一、LAK細(xì)胞之誘導(dǎo)條件的探討（論文文獻綜述）
趙磊,周桂珍,張慧霞[1]（2012）在《低劑量電離輻射后LAK細(xì)胞對動物骨肉瘤治療作用的研究》文中研究表明目的:探索低劑量電離輻射對LAK細(xì)胞治療動物骨肉瘤的影響。方法:培養(yǎng)的UMR-106細(xì)胞接種在月齡大鼠的前胸壁皮下,建立動物骨肉瘤模型。將LAK細(xì)胞分別經(jīng)不同劑量X線輻照后,分別于3、6、9、12、15、18和21d進行細(xì)胞計數(shù)。采用3H-TdR釋放法測定LAK細(xì)胞的殺傷活性。winn氏測定法測定LAK細(xì)胞對皮下腫瘤細(xì)胞生長的影響。結(jié)果:大鼠腫瘤發(fā)生率達到100%,動物模型建立成功。LAK細(xì)胞在第6～9天時,3.25mGy受照組細(xì)胞擴增量明顯大于對照組。經(jīng)0.65、3.25mGy輻照及未輻照的LAK細(xì)胞輸入荷瘤小鼠后,其生存期以3.25mGy組為最長。將骨肉瘤細(xì)胞與LAK細(xì)胞一并注入小鼠右后肢皮下,30d后發(fā)現(xiàn),3.25mGy輻射的LAK細(xì)胞小鼠未見腫瘤生長,而0及0.65mGy輻照的LAK細(xì)胞小鼠,可見質(zhì)量2.0g腫瘤生長,對照組為6.25g。結(jié)論:低劑量電離輻射可以使LAK細(xì)胞擴增,低劑量電離輻射后LAK細(xì)胞的殺傷活性及對骨肉瘤的抗瘤作用均明顯增強。
王鍇佳[2]（2010）在《胰島素誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞株GPI-PLD基因的表達及其免疫學(xué)效應(yīng)》文中指出目的初步研究胰島素對HepG2細(xì)胞GPI-PLD基因表達和GPI-PLD酶活性的影響,以及對細(xì)胞膜上GPI錨定蛋白質(zhì)如CEA分子的釋放改變,這些效應(yīng)是否能夠提高淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）殺傷HepG2細(xì)胞和GPI-PLD基因轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞的敏感性。方法用陽離子聚合物將本室已經(jīng)構(gòu)建的真核表達載體pcDNA3.1 （+）/GPI-PLD轉(zhuǎn)入HepG2細(xì)胞,以未轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞組、陽離子聚合物處理組以及轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.1（+）的細(xì)胞組為對照,G418篩選出陽性細(xì)胞克隆。RT-PCR法鑒定GPI-PLD基因的mRNA表達水平,利用自制具完整GPI結(jié)構(gòu)的胎盤型堿性磷酸酶（PLAP）做底物,定量檢測GPI-PLD酶活性。利用胰島素分別誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞以及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞48h,RT-PCR檢測各組細(xì)胞GPI-PLD基因的mRNA表達水平；利用自制具完整GPI結(jié)構(gòu)的胎盤型堿性磷酸酶（PLAP）做底物,定量檢測GPI-PLD酶活性；ELISA檢測各組細(xì)胞CEA的釋放情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面GPI錨定的CEA分子的變化。IL-2誘導(dǎo)從正常人外周血分離的外周血單個核細(xì)胞。高倍鏡下觀察LAK細(xì)胞與各組HepG2細(xì)胞按20：1的效靶比共育12h后的情況,MTT法檢測LAK細(xì)胞對各組細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。結(jié)果RT-PCR分析和GPI-PLD酶活性測定表明,穩(wěn)定高表達GPI-PLD的HepG2細(xì)胞系已經(jīng)建立。胰島素（10-6mol／L）誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞以及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞48h后：1.RT-PCR測定表明誘導(dǎo)后,HepG2細(xì)胞組GPI-PLD基因的mRNA表達水平明顯高于誘導(dǎo)前細(xì)胞的表達水平,統(tǒng)計具有顯著性差異（P<0.01）,而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)前后GPI-PLD基因的mRNA表達水平增高不明顯；2.誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞組細(xì)胞的GPI-PLD酶活性明顯高于誘導(dǎo)前細(xì)胞的酶活性,統(tǒng)計具有顯著性差異（P<0.01）,而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)前后GPI-PLD酶活性增高不明顯；3.誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞釋放的CEA分子和誘導(dǎo)前相比明顯增多,并且,膜上GPI錨定的CEA分子比誘導(dǎo)前細(xì)胞減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）,而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞誘導(dǎo)后釋放的CEA分子增加不明顯,而誘導(dǎo)后膜上GPI錨定的CEA分子比誘導(dǎo)前細(xì)胞減少,統(tǒng)計具有顯著性差異（P<0.01）。LAK細(xì)胞與各組HepG2細(xì)胞按20：1的效靶比共育12h后,HepG2細(xì)胞組和誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞組、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞組以及誘導(dǎo)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GPI-PLD基因的HepG2細(xì)胞組相比,靶細(xì)胞周圍的LAK細(xì)胞相對減少,形成的細(xì)胞團塊也不明顯。MTT法檢測顯示,LAK細(xì)胞對誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞的殺傷活性和誘導(dǎo)前細(xì)胞相比,殺傷活性增加,統(tǒng)計具有顯著性差異（P<0.01）,而胰島素誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染組殺傷活性和誘導(dǎo)前轉(zhuǎn)染組相比,殺傷活性也有增加,統(tǒng)計具有差異（P<0.05）。結(jié)論1.建立了穩(wěn)定表達GPI-PLD的HepG2細(xì)胞株。2.胰島素能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞GPI-PLD基因過表達,GPI-PLD活性增加。同時,細(xì)胞膜上GPI錨定的CEA減少,從而增加LAK細(xì)胞殺傷HepG2細(xì)胞的敏感性。
趙紅麗,洪珞珈[3]（2008）在《免疫細(xì)胞在白血病治療應(yīng)用的進展》文中進行了進一步梳理微小殘留病是緩解期惡性血液病復(fù)發(fā)的主要原因,各種惡性血液病經(jīng)過正規(guī)的化療大多數(shù)患者體內(nèi)大量的惡性細(xì)胞被消滅,但是幾乎不可能徹底根除所有的惡性細(xì)胞,必然殘留一定數(shù)量的周期外的不能被殺滅的細(xì)胞。傳統(tǒng)的方法是繼續(xù)化療盲目殺滅,其結(jié)果腫瘤細(xì)胞沒有消滅,而正常組織破壞嚴(yán)重,患者不僅經(jīng)受不必要的痛苦而且生存期縮短。自體免疫細(xì)胞能調(diào)節(jié)以及增加機體的免疫力,消除患者體內(nèi)的免疫抑制因素,回輸體內(nèi)后可直接殺傷或誘導(dǎo)免疫細(xì)胞殺傷殘留腫瘤細(xì)胞。文章對五種免疫細(xì)胞（LAK,CIK,DC,CTL,TIL）,在白血病治療中應(yīng)用進展做一綜述。
呂慧芳,任歡,李殿俊,徐玉清,張鳳民,曾振武,阮云祥,張本寧[4]（2008）在《健康人外周血單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的NK細(xì)胞對腦膠質(zhì)瘤殺傷作用的探討》文中提出目的對體外培養(yǎng)的 NK 細(xì)胞殺傷腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞進行探討,為腦膠質(zhì)瘤的免疫細(xì)胞療法提供理論基礎(chǔ)。方法從4個健康人外周血提取單個核細(xì)胞,在 KRATM培養(yǎng)環(huán)境下,誘導(dǎo)產(chǎn)生 NK 細(xì)胞和LAK 細(xì)胞。分別用細(xì)胞計數(shù)法和流式細(xì)胞儀檢測 NK 細(xì)胞增殖和細(xì)胞表面特異性標(biāo)志 CD3/CD16/CD56,并用 MTT 法檢測 NK 細(xì)胞及 LAK 細(xì)胞對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷。結(jié)果經(jīng)過體外培養(yǎng),平均可得到7.93×109個以上細(xì)胞。和 LAK 細(xì)胞相比,NK 細(xì)胞對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 LN18、LN229、T98G 和U87MG 的敏感性更高。結(jié)論 NK 細(xì)胞能夠?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答,為過繼性免疫細(xì)胞治療腦膠質(zhì)瘤提供可能。
李可,呂章春,陳海祥,張立煌[5]（2008）在《抗原致敏DC聯(lián)合CIK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞殺傷作用的研究》文中提出[目的]研究腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞（DC）聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷作用,及肺癌細(xì)胞殺傷作用中細(xì)胞因子水平。[方法]取健康人外周血單個核細(xì)胞（PBMNC）,常規(guī)誘導(dǎo)出DC、CIK、LAK細(xì)胞;用肺癌A549細(xì)胞提取的腫瘤抗原沖擊DC,倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測DC經(jīng)抗原沖擊和未經(jīng)抗原沖擊后其表型變化;把CIK細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞和DC-LAK細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞,肺腺癌原代細(xì)胞作為靶細(xì)胞,共分為4組,在10∶1、20∶1、50∶1的效靶比時,進行殺傷試驗,使用LDH釋放法測定殺傷活性;ELISA法檢測殺傷試驗中細(xì)胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的分泌水平。[結(jié)果]DC經(jīng)腫瘤抗原沖擊后在鏡下呈典型成熟形態(tài);DC-CIK細(xì)胞對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷活性高于CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞和DC-LAK細(xì)胞（P<0.05）,隨著效靶比的升高,DC-CIK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)隨之增強（P<0.05）;細(xì)胞殺傷試驗中DC-CIK細(xì)胞組中IFN-γ、IL-12的分泌量明顯高于其它3組（P<0.05）;而IL-2的分泌量以DC-LAK細(xì)胞組為最高,DC-LAK和LAK細(xì)胞組明顯高于其他2組（P<0.05）。[結(jié)論]腫瘤抗原致敏的DC可誘導(dǎo)特異性CIK細(xì)胞,顯著提高CIK細(xì)胞對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷作用,其殺傷作用可能與IFN-γ、IL-12的分泌量有關(guān)。
李可,呂章春,陳海祥,張立煌[6]（2008）在《抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞對肺腺癌細(xì)胞的殺傷作用》文中指出[目的]研究腫瘤抗原致敏的樹突狀細(xì)胞（DC）誘導(dǎo)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷作用,并與單獨LAK、CIK細(xì)胞的殺傷效果進行比較。[方法]取健康人外周血單個核細(xì)胞（PBMNC）,常規(guī)誘導(dǎo)出DC、CIK、LAK細(xì)胞;用肺癌A549細(xì)胞提取的腫瘤抗原沖擊DC,倒置顯微鏡下觀察DC形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測DC經(jīng)抗原沖擊和未經(jīng)抗原沖擊后其表型變化;把CIK細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞、LAK細(xì)胞和DC-LAK細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞,肺腺癌原代細(xì)胞作為靶細(xì)胞,共分為4組,在10∶1、20∶1、50∶1的效靶比時,進行殺傷試驗,使用LDH釋放法測定殺傷活性。[結(jié)果]DC經(jīng)腫瘤抗原沖擊后在鏡下呈典型成熟形態(tài);流式細(xì)胞儀檢測DC經(jīng)腫瘤抗原沖擊和未經(jīng)腫瘤抗原沖擊其表面分子CD40、CD80、CD86和HLA-DR的表達,前者明顯高于后者,兩者有顯著性差異（P<0.01）;DC-CIK細(xì)胞對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷活性高于DC-LAK細(xì)胞、CIK細(xì)胞和LAK細(xì)胞（P<0.05）,隨著效靶比的升高,DC-CIK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)隨之增強（P<0.05）。[結(jié)論]腫瘤抗原致敏的DC可誘導(dǎo)特異性CIK細(xì)胞,DC-CIK細(xì)胞對肺腺癌原代細(xì)胞的殺傷作用明顯高于DC-LAK、CIK、LAK細(xì)胞。
孫杰[7]（2008）在《共培養(yǎng)DC-LAK細(xì)胞抗腫瘤作用及經(jīng)不同途徑回輸后在荷瘤小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布》文中提出目的:本試驗采用小鼠肺癌腫瘤模型為研究對象。取小鼠骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC）,用腫瘤抗原活化DC成熟,與小鼠脾淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的淋巴因子激活殺傷細(xì)胞（Lymphokine activated killer cell,LAK）細(xì)胞共培養(yǎng),觀察共培養(yǎng)細(xì)胞的抗腫瘤能力及回輸體內(nèi)后的組織器官分布特點。為今后在臨床聯(lián)合應(yīng)用DC和LAK細(xì)胞治療肺癌提供試驗依據(jù)。方法:1培養(yǎng)小鼠肺癌腫瘤細(xì)胞株Lewis lung carcinoma（LLC）,收集對數(shù)生長期的LLC細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為1×107/ml。以C57BL/6小鼠右側(cè)前肢腋下為注射部位,皮下注射單細(xì)胞懸液0.2ml,以建立小鼠腫瘤模型。2取小鼠腫瘤組織,應(yīng)用反復(fù)凍融法制備腫瘤抗原,使用考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒進行LLC腫瘤抗原蛋白定量。3 DC與LAK細(xì)胞的體外培養(yǎng)。從C57BL/6小鼠脛骨與股骨獲得骨髓細(xì)胞,用含有rmGM-CSF 50ng/ml和rmIL-4 25ng/ml的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng),隔天半量換液,并加相應(yīng)細(xì)胞因子。培養(yǎng)至第七天的DC,加入LLC腫瘤抗原100mg/ml,48h后,收獲懸浮細(xì)胞,為活化DC。使用流式細(xì)胞儀檢測CD80、CD86的表達情況。于C57BL/6小鼠獲得脾臟,過400目鋼網(wǎng)制備脾細(xì)胞懸液。利用梯度離心法收獲脾淋巴細(xì)胞。用含rmIL-2 1000iu/ml的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)至第七天,收獲細(xì)胞為LAK細(xì)胞。4 DC-LAK的共同培養(yǎng)。收獲的活化DC與LAK細(xì)胞,按1:5的比例混合,加入rmIL-2 500iu/ml、rmGM-CSF 25ng/ml、rmIL-4 12.5ng/ml培養(yǎng)48h后收集,為共培養(yǎng)DC-LAK細(xì)胞。5共培養(yǎng)DC-LAK體外殺傷實驗。效應(yīng)細(xì)胞為LAK細(xì)胞組和與腫瘤抗原致敏DC共培養(yǎng)LAK細(xì)胞（DC-LAK）,靶細(xì)胞為LLC細(xì)胞,分別按效靶比20:1、40:1的條件下用MTT法檢測兩種細(xì)胞的殺傷活性。6回輸外源性殺傷細(xì)胞。荷瘤C57BL/6小鼠48只,于注射LLC后10天,回輸經(jīng)CFSE標(biāo)記的外源性殺傷細(xì)胞。荷瘤小鼠隨機分為瘤旁皮下注射和腹腔注射2組,各組再隨機分為DC-LAK組與LAK組,各組再隨機分為4組（1h、4h、24h、72h）,每組3只,每只分別經(jīng)瘤旁皮下注射或腹腔注射CFSE標(biāo)記的DC-LAK細(xì)胞或LAK細(xì)胞3×107/0.2ml。7外源性殺傷細(xì)胞體內(nèi)分布的檢測。各組荷瘤小鼠分別于回輸外源性殺傷細(xì)胞后1h、4h、24h、72h,取外周血、肝臟、脾臟、肺臟與腫瘤。肝臟、脾臟、肺臟與皮下腫瘤過200目鋼網(wǎng),加入與原重量相等的PBS重懸。外周血按體積用PBS1:1稀釋。處理好的血,肝臟,脾臟,肺臟與皮下腫瘤各樣本取10μl,滴于載玻片上,上覆蓋玻片,每個樣本滴片3張。激光共聚焦熒光顯微鏡（Laser scanning confocal microscope,LSM）下觀察成像（激發(fā)波長為488nm,熒光信號的檢測通道為505nm的長通濾光片）。于400倍視野下觀察,每張玻片隨機選取10個視野,采集圖像,計數(shù)圖像中綠色熒光細(xì)胞。以3張玻片均數(shù)記為該樣本陽性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果:1小鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)9天后表面突起多樣化,細(xì)胞呈樹突狀。平均每只小鼠收獲DC6×106個。經(jīng)LLC腫瘤凍融抗原活化的DC,其表面CD80表達率為42.4%,CD86表達率為75.31%,CD80CD86共表達率為41.36%。2 DC和LAK細(xì)胞混合培養(yǎng)48h后形成DC-LAK細(xì)胞簇,少則數(shù)個細(xì)胞,多則數(shù)十個細(xì)胞。3外源性殺傷細(xì)胞對小鼠LLC肺癌細(xì)胞的體外殺傷活性。效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞為40:1時,單純LAK細(xì)胞組殺傷活性為（63.45±2.46%）,而經(jīng)LLC細(xì)胞抗原致敏的DC能誘導(dǎo)出LAK細(xì)胞對LLC肺癌細(xì)胞更強的殺傷活性（81.02±2.18%）。兩者相比較差異有顯著性（p<0.01）。當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞為20:1時,DC-LAK細(xì)胞對LLC細(xì)胞的殺傷活性（75.10±3.68%）仍明顯高于LAK細(xì)胞的殺傷活性（57.92±2.11%）（p<0.01）。4外源性殺傷細(xì)胞回輸荷瘤小鼠體內(nèi)的分布。（1）外源性殺傷細(xì)胞經(jīng)腹腔注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,標(biāo)記的DC-LAK細(xì)胞于回輸后1h時,在肺臟內(nèi)的分布達到峰值;4h時,肝臟和脾臟內(nèi)的分布達到峰值;24h時,腫瘤內(nèi)的分布達到峰值,此時腫瘤內(nèi)的分布高于其他臟器（p<0.05）。72h時,此時脾臟內(nèi)分布最多（p<0.05）。在整個觀測過程中,外周血中的分布始終很低。與LAK細(xì)胞組相比,在1h、4h、24h時腫瘤內(nèi)的分布DC-LAK組高于LAK組（p<0.05）。在72h時腫瘤內(nèi)的分布兩組無統(tǒng)計學(xué)差異。（2）外源性殺傷細(xì)胞經(jīng)瘤旁皮下注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,標(biāo)記的DC-LAK細(xì)胞于回輸后1h時,在肺臟內(nèi)的分布達到峰值;4h時,肝臟內(nèi)的分布達到峰值;24h時,腫瘤脾臟內(nèi)的分布達到峰值,此時腫瘤內(nèi)的分布高于其他臟器（p<0.05）。72h時,腫瘤脾臟內(nèi)分布最多。在整個觀測過程中,外周血中的分布始終很低。與LAK細(xì)胞組相比,在1h、4h、24h時腫瘤內(nèi)的分布DC-LAK組高于LAK組（p<0.05）。在72h時腫瘤內(nèi)的分布兩組無統(tǒng)計學(xué)差異。（3）兩種回輸途徑回輸?shù)谋容^。腹腔注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,DC-LAK細(xì)胞主要分布于肝臟和脾臟中;瘤旁皮下注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,DC-LAK細(xì)胞主要分布于腫瘤中。在各觀測時間點,DC-LAK細(xì)胞在腫瘤內(nèi)的分布瘤旁皮下注射組均高于腹腔注射組（p<0.05）。結(jié)論:1小鼠骨髓細(xì)胞體外聯(lián)合應(yīng)用rmGM-CSF和rmIL-4培養(yǎng),經(jīng)腫瘤細(xì)胞凍融抗原致敏,可以誘導(dǎo)擴增出較多數(shù)量、較高純度的樹突狀細(xì)胞,可滿足一般試驗的要求。2腫瘤凍融抗原致敏DC誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對小鼠LLC細(xì)胞具有高效的特異性殺傷作用。3 DC-LAK細(xì)胞經(jīng)腹腔注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,主要分布于肝臟和脾臟中;經(jīng)瘤旁皮下注射途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,主要分布于腫瘤組織中。DC與LAK細(xì)胞共培養(yǎng)后經(jīng)兩種途徑回輸荷瘤小鼠體內(nèi)后,均可提高LAK細(xì)胞于腫瘤組織內(nèi)的分布;在各觀測時間點,DC-LAK細(xì)胞在腫瘤內(nèi)的分布瘤旁皮下注射組均高于腹腔注射組。
馮云[8]（2006）在《人LAK細(xì)胞免疫效應(yīng)分子HMGN2的初步研究》文中研究表明人LAK細(xì)胞（lymphocyte-activated killer cells，淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞）／NK細(xì)胞、CTL細(xì)胞被認(rèn)為是機體抗瘤細(xì)胞系統(tǒng)和抗胞內(nèi)微生物感染的主要免疫細(xì)胞群體。LAK中存在多種具有殺菌作用的活性物質(zhì)，已經(jīng)在LAK細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了穿孔素、顆粒酶、顆粒溶素、LL-37、α-防御素等抗菌分子。LAK細(xì)胞中是否還有其它內(nèi)源性抗菌肽尚不清楚。 將rIL-2、PHA刺激培養(yǎng)一周的人LAK細(xì)胞用5％的乙酸勻漿，制備酸溶性粗提物。AU-PAGE及電泳凝膠瓊脂糖彌散法檢測出其中含有三組殺菌多肽成分，分別命名為HLP-1、HLP-2、HLP-3。利用制備性AU-PAGE電泳技術(shù)初步分離獲得這三個組分。將這三個組分用反向高效液相色譜技術(shù)進一步分離純化，瓊脂糖彌散法篩選純化各組分的抗菌活性，較強抗菌活性的組分進行Tricine-SDS-PAGE電泳初步測定分子量及純度。選擇高度純化的蛋白組分HLP-3p21，采取Edman降解法測定其氮端氨基酸序列，得到HLP-3p21的N-端10個氨基酸序列，分別為：脯氨酸（Pro，P），賴氨酸（Lys，K），精氨酸（Arg，R），賴氨酸（Lys，K），丙氨酸（Ala，A），谷氨酸（Glu，E），甘氨酸（Gly，G），天冬氨酸（Asp，D）丙氨酸（Ala，A），賴氨酸（Lys，K）。將該段氨基酸序列登錄美國國立醫(yī)學(xué)圖書館（NCBI），應(yīng)用Blast檢索工具進行短序列匹配的人蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索發(fā)現(xiàn)：這段序列與人非組蛋白HMGN2的氮端氨基酸序列完全相同。對HLP-3p21進行質(zhì)譜精確分子量分析，其分子量為9274.04 Da，也與HMGN2相同。使用本實驗室自制的兔抗HMGN2多克隆抗體對HLP-3p21用做Western blot，結(jié)果顯示HLP-3p21蛋白條帶處有較強的雜交信號。根據(jù)以上試驗結(jié)果，我們判斷HLP-3p21抗菌活性分子
史緋緋,楊成旺,蘇秀蘭[9]（2005）在《胃癌的生物治療進展》文中提出本文概述了有關(guān)胃癌生物治療的發(fā)展與前景。
高秋,李錦添,王思愚,陳詩萍,劉偉,吳一龍[10]（2004）在《樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對肺癌的生長抑制作用》文中指出目的 研究肺癌細(xì)胞裂解物負(fù)載的樹突狀細(xì)胞 （DC）誘導(dǎo)的淋巴因子激活殺傷細(xì)胞 （LAK ）對肺腺癌裸鼠移植瘤的生長抑制作用。方法 肺腺癌患者手術(shù)切除標(biāo)本接種裸鼠皮下建立肺腺癌移植瘤模型 ,同時將手術(shù)切除標(biāo)本用反復(fù)凍融的方法制備腫瘤細(xì)胞裂解物 ;同一患者外周血分離得到的單個核細(xì)胞中 ,貼壁的細(xì)胞加入DC生長因子 （DCGF）培養(yǎng)得DC ,未貼壁的細(xì)胞加入rhIL 2培養(yǎng)得LAK細(xì)胞。用腫瘤細(xì)胞裂解物負(fù)載自體DC ,誘導(dǎo)LAK細(xì)胞生成DC LAK細(xì)胞 ,注射荷瘤裸鼠腋下以觀察DC LAK細(xì)胞對肺癌移植瘤的生長抑制作用。結(jié)果 用肺癌手術(shù)標(biāo)本能成功建立裸鼠移植瘤模型。DC LAK組、LAK組、DC組和生理鹽水對照組腫瘤瘤重平均值分別為 0 .47、1.0 5、1.3 0和 1.5 8g ,DC LAK組、LAK組和DC組腫瘤生長抑制率分別為 70 .3 %、3 3 .5 %和 17.9% ,DC LAK細(xì)胞具有抑制裸鼠肺癌移植瘤生長的作用而且強于LAK細(xì)胞 （P <0 .0 5 ）。結(jié)論 通過荷瘤裸鼠體內(nèi)抗瘤實驗證實了DC LAK細(xì)胞的抗肺癌作用明顯高于LAK細(xì)胞 ,提示DC LAK細(xì)胞治療是更為有效的抗肺癌生物治療方法 ,為DC疫苗用于肺癌的臨床治療提供依據(jù)
二、LAK細(xì)胞之誘導(dǎo)條件的探討（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、LAK細(xì)胞之誘導(dǎo)條件的探討（論文提綱范文）
（1）低劑量電離輻射后LAK細(xì)胞對動物骨肉瘤治療作用的研究（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 儀器和材料 |
| 1.2 實驗動物和細(xì)胞系 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 細(xì)胞接種 |
| 1.3.2 病理染色以及堿性磷酸酶測定 |
| 1.3.3 生物活性細(xì)胞的分離、培養(yǎng) |
| 1.3.4 winn氏測定法 |
| 1.3.5 體外細(xì)胞殺傷活性試驗 |
| 1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 腫瘤生長曲線 |
| 2.2 荷瘤鼠平均存活時間 |
| 2.3 腫瘤組織和臟器中轉(zhuǎn)移瘤組織的病理染色 |
| 2.4 荷瘤鼠血中堿性磷酸酶活性水平 |
| 2.5 不同劑量X線輻照對生物活性細(xì)胞擴增的影響 |
| 2.6 不同照射量對LAK細(xì)胞殺傷活性的影響 |
| 3 討論 |
（2）胰島素誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞株GPI-PLD基因的表達及其免疫學(xué)效應(yīng)（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞匯表 |
| 前言 |
| 實驗技術(shù)路線圖 |
| 第一章 材料與方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 細(xì)胞株、正常人外周血、菌種和重組質(zhì)粒 |
| 1.2 主要試劑 |
| 1.3 主要儀器 |
| 2 方法 |
| 2.1 攜帶pcDNA3.1(+)/GPI-PLD質(zhì)粒的TG1大腸桿菌擴增培養(yǎng)及提取 |
| 2.2 重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/GPI-PLD轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞、篩選并鑒定 |
| 2.3 胰島素對HepG2細(xì)胞以及轉(zhuǎn)GPI-PLD基因HepG2細(xì)胞誘導(dǎo) |
| 2.4 誘導(dǎo)前后各組細(xì)胞被LAK細(xì)胞殺傷敏感性的改變 |
| 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 第二章 結(jié)果 |
| 1.質(zhì)粒提取酶切結(jié)果 |
| 2.經(jīng)G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組及對照組細(xì)胞GPI-PLD酶活性測定結(jié)果 |
| 3.細(xì)胞總RNA提取及鑒定結(jié)果 |
| 4.RT-PCR法檢測GPI-PLD基因mRNA的表達量變化 |
| 5.胰島素誘導(dǎo)48h后細(xì)胞GPI-PLD酶活性測定結(jié)果 |
| 6.胰島素誘導(dǎo)后RT-PCR法檢測GPI-PLD基因mRNA的表達量變化 |
| 7.ELISA法檢測誘導(dǎo)前后各組細(xì)胞培養(yǎng)液中CEA的濃度 |
| 8.誘導(dǎo)前后各組細(xì)胞表面錨定CEA的流式細(xì)胞術(shù)分析 |
| 9.MTT法優(yōu)化LAK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞作用的條件 |
| 10.LAK細(xì)胞分別與誘導(dǎo)前后四組細(xì)胞共育的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 |
| 11.MTT法檢測LAK細(xì)胞對誘導(dǎo)前后各組細(xì)胞殺傷活性的改變 |
| 第三章 討論 |
| 1.肝臟、肝細(xì)胞癌與GPI-PLD |
| 2.胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞GPI-PLD基因的表達 |
| 3.腫瘤細(xì)胞表面GPI錨定的CEA與LAK細(xì)胞對其殺傷活性相關(guān) |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果 |
（6）抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞對肺腺癌細(xì)胞的殺傷作用（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要試劑與儀器 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.2.1 CIK、LAK細(xì)胞培養(yǎng)[2, 3] |
| 1.2.2 DC細(xì)胞培養(yǎng)[4] |
| 1.2.3 肺腺癌原代細(xì)胞培養(yǎng)[5] |
| 1.2.4 腫瘤抗原制備 |
| 1.2.5 腫瘤抗原沖擊DC及表型測定 |
| 1.2.6 DC和CIK、LAK細(xì)胞共培養(yǎng) |
| 1.2.7 細(xì)胞殺傷試驗 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 細(xì)胞形態(tài)與增殖觀察 |
| 2.2 DC表型分析 |
| 2.3 細(xì)胞殺傷活性 |
| 3 討論 |
（7）共培養(yǎng)DC-LAK細(xì)胞抗腫瘤作用及經(jīng)不同途徑回輸后在荷瘤小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文縮寫 |
| 研究論文 共培養(yǎng)DC-LAK 細(xì)胞抗腫瘤作用及經(jīng)不同途徑回輸后在荷瘤小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 附表 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 過繼免疫治療中外源性殺傷細(xì)胞體內(nèi)的分布 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（8）人LAK細(xì)胞免疫效應(yīng)分子HMGN2的初步研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 人LAK細(xì)胞抗菌肽的分離和純化 |
| 一 材料與方法 |
| 二 結(jié)果 |
| 三 討論 |
| 四 結(jié)論 |
| 第二部分 HMGN2抗菌活性及其抗菌結(jié)構(gòu)功能區(qū)域的研究 |
| 一 材料及方法 |
| 二 結(jié)果 |
| 三 討論 |
| 四 結(jié)論 |
| 第三部分 HMGN2在LAK細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位分析 |
| 一 材料及方法 |
| 二 結(jié)果 |
| 三 討論 |
| 四 結(jié)論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 文獻綜述：抗菌肽：哺乳動物白細(xì)胞的抗感染分子 |
| 個人簡介 |
| 致謝 |
（10）樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對肺癌的生長抑制作用（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要試劑 |
| 1.1.2 實驗動物 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.2.1 肺癌移植瘤模型建立 |
| 1.2.2 病理分析 |
| 1.2.3 DC培養(yǎng)及負(fù)載 |
| 1.2.4 LAK細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo) |
| 1.2.5 倒置顯微鏡及透射電鏡觀察DC細(xì)胞 |
| 1.2.6 細(xì)胞表型分析 |
| 1.2.7 荷瘤裸鼠處理及處理后觀察 |
| 1.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 動物模型的建立 |
| 2.2 DC的形態(tài)及細(xì)胞表型結(jié)果 |
| 2.3 LAK細(xì)胞的形態(tài)及細(xì)胞表型結(jié)果 |
| 2.4 DC誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對肺腺癌移植瘤的生長抑制 |
| 3 討論 |
四、LAK細(xì)胞之誘導(dǎo)條件的探討（論文參考文獻）
- [1]低劑量電離輻射后LAK細(xì)胞對動物骨肉瘤治療作用的研究[J]. 趙磊,周桂珍,張慧霞. 中華腫瘤防治雜志, 2012(03)
- [2]胰島素誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞株GPI-PLD基因的表達及其免疫學(xué)效應(yīng)[D]. 王鍇佳. 中南大學(xué), 2010(02)
- [3]免疫細(xì)胞在白血病治療應(yīng)用的進展[J]. 趙紅麗,洪珞珈. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展, 2008(11)
- [4]健康人外周血單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的NK細(xì)胞對腦膠質(zhì)瘤殺傷作用的探討[J]. 呂慧芳,任歡,李殿俊,徐玉清,張鳳民,曾振武,阮云祥,張本寧. 國際免疫學(xué)雜志, 2008(03)
- [5]抗原致敏DC聯(lián)合CIK細(xì)胞對肺癌細(xì)胞殺傷作用的研究[J]. 李可,呂章春,陳海祥,張立煌. 中國腫瘤, 2008(05)
- [6]抗原致敏DC誘導(dǎo)CIK細(xì)胞對肺腺癌細(xì)胞的殺傷作用[J]. 李可,呂章春,陳海祥,張立煌. 腫瘤學(xué)雜志, 2008(04)
- [7]共培養(yǎng)DC-LAK細(xì)胞抗腫瘤作用及經(jīng)不同途徑回輸后在荷瘤小鼠體內(nèi)的動態(tài)分布[D]. 孫杰. 河北醫(yī)科大學(xué), 2008(01)
- [8]人LAK細(xì)胞免疫效應(yīng)分子HMGN2的初步研究[D]. 馮云. 四川大學(xué), 2006(03)
- [9]胃癌的生物治療進展[J]. 史緋緋,楊成旺,蘇秀蘭. 內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2005(01)
- [10]樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的LAK細(xì)胞對肺癌的生長抑制作用[J]. 高秋,李錦添,王思愚,陳詩萍,劉偉,吳一龍. 中國肺癌雜志, 2004(05)
標(biāo)簽：誘導(dǎo)效應(yīng)論文; 細(xì)胞轉(zhuǎn)染論文; 肺癌論文; 腫瘤論文; dc細(xì)胞論文;