一、草莓分生組織培養(yǎng)脫病毒技術(shù)及其應(yīng)用（論文文獻綜述）
馬秀明,繆軍,王俊峰,韓偉,孫楊[1]（2021）在《草莓莖尖脫毒繁育體系研究進展》文中研究表明草莓莖尖脫毒技術(shù)能夠從生產(chǎn)上解決草莓因長期無性繁殖,易受到多種病毒的侵染,從而導(dǎo)致植株長勢變?nèi)?、果實品質(zhì)劣化、產(chǎn)量下降等品種退化現(xiàn)象。從草莓莖尖消毒、莖尖選取、培養(yǎng)基的篩選、多種脫毒方式結(jié)合、病毒檢測、馴化移栽、種苗繁育等方面綜述了草莓莖尖脫毒繁育體系的研究進展,以期為草莓莖尖脫毒繁育體系的建立提供參考。
陳龍[2]（2021）在《外施褪黑素促進蘋果脫毒的技術(shù)與機理研究》文中研究說明病毒病害是制約蘋果產(chǎn)業(yè)高效、持續(xù)發(fā)展的重要因素。與真菌病害和細菌病害不同,植物一旦感染病毒病害,難以用其他方法治愈。栽培無毒苗是目前生產(chǎn)上防治病毒病害的有效方法。建立簡易、高效的脫毒技術(shù)是培育和栽培無毒苗的必要條件。對蘋果危害最大的潛隱病毒有三種,它們是蘋果褪綠葉斑病毒（apple cholorotic leafsopt virus,ACLSV）,蘋果莖痘病毒（apple stem pitting virus,ASPV）和蘋果莖溝病毒（apple stem grooving virus,ASGV）。ASPV不能侵染頂端分生組織,容易脫除,而ASGV能侵染頂端分生組織,難以脫除。褪黑素可以調(diào)控植物的生長發(fā)育,增強植物對非生物脅迫（如干旱、低溫、鹽堿等）和生物脅迫（如真菌和細菌）的抗性,但在增強植物對病毒抗性和脫毒方面極少有報道。本研究旨在:（1）以模式植物為材料,研究外施褪黑素對煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV）的抗性。通過病毒相對含量、防御基因表達量和抗病相關(guān)因子含量測定,初步探究外施褪黑素促進植物抗病毒的機理,并將獲得的結(jié)果在蘋果植株上驗證;（2）測試外施褪黑素脫除蘋果ASGV和ASPV的效果,通過測定抗病相關(guān)因子和病毒相對含量及病毒在莖尖的定位,揭示褪黑素促進病毒脫除的機理;（3）測試褪黑素介導(dǎo)植物增強對病毒抗性的關(guān)鍵因子（SA和NO）脫除ASGV和ASPV的效果,建立脫毒新方法。獲得的主要研究結(jié)果如下:（1）以心葉煙（Nicotiana glutinosa）、普通煙草（N.tabacum）和番茄（Solanum lycopersicum）模式植物為試材,研究了外施褪黑素對煙草花葉病毒（tobacco mosaic virus,TMV）抗性的效應(yīng)。心葉煙（N.glutinosa）根部外施褪黑素,增強了植株對TMV局部侵染的抗性,以100μM褪黑素施用兩次效果最佳,枯斑抑制率達37.4%。RT-q PCR檢測結(jié)果表明,番茄根部外施褪黑素后,PR1和PR5基因表達上調(diào),TMV相對含量下降,以100μM褪黑素施用兩次時效果最顯著。Dot-ELISA對TMV的測定結(jié)果也驗證了外施褪黑素降低TMV的含量。根部外施褪黑素促進了番茄帶毒植株中水楊酸（SA）和一氧化氮（NO）的積累,但對H2O2含量沒有明顯影響。外施NO供體硝普鈉（SNP）和亞硝基谷胱甘肽（GSNO）可以上調(diào)PR1和PR5的表達,降低帶毒植株中的病毒濃度。外施一氧化氮抑制劑c PTIO,明顯降低褪黑素誘導(dǎo)的對TMV的抗性。以轉(zhuǎn)水楊酸羥化酶基因（nah G）的普通煙草（N.tabacum cv.Xanthi-nn）為材料,接種TMV后發(fā)現(xiàn),nah G煙草更易感病,接種3天后病毒濃度為野生型煙草的3倍,外施100μM褪黑素對nah G煙草的TMV相對濃度沒有明顯影響。以上研究表明,褪黑素介導(dǎo)的TMV抗性很可能依賴于NO和SA途徑。（2）以單感ASGV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,培養(yǎng)在添加0-20μM褪黑素的增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。結(jié)果表明,10-20μM褪黑素明顯促進莖的增殖,10-15μM褪黑素明顯促進莖的伸長。外施褪黑素明顯提高試管苗內(nèi)源吲哚乙酸（IAA）含量,以15μM褪黑素處理的效果最為明顯。在含有15μM褪黑素的增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)4周后,取0.5 mm帶有2片葉原基的莖尖進行培養(yǎng),莖尖培養(yǎng)的成活率與對照沒有明顯差異,再生率由對照組的47%提高至85%,脫毒率由對照組的0%提高到95%。外施15μM褪黑素明顯促進試管苗內(nèi)源SA和NO積累。RT-q PCR對病毒的定量檢測表明,褪黑素處理顯著降低帶毒植株的病毒含量,病毒相對濃度下降約60%。免疫組織化學法對病毒定位研究發(fā)現(xiàn),褪黑素處理抑制ASGV在莖尖的轉(zhuǎn)運,擴大莖尖的無毒區(qū)。（3）以復(fù)合感染ASGV和ASPV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,取葉片外殖體培養(yǎng)在含有0-30μM褪黑素的再生培養(yǎng)基中,誘導(dǎo)不定芽。從不定芽取莖尖（0.3-0.5 mm、帶2-3個葉原基）培養(yǎng)獲得完整試管苗。結(jié)果表明,再生培養(yǎng)基中添加15-30μM褪黑素明顯提高葉片不定芽再生力。對照組的不定芽發(fā)生率和不定芽數(shù)分別為81.6%和3.9。15μM和30μM褪黑素處理的不定芽發(fā)生率和不定芽數(shù)分別為100%和5.8與5.2,顯著高于對照組。再生培養(yǎng)基中添加褪黑素（15-30μM）能提高莖尖的再生率及脫毒率,以15μM褪黑素處理對ASGV和ASPV脫毒率最高,分別達到53%和100%。免疫組織化學法對病毒定位研究發(fā)現(xiàn),外施褪黑素擴大莖尖的無毒區(qū),促進莖尖培養(yǎng)脫除病毒。（4）以復(fù)合感染ASGV和ASPV的‘Gala’蘋果試管苗為材料,培養(yǎng)在添加了SA和NO供體硝普鈉（SNP）的培養(yǎng)基培養(yǎng)4周后,取莖尖（0.3-0.5mm、帶2-3個葉原基）培養(yǎng)獲得完整試管苗。結(jié)果表明,低濃度的SA（10μM）與SNP（10μM和50μM）對試管苗的伸長和增殖無顯著影響,高濃度SA（100μM）與SNP（70μM）明顯抑制試管苗的生長,但明顯提高ASGV和ASPV的脫毒率。本研究首次揭示了外施褪黑素能明顯提高植物對TMV的抗性。外施褪黑素、SA及NO供體硝普鈉（SNP）能有效脫除ASGV和ASPV,并初步揭示了外施褪黑素提高脫毒率的機理。本研究為植物脫毒開辟了新的途徑,具有重要的理論和應(yīng)用研究價值。
李曉亮,楊世先,楊光炤,王文智,張建康,錢遵姚,董廣,張軍云[3]（2021）在《草莓種苗的脫毒技術(shù)試驗研究》文中認為草莓病毒病是草莓生產(chǎn)中的一大危害,草莓脫毒種苗成為了草莓高效生產(chǎn)中的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本試驗旨在研究提出一種操作簡便、脫病毒率較高的草莓種苗脫毒技術(shù),通過設(shè)置5種試驗處理并獲得草莓組培苗,經(jīng)病原檢測后分析各種處理的病原脫毒效果。研究結(jié)果表明,最佳的草莓種苗脫毒技術(shù)為直接莖尖培養(yǎng)（0.2～0.5 mm莖尖生長點）+冷處理（組培苗置于5℃的冰箱中培養(yǎng)60 d）,該技術(shù)不僅可推廣應(yīng)用于草莓脫毒種苗規(guī)?；缰?同時對其他作物的脫毒技術(shù)的研究與應(yīng)用具有重要的參考價值。
徐燕[4]（2020）在《冀東地區(qū)主栽甘薯品種莖尖脫病毒及組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)研究》文中研究說明近年來,冀東地區(qū)推廣種植的甘薯品種病毒病發(fā)生嚴重,特別是主要種植的淀粉型品種盧選1號受病毒病危害嚴重,減產(chǎn)30%以上,使當?shù)馗适砩a(chǎn)受到極大影響。本文對甘薯莖尖脫毒技術(shù)、脫毒苗檢測技術(shù)、快繁技術(shù)進行研究,旨在為冀東地區(qū)生產(chǎn)脫病毒甘薯種苗提供技術(shù)保障。研究的主要結(jié)果如下:1用2%NaClO對甘薯莖段消毒515 min,觀察其莖尖污染率、死亡率、成活率,試驗結(jié)果表明,煙薯25、盧選1號與北京553分別用2%NaClO消毒9min、13 min、11 min污染率最低,成苗率最高。2以甘薯莖尖分生組織為培養(yǎng)對象,篩選出適合外植體生長的激素配方,適合煙薯25、盧選1號與北京553最佳培養(yǎng)基分別是MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA3共檢測323個樣品,其中脫毒苗有195株,血清學檢測SPFMV的脫毒率為63.42%。不同品種間脫毒效果有一定差異,盧選1號的脫毒率為46.39%,煙薯25的脫毒率為88.30%,北京553的脫毒率為55.56%。4本研究中利用常規(guī)秧苗的莖尖進行脫毒,其脫毒率為37.25%,而經(jīng)過一個月高溫的甘薯苗剝離莖尖,脫毒率為71.43%,脫毒效果明顯比不經(jīng)過高溫的好。5通過對品種間的植株相關(guān)性狀的調(diào)查,盧選1號的株高最高,達到3.64cm;北京553次之,株高為2.56 cm;煙薯25最低,為2.27 cm。盧選1號與煙薯25之間的株高差異顯著,盧選1號與北京553之間的株高達到顯著差異。盧選1號的節(jié)間最長,達到0.66 cm;北京553次之,節(jié)間為0.38 cm;煙薯25最短,為0.33 cm。盧選1號與煙薯25之間的節(jié)間差異顯著,盧選1號與北京553之間的節(jié)間達到顯著差異。盧選1號的生根數(shù)最多,達到5.98;北京553次之,生根數(shù)為5.56;煙薯25最少,為5.25。盧選1號與煙薯25之間的生根數(shù)有差異顯著性。
霍辰思,樊新萍,劉偉[5]（2020）在《草莓病毒病、脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進展》文中研究指明針對草莓主要病毒病及其為害特點、草莓脫毒主要技術(shù)及病毒檢測技術(shù)進行綜述,介紹了近年來草莓脫毒苗繁育技術(shù),以期對草莓生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)作用。
代雄偉[6]（2020）在《黃毛草莓（Fragaria nilgerrensis Schltdl）組培再生過程中基因組DNA甲基化動態(tài)變化》文中進行了進一步梳理黃毛草莓（Fragaria nilgerrensis Schltdl）是西南地區(qū)常見的野生草莓,具有較強的抗性,其果實中特有的蜜桃香味尤其突出,是改良栽培草莓品質(zhì)的重要遺傳資源。組織培養(yǎng)是無性繁殖和遺傳轉(zhuǎn)化的重要基礎(chǔ),也是了解植物細胞全能性的重要手段,通過組織培養(yǎng)可實現(xiàn)植物脫毒和離體快繁,并在此基礎(chǔ)上培育新品種。然而草莓組培苗及其后代在花果特性、生長勢等方面存在一定程度的表型變異,影響了草莓組培苗在實際生產(chǎn)中的運用。研究表明組培過程中導(dǎo)致的DNA甲基化不穩(wěn)定是再生植株表型變異的重要來源,同時DNA甲基化可有效促進或加快組培過程。因此,本研究以黃毛草莓為材料,優(yōu)化組培再生體系的同時收集組培各階段材料,利用全基因組重亞硫酸鹽測序技術(shù),對其在外植體、愈傷組織、不定芽、再生植株、再生植株生根和下地移栽六個時間點的基因組DNA甲基化變化進行研究。以期了解黃毛草莓組培再生過程中不同階段的甲基化水平和動態(tài)變化趨勢,探究草莓組培苗無性系變異的甲基化模式,為有效解決草莓組織培養(yǎng)生產(chǎn)中的問題提供理論依據(jù)。此外,也為植物生長發(fā)育過程中甲基化調(diào)控模式的研究提供線索。主要研究結(jié)果如下:1.通過正交試驗、篩選并建立了高效穩(wěn)定的黃毛草莓組培再生體系。最佳體系為:黃毛草莓無性系最適初代培養(yǎng)基是MS+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂,出苗率95%;最適誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基是MS+0.2 mg/L TDZ+0.6 mg/L 6-BA+0.15 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂,出愈率90%;最適不定芽分化培養(yǎng)基是MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂;最適生根培養(yǎng)基是1/2 MS+0.2 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂。該再生體系為黃毛草莓無性繁殖與遺傳轉(zhuǎn)化提供了參考。2.利用全基因組重亞硫酸鹽測序技術(shù)研究了黃毛草莓外植體莖尖、愈傷組織、不定芽和再生植株、再生植株生根與移栽成活的葉片基因組DNA甲基化變化,與參考基因組比對后得到60.43%75.33%的唯一比對率,C位點的覆蓋深度均在7x以上。通過全基因組甲基化模式分析,我們發(fā)現(xiàn)CG類型的甲基化水平最高,CHG類型次之,CHH類型最低;從組培不同階段來看,愈傷組織階段、壯苗階段、下地移栽發(fā)生了明顯的去甲基化過程,不定芽階段、生根發(fā)生了明顯的超甲基化過程,CHH變化最為突出;從染色體分布上看甲基化占比最高的同樣是CG類型;通過建立甲基化在染色體上的密度分布圖,觀察到甲基化變化的區(qū)域主要集中在轉(zhuǎn)座子密集區(qū),而基因密集區(qū)的甲基化程度普遍偏低。從基因功能區(qū)域的甲基化程度來看,組培6個階段甲基化水平由高到低依次為repeat區(qū)、intron區(qū)和promoter區(qū)、exon區(qū)、3’UTR和5’UTR區(qū)。DNA甲基化通過改變相關(guān)基因的甲基化模式,可以參與器官或組織形成的調(diào)控,DNA甲基化水平在不同組織和時期也并不是恒定的,而是動態(tài)變化的。依照組培順序兩兩比較發(fā)現(xiàn),整個組培過程黃毛草莓甲基化水平呈現(xiàn)降低和升高交替出現(xiàn)的動態(tài)變化趨勢,這與組培過程中細胞功能分化、激素的使用以及外界環(huán)境的影響密切相關(guān)。3.通過差異甲基化區(qū)域分析發(fā)現(xiàn),CG甲基化類型在promoter區(qū)和exon區(qū)的差異甲基化區(qū)域（DMR）數(shù)目最多,愈傷組織與外植體莖尖相比,CG甲基化類型以去甲基化（hypo）的DMR為主,相關(guān)基因的功能富集顯示,愈傷組織階段去甲基化的基因主要富集于與轉(zhuǎn)移酶活性、甾體合成與代謝和細胞壁組裝與修復(fù)等相關(guān)功能的基因集;不定芽階段與愈傷組織階段相比,CG甲基化均以超甲基化（hyper）的DMR為主,相關(guān)基因主要富集于與氧化還原酶活性、催化活性和葉綠素分解代謝等相關(guān)功能的基因集;而再生植株葉片生長階段、生根階段和下地移栽階段甲基化發(fā)生改變的相關(guān)基因主要與細胞分化、生長發(fā)育以及環(huán)境適應(yīng)相關(guān)。此外,從莖尖外植體到愈傷組織涉及脫分化過程,而從愈傷組織到不定芽涉及植物再分化過程,在此過程中,有54個基因隨著細胞脫分化和去分化過程甲基化水平也在不斷發(fā)生改變,涉及數(shù)個與細胞核骨架形成、參與DNA修復(fù)與同源重組、泛素代謝等相關(guān)基因;從植株葉片生長、生根和下地移栽幾個階段主要涉及激素的變化和環(huán)境的改變,共有36個基因在不同階段甲基化水平不斷發(fā)生改變,涉及數(shù)個組蛋白甲基化酶、細胞色素P450、ABC轉(zhuǎn)運蛋白等與植物代謝、發(fā)育、抗逆相關(guān)的基因。
蘇代發(fā),童江云,楊俊譽,陳杉艷,羅志偉,沈雪梅,賴泳紅,Jamil Arslan,魏世杰,崔曉龍[7]（2019）在《草莓病毒病及其研究進展》文中認為對草莓鑲脈病毒（strawberry vein banding virus, SVBV）、草莓斑駁病毒（strawberry mottle virus, SMoV）、草莓皺縮病毒（strawberry crinkle virus, SCV）、草莓輕型黃邊病毒（strawberry mild yellow edge virus, SMYEV）和草莓潛隱環(huán)斑病毒（strawberry latent ringspot virus, SLRSV）等5種草莓主要病毒的分類、分布及生物學特性進行了綜述.在此基礎(chǔ)上,對草莓病毒的檢測方法（指示植物檢測、電鏡檢測、血清學檢測和分子生物學檢測）、傳播媒介（蚜蟲、薊馬、粉虱、線蟲和真菌）、脫毒方法（高溫脫毒、化學試劑脫毒、莖尖脫毒、高溫-莖尖結(jié)合脫毒和超低溫脫毒）及草莓病毒病的防治（脫毒苗運用、田間管理、抗病毒品種和阻斷傳播媒介）等方面進行了論述,以期為草莓生產(chǎn)中病毒病的防治提供科學依據(jù).
王仁睿,李杰[8]（2020）在《建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的檢測技術(shù)及脫毒方法研究進展》文中提出為了弄清目前建蘭花葉病毒（CymMV）和齒蘭環(huán)斑病毒（ORSV）病毒檢測和脫毒的研究概況,本研究詳細闡述了2種病毒的檢測方法、采用的脫毒技術(shù)和脫毒效率,分析比較了不同技術(shù)存在的弊端,指出現(xiàn)有的脫毒方法已不能滿足蘭科植物脫毒研究的需要。在此基礎(chǔ)上,進一步提出應(yīng)采用安全、可靠的新型脫毒技術(shù)來解決目前蘭科植物產(chǎn)業(yè)瓶頸問題。超低溫脫毒技術(shù)是近年來發(fā)展迅速的脫毒技術(shù),具有獨特優(yōu)勢,目前已在多種植物上成功應(yīng)用,該方法的應(yīng)用有望解決2種病毒脫毒方面存在的問題。
焦楠[9]（2019）在《西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究》文中認為西番蓮（Passiflora caerulea L.）屬西番蓮科（Passiflora ceae）西番蓮屬（Passiflora L.）,是亞熱帶地區(qū)的一種多年生常綠攀援植物。其果實富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì),果汁氣味馥郁,故有“百香果”的美名,在世界飲品市場占據(jù)重要席位。近年來隨著西番蓮的大量引種種植,病毒病害侵染情況愈發(fā)嚴重,使西番蓮果實產(chǎn)量和品質(zhì)大幅下降,嚴重阻礙了我國乃至世界西番蓮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此,對西番蓮進行優(yōu)質(zhì)種苗快速繁育以及病毒苗木的脫毒工作尤為重要。本研究建立并優(yōu)化了西番蓮離體再生體系,將獲得的無菌苗進行煉苗及移栽管理;針對侵染西番蓮的兩種病毒建立了TeMV和CMV雙重RT-PCR病毒檢測體系,進一步對反應(yīng)條件進行了優(yōu)化,同時建立了微量直接RT-PCR檢測方法;通過構(gòu)建CP-GFP的表達載體對TeMV外殼蛋白展開亞細胞定位研究,進一步對感病西番蓮體內(nèi)的TeMV表達特性進行定量分析;以感病西番蓮莖尖為材料,通過建立的小滴玻璃化法進行超低溫脫毒處理,探究了影響脫毒效果的主要因素,并對脫毒過程進行優(yōu)化。主要研究結(jié)果如下:1西番蓮快繁體系的建立及優(yōu)化以西番蓮帶腋芽的莖段為外植體材料,對不同消毒劑種類和消毒時間進行篩選,優(yōu)化外植體滅菌體系。結(jié)果表明:西番蓮?fù)庵搀w的最佳滅菌方法為使用75%乙醇浸沒處理30s,隨后轉(zhuǎn)入0.1%HgCl2溶液中消毒12min,可以顯著降低外植體的污染率和褐化率,接種后可獲得較高的存活率。以腋芽發(fā)育得到的無菌苗為材料,采用正交法研究6-BA和NAA兩種外源激素對西番蓮增殖效果的作用。結(jié)果顯示,兩種激素存在顯著的交互效應(yīng),將2.0mg/L6-BA和0.1mg/LNAA加入增殖培養(yǎng)基時,西番蓮的增殖系數(shù)最高,為5.09。對四周苗齡的西番蓮試管苗進行生根誘導(dǎo)時,探究了IBA和NAA兩種激素對植株生根的影響。由試驗結(jié)果得知,1.5mg/LIBA和0.5mg/LNAA組合為最佳誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基,平均可誘導(dǎo)生根數(shù)為5.53。對根系生長健壯且達到34條主根的無菌苗進行移栽管理,根據(jù)移栽苗的成活率及生長勢可以判斷最適移栽基質(zhì)為草炭土和珍珠巖混合比為4:1的營養(yǎng)基質(zhì),移植后植株成活率達93%,生長勢也明顯優(yōu)于其他試驗組。2西番蓮相關(guān)病毒的檢測技術(shù)研究以感染病毒病的西番蓮葉片為試驗材料,對四種西番蓮常見病毒進行分子生物學檢測,結(jié)果表明:在采集的西番蓮樣葉中,可檢測到黃瓜花葉病毒（CMV）、夜來香花葉病毒（TeMV）、東亞西番蓮病毒（EAPV）和西番蓮木質(zhì)化病毒（PWV）四種病毒侵染的情況。在此基礎(chǔ)上針對復(fù)合感染TeMV和CMV的西番蓮建立了雙重RT-PCR檢測體系,并且對反應(yīng)參數(shù)中的引物濃度、退火溫度及循環(huán)次數(shù)進行優(yōu)化。改良后的雙重RT-PCR檢測系統(tǒng)反應(yīng)參數(shù)為:最佳引物濃度比為TeMV:CMV=1:4,即TeMV反應(yīng)終濃度為2.0mmol/L,CMV終濃度為8.0mmol/L;最佳退火溫度為57℃;最佳循環(huán)次數(shù)為35次。針對優(yōu)化后的雙重RT-PCR檢測體系進行靈敏度檢驗,結(jié)果顯示,當樣葉cDNA稀釋到原液的10-5時,仍能夠擴增出特異性條帶,檢測靈敏度等同于10-5mg組織量。將優(yōu)化后的雙重RT-PCR體系應(yīng)用于36份西番蓮樣葉進行檢測,結(jié)果表明,來自不同產(chǎn)區(qū)的樣品中,有8份樣品復(fù)合感染TeMV及CMV,18份樣品單感TeMV或CMV。本研究還建立了西番蓮微量直接RT-PCR檢測體系,針對不同取樣部位和不同尺寸的針頭進行試驗。由檢測結(jié)果可知,選擇尺寸為23G（0.6×25TW LB）的注射器針頭,以健壯的莖段或葉片為檢測部位可以對PWV病毒達到較好的檢測效果,此研究可為西番蓮的田間檢測提供便利。3 TeMVCP基因克隆、亞細胞定位及表達特性分析以感染TeMV的西番蓮植株為試驗材料,對TeMV外殼蛋白進行克隆驗證。通過構(gòu)建CP-GFP融合載體并轉(zhuǎn)化至煙草植株進行亞細胞定位試驗,定位結(jié)果表明:TeMVCP蛋白定位于葉綠體中,與網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果一致,由此推測TeMV感染西番蓮后作用位點位于葉片的葉綠體處。為研究TeMV在西番蓮寄主體內(nèi)的表達特點,對不同西番蓮品種以及不同組織部位進行RNA提取和反轉(zhuǎn)錄操作,以eIF-5A作為內(nèi)參基因,進行定量表達分析。定量結(jié)果顯示:TeMV在感病西番蓮不同部位的表達量差異顯著,在葉片部位表達量最高,花藥處表達量最低,具有明顯的組織表達特異性。對“福建百香果一號”和“福建百香果三號”兩個感病品種進行定量表達分析后發(fā)現(xiàn),前者較后者具有顯著高表達的情況,表達量約為后者的三倍,推測“福建百香果三號”具備較強的抗病性。4西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)研究及脫毒苗遺傳穩(wěn)定性檢測以攜帶TeMV病毒的西番蓮組培苗莖尖為材料,運用小滴玻璃化法對西番蓮莖尖采取超低溫處理。針對影響小滴玻璃化法的預(yù)培養(yǎng)時間和脫水時間兩個因素進行優(yōu)化試驗,優(yōu)化后的小滴玻璃化法操作程序為:剝?nèi)?mm的西番蓮莖尖投入液體預(yù)培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)24h,隨后轉(zhuǎn)入PVS2脫水劑中50min進行脫水處理,在1×4cm大小的鋁箔紙上制作PVS2小滴并轉(zhuǎn)入脫水后的莖尖,將鋁箔紙轉(zhuǎn)移至液氮凍存1h,凍存結(jié)束后進行卸載處理并轉(zhuǎn)移莖尖至再生培養(yǎng)基上恢復(fù)培養(yǎng)。根據(jù)優(yōu)化后的小滴玻璃化法對西番蓮莖尖進行超低溫脫毒研究,設(shè)置不同的莖尖大小研究不同尺寸的莖尖對超低溫脫毒效果的影響。設(shè)置不同的莖尖大小研究不同尺寸的莖尖對超低溫脫毒效果的影響。試驗結(jié)果證明,當剝?nèi)〉那o尖尺寸在0.81.0mm時,經(jīng)超低溫脫毒后莖尖存活率和再生率最高,分別為83.3%和60%,脫毒率達100%。對超低溫脫毒后的組培苗進行ISSR擴增,結(jié)果顯示:試驗共擴增得到2550條條帶,每組引物可擴增出49條條帶,與母株對照組相比,試驗組脫毒苗無特異性條帶產(chǎn)生,超低溫脫毒后的再生苗未發(fā)生遺傳變異。
王宇虹[10]（2019）在《三個茶用菊品種脫毒體系的建立》文中研究指明茶用菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）是菊科菊屬多年生的宿根草本植物。具有很高的茶用價值,同時在我國的藥用方面具有很悠久的歷史。江蘇省射陽縣的菊花種植基地茶用菊歷史悠久,種類繁多。其中‘早花紅心菊’‘晚花紅心菊’和‘北京茶菊’種植范圍最廣,藥用價值也最高。但是隨著種植面積和范圍的擴大,經(jīng)歷長時間的營養(yǎng)繁殖使得這三種茶用菊感染菊花病毒和類病毒的現(xiàn)象非常嚴重,使得菊花的品質(zhì)下降,藥用價值減弱,產(chǎn)量逐年降低,嚴重影響和制約了其產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展。本研究從這三種茶用菊的病毒檢測開始,確定出感染病毒的種類,并結(jié)合化學處理,物理處理以及轉(zhuǎn)基因等技術(shù)對三種茶用菊進行脫毒處理,從而建立起合理有效的脫毒體系,為這三種茶用菊的生產(chǎn)和推廣奠定基礎(chǔ)。1.結(jié)合‘早花紅心菊’、‘晚花紅心菊’和‘北京茶菊’的田間癥狀的表現(xiàn),通過巢式RT-PCR技術(shù)檢測出侵染‘早花紅心菊’的病毒是菊花B病毒（CVB）、菊花矮化類病毒（CSVd）和番茄不孕病毒病（TAV）;侵染‘晚花紅心菊’和‘北京茶菊’的是菊花B病毒（CVB）和菊花矮化類病毒（CSVd）。2.在篩選出的最適激素基礎(chǔ)上,設(shè)置4組不同利巴韋林濃度的MS培養(yǎng)基,篩選出出愈率較高和褐化率較低利巴韋林濃度為40 mg/L,最有利于遏制‘早花紅心菊’,‘晚花紅心菊’和‘北京茶菊’病毒及類病毒的傳播。3.對‘早花紅心菊’,‘晚花紅心菊’及‘北京茶菊’進行4℃低溫結(jié)合利巴韋林脫毒處理。發(fā)現(xiàn)當?shù)蜏靥幚?個月時,三種茶用菊的存活率最高,為40%左右。在此基礎(chǔ)上將三種不同低溫處理時長下的茶用菊莖尖分生組織接種在利巴韋林濃度為40 mg/L的MS培養(yǎng)基上,并對不同處理的病毒脫除率進行統(tǒng)計分析,并獲得5株‘早花紅心菊’脫毒苗,4株‘晚花紅心菊’脫毒苗和4株‘北京茶菊’脫毒苗。4.在DNA水平上,用SRAP引物組合對3種茶用菊的3種不同的脫毒方法所獲得的脫毒苗進行遺傳穩(wěn)定性分子檢測,結(jié)果顯示3種不同脫毒方法獲得的脫毒苗與常規(guī)無菌苗之間的遺傳位點的沒有明顯差異,表明脫毒苗均能有效地保持3種茶用菊的遺傳穩(wěn)定性。5.3D8 scFv是一種具有RNA水解功能和細胞滲透功能的重組抗體,已經(jīng)成功用于菊花CSVd抑制研究。用3D8scFv構(gòu)建pORE-R4-1×35s-3D8 scFv的植物表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,用叢生芽侵染法轉(zhuǎn)化經(jīng)過脫毒處理后仍含有CSVd的‘早花紅心菊’?！缁t心菊’叢生芽最適分化培養(yǎng)基為:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,平均能分化出1.22個不定芽,不定芽的卡那霉素的抗性選擇壓為30 mg/L,植株生根的卡那霉素抗性選擇壓為8mg/L。通過卡那霉素的篩選后初步得到抗性芽。
二、草莓分生組織培養(yǎng)脫病毒技術(shù)及其應(yīng)用（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、草莓分生組織培養(yǎng)脫病毒技術(shù)及其應(yīng)用（論文提綱范文）
（1）草莓莖尖脫毒繁育體系研究進展（論文提綱范文）
| 1 莖尖消毒 |
| 2 莖尖選取 |
| 3 培養(yǎng)基篩選 |
| 3.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選 |
| 3.2 增殖培養(yǎng)基篩選 |
| 3.3 生根培養(yǎng)基篩選 |
| 4 多種脫毒方式結(jié)合 |
| 5 病毒檢測 |
| 6 馴化移栽 |
| 7 種苗繁育 |
| 8 其他 |
| 9 小結(jié)與展望 |
（2）外施褪黑素促進蘋果脫毒的技術(shù)與機理研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 蘋果生產(chǎn)概況與病毒病害對蘋果生產(chǎn)的影響 |
| 1.2 蘋果脫毒技術(shù)的研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 莖尖培養(yǎng) |
| 1.2.2 熱療法 |
| 1.2.3 化學療法 |
| 1.2.4 莖尖嫁接 |
| 1.2.5 莖尖超低溫療法 |
| 1.3 褪黑素在植物中的研究進展 |
| 1.3.1 褪黑素的概況 |
| 1.3.2 褪黑素調(diào)控植物生長發(fā)育的功能 |
| 1.3.3 褪黑素增強植物對非生物脅迫的抗性 |
| 1.3.4 褪黑素增強植物對生物脅迫抗性的研究 |
| 1.3.5 褪黑素增強植物對生物脅迫抗性的機理 |
| 1.4 本研究的目的和意義 |
| 1.4.1 研究目的 |
| 1.4.2 研究意義 |
| 1.5 本研究的思路和技術(shù)路線 |
| 第二章 褪黑素增進植物抗病毒的機理研究 |
| 2.1 試驗材料、儀器和試劑 |
| 2.1.1 試驗材料 |
| 2.1.2 主要試驗儀器和設(shè)備 |
| 2.1.3 主要試驗試劑 |
| 2.2 試驗方法 |
| 2.2.1 TMV病毒粒子的提純 |
| 2.2.2 外施褪黑素對煙草TMV局部侵染抗性的影響 |
| 2.2.3 外施褪黑素對番茄TMV系統(tǒng)侵染抗性的影響 |
| 2.2.4 外施褪黑素對番茄葉片SA含量的影響 |
| 2.2.5 外施褪黑素對番茄葉片H_2O_2含量的影響 |
| 2.2.6 外施褪黑素對番茄葉片NO含量的影響 |
| 2.2.7 外施NO供體對番茄TMV抗性的影響 |
| 2.2.8 內(nèi)源SA對番茄TMV抗性的影響 |
| 2.2.9 試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析 |
| 2.3 試驗結(jié)果 |
| 2.3.1 外施褪黑素對煙草TMV局部侵染抗性的影響 |
| 2.3.2 外施褪黑素對番茄TMV系統(tǒng)侵染抗性的影響 |
| 2.3.3 外施褪黑素對番茄葉片中SA含量的影響 |
| 2.3.4 外施褪黑素對番茄葉片中H_2O_2含量的影響 |
| 2.3.5 外施褪黑素對番茄葉片NO含量的影響 |
| 2.3.6 NO對番茄TMV抗性影響 |
| 2.3.7 內(nèi)源SA對番茄TMV抗性影響 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 外施褪黑素結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫除ASGV的研究 |
| 3.1 試驗材料、儀器與試劑 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 3.1.3 主要試劑 |
| 3.2 試驗方法 |
| 3.2.1 帶毒試管苗的建立與保持 |
| 3.2.2 外施褪黑素對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 3.2.3 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源IAA含量的影響 |
| 3.2.4 外施褪黑素對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 3.2.5 再生苗的溫室移栽 |
| 3.2.6 病毒的反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)法檢測 |
| 3.2.7 病毒的指示植物法與DAS-ELISA檢測 |
| 3.2.8 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源SA與NO含量的影響 |
| 3.2.9 外施褪黑素對帶毒試管苗病毒含量的影響 |
| 3.2.10 外施褪黑素對病毒在莖尖分布的影響 |
| 3.2.11 試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析 |
| 3.3 試驗結(jié)果 |
| 3.3.1 外施褪黑素對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 3.3.2 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源IAA含量的影響 |
| 3.3.3 外施褪黑素對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 3.3.4 病毒RT-PCR檢測結(jié)果 |
| 3.3.5 病毒的指示植物法與DAS-ELISA檢測結(jié)果 |
| 3.3.6 外施褪黑素對帶毒試管苗病毒含量的影響 |
| 3.3.7 外施褪黑素對帶毒試管苗內(nèi)源SA和NO含量的影響 |
| 3.3.8 外施褪黑素對病毒在莖尖分布的影響 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 外施褪黑素結(jié)合葉片不定芽莖尖培養(yǎng)脫除蘋果病毒的研究 |
| 4.1 試驗材料、試劑與主要儀器設(shè)備 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 4.1.3 主要藥品和試劑 |
| 4.2 試驗方法 |
| 4.2.1 帶毒試管苗的建立與保持 |
| 4.2.2 外施褪黑素對帶毒試管苗葉片不定芽再生的影響 |
| 4.2.3 外施褪黑素結(jié)合不定芽莖尖培養(yǎng)的脫毒效果 |
| 4.2.4 病毒的RT-PCR檢測 |
| 4.2.5 外施褪黑素影響葉片再生不定芽的組織學觀察和病毒定位 |
| 4.2.6 試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析 |
| 4.3 試驗結(jié)果 |
| 4.3.1 外施褪黑素對帶毒試管苗葉片不定芽再生的影響 |
| 4.3.2 外施褪黑素結(jié)合葉片再生不定芽莖尖培養(yǎng)的脫毒效應(yīng) |
| 4.3.3 外施褪黑素對葉片再生不定芽影響的組織學觀察和病毒定位 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 褪黑素介導(dǎo)植物增強對病毒抗性的關(guān)鍵因子在促進病毒脫除中的應(yīng)用研究 |
| 5.1 試驗材料、試劑與主要儀器設(shè)備 |
| 5.1.1 試驗材料 |
| 5.1.2 主要試驗儀器和設(shè)備 |
| 5.1.3 主要試驗試劑 |
| 5.2 試驗方法 |
| 5.2.1 帶毒試管苗的建立和保持 |
| 5.2.2 外施SNP與SA對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 5.2.3 外施SNP與SA對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 5.2.4 病毒的RT-PCR檢測 |
| 5.2.5 試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)分析 |
| 5.3 試驗結(jié)果 |
| 5.3.1 外施SNP與SA對帶毒試管苗增殖的影響 |
| 5.3.2 外施SNP與SA對莖尖培養(yǎng)脫毒的影響 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 本研究的結(jié)論與創(chuàng)新點 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（3）草莓種苗的脫毒技術(shù)試驗研究（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗地點 |
| 1.2 試驗材料 |
| 1.3 試驗時間 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.4.1 試驗設(shè)計 |
| 1.4.2 草莓苗的組培 |
| 1.4.3草莓苗的病原檢測 |
| 1.4.4 數(shù)據(jù)調(diào)查與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 草莓種苗的存活率 |
| 2.2 草莓種苗的病原檢測結(jié)果 |
| 2.3 最佳的草莓脫毒技術(shù)篩選 |
| 3 結(jié)論 |
（4）冀東地區(qū)主栽甘薯品種莖尖脫病毒及組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)研究（論文提綱范文）
| 縮略詞 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 甘薯及甘薯的病毒病 |
| 1.2 甘薯組織培養(yǎng)的發(fā)展 |
| 1.3 甘薯脫毒的生物學原理 |
| 1.4 甘薯脫毒技術(shù)的發(fā)展 |
| 1.4.1 熱處理脫毒技術(shù) |
| 1.4.2 莖尖培養(yǎng)脫毒法 |
| 1.4.3 植物莖尖超低溫技術(shù) |
| 1.4.4 熱處理結(jié)合莖尖脫毒 |
| 1.4.5 化學處理 |
| 1.5 脫毒苗的檢測 |
| 1.5.1 目測法 |
| 1.5.2 指示植物法 |
| 1.5.3 血清法 |
| 1.5.4 電鏡檢測法 |
| 1.5.5 分子生物學檢測技術(shù) |
| 1.6 影響脫毒效果的因素 |
| 1.6.1 莖尖大小 |
| 1.6.2 預(yù)處理對莖尖脫毒的影響 |
| 1.6.3 培養(yǎng)基配方對莖尖脫毒的影響 |
| 1.7 研究目的和意義 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 甘薯塊根壯芽的培養(yǎng) |
| 2.2.2 外植體的表面消毒 |
| 2.2.3 莖尖分生組織培養(yǎng)的激素配比 |
| 2.2.4 熱處理 |
| 2.5 培養(yǎng)條件 |
| 2.6 甘薯病毒病檢測 |
| 2.7 不同品種甘薯脫毒苗的快速繁殖 |
| 2.8 移栽 |
| 2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 3.1 不同的消毒時間下的莖尖消毒效果 |
| 3.2 6-BA與IBA不同濃度的組合對莖尖組織分化芽的影響 |
| 3.2.1 6-BA與IBA對甘薯不同品種莖尖誘導(dǎo)分化率的影響 |
| 3.2.2 6-BA和IBA對不同甘薯品種成苗率的影響 |
| 3.2.3 不同品種莖尖成活率及成苗率的比較 |
| 3.3 DAS-ELISA病毒檢測 |
| 3.3.1 不同品種莖尖組培苗的脫毒效果 |
| 3.3.2 高溫處理對盧選1號脫毒效果的影響 |
| 3.4 不同品種試管苗植株性狀差異 |
| 第四章 討論 |
| 4.1 甘薯莖尖培養(yǎng)適宜的消毒時間 |
| 4.2 甘薯莖尖培養(yǎng)適宜培養(yǎng)基的選擇 |
| 4.3 病毒檢測 |
| 4.4 不同甘薯品種試管苗植株相關(guān)性狀 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 5.1 甘薯莖尖培養(yǎng)適宜的消毒時間 |
| 5.2 甘薯莖尖培養(yǎng)適宜培養(yǎng)基的選擇 |
| 5.3 不同品種莖尖組培苗的脫毒效果 |
| 5.4 高溫處理對盧選1號脫毒效果的影響 |
| 5.5 不同甘薯品種試管苗植株性狀的差異 |
| 參考文獻 |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說明 |
| 論文受資助情況 |
| 附錄1 試驗過程的圖片 |
| 附錄2 MS培養(yǎng)基母液配方 |
| 附錄3 DAS-ELISA檢測甘薯莖尖脫毒SPFMV的 OD450 |
| 致謝 |
（5）草莓病毒病、脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進展（論文提綱范文）
| 1 草莓主要病毒病類型 |
| 1.1 草莓斑駁病毒（strawberry mottle vi-rus,SMoV) |
| 1.2 草莓鑲脈病毒（strawberry vein band virus,SVBV) |
| 1.3 草莓皺縮病毒（strawberry crinkle vi-rus,SCV) |
| 1.4 草莓潛環(huán)斑病毒（strawberry latent ringspot virus,SLRSV) |
| 1.5 草莓輕型黃邊病毒（strawberry mild yellow edge virus,SMYEV) |
| 2 草莓脫毒技術(shù) |
| 2.1 草莓莖尖培養(yǎng)脫毒 |
| 2.2 熱處理脫病毒 |
| 2.3 化學試劑脫毒 |
| 2.4 熱處理與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫毒 |
| 2.5 超低溫脫毒 |
| 3 草莓無病毒苗鑒定與繁殖 |
| 3.1 草莓病毒病檢測方法 |
| 3.2 草莓脫毒苗繁育技術(shù) |
| 4 展望 |
（6）黃毛草莓（Fragaria nilgerrensis Schltdl）組培再生過程中基因組DNA甲基化動態(tài)變化（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 草莓屬植物綜述 |
| 1.1.1 草莓概述 |
| 1.1.2 野生草莓 |
| 1.1.3 黃毛草莓 |
| 1.2 組織培養(yǎng)概述 |
| 1.2.1 組織培養(yǎng) |
| 1.2.2 草莓屬植物組織培養(yǎng)研究進展及問題 |
| 1.3 DNA甲基化研究 |
| 1.3.1 表觀遺傳學簡介 |
| 1.3.2 DNA甲基化研究 |
| 1.3.3 植物組培再生過程中DNA甲基化動態(tài)變化 |
| 1.4 研究的目的及意義 |
| 1.5 技術(shù)路線 |
| 第二章 黃毛草莓組培再生體系的建立 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 試驗材料 |
| 2.1.2 試驗方法 |
| 2.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 最適初代培養(yǎng)基的確定 |
| 2.2.2 最適繼代培養(yǎng)基的確定 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 初代培養(yǎng)基 |
| 2.3.2 繼代培養(yǎng)基 |
| 第三章 組培再生過程中DNA甲基化變化 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試驗材料的處理 |
| 3.1.2 試驗方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制 |
| 3.2.2 參考基因組比較分析 |
| 3.2.3 全基因組DNA甲基化模式分析 |
| 3.2.4 差異甲基化區(qū)域(DMRs)分析 |
| 3.2.5 不同時期甲基化差異基因注釋與功能富集 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 組培再生與甲基化 |
| 3.3.2 組培過程中相關(guān)基因的變化 |
| 第四章 總結(jié)和展望 |
| 4.1 總結(jié) |
| 4.2 展望 |
| 附錄 |
| 參考文獻 |
| 攻讀碩士學位期間完成的科研成果 |
| 致謝 |
（8）建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的檢測技術(shù)及脫毒方法研究進展（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 2種病毒的檢測技術(shù) |
| 1.1 血清學方法 |
| 1.2 分子生物學方法 |
| 1.3 電鏡觀察 |
| 2 脫毒技術(shù) |
| 2.1 化學療法 |
| 2.2 化學藥劑結(jié)合分生組織培養(yǎng) |
| 2.3 熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng) |
| 2.4 超低溫療法 |
| 3 問題與展望 |
（9）西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究（論文提綱范文）
| 縮寫詞 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1 西番蓮離體培養(yǎng)研究進展 |
| 1.1 外植體類型 |
| 1.2 培養(yǎng)基類型對西番蓮離體培養(yǎng)的影響 |
| 1.3 激素對西番蓮離體培養(yǎng)的影響 |
| 1.4 西番蓮組培苗的生根與移栽 |
| 2 西番蓮病毒病研究進展 |
| 2.1 西番蓮病毒病的種類 |
| 2.2 西番蓮病毒病的侵染特性及傳播途徑 |
| 3 植物病毒檢測方法研究進展 |
| 3.1 指示植物法 |
| 3.2 電鏡檢測法 |
| 3.3 血清學檢測法 |
| 3.4 分子生物學檢測法 |
| 4 病毒外殼蛋白(Coat protein,CP)功能及定位研究 |
| 4.1 CP的功能研究進展 |
| 4.2 CP的亞細胞定位研究進展 |
| 5 脫毒技術(shù)研究進展 |
| 5.1 熱處理脫毒 |
| 5.2 化學療法脫毒 |
| 5.3 組織培養(yǎng)脫毒 |
| 5.4 超低溫脫毒 |
| 6 本研究的意義和內(nèi)容 |
| 6.1 研究意義 |
| 6.2 研究內(nèi)容 |
| 第二章 西番蓮快繁體系的建立 |
| 第一節(jié) 西番蓮?fù)庵搀w消毒體系的建立 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 消毒劑種類對西番蓮再生的影響 |
| 2.2 不同消毒時間對外植體的影響 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 不同濃度激素組合對西番蓮增殖的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) 不同濃度激素組合對西番蓮組培苗生根的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 培養(yǎng)條件 |
| 1.4 計算方法及數(shù)據(jù)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第四節(jié) 西番蓮組培苗的煉苗與移栽 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第三章 西番蓮相關(guān)病毒檢測技術(shù)研究 |
| 第一節(jié) 西番蓮多種病毒的單重RT-PCR檢測 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 西番蓮Te MV和 CMV雙重RT-PCR檢測體系的建立及應(yīng)用 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 部分感病西番蓮樣品表型 |
| 2.2 RT-PCR擴增結(jié)果 |
| 2.3 雙重RT-PCR擴增 |
| 2.4 應(yīng)用雙重RT-PCR檢測西番蓮樣品Te MV和 CMV感染情況 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) 西番蓮微量直接RT-PCR(Microtissue direct RT-PCR)檢測體系的建立及優(yōu)化 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 不同針頭尺寸對微量直接RT-PCR檢測的影響 |
| 2.2 不同部位對微量直接RT-PCR檢測的影響 |
| 3 討論 |
| 第四章 西番蓮Te MV_CP基因克隆、亞細胞定位及表達分析 |
| 第一節(jié) Te MV外殼蛋白基因克隆及生物信息學分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 TeMV_CP基因克隆驗證 |
| 2.2 TeMV_CP蛋白同源性分析及蛋白保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測 |
| 2.3 TeMV_CP蛋白理化性質(zhì)分析 |
| 2.4 TeMV_CP蛋白跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸化位點預(yù)測 |
| 2.5 TeMV_CP蛋白二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測分析 |
| 2.6 TeMV_CP系統(tǒng)進化樹構(gòu)建與分析 |
| 2.7 TeMV_CP蛋白亞細胞定位預(yù)測 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) Te MV_CP蛋白亞細胞定位研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 目的基因酶切位點分析 |
| 2.2 目的片段及線性化載體的回收 |
| 2.3 重組載體的鑒定 |
| 2.4 TeMV_CP蛋白亞細胞定位 |
| 3 討論 |
| 第三節(jié) Te MV病毒表達特性分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 TeMV在西番蓮不同組織部位的表達分析 |
| 2.2 TeMV在不同品種西番蓮中的表達分析 |
| 3 討論 |
| 3.1 侵染西番蓮的Te MV具有組織表達特異性 |
| 3.2 TeMV在西番蓮上的表達具有品種差異性 |
| 第五章 西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)研究 |
| 第一節(jié) 莖尖超低溫處理體系的建立及優(yōu)化 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 試驗設(shè)計及數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 不同預(yù)培養(yǎng)時間對超低溫處理效果的影響 |
| 2.2 不同脫水處理時間對超低溫脫毒效果的影響 |
| 3 討論 |
| 第二節(jié) 西番蓮莖尖超低溫脫毒效果檢測 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第六章 西番蓮脫毒苗ISSR遺傳穩(wěn)定性分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 第七章 小結(jié)與展望 |
| 1 小結(jié) |
| 1.1 西番蓮離體快繁體系的建立與優(yōu)化 |
| 1.2 西番蓮主要病毒檢測及雙重RT-PCR檢測體系的建立 |
| 1.3 侵染西番蓮的Te MV_CP蛋白亞細胞定位研究及表達分析 |
| 1.4 西番蓮莖尖超低溫脫毒技術(shù)的研究 |
| 1.5 西番蓮脫毒苗ISSR遺傳穩(wěn)定性檢測 |
| 2 展望 |
| 參考文獻 |
| 攻讀碩士期間的學術(shù)論文與研究成果 |
| 致謝 |
（10）三個茶用菊品種脫毒體系的建立（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞表 |
| 引言 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1 三種茶用菊的背景 |
| 2 植物病毒及類病毒侵染菊花的機理及癥狀 |
| 3 菊科植物的四種主要病毒介紹 |
| 3.1 菊花矮化類病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd) |
| 3.2 菊花B病毒(Chrysanthemum virus B,CVB) |
| 3.3 番茄不孕病毒病(Tomato aspermy virus,TAV) |
| 3.4 菊花枯黃斑點類病毒(Chrysanthemum Chlorotic Mottle viroid,CChmvd) |
| 4 植物病毒的檢測方法 |
| 4.1 生物學檢測方法 |
| 4.2 電鏡觀察法 |
| 4.3 血清學檢測方法 |
| 4.4 分子生物學法 |
| 5 植物的抗病毒機制 |
| 5.1 交叉保護法 |
| 5.2 R基因的調(diào)節(jié)反應(yīng) |
| 5.3 RNA沉默機制 |
| 6 植物脫毒技術(shù)的研究現(xiàn)狀 |
| 6.1 莖尖組織培養(yǎng)脫毒 |
| 6.2 化學處理結(jié)合莖尖培養(yǎng) |
| 6.3 熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng) |
| 6.4 低溫處理結(jié)合莖尖培養(yǎng) |
| 6.5 基因工程脫毒技術(shù) |
| 6.6 脫落酸在植物抗病毒技術(shù)中的運用 |
| 6.7 其他領(lǐng)域脫毒技術(shù)的研究 |
| 7 本研究的目的意義 |
| 第二章 三種茶用菊病毒的檢測及脫除 |
| 1 材料 |
| 2 試驗方法 |
| 2.1 三種茶用菊的采集與保存 |
| 2.2 巢式RT-PCR病毒檢測 |
| 2.3 三種茶用菊脫毒體系的建立 |
| 2.4 三種茶用菊脫毒苗遺傳穩(wěn)定性分析 |
| 2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 三種茶用菊大田病害的調(diào)查 |
| 3.2 三種茶用菊的病毒檢測情況 |
| 3.3 三種茶用菊莖尖最適利巴韋林濃度的確定 |
| 3.4 低溫處理三種茶用菊的脫毒培養(yǎng)生長比較 |
| 3.5 三種茶用菊低溫處理莖尖存活率比較 |
| 3.6 脫毒苗脫毒效果的鑒定和比較 |
| 3.7 三種茶用菊脫毒苗遺傳穩(wěn)定性分析 |
| 4 討論 |
| 第三章 3D8 scFv基因轉(zhuǎn)化‘早花紅心菊’的初探 |
| 1 材料 |
| 1.1 植物材料 |
| 1.2 農(nóng)桿菌菌株及載體 |
| 2 試驗方法 |
| 2.1 ‘早花紅心菊’不定芽的分化 |
| 2.2 抗生素的篩選試驗 |
| 2.3 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)及活化 |
| 2.4 轉(zhuǎn)基因 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 直接誘導(dǎo)芽再生培養(yǎng)基對菊花的影響 |
| 3.2 抗生素對菊花的影響 |
| 3.3 ‘早花紅心菊’抗性芽的形成 |
| 4 討論 |
| 全文結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
四、草莓分生組織培養(yǎng)脫病毒技術(shù)及其應(yīng)用（論文參考文獻）
- [1]草莓莖尖脫毒繁育體系研究進展[J]. 馬秀明,繆軍,王俊峰,韓偉,孫楊. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2021(24)
- [2]外施褪黑素促進蘋果脫毒的技術(shù)與機理研究[D]. 陳龍. 西北農(nóng)林科技大學, 2021
- [3]草莓種苗的脫毒技術(shù)試驗研究[J]. 李曉亮,楊世先,楊光炤,王文智,張建康,錢遵姚,董廣,張軍云. 農(nóng)業(yè)科技通訊, 2021(03)
- [4]冀東地區(qū)主栽甘薯品種莖尖脫病毒及組織培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)研究[D]. 徐燕. 河北科技師范學院, 2020(06)
- [5]草莓病毒病、脫毒技術(shù)及病毒檢測研究進展[J]. 霍辰思,樊新萍,劉偉. 果樹資源學報, 2020(04)
- [6]黃毛草莓（Fragaria nilgerrensis Schltdl）組培再生過程中基因組DNA甲基化動態(tài)變化[D]. 代雄偉. 云南大學, 2020(08)
- [7]草莓病毒病及其研究進展[J]. 蘇代發(fā),童江云,楊俊譽,陳杉艷,羅志偉,沈雪梅,賴泳紅,Jamil Arslan,魏世杰,崔曉龍. 云南大學學報(自然科學版), 2019(06)
- [8]建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的檢測技術(shù)及脫毒方法研究進展[J]. 王仁睿,李杰. 中國農(nóng)學通報, 2020(11)
- [9]西番蓮快繁體系建立及脫毒技術(shù)研究[D]. 焦楠. 福建農(nóng)林大學, 2019(04)
- [10]三個茶用菊品種脫毒體系的建立[D]. 王宇虹. 南京農(nóng)業(yè)大學, 2019(08)
標簽：草莓論文; 西番蓮論文; 褪黑素論文; 甲基化論文; 組織培養(yǎng)論文;