一、拓撲異構酶抑制劑的臨床應用（論文文獻綜述）
馬潔,李荀,劉兆鵬[1]（2021）在《非喹諾酮類細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑的研究進展》文中研究說明細菌ⅡA型拓撲異構酶（DNA促旋酶和拓撲異構酶Ⅳ）是控制細菌感染的有效靶標。喹諾酮類抗生素是目前臨床上廣泛應用的細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑,由于不合理使用以及濫用,導致細菌ⅡA型拓撲異構酶與喹諾酮類藥物的結合位點發(fā)生突變,使細菌對其產生耐藥性。非喹諾酮類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑與細菌ⅡA型拓撲異構酶的結合位點不同于喹諾酮類藥物,從而對喹諾酮類耐藥的細菌發(fā)揮藥效。本文根據(jù)不同的化學結構類型,總結了近6年來非喹諾酮類細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑的研究進展。
張寧[2]（2021）在《PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應及其作用機制研究》文中研究指明聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly（ADP-ribose）polymerase,PARP）抑制劑是通過合成致死機制,治療同源重組修復缺陷腫瘤的一類藥物。目前,已經(jīng)有四個PARP抑制劑相繼上市應用于晚期卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌的治療,標志著PARP作為抗腫瘤靶點和協(xié)同致死理論在臨床得到確認。然而,PARP抑制劑在產生良好治療效果的同時,其對同源重組修復缺陷腫瘤應用的局限性和耐藥的產生都阻礙了其在臨床的進一步發(fā)展。為了拓寬PARP抑制劑的應用范圍并克服其在臨床應用過程中產生的耐藥現(xiàn)象。本課題采用高通量的方法對PARP抑制劑與99個抗腫瘤藥物的聯(lián)合效應進行了檢測,并篩選得到與PARP抑制劑具有明顯協(xié)同效應的糖原合成激酶3（Glycogen synthase kinase 3,GSK3）抑制劑。之后,我們對PARP抑制劑與GSK3抑制劑的協(xié)同效應進行了體內外實驗的驗證并深入研究了其作用機制。本研究選用兩個批準上市的PARP抑制劑olaparib和niraparib,與99個針對50個抗腫瘤靶點的小分子抑制劑在BRCA缺陷但是對PARP抑制劑敏感性較差的HCC1937和HCT-15細胞株中進行了聯(lián)用篩選。結果表明,在HCT-15細胞株中,olaparib和niraparib與兩個GSK3抑制劑LY2090314和CHIR99021 HCl顯示出了最強的聯(lián)用增敏效果。體外增殖抑制實驗表明,在HCT-15細胞中,5個PARP抑制劑simmiparib,olaparib,niraparib,rucaparib和talazoparib在聯(lián)合應用對細胞增殖抑制無明顯影響濃度的GSK3抑制劑LY2090314和CHIR99021HCl時,均具有一定程度的增敏效應。特別地,當simmiparib聯(lián)合應用5μM的LY2090314時,其增敏倍數(shù)高達4463倍。G2/M期阻滯和細胞凋亡的實驗結果進一步證明了該聯(lián)用組合的效果。采用聯(lián)合指數(shù)法對simmiparib與LY2090314和CHIR99021 HCl的協(xié)同效應評價結果顯示,在6株結腸癌細胞中,simmiparib與LY2090314或CHIR99021 HCl聯(lián)用時,其對應的平均聯(lián)合指數(shù)（combination index,CI）值均在0.6以下,提示該類聯(lián)用組合具有普遍性。由于上述兩個GSK3抑制劑對GSK3α和GSK3β沒有選擇性,我們構建了二者的敲除株以考察其在協(xié)同效應中發(fā)揮的作用。細胞增殖抑制實驗表明,GSK3β敲除而非GSK3α能夠增強PARP抑制劑的體外抗腫瘤作用。此外,我們發(fā)現(xiàn)GSK3β抑制或敲除與拓撲異構酶I抑制劑和羥基脲也具有較好的協(xié)同效應,而對拓撲異構酶II抑制劑無效。因此,推測GSK3β可能參與復制依賴的DNA雙鏈損傷產生或修復過程。進一步實驗結果表明,GSK3β抑制或敲除能夠明顯增強PARP抑制劑誘導蓄積p-Chk1、p-RPA32和γ-H2AX的能力,同時也能夠使PARP抑制劑誘導有絲分裂異常細胞的比例明顯增加。以上結果提示,GSK3抑制劑與PARP抑制劑的聯(lián)用可以導致復制叉壓力增加、DNA損傷蓄積以及有絲分裂災難發(fā)生。DNA雙鏈損傷修復報告系統(tǒng)以及RAD51灶免疫熒光實驗結果表明,GSK3β抑制和敲除能夠明顯抑制同源重組修復過程,而對非同源末端連接沒有明顯影響。分子機制研究表明,GSK3β抑制和敲除能夠明顯下調同源重組關鍵因子BRCA1的m RNA和蛋白水平。此外,在親本細胞中過表達野生型GSK3β以及在GSK3β敲除細胞株中回補野生型GSK3β均能夠明顯上調BRCA1的蛋白表達。已有文獻報道,在乳腺癌細胞中,GSK3β通過Wnt3α/Snail/Slug信號通路調控BRCA1的轉錄水平;然而尚未對Snail/Slug負調控BRCA1的生理功能進行闡明。在我們的體系中,發(fā)現(xiàn)GSK3β同樣通過轉錄抑制子Snail和Slug來調控BRCA1的表達,從而影響同源重組功能和PARP抑制劑的敏感性。BRCA1的表達水平可能是PARP抑制劑和GSK3抑制劑發(fā)揮協(xié)同效應的重要因素之一。在BRCA1缺陷的UWB1.289細胞中,simmiparib與LY2090314或CHIR99021 HCl的協(xié)同效應較弱,平均CI值分別為0.68和0.87;而在其BRCA1回補細胞株中,協(xié)同效應明顯增強,平均CI值分別為0.30和0.38。此外,在HCT-15和RKO細胞中下調BRCA1的蛋白表達之后,能夠明顯減弱PARP抑制劑和GSK3抑制劑的協(xié)同效應。以上結果提示,BRCA1水平與該聯(lián)用組合的增敏效果正相關。最后,我們在裸小鼠皮下移植瘤模型中考察了simmiparib與GSK3β抑制或敲除的體內聯(lián)用效果。結果顯示,simmiparib和LY2090314聯(lián)用組能夠顯著抑制HCT-15和RKO裸小鼠移植瘤的生長,T/C比分別為20.82%和45.67%;而它們各自的單用組均沒有明顯作用。聯(lián)用后,小鼠體重未發(fā)生明顯變化,提示聯(lián)用沒有明顯增加毒性。與體外結果一致,GSK3β抑制劑能夠明顯下調瘤組織中BRCA1的蛋白表達,并且與simmiparib聯(lián)用后上調γ-H2AX和Caspase3剪切蛋白的表達。同時,發(fā)現(xiàn)simmiparib對HCT-15 GSK3βKO的移植瘤生長具有一定的抑制作用。綜上所述,我們通過高通量篩選的方法首次發(fā)現(xiàn)與PARP抑制劑具有明顯協(xié)同效應的GSK3抑制劑,并采用多種方式在多株結腸癌細胞株以及裸小鼠皮下移植瘤模型中對其協(xié)同效應進行了驗證。在作用機制方面,GSK3β抑制和敲除能夠通過Wnt/Snail/Slug通路下調BRCA1的m RNA和蛋白水平,從而介導了同源重組修復缺陷,最終增敏了PARP抑制劑?；谏鲜鰧嶒?我們揭示了在結腸癌細胞中PARP抑制劑與GSK3抑制劑良好的體內外協(xié)同效應及其作用機制,為該類聯(lián)合用藥臨床試驗的開展提供了實驗數(shù)據(jù),也為結腸癌的治療提供了新策略。
張鶴營[3]（2021）在《具有抗菌活性的新型喹惡啉-N1, N4-二氧化物的設計、合成和作用機制研究》文中研究指明喹惡啉-N1,N4-二氧化物早期作為抗菌藥應用于獸醫(yī)臨床。近些年研究表明,喹惡啉類化合物具有廣泛的藥理活性,如抗腫瘤、抗病毒、抗結核桿菌、抗蟲及抗真菌活性。特別是針對抗結核桿菌和抗原蟲活性的新型喹惡啉類化合物的發(fā)現(xiàn)及結構改造成為藥物化學領域研究的熱點之一。研究表明喹惡啉類化合物在生物體內氧化還原酶的作用下產生氧自由基（Reactive oxygen species,ROS）,ROS進攻細菌DNA雙鏈造成DNA雙鏈發(fā)生斷裂,最終導致細菌死亡。喹惡啉類化合物具有較強的厭氧選擇活性,其在還原性酶的作用下,得到一個單電子被還原,并釋放出羥基自由基（OH·）。OH·是生物體內的一種ROS,它能夠通過修飾DNA雙鏈進而降解DNA,這也是目前研究所得到的最為認可的喹惡啉類化合物的作用方式。對喹惡啉類化合物抗結核桿菌活性的研究較為廣泛,但對其抗結核桿菌的作用機制研究較少。目前基于結核桿菌（Mycobacterium tuberculosis,M.tb）作用機制的研究主要集中在巨噬細胞內各種通路的調控作用,其中包括ROS和自噬。ROS可以進攻M.tb細胞膜上的電子傳遞鏈（Electron transport chain,ETC）,干擾其能量代謝及穩(wěn)態(tài);高水平的ROS也能誘導細胞自噬,通過自噬可以抑制并清除胞內感染的M.tb。本課題首先運用藥效團融合的藥物設計策略,保留喹惡啉-N1,N4-二氧化物藥效團,分別重點對喹惡啉環(huán)C2位和C6位進行結構改造,獲得新型喹惡啉-N1,N4-二氧化物衍生物。對獲得的目標化合物進行抗菌活性評價,建立構效關系。然后從ROS、DNA合成與修復以及誘導細胞自噬等方面闡明喹惡啉-N1,N4-二氧化物發(fā)揮抗菌作用的作用方式。1.新型噻唑烷酮-喹惡啉-N1,N4-二氧化物的設計、合成與活性研究本課題擬通過結構改造得到新型喹惡啉-N1,N4-二氧化物,完善該類化合物的構效關系,并篩選出潛在的先導化合物為喹惡啉類化合物研究與發(fā)展奠定基礎。研究表明喹惡啉環(huán)的C2和C7位取代基對該類化合物的抗菌活性影響較大,并且本實驗室前期也對該類化合物的構效關系進行了分析,同樣發(fā)現(xiàn)C2位取代基對其抗菌活性影響較大。近些年來,化合物的結構改造主要借助藥效團融合、化合物骨架躍遷和電子等排等方法,從而獲得具有潛在活性的先導化合物。噻唑酮環(huán)廣譜的抗菌活性為本課題化合物的設計改造提供了思路,本課題采用藥效團融合的策略設計了C2位含有不同取代噻唑酮環(huán)的化合物,在經(jīng)過氧化反應、Beirut反應、水解反應、醛胺縮合及環(huán)化縮合反應后得到26個新型噻唑烷酮-喹惡啉-N1,N4-二氧化物（TZN1～26）。采用微量肉湯稀釋法和MABA法分別測定化合物TZN1～26的抗菌、抗真菌和抗結核桿菌活性,結果表明:TZN4、TZN5、TZN10、TZN11、TZN15、TZN16、TZN20、TZN21、TZN25和TZN26對革蘭氏陽性菌表現(xiàn)出顯著的抗菌活性,較喹乙醇抗菌活性提高2～8倍,如化合物TZN20和TZN21對金黃色葡萄球菌ATCC29213的MIC為16μg/m L?；衔颰ZN19-26對白色念珠菌（C.albicans,ATCC90028）、熱帶念珠菌（C.tropicalis,ATCC7349）,A.fumigatus（3.5352）和C.neoformans（2.3201）具有一定的抗菌活性（MIC≤8μg/m L）。TZN20、TZN21、TZN25和TZN26對M.tb具有顯著的活性（MIC=1.56μg/m L）。分析后發(fā)現(xiàn),在喹惡啉環(huán)C7位或苯環(huán)C4位引入F原子或Cl原子后能增加化合物活性,當取代甲基或甲氧基后會明顯降低化合物活性。通過建立3D-QSAR模型分析化合物的構效關系。結果表明,在喹惡啉環(huán)C7位和苯環(huán)的C4位取代體積大、電負性強或親水性基團有利于提高喹惡啉類化合物的抗菌活性;在喹惡啉環(huán)C7位引入正電性基團會顯著降低化合物的親和力,導致化合物抗菌活性的降低;在喹惡啉環(huán)C2位側鏈引入親水性基團和氫鍵供體基團同樣會提高化合物的抗菌活性。2.新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N1,N4-二氧化物的設計、合成與活性研究目前對喹惡啉環(huán)C6位的結構改造較少,僅有少量研究表明在C6位引入鹵素原子或甲基基團可以提高化合物的抗菌活性,未見更多的結構改造,導致該位置構效關系的空缺。本課題采用藥效團融合策略重點針對C6位進行結構改造,引入多種含氮雜環(huán),同時在C2位取代酯基或?；?C3位引入甲基或三氟甲基,C7位取代氟原子,在經(jīng)過一系列氧化反應、Beirut反應及親核取代反應后得到33個新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N1,N4-二氧化物（NCH1～33）。采用微量肉湯稀釋法和MABA法分別測定化合物NCH1～33的抗菌活性和抗結核桿菌活性,結果顯示:化合物NCH1～33對大腸桿菌ATCC25922的抗菌活性較差,僅NCH5、NCH6和NCH25的MIC值為4～8μg/m L;化合物NCH16、NCH20、NCH24、NCH28和NCH29對耐藥大腸桿菌的抗菌活性與標準菌相比,并未有明顯降低的現(xiàn)象,說明耐藥大腸桿菌對這些化合物并未產生明顯的耐藥性,也間接表明喹惡啉類化合物的抗菌作用方式可能與氟喹諾酮類藥物有所差異。NCH1～33對胸膜肺炎放線桿菌ATCC27090的MIC低至0.25μg/m L,對副豬嗜血桿菌HPS0165的MIC低至1μg/m L。對于金黃色葡萄球菌ATCC29213,化合物的MIC低至0.5μg/m L,較乙酰甲喹抗菌活性提高256倍。對于臨床分離耐藥金葡菌,化合物的MIC低至1μg/m L;化合物對MRSA的MIC值低至4μg/m L?；衔颪CH16、NCH20、NCH28和NCH29對M.tb具有顯著的抗菌活性,MIC≤0.25μg/m L,與乙酰甲喹相比活性提高了16～32倍。化合物NCH29在不同濃度下與M.tb感染的巨噬細胞孵育不同時間均表現(xiàn)出顯著的胞內抗菌活性,在40×MIC濃度時與細胞孵育4 d后可以減少2.73-log數(shù)值的胞內M.tb;當不同濃度的NCH29與細胞孵育1 d后,胞內M.tb表現(xiàn)出0.1～1.69-log數(shù)值的降低。分析后發(fā)現(xiàn),當喹惡啉環(huán)C2位乙酯或芐酯取代時,化合物抗菌活性較高;C3位引入-CF3后發(fā)現(xiàn)可以增加化合物的活性;C6位咪唑或1,2,4-三氮唑取代時,化合物抗菌活性較高;C7位引入氟原子顯著增加化合物的活性,尤其當C6位引入官能團后,C7位須有氟原子取代才可以起到提升化合物抗菌活性的作用。3D-QSAR結果表明,在喹惡啉環(huán)C6位增加取代基的電負性,可以提高化合物的活性;C6位取代親水性基團、C3位取代疏水性基團能夠增加化合物的活性;在C2/C6位置的側鏈基團,應該考慮具有更多氫鍵供體的基團。3.喹惡啉類化合物抗菌作用機制研究對大腸桿菌作用機制研究基于文獻調研和前期研究結果,本課題對喹惡啉類化合物的作用機制做出假設:喹惡啉類化合物通過自身產生的ROS對細菌的DNA造成損傷;同時它還能干擾細菌對損傷的DNA修復的過程,從而進一步發(fā)揮抗菌作用。選取DNA合成與修復相關的酶,主要包括DNA聚合酶I、DNA連接酶和DNA拓撲異構酶（DNA回旋酶和DNA拓撲異構酶IV）等,通過對上述蛋白酶進行活性抑制試驗闡明喹惡啉類化合物與DNA損傷修復系統(tǒng)之間的聯(lián)系,結果表明:（1）喹惡啉類化合物對DNA連接酶和DNA拓撲異構酶無明顯的抑制作用;（2）對DNA聚合酶I表現(xiàn)出顯著的抑制活性,如喹多辛和替拉扎明在128μg/m L時對DNA聚合酶I的抑制率分別為80.2%和78.7%;（3）與底物d NTPs同時競爭酶的活性中心,并且能夠抑制酶活性,且N-O鍵是化合物發(fā)揮作用的必要結構。上述結果可以初步確定喹惡啉類化合物通過抑制DNA聚合酶I的活性發(fā)揮作用。對結核桿菌作用機制研究首先測定了喹惡啉類化合物對M.tb能量穩(wěn)態(tài)的影響,分別通過膜完整性試驗、ATP消耗試驗和RT-q PCR評估喹惡啉類化合物對M.tb能量穩(wěn)態(tài)的影響。結果顯示:NCH29處理M.tb后,細胞膜完整性受到破壞、菌體內ATP水平顯著降低并且II型NADH脫氫酶（Type II NADH-dehydrogenase,NDH-2）相關m RNA（ndh和ndh A）的表達水平顯著下調。上述結果表明,NCH29與M.tb作用后,造成細胞膜的損傷和破壞,使菌體無法維持穩(wěn)態(tài)平衡以及自身生存;NCH29能夠繼續(xù)作用于ETC,干擾NDH-2功能的正常發(fā)揮,破壞菌體的氧化還原穩(wěn)態(tài),阻礙電子在ETC的正常傳遞,造成菌體內ATP水平顯著下調,能量穩(wěn)態(tài)受到破壞,導致M.tb的死亡。為研究喹惡啉類化合物作用于巨噬細胞后對M.tb的抗菌作用機制,本課題分別通過多功能酶標儀檢測胞內ROS及線粒體超氧自由基的變化,自噬相關蛋白LC3 II的變化則由WB和共聚焦顯微鏡進行測定。結果表明,NCH29能夠刺激M.tb感染的巨噬細胞內ROS水平的增加,并且ROS水平與化合物濃度和孵育時間呈正相關的關系;NCH29處理M.tb感染的細胞后可以誘導細胞自噬的發(fā)生,并且可以在胞內觀察到大量自噬體標志物的堆積。上述結果表明,當NCH29作用于M.tb感染的巨噬細胞后,一方面可以刺激巨噬細胞產生大量的ROS,ROS進攻胞內的M.tb,起到殺菌作用;另一方面,高水平的ROS也可以誘導巨噬細胞自噬的發(fā)生,通過自噬這一生物過程清除胞內的M.tb,進一步發(fā)揮抗菌作用。綜上所述,本課題設計合成了59個新型喹惡啉-N1,N4-二氧化物,并對其抗菌活性進行評價。采用3D-QSAR建立了新型喹惡啉-N1,N4-二氧化物抗菌活性的構效關系。本研究結果表明喹惡啉類化合物不僅可以通過ROS破壞細菌DNA雙鏈,還可以抑制DNA聚合酶I的活性、干擾細菌能量穩(wěn)態(tài)、誘導細胞自噬發(fā)揮抗菌作用。本課題深入研究了喹惡啉類化合物的抗菌作用機制并建立了構效關系,為進一步的喹惡啉類藥物設計與改造提供了科學依據(jù)。
董金嬌[4]（2021）在《HDAC/Topo及DHHC20抑制劑的設計合成和抗腫瘤活性研究》文中認為組蛋白去乙?；福℉DAC）抑制劑通過增加組蛋白乙酰化和染色質重構從而導致腫瘤細胞的凋亡或細胞周期阻滯,拓撲異構酶（Topo）抑制劑通過催化DNA鏈的斷裂與結合進而影響DNA的拓撲狀態(tài)從而發(fā)揮抗腫瘤活性。許多研究證實HDAC與Topo之間具有協(xié)同作用,因此,設計同時作用于HDAC和Topo的藥物是一種可行的抑癌策略。本文第一部分是基于HDAC/Topo雙靶點的吡唑并[3,4-d]嘧啶類化合物的設計、合成和抗腫瘤活性研究。通過分析HDAC和Topo抑制劑的關鍵藥效團發(fā)現(xiàn)其具有共同的藥效團特征,即平面結構和適宜長度的疏水側鏈,在此基礎上根據(jù)藥效團融合原理,設計合成了28個化合物。通過MTT法對化合物進行體外抗增殖活性研究,結果表明化合物具有較好的抗腫瘤活性,其中化合物8e、8f、8g、10、14d對MGC-803、MCF-7、RBL-2H3三種癌細胞的IC50均小于20μM,當化合物Linker中n=5時,化合物的抗腫瘤活性最好,其中化合物8e（n=5）對He La(IC50=4.58μM)、MGC-803(IC50=11.52μM)、MCF-7(IC50=7.88μM)、RBL-2H3(IC50=4.58μM)四種癌細胞的IC50小于15μM。HDACs抑制實驗表明,化合物都具有較好的HDACs抑制作用,其中化合物8c、8e、8f、10、14d、14e、20e、20f和20g的HDACs抑制活性優(yōu)于陽性對照藥物伏立諾他。Topo活性抑制實驗表明,化合物8d、8f、10、14b、20a～20g、22、24a對Topo II表現(xiàn)出不同程度的選擇性抑制作用。其中化合物8f、10、14b、20e、20f、20g表現(xiàn)出較好的HDACs和Topo II雙靶點抑制活性。細胞凋亡實驗表明,在2.5μM時,化合物10、22誘導MCF-7細胞凋亡的比率分別為40.67%和58.60%,當濃度增大到10μM時,凋亡率分別為80.07%和70.74%。分子對接結果從理論上解釋了化合物對HDACs和Topo II的抑制活性。ADMET和類藥性預測結果表明化合物的均具有良好的ADMET性質并符合Lipinski規(guī)則。DHHC20是棕櫚?；D移酶家族中的一員,在調控蛋白的轉運、穩(wěn)定性、細胞定位等方面具有重要作用,研究表明,與正常細胞比較,在卵巢癌、乳腺癌、結腸癌、腎癌和前列腺癌中DHHC20表達水平上調,因此抑制其活性可達到治療癌癥的目的。本文第二部分是作用于DHHC20靶點的靛紅衍生物的設計、合成和抗腫瘤活性研究。本部分基于DHHC20蛋白中配體小分子PAP所在的活性口袋及Ducker等人發(fā)現(xiàn)的非脂質類棕櫚?；D移酶抑制劑化合物V,利用生物電子等排體原理,將化合物V的苯并氫化噻喃酮骨架替換為生物電子等排體靛紅結構,根據(jù)配體小分子PAP的結構及其與蛋白的相互作用,結合分子對接技術設計合成15個DHHC20抑制劑。通過MTT法檢測化合物對He La、MGC-803、MCF-7、RBL-2H3等四種腫瘤細胞的抗增殖活性,結果表明,化合物5b對He La、MGC-803和MCF-7三種癌細胞具有較好的抗增殖活性,其IC50小于20μM。AO/EB染色實驗表明,化合物5a和5b可誘導MCF-7細胞凋亡。最后,采用分子對接技術模擬了化合物對DHHC20的抑制活性。
劉東巖[5]（2021）在《BAK-MCL1復合物預測卵巢癌對紫杉醇和S63845的敏感性》文中研究指明婦科腫瘤中,卵巢癌發(fā)病率排在第三位,死亡率居于首位。卵巢癌目前多采用傳統(tǒng)的化療藥物治療,包括鉑類藥物和紫杉醇等,其治療有效率不高,而抗腫瘤藥物敏感性預測能夠有效改善患者的生存質量或生存周期。目前抗腫瘤藥物敏感性預測的手段包括基于遺傳基因、體外藥物篩選和PDX模型等多種方法。BCL2家族調控線粒體凋亡途徑,在抗腫瘤藥物誘導的細胞死亡中起重要作用?；贐CL2家族蛋白的表達或相互作用預測藥物敏感性是目前的研究方向之一,一些研究采用BCL2家族蛋白表達水平預測藥物敏感性,或者采用Dynamic BH3 profiling方法預測藥物敏感性。本課題組的前期研究表明,基于BAK在細胞內的激活及相互作用狀態(tài)可以預測血液及淋巴腫瘤細胞對BH3類似物的敏感性。但該方法是否適用于實體瘤以及是否可以預測傳統(tǒng)化療藥物的敏感性仍然不清楚。因此本研究以卵巢癌為研究對象,分析腫瘤細胞內BAK的狀態(tài)與該腫瘤對傳統(tǒng)的化療藥物敏感性的關系。本研究首先通過免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn),BAK在卵巢癌細胞株中有著部分活化或者不活化的狀態(tài),而部分活化的BAK又呈現(xiàn)BAK/BCLXL、BAK/MCL1、BAK/BCLXL+ BAK/MCL1 三種復合物狀態(tài)。進一步研究發(fā)現(xiàn),BAK的部分活化狀態(tài)與卵巢癌細胞株的藥物敏感性相關。其中,含有BAK/MCL1復合物的細胞對紫杉醇、S63845和卡鉑更為敏感,而含有BAK/BCLXL復合物的細胞對紫杉醇和S63845更為抵抗。在這些分析中,含BAK/MCL1復合物細胞與紫杉醇敏感性最為顯著相關。利用該方法比采用單一BCL2蛋白表達水平預測紫杉醇的敏感性更為有效。后續(xù)分子機制研究表明,BAK/MCL1類型細胞對紫杉醇更為敏感的原因可能是低濃度紫杉醇作用于這類細胞時,紫杉醇誘導的BIM更傾向于結合MCL1,并替換部分活化的BAK,從而激活細胞凋亡通路。由于紫杉醇具有神經(jīng)毒性等副作用,我們接著采用MCL1抑制劑來聯(lián)合增效。MCL1抑制劑能夠顯著增強卵巢癌細胞對紫杉醇的敏感性,并且這種聯(lián)合增效只發(fā)生于含有BAK/MCL1復合物的細胞中,對于不含有BAK/MCL1復合物的細胞則沒有協(xié)同作用。進一步的小鼠荷瘤實驗也獲得同樣結論。綜上所述,腫瘤細胞中BAK/MCL1復合物的存在能夠預測紫杉醇、MCL1抑制劑及其聯(lián)合用藥的敏感性,因此檢測腫瘤細胞中的BAK/MCL1復合物具有潛在的臨床應用價值。
薛佳興[6]（2021）在《深海微生物來源Loonamycin抗三陰乳腺癌作用機制初探》文中研究表明世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構（IARC）發(fā)布了2020年全球最新癌癥負擔數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示,乳腺癌新發(fā)病例高達226萬,超過肺癌的220萬,乳腺癌取代肺癌,成為全球第一大癌,同時女性乳腺癌死亡率高達15.5%,也是女性癌癥患者死亡率最高的惡性腫瘤。三陰乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中的一個特殊類型,占比約為12.7%。TNBC組織病理學分級多為III級以上,惡性程度高,較其他乳腺癌亞型更具侵襲性。同時TNBC包含一系列異質性的分子結構,其治療進展一直落后于其他分子亞型的腫瘤。所以積極尋找TNBC新的作用靶點以及新的化療藥物仍然是我們需要積極努力的目標。Loonamycin（LGY）是南京大學戈惠民團隊從諾卡氏菌中分離得到的一個具有自主知識產權的蝴蝶霉素類似物,前期研究結果表明LGY具有抑制多種腫瘤細胞株增殖的生物學活性。本研究擬通過檢測LGY對兩株TNBC細胞MDA-MB-231和MDA-MB-468的增殖、周期和凋亡的影響,采用轉錄組測序、Western Blot、流式細胞術等實驗分析LGY作用的分子機制,希望能進一步揭示LGY抑制TNBC細胞株增殖的分子機制,為LGY的臨床應用奠定基礎。首先,在細胞學層次上,為了研究LGY對TNBC細胞株增殖的影響,本部分選取兩株TNBC細胞株MDA-MB-231和MDA-MB-468為研究對象,采用了Cell Counting Kit-8（CCK-8）、流式細胞術、DNA松弛等實驗進行研究。CCK-8細胞增殖實驗結果表明:LGY能夠抑制TNBC細胞株MDA-MB-231和MDA-MB-468增殖,且抑制作用具有時間和劑量依賴性。流式細胞術檢測細胞凋亡和細胞周期的實驗結果表明:LGY對兩株TNBC的細胞凋亡無顯著作用;LGY作用于MDA-MB-231細胞時可引起細胞周期S期阻滯;作用于MDA-MB-468細胞時可引起細胞周期G2期阻滯。DNA松弛實驗顯示,LGY對拓撲異構酶I有明顯的抑制作用且具有濃度依賴性。在細胞實驗證明LGY能夠影響TNBC細胞株生命過程的基礎上,為了進一步研究LGY抑制TNBC細胞株增殖的分子機制,對用藥細胞株與對照組進行了轉錄組測序,共獲得符合篩選條件的基因1764個。與對照組（Ctrl）相比,LGY處理組中,上調基因737個,下調基因1027個,并進行了綜合的生物信息學分析。GO分析提示,在表達值下調的基因中突觸后膜定位有明顯定位。多與神經(jīng)突觸信號轉導、肌動蛋白結合及離子門控通道等條目有關。在表達值上調的基因中,多定位在細胞外固定相關條目,多與信號受體活性調節(jié)、內皮細胞增殖調控、細胞運動等條目有關。KEGG分析發(fā)現(xiàn)下調基因主要集中于神經(jīng)相關功能通路及RAP1信號通路。上調的基因主要位于細胞因子-受體互作過程。GSEA富集分析提示LGY處理組TNFα介導的NF-κB信號通路及p53信號通路存在上調,可能主要受到PSMB5和SETD7的調控。分子對接結果顯示,LGY能以類似蝴蝶霉素的形式與DNA拓撲異構酶結合,此外還能與PSMB5和SETD7發(fā)生作用。后續(xù)RT-PCR實驗結果證實了差異基因的變化,Western Blot結果與預測結果基本一致。通過本課題研究,我們得到了以下結論:（1）LGY通過阻滯細胞周期抑制TNBC細胞增殖;（2）LGY可以通過與DNA-拓撲異構酶I相互作用而引起細胞周期阻滯,發(fā)揮細胞毒作用;（3）生物信息學預測LGY也可能通過結合基因表達調節(jié)蛋白PSMB5和SETD7,進而影響GNG7、GNG11、CXCL8、ADCY2等基因的表達,最終上調TNFα介導的NF-κB通路和p53通路,導致TNBC細胞系細胞周期阻滯,發(fā)揮細胞毒作用。
劉芳兵[7]（2021）在《Vosaroxin和IACS-010759分別與Venetoclax協(xié)同抗急性髓系白血病的活性與機制研究》文中指出急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）是一種侵襲性的惡性腫瘤,其特征為未成熟的髓樣細胞的爆炸性克隆增殖和細胞凋亡減少。兒科和成人的生存率仍然不容樂觀（5年生存率分別約為65%和25%）。40多年來,標準的急性髓系白血病誘導療法為阿糖胞苷加蒽環(huán)類藥物的7+3方案（阿糖胞苷7天加蒽環(huán)類藥物,如柔紅霉素,3天）,隨后是以高劑量阿糖胞苷為基礎的或同種異體造血干細胞移植的鞏固治療。但是,這是一種高強度化療方案,由于其廣泛的毒性,許多60歲以上的患者（急性髓系白血病患者的主要人群）以及其他合并癥患者,不適合應用7+3化療進行治療。同時由于急性髓系白血病干細胞的細胞周期相對靜止,傳統(tǒng)化療藥物難以根除,使得急性髓系白血病極易復發(fā),且一旦復發(fā)便對化療藥物喪失敏感性,導致許多患者,尤其是60歲以上患者死于耐藥、復發(fā)或并發(fā)癥。因此,亟待尋找一種老年人耐受性佳,復發(fā)率低的抗急性髓系白血病方案,來延長急性髓系白血病患者尤其是老年患者的生存時間,并最終提高治愈率。本論文的第一部分著重探討了Venetoclax（ABT-199）與Vosaroxin聯(lián)合使用抗急性髓系白血病的活性及分子機制。Venetoclax是一種口服選擇性Bcl-2抑制劑,于2018年11月21日獲得美國食品藥品管理局（Food and Drug Administration,FDA）批準,與低劑量阿糖胞苷或去甲基化藥物組合作為一線藥物治療75歲以上新診斷的或無法耐受高強度化療的急性髓系白血病患者。我們實驗室先前的研究表明,Venetoclax可將促凋亡蛋白Bim從Bcl-2上游離出來,但是抗凋亡蛋白Mcl-1會與游離出來的Bim結合,阻止其誘導細胞凋亡,導致Venetoclax耐藥。另外,我們還發(fā)現(xiàn)Venetoclax可顯著增加DNA損傷類藥物所誘導的DNA鏈的斷裂,產生協(xié)同抗AML活性。Vosaroxin（SNS-595）是拓撲異構酶II抑制劑和DNA嵌入劑,其在老年患者中具有良好的耐受性和療效,但似乎不足以作為單一療法應用。我們假設Vosaroxin與Venetoclax的組合將通過DNA損傷和抑制Bcl-2而展現(xiàn)出高度可耐受的協(xié)同抗AML作用。結果表明,Venetocalx與Vosaroxin在多種急性髓系白血病細胞系和急性髓系白血病患者臨床樣本中均有協(xié)同抗急性髓系白血病活性。Venetoclax可增加Vosaroxin誘導產生的DNA損傷,并干擾細胞對Vosaroxin造成的DNA損傷的修復。此外,兩藥聯(lián)用成功抑制了急性髓系白血病祖細胞的集落形成能力,但是對人正常造血祖細胞無影響。上述結果預示,Venetoclax和Vosaroxin的聯(lián)合是一種有效且安全的抗急性髓系白血病的治療方案。本論文的第二部分著重探究了Venetoclax與IACS-010759聯(lián)合在急性髓系白血病細胞系、急性髓系白血病患者臨床樣本和NSGS小鼠異種移植模型中的抗腫瘤活性。IACS-010759是線粒體電子傳遞鏈復合體I的選擇性小分子抑制劑,在體外以及急性髓系白血病異種移植模型中通過抑制氧化磷酸化（Oxidative phosphorylation,OXPHOS）顯示抗白血病活性。據(jù)報道,復合物I缺乏會抑制細胞色素c和凋亡誘導因子（AIF）的釋放,從而抑制細胞凋亡。而細胞色素c的釋放受到Bcl-2家族的嚴格調控,同時Venetoclax也被報導可在體外靶向OXPHOS。因此,我們假設IACS-010759與Venetoclax聯(lián)合應用可通過抑制OXPHOS和/或釋放細胞色素c協(xié)同誘導細胞凋亡。本部分的研究結果表明,在依賴OXPHOS的急性髓系白血病細胞系中,IACS-010759聯(lián)合Venetoclax可以協(xié)同誘導細胞凋亡,而在依賴糖酵解的急性髓系白血病細胞中則無法發(fā)揮其抗急性髓系白血病活性。但是,當我們將培養(yǎng)基中的碳源由葡萄糖替換為半乳糖,從而迫使細胞更依賴OXPHOS途徑之后,IACS-010759聯(lián)合Venetoclax也能表現(xiàn)出較強的抗腫瘤活性。我們發(fā)現(xiàn),當細胞轉而依賴OXPHOS后,IACS-010759能引起細胞色素c的累積,而Venetoclax可增加細胞色素c的釋放,從而誘導細胞內源性凋亡。在急性髓系白血病臨床樣本中,IACS-010579和Venetoclax的聯(lián)合同樣可以協(xié)同誘導細胞凋亡,并聯(lián)合抑制急性髓系白血病祖細胞的集落形成能力。此外,在體內實驗中,IACS-010759與Venetoclax的組合顯著提高了急性髓系白血病細胞系衍生的異種移植小鼠的存活率。并未對小鼠的體重產生明顯的影響。上述結果表明,IACS-010759與Venetoclax聯(lián)合在體內外均具有良好的抗依賴OXPHOS的急性髓系白血病的活性,擁有潛在的臨床應用前景。綜上所述,本論文的研究結果為Venetoclax與Vosaroxin或IACS-010759聯(lián)合治療急性髓系白血病的臨床應用奠定了理論與實驗基礎。
趙彬[8]（2021）在《基于條件重編程細胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究》文中指出目的:乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤,三陰性乳腺癌是指ER、PR及HER-2表達均為陰性的乳腺癌。與其他類型的乳腺癌相比,三陰性乳腺癌進展快,侵襲性強,容易復發(fā)和轉移。目前三陰性乳腺癌術后的輔助治療手段比較單一,缺乏特異性的治療靶點,亟需尋找個體化的、有效的治療靶點。條件重編程細胞模型是一種可在不轉入外源基因的情況下誘導體細胞的無限增殖的細胞模型,具有培養(yǎng)成功率高,成本低,與原腫瘤一致性強的優(yōu)點,具有用于個體化腫瘤藥敏預測的潛力。本研究中,我們構建了三陰性乳腺癌的條件重編程細胞模型,并使用該模型進行了高通量敏感藥物篩選實驗,以探索條件重編程細胞藥敏試驗在三陰性乳腺癌的個體化治療中的應用。方法:（1）前瞻性收集2019年3月1日至2020年3月1日就診于中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院乳腺外科、確診為乳腺癌并擬行手術治療的乳腺癌病例信息。術中留取腫瘤組織及配對正常乳腺組織的標本并培養(yǎng)條件重編程細胞。選擇病理證實的三陰性乳腺癌條件重編程細胞傳代擴增。（2）通過全外顯子測序和轉錄組測序檢測條件重編程三陰性乳腺癌細胞及原腫瘤組織的DNA突變譜和轉錄組表達譜,對比條件重編程細胞與原腫瘤組織在常見突變基因位點的一致性,通過Pearson相關性分析檢驗條件重編程細胞與原腫瘤組織轉錄組表達譜的一致性。（3）使用高通量藥敏試驗檢測上述細胞對110種藥物的敏感性,分別構建劑量-效應曲線,計算藥物敏感性評分（DSS）,并根據(jù)DSS評分尋找每株條件重編程細胞的敏感藥物。使用RRA算法整合DSS評分,得到反應藥物有效性的綜合藥物排序。（4）檢索外顯子測序結果中與相關藥物敏感性相關的基因,并與藥敏結果進行比對。通過基因集變異分析（GSVA）計算經(jīng)典通路或重要基因集的活化程度評分,通過Pearson相關性分析檢驗各通路GSVA評分與條件重編程細胞藥物敏感性DSS評分的關聯(lián)。（5）獲取GEO數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中三陰性乳腺癌的高通量mRNA芯片數(shù)據(jù)和轉錄組測序數(shù)據(jù),通過差異基因篩選、差異基因富集分析以及Kaplan-Meier生存分析尋找三陰性乳腺癌預后生物標記;通過GSVA分析和Kaplan-Meier生存分析尋找與三陰性乳腺癌患者預后顯著相關的生物通路。結果:（1）成功構建了 6株條件重編程三陰性乳腺癌細胞和6株配對正常乳腺組織的條件重編程細胞。條件重編程三陰性乳腺癌細胞和原腫瘤組織的DNA突變譜相似,二者的轉錄組基因表達也具有較強的相關性（R=0.855）。（2）PF-04691502,一種PI3K/Akt和mTOR雙靶點抑制劑是RRA綜合藥物敏感性評分最佳的藥物,而其他排名前十位的藥物中,有2種mTOR抑制劑,2種Akt靶向藥物,1種Syk（脾酪氨酸激酶）抑制劑,1種拓撲異構酶抑制劑,1種EGFR抑制劑,1種植物來源的小分子藥物（重樓皂苷VI）。mTOR抑制劑西羅莫司、替西羅莫司、利羅莫司和Torin1的DSS評分具有較高的相關性（R=0.82～0.97）。EGFR靶向藥物阿法替尼、吉非替尼、拉帕替尼的DSS評分具有較高的相關性（R=0.61～0.93）。（3）條件重編程細胞轉錄組中PI3K-Akt通路的GSVA評分與Ipatasertib的DSS評分顯著相關（R=0.587,P=0.045）。mTOR通路的GSVA評分與Torin 1的DSS評分顯著相關（R=0.62,P=0.030）。EGF通路的GSVA評分與吉非替尼的DSS評分具有顯著相關性（R=0.60,P=0.039）。（4）我們進一步通過GEO和TCGA數(shù)據(jù)分析了 GSVA評分與三陰性乳腺癌患者預后的關系,發(fā)現(xiàn)Akt1/mTOR信號通路、HIF信號通路、VEGF信號通路和脂肪合成相關通路的GSVA評分升高與三陰性乳腺癌患者的較短的總體生存期相關（P<0.05）。T細胞抗原受體信號通路GSVA高評分或抗原加工和呈遞通路GSVA評分較高的患者總體生存期較長（P<0.05）。結論:（1）本研究培養(yǎng)的6株條件重編程三陰性乳腺癌細胞與原腫瘤組織具有較高的一致性,可以作為個體化腫瘤模型用于三陰性乳腺癌發(fā)病機制研究和藥敏試驗。（2）條件重編細胞藥敏試驗結果較穩(wěn)定,可以用于三陰性乳腺癌藥物敏感性預測。本研究中的條件重編程三陰性乳腺癌細胞對靶向PI3K-Akt、mTOR、EGFR、Syk通路的藥物以及拓撲異構酶Ⅱ抑制劑比較敏感。（3）條件重編程細胞轉錄組數(shù)據(jù)中PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA評分與針對相應通路的靶向藥物的有效性成正相關,三陰性乳腺癌腫瘤組織中轉錄組PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA評分與三陰性乳腺癌患者總體生存顯著相關,因而GSVA評分也可以用于三陰性乳腺癌的藥物敏感性預測以及患者預后的評價。
李蝶蝶[9]（2021）在《葉酸修飾的改性SN38前藥自組裝膠束傳遞系統(tǒng)的構建及體外研究》文中研究指明據(jù)國際衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布的《全球癌癥報告》顯示,近年全球的腫瘤患者及因腫瘤造成死亡的病例都在極速攀升。目前治療腫瘤最為常規(guī)的方式則是化療,而眾多化療藥物都存在缺點,如水溶性差、生物利用度低等,因此以納米載體為基礎的藥物傳遞系統(tǒng)逐漸進入人們視野。本課題即以納米膠束為載體用以遞送難溶性抗腫瘤藥物7-乙基10羥基喜樹堿（SN38）,借助該傳遞系統(tǒng)提高SN38的生物利用度、降低毒副作用等,本研究主要包含以下幾部分:（1）TAT-PEG2000-SN38膠束的制備及表征本章使用親水性的聚乙二醇（PEG）連接SN38原料藥和穿膜肽TAT（GRKKRRQRRRQC）,確定了TAT-PEG2000-SN38的合成路線,設計PEG一端與SN38通過酯鍵連接,在腫瘤部位微酸環(huán)境刺激下可酸響應釋放出SN38原藥,另一端與穿膜肽TAT相連增加藥物進入細胞的能力,并選擇了二肽（序列GC）（不具細胞膜穿透效果）作為對照,通過核磁共振、紅外光譜和紫外全波長掃描等方法對化合物進行表征,確認化合物成功合成。采用乙醇注入法制備得到粒度均一的TAT-PEG2000-SN38膠束,通過激光粒度分析儀測得粒徑為135.24±2.36 nm,多分散系數(shù)（PDI）為0.129±0.047,Zeta電位為+12.33±0.31 m V。（2）TAT-PEG2000-SN38膠束的體外抗腫瘤活性評價本章將上述制備的膠束用于體外抗腫瘤活性評價,觀察SN38、GC-PEG2000-SN38及TAT-PEG2000-SN38對A549和He La兩種細胞的抑制作用,藥物濃度在2nmol/L～20000nmol/L范圍內,三組藥物對腫瘤細胞的抑制作用呈劑量依賴性,但TAT-PEG2000-SN38組相較于SN38和GC-PEG2000-SN38表現(xiàn)出明顯更高的細胞抑制率,通過定性和定量觀察也發(fā)現(xiàn)TAT-PEG2000-SN38組相較于GC-PEG2000-SN38組細胞攝取量明顯增加,在A549和He La兩種細胞中TAT-PEG2000-SN38組攝取熒光量分別是GC-PEG2000-SN38組的4.7倍、3.6倍,這一結果表明TAT-PEG2000-SN38膠束引入細胞穿膜肽TAT后可以有效增加細胞對藥物的攝取。（3）FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)的建立及性質考察葉酸受體（FRs）在很多人類腫瘤細胞中過表達,而在正常細胞中低表達或不表達,而葉酸（FA）與葉酸受體具有高親和力,藥物可通過葉酸受體介導的途徑進入細胞。本章通過靜電吸附的方式將葉酸與TAT-PEG2000-SN38膠束結合形成了FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng),獲得了不同葉酸濃度下傳遞系統(tǒng)的粒徑和電位。通過對該傳遞系統(tǒng)穩(wěn)定性、體外釋放能力等的考察,發(fā)現(xiàn)該傳遞系統(tǒng)在一定時間內可在生理條件下（p H7.4）保持穩(wěn)定,并在酸性條件下（p H5.6）釋放出藥物SN38。（4）FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)的體外抗腫瘤評價本章將FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)分別用于葉酸受體低表達的A549和葉酸受體高表達的He La細胞,結果表明,He La細胞在FA5組至FA20組范圍內生長活力隨葉酸濃度增加而降低,細胞生長活力從71.50%降低至42.70%,而在A549細胞中,葉酸濃度增加沒有造成腫瘤生長活力明顯改變。激光共聚焦觀察在He La細胞中,FA20組相較于FA0組細胞攝取量明顯增加,流式細胞觀察結果也顯示FA20組的熒光攝取量是FA0組的2.2倍,而在葉酸受體低表達的A549細胞中,葉酸濃度增加并不會使藥物攝取量增加。最后對兩種細胞攝取FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)的機制進行研究,發(fā)現(xiàn)兩種細胞都主要通過網(wǎng)格蛋白介導的內吞途徑攝取FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng),其次為脂筏介導的途徑。而He La細胞系的攝取還受高濃度葉酸溶液（0.1mol/L）的影響,其抑制率為34.55%,而A549細胞的攝取并沒有受其影響,說明FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)可以通過葉酸受體介導的途徑進入細胞,這與細胞表面葉酸受體的表達情況有關,該結果表明所制備FA/TAT-PEG2000-SN38傳遞系統(tǒng)可以有效的靶向葉酸受體高表達的腫瘤細胞,進而降低對正常細胞的毒性。
沈泓佑[10]（2020）在《羥基蒽醌衍生物的設計合成及體外抗腫瘤活性研究》文中提出蒽醌化合物廣泛應用于許多領域。起初常用作有機染料,隨后它們被用于制藥領域如抗病毒、抗菌、抗腫瘤等方面。自十九世紀五十年代以來,一系列具有代表性的蒽環(huán)藥物如:阿霉素、克拉仙、米托蒽醌和柔紅霉素等相繼被合成出來,這些化合物都是具有酚羥基結構的蒽醌衍生物。隨著對蒽環(huán)類抗癌藥物的研發(fā),我們了解到了許多關于它的毒副作用以及其在藥物應用上的缺陷。因此,越來越多的學者嘗試設計合理的結構以獲得高活性、低毒性的蒽醌衍生物。在此次的課題設計中,我們選取拓撲異構酶II為靶標,將文獻中具有一定抗腫瘤活性的蒽醌類化合物收集并整理,并研究其結構特征與抗腫瘤活性之間的定量構效關系（Quantitative Structure-Activity Relationship,QSAR）,以最新的深度學習算法作為建模工具,取得一定結果。然后又利用靶標拓撲異構酶II（Topoisomerase II,TOPOII）的三維晶體結構（PDB代碼:1ZXM）為受體,1,4-二羥基蒽醌作為配體的母核結構,采用對接計算方法,結合運用骨架躍遷、拼合原理等藥物設計的基本思路,合成一系列1,4-二羥基蒽醌衍生物,得到更有藥效的TOPOII抑制劑,提高其在抗腫瘤活性等方面的作用。我們以1,4二羥基蒽醌為起始原料,在醌茜的1,4號位接上磺?；?利用其易離去的性質,通過親電、親核取代反應在1號位合成具有苯基、烷基鏈、氮雜環(huán)的A系列衍生物。然后在2號位上通過邁克反應合成具有苯基、萘基的B系列衍生物。本文通過核磁共振氫譜、核磁共振13C譜和質譜分析確定了29個化合物的純度和結構。本文采用MTS法對所合成的蒽醌衍生物進行體外抗腫瘤活性實驗,實驗結果表明,蒽醌衍生物的活性均表現(xiàn)出高于蒽醌母核,其中A15和A20顯示出優(yōu)越的抗腫瘤活性,其對DU145的IC50分別為16.88μM和5.48μM,說明通過引入雜原子烷基鏈作為主要的藥效基團,它不僅大幅提高了化合物的脂溶性,也顯著提高其生物活性。為我們后續(xù)對蒽醌改造提供了一個方向。
二、拓撲異構酶抑制劑的臨床應用（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結構并詳細分析其設計過程。在該MMU結構中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結構映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉換過程,TLB結構組織等。該MMU結構將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關系。
文獻研究法：通過調查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設計。
定性分析法：對研究對象進行“質”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、拓撲異構酶抑制劑的臨床應用（論文提綱范文）
（1）非喹諾酮類細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑的研究進展（論文提綱范文）
| 1 細菌ⅡA型拓撲異構酶的結構與功能 |
| 2 非喹諾酮類細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.1 吡咯酰胺類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.2 三氮雜苊烯類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.3 喹啉酮類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.4 苯并咪唑脲類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.5 吡唑并吡啶酮類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.6 香豆素類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.7 吲哚類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.8 噻唑脲和氮雜吲哚脲類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 2.9 其他類ⅡA型拓撲異構酶抑制劑 |
| 3 總結與展望 |
（2）PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應及其作用機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 PARP家族及成員 |
| 1.2 PARP抑制劑抗腫瘤機制 |
| 1.3 PARP抑制劑研究進展 |
| 1.4 PARP抑制劑有效人群篩選 |
| 1.5 PARP抑制劑聯(lián)合用藥研究進展 |
| 1.5.1 PARP抑制劑和放射療法的聯(lián)合應用 |
| 1.5.2 PARP抑制劑和細胞毒類抗腫瘤藥物的聯(lián)合應用 |
| 1.5.3 PARP抑制劑與靶向藥物的聯(lián)合用藥 |
| 1.5.4 PARP抑制劑和免疫檢查點抑制劑的聯(lián)合效應 |
| 1.5.5 PARP抑制劑聯(lián)合用藥總結 |
| 1.6 存在問題與研究意義 |
| 1.7 研究思路與方案 |
| 1.7.1 PARP抑制劑新型聯(lián)用方案篩選與驗證 |
| 1.7.2 PARP抑制劑和GSK3抑制劑協(xié)同效應作用機制 |
| 1.7.3 PARP抑制劑與GSK3抑制劑體內協(xié)同效應 |
| 第2章 PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應發(fā)現(xiàn)及驗證 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 藥品和試劑 |
| 2.1.2 抗體 |
| 2.1.3 主要儀器設備 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 細胞復蘇、培養(yǎng)和凍存 |
| 2.2.2 SRB染色法 |
| 2.2.3 聯(lián)合指數(shù)(combination index,CI)計算 |
| 2.2.4 流式細胞術檢測細胞周期 |
| 2.2.5 流式細胞術檢測細胞凋亡 |
| 2.2.6 Western blot |
| 2.2.7 CRISPR-Cas9敲除 |
| 2.2.8 克隆形成實驗 |
| 2.3 實驗結果 |
| 2.3.1 PARP抑制劑聯(lián)合用藥高通量篩選流程 |
| 2.3.2 PARP抑制劑聯(lián)合用藥高通量篩選結果 |
| 2.3.3 PARP抑制劑聯(lián)合用藥高通量篩選結果驗證 |
| 2.3.4 PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應驗證 |
| 2.3.5 GSK3 抑制劑濃度依賴性增敏PARP抑制劑simmiparib |
| 2.3.6 PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同誘導細胞周期阻滯和凋亡 |
| 2.3.7 PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同抑制多株結腸癌細胞增殖 |
| 2.3.8 GSK3α和GSK3β敲除細胞株構建及驗證 |
| 2.3.9 GSK3β敲除增強PARP抑制劑體外抗腫瘤作用 |
| 2.3.10 GSK3β敲除增強CPT-11和HU體外抗腫瘤作用 |
| 2.4 討論 |
| 第3章 PARP抑制劑和GSK3抑制劑協(xié)同效應作用機制 |
| 3.1 實驗材料 |
| 3.1.1 化合物和主要試劑 |
| 3.1.2 抗體 |
| 3.1.3 主要儀器設備 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.2.1 細胞培養(yǎng) |
| 3.2.2 Western blot |
| 3.2.3 免疫熒光實驗 |
| 3.2.4 siRNA干擾實驗 |
| 3.2.5 HR和NHEJ報告系統(tǒng)實驗 |
| 3.2.6 SRB染色法 |
| 3.2.7 CI值計算 |
| 3.2.8 質粒和病毒轉染 |
| 3.2.9 Real-time PCR實驗 |
| 3.3 實驗結果 |
| 3.3.1 GSK3β抑制或敲除與PARP抑制劑協(xié)同增加復制叉壓力和DSB |
| 3.3.2 GSK3β抑制劑與PARP抑制劑協(xié)同產生有絲分裂災難 |
| 3.3.3 GSK3β抑制或蛋白下調抑制HR功能 |
| 3.3.4 GSK3β抑制或敲除下調BRCA1蛋白表達 |
| 3.3.5 GSK3β抑制或敲除下調BRCA1 mRNA表達 |
| 3.3.6 GSK3β通過Snail/Slug調控BRCA1表達 |
| 3.3.7 MG-132不影響GSK3β抑制和敲除介導的BRCA1的蛋白下調 |
| 3.3.8 GSK3抑制劑能在多株結腸癌細胞株中下調BRCA1的表達 |
| 3.3.9 BRCA1影響PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應 |
| 3.4 討論 |
| 第4章 PARP抑制劑與GSK3抑制劑的體內協(xié)同效應 |
| 4.1 實驗材料 |
| 4.1.1 藥品、動物和試劑 |
| 4.1.2 動物 |
| 4.1.3 抗體 |
| 4.1.4 主要儀器設備 |
| 4.2 實驗方法 |
| 4.2.1 細胞培養(yǎng) |
| 4.2.2 裸小鼠皮下移植瘤藥效實驗 |
| 4.2.3 Western blot |
| 4.2.4 免疫組化 |
| 4.3 實驗結果 |
| 4.3.1 Simmiparib和LY2090314協(xié)同抑制結腸癌裸小鼠皮下移植瘤生長 |
| 4.3.2 GSK3β敲除增強simmiparib體內抗腫瘤作用 |
| 4.4 討論 |
| 第5章 總結與展望 |
| 5.1 總結 |
| 5.1.1 發(fā)現(xiàn)并驗證PARP抑制劑與GSK3抑制劑具有協(xié)同效應 |
| 5.1.2 發(fā)現(xiàn)GSK3β在復制叉壓力產生和DNA雙鏈損傷應答中的作用 |
| 5.1.3 闡明PARP抑制劑和GSK3抑制劑協(xié)同效應與BRCA1相關 |
| 5.1.4 闡明PARP抑制劑與GSK3抑制的體內協(xié)同效應 |
| 5.2 尚待解決的問題及工作計劃 |
| 參考文獻 |
| 附錄一 研究生期間已發(fā)表文章 |
| 附錄二 研究生期間參加會議 |
| 致謝 |
| 作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術論文與研究成果 |
（3）具有抗菌活性的新型喹惡啉-N1, N4-二氧化物的設計、合成和作用機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語表(Abbreviation) |
| 1 前言 |
| 1.1 立題依據(jù) |
| 1.2 研究進展 |
| 1.2.1 喹惡啉類化合物生物活性研究進展 |
| 1.2.2 喹惡啉類化合物構效關系研究進展 |
| 1.2.3 喹惡啉類化合物抗菌作用機制研究進展 |
| 1.2.4 細胞自噬和ROS發(fā)揮抗結核桿菌活性的研究進展 |
| 1.3 研究內容和目標 |
| 1.3.1 研究內容 |
| 1.3.2 研究目標 |
| 2 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的設計、合成與活性研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 菌種與細胞 |
| 2.1.2 藥物與試劑 |
| 2.1.3 主要儀器與設備 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.1.5 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的合成 |
| 2.1.6 細菌培養(yǎng) |
| 2.1.7 抗菌活性的測定(MIC) |
| 2.1.8 抗真菌活性的測定 |
| 2.1.9 細胞培養(yǎng) |
| 2.1.10 細胞毒性 |
| 2.1.11 抗結核桿菌活性的測定 |
| 2.1.12 3D-QSAR |
| 2.1.13 化合物理化性質預測 |
| 2.2 結果 |
| 2.2.1 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(TZN1~26)的結構表征 |
| 2.2.2 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(TZN1~26)理化性質 |
| 2.2.3 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(TZN1~26)抗菌活性 |
| 2.2.4 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物細胞毒性結果 |
| 2.2.5 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物3D-QSAR研究 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的設計與合成 |
| 2.3.2 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物抗菌活性的分析 |
| 2.3.3 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物構效關系分析 |
| 2.3.4 新型噻唑烷酮-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的細胞毒性 |
| 2.4 小結 |
| 3 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的設計、合成與活性研究 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 菌種與細胞 |
| 3.1.2 藥物與試劑 |
| 3.1.3 主要儀器與設備 |
| 3.1.4 溶液配制 |
| 3.1.5 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的合成 |
| 3.1.6 細菌培養(yǎng) |
| 3.1.7 抗菌活性的測定(MIC) |
| 3.1.8 細胞培養(yǎng) |
| 3.1.9 細胞毒性 |
| 3.1.10 抗結核桿菌活性的測定 |
| 3.1.11 3D-QSAR |
| 3.1.12 化合物理化性質預測 |
| 3.2 結果 |
| 3.2.1 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(NCH1~33)的結構表征 |
| 3.2.2 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(NCH1~33)理化性質 |
| 3.2.3 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物(NCH1~33)抗菌活性 |
| 3.2.4 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物細胞毒性結果 |
| 3.2.5 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物3D-QSAR研究 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的設計與合成 |
| 3.3.2 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物抗菌活性的分析 |
| 3.3.3 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物構效關系分析 |
| 3.3.4 新型含氮雜環(huán)-喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的細胞毒性 |
| 3.4 小結 |
| 4 喹惡啉類化合物抗菌作用機制研究 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 蛋白酶 |
| 4.1.2 菌種與細胞 |
| 4.1.3 藥品與試劑 |
| 4.1.4 溶液配制 |
| 4.1.5 主要儀器和設備 |
| 4.1.6 DNA聚合酶Ⅰ活性抑制試驗 |
| 4.1.7 酶動力學試驗 |
| 4.1.8 DNA連接酶活性抑制試驗 |
| 4.1.9 E.coli DNA Topoisomerase Ⅳ活性抑制試驗 |
| 4.1.10 細胞復蘇、傳代和凍存 |
| 4.1.11 細胞毒性 |
| 4.1.12 體外結核桿菌感染巨噬細胞模型 |
| 4.1.13 細胞膜完整性檢測 |
| 4.1.14 結核桿菌ATP水平測定 |
| 4.1.15 胞內氧自由基檢測(cROS、mROS) |
| 4.1.16 qRT-PCR檢測相關基因的mRNA表達 |
| 4.1.17 Western Blot方法測定蛋白表達水平 |
| 4.1.18 間接免疫熒光試驗 |
| 4.1.19 統(tǒng)計學分析 |
| 4.2 結果 |
| 4.2.1 DNA聚合酶Ⅰ活性抑制結果 |
| 4.2.2 DNA連接酶活性抑制試驗 |
| 4.2.3 DNA拓撲異構酶活性抑制試驗 |
| 4.2.4 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物的細胞毒性 |
| 4.2.5 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物干擾結核桿菌能量穩(wěn)態(tài)的平衡 |
| 4.2.6 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物誘導結核桿菌感染的巨噬細胞內氧自由基水平增加 |
| 4.2.7 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物誘導結核桿菌感染的巨噬細胞自噬 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 喹惡啉類化合物對大腸桿菌作用機制的研究 |
| 4.3.2 喹惡啉類化合物對結核桿菌作用機制的研究 |
| 4.4 小結 |
| 5 全文總結 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 附錄Ⅰ 研究生簡介 |
| 附錄Ⅱ 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物核磁圖譜 |
| 附錄Ⅲ 新型喹惡啉-N~1,N~4-二氧化物核磁圖譜 |
| 附錄Ⅳ 菌種PCR鑒定 |
| 附錄Ⅴ 文獻綜述 抗菌藥物主要作用靶點的研究進展 |
（4）HDAC/Topo及DHHC20抑制劑的設計合成和抗腫瘤活性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 抗腫瘤藥物的研究進展 |
| 1.2 組蛋白去乙酰化酶及其小分子抑制劑 |
| 1.3 拓撲異構酶及其小分子抑制劑 |
| 1.3.1 拓撲異構酶 |
| 1.3.2 Topo I小分子抑制劑的研究進展 |
| 1.3.3 Topo II小分子抑制劑的研究進展 |
| 1.4 HDAC/Topo雙靶點抑制劑的研究進展 |
| 1.5 棕櫚?；D移酶(DHHC20)及其小分子抑制劑的研究進展 |
| 1.6 論文的設計思路 |
| 1.6.1 HDAC/Topo雙靶點抑制劑的設計思路 |
| 1.6.2 DHHC20抑制劑的設計思路 |
| 第二章 HDAC/Topo雙靶點抑制劑的合成及其抗腫瘤活性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 目標化合物的合成 |
| 2.2.1 儀器與試劑 |
| 2.2.2 合成路線 |
| 2.2.3 化合物的合成 |
| 2.3 生物活性實驗 |
| 2.3.1 實驗試劑和儀器 |
| 2.3.2 體外抗增殖實驗 |
| 2.3.3 HDACs活性抑制實驗 |
| 2.3.4 Topo I活性抑制實驗 |
| 2.3.5 Topo II的提取及其活性抑制實驗 |
| 2.3.6 劃痕實驗 |
| 2.3.7 細胞凋亡實驗 |
| 2.4 分子對接 |
| 2.5 化合物類藥性及ADMET預測 |
| 2.6 結果與討論 |
| 2.6.1 化合物的合成 |
| 2.6.2 化合物的抗增殖活性 |
| 2.6.3 HDACs活性抑制實驗 |
| 2.6.4 Topo I活性抑制實驗 |
| 2.6.5 Topo II活性抑制實驗 |
| 2.6.6 劃痕實驗 |
| 2.6.7 細胞凋亡實驗 |
| 2.6.8 分子對接結果及討論 |
| 2.6.9 化合物ADMET預測 |
| 第三章 DHHC20抑制劑的合成及其抗腫瘤活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 目標化合物的合成 |
| 3.2.1 儀器與試劑 |
| 3.2.2 合成路線 |
| 3.2.3 化合物的合成 |
| 3.3 生物活性實驗 |
| 3.3.1 實驗試劑和儀器 |
| 3.3.2 體外抗增殖實驗 |
| 3.3.3 劃痕實驗 |
| 3.3.4 AO/EB染色實驗 |
| 3.4 分子對接 |
| 3.5 結果與討論 |
| 3.5.1 化合物的合成 |
| 3.5.2 化合物的抗增殖活性 |
| 3.5.3 劃痕實驗 |
| 3.5.4 AO/EB染色實驗 |
| 3.5.5 分子對接 |
| 第四章 結論 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 攻讀學位期間取得的科研成果 |
（5）BAK-MCL1復合物預測卵巢癌對紫杉醇和S63845的敏感性（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1. BCL2家族調控細胞凋亡及其在抗腫瘤治療中的應用 |
| 1.1 BCL2家族蛋白調控細胞凋亡 |
| 1.2 BCL2家族的三個亞家族蛋白的功能 |
| 1.2.1 BAK/BAX的激活調控凋亡與部分線粒體功能 |
| 1.2.2 抗凋亡BCL2家族蛋白抑制BAK/ BAX激活,并在腫瘤發(fā)生發(fā)展及耐藥中起重要作用 |
| 1.2.3 僅含BH3結構域蛋白既激活BAK/BAX,又抑制抗凋亡BCL2蛋白 |
| 1.3 基于BCL2家族蛋白的抗腫瘤藥物研發(fā) |
| 1.3.1 抑制BCL2的BH3類似物 |
| 1.3.2 抑制MCL1的BH3類似物 |
| 1.4 BCL2家族蛋白與微管穩(wěn)定性藥物的敏感性 |
| 1.5 BCL2家族蛋白與酪氨酸激酶抑制劑的敏感性 |
| 1.6 BCL2家族蛋白預測抗腫瘤藥物敏感性 |
| 2. 實驗材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 卵巢癌細胞 |
| 2.1.2 實驗試劑 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 細胞培養(yǎng) |
| 2.2.2 細胞免疫沉淀 |
| 2.2.3 細胞凋亡檢測 |
| 2.2.4 BAK/BCLX_L和BAK/MCL1與MCL1抑制劑敏感性相關分析 |
| 2.2.5 對Broad和Sanger數(shù)據(jù)庫中細胞株分析紫杉醇與MCL1抑制劑敏感性相關分析 |
| 2.2.6 內源性BCL2蛋白表達水平與藥物敏感性的相關統(tǒng)計分析 |
| 2.2.7 BCL2家族蛋白在卵巢癌細胞中表達水平檢測 |
| 2.2.8 BCL2家族單一蛋白表達水平與藥物敏感性相關性統(tǒng)計分析 |
| 2.2.9 利用生物信息工具基于Kaplan Meier-plotter分析BCL2家族蛋白mRNA水平與卵巢癌患者生存率相關性 |
| 2.2.10 利用生物信息工具基于Gene Expression Profiling Interactive Analysis分析BCL2家族蛋白mRNA水平與卵巢癌患者生存率相關性 |
| 2.2.11 利用生物信息工具基于The Cancer Genome Atlas分析紫杉醇治療患者BCL2家族蛋白mRNA水平與生存率相關性 |
| 2.2.12 紫杉醇處理后,BH3蛋白與抗凋亡蛋白的結合情況分析 |
| 2.2.13 S63845協(xié)同紫杉醇對卵巢癌細胞的凋亡影響 |
| 2.2.14 動物水平S63845聯(lián)合紫杉醇對卵巢癌細胞荷瘤小鼠的作用分析 |
| 2.2.15 對腫瘤組織進行石蠟切片 |
| 2.2.16 對石蠟切片免疫組化染色方法 |
| 2.2.17 構建卵巢癌PDX模型,并進行小鼠對紫杉醇的敏感性實驗 |
| 2.2.18 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 |
| 3. 實驗結果 |
| 3.1 卵巢癌細胞株內,內源性BAK/MCL1、BAK/BCLXL復合物呈現(xiàn)多樣化 |
| 3.2 BAK/MCL1細胞對紫杉醇、S63845、長春新堿等藥物更敏感 |
| 3.3 BAK/MCL1復合物含量高的細胞對紫杉醇等更敏感 |
| 3.4 小鼠PDX模型顯示BAK/MCL1復合物卵巢癌積極響應紫杉醇 |
| 3.5 BAK/MCL1復合物預測紫杉醇等藥物敏感性優(yōu)于單一 BCL2家族蛋白 |
| 3.6 紫杉醇誘導BIM替代BAK結合MCL1 |
| 3.7 S63845協(xié)同紫杉醇誘導BAK/MCL1型卵巢癌細胞凋亡 |
| 3.8 S63845協(xié)同紫杉醇介導小鼠移植BAK/MCL1型卵巢癌的細胞凋亡 |
| 4. 討論與展望 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 在讀期間發(fā)表的學術論文與取得的其他研究成果 |
（6）深海微生物來源Loonamycin抗三陰乳腺癌作用機制初探（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 Loongmycin對人三陰乳腺癌細胞增殖,周期和凋亡的影響 |
| 一、材料和儀器 |
| 二、實驗方法 |
| 三、實驗結果 |
| 四、討論 |
| 第二部分 Loonamycin處理三陰乳腺癌細胞轉錄組測序分析 |
| 一、材料和儀器 |
| 二、實驗方法 |
| 三、實驗結果 |
| 四、討論 |
| 全文總結 |
| 參考文獻 |
| 綜述 Chk1及其抑制劑在腫瘤中的作用 |
| 參考文獻 |
| 已發(fā)表文章情況 |
| 致謝 |
（7）Vosaroxin和IACS-010759分別與Venetoclax協(xié)同抗急性髓系白血病的活性與機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 白血病 |
| 1.1.1 白血病的定義 |
| 1.1.2 白血病的分類 |
| 1.2 急性髓系白血病 |
| 1.2.1 急性髓系白血病的定義 |
| 1.2.2 急性髓系白血病的分型 |
| 1.2.3 急性髓系白血病的染色體異常與基因突變 |
| 1.2.4 急性髓系白血病的治療現(xiàn)狀 |
| 1.2.5 白血病干細胞(Leukemia stem cells,LSCs) |
| 1.3 BCL-2 家族蛋白及BCL-2 抑制劑 |
| 1.3.1 Bcl-2 家族蛋白成員及結構 |
| 1.3.2 Bcl-2 家族蛋白功能 |
| 1.3.3 Bcl-2 抑制劑 |
| 1.4 DNA拓撲異構酶 |
| 1.4.1 拓撲異構酶Ⅱ |
| 1.4.2 拓撲異構酶Ⅱ α抑制劑 |
| 1.4.3 Vosaroxin(SNS-595) |
| 1.5 瓦氏效應(Warburg effect) |
| 1.6 線粒體氧化磷酸化(Oxidative phosphorylation, OXPHOS) |
| 1.7 線粒體復合物Ⅰ抑制劑IACS-010759 |
| 1.8 本論文研究的內容與意義 |
| 第二章 Vosaroxin協(xié)同增強Venetoclax殺傷急性髓系白血病細胞的活性與機制研究 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 實驗材料及儀器 |
| 2.2.1 實驗細胞及組織 |
| 2.2.2 實驗試劑及耗材 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 實驗儀器 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 細胞復蘇 |
| 2.3.2 細胞培養(yǎng) |
| 2.3.3 細胞凍存 |
| 2.3.4 急性髓系白血病臨床樣本細胞及正常人骨髓單核細胞的分離及培養(yǎng) |
| 2.3.5 流式細胞術檢測凋亡 |
| 2.3.6 集落形成實驗 |
| 2.3.7 Western blotting |
| 2.3.8 堿性彗星實驗 |
| 2.3.9 免疫共沉淀實驗(Co-IP) |
| 2.3.10 統(tǒng)計學分析 |
| 2.4 實驗結果 |
| 2.4.1 Venetoclax和 Vosaroxin具有協(xié)同抗急性髓系白血病活性 |
| 2.4.2 Vosaroxin可部分削弱Venetoclax對 Mcl-1 的誘導作用,但無法阻止Mcl-1 與游離的Bim結合 |
| 2.4.3 DNA損傷在Venetoclax和 Vosaroxin協(xié)同誘導急性髓系白血病細胞凋亡中的作用 |
| 2.4.4 Venetoclax干擾對Vosaroxin誘導的DNA雙鏈斷裂的修復 |
| 2.4.5 Venetoclax和 Vosaroxin協(xié)同誘導急性髓系白血病臨床樣本細胞凋亡 |
| 2.4.6 Venetoclax和 Vosaroxin協(xié)同殺傷急性髓系白血病祖細胞,但不傷害正常的造血祖細胞 |
| 2.5 小結與討論 |
| 第三章 IACS-010759 協(xié)同Venetoclax抗急性髓系白血病的活性與機制研究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 實驗材料及儀器 |
| 3.2.1 實驗試劑 |
| 3.2.2 實驗材料 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 線粒體提取 |
| 3.3.2 線粒體膜電位檢測 |
| 3.3.3 Seahorse實驗 |
| 3.3.4 shRNA沉默細胞株及cDNA過表達細胞株的建立 |
| 3.3.5 急性髓系白血病小鼠異種移植模型構建 |
| 3.3.6 統(tǒng)計學分析 |
| 3.4 實驗結果 |
| 3.4.1 IACS-010759和Venetoclax協(xié)同誘導依賴OXPHOS的急性髓系白血病細胞系凋亡 |
| 3.4.2 IACS-010759和Venetoclax協(xié)同誘導急性髓系白血病臨床樣本細胞凋亡并協(xié)同殺傷急性髓系白血病祖細胞 |
| 3.4.3 Venetoclax在急性髓系白血病細胞系衍生的異種移植小鼠模型中顯著增強IACS-010759 的抗白血病活性 |
| 3.4.4 Venetoclax不能增強IACS-010759對OXPHOS的抑制作用 |
| 3.4.5 IACS-010759 誘導線粒體易感態(tài),從而增強Venetoclax所誘導的細胞色素c的釋放 |
| 3.5 小結與討論 |
| 結論 |
| 附錄 |
| 參考文獻 |
| 碩博連讀期間發(fā)表論文及獲獎情況 |
| 致謝 |
（8）基于條件重編程細胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分: 條件重編程細胞的培養(yǎng)、鑒定 |
| 一、實驗材料 |
| 1、患者與樣本 |
| 2、主要試劑、耗材 |
| 3、主要儀器 |
| 二、實驗方法 |
| 1、條件重編程細胞培養(yǎng)及傳代 |
| 2、高通量測序 |
| 三、實驗結果 |
| 1、條件重編程細胞及其鏡下形態(tài) |
| 2、條件重編程細胞與腫瘤組織的一致性 |
| 四、討論 |
| 1、條件重編程培養(yǎng)技術的發(fā)展過程 |
| 2、條件重編程細胞與原腫瘤組織的一致性 |
| 五、小結 |
| 第二部分: 條件重編程三陰性乳腺癌細胞高通量藥篩試驗 |
| 一、實驗方法 |
| 1、藥物組設計 |
| 2、敏感藥物篩選實驗 |
| 3、藥篩實驗數(shù)據(jù)分析 |
| 二、實驗結果 |
| 1、條件重編程細胞藥敏篩查 |
| 2、條件重編程細胞藥敏試驗DSS評分的整合 |
| 3、條件重編程藥敏試驗的穩(wěn)定性 |
| 三、討論 |
| 1、條件重編程細胞藥敏試驗的穩(wěn)定性 |
| 2、PI3K-Akt通路靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應用 |
| 3、mTOR通路靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應用 |
| 4、表皮生長因子受體靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應用 |
| 5、靶向血管形成在三陰性乳腺癌中的應用 |
| 6、拓撲異構酶靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應用 |
| 7、靶向乏氧在三陰性乳腺癌治療中的應用 |
| 四、小結 |
| 第三部分: 條件重編程細胞的高通量測序 |
| 一、實驗方法 |
| 1、條件重編程三陰性乳腺癌細胞的外顯子基因突變分析 |
| 2、條件重編程三陰性乳腺癌細胞與條件重編程正常乳腺組織細胞總體轉錄組差異分析 |
| 3、條件重編程細胞基因集變異分析 |
| 二、實驗結果 |
| 1、外顯子基因突變情況 |
| 2、條件重編程三陰性乳腺癌細胞與條件重編程正常乳腺組織細胞的轉錄組差異 |
| 3、三陰性乳腺癌來源的條件重編程細胞的基因集變異分析 |
| 4、基因集變異分析與藥物敏感性的相關性 |
| 三、討論 |
| 1、靶點基因外顯子突變對藥物敏感性的預測作用 |
| 2、基因集變異分析對藥物敏感性的預測作用 |
| 四、小結 |
| 第四部分: 三陰性乳腺癌預后相關通路分析 |
| 一、實驗方法 |
| 1、數(shù)據(jù)獲取及批間差校正 |
| 2、差異基因篩選及基因集富集分析 |
| 3、生存分析 |
| 二、實驗結果 |
| 1、批間差校正 |
| 2、差異基因篩選 |
| 3、基因集富集分析 |
| 4、差異基因對三陰性乳腺癌患者生存的影響 |
| 5、GSVA評分對患者生存的影響 |
| 三、討論 |
| 1、三陰性乳腺癌的預后生物標記 |
| 2、GSVA評分可作為三陰性乳腺患者的預后評估手段 |
| 四、小結 |
| 結論 |
| 綜述: 個體化腫瘤模型在乳腺癌中的應用 |
| 背景 |
| 一、2D腫瘤模型 |
| 二、腫瘤類器官 |
| 三、PDX模型 |
| 四、條件重編程細胞模型 |
| 五、微流控芯片腫瘤模型 |
| 六、3D生物打印腫瘤模型 |
| 結論 |
| 參考文獻 |
| 縮略詞表 |
| 博士在讀期間發(fā)表的文章 |
| 致謝 |
（9）葉酸修飾的改性SN38前藥自組裝膠束傳遞系統(tǒng)的構建及體外研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮寫索引 |
| 1 引言 |
| 1.1 腫瘤及相關治療背景 |
| 1.2 喜樹堿類抗癌藥物 |
| 1.2.1 喜樹堿類藥物的應用局限性 |
| 1.2.2 SN38 納米制劑研究現(xiàn)狀 |
| 1.3 細胞穿膜肽(CPPs) |
| 1.3.1 CPPs的種類 |
| 1.3.2 CPPs的攝取機制 |
| 1.3.3 CPPs在腫瘤治療的應用 |
| 1.4 葉酸靶向修飾的藥物傳遞系統(tǒng) |
| 1.5 立題依據(jù)及研究思路 |
| 2 SN38 前藥的制備及膠束的制備和表征 |
| 2.1 儀器與試劑 |
| 2.1.1 儀器 |
| 2.1.2 試劑 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 SN38 前藥(TAT-PEG_(2000)-SN38)的制備 |
| 2.2.2 SN38 前藥(TAT-PEG_(2000)-SN38)表征 |
| 2.2.3 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束的制備及表征 |
| 2.3 實驗結果與討論 |
| 2.3.1 TAT-PEG_(2000)-SN38 的制備 |
| 2.3.2 TAT-PEG_(2000)-SN38 核磁圖譜分析(~1H-NMR) |
| 2.3.3 TAT-PEG_(2000)-SN38 紅外光譜分析(FT-IR) |
| 2.3.4 TAT-PEG_(2000)-SN38 紫外光譜分析(UV-vis) |
| 2.3.5 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束的粒徑和Zeta電位的測定 |
| 2.3.6 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束的表面形態(tài) |
| 2.4 本章小結 |
| 3 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束的體外抗腫瘤活性評價 |
| 3.1 儀器與材料 |
| 3.1.1 儀器 |
| 3.1.2 材料 |
| 3.1.3 溶液配制 |
| 3.1.4 細胞系 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.2.1 細胞培養(yǎng) |
| 3.2.2 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束對腫瘤細胞的抑制效果 |
| 3.2.3 激光共聚焦顯微鏡定性分析腫瘤細胞對膠束的攝取 |
| 3.2.4 流式細胞儀定量分析腫瘤細胞對膠束的攝取 |
| 3.3 實驗結果與討論 |
| 3.3.1 TAT-PEG_(2000)-SN38 膠束對腫瘤細胞的抑制效果 |
| 3.3.2 激光共聚焦顯微鏡定性分析腫瘤細胞對膠束的攝取 |
| 3.3.3 流式細胞儀定量分析腫瘤細胞對膠束的攝取 |
| 3.4 本章小結 |
| 4 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的建立及性質考察 |
| 4.1 儀器與試劑 |
| 4.1.1 儀器 |
| 4.1.2 材料 |
| 4.2 實驗方法 |
| 4.2.1 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的建立 |
| 4.2.2 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)性質考察 |
| 4.3 結果與討論 |
| 4.3.1 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的建立 |
| 4.3.2 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)性質的考察 |
| 4.4 本章小結 |
| 5 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的體外抗腫瘤評價 |
| 5.1 儀器與材料 |
| 5.1.1 儀器 |
| 5.1.2 材料和試劑 |
| 5.1.3 細胞系 |
| 5.2 實驗方法 |
| 5.2.1 細胞培養(yǎng) |
| 5.2.2 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)對腫瘤細胞的抑制效果. |
| 5.2.3 流式細胞儀定量分析腫瘤細胞對藥物的攝取 |
| 5.2.4 激光共聚焦定性分析腫瘤細胞對藥物的攝取 |
| 5.2.5 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的細胞攝取機制分析 |
| 5.3 實驗結果與討論 |
| 5.3.1 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)對腫瘤細胞的抑制效果. |
| 5.3.2 流式細胞儀定量分析腫瘤細胞對傳遞系統(tǒng)的攝取 |
| 5.3.3 激光共聚焦定性分析腫瘤細胞對傳遞系統(tǒng)的攝取 |
| 5.3.4 FA/TAT-PEG_(2000)-SN38 傳遞系統(tǒng)的細胞攝取機制分析 |
| 5.4 本章小結 |
| 6 總結與展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 個人簡歷、在校期間發(fā)表的學術論文及取得的研究成果 |
（10）羥基蒽醌衍生物的設計合成及體外抗腫瘤活性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 蒽醌類化合物簡介 |
| 1.2 蒽醌類化合物的活性研究 |
| 1.2.1 抗癌作用 |
| 1.2.2 抗菌消炎作用 |
| 1.2.3 抗病毒作用 |
| 1.2.4 與DNA的相互作用 |
| 1.2.5 蒽醌類藥物存在的問題 |
| 1.3 蒽醌類藥物的合成進展 |
| 1.3.1 1,4 二羥基蒽醌的主要合成方法 |
| 1.3.2 羥基蒽醌類化合物的結構修飾 |
| 第二章 蒽醌衍生物的設計及虛擬篩選 |
| 2.1 虛擬篩選的簡介 |
| 2.2 系列一化合物的設計 |
| 2.3 系列二化合物的設計 |
| 第三章 目標化合物的合成與表征 |
| 3.1 實驗儀器及藥品 |
| 3.1.1 實驗儀器 |
| 3.1.2 實驗試劑 |
| 3.1.3 所用程序及在線工具 |
| 3.2 目標化合物的合成路線 |
| 3.2.1 目標化合物A1-A20 的制備方法 |
| 3.2.2 目標化合物B1-B9 的制備方法 |
| 3.3 目標化合物的理化性質及譜圖數(shù)據(jù) |
| 第四章 分子對接與藥理實驗 |
| 4.1 體外抗腫瘤活性研究 |
| 4.1.1 實驗材料 |
| 4.1.2 實驗儀器 |
| 4.1.3 實驗步驟與方法 |
| 4.1.4 實驗結果 |
| 4.2 蒽醌衍生物與抗腫瘤靶標的對接研究 |
| 4.2.1 深度學習建模 |
| 4.2.2 DNA拓撲異構酶Ⅱ(1ZXM)的對接結果 |
| 4.2.3 對接作用分析 |
| 4.3 化合物構效關系的分析 |
| 第五章 結論與展望 |
| 5.1 結論 |
| 5.2 展望 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間發(fā)表論文情況 |
| 附錄 |
| 致謝 |
四、拓撲異構酶抑制劑的臨床應用（論文參考文獻）
- [1]非喹諾酮類細菌ⅡA型拓撲異構酶抑制劑的研究進展[J]. 馬潔,李荀,劉兆鵬. 中國藥物化學雜志, 2021(11)
- [2]PARP抑制劑與GSK3抑制劑協(xié)同效應及其作用機制研究[D]. 張寧. 中國科學院大學(中國科學院上海藥物研究所), 2021
- [3]具有抗菌活性的新型喹惡啉-N1, N4-二氧化物的設計、合成和作用機制研究[D]. 張鶴營. 華中農業(yè)大學, 2021(02)
- [4]HDAC/Topo及DHHC20抑制劑的設計合成和抗腫瘤活性研究[D]. 董金嬌. 河北大學, 2021(11)
- [5]BAK-MCL1復合物預測卵巢癌對紫杉醇和S63845的敏感性[D]. 劉東巖. 中國科學技術大學, 2021(09)
- [6]深海微生物來源Loonamycin抗三陰乳腺癌作用機制初探[D]. 薛佳興. 中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學, 2021(09)
- [7]Vosaroxin和IACS-010759分別與Venetoclax協(xié)同抗急性髓系白血病的活性與機制研究[D]. 劉芳兵. 吉林大學, 2021(01)
- [8]基于條件重編程細胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究[D]. 趙彬. 北京協(xié)和醫(yī)學院, 2021(02)
- [9]葉酸修飾的改性SN38前藥自組裝膠束傳遞系統(tǒng)的構建及體外研究[D]. 李蝶蝶. 重慶理工大學, 2021(02)
- [10]羥基蒽醌衍生物的設計合成及體外抗腫瘤活性研究[D]. 沈泓佑. 廣西大學, 2020(07)