一、鯊魚軟骨血管生成抑制因子的純化和功能（論文文獻(xiàn)綜述）
彭雯丹[1]（2012）在《重組鯊魚血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF純化工藝及其抑制腫瘤機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的：在構(gòu)建了重組工程菌BL21（DE3）/PET-3C/aSAIF-SUMO的基礎(chǔ)上，對(duì)重組鯊魚血管抑制因子（aSAIF）的高密度發(fā)酵條件及中試純化工藝進(jìn)行優(yōu)化，初步探討其抑制腫瘤生長(zhǎng)及血管生成的機(jī)制。方法：在5L發(fā)酵罐中進(jìn)行工程菌培養(yǎng)，優(yōu)化IPTG誘導(dǎo)濃度及時(shí)間點(diǎn)。利用離子交換層析和鎳柱親和層析對(duì)帶有組氨酸標(biāo)簽的重組鯊魚血管抑制因子融合蛋白His-SUMO-aSAIF進(jìn)行純化，并在純化過程中嘗試以HPLC監(jiān)測(cè)aSAIF-SUMO融合蛋白純化流程。純化后的融合蛋白進(jìn)行小分子泛素樣修飾蛋白（small ubiquitin-related modifier，SUMO）酶切，切除了SUMO蛋白后的非融合aSAIF經(jīng)鎳柱二次親和層析獲得，并進(jìn)行血管抑制活性檢測(cè)、流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡及周期情況、基因表達(dá)譜芯片分析等。結(jié)果：確立工程菌發(fā)酵罐培養(yǎng)的IPTG誘導(dǎo)時(shí)間點(diǎn)為接種3小時(shí)后，誘導(dǎo)濃度為1mmol/L。優(yōu)化后的純化工藝參數(shù)為：離子交換層析采用0.2mol/L NaCl進(jìn)行洗脫；親和層析則采用250mmol/L咪唑進(jìn)行洗脫；SUMO蛋白酶與融合蛋白的最佳酶切比例為1:480，酶切時(shí)間為1h。最終獲得的aSAIF蛋白純度可達(dá)95%，并證實(shí)其具有抑制血管生成的生物學(xué)活性，但可能并非通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡或周期變化發(fā)揮作用，通過表達(dá)譜芯片初步篩選出一部分差異基因，發(fā)現(xiàn)其主要聚集于細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程，并集中在細(xì)胞裝配與組織、骨骼肌肉系統(tǒng)發(fā)育及功能和細(xì)胞間信號(hào)與作用的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。結(jié)論：已成功建立aSAIF的發(fā)酵和純化工藝，并由基因芯片分析篩選出其調(diào)控的潛在基因及生物學(xué)進(jìn)程，為后續(xù)大規(guī)模生產(chǎn)及機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
馮剛,王斌,羅紅宇,曲有樂[2]（2011）在《海洋軟骨魚軟骨抗腫瘤物質(zhì)的研究進(jìn)展》文中提出篩選高效低毒的抗腫瘤藥物是海洋新藥研發(fā)最為重要的課題之一。軟骨魚軟骨中富含多肽、低分子量蛋白、糖蛋白和多糖等活性物質(zhì),可以作為新生血管生成抑制因子、腫瘤細(xì)胞抑制因子、免疫調(diào)節(jié)因子和抗入侵因子等用于腫瘤的治療和預(yù)防。本文對(duì)軟骨魚軟骨中活性物質(zhì)及其功效進(jìn)行綜述,將為軟骨的研究利用提供參考。
謝秋玲,姚晟,盧加,徐麗慧,陳小佳[3]（2009）在《鯊魚軟骨活性段蛋白在大腸桿菌中的融合表達(dá)及培養(yǎng)條件的優(yōu)化》文中研究指明采用三角搖瓶來(lái)摸索菌種BL21（DE3）/pET3C-aSCAIF表達(dá)目的蛋白的最優(yōu)發(fā)酵條件,并在此基礎(chǔ)上在Biotop CF-5L自動(dòng)控制發(fā)酵罐中,利用補(bǔ)料分批培養(yǎng)技術(shù),流加甘油,進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng).搖瓶培養(yǎng)最優(yōu)條件:2%接種量、25 mL LB培養(yǎng)基、37℃培養(yǎng)、0.5%的甘油做碳源,接種后4 h加入終濃度為0.5 mmol/L的IPTG,誘導(dǎo)4 h后目的蛋白表達(dá)量最高.菌種在Biotop CF-5L自動(dòng)控制發(fā)酵罐中的條件為:以10%的接種量接種到2.5 L發(fā)酵培養(yǎng)基中,設(shè)定溶氧30%,pH7.0,溫度37℃,通氣量3 L/min,流加甘油15 g,培養(yǎng)4 h后,加入終濃度為0.5 mmol/L的IPTG,誘導(dǎo)4 h后終止發(fā)酵,發(fā)酵罐中獲得的菌體量為62.1 g.
尚俊英[4]（2008）在《鯊魚軟骨提取物聯(lián)合螺旋藻硒多糖治療惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究說明目的:觀察超聲波用于螺旋藻硒多糖（Polysaccharide from Se-enrichedSpimlina Platensis,Se-PSP）提取的可行性,并對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化:分離純化Se-PSP并測(cè)定其糖與蛋白的含量,研究其體外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。方法:通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化超聲波法提取螺旋藻硒多糖的實(shí)驗(yàn)條件;三氯乙酸法去除蛋白,DEAE-纖維素層析柱及8 kDa～10 kDa的透析袋對(duì)Se-PSP粗品進(jìn)行分離純化,應(yīng)用硫酸-恩酮比色法、考馬斯亮藍(lán)G-250比色法,測(cè)定糖及蛋白的含量;用MTT比色法研究濃度為10μg/ml時(shí)Se-PSP總糖及其不同組分體外對(duì)SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,并研究不同濃度的Se-PSP2體外對(duì)SKOV-3細(xì)胞、HepG-2細(xì)胞、BGC-803細(xì)胞、CNE細(xì)胞和Tca-8113細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果:富硒螺旋藻干粉在pH 11和60℃的水浴條件下超聲波處理60 min提取率最高,糖含量最多;經(jīng)DEAE-纖維素柱層析分離得到4個(gè)不同分子量的多糖組分Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4;其中Se-PSP2組分是Se-PSP總糖的主要成分（含量占70.2%）,透析純化后糖含量為98.49%,蛋白含量為0.45%;MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示濃度在10μg/ml時(shí),Se-PSP總糖及Se-PSP1、Se-PSP2、Se-PSP3和Se-PSP4對(duì)SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率分別為（33.393±5.437）%、（22.290±8.399）%、（44.881±4.878）%、（45.354±4.931）%和（46.203±4.455）%;MTT比色法證實(shí)Se-PSP2能有效抑制SKOV-3、HepG-2、BGC-803和Tca-8113細(xì)胞的增殖,抗瘤譜較廣,抑制作用有劑量依賴趨勢(shì)。對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率有所不同,其中對(duì)SKOV-3卵巢癌細(xì)胞抑制作用最強(qiáng),抑制率最高達(dá)到（45.202±4.401）%,對(duì)CNE鼻咽癌細(xì)胞抑制作用較弱,抑制率最高為（22.238±2.481）%。結(jié)論:螺旋藻硒多糖最佳提取方案是pH11和60℃的水浴條件下超聲波處理60 min,分離純化后的Se-PSP總糖及各組分對(duì)SKOV-3細(xì)胞體外生長(zhǎng)均有抑制作用,Se-PSP2組分是Se-PSP總糖的主要成分,Se-PSP2能有效抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),抗瘤譜較廣,并對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞作用有所不同,有望成為治療惡性腫瘤的良藥。目的:研究一種從鯊魚軟骨（Shark Cartilage,SC）中提取低分子蛋白簡(jiǎn)便、快速的方法,并證實(shí)該方法提取的SC低分子蛋白能有效地抑制新生血管的形成。方法:以鯊魚軟骨為原料,粉碎后反復(fù)凍融,離心去沉淀,超濾、真空干燥后得到鯊魚軟骨低分子蛋白;光學(xué)顯微鏡及電鏡下觀察SC低分子蛋白作用72 h后,EVC304細(xì)胞的形態(tài)變化;體外實(shí)驗(yàn)觀察它對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、黏附和遷移的影響,用雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)測(cè)定其對(duì)新生血管形成的影響。結(jié)果:SC低分子蛋白作用后,光鏡觀察EVC304細(xì)胞生長(zhǎng)不良,細(xì)胞表面?zhèn)巫阆?形態(tài)變圓、變小,皺縮,聚集成團(tuán),胞漿內(nèi)顆粒增多,透亮度降低;電鏡觀察細(xì)胞核形態(tài)明顯不規(guī)則,有絲分裂相明顯減少;SC低分子蛋白在濃度超過50μg/ml時(shí)能有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,在濃度超過5μg/ml時(shí)能有效抑制內(nèi)皮細(xì)胞的黏附,并且此抑制作用均呈劑量依賴趨勢(shì);濃度在100μg/ml時(shí)EVC304細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為（36.770±2.800）%、黏附抑制率為（52.954±4.442）%和遷移運(yùn)動(dòng)抑制率為（68.01±5.65）%;SC低分子蛋白作用48 h后,陰性對(duì)照組雞胚絨毛尿囊膜的新生血管數(shù)目為（18.750±3.671）根,低分子蛋白實(shí)驗(yàn)組為（7.167±1.529）根,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,SC低分子蛋白能有效抑制雞胚絨毛尿囊膜的新生血管的形成。結(jié)論:我們采用將SC凍融超濾法獲取的鯊魚軟骨低分子蛋白,可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、黏附和遷移運(yùn)動(dòng),進(jìn)而抑制新生血管的形成,有望成為抑制腫瘤血管生長(zhǎng)的新型靶向藥物。目的:篩選鯊魚軟骨（Shark Cartilage,SC）低分子蛋白聯(lián)合螺旋藻硒多糖（Polysaccharide from Se-enriched Spirulina Platensis,Se-PSP）的最佳配伍濃度,觀察二者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)及免疫功能的影響。方法:SC低分子蛋白和Se-PSP分別按20∶1、10∶1、5∶1、2.5∶1、1:1、1∶2.5、1∶5、1∶10和1∶20質(zhì)量比混合,測(cè)定其體外對(duì)SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)和黏附運(yùn)動(dòng)的抑制作用,對(duì)雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成的抑制作用;選Balb/c小鼠50只,隨機(jī)分為5組,連續(xù)給藥10 d后,用刀豆蛋白A（ConA）誘導(dǎo)和改良MTT法觀察各實(shí)驗(yàn)組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖情況;選C57BL/6小鼠60只,隨機(jī)分為6組,建立荷Lewis肺癌腫瘤小鼠模型,連續(xù)給藥10 d后,計(jì)算各組瘤體抑制率。結(jié)果:SC低分子蛋白聯(lián)合Se-PSP對(duì)SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)和黏附運(yùn)動(dòng)均有抑制作用,濃度比5∶1時(shí)作用最強(qiáng),抑制率分別是（51.108±4.618）%、（53.303±5.194）%;雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),當(dāng)配伍濃度比在20∶1、10∶1和5∶1時(shí)各實(shí)驗(yàn)組雞胚絨毛尿囊膜新生血管數(shù)目分別為（6.02±0.748）、（5.200±0.980）和（5.600±0.800）根,三者兩兩比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）,但與其他配伍組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）:小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,5∶1配伍組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)（1.831±0.035）明顯高于SC低分子蛋白組（1.533±0.046）和Se-PSP組（1.624±0.043）,三者分別與生理鹽水組（1.367±0.058）相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）,SC低分子蛋白和Se-PSP均有促進(jìn)Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用,且聯(lián)合應(yīng)用療效增強(qiáng);腫瘤生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,5∶1配伍組瘤體抑制率明顯高于SC低分子蛋白組和Se-PSP組,5∶1混合物+環(huán)磷酰胺組明顯高于環(huán)磷酰胺組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）,SC低分子蛋白和Se-PSP組分別與陰性對(duì)照組相比,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論:鯊魚軟骨低分子蛋白和Se-PSP分別按5∶1質(zhì)量比混合是理想的配伍,二者聯(lián)合對(duì)實(shí)體瘤生長(zhǎng)的抑制作用有聯(lián)合增效作用,并能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖,提高小鼠免疫力,與化療藥物環(huán)磷酰胺聯(lián)合有增強(qiáng)療效的作用,有望成為治療惡性腫瘤的的新藥。
尚俊英,謝裕安,楊帆,楊志國(guó),吳昊[5]（2008）在《鯊魚軟骨低分子蛋白的提取及其抑制新生血管形成的初步研究》文中研究說明目的研究一種從鯊魚軟骨簡(jiǎn)便、快速提取低分子蛋白的方法,并證實(shí)該方法提取的鯊魚軟骨低分子蛋白能有效的抑制新生血管的形成。方法以鯊魚軟骨為原料,粉碎后反復(fù)凍融,離心去沉淀,超濾、真空干燥后得到鯊魚軟骨低分子蛋白。體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、黏附和遷移的影響,用雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)測(cè)定對(duì)新生血管形成的影響。結(jié)果鯊魚軟骨低分子蛋白能顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率為（36.77±2.98）%、黏附抑制率為（52.95±4.48）%和遷移運(yùn)動(dòng)抑制率為（68.05±4.04）%,可顯著抑制雞胚絨毛尿囊膜的新生血管的形成。結(jié)論本研究所提取的鯊魚軟骨低分子蛋白可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、黏附和遷移運(yùn)動(dòng),進(jìn)而抑制新生血管的生長(zhǎng)。
尚俊英,謝裕安[6]（2008）在《鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)新生血管形成的影響》文中研究說明目的研究一種從鯊魚軟骨（shark cartilag,SC）中簡(jiǎn)便、快速提取低分子蛋白的方法,并證實(shí)該方法提取的鯊魚軟骨低分子蛋白能有效地抑制新生血管的形成。方法以鯊魚軟骨為原料,粉碎后反復(fù)凍融,離心去沉淀,超濾、真空干燥后得到鯊魚軟骨低分子蛋白。體外實(shí)驗(yàn)測(cè)定它對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、黏附和遷移的影響,用雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)測(cè)定對(duì)血管生成的影響。結(jié)果鯊魚軟骨低分子蛋白能顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)[MTT法抑制率為（42.026±3.530%）]、黏附[抑制率為（66.783±5.220）%]和遷移運(yùn)動(dòng)[抑制率為（86.760±12.487）%],可顯著抑制雞胚絨毛尿囊膜的新生血管的形成。結(jié)論鯊魚軟骨低分子蛋白可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、黏附和遷移運(yùn)動(dòng),進(jìn)而抑制新生血管的生長(zhǎng)。
雷呈祥,彭武林,馬麗[7]（2007）在《鯊魚軟骨活性物質(zhì)的研究現(xiàn)狀》文中研究說明鯊魚是大型軟骨魚類,其軟骨含有多種活性物質(zhì),具有抑制新生血管的生成、抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移和生長(zhǎng)、增強(qiáng)免疫和消炎等作用。軟骨粗提物或純化制劑在臨床上均有較好的抑制腫瘤作用,但是這種作用一直存在爭(zhēng)論,尚待進(jìn)一步的研究加以確證。
熊和麗[8]（2007）在《鹿茸活性成分的提取分離及其抗腫瘤作用研究》文中提出目的:鹿茸是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥,具有廣泛的藥理學(xué)活性。鹿茸作為一種特殊的軟骨,是一個(gè)天然的細(xì)胞因子庫(kù),其中含有大量的蛋白質(zhì)及蛋白多糖。近年來(lái)大量研究證明,蛋白多糖具有抗腫瘤作用,而以往對(duì)鹿茸的研究主要是醇提物,其中蛋白質(zhì)和多糖類水溶性物質(zhì)研究較少,對(duì)其水溶性物質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的抗腫瘤研究更是鮮見,因此本研究通過緩沖液提取出水溶性蛋白質(zhì)及蛋白多糖,系統(tǒng)的研究鹿茸水溶性提取物的抗腫瘤作用及其機(jī)理,同時(shí)研究鹿茸中蛋白多糖與化療藥物聯(lián)合用藥時(shí)的抗腫瘤效果并將其與鹿茸粗提物的抗腫瘤效果進(jìn)行比較。方法:利用Tris緩沖液提取出鹿茸中水溶性成分,并分別用Bradford法和天青I法檢測(cè)其中蛋白質(zhì)及蛋白多糖含量;采用DEAE Sepharose FF陰離子交換樹脂分離出水溶性提取物中的蛋白多糖,Bradford法和天青I法示蹤檢測(cè)洗脫液中蛋白質(zhì)和蛋白多糖,根據(jù)洗脫曲線濃縮收集蛋白多糖組分,SDS聚丙酰胺凝膠電泳鑒定分離效果,凍干提取分離物;建立移植性S180肉瘤模型,隨機(jī)將植瘤鼠分為7組,分別為陰性對(duì)照組（陰性對(duì)照組）,陽(yáng)性對(duì)照組（環(huán)磷酰胺,25mg/kg）,鹿茸蛋白多糖低劑量組（40mg/kg）、中劑量組（80mg/kg）、高劑量組（160mg/kg）,鹿茸粗提物組（400mg/kg）,聯(lián)合用藥組（蛋白多糖80mg/kg+環(huán)磷酰胺25mg/kg）,連續(xù)灌胃給藥10d,陰性對(duì)照組灌胃生理鹽水,陽(yáng)性對(duì)照組隔天腹腔注射環(huán)磷酰胺,第11d脫頸椎處死小鼠,剝離腫瘤組織和脾,制備腹腔巨噬細(xì)胞懸液和脾淋巴細(xì)胞懸液,巨噬細(xì)胞吞噬中性紅實(shí)驗(yàn),T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),體內(nèi)抑瘤活性及生命延長(zhǎng)率,稱重瘤組織和脾,計(jì)算抑瘤率和脾指數(shù)。結(jié)果:經(jīng)檢測(cè)鹿茸頂部蛋白質(zhì)含量占鹿茸干重13.13%,蛋白多糖占鹿茸干重1.67%。離子交換層析在NaCl濃度為0.7mol/L,0.8mol/L,0.9mol/L時(shí)出現(xiàn)洗脫峰,經(jīng)濃縮收集得到三個(gè)蛋白多糖組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,其蛋白多糖含量分別占總蛋白多糖含量的45.25%、25.15%、18.26% ,蛋白多糖提取率為88.66%。移植性腫瘤S180免疫調(diào)節(jié)試驗(yàn)結(jié)果表明,灌服蛋白多糖高劑量、鹿茸粗提物及聯(lián)合用藥荷瘤鼠各組間日增重?zé)o顯著差異,脾指數(shù),T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力,巨噬細(xì)胞吞噬中性紅功能均高于陰性對(duì)照組（P<0.05）;蛋白多糖高劑量組荷瘤鼠T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力,巨噬細(xì)胞吞噬中性紅功能高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）,脾指數(shù)無(wú)顯著差異;鹿茸粗提物組荷瘤鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能和T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）,B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能和脾指數(shù)與陽(yáng)性對(duì)照組間無(wú)顯著差異;聯(lián)合用藥組荷瘤鼠脾指數(shù),T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能均高于蛋白多糖中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組,但僅T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能有顯著差異（P<0.05）。移植性腫瘤S180抑制試驗(yàn)結(jié)果表明,鹿茸粗提物組抑瘤率（78.15%）與陽(yáng)性對(duì)照組（39.87%）間存在極顯著差異（P<0.01）,聯(lián)合用藥組體內(nèi)抑瘤率（50.16%）高于陽(yáng)性對(duì)照組和蛋白多糖中劑量組（-23.07%）,但與陽(yáng)性對(duì)照組間不存在顯著差異;蛋白多糖高劑量組抑瘤率（23.47%）低于30%;生命延長(zhǎng)率方面蛋白多糖高劑量組（119.79%）、鹿茸粗提物組（119.79%）均高于陽(yáng)性對(duì)照組（41.67%）,但無(wú)顯著差異;聯(lián)合用藥組生命延長(zhǎng)率（212.50%）高于蛋白多糖中劑量組（103.13%）和陽(yáng)性對(duì)照組,且與陽(yáng)性對(duì)照組間有極顯著差異（P<0.01）。結(jié)論:鹿茸頂部蛋白質(zhì)含量占鹿茸干重的13.13%;蛋白多糖含量占鹿茸干重1.67%;利用DEAE Sepharose F.F陰離子交換層析能快速分離出鹿茸中蛋白多糖,此法相對(duì)快速,簡(jiǎn)便;通過移植腫瘤S180抑制試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),鹿茸粗提物對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤效果最好,抑瘤率達(dá)78.15%;聯(lián)合用藥組荷瘤鼠的生命延長(zhǎng)率最高,達(dá)212.50%;移植腫瘤S180免疫調(diào)節(jié)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),蛋白多糖各劑量組對(duì)荷瘤鼠的免疫調(diào)節(jié)作用呈現(xiàn)一定劑量依賴關(guān)系,且蛋白多糖劑量達(dá)160mg/kg時(shí),其免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于鹿茸粗提物和聯(lián)合用藥;蛋白多糖的免疫調(diào)節(jié)功能強(qiáng)于鹿茸粗提物;蛋白多糖與化療藥物聯(lián)用可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)化療藥物的耐受性。
鄭蘭紅[9]（2007）在《鯊魚軟骨抗血管生成多肽的分離純化及其生物活性》文中研究指明以血管生成為靶點(diǎn)的抗腫瘤策略是抗腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多天然和化學(xué)合成的抗血管生成藥物。鯊魚軟骨作為抗新生血管生成因子的重要來(lái)源的研究已有20多年的歷史,很多研究顯示鯊魚軟骨提取物有抗血管生成活性。但鯊魚軟骨活性多肽的完整分子結(jié)構(gòu)一直未見報(bào)道;鯊魚軟骨活性多肽干擾血管生成通路的信號(hào)途徑尚不明確。本文應(yīng)用鹽酸胍抽提、丙酮分級(jí)沉淀、超濾、凝膠層析等分離技術(shù),從青鯊（Prionace glauca）軟骨中分離純化并鑒定了一種新的具有抗新生血管生成活性的多肽。經(jīng)SDS-PAGE和N-末端氨基酸序列分析顯示,該多肽分子量為15500 Da,采用蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明該多肽是一種新發(fā)現(xiàn)的鯊魚軟骨多肽（Polypeptide from Prionace glauca,PG155）。體外實(shí)驗(yàn)顯示,PG155抑制內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）介導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cell ,HUVEC）遷移和管腔形成,并呈劑量依賴關(guān)系。200μg/ml PG155對(duì)牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（Bovine Aortic Endothelial Cells,BAECs）和HUVECs及以下癌細(xì)胞,包括人肝癌細(xì)胞（human hepatoma Bel-7402 cells,Bel-7402）、口腔上皮癌細(xì)胞（human oral epidermoid carcinoma KB cells ,KB）、人結(jié)腸癌細(xì)胞（human colon cancer HCT-18 cells,HCT-18）和人乳腺癌細(xì)胞（human breast MCF7 cancer cells ,MCF7）的增殖均無(wú)抑制作用,說明PG155無(wú)細(xì)胞毒作用。20μg/ml PG155顯著抑制HUVEC的遷移和管腔形成;40-80μg/ml PG155對(duì)VEGF介導(dǎo)的HUVEC的遷移和管腔形成幾乎完全抑制。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,PG155顯著抑制斑馬魚胚胎模型新生血管生成,并呈劑量依賴關(guān)系。形態(tài)學(xué)觀察表明PG155顯著抑制斑馬魚胚胎腸下靜脈（subintestinal vessels, SIVs）的生長(zhǎng),隨著濃度的升高SIVs的生長(zhǎng)可受到完全抑制。堿性磷酸酶染色分析顯示,在一定濃度范圍內(nèi),PG155隨著濃度的升高對(duì)斑馬魚胚胎整體血管生成抑制作用依次增強(qiáng)。160μg/ml PG155會(huì)引起斑馬魚胚胎心臟功能障礙。由海洋生物中發(fā)現(xiàn)新的腫瘤新生血管生成抑制劑國(guó)內(nèi)外的報(bào)道較少,我們的工作表明鯊魚軟骨可作為血管生成抑制劑的重要來(lái)源,鯊魚軟骨活性多肽PG155由于具有極低的細(xì)胞毒作用,并能抑制VEGF介導(dǎo)的血管生成過程,有希望成為一類新型抗腫瘤藥物。
賀麗虹,黃建華,沈頌東,孫少勇[10]（2005）在《鯊魚中的抗腫瘤活性物質(zhì)及其作用機(jī)制》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理
二、鯊魚軟骨血管生成抑制因子的純化和功能（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、鯊魚軟骨血管生成抑制因子的純化和功能（論文提綱范文）
（1）重組鯊魚血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF純化工藝及其抑制腫瘤機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 腫瘤的血管生成 |
| 1.2 腫瘤血管生成抑制因子 |
| 1.3 鯊魚血管生成抑制因子 |
| 1.4 鯊魚軟骨抗腫瘤活性成分及其相關(guān)機(jī)制 |
| 1.4.1 鯊魚軟骨活性物質(zhì)對(duì)腫瘤新生血管的抑制作用 |
| 1.4.2 鯊魚軟骨活性物質(zhì)對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用 |
| 1.4.3 鯊魚軟骨活性物質(zhì)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng) |
| 1.5 SUMO 融合蛋白系統(tǒng) |
| 1.5.1 融合蛋白技術(shù) |
| 1.5.2 SUMO 蛋白簡(jiǎn)介 |
| 1.5.3 SUMO 融合蛋白系統(tǒng)優(yōu)勢(shì) |
| 1.5.4 SUMO 融合蛋白系統(tǒng)應(yīng)用 |
| 1.6 高效液相色譜技術(shù)及其應(yīng)用 |
| 1.7 血管生成的相關(guān)信號(hào)通路 |
| 1.7.1 VEGF-VEGFR 信號(hào)通路 |
| 1.7.2 Ang-Tie 信號(hào)通路 |
| 1.7.3 Dll4-Notch 信號(hào)通路 |
| 1.8 表達(dá)譜芯片技術(shù)及其應(yīng)用 |
| 1.9 本研究主要內(nèi)容及技術(shù)路線 |
| 1.9.1 研究?jī)?nèi)容 |
| 1.9.2 本研究技術(shù)路線 |
| 第二章 實(shí)驗(yàn)材料及儀器 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒及菌株 |
| 2.1.2 主要試劑與試劑盒 |
| 2.1.3 層析填料及 HPLC 高效液相色譜柱 |
| 2.1.4 常用緩沖液及配方 |
| 2.2 儀器及設(shè)備 |
| 第三章 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.1. 工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 發(fā)酵罐培養(yǎng)條件的優(yōu)化 |
| 3.1.1. 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 的制備 |
| 3.1.2 發(fā)酵罐培養(yǎng)準(zhǔn)備工作 |
| 3.1.3 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 發(fā)酵罐培養(yǎng)生長(zhǎng)曲線 |
| 3.1.4 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 發(fā)酵罐培養(yǎng)條件優(yōu)化 |
| 3.2 ASAIF 蛋白中試純化工藝摸索 |
| 3.2.1 菌體破碎上清液的獲取 |
| 3.2.2 Q Sepharose 線性洗脫梯度摸索 |
| 3.2.3 Q Sepharose 分步洗脫梯度確立 |
| 3.2.4 Q Sepharose 載量摸索 |
| 3.2.5 Ni Sepharose FF 親和層析 |
| 3.2.6 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的 sumo 酶切 |
| 3.2.7 aSAIF 蛋白的純化 |
| 3.2.8 aSAIF 超濾脫鹽及凍干 |
| 3.2.9 BCA 法蛋白濃度測(cè)定 |
| 3.2.10 融合蛋白半定量灰度掃描 |
| 3.2.11 SDS-PAGE 電泳 |
| 3.3 HPLC 檢測(cè)融合蛋白方法的建立 |
| 3.3.1 融合蛋白在不同介質(zhì)上的高效液相色譜行為探索 |
| 3.3.2 融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脫峰鑒定 |
| 3.3.3 兩種樣品溶液下的融合蛋白檢測(cè) |
| 3.3.4 菌體破碎上清中融合蛋白的檢測(cè) |
| 3.4. ASAIF 蛋白活性及功能鑒定 |
| 3.4.1 HUVEC 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 3.4.2 WST-8 增殖抑制實(shí)驗(yàn) |
| 3.4.3 細(xì)胞凋亡及周期檢測(cè) |
| 3.4.4 人源基因表達(dá)譜芯片檢測(cè) |
| 3.4.5 IPA 生物信息學(xué)分析 |
| 第四章 結(jié)果與分析 |
| 4.1 工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 發(fā)酵罐培養(yǎng)條件的優(yōu)化 |
| 4.1.1 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 生長(zhǎng)曲線 |
| 4.1.2 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 發(fā)酵罐培養(yǎng)條件優(yōu)化 |
| 4.2 重組 ASAIF 中試純化工藝摸索 |
| 4.2.1 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的純化 |
| 4.2.2 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的酶切 |
| 4.2.3 ASAIF 純化工藝得率分析 |
| 4.3 HPLC 檢測(cè)融合蛋白方法的建立 |
| 4.3.1 融合蛋白 aSAIF-SUMO 在不同介質(zhì)上的高效液相色譜行為探索 |
| 4.3.2 融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脫峰鑒定 |
| 4.3.3 兩種樣品溶液下的融合蛋白檢測(cè)情況 |
| 4.3.4 菌體破碎上清中融合蛋白的檢測(cè)情況 |
| 4.4 ASAIF 蛋白活性及功能鑒定 |
| 4.4.1 WST-8 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) |
| 4.4.2 細(xì)胞凋亡及周期檢測(cè) |
| 4.4.3 人源全基因表達(dá)譜芯片檢測(cè) |
| 第五章 討論 |
| 5.1 工程菌高密度發(fā)酵優(yōu)化策略 |
| 5.2 ASAIF 純化工藝優(yōu)化策略 |
| 5.3 ASAIF 純化工藝得率分析 |
| 5.4 HPLC 檢測(cè)融合蛋白方法的建立 |
| 5.5 ASAIF 抑制血管生成機(jī)制初探 |
| 第六章 總結(jié)和展望 |
| 6.1 總結(jié) |
| 6.2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 碩士期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（2）海洋軟骨魚軟骨抗腫瘤物質(zhì)的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 海洋軟骨魚軟骨多糖 |
| 1.1 軟骨多糖新生血管生成抑制因子 |
| 1.2 軟骨多糖腫瘤細(xì)胞抑制因子 |
| 1.3 軟骨多糖免疫調(diào)節(jié)因子 |
| 2 海洋軟骨魚軟骨低分子量蛋白 |
| 2.1 軟骨蛋白新生血管生成抑制因子 |
| 2.2 海洋軟骨低分子量蛋白免疫調(diào)節(jié)因子 |
| 3 海洋軟骨抗腫瘤蛋白多糖類 |
| 4 展望 |
（3）鯊魚軟骨活性段蛋白在大腸桿菌中的融合表達(dá)及培養(yǎng)條件的優(yōu)化（論文提綱范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果 |
| 2.1 三角搖瓶培養(yǎng)條件的優(yōu)化 |
| 2.1.1 重組aSCAIF的表達(dá)時(shí)間的優(yōu)化 |
| 2.1.2 IPTG加入時(shí)間的優(yōu)化 |
| 2.1.3 IPTG濃度的優(yōu)化 |
| 2.1.4 培養(yǎng)基裝量的優(yōu)化 |
| 2.1.5 接種量的優(yōu)化 |
| 2.1.6 碳源種類的優(yōu)化 |
| 2.1.7 碳源質(zhì)量濃度的優(yōu)化 |
| 2.2 5 L 生物反應(yīng)器的發(fā)酵 |
| 3 討論 |
（4）鯊魚軟骨提取物聯(lián)合螺旋藻硒多糖治療惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 主要英漢縮略對(duì)照表 |
| 前言 |
| 一、螺旋藻硒多糖提取、純化及其體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 富硒螺旋藻超聲波提取方案的優(yōu)化 |
| 2.2 螺旋藻硒多糖粗品的純化實(shí)驗(yàn) |
| 2.3 螺旋藻硒多糖體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn) |
| 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 4 結(jié)果 |
| 4.1 超聲波提取螺旋藻硒多糖粗品測(cè)定結(jié)果 |
| 4.2 螺旋藻硒多糖的分離純化結(jié)果 |
| 4.3 各Se-PSP組分對(duì)SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制結(jié)果 |
| 4.4 螺旋藻硒多糖Se-PSP_2抑制瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的有效濃度及量效關(guān)系 |
| 5 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 二、鯊魚軟骨低分子蛋白的提取及其抑制新生血管形成的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 鯊魚軟骨低分子蛋白的提取方法 |
| 2.2 不同濃度的鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)EVC304細(xì)胞生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.3 鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)EVC304細(xì)胞形態(tài)的影響實(shí)驗(yàn) |
| 2.4 EVC304細(xì)胞的電鏡標(biāo)本的制備及觀察 |
| 2.5 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)EVC304細(xì)胞的黏附抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.6 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)EVC304細(xì)胞遷移抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.7 鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管抑制實(shí)驗(yàn) |
| 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 4 結(jié)果 |
| 4.1 鯊魚軟骨低分子蛋白的對(duì)EVC304細(xì)胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響 |
| 4.2 鯊魚軟骨低分子蛋白抑制EVC304細(xì)胞生長(zhǎng)有效濃度及量效關(guān)系 |
| 4.3 鯊魚軟骨低分子蛋白抑制EVC304細(xì)胞黏附有效濃度及量效關(guān)系 |
| 4.4 鯊魚軟骨低分子蛋白抑制EVC304細(xì)胞遷移的結(jié)果 |
| 4.5 鯊魚軟骨低分子蛋白抑制雞胚絨毛尿囊膜新生血管形成 |
| 5 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 三、鯊魚軟骨低分子蛋白聯(lián)合螺旋藻硒多糖抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 鯊魚軟骨低分子蛋白聯(lián)合Se-PSP_2藥物配伍濃度篩選 |
| 2.2 Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) |
| 2.3 對(duì)移植性小鼠Lewis肺癌療效觀察實(shí)驗(yàn) |
| 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 4 結(jié)果 |
| 4.1 鯊魚軟骨低分子蛋白聯(lián)合Se-PSP_2抗腫瘤的有效配伍濃度 |
| 4.2 鯊魚軟骨低分子蛋白聯(lián)合Se-PSP_2促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果 |
| 4.3 鯊魚軟骨低分子蛋白聯(lián)合Se-PSP_2抑制腫瘤生長(zhǎng)結(jié)果 |
| 5 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 四、文獻(xiàn)綜述 |
| 綜述1.螺旋藻硒多糖抗腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展 |
| 綜述2.鯊魚軟骨血管生成抑制因子國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄 |
| 致謝 |
（6）鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)新生血管形成的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與試劑 |
| 2 方法 |
| 2.1 鯊魚軟骨低分子蛋白的提取 |
| 2.2 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株HUEVC生長(zhǎng)的影響 |
| 2.3 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附的抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.4 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.5 鯊魚軟骨低分子蛋白體外對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管抑制實(shí)驗(yàn) |
| 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)HUEVC細(xì)胞株生長(zhǎng)、黏附和遷移的影響 |
| 3.2 鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)雞胚絨毛尿囊膜血管的抑制 |
| 4 討論 |
（7）鯊魚軟骨活性物質(zhì)的研究現(xiàn)狀（論文提綱范文）
| 1 鯊魚軟骨的活性成分 |
| 2 鯊魚軟骨的作用 |
| 2.1 對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用 |
| 2.2 對(duì)新生血管生長(zhǎng)的抑制作用 |
| 2.3 抗氧化作用 |
| 2.4 增強(qiáng)機(jī)體免疫力 |
| 3 鯊魚軟骨制劑的臨床應(yīng)用 |
| 3.1 用于輔助治療腫瘤 |
| 3.2 用于輔助治療關(guān)節(jié)炎 |
| 4 鯊魚軟骨活性物質(zhì)研究中需注意的幾個(gè)問題 |
| 4.1 軟骨與腫瘤的關(guān)系 |
| 4.2 軟骨中不同的活性物質(zhì) |
| 4.3 軟骨的來(lái)源 |
（8）鹿茸活性成分的提取分離及其抗腫瘤作用研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 鹿茸研究概況 |
| 1.1.1 鹿茸在傳統(tǒng)中醫(yī)中的應(yīng)用 |
| 1.1.2 鹿茸化學(xué)成分 |
| 1.1.3 鹿茸的藥理學(xué)研究 |
| 1.1.4 鹿茸在抗腫瘤上的應(yīng)用 |
| 1.2 軟骨的抗腫瘤作用 |
| 1.2.1 血管生成抑制因子 |
| 1.2.2 抗腫瘤因子（anti-tumor factor） |
| 1.3 蛋白多糖的抗腫瘤作用 |
| 1.3.1 核心蛋白聚糖（decorin）抗腫瘤作用 |
| 1.3.2 聚合PG 的抗腫瘤作用 |
| 1.4 本課題的提出及其目的 |
| 第二章 鹿茸活性成分的提取及其含量測(cè)定 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 鹿茸干物質(zhì)含量測(cè)定 |
| 2.2.2 蛋白含量測(cè)定 |
| 2.2.3 蛋白多糖含量測(cè)定 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 活性成分提取 |
| 2.3.2 鹿茸干物質(zhì)含量測(cè)定 |
| 2.3.3 鹿茸蛋白質(zhì)含量測(cè)定 |
| 2.3.4 蛋白多糖的含量測(cè)定 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 鹿茸中活性成分分離及其鑒定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 洗脫液中蛋白多糖的鑒定 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 粗提液洗脫曲線 |
| 3.2.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 蛋白多糖的分離 |
| 3.3.2 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 鹿茸活性成分的抗腫瘤作用及其機(jī)制 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 鹿茸提取物對(duì)荷瘤鼠免疫調(diào)節(jié)作用 |
| 4.2.2 鹿茸活性提取物對(duì)移植瘤的抑制作用 |
| 4.2.3 荷瘤小鼠的病理學(xué)觀察 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 鹿茸活性提取物的免疫調(diào)節(jié)功能 |
| 4.3.2 鹿茸提取物對(duì)移植瘤的抑制作用 |
| 4.3.3 鹿茸提取物對(duì)荷瘤鼠的各組織器官的影響 |
| 結(jié)論 |
| 附圖 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（9）鯊魚軟骨抗血管生成多肽的分離純化及其生物活性（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一節(jié) 血管生成與腫瘤治療 |
| 1. 腫瘤生成研究 |
| 2. 血管生成研究 |
| 3. 血管生成與腫瘤治療的關(guān)系 |
| 第二節(jié) 腫瘤新生血管生成抑制作為一種抗腫瘤策略 |
| 1. 抗血管生成的主要治療靶點(diǎn) |
| 2. 抗血管生成抑制劑的臨床研究 |
| 3. 鯊魚軟骨血管生成抑制因子國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀 |
| 4. 斑馬魚作為一種新型的腫瘤新生血管生成檢測(cè)模型 |
| 5. 腫瘤新生血管生成抑制研究展望 |
| 第三節(jié) 研究目的和意義 |
| 第二章 鯊魚軟骨抗新生血管生成多肽PG155 的分離純化 |
| 第一節(jié) 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 鯊魚軟骨多肽的分離純化 |
| 3. SDS-PAGE檢測(cè) |
| 4. 質(zhì)譜分析 |
| 5. N -末端氨基酸序列分析 |
| 第二節(jié) 結(jié)果 |
| 1. 鯊魚軟骨粗提物的制備 |
| 2. 鯊魚軟骨抗新生血管生成活性多肽的制備 |
| 3. 鯊魚軟骨多肽SDS-PAGE分析結(jié)果 |
| 4. 質(zhì)譜分析結(jié)果 |
| 5. N-末端分析結(jié)果 |
| 第三節(jié) 討論 |
| 第三章 PG155 在體外對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞遷移和管腔形成的影響 |
| 第一節(jié) 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 2. MTT法檢測(cè)PG155 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞增殖的影響 |
| 3. BrdU檢測(cè)PG155 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響 |
| 4. PG155 對(duì)VEGF介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移實(shí)驗(yàn) |
| 5. PG155 對(duì)VEGF介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的管腔形成實(shí)驗(yàn) |
| 第二節(jié) 結(jié)果 |
| 1. PG155 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用 |
| 2. PG155 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用 |
| 3. PG155 對(duì)VEGF介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移的抑制作用 |
| 4. PG155 對(duì)VEGF介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的管腔形成的抑制作用 |
| 第三節(jié) 討論 |
| 第四章 PG155 對(duì)斑馬魚胚胎新生血管生成的影響 |
| 第一節(jié) 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 形態(tài)觀察法檢測(cè)PG155 在斑馬魚胚胎體內(nèi)的抗血管生成活性 |
| 3. 定量EAP染色法檢測(cè)PG155 對(duì)斑馬魚胚胎整體的抗血管生成活性 |
| 第二節(jié) 結(jié)果 |
| 1. PG155 對(duì)斑馬魚胚胎新生血管生成的抑制作用 |
| 2. PG155 對(duì)斑馬魚胚胎整體血管生成的抑制作用 |
| 第三節(jié) 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 縮略語(yǔ) |
| 發(fā)表文章目錄 |
| 專利情況 |
| 致謝 |
（10）鯊魚中的抗腫瘤活性物質(zhì)及其作用機(jī)制（論文提綱范文）
| 1 鯊魚軟骨中的抗腫瘤活性物質(zhì)及作用機(jī)制 |
| 1.1 腫瘤新生血管生成抑制因子 |
| 1.2 免疫調(diào)節(jié)因子 |
| 1.3 抗入侵因子和腫瘤細(xì)胞抑制因子 |
| 1.4 調(diào)節(jié)前列腺素和血栓素水平 |
| 1.5 抗氧化作用 |
| 2 鯊魚肝臟中的抗腫瘤活性物質(zhì)及機(jī)制 |
| 2.1 角鯊烯 |
| 2.2 鯊魚肝油 |
四、鯊魚軟骨血管生成抑制因子的純化和功能（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]重組鯊魚血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF純化工藝及其抑制腫瘤機(jī)制研究[D]. 彭雯丹. 暨南大學(xué), 2012(10)
- [2]海洋軟骨魚軟骨抗腫瘤物質(zhì)的研究進(jìn)展[J]. 馮剛,王斌,羅紅宇,曲有樂. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011(02)
- [3]鯊魚軟骨活性段蛋白在大腸桿菌中的融合表達(dá)及培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 謝秋玲,姚晟,盧加,徐麗慧,陳小佳. 遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2009(04)
- [4]鯊魚軟骨提取物聯(lián)合螺旋藻硒多糖治療惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 尚俊英. 廣西醫(yī)科大學(xué), 2008(10)
- [5]鯊魚軟骨低分子蛋白的提取及其抑制新生血管形成的初步研究[J]. 尚俊英,謝裕安,楊帆,楊志國(guó),吳昊. 廣西醫(yī)學(xué), 2008(02)
- [6]鯊魚軟骨低分子蛋白對(duì)新生血管形成的影響[J]. 尚俊英,謝裕安. 基層醫(yī)學(xué)論壇, 2008(04)
- [7]鯊魚軟骨活性物質(zhì)的研究現(xiàn)狀[J]. 雷呈祥,彭武林,馬麗. 海軍醫(yī)學(xué)雜志, 2007(03)
- [8]鹿茸活性成分的提取分離及其抗腫瘤作用研究[D]. 熊和麗. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2007(01)
- [9]鯊魚軟骨抗血管生成多肽的分離純化及其生物活性[D]. 鄭蘭紅. 中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）, 2007(04)
- [10]鯊魚中的抗腫瘤活性物質(zhì)及其作用機(jī)制[J]. 賀麗虹,黃建華,沈頌東,孫少勇. 海洋科學(xué), 2005(11)
標(biāo)簽：血管生成論文; 多糖論文; 蛋白質(zhì)純化論文; 科普論文;