一、季節(jié)效應(yīng)對綿羊體外受精的影響（論文文獻(xiàn)綜述）
孫偉[1]（2021）在《奶牛種公牛培育及性別控制冷凍精液生產(chǎn)效率影響因素的研究》文中提出本研究針對我國奶牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)對優(yōu)質(zhì)種公牛培育和良種母牛快速擴(kuò)繁的迫切需求,創(chuàng)新集成了奶牛育種關(guān)鍵技術(shù)體系、研制性別控制冷凍精液生產(chǎn)新技術(shù)與新產(chǎn)品,為解決高產(chǎn)奶牛擴(kuò)繁速度慢的技術(shù)瓶頸問題,加快奶牛群體遺傳改良進(jìn)程提供了技術(shù)支撐。奶牛育種關(guān)鍵技術(shù)體系包括種用胚胎生產(chǎn)與胚胎移植（Embryo Transfer,ET）、青年公牛全基因組檢測與遺傳評估、生長發(fā)育、生產(chǎn)性能測定（Dairy Herd Improvement,DHI）及精液受精與受胎能力相關(guān)性分析。奶牛性控冷凍精液生產(chǎn)新技術(shù)主要圍繞生產(chǎn)效率提升、產(chǎn)品質(zhì)量改善與人工授精（Artificial Insemination,AI）關(guān)鍵技術(shù)開發(fā)。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1、創(chuàng)新集成了高效的奶牛種用胚胎生產(chǎn)與ET關(guān)鍵技術(shù)流程,使每頭供體牛平均生產(chǎn)體內(nèi)胚胎6.6枚,比行業(yè)平均水平（5枚）高32.0%;冷凍胚胎移植受胎率為45.0-58.6%、產(chǎn)犢率為38.4-55.8%,均高于行業(yè)平均水平。2、利用全基因組檢測結(jié)合奶牛DHI技術(shù),集成了種公牛遺傳-生產(chǎn)性能對比育種評價體系。不同月齡青年公牛生長發(fā)育關(guān)鍵指標(biāo),與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相比,體重和睪丸周徑均高于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)平均水平,并篩選出遺傳品質(zhì)優(yōu)秀的種公牛154頭,其中育種綜合指數(shù)GTPI（General Total Performance Index）≥2600指數(shù)的種公牛35頭、占比22.7%;AI配種的種母牛一、二和三胎次305天產(chǎn)奶量與商品母牛相比分別提升了823.0 kg、1374.5 kg和976.7 kg,表明全基因組檢測遺傳評估與生產(chǎn)性能實際表型值的顯著關(guān)聯(lián)性。3、體外受精（In vitro fertilization,IVF）與AI受胎率對比分析顯示,同一頭種公牛精液的IVF受精率與AI受胎率高度關(guān)聯(lián),證明IVF可作為新的繁殖性狀評價指標(biāo)納入奶牛種公牛育種評價體系,據(jù)此把種公牛受精能力分為三個等級,分別是正常受精率（Normal fertility bulls:45-60%）、較高受精率（Higher fertility bulls:61-80%）、高受精率（Highest fertility bulls:>80%）。4、探究異種動物的精子（山羊、綿羊和鹿）對于奶牛X精子的受精推流效果表明,選擇山羊精液受精推流最佳,在此基礎(chǔ)上開發(fā)了奶牛性控凍精生產(chǎn)新技術(shù),使奶牛性控凍精生產(chǎn)效率提升2倍以上、生產(chǎn)成本降低70%,并確定新產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)為:100萬分離X精子混合100萬山羊精子,該產(chǎn)品可以保持平均56.2%的AI情期受胎率和94.6%的性控準(zhǔn)確率。5、添加抗氧化劑VE、SOD、CAT可以明顯提升奶牛分離X精子的活力,特別是奶牛性控凍精的體外存活時間由原來的4-6 h延長到8-10 h,該產(chǎn)品的AI受胎率總體提升了5-10%,為奶牛性控凍精產(chǎn)業(yè)化推廣應(yīng)用提供了技術(shù)支撐。
李娜[2]（2020）在《綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚階段轉(zhuǎn)錄組研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理綿羊卵裂期早期胚胎經(jīng)歷了受精卵形成、合子基因組激活、卵裂球壓實等四個階段,涉及胚胎轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)的劇烈變化,研究8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚階段綿羊體外受精胚胎轉(zhuǎn)錄組,對了解早期胚胎生長發(fā)育規(guī)律十分重要。本研究為獲得綿羊體外受精胚胎樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,對綿羊體外受精培養(yǎng)體系進(jìn)行優(yōu)化;分別用單細(xì)胞裂解液和PicoPure?RNA Isolation Kit獲得RNA,篩選有效單個胚胎RNA獲取方法,純化mRNA,將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,Smart-Seq2擴(kuò)增cDNA構(gòu)建綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚期單個胚胎轉(zhuǎn)錄組測序文庫,采用Illumina HiSeq Xten高通量測序技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序;篩選不同卵裂期胚胎差異表達(dá)基因,進(jìn)行GO功能分析及KEGG分析。獲得結(jié)果如下:1.在綿羊卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液中添加10μg/mL的LH卵母細(xì)胞的成熟率為76.60%,卵裂率為63.24%,桑椹胚率為30.81%,顯著高于添加0μg/mL、5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL LH的成熟培養(yǎng)液（P<0.05）。2.用單細(xì)胞裂解液裂解綿羊單個胚胎,純化mRNA,將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,Smart-Seq2擴(kuò)增cDNA,檢測PCR產(chǎn)物濃度均在60 ng以上,cDNA片段大小集中分布在1kbp2 kbp之間,成功構(gòu)建綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚期單個胚胎轉(zhuǎn)錄組測序文庫,而采用PicoPure?RNA Isolation Kit提取單個胚胎RNA,檢測RNA質(zhì)量,RIN<1.5且28S/18S<0.2,未滿足cDNA擴(kuò)增要求,無法構(gòu)建轉(zhuǎn)錄組測序文庫。3.用DEGSeq軟件分析差異表達(dá)基因,以FC>2or<0.5且Q-value<0.05為篩選標(biāo)準(zhǔn),8-細(xì)胞VS 16-細(xì)胞篩選到170條DEGs,其中上調(diào)126條,下調(diào)44條;16-細(xì)胞VS桑椹胚篩選找到417條DEGs,其中上調(diào)47條,下調(diào)370條;8-細(xì)胞VS桑椹胚篩選到126條DEGs,其中上調(diào)36條,下調(diào)90條。對差異表達(dá)基因進(jìn)行GO生物功能分析,主要涉及核苷酸化合物合成、代謝調(diào)節(jié)、有機(jī)環(huán)化合物生物合成、RNA代謝、化合物代謝等生物過程。對差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG分析結(jié)果顯示,8-細(xì)胞VS 16-細(xì)胞DEGs參與到126條通路中,顯著富集在癌癥中轉(zhuǎn)錄失調(diào)、Hippo信號通路等11條代謝通路;16-細(xì)胞VS桑椹胚DEGs參與到206條代謝通路,顯著富集在剪接體、調(diào)控干細(xì)胞多能性的信號通路2條代謝通路;8-細(xì)胞VS桑椹胚DEGs無顯著富集代謝通路。
李昊[3]（2019）在《Myostatin基因敲低克隆綿羊的研究》文中研究說明肌肉生長抑制素（Myostatin,MSTN）是一種生長因子,屬于TGF-β超家族,主要在骨骼肌細(xì)胞中表達(dá),對肌肉的生長具有負(fù)調(diào)控作用。MSTN基因的過表達(dá)可引起肌肉萎縮,而MSTN基因發(fā)生突變或被敲除時則會使動物的肌肉量增加,產(chǎn)生雙肌現(xiàn)象。本研究利用克隆獲得的綿羊MSTN基因構(gòu)建真核表達(dá)載體,同時設(shè)計合成MSTN干涉序列并構(gòu)建RNA干涉載體,共轉(zhuǎn)染293GP細(xì)胞后經(jīng)熒光定量PCR檢測獲得干涉效率最佳的載體;將其線性化后轉(zhuǎn)染綿羊成纖維細(xì)胞后,經(jīng)G418篩選獲得MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系;以MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞為核供體,利用細(xì)胞核移植的方法獲得MSTN敲低轉(zhuǎn)基因綿羊克隆胚和轉(zhuǎn)基因綿羊,以期建立獲得肌肉豐滿綿羊新品系的方法。此外,本研究利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),獲得了基因編輯胚胎和小鼠,為后續(xù)利用CRIISPR/Cas9系統(tǒng)獲得基因打靶綿羊奠定基礎(chǔ)。本研究的結(jié)果與結(jié)論如下:1、綿羊MSTN基因RNA干涉載體構(gòu)建和活性分析（1）綿羊Myostatin基因的克隆:參照GenBank中綿羊MSTN基因序列（AF019622.1）,采用RT-PCR擴(kuò)增技術(shù),克隆綿羊肌肉生長抑制素基因,將其連接到pcDNA3.1（+）載體,獲得肌肉抑制素基因真核表達(dá)載體;（2）RNA干涉表達(dá)載體的構(gòu)建:參照綿羊MSTN基因的mRNA序列,設(shè)計合成RNA干涉序列并與pRNAT-U6載體連接,獲得RNA干涉表達(dá)載體。與真核表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293GP細(xì)胞后,通過實時定量PCR檢測干涉效率,獲得干涉效果最佳序列。（3）RNA干涉載體表達(dá)活性檢測:將篩選獲得的RNA干涉載體線性化,采用顯微注射的方式,注射到小鼠原核時期的胚胎中,注射后的胚胎可以分裂為2細(xì)胞,經(jīng)體外培養(yǎng)最終獲得表達(dá)綠色熒光蛋白的囊胚,表明所構(gòu)建的RNA干涉載體可以在胚胎中正常表達(dá)并支持胚胎的發(fā)育。2、綿羊MSTN敲低轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞系的建立通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將線性化的RNA干涉載體轉(zhuǎn)染到綿羊成纖維細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選,獲得轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞;PCR結(jié)果顯示,構(gòu)建的基因已整合到細(xì)胞基因組中;對獲得的轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征、生長曲線以及冷凍復(fù)蘇后特征的檢測結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因細(xì)胞具有正常細(xì)胞的生物學(xué)特征。3、綿羊MSTN敲低轉(zhuǎn)基因胚胎的獲得（1）供體細(xì)胞的修飾和處理:來源于成纖維細(xì)胞的核移植胚胎的卵裂率為44.6%,高于MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的33.0%,且差異顯著,但兩者的桑/囊胚率差異不顯著（分別為24.1%和15.6%）;供體細(xì)胞不需進(jìn)行血清饑餓處理,使用接觸抑制方法可以達(dá)到相同效果。（2）重構(gòu)胚的融合、激活和培養(yǎng):采用逐個融合（一次一個）的融合方式能顯著提高融合效率,但融合后的胚胎發(fā)育能力和批量融合（一次多個）方法比差異不顯著;采用A23187+6-DMAP激活卵母細(xì)胞與采用Ionomycin+6-DMAP激活方法之間的效果差異不大;重構(gòu)胚融合后培養(yǎng)34 h后再進(jìn)行激活可有效提高胚胎卵裂和囊胚發(fā)育率。KSOM和SOFaa都可以用來進(jìn)行綿羊克隆胚的體外培養(yǎng)。4、轉(zhuǎn)基因核移植胚胎的移植和胎兒鑒定（1）重構(gòu)胚的移植:采用輸卵管移植方法,將原核期或2-細(xì)胞期的核移植胚胎（242枚）移植到同步發(fā)情的受體綿羊（23只）體內(nèi),以檢驗其在體內(nèi)的發(fā)育能力。（2）轉(zhuǎn)基因胎兒鑒定:在23只受體中,最終只有1只受體妊娠,但妊娠期間發(fā)生流產(chǎn),未能獲得成活個體,獲得流產(chǎn)胎兒1只;對流產(chǎn)胎兒進(jìn)行PCR鑒定,結(jié)果顯示,胎兒基因組中整合有目的基因。5、肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白打靶胚胎的獲得（1）Rosa26基因sgRNA的設(shè)計和體外驗證:根據(jù)小鼠Rosa26基因序列設(shè)計sgRNA,體外編輯試驗表明,所設(shè)計的sgRNA可以對Rosa26位點發(fā)生編輯作用;（2）肌肉特異打靶載體的構(gòu)建:通過PCR和同源重組連接,成功構(gòu)建了肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白的同源打靶載體Donor-SP-Cas9-DsRed;（3）Rosa26基因編輯胚胎和小鼠的獲得:注射Rosa26 sgRNA和Cas9到小鼠胚胎,注射后的胚胎可以正常卵裂并支持囊胚發(fā)育,通過PCR和測序結(jié)果顯示,獲得的胚胎為基因編輯胚胎,注射的胚胎經(jīng)胚胎移植后,獲得了 Rosa26基因編輯小鼠;（4）通過將同源打靶載體與Rosa26 sgRNA和Cas9聯(lián)合注射的方式,獲得肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白的基因打靶胚胎;綜上所述,通過構(gòu)建MSTN基因RNA干涉載體、轉(zhuǎn)染綿羊成纖維細(xì)胞建立MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞核移植等程序,可以獲得MSTN敲低的綿羊轉(zhuǎn)基因克隆胚,胚胎移植后獲得流產(chǎn)胎兒且攜帶外源基因,表明獲得的重構(gòu)胚具有體內(nèi)發(fā)育能力,可以通過該方法獲得MSTN敲低的轉(zhuǎn)基因綿羊。本研究結(jié)果為培育MSTN敲低的綿羊新品系提供了依據(jù)。此外,通過利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),獲得了基因編輯胚胎和小鼠,初步在小鼠上建立了基因編輯和基因打靶體系,為后續(xù)利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)獲得基因打靶綿羊奠定基礎(chǔ)。
呂和[4]（2016）在《不同因素對綿羊體外胚胎生產(chǎn)的影響》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理本論文主要研究了不同因素對綿羊體外胚胎生產(chǎn)的影響,主要分為以下幾個方面：1.在綿羊卵母細(xì)胞成熟液中添加不同濃度的褪黑素（0、10-5、10-7、10-9mol/L）,體外培養(yǎng)24h后,觀察各試驗組的成熟率。結(jié)果表明,褪黑素濃度為10-7M組成熟率最高,但與其他組相比無顯著性差異（P>0.05）。各組卵母細(xì)胞成熟后進(jìn)行孤雌激活,體外培養(yǎng),結(jié)果顯示,四個組之間卵裂率和囊胚率均無顯著差異（P>0.05）,但三個試驗組的囊胚凋亡指數(shù)（12.22～18.18%）顯著低于無添加的對照組（21.30%,P<0.05）。其中,10-9mol·L-1濃度組的凋亡指數(shù)最低。2.比較精液常溫保存和低溫保存對體外受精的影響。采集新鮮的公羊精液,經(jīng)過稀釋后分別進(jìn)行常溫保存和低溫保存,然后體外受精,結(jié)果表明,低溫保存組卵裂率和囊胚率均略高于常溫保存組,但兩組無顯著性差異（P>0.05）。3.比較受精液中不同血清濃度對體外受精的影響。分別用含有2%和20%發(fā)情母羊血清的受精液進(jìn)行體外受精,結(jié)果表明,兩試驗組卵裂率和囊胚率均無顯著性差異（P>0.05）。4.比較兩種不同的精液稀釋保存液對體外受精效果的影響。結(jié)果表明,利用稀釋保存液LTGC和SOF常溫保存處理后的精子,進(jìn)行體外受精后,兩試驗組卵裂率和囊胚率均無顯著性差異（P>0.05）。5.卵母細(xì)胞體外成熟并孤雌激活后,移入添加了不同濃度褪黑素（0、10-5、10-7、10-9mol·L-1）的培養(yǎng)液中進(jìn)行體外培養(yǎng),結(jié)果表明,四個組之間的卵裂率并無顯著差異（P>0.05）,10-7、10-9mol·L-1兩個試驗組的囊胚率要顯著高于其他兩組,但兩個組間無差異。10-5、10-7、10-9mol·L-1濃度組的胚胎凋亡指數(shù)顯著低于對照組（P<0.05）,其中10-5mol·L-1組的（17.56%）顯著高于10-7、10-9濃度組（13.64%、11.62%,P<0.05）。
唐淑紅[5]（2015）在《IGF-I和GSH對不同季節(jié)綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量的影響》文中指出綿羊是我國重要的經(jīng)濟(jì)動物,為人類提供所需的毛、肉等產(chǎn)品。目前,利用凍精進(jìn)行人工授精、體外受精等手段可提高綿羊的繁殖效率,同時還可降低飼養(yǎng)成本。然而綿羊凍精,特別是非繁殖季節(jié)綿羊凍精質(zhì)量較差,導(dǎo)致凍精的利用率較低。目前仍未找到適合綿羊精子生理特性的冷凍稀釋液。為改善全季綿羊冷凍精液品質(zhì),本研究分別在繁殖季節(jié)（11月）及非繁殖季節(jié)（6月）對7只特克賽爾公羊進(jìn)行采精,并將同季節(jié)不同個體精液混和。在冷凍稀釋液中分別添加IGF-I和GSH,用一步稀釋法制作細(xì)管凍精。精液解凍后,分別溫育0、1及2 h,應(yīng)用SYBR-14/PI熒光雙染法、低滲腫脹實驗和吖啶橙染色分別測定精子的頂體膜、質(zhì)膜和DNA完整率。利用解凍精子進(jìn)行體外受精、體外培養(yǎng),并測定卵裂率和囊胚率。共同探索不同季節(jié)條件下對綿羊冷凍精子質(zhì)量的影響,以及添加IGF-I和GSH對繁殖季節(jié)及非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響,為提高凍精利用效率提供理論依據(jù)。結(jié)果如下:1、不同季節(jié)（繁殖季節(jié)、非繁殖季節(jié)）對冷凍解凍后精子質(zhì)量的影響:繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性以及體外受精后的卵裂率和囊胚率都顯著高于非繁殖季節(jié)。2、在冷凍稀釋液中添加不同濃度IGF-I（0、50、100、150、250 ng/mL）對繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加50、100、150 ng/m L IGF-I精子頂體膜完整率在解凍初期顯著高于對照組（P<0.05）。添加100 ng/m L IGF-I精子質(zhì)膜及DNA完整率在解凍溫育1 h時顯著高于其對照組（P<0.05）,而添加150、250 ng/mL IGF-I顯著降低精子頂體膜及質(zhì)膜的完整率（P<0.05）。因此在冷凍稀釋液中添加100 ng/m L IGF-I可提高繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜、DNA的完整性。3、在冷凍稀釋液中添加不同濃度IGF-I（0、50、100、150、250 ng/mL）對非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加100 ng/mL IGF-I在初解凍、解凍后溫育1及2 h時能顯著提高精子頂體膜完整率（P<0.05）。添加100、150 ng/m L IGF-I在初解凍及解凍后溫育1 h時能顯著提高精子質(zhì)膜完整率（P<0.05）。添加250 ng/mL IGF-I在解凍后溫育1、2 h時顯著降低精子DNA完整率（P<0.05）。添加100、150 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季節(jié)凍精解凍后體外受精的卵裂率。因此在冷凍稀釋液中添加100 ng/m L IGF-I可提高非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性,提高體外受精后的卵裂率。4、在冷凍稀釋液中添加不同濃度GSH（0、1、2、2.5、3 m M）對繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1 h時能提高精子頂體膜完整率（P<0.05）。添加1、2 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1、2 h時能顯著提高精子質(zhì)膜完整率（P<0.05）。添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1、2 h時能顯著提高精子DNA完整率（P<0.05）。因此在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜及DNA的完整性。5、在冷凍稀釋液中添加不同濃度GSH（0、1、2、2.5、3 mM）對非繁殖季節(jié)凍精質(zhì)量的影響:添加1 mM GSH在初解凍及解凍后溫育1 h時能顯著提高精子頂體膜完整率（P<0.05）。添加1 mM GSH在解凍溫育1 h時顯著提高精子質(zhì)膜完整率（P<0.05）。在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季節(jié)凍精解凍后體外受精的卵裂率及囊胚率。因此在冷凍稀釋液中添加1 mM GSH可提高非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性,提高體外受精后的卵裂率及囊胚率。綜上所述,繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜完整性,及體外受精后的效果都好于非繁殖季節(jié)。在冷凍稀釋液中添加IGF-I 100 ng/mL或GSH 1 mM對提高繁殖季節(jié)頂體膜及質(zhì)膜完整性效果較好,同時也可改善非繁殖季節(jié)冷凍解凍后精子頂體膜、質(zhì)膜的完整性以及體外受精后的效果。
陸會寧,齊燕姣[6]（2013）在《影響綿羊卵母細(xì)胞體外成熟因素研究進(jìn)展》文中研究表明卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)中的重要內(nèi)容之一,為提高綿羊卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量和促進(jìn)動物生物技術(shù)研究,綜述了綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的主要影響因素,主要包括季節(jié)因素和綿羊年齡、卵母細(xì)胞的來源、培養(yǎng)條件和方法、成熟培養(yǎng)液及其它添加成分等。
任立坤,劉月琴,張英杰,楊少華,王紅娜[7]（2012）在《羊卵母細(xì)胞體外成熟影響因素》文中研究指明隨著哺乳動物體外受精、轉(zhuǎn)基因、核移植、外源基因的導(dǎo)入等生物工程技術(shù)研究的不斷深入,卵母細(xì)胞的體外成熟技術(shù)與冷凍保存聯(lián)系密切也日益受到重視。但迄今為止,與體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞相比,體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量差,胞質(zhì)成熟鑒定困難,核、質(zhì)成熟不同步等許多問題還未解決。這些都直接影響著卵母細(xì)胞體外成熟的質(zhì)量,并制約著上述生物技術(shù)的發(fā)展。因此,完善哺乳動物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系,提高卵母細(xì)胞體外成熟
任立坤,劉月琴,張英杰,楊少華,王紅娜[8]（2012）在《羊卵母細(xì)胞體外成熟影響因素》文中研究說明隨著哺乳動物體外受精、轉(zhuǎn)基因、核移植、外源基因的導(dǎo)入等生物工程技術(shù)研究的不斷深入,卵母細(xì)胞的體外成熟技術(shù)與冷凍保存聯(lián)系密切也日益受到重視。但迄今為止,與體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞相比,體外成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量差,胞質(zhì)成熟鑒定困難,核、質(zhì)成熟不同步等許多問題還未解決。這些都直接影響著卵母細(xì)胞體外成熟的質(zhì)量,并制約著上述生物技術(shù)的發(fā)展。因此,完善哺乳動物卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系,提高卵母細(xì)胞體外成熟的質(zhì)量,成為亟待解決的問題。影響卵母細(xì)胞體外成熟的
常衛(wèi)華[9]（2011）在《重離子輻射對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟、受精及發(fā)育的影響》文中研究表明體外受精技術(shù)是指在實驗室條件下,人為模擬雌性動物生殖道內(nèi)環(huán)境,使獲能精子和成熟卵子完成受精形成合子的過程。它是繼人工授精（AI）技術(shù)、胚胎移植（ET）技術(shù)以后動物繁殖領(lǐng)域的第三次革命。近年以來,隨著市場經(jīng)濟(jì)的向前發(fā)展,綿羊產(chǎn)業(yè)化前景越來越廣闊,體外受精技術(shù)越來越受到人們的重視。然而,由于受到各種因素的制約,綿羊體外受精技術(shù)仍不穩(wěn)定,體外受精率不高,胚胎發(fā)育率低、質(zhì)量差,而且很難重復(fù)。對此,我們進(jìn)行了重離子輻射對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟、受精及早期胚胎發(fā)育影響的試驗研究,主要結(jié)果如下:1.成熟液中,添加不同配比濃度的FSH和LH對卵母細(xì)胞的體外成熟影響顯著,其中10μg/ml FSH+10μg/ml LH（1:1）時卵母細(xì)胞體外成熟率最高,為61.2%。2.在綿羊卵母細(xì)胞體外成熟液中添加不同濃度的丙酮酸鈉,其卵母細(xì)胞體外成熟率不同。添加0.2g/L的丙酮酸鈉,卵母細(xì)胞體外成熟率最高;而添加0.4、0.6g/L的丙酮酸鈉,其體外成熟率顯著下降。3.重離子束輻射綿羊卵母細(xì)胞對其體外成熟影響顯著,1.0和1.5Gy的照射劑量與對照組相比可以明顯促進(jìn)卵母細(xì)胞的體外成熟,且1.0Gy劑量輻照其促進(jìn)效果更好,而2.0Gy劑量進(jìn)行照射則抑制卵母細(xì)胞體外成熟。4.在綿羊體外受精過程中,采用凍精或鮮精做體外受精,其早期胚胎的發(fā)育情況并無顯著性差異。因此,在體外受精的試驗過程中,凍精也能獲得預(yù)期的試驗?zāi)康摹?.重離子束輻射綿羊精液并做體外受精后,早期胚胎發(fā)育有著顯著變化。0.5、1.0Gy劑量輻照精液,綿羊早期胚胎的卵裂率、桑葚胚率顯著升高,囊胚率無顯著變化;1.5 Gy劑量輻照精液,卵裂率顯著提高,而桑葚胚率和囊胚發(fā)育率顯著降低;2.0 Gy劑量輻照精液,其卵裂率、桑葚胚率、囊胚發(fā)育率均極顯著降低。6.0.5、1.0Gy劑量的重離子束輻射綿羊卵母細(xì)胞,體外受精后的卵裂率、桑葚胚率、囊胚發(fā)育率顯著升高;而2.0Gy劑量組的卵裂率、桑葚胚率、囊胚發(fā)育率極顯著降低,其中囊胚發(fā)育率為0。
段明軍[10]（2008）在《牛羊體外受精技術(shù)條件優(yōu)化和牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究》文中認(rèn)為本試驗探討了精卵共培養(yǎng)時間和卵泡液對牛體外受精效果的影響,以及卵泡液、精卵共培養(yǎng)時間、精卵共培養(yǎng)液量、顆粒細(xì)胞層數(shù)以及季節(jié)對羊體外受精效果的影響,進(jìn)一步優(yōu)化了牛羊體外受精技術(shù)條件;本試驗還對冷凍保護(hù)劑、冷凍方法、冷凍載體以及胚胎不同發(fā)育階段的冷凍效果等進(jìn)行了研究。牛體外受精技術(shù)條件優(yōu)化的研究:（1）受精10 h組的卵裂率和囊胚率均優(yōu)于受精7 h組,其中卵裂率差異顯著（P<0.05）,囊胚率差異不顯著（P>0.05）;（2）在成熟培養(yǎng)液中添加BFF組和SFF組的卵裂率分別為75.41﹪和63.01﹪,差異顯著（P<0.05）。牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存的研究:（1） EG組與EG + DMSO組的形態(tài)完整率差異不顯著（P>0.05）;EG組與對照組的孵育率差異顯著（P>0.05）,雖然EG + DMSO組的孵育率高于EG組,但差異不顯著（P>0.05）; （2）早期囊胚經(jīng)OPS法玻璃化冷凍和程序化冷凍法冷凍的孵育率均低于對照組,分別為30.23%、35.56%和39.34%,但差異不顯著（P<0.05）,說明采用OPS進(jìn)行牛早期囊胚玻璃化冷凍能取得與程序化冷凍相當(dāng)?shù)男Ч?（3）GMS組與0.25m1細(xì)管組的形態(tài)完整率差異極顯著（p < 0.01）,OPS組與0.25m1細(xì)管組的形態(tài)完整率差異顯著（p < 0.05）,但GMS組與OPS組間的差異不顯著（p > 0.05）,說明0.25ml細(xì)管的玻璃化冷凍效果欠佳,OPS和GMS的早期囊胚玻璃化冷凍效果相當(dāng),可用OPS取代GMS; （4）桑甚胚組與囊胚組的形態(tài)完整率差異不顯著（P>0.05）;?？芭呓M與對照組的孵育率差異顯著（p<0.05）,?？芭呓M與囊胚組差異顯著（P<0.05）。（5）桑椹胚組與早期囊胚組形態(tài)完整率差異不顯著（P>0.05）;桑椹胚組凍前與凍后平均活力差異顯著（p<0.05）,早期囊胚組凍前與凍后平均活力差異顯著（p<0.05）,孵化囊胚組凍前與凍后平均活力差異顯著（p< 0.05）。綿羊體外受精技術(shù)條件優(yōu)化的研究:（1）在成熟培養(yǎng)液中添加SFF組和BFF組的卵裂率分別為65.23﹪和60.43﹪,差異不顯著（P>0.05）;囊胚率分別為26.16﹪和17.11﹪,差異顯著（P<0.05）;（2）受精22 h組、18 h組和12 h組的卵裂率分別為64.85﹪、54.39﹪和48.72%,受精22h組和18 h組間差異顯著（P<0.05）,受精22 h組和12 h組間差異極顯著（P<0.01）;（3）精卵共培養(yǎng)液量為100 ul組的卵裂率和囊胚率均優(yōu)于70 ul組和200 ul組,但差異均不顯著（P>0.05）;（4）帶有1層～3層顆粒細(xì)胞的卵母細(xì)胞進(jìn)行IVF的效果優(yōu)于0層組,兩者的卵裂率和囊胚率均顯著（P<0.05）;3層～5層組的卵裂率和囊胚率也優(yōu)于0層組,但兩者差異不顯著（P>0.05）;（5）秋季的卵裂率和囊胚率均高于夏季,差異顯著（P<0.05）,但秋季與春季相比差異均不顯著（P>0.05）。通過上述試驗,本實驗室已建立了牛體外受精技術(shù),已初步建立了綿羊體外受精技術(shù)和牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)體系。
二、季節(jié)效應(yīng)對綿羊體外受精的影響（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、季節(jié)效應(yīng)對綿羊體外受精的影響（論文提綱范文）
（1）奶牛種公牛培育及性別控制冷凍精液生產(chǎn)效率影響因素的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 奶牛繁育技術(shù)研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 人工輸精技術(shù) |
| 1.1.2 MOET育種技術(shù) |
| 1.1.2.1 胚胎移植國內(nèi)外應(yīng)用情況 |
| 1.1.2.2 胚胎移植技術(shù)存在的問題及解決方法 |
| 1.1.2.3 胚胎移植技術(shù)前景 |
| 1.1.3 活體采卵-體外受精技術(shù) |
| 1.1.3.1 體外受精技術(shù)的應(yīng)用情況 |
| 1.1.3.2 體外受精技術(shù)存在的問題 |
| 1.1.3.3 體外受精技術(shù)的發(fā)展前景 |
| 1.1.4 奶牛生產(chǎn)性能測定 |
| 1.2 奶牛分子育種技術(shù)研究進(jìn)展 |
| 1.2.1 分子輔助標(biāo)記 |
| 1.2.2 全基因組選擇 |
| 1.2.2.1 全基因組關(guān)聯(lián)研究 |
| 1.2.2.2 全基因組選擇技術(shù) |
| 1.2.2.3 基因組選擇的應(yīng)用 |
| 1.2.3 動物體細(xì)胞克隆技術(shù) |
| 1.2.3.1 動物克隆操作技術(shù) |
| 1.2.3.2 動物克隆研究的生物學(xué)意義 |
| 1.2.3.3 動物克隆技術(shù)的應(yīng)用前景及存在的問題 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 影響種公牛培育的種用胚胎質(zhì)量及受胎率相關(guān)因素研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 供體母牛選擇 |
| 2.2.2 實驗材料 |
| 2.2.2.1 儀器與設(shè)備 |
| 2.2.2.2 主要試劑耗材 |
| 2.2.3 實驗方法 |
| 2.2.3.1 試劑配制 |
| 2.2.3.2 超數(shù)排卵處理 |
| 2.2.3.3 供體牛人工授精 |
| 2.2.3.4 牛胚胎采集和鑒定 |
| 2.2.3.5 牛胚胎冷凍保存 |
| 2.2.3.6 牛體外胚胎生產(chǎn) |
| 2.2.3.7 牛胚胎解凍和移植 |
| 2.2.3.8 妊娠檢查 |
| 2.2.4 實驗數(shù)據(jù)處理 |
| 2.3 實驗結(jié)果 |
| 2.3.1 影響奶牛種用胚胎生產(chǎn)因素的研究 |
| 2.3.1.1 奶牛不同性別X/Y冷凍精子體內(nèi)胚胎生產(chǎn)效率的比較 |
| 2.3.1.2 添加與未添加抗氧化劑性控凍精對體外性控胚胎生產(chǎn)效率的影響 |
| 2.3.1.3 添加與未添加抗氧化劑對奶牛體內(nèi)性控胚胎生產(chǎn)效率的影響 |
| 2.3.2 奶牛種用胚胎移植效果的比較 |
| 2.3.2.1 不同季節(jié)對牛胚胎移植效果的影響 |
| 2.3.2.2 不同月齡受體母牛對胚胎移植效果比較 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 全基因組選擇技術(shù)及受精能力檢測在奶牛育種中應(yīng)用效果的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 試劑 |
| 3.2.2 儀器設(shè)備 |
| 3.2.3 實驗方法 |
| 3.2.3.1 試劑的配制 |
| 3.2.3.2 青年種公牛生長發(fā)育測定 |
| 3.2.3.3 全基因組檢測 |
| 3.2.3.4 DHI測定方法 |
| 3.2.4 實驗數(shù)據(jù)處理 |
| 3.3 實驗結(jié)果 |
| 3.3.1 種公牛全基因組檢測及生長發(fā)育研究 |
| 3.3.1.1 青年種公牛生長發(fā)育指標(biāo)分析 |
| 3.3.1.2 青年種公牛全基因組檢測及遺傳評估 |
| 3.3.2 核心種母牛全基因組檢測及其生產(chǎn)性能研究 |
| 3.3.3 種公牛精液AI受胎率與IVF受精率相關(guān)性研究 |
| 3.3.3.1 常規(guī)冷凍精液IVF受精率與AI受胎率的相關(guān)性分析 |
| 3.3.3.2 性控冷凍精液IVF受精率與AI受胎率的相關(guān)性分析 |
| 3.3.3.3 常規(guī)與性控冷凍精液AI受胎率與參配奶牛胎次的影響 |
| 3.3.3.4 常規(guī)和性控冷凍精液IVF受精率與AI受胎率的相關(guān)性分析 |
| 3.4 討論 |
| 第四章 添加異種動物精液及抗氧化劑對奶牛性控冷凍精液生產(chǎn)效率和品質(zhì)的影響 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 實驗材料 |
| 4.2.1.1 藥品試劑及耗材 |
| 4.2.1.2 器材設(shè)備 |
| 4.2.2 實驗方法 |
| 4.2.2.1 原精的準(zhǔn)備 |
| 4.2.2.2 染色處理 |
| 4.2.2.3 精子分離操作 |
| 4.2.2.4 精子分離平衡和冷凍保存 |
| 4.2.2.5 產(chǎn)品質(zhì)量檢測 |
| 4.2.2.6 輸精時精液處理 |
| 4.2.3 實驗數(shù)據(jù)處理 |
| 4.3 實驗結(jié)果 |
| 4.3.1 添加異種動物精液對奶牛性控冷凍精液生產(chǎn)效率及品質(zhì)影響 |
| 4.3.1.1 山羊、鹿和綿羊異種精子對牛精子輔助受精推流作用效果比較 |
| 4.3.1.2 奶牛高效性控冷凍精液新產(chǎn)品與常規(guī)性控凍精受胎率及性別比例研究 |
| 4.3.2 添加抗氧化劑對奶牛性控凍精品質(zhì)的影響 |
| 4.3.2.1 添加V_E對奶牛性控冷凍精液品質(zhì)的影響 |
| 4.3.2.2 添加SOD對奶牛性控冷凍精液品質(zhì)的影響 |
| 4.3.2.3 添加CAT對奶牛性控冷凍精液品質(zhì)的影響 |
| 4.3.3 奶牛性控冷凍精液關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)與國內(nèi)外育種同行企業(yè)比較 |
| 4.4 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀博士期間發(fā)表的論文 |
（2）綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚階段轉(zhuǎn)錄組研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 縮略詞表 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 早期胚胎基因表達(dá) |
| 1.1.1 早期胚胎母源基因表達(dá) |
| 1.1.2 早期胚胎DNA甲基化基因表達(dá) |
| 1.1.3 早期胚胎發(fā)育阻滯 |
| 1.2 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組技術(shù) |
| 1.2.1 單細(xì)胞RNA-Seq技術(shù) |
| 1.2.2 單細(xì)胞RNA-Seq技術(shù)在早期胚胎中的應(yīng)用 |
| 1.3 綿羊體外胚胎的生產(chǎn) |
| 1.3.1 卵母細(xì)胞質(zhì)量對綿羊體外胚胎培養(yǎng)的影響 |
| 1.3.2 促性腺激素對綿羊體外胚胎培養(yǎng)的影響 |
| 1.4 研究目的意義 |
| 1.5 技術(shù)路線 |
| 第2章 促黃體素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟及卵裂的影響 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 試驗材料 |
| 2.1.2 主要試劑配制 |
| 2.1.3 試驗方法 |
| 2.1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 不同濃度LH對 COCs成熟率的影響 |
| 2.2.2 不同濃度LH對卵裂率的影響 |
| 2.2.3 不同濃度LH對桑葚胚率的影響 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第3章 Smart-Seq2 技術(shù)構(gòu)建綿羊單個胚胎測序文庫 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 主要試劑和儀器 |
| 3.1.2 試驗設(shè)計 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 PicoPure?RNA Isolation Kit提取RNA質(zhì)量檢測 |
| 3.2.2 單細(xì)胞裂解液獲取RNA經(jīng) Smart-Seq2 擴(kuò)增產(chǎn)物質(zhì)量檢測 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第4章 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚差異表達(dá)基因篩選及功能注釋研究 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 試驗材料 |
| 4.1.2 試驗方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 綿羊8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)質(zhì)量分析 |
| 4.2.2 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚基因表達(dá)水平分析 |
| 4.2.3 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚部分基因表達(dá)量分析 |
| 4.2.4 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚差異表達(dá)基因篩選 |
| 4.2.5 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚差異表達(dá)基因GO富集分析 |
| 4.2.6 綿羊IVF8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚差異基因KEGG通路分析 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 差異表達(dá)基因及GO功能分析 |
| 4.3.2 早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因分析 |
| 4.3.3 KEGG通路分析 |
| 4.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（3）Myostatin基因敲低克隆綿羊的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 緒論 |
| 1.1 肌肉生長抑制素(Myostatin,MSTN) |
| 1.1.1 MSTN基因的發(fā)現(xiàn) |
| 1.1.2 MSTN基因和蛋白結(jié)構(gòu) |
| 1.1.3 MSTN基因的表達(dá) |
| 1.1.4 MSTN的作用機(jī)制 |
| 1.1.5 MSTN的表達(dá)調(diào)控機(jī)制 |
| 1.1.6 MSTN基因的應(yīng)用前景 |
| 1.2 RNA干涉 |
| 1.2.1 RNA干涉現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn) |
| 1.2.2 RNA干涉的作用機(jī)制 |
| 1.2.3 RNA干涉的作用特點 |
| 1.2.4 siRNA和shRNA技術(shù)優(yōu)缺點 |
| 1.2.5 哺乳動物的RNA干涉 |
| 1.2.6 RNA干涉的應(yīng)用前景 |
| 1.3 卵母細(xì)胞的體外成熟 |
| 1.3.1 卵母細(xì)胞的成熟 |
| 1.3.2 卵母細(xì)胞的成熟調(diào)控機(jī)制 |
| 1.3.3 卵母細(xì)胞成熟的特征 |
| 1.3.4 卵母細(xì)胞成熟的影響因素 |
| 1.4 哺乳動物細(xì)胞核移植 |
| 1.4.1 哺乳動物胚胎細(xì)胞核移植研究進(jìn)展 |
| 1.4.2 哺乳動物胚胎干細(xì)胞核移植研究進(jìn)展 |
| 1.4.3 哺乳動物體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展 |
| 1.4.4 哺乳動物轉(zhuǎn)基因細(xì)胞核移植研究進(jìn)展 |
| 1.4.5 影響細(xì)胞核移植結(jié)果的因素 |
| 1.4.6 核移植存在的問題 |
| 1.5 CRISPR/Cas9 |
| 1.5.1 CRISPR/Cas9的發(fā)現(xiàn) |
| 1.5.2 Cas9蛋白的結(jié)構(gòu) |
| 1.5.3 CRISPR/Cas9的作用機(jī)制 |
| 1.5.4 CRISPR/Cas9面臨的問題和挑戰(zhàn) |
| 1.6 研究的目的與意義 |
| 2 綿羊Myostatin基因RNA干涉載體構(gòu)建與活性分析 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實驗動物、細(xì)胞和菌株 |
| 2.1.2 實驗載體信息 |
| 2.1.3 藥品和試劑 |
| 2.1.4 溶液的配制 |
| 2.1.5 主要儀器設(shè)備 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 綿羊Myostatin基因克隆與序列分析 |
| 2.2.2 綿羊Myostatin真核表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 2.2.3 綿羊Myostatin基因RNA干涉載體的構(gòu)建 |
| 2.2.4 293GP細(xì)胞的復(fù)蘇和傳代培養(yǎng) |
| 2.2.5 綿羊Myostatin基因RNA干涉載體效率檢測 |
| 2.2.6 綿羊Myostatin基因RNA干涉載體的顯微注射 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 綿羊Myostatin基因的克隆與序列分析 |
| 2.3.2 綿羊Myostatin基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 2.3.3 綿羊Myostatin基因RNA干涉載體測序 |
| 2.3.4 293GP細(xì)胞復(fù)蘇傳代與轉(zhuǎn)染 |
| 2.3.5 RNA干涉效率結(jié)果與分析 |
| 2.3.6 RNA干涉載體表達(dá)活性分析 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 3 綿羊Myostatin基因敲低成纖維細(xì)胞系的建立 |
| 3.1 實驗材料 |
| 3.1.1 實驗動物 |
| 3.1.2 主要藥品和試劑 |
| 3.1.3 溶液配制 |
| 3.1.4 主要儀器設(shè)備 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.2.1 RNA干涉載體的線性化 |
| 3.2.2 綿羊皮膚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng) |
| 3.2.3 G418濃度的篩選 |
| 3.2.4 綿羊皮膚成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)染及篩選 |
| 3.2.5 綿羊MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的鑒定 |
| 3.2.6 綿羊MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的冷凍保存 |
| 3.2.7 綿羊MSTN敲低轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的冷凍復(fù)蘇 |
| 3.3 實驗結(jié)果 |
| 3.3.1 綿羊皮膚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng) |
| 3.3.2 最適G418濃度的篩選 |
| 3.3.3 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的生物學(xué)特征 |
| 3.3.4 轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞的PCR鑒定 |
| 3.3.5 冷凍復(fù)蘇的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的生物學(xué)特征 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 4 綿羊Myostatin基因敲低細(xì)胞核移植 |
| 4.1 實驗材料 |
| 4.1.1 實驗動物 |
| 4.1.2 藥品試劑 |
| 4.1.3 溶液配制 |
| 4.1.4 儀器設(shè)備 |
| 4.2 實驗方法 |
| 4.2.1 綿羊卵母細(xì)胞的獲取 |
| 4.2.2 綿羊卵母細(xì)胞的體外成熟 |
| 4.2.3 綿羊成熟卵母細(xì)胞的孤雌激活 |
| 4.2.4 綿羊皮膚成纖維細(xì)胞的復(fù)蘇 |
| 4.2.5 顯微操作前的實驗準(zhǔn)備 |
| 4.2.6 核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備 |
| 4.2.7 核受體卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備 |
| 4.2.8 卵母細(xì)胞的去核和注核 |
| 4.2.9 重構(gòu)胚的融合與激活 |
| 4.2.10 重構(gòu)胚的體外培養(yǎng) |
| 4.2.11 轉(zhuǎn)基因胚胎的分子鑒定 |
| 4.2.12 轉(zhuǎn)基因胚胎的移植 |
| 4.2.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.3.1 卵巢的保存和運(yùn)輸對綿羊卵母細(xì)胞成熟的影響 |
| 4.3.2 綿羊卵母細(xì)胞的采集方法和分級對卵成熟的影響 |
| 4.3.3 卵密度和不同成熟液對綿羊卵母細(xì)胞成熟的影響 |
| 4.3.4 綿羊卵母細(xì)胞成熟時間對成熟和去核的影響 |
| 4.3.5 不同的激活方法對綿羊卵母細(xì)胞孤雌激活的影響 |
| 4.3.6 供體細(xì)胞修飾和處理對綿羊重構(gòu)胚發(fā)育的影響 |
| 4.3.7 綿羊重構(gòu)胚融合方式對核移植胚胎發(fā)育的影響 |
| 4.3.8 重構(gòu)胚激活前培養(yǎng)時間對綿羊重構(gòu)胚發(fā)育的影響 |
| 4.3.9 不同培養(yǎng)液對綿羊核移植重構(gòu)胚發(fā)育的影響 |
| 4.3.10 轉(zhuǎn)基因重構(gòu)胚的獲得和PCR鑒定 |
| 4.3.11 胚胎移植和流產(chǎn)胎兒鑒定 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 卵巢的保存和運(yùn)輸 |
| 4.4.2 卵母細(xì)胞的采集、分級和培養(yǎng) |
| 4.4.3 供體細(xì)胞的遺傳修飾和處理 |
| 4.4.4 重構(gòu)胚的融合、激活和培養(yǎng) |
| 4.4.5 轉(zhuǎn)基因動物的生產(chǎn) |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 5 肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白打靶胚胎的獲得 |
| 5.1 實驗材料 |
| 5.1.1 實驗動物和菌株 |
| 5.1.2 實驗載體信息 |
| 5.1.3 藥品和試劑 |
| 5.1.4 溶液的配制 |
| 5.1.5 主要儀器設(shè)備 |
| 5.2 實驗方法 |
| 5.2.1 小鼠Rosa26基因sgRNA的設(shè)計與獲得 |
| 5.2.2 Rosa26基因sgRNA體外編輯效率檢測 |
| 5.2.3 肌肉特異性小鼠Rosa26同源打靶載體的構(gòu)建 |
| 5.2.4 小鼠胚胎的顯微注射 |
| 5.2.5 注射后囊胚的基因分型和檢測 |
| 5.2.6 胚胎移植和基因分型檢測 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.3.1 sgRNA獲得與體外編輯效率檢測 |
| 5.3.2 肌肉特異表達(dá)同源打靶載體的構(gòu)建 |
| 5.3.3 小鼠Rosa26基因編輯胚胎的獲得 |
| 5.3.4 Rosa26基因編輯小鼠的獲得 |
| 5.3.5 肌肉特異表達(dá)Cas9蛋白小鼠胚胎的獲得 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 本章小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 致謝 |
（4）不同因素對綿羊體外胚胎生產(chǎn)的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語表 |
| 1 引言 |
| 1.1 研究目的及意義 |
| 1.2 卵母細(xì)胞的體外成熟 |
| 1.2.1 卵母細(xì)胞的發(fā)育成熟過程 |
| 1.2.2 影響卵母細(xì)胞體外成熟的因素 |
| 1.3 綿羊精液的保存和獲能 |
| 1.3.1 精液稀釋 |
| 1.3.2 精液的保存方法 |
| 1.3.3 精子獲能 |
| 1.4 褪黑素對動物繁殖的作用 |
| 1.4.1 褪黑素受體 |
| 1.4.2 褪黑素的生理作用 |
| 1.4.3 褪黑素對卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 1.4.4 褪黑素對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 2 褪黑素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 主要藥品與試劑 |
| 2.1.2 主要儀器 |
| 2.1.3 主要溶液的配制 |
| 2.2 實驗方法及設(shè)計 |
| 2.2.1 實驗方法 |
| 2.2.2 試驗設(shè)計 |
| 2.3 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 2.4 試驗結(jié)果 |
| 2.5 討論 |
| 3 精液的不同處理方法對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 3.1 實驗材料 |
| 3.1.1 藥品與試劑 |
| 3.1.2 主要儀器 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 |
| 3.2 實驗方法及設(shè)計 |
| 3.2.1 實驗方法 |
| 3.2.2 試驗設(shè)計 |
| 3.3 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 3.4 試驗結(jié)果 |
| 3.5 討論 |
| 4 褪黑素對綿羊早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 4.1 實驗材料 |
| 4.1.1 主要藥品與試劑 |
| 4.1.2 主要儀器及耗材 |
| 4.1.3 主要溶液的配制 |
| 4.2 實驗方法及設(shè)計 |
| 4.2.1 實驗方法 |
| 4.2.2 試驗設(shè)計 |
| 4.3 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 4.4 試驗結(jié)果 |
| 4.5 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介 |
（5）IGF-I和GSH對不同季節(jié)綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 精液冷凍保存的機(jī)理及影響因素 |
| 1.3 季節(jié)綿羊凍精的研究現(xiàn)狀 |
| 1.4 冷凍稀釋液的研究進(jìn)展 |
| 1.5 研究的目的意義 |
| 第2章 不同季節(jié)對綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量的影響 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.3 實驗結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 第3章 IGF-I對不同季節(jié)綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量的影響 |
| 3.1 實驗材料 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.3 實驗結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 第4章 GSH對不同季節(jié)綿羊細(xì)管凍質(zhì)量的影響 |
| 4.1 實驗材料 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.3 實驗結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 5.1 實驗結(jié)論 |
| 5.2 創(chuàng)新 |
| 5.3 展望 |
| 附錄 主要試劑配制 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（6）影響綿羊卵母細(xì)胞體外成熟因素研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 季節(jié)因素和綿羊年齡 |
| 1.1 季節(jié)因素 |
| 1.2 綿羊年齡 |
| 2 卵母細(xì)胞來源 |
| 2.1 卵巢的貯存時間和溫度 |
| 2.2 卵母細(xì)胞的采集方法 |
| 2.3 卵泡的大小 |
| 2.4 細(xì)胞的類型和形態(tài) |
| 3 培養(yǎng)方法和條件 |
| 4 成熟培養(yǎng)液及其添加成分 |
| 4.1 血清 |
| 4.2 激素 |
| 4.3 卵泡液 |
| 4.4 抗氧化物質(zhì) |
| 4.5 生長因子 |
| 4.5.1 上皮細(xì)胞生長因子 |
| 4.5.2 轉(zhuǎn)化生長因子 |
| 4.5.3 胰島素類生長因子 (IGF-1和IGF-II) |
| 4.5.4 血管內(nèi)皮生長因子 |
| 5 結(jié)論 |
（8）羊卵母細(xì)胞體外成熟影響因素（論文提綱范文）
| 1 激素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2 生長因子對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 3 年齡、采卵方法對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 4 季節(jié)對綿羊卵母細(xì)胞采集和體外成熟的影響 |
| 5 卵泡直徑大小對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
（9）重離子輻射對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟、受精及發(fā)育的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 縮略詞表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 哺乳動物卵母細(xì)胞體外成熟研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 卵母細(xì)胞體外成熟的研究現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 卵母細(xì)胞采集方法 |
| 1.1.3 卵母細(xì)胞體外成熟的影響因素 |
| 1.1.3.1 培養(yǎng)條件 |
| 1.1.3.2 培養(yǎng)基 |
| 1.2 哺乳動物體外受精的研究進(jìn)展 |
| 1.2.1 研究概況 |
| 1.2.2 主要影響因素 |
| 1.3 哺乳動物早期胚胎體外培養(yǎng)最新研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 概況 |
| 1.3.2 主要影響物質(zhì) |
| 1.3.2.1 能量 |
| 1.3.2.2 氨基酸 |
| 1.3.2.3 蛋白質(zhì) |
| 1.3.2.4 細(xì)胞因子與生長因子 |
| 1.3.2.5 抗氧化物質(zhì) |
| 1.4 輻射對哺乳動物生殖細(xì)胞及早期胚胎影響的研究進(jìn)展 |
| 1.4.1 輻照的特點與機(jī)理 |
| 1.4.2 輻照在生物育種上的研究現(xiàn)狀 |
| 1.4.2.1 輻射育種在植物上的應(yīng)用 |
| 1.4.2.2 輻射在哺乳動物生殖細(xì)胞及早期胚胎方面的研究 |
| 1.5 小結(jié) |
| 第二章 綿羊卵母細(xì)胞體外成熟試驗 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.1.1 試驗材料 |
| 2.1.1.2 主要藥品與試劑 |
| 2.1.1.3 主要儀器設(shè)備 |
| 2.1.2 綿羊卵巢的采集及運(yùn)輸 |
| 2.1.3 卵母細(xì)胞的獲取及體外培養(yǎng) |
| 2.1.4 卵母細(xì)胞體外成熟效果的觀察 |
| 2.1.5 試驗設(shè)計 |
| 2.1.5.1 不同F(xiàn)SH 與LH 濃度配比對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.1.5.2 丙酮酸鈉濃度對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.1.5.3 重離子束輻照處理 |
| 2.1.6 試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 不同濃度FSH 與LH 的配比對卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.2.2 不同濃度的丙酮酸鈉對卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.2.3 重離子束輻照對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 不同濃度的FSH 與LH 配比對卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.3.2 不同濃度的丙酮酸鈉對卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 2.3.3 重離子束輻照對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟的影響 |
| 第三章 綿羊卵母細(xì)胞體外受精試驗 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.1.1 試驗材料 |
| 3.1.1.2 主要藥品與試劑 |
| 3.1.1.3 主要儀器設(shè)備 |
| 3.1.1.4 主要操作液配方 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.2.1 顆粒細(xì)胞的制備 |
| 3.1.2.2 體外受精 |
| 3.1.3 試驗設(shè)計 |
| 3.1.3.1 冷凍精液對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.1.3.2 重離子輻射綿羊精子細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.1.3.3 重離子輻射綿羊卵母細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.1.4 試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 冷凍精液對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.2.2 重離子輻射綿羊精子細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.2.3 重離子輻射綿羊卵母細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 冷凍精液對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.3.2 重離子輻射綿羊精子細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.3.3 重離子輻射綿羊卵母細(xì)胞對早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 導(dǎo)師簡介 |
| 個人簡介 |
（10）牛羊體外受精技術(shù)條件優(yōu)化和牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞 |
| 前言 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 體外受精技術(shù)的研究進(jìn)展 |
| 1. 體外受精技術(shù)的研究進(jìn)展 |
| 1.1 卵母細(xì)胞的體外成熟 |
| 1.2 精子體外獲能和體外受精(IVF) |
| 1.3 早期胚胎的體外培養(yǎng) |
| 1.4 展望 |
| 第二章 牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究進(jìn)展 |
| 1. 胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究進(jìn)展 |
| 1.1 胚胎玻璃化冷凍保存的意義 |
| 1.2 胚胎冷凍保存的發(fā)展概況 |
| 1.3 胚胎玻璃化冷凍保存機(jī)理 |
| 1.4 胚胎玻璃化冷凍方法 |
| 1.5 展望 |
| 試驗研究 |
| 第三章 牛體外受精技術(shù)條件優(yōu)化的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 儀器設(shè)備 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 卵泡液的制備 |
| 1.4 卵巢與卵母細(xì)胞的采集和卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng) |
| 1.5 精子獲能處理和卵母細(xì)胞體外受精 |
| 1.6 早期胚胎體外培養(yǎng) |
| 1.7 實驗設(shè)計 |
| 1.8 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 精卵共培養(yǎng)時間對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 2.2 牛羊卵泡液對牛卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 精卵共培養(yǎng)時間對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 3.2 卵泡液對卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 4 結(jié)論 |
| 第四章 牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存的研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 試驗設(shè)計 |
| 1.4 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 冷凍保護(hù)劑對OPS法玻璃化冷凍胚胎發(fā)育率的影響 |
| 2.2 冷凍方法對體外受精胚胎發(fā)育率的影響 |
| 2.3 冷凍載體對OPS法玻璃化冷凍胚胎發(fā)育率的影響 |
| 2.4 不同發(fā)育階段牛體外受精胚胎的 OPS 法玻璃化冷凍 |
| 2.5 不同發(fā)育階段體外受精胚胎的活力檢測 |
| 3 討論 |
| 3.1 冷凍保護(hù)劑對OPS法玻璃化冷凍胚胎發(fā)育率的影響 |
| 3.2 冷凍方法對體外受精胚胎發(fā)育率的影響 |
| 3.3 冷凍載體對OPS法玻璃化冷凍胚胎發(fā)育率的影響 |
| 3.4 不同發(fā)育階段牛體外受精胚胎的OPS 法玻璃化冷凍 |
| 3.5 不同發(fā)育階段體外受精胚胎的活力檢測 |
| 4 結(jié)論 |
| 第五章 綿羊體外受精技術(shù)條件優(yōu)化的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 儀器設(shè)備 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 卵泡液的制備 |
| 1.4 卵巢與卵母細(xì)胞采集和卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng) |
| 1.5 精子獲能處理和卵母細(xì)胞的體外受精 |
| 1.6 早期胚胎的體外培養(yǎng) |
| 1.7 實驗設(shè)計 |
| 1.8 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 牛羊卵泡液對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 2.2 精卵共培養(yǎng)時間對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 2.3 精卵共培養(yǎng)液量對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 2.4 顆粒細(xì)胞層數(shù)對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 2.5 季節(jié)對卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 卵泡液對卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 3.2 精卵共培養(yǎng)時間對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 3.3 精卵共培養(yǎng)液量對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 3.4 顆粒細(xì)胞層數(shù)對卵母細(xì)胞體外受精的影響 |
| 3.5 季節(jié)對卵母細(xì)胞體外成熟和體外受精的影響 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附圖 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
| 石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表 |
四、季節(jié)效應(yīng)對綿羊體外受精的影響（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]奶牛種公牛培育及性別控制冷凍精液生產(chǎn)效率影響因素的研究[D]. 孫偉. 內(nèi)蒙古大學(xué), 2021(10)
- [2]綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚階段轉(zhuǎn)錄組研究[D]. 李娜. 塔里木大學(xué), 2020(12)
- [3]Myostatin基因敲低克隆綿羊的研究[D]. 李昊. 東北林業(yè)大學(xué), 2019(01)
- [4]不同因素對綿羊體外胚胎生產(chǎn)的影響[D]. 呂和. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué), 2016(02)
- [5]IGF-I和GSH對不同季節(jié)綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量的影響[D]. 唐淑紅. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015(06)
- [6]影響綿羊卵母細(xì)胞體外成熟因素研究進(jìn)展[J]. 陸會寧,齊燕姣. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013(09)
- [7]羊卵母細(xì)胞體外成熟影響因素[A]. 任立坤,劉月琴,張英杰,楊少華,王紅娜. 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會2012年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集, 2012
- [8]羊卵母細(xì)胞體外成熟影響因素[J]. 任立坤,劉月琴,張英杰,楊少華,王紅娜. 中國草食動物科學(xué), 2012(S1)
- [9]重離子輻射對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟、受精及發(fā)育的影響[D]. 常衛(wèi)華. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011(04)
- [10]牛羊體外受精技術(shù)條件優(yōu)化和牛體外受精胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)的研究[D]. 段明軍. 石河子大學(xué), 2008(01)
標(biāo)簽：體外受精論文; 卵母細(xì)胞論文; 精子獲能論文; 冷凍胚胎論文; 冷凍精子論文;