分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮寫詞(Abbreviation) |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1. 原花青素的性質(zhì)及生物學(xué)功能 |
| 1.1 原花青素結(jié)構(gòu) |
| 1.2 原花青素的生物學(xué)功能 |
| 2.原花青素代謝途徑及其關(guān)鍵酶基因 |
| 3.原花青素在牧草育種中的應(yīng)用及進展 |
| 3.1 傳統(tǒng)育種 |
| 3.2 生物技術(shù)育種 |
| 4.抗草丁膦除草劑bar基因及其應(yīng)用 |
| 4.1 草丁膦的作用機理 |
| 4.2 bar基因的抗性機理 |
| 4.3 抗除草劑bar基因的應(yīng)用 |
| 5.紅豆草 |
| 5.1 紅豆草概況 |
| 5.2 紅豆草的生物學(xué)特性 |
| 5.3 紅豆草原花青素 |
| 6.科學(xué)問題的提出 |
| 7.研究目的及意義 |
| 8.主要研究內(nèi)容 |
| 9.技術(shù)路線 |
| 第二章 紅豆草不同生育期原花青素和花青素含量動態(tài)變化 |
| 1. 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 花青素含量測定 |
| 1.3 原花青素含量測定 |
| 2. 結(jié)果與分析 |
| 2.1 不同器官花青素含量變化 |
| 2.2 不同生育期花青素含量變化 |
| 2.3 可溶性原花青素在不同生育期和不同器官的變化 |
| 2.4 不溶性原花青素含量在不同生育期和不同器官的變化 |
| 2.5 原花青素總量在不同生育期和不同器官的變化 |
| 3. 討論 |
| 4. 小結(jié) |
| 第三章 甘肅紅豆草BAN和LAR基因的克隆與序列分析 |
| 1. 材料與方法 |
| 1.1 植物材料 |
| 1.2 菌株 |
| 1.3 試驗試劑和處理方法 |
| 1.4 總RNA提取方法 |
| 1.5 總RNA質(zhì)量檢測 |
| 1.6 First-Strand cDNA合成 |
| 1.7 克隆BAN和LAR基因 |
| 1.8 BAN和LAR基因生物信息學(xué)分析 |
| 1.9 BAN和LAR基因的組織特異性分析 |
| 2. 結(jié)果與分析 |
| 2.1 RNA的提取和瓊脂糖凝膠電泳檢測 |
| 2.2 BAN和LAR基因的擴增及克隆 |
| 2.3 BAN的cDNA序列和編碼的氨基酸及蛋白質(zhì) |
| 2.4 LAR基因的cDNA序列和編碼的氨基酸及蛋白質(zhì) |
| 2.5 不同器官BAN基因表達 |
| 2.6 不同器官LAR基因表達 |
| 3. 討論 |
| 3.1 甘肅紅豆草總RNA提取法的改良及其效果評價 |
| 3.2 甘肅紅豆草BAN的核酸和氨基酸序列特征分析 |
| 3.3 甘肅紅豆草LAR基因序列和表達分析 |
| 3.4 BAN和LAR基因組織特異表達特征 |
| 4.小結(jié) |
| 第四章 甘肅紅豆草BAN和LAR雙標(biāo)記植物表達載體的構(gòu)建及其對紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 1. 實驗材料 |
| 1.1 菌株與質(zhì)粒 |
| 1.2 植物材料 |
| 1.3 酶與試劑 |
| 1.4 培養(yǎng)基配制 |
| 1.5 種子消毒及培養(yǎng)條件 |
| 1.6 受體材料的制備 |
| 1.7 菌株培養(yǎng) |
| 1.8 菌液制備 |
| 2. 實驗方法 |
| 2.1 GFP基因的亞克隆 |
| 2.2 含BAN基因的雙標(biāo)記選擇載體的構(gòu)建 |
| 2.3 含LAR基因的雙標(biāo)記選擇載體的構(gòu)建 |
| 2.4 載體CPB-BAN-GFP和CPB-LAR-GFP轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌 |
| 2.5 農(nóng)桿菌侵染及共培養(yǎng) |
| 2.6 轉(zhuǎn)基因愈傷的檢測 |
| 2.7 原花青素含量檢測 |
| 3. 結(jié)果與分析 |
| 3.1 GFP基因的亞克隆 |
| 3.2 BAN基因的雙標(biāo)記植物表達載體的構(gòu)建 |
| 3.3 LAR基因的雙標(biāo)記植物表達載體的構(gòu)建 |
| 3.4 植物表達載體CPB-BAN-GFP和CPB-LAR-GFP轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌 |
| 3.5 紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因愈傷的獲得 |
| 3.6 轉(zhuǎn)基因愈傷的PCR檢測 |
| 3.7 轉(zhuǎn)基因愈傷GFP熒光檢測 |
| 3.8 轉(zhuǎn)基因愈傷抗除草劑濃度的確定 |
| 3.9 轉(zhuǎn)基因愈傷原花青素含量的檢測 |
| 4. 討論 |
| 5. 小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論、創(chuàng)新點與展望 |
| 1 結(jié)論 |
| 1.1 甘肅紅豆草不同器官原花青素和花青素含量季節(jié)變化特征 |
| 1.2 甘肅紅豆草原花青素生物合成相關(guān)基因的克隆和信息學(xué)分析 |
| 1.3 攜帶GFP和bar基因的雙標(biāo)記選擇植物表達載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)化分析 |
| 2 創(chuàng)新點 |
| 3.展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
| 導(dǎo)師簡介 |
四、Bar基因轉(zhuǎn)化草原1號苜蓿的研究（論文參考文獻）
- [1]共表達ZxNHX1-VP1-1紫花苜蓿的分子鑒定及ZxNHX1-PcCLCg紫花苜蓿的耐鹽性評價[D]. 林杉. 蘭州大學(xué), 2021(12)
- [2]苜蓿抗寒性鑒定及耐寒種質(zhì)篩選[D]. 王曉龍. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2021(01)
- [3]利用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯紫花苜蓿CCoAOMT及ALS基因的研究[D]. 馬倩. 蘭州大學(xué), 2021(09)
- [4]苜蓿種質(zhì)飼草產(chǎn)量及品質(zhì)評價與SSR標(biāo)記分析[D]. 王雪婷. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020(02)
- [5]紫花苜蓿落葉及營養(yǎng)品質(zhì)調(diào)控機理研究[D]. 成啟明. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020
- [6]Bar+CP4EPSPS基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究及抗性鑒定[J]. 王英哲,王一楠,任偉,徐安凱,劉艷芝,郝東云. 北方園藝, 2019(18)
- [7]轉(zhuǎn)Bar基因紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價[J]. 周仂,王英哲,徐博,譚晶,徐安凱. 草地學(xué)報, 2019(05)
- [8]抗除草劑紫花苜蓿雜交組合的篩選與評價[D]. 譚晶. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(03)
- [9]新疆紫花苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性和利用潛力分析[D]. 馬金星. 北京林業(yè)大學(xué), 2017(04)
- [10]甘肅紅豆草原花青素合成途徑的兩個關(guān)鍵酶基因的克隆和功能分析[D]. 陳春艷. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016(11)