一、巴布膏對豚鼠哮喘模型基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制物水平的影響（論文文獻綜述）
黃躍平[1]（2021）在《不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE-/-小鼠炎癥免疫平衡的影響》文中提出背景動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）作為心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎(chǔ),是一種以粥樣斑塊為顯著特征的慢性炎癥疾病。研究發(fā)現(xiàn),AS斑塊中的大量CD4+T細(xì)胞受局部炎癥微環(huán)境激活信號誘導(dǎo)后,選擇性地向不同的輔助性T細(xì)胞（T helper,Th）亞群分化,即Th1、Th2、Th17和Tregs細(xì)胞譜系,并通過分泌不同細(xì)胞因子參與AS的炎癥反應(yīng),進而影響斑塊穩(wěn)定性。此外,基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMPs）與金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs）之間的平衡可直接影響AS斑塊穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)Th1、Th17、MMPs 比例升高時,可導(dǎo)致斑塊穩(wěn)定性下降,最終因斑塊破裂形成血栓,引發(fā)血管缺血性病變。艾燃燒生成物（moxa combustion products,MCP）包括了揮發(fā)油、輕組分（氣態(tài)物質(zhì)）及重組分（液態(tài)、顆粒物質(zhì)）等,是艾灸起效的作用機制之一。艾煙作為MCP的主要存在形式,前期研究表明,艾灸與艾煙可通過調(diào)節(jié)AS模型小鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂、減輕炎癥反應(yīng)等途徑,起到防治AS的作用。目的觀察不同處理方式下MCP（艾煙、濾過艾煙、艾絨加熱、艾葉精油）對AS模型小鼠主動脈及肝臟病理變化、炎性因子水平含量、斑塊穩(wěn)定性的影響,探討MCP干預(yù)AS的作用機制,初步界定MCP中活性物質(zhì)的存在形式和范圍。方法40只雄性8周齡ApoE-/-小鼠隨機均分為5組:模型組、艾煙組、濾過艾煙組、艾絨加熱組、艾葉精油組。8只同齡雄性C57BL/6小鼠為空白組。各組小鼠每日抓取固定,空白組與模型組小鼠不進行干預(yù);艾煙組小鼠暴露于2%濃度（以染毒柜遮光率度量）的艾煙環(huán)境,每次約燃燒1.5 g艾絨;濾過艾煙組小鼠暴露于1.5g艾絨點燃濾過后的艾煙環(huán)境;艾絨加熱組小鼠暴露于1.5 g艾絨在150℃加熱條件下的環(huán)境中;艾葉精油組小鼠暴露于3.75 uL艾葉精油（1.5 g艾絨所含揮發(fā)油含量折合）加入16mL蒸餾水霧化形成的環(huán)境。所有干預(yù)均在染毒柜中進行,20min/日,6日/周,連續(xù)干預(yù)14周。采用HE染色和油紅“O”染色觀察胸主動脈病理切片,HE染色觀察肝臟病理切片。Elisa法測定血清中 INF-γ、IL-10、IL-17、TGF-β1、MMP-9、TIMP-1 的含量。結(jié)果1 ApoE-/-小鼠胸主動脈與肝臟的病理變化胸主動脈病理變化:空白組未見明顯異常,模型組的胸主動脈部位出現(xiàn)明顯AS斑塊病變,艾煙組、濾過艾煙組、艾絨加熱組較模型組有不同程度改善,艾葉精油組與模型組比較未見明顯改善。肝臟病理變化:空白組未見明顯異常,模型組的肝細(xì)胞索及肝竇排列紊亂,且肝細(xì)胞明顯變性腫脹。艾煙組、濾過艾煙組、艾絨加熱組肝細(xì)胞索排列較模型組規(guī)則,艾葉精油組與模型組比較未見明顯改善。2炎性因子水平含量與空白組比較,模型組血清INF-γ、IL-17含量顯著升高（P<0.01,P<0.01）,血清 IL-10、TGF-β1 顯著降低（P<0.01,P<0.01）,INF-γ/IL-10 比值、IL-17/TGF-β1 比值顯著升高（P<0.01,P<0.01）。與模型組比較,艾煙組血清IL-10、TGF-β1含量顯著升高（P<0.01,P<0.05）,血清 INF-γ、IL-17 含量及 INF-y/IL-10 比值與 IL-17/TGF-β1比值顯著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01）;濾過艾煙組血清IL-10含量顯著升高（P<0.05）,血清 INF-γ、IL-17 含量及 INF-y/IL-10 比值與 IL-17/TGF-β1 比值顯著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01）,TGF-β1含量無顯著差異（P>0.05）;艾絨加熱組血清INF-y、IL-17含量顯著降低（P<0.05,P<0.05）,IL-10、TGF-β1含量及INF-y/IL-10比值與IL-17/TGF-β1比值無顯著差異（P>0.05）;艾葉精油組血清INF-γ、IL-10、IL-17、TGF-β1 含量及 INF-y/IL-10 比值與 IL-17/TGF-β1 比值無顯著差異（P>0.05）。不同處理方式下MCP各組組間比較:各組間血清INF-γ含量比較無顯著差異（P>0.05）;艾煙組血清IL-10含量顯著高于艾絨加熱組和艾葉精油組（P<0.01,P<0.05）,其余組間比較均無顯著差異（P>0.05）;艾煙組血清INF-γ/IL-10 比值顯著低于艾絨加熱組和艾葉精油組（P<0.05,P<0.05）,其余組間比較均無顯著差異（P>0.05）;艾煙組、濾過艾煙組血清IL-17含量均顯著低于艾葉精油組（P<0.05,P<0.05）,其余組間比較無顯著差異（P>0.05）;各組間血清TGF-β1含量比較無顯著差異（P>0.05）;艾煙組、濾過艾煙組血清IL-17/TGF-β1比值均顯著低于艾葉精油組（P<0.01,P<0.01）,其余組間比較均無顯著差異（P>0.05）。3斑塊穩(wěn)定性與空白組比較,模型組血清MMP-9含量顯著升高（P<0.01）,血清TIMP-1含量、MMP-9/TIMP-1比值無顯著差異（P>0.05）。與模型組比較,艾煙組血清MMP-9含量顯著降低（P<0.01）,血清TIMP-1含量顯著升高（P<0.05）,MMP-9/TIMP-1比值顯著降低（P<0.01）;濾過艾煙組血清MMP-9含量顯著降低（P<0.05）,血清TIMP-1含量無顯著差異（P>0.05）,MMP-9/TIMP-1比值顯著降低（P<0.01）;艾絨加熱組血清MMP-9含量顯著降低（P<0.01）,血清TIMP-1含量無顯著差異（P>0.05）,MMP-9/TIMP-1比值顯著降低（P<0.05）;艾葉精油組血清MMP-9、TIMP-1含量、MMP-9/TIMP-1比值均無顯著差異（P>0.05）。不同處理方式下MCP各組組間比較:各組間血清MMP-9含量比較無顯著差異（P>0.05）;艾煙組血清TIMP-1含量顯著高于艾葉精油組（P<0.01）,其余組間比較無顯著差異（P>0.05）;艾煙組、濾過艾煙組血清MMP-9/TIMP-1比值顯著低于艾葉精油組,有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01,P<0.01）,其余組間比較無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論1 艾煙、濾過艾煙均能改善主動脈及肝臟病理,減輕炎癥反應(yīng),增強斑塊穩(wěn)定性,減緩AS的發(fā)展進程,兩者作用基本一致,提示所濾過的顆粒物對艾煙的作用影響不大。2 與艾煙組相比,艾絨加熱組以及艾葉精油組在改善主動脈及肝臟病理,減輕炎癥反應(yīng),增強斑塊穩(wěn)定性方面療效一般,提示艾絨的燃燒環(huán)節(jié)可能是艾灸發(fā)揮作用不可或缺的步驟。
龔堅[2]（2020）在《清血毒顆粒合劑經(jīng)Spred-1蛋白治療尋常型銀屑病（血熱證）機制的研究》文中提出目的:通過臨床實驗,探討銀屑病患者與健康人皮膚組織中Spred蛋白表達(dá)差異,明確Spred蛋白與銀屑病相關(guān)性;同時通過對咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠實驗,明確銀屑病中Spred-1蛋白與Ras/ERK信號通路的相關(guān)性,并基于Spred-1/Ras/ERK信號通路研究清血毒顆粒合劑治療銀屑病可能機制。方法:1.納入符合要求的15例健康對照和30例尋常型銀屑病患者,通過組織免疫熒光檢測,觀察銀屑病患者皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)及正常人表皮組織中Spred-1、Spred-2、Spred-3蛋白表達(dá)定位和豐度,同時觀察兩組樣本之間蛋白表達(dá)的差異。2.BALB/c雄性小鼠隨機分為正常組、模型組、過表達(dá)Ⅰ、Ⅱ組、空載病毒Ⅰ、Ⅱ組,每組8只。過表達(dá)Ⅰ、Ⅱ組、空載病毒Ⅰ、Ⅱ組小鼠分別尾靜脈注射對應(yīng)病毒,模型組和正常組注射生理鹽水。2天后,模型組、空載病毒Ⅰ組、過表達(dá)Ⅰ組小鼠采用IMQ造模,過表達(dá)Ⅱ組、空載病毒Ⅱ組、正常組小鼠予以凡士林外搽對照,連續(xù)7天,第8天后處死取樣。實驗觀察小鼠PASI評分變化;并對樣本進行組織病理觀察Spred-1過表達(dá)對銀屑病樣小鼠模型皮損組織病理影響;同時進行Western blot和RT-PCR實驗觀察銀屑病樣小鼠皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)Spred-1蛋白及皮損區(qū)Ras/ERK通路相關(guān)蛋白表達(dá)。3.雄性BALB/c小鼠隨機分為清血毒顆粒組、復(fù)方青黛膠囊組、模型組、正常組,每組8只。前三組采用IMQ造模,正常組小鼠予以凡士林外搽對照;搽藥2h后,模型組、正常組用蒸餾水灌胃,清血毒顆粒組、復(fù)方青黛膠囊組用相應(yīng)藥物灌胃;實驗連續(xù)進行7天后,第8天后處死取樣。實驗過程觀察小鼠PASI評分變化;并對樣本進行組織病理觀察清血毒顆粒合劑對銀屑病樣小鼠模型皮損組織病理影響;同時進行Western blot及RT-PCR實驗觀察清血毒顆粒合劑對銀屑病樣小鼠皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)Spred-1/Ras/ERK通路相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.在臨床實驗部分,Spred-1蛋白在正常人的表皮層全層及真皮層均有表達(dá),但主要集中在基底層、棘層和顆粒層下部,真皮層、角質(zhì)層和顆粒層上部表達(dá)低。Spred-2蛋白表達(dá)于表皮層全層,除基底層、真皮層表達(dá)較弱外,在其他部位表達(dá)強。Spred-3蛋白在棘層、顆粒層下部及角質(zhì)層均有表達(dá),在基底層及真皮層無表達(dá)。同時與正常人相比Spred-1、Spred-2、Spred-3在銀屑病皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)中表達(dá)位置一致,但平均熒光密度值下降（P<0.05）。2.在動物實驗中,我們首先驗證了Spred-1過表達(dá)腺病毒。通過Western blot和RT-PCR實驗,我們發(fā)現(xiàn)在過表達(dá)Ⅱ組中Spred-1蛋白及m RNA表達(dá)升高,與空載病毒Ⅱ組和正常組相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）,說明Spred-1過表達(dá)腺病毒能在體內(nèi)正常表達(dá);同時空載病毒Ⅱ組與正常組相比Spred-1蛋白及m RNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;以上結(jié)果表明Spred-1過表達(dá)腺病毒尾靜脈注射后能在小鼠體內(nèi)正常過表達(dá),而空載病毒對小鼠無影響。同時三組小鼠實驗過程未見皮損產(chǎn)生,皮膚病理表現(xiàn)相似,且平均表皮厚度組間比較未見統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,說明Spred-1過表達(dá)腺病毒及空載病毒不能產(chǎn)生自發(fā)性皮損且對正常皮膚病理無明顯影響。3.在Spred-1過表達(dá)實驗中,模型組小鼠從實驗第4-5天可見少許紅斑、鱗屑,隨后紅斑增多、皮損浸潤增厚、鱗屑成層,最嚴(yán)重癥狀出現(xiàn)時間約在實驗第7-9天之中;與模型組相比,空載病毒Ⅰ組與模型組皮損嚴(yán)重程度、皮疹變化時間及皮膚病理表現(xiàn)相似,兩組PASI評分相比無顯著差異（P>0.05）,皮膚平均表皮厚度及病理Baker評分兩組相比亦無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,說明空載病毒體內(nèi)注射后對IMQ誘導(dǎo)的銀屑病皮損、病理無影響;而過表達(dá)Ⅰ組小鼠皮損嚴(yán)重程度整體輕于模型組及空載病毒Ⅰ組,PASI評分與后兩組相比有顯著差異（P<0.05）,平均表皮厚度及病理Baker評分較模型組及空載病毒Ⅰ組顯著降低（P<0.05）,說明Spred-1過表達(dá)在一定程度上能減輕IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣皮損。4.在Spred-1蛋白過表達(dá)實驗中,Spred-1蛋白過表達(dá)后,過表達(dá)Ⅰ組p-Ras、p-Raf1、p-ERK1/2、VEGF蛋白及Ras、Raf1、ERK1/2、VEGF的m RNA表達(dá)與模型組及空載病毒Ⅰ組相比顯著下降（P<0.001）,說明Spred-1蛋白表達(dá)升高后抑制Ras/ERK通路相關(guān)蛋白及m RNA表達(dá),并且能緩解銀屑病樣小鼠癥狀;而空載病毒Ⅰ組與模型組相比,兩組Ras、p-Ras、Raf1、p-Raf1、ERK1/2、p-ERK1/2、VEGF的蛋白及m RNA表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,說明空載病毒對Ras/ERK通路m RNA表達(dá)無影響。5.在中藥干預(yù)實驗中,與模型組相比,清血毒顆粒組、復(fù)方青黛膠囊組紅斑、浸潤肥厚等癥狀程度更輕,PASI評分減低（P<0.05）,皮膚平均表皮厚度及病理Baker評分下降明顯（P<0.05）,說明清血毒顆粒合劑和復(fù)方青黛膠囊對IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠有一定的治療功效。對比清血毒顆粒組與復(fù)方青黛膠囊組,我們發(fā)現(xiàn)清血毒顆粒組小鼠紅斑、浸潤、鱗屑等癥狀消退速度較復(fù)方青黛膠囊更快,PASI評分明顯低于復(fù)方青黛膠囊組（P<0.05）,皮膚平均表皮厚度及病理Baker評分兩組亦有顯著差異（P<0.05）,以上結(jié)果提示清血毒顆粒合劑對銀屑病樣小鼠皮損改善作用優(yōu)于復(fù)方青黛膠囊。6.在中藥干預(yù)實驗中,我們應(yīng)用清血毒顆粒合劑治療銀屑病樣小鼠,發(fā)現(xiàn)治療后銀屑病樣小鼠皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)中Spred-1 m RNA表達(dá)升高,而皮損區(qū)p-Ras、p-Raf1、p-ERK1/2、VEGF蛋白及Ras、Raf1、ERK1/2、VEGF的m RNA表達(dá)降低（P<0.001）,說明清血毒顆粒合劑能夠通過干預(yù)Spred-1/Ras/ERK通路達(dá)到治療銀屑病的目的。復(fù)方青黛膠囊治療IMQ誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠后三區(qū)域中Spred-1 m RNA變化無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,而皮損區(qū)p-Ras、p-Raf1、p-ERK1/2、VEGF蛋白及Ras、Raf1、ERK1/2、VEGF的m RNA表達(dá)降低（P<0.001）,說明復(fù)方青黛膠囊可能是通過其他途徑調(diào)節(jié)Ras/ERK通路。結(jié)論:1.Spred-1、Spred-2、Spred-3蛋白表達(dá)于正常人表皮全層,但在各層表達(dá)具有細(xì)微差別;同時,三種蛋白在銀屑病皮損區(qū)、近皮損區(qū)、非皮損區(qū)表達(dá)定位與正常人表達(dá)一致,但平均熒光密度值降低。2.在銀屑病樣小鼠皮膚組織中,Spred-1蛋白表達(dá)降低,Ras/ERK通路相關(guān)蛋白及m RNA表達(dá)升高;Spred-1過表達(dá)后能夠抑制Ras/ERK通路相關(guān)蛋白表達(dá),緩解銀屑病小鼠癥狀。3.通過提高Spred-1蛋白表達(dá),抑制Ras/ERK通路相關(guān)蛋白表達(dá)可能是清血毒顆粒合劑能治療銀屑病的機制之一。
嚴(yán)嘯天[3]（2019）在《化濁生新膏在鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的療效觀察及對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、7、9表達(dá)影響的研究》文中提出研究目的:本研究對化濁生新膏用于慢性鼻-鼻竇炎鼻內(nèi)鏡術(shù)后的患者進行臨床療效觀察,并在術(shù)中術(shù)后鉗取部分鼻腔粘膜進行實驗室指標(biāo)檢測。探索化濁生新膏用于慢性鼻竇炎術(shù)后上皮化治療的優(yōu)越性。為臨床應(yīng)用和進步研究此油劑打下基礎(chǔ)。研究方法:選取2016年9月至2018年5月于我院耳鼻喉科住院CRS確診且行功能性鼻內(nèi)鏡手術(shù)患者40例。按照同期的原則分為兩組,將一般換藥加西藥治療設(shè)為對照組,共20例;將化濁生新膏術(shù)后填塞換藥聯(lián)合西藥治療設(shè)置為治療組,共20例。對照組患者全麻下行Messer-Klinger術(shù)式,圍手術(shù)期用藥及術(shù)后換藥采用常規(guī)處理。治療組手術(shù)術(shù)式、圍手術(shù)期全身用藥、鼻腔沖洗及換藥時間同對照組。術(shù)畢以化濁生新膏膨脹海綿填塞鼻腔,2d～3d后取出。每次換藥在術(shù)腔涂抹化濁生新膏或填塞化濁生新膏紗條。鼻內(nèi)鏡下觀察及術(shù)腔清理時間:術(shù)后4周、8周、12周?？陀^療效評定采用Lund-Kennedy評分法。在手術(shù)中選擇患者上頜竇竇口后緣粘膜組織作為取樣部位。于術(shù)后8周換藥時選取相同部位作為術(shù)后樣本。術(shù)前術(shù)后樣本行T-PCR實驗。檢測相關(guān)樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2、7、9mRNA的相對表達(dá)量。并將數(shù)據(jù)收集、整理,運用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析、比較,評價兩組患者治療的臨床療效和目的mRNA的相對表達(dá)量。研究結(jié)果:（1）組內(nèi)三個時間點治療前后療效比較分析,除術(shù)后8周總積分及術(shù)后12周鼻漏項,無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。兩組息肉項評分及總評分在三個時間點均明顯低于術(shù)前（P<0.05）?？梢缘贸鯢ESS手術(shù)對慢性鼻-鼻竇炎伴有息肉的病人療效十分明確;（2）對術(shù)前以及術(shù)后4周、8周、12周的相關(guān)項進行統(tǒng)計,并對比總分發(fā)現(xiàn)。治療組在水腫、息肉、鼻漏、疤痕及結(jié)痂等各項,以及總分項均明顯低于對照組。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（p≤0.001）;（3）兩組在術(shù)后4周水腫和鼻漏較術(shù)前評分下降。具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。提示手術(shù)器械清理,容易導(dǎo)致術(shù)腔短期的黏膜水腫和鼻漏;（4）治療組相比對照組在息肉、結(jié)痂、疤痕及總分評分項均明顯低于對照組,在手術(shù)后4至8周水腫及鼻漏評分下降趨勢較對照組明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;（5）2組在術(shù)后4周達(dá)到1及2級皆為0例（0%）,2組達(dá)到3級為20例（100%）。提示西藥治療聯(lián)合化濁生新膏在術(shù)后4周內(nèi)較對照組無顯著促上皮化進程的作用。對照組和治療組在術(shù)后8周3級上皮化比率分別為11例（55%）2例（10%）;2級上皮化比率分別為6例（30%）1例（5%）;治療組達(dá)到1級為17例（85%）,對照達(dá)到1級為3例（15%）（P<0.05）。提示化濁生新膏在術(shù)后4周至8周時間內(nèi)較西藥治療有明顯的促上皮化作用,較西藥常規(guī)換藥更早達(dá)到1級上皮化階段。兩組綜合療效均于術(shù)后第12周達(dá)到最大（P<0.05）,3級上皮化比率皆為0%,且治療組較對照組1級上皮化控制比例差距更大,較一般西藥治療及換藥術(shù)后8周變異率更大（P<0.05）。提示化濁生新膏在術(shù)后4至8周內(nèi)可發(fā)揮最大促上皮化療效,較普通換藥促上皮化進程更為明顯。（6）治療組患者術(shù)后標(biāo)本MMP2、7、9mRNA相對表達(dá)量均明顯低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。研究結(jié)論:化濁生新膏療效明確,可減少鼻內(nèi)鏡術(shù)后新生病變發(fā)生,減輕水腫、鼻漏、痂皮,減少鼻腔內(nèi)疤痕形成,抑制鼻粘膜重塑,加快上皮化,提高了FESS手術(shù)后療效。其本身氣味芬芳,未見明顯不良反應(yīng)。本次研究肯定了化濁生新膏在CRS手術(shù)后的運用,值得進一步研究。
賀前松[4]（2019）在《從哮喘氣道平滑肌增厚探討“防風(fēng)—烏梅”配伍的機制》文中認(rèn)為目的本課題圍繞哮喘過程中ASMC的病理變化,根據(jù)“驅(qū)邪利肺”、“標(biāo)本兼治”等中醫(yī)治法理論,以名醫(yī)經(jīng)驗方“過敏煎”中君臣配伍“防風(fēng)-烏梅”藥對作為干預(yù)手段,結(jié)合該領(lǐng)域研究進展,對干預(yù)前后ASMC相關(guān)指標(biāo)進行對比,探索辛散酸收配伍抑制氣道平滑肌增厚的作用機制,揭示“過敏煎”配伍的科學(xué)內(nèi)涵,以探索哮喘更有效、更具有針對性的中醫(yī)藥臨床治療方案。方法第一部分:“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠ASMC病理變化的影響及其機制研究。1、造模:將70只BALB/C小鼠隨機分為正常對照組、哮喘模型組、激素干預(yù)組、防風(fēng)組、烏梅組“防風(fēng)-烏梅”組、“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組,每組10只。以復(fù)合型OVA建立哮喘模型,模型建立后,取小鼠肺組織進行相應(yīng)處理,分別采用光學(xué)顯微鏡和透視電鏡觀察肺組織病理變化。2、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織結(jié)構(gòu)的影響:按上述方法造模成功后連續(xù)按組別用藥干預(yù)7天。防風(fēng)組、烏梅組、“防風(fēng)-烏梅”組、“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組分別于上午9時給予防風(fēng)、烏梅、“防風(fēng)-烏梅”、“防風(fēng)-烏梅”藥液灌胃,其余各組給予生理鹽水灌胃;激素干預(yù)組、“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組同時分別于下午3時給予0.02%布地奈德霧化吸入,其余各組給予生理鹽水霧化吸入。取材后,進行相應(yīng)處理,光學(xué)顯微鏡下觀察“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織病理學(xué)的影響以及小鼠支氣管平滑肌厚度的影響;透視電鏡下觀察“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)的影響。3、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織氣道重塑相關(guān)因子的影響:小鼠肺組織取材后勻漿,取上清液保存,采用ELISA法測定肺組織MMP-9、TIMP-1及炎癥因子IL-6、IL-8、VEGF、TGF-β1、TNF-α的含量。4、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織ASMC周期及表型轉(zhuǎn)化的影響:小鼠肺組織取材進行相應(yīng)處理后,采用免疫組織化學(xué)染色方法,觀察細(xì)胞周期調(diào)控蛋白（細(xì)胞周期蛋白CyclinD1與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子P27kip1）,凋亡蛋白（bcl-2、caspase-3）表達(dá)和分布;采用實時熒光定量PCR、Western-blot法檢測平滑肌中細(xì)胞周期調(diào)控蛋白（CyclinD1、P27kip1）凋亡蛋白（bcl-2、caspase-3）mRNA、蛋白表達(dá);分別采用實時熒光定量PCR、Western-blot法檢測ASMC收縮型標(biāo)志蛋白α-actin、合成型標(biāo)志蛋白OPN在平滑肌中含量,判定表型轉(zhuǎn)化情況。第二部分:“防風(fēng)-烏梅”含藥血清對PDGF誘導(dǎo)HBSMC增殖模型的影響及其機制研究。1、“防風(fēng)-烏梅”配伍含藥血清對HBSMC遷徙的影響:通過PDGF誘導(dǎo)的方式誘導(dǎo)HBSMC增殖模型;分別予大鼠灌胃防風(fēng)、烏梅、“防風(fēng)-烏梅”及生理鹽水,制備含藥血清;HBSMC增殖模型建立好后,取4代對數(shù)生長期的HBSMC,將其分為空白對照組、細(xì)胞模型組、正常大鼠血清組、正常大鼠血清細(xì)胞模型組、激素干預(yù)組、防風(fēng)血清組、烏梅血清組、“防風(fēng)-烏梅”血清組、“防風(fēng)-烏梅”血清和激素干預(yù)組對細(xì)胞給予相應(yīng)處理;采用平板遷移實驗和跨膜遷移實驗觀察HBSMC的遷移能力。2、“防風(fēng)-烏梅”配伍含藥血清對HBSMC相關(guān)細(xì)胞因子的影響:ELISA法檢測TNF-α、IL-8、MMP-9、TIMP-1的濃度及MMP-9/TIMP-1比值。結(jié)果第一部分:“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠ASMC病理變化的影響及其機制研究。1、造模:正常對照組肺組織結(jié)構(gòu)未見異常;哮喘模型組支氣管上皮結(jié)構(gòu)被破壞,氣道內(nèi)見大量脫落上皮細(xì)胞,杯狀細(xì)胞增生明顯,粘膜下及氣道周圍炎性細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞）浸潤,氣道壁及支氣管平滑肌明顯增厚;哮喘模型組肺泡II型上皮細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)不清晰,見明顯腫脹,板層小體結(jié)構(gòu)紊亂、線粒體空泡化嚴(yán)重,可見嗜酸性粒細(xì)胞顆粒。2、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織結(jié)構(gòu)的影響:與模型組相比,各藥物組上皮結(jié)構(gòu)均有改善,氣道內(nèi)可見少許脫落的上皮細(xì)胞,杯狀細(xì)胞增生減輕,粘膜下及氣道周圍炎性細(xì)胞浸潤緩解,氣道壁及支氣管平滑肌增厚減輕,以“防風(fēng)-烏梅”組和“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組改善最明顯;透視電鏡下,藥物治療后哮喘模型組肺泡II型上皮細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)不清晰、腫脹、板層小體結(jié)構(gòu)紊亂、嚴(yán)重線粒體空泡化等情況均得到明顯改善,且“防風(fēng)-烏梅”聯(lián)合用藥優(yōu)于單獨使用防風(fēng)和烏梅,同時“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組有巨噬細(xì)胞出現(xiàn),表明受損肺臟出現(xiàn)明顯的修復(fù)跡象。3、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織氣道重塑相關(guān)因子的影響:“防風(fēng)-烏梅”配伍可降低肺組織IL-6、IL-8、MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及MMP-9/TIMP-1的比值（P<0.05或P<0.01）,以“防風(fēng)-烏梅”合激素干預(yù)組最佳,“防風(fēng)-烏梅”組優(yōu)于防風(fēng)組和烏梅組。相關(guān)性分析提示IL-6、IL-8與MMP-9、TIMP-1顯著相關(guān)。4、“防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織ASMC周期及表型轉(zhuǎn)化的影響:綜合各檢測方法,結(jié)果顯示“防風(fēng)-烏梅”配伍可降低CyclinD1、bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá)（P<0.05）,升高P27kip1、caspase-3 mRNA及蛋白表達(dá)（P<0.05）;“防風(fēng)-烏梅”配伍能降低α-actin、OPN表達(dá)。第二部分:“防風(fēng)-烏梅”含藥血清對PDGF誘導(dǎo)人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC增殖模型的影響及其機制研究。1、“防風(fēng)-烏梅”配伍含藥血清對HBSMC遷徙的影響:平板遷移實驗和跨膜遷移結(jié)果表明,“防風(fēng)-烏梅”血清合激素干預(yù)組降低細(xì)胞遷移的能力要優(yōu)于其余各給藥組,“防風(fēng)-烏梅”血清組降低HBSMC的遷移能力優(yōu)于單獨的防風(fēng)血清組和烏梅血清組。2、“防風(fēng)-烏梅”配伍含藥血清對HBSMC增殖相關(guān)細(xì)胞因子的影響:ELISA法結(jié)果顯示:“防風(fēng)-烏梅”血清合激素干預(yù)組降低TNF-α、IL-8表達(dá),抑制MMP-9/TIMP-1比值的能力要優(yōu)于其余各給藥組,“防風(fēng)-烏梅”血清組降低TNF-α、IL-8表達(dá),抑制MMP-9/TIMP-1比值的能力要優(yōu)于單獨使用防風(fēng)血清組和烏梅血清組。結(jié)論1、“防風(fēng)-烏梅”“相制為用”配伍可改善哮喘氣道重塑,其機制可能與減輕支氣管平滑肌肥厚、改善氣道炎癥、降低肺組織MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及MMP-9/TIMP-1的比值,降低CyclinD1、bcl-2 mRNA及蛋白表達(dá),升高P27kip1、Caspase-3 mRNA及蛋白表達(dá),從而調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖/凋亡失衡有關(guān)。2、“防風(fēng)-烏梅”配伍能顯著抑制HBSMC遷移與表型轉(zhuǎn)換,阻滯細(xì)胞周期進程,影響氣道重塑,其機制可能通過抑制TNF-α、IL-8釋放,抑制MMP-9/TIMP-1比值有關(guān)?！胺里L(fēng)-烏梅”作為“過敏煎”的君臣藥對,其通過對哮喘發(fā)作過程中的ASMC增殖/凋亡平衡進行干預(yù),減輕氣道炎癥,從而減緩氣道平滑肌增厚,發(fā)揮其“相制為用”的作用。
閆興柱[5]（2018）在《基于全基因表達(dá)譜揭示天灸藥物白芥子散對哮喘大鼠免疫穩(wěn)態(tài)重建的分子機制研究》文中進行了進一步梳理目的本實驗在前期動物實驗已確定古方天灸藥物白芥子散穴位貼敷治療哮喘最佳配比的基礎(chǔ)上,確定應(yīng)用古方天灸藥物白芥子散進行穴位貼敷治療對哮喘大鼠的氣道炎癥有顯著地抑制作用和免疫調(diào)節(jié)作用,促使免疫功能恢復(fù)正常,即古方天灸藥物白芥子散在免疫穩(wěn)態(tài)重建中有重要作用。擬從基因角度對白芥子散在小兒哮喘的發(fā)病機制、免疫穩(wěn)態(tài)重建機制、治療機制等方面進行研究,提高哮喘的診斷準(zhǔn)確性和治療靶向性,為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)與理論支撐。方法將雄性清潔SD大鼠90只,46周齡,體重（150±20）g,按均衡隨機法（按體重分層）分為3組,分別為給藥組、模型組A組和B組（各15只）、正常組,每組實驗動物30只。第1天,給藥組、模型組分別于用新鮮配制的OVA,100mg輔以氫氧化鋁凝膠200mg及生理鹽水1ml的混懸液在大鼠兩腹股溝、后足跖,共4點做皮下注射,每點0.2ml,同時腹腔注射0.2ml,正常組不做任何處理。第15天中處死模型組A組,正常組5只大鼠,收集并保存需檢測部位的標(biāo)本,以便于確認(rèn)造模成功后動物的體內(nèi)基因表達(dá)狀態(tài),模型組B組留用作為治療對照。第1524天給藥組開始進行天灸貼敷治療,穴位貼敷前用8%硫化鈉在穴位處脫毛,將藥丸放在醫(yī)用脫敏膠貼上,分別貼于大鼠肺俞（雙）、定喘、膻中、膏肓（雙）處,每天1次,每次貼敷24h,貼敷治療后,將實驗組致敏的大鼠置于密閉容器內(nèi)用超聲霧化器霧化吸入2%OVA生理鹽水懸液,每天30min,進行激發(fā)誘喘1次,連續(xù)10天。模型組B組予空白貼敷,處理方法同給藥組。正常組自由進食常規(guī)飼料和水。第25天處死大鼠,采集肺組織標(biāo)本。進行RNA的提取及鑒定、基因芯片的檢測、生物信息學(xué)分析、采用Western blot、Northern bLot、熒光定量RT-PCR檢測和基因敲除技術(shù)對基因芯片檢測結(jié)果進行驗證。結(jié)果（1）造模成功判定:與正常組對比,模型組大鼠在行為學(xué)、病理學(xué)及基因?qū)W上有顯著變化,造模成功。（2）送檢9只大鼠的肺組織中提取的基因,將所得基因結(jié)果根據(jù)基因庫等數(shù)據(jù)進行剔除,按照p<0.05,以基因表達(dá)倍數(shù)值的絕對值≥2.0為閾值來確定差異表達(dá)基因。結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義,這些基因與哮喘的發(fā)生發(fā)展均有直接或者間接的關(guān)系。正常組與模型組A組比較,正常組中下調(diào)的17個基因,上調(diào)的6個基因,模型組A組呈現(xiàn)相反的變化,有統(tǒng)計學(xué)意義,哮喘模型建立成功。正常組和模型組B組、給藥組比較,差異表達(dá)基因相同,上調(diào)基因有4個,下調(diào)基因有2個,給藥組基因上下調(diào)倍數(shù)明顯高于模型組B組,上調(diào)基因和下調(diào)基因減少。模型組A組和模型組B組、給藥組比較,上調(diào)基因有兩個,下調(diào)基因有6個,給藥組基因上下調(diào)倍數(shù)明顯高于模型組B組,模型組A組中上調(diào)的基因在模型組B組、給藥組中下調(diào),下調(diào)的基因不表達(dá)或者低表達(dá),模型組B組、給藥組出現(xiàn)了兩個上調(diào)基因,其均有抗炎作用。模型組B組和給藥組比較中,無表達(dá)下調(diào)基因,表達(dá)上調(diào)基因有8個。結(jié)果提示模型組B組自身免疫恢復(fù),給藥組用藥后免疫恢復(fù),且治療效果優(yōu)于模型組B組,尚未恢復(fù)到正常狀態(tài)。（3）將正常組、模型組和給藥組的差異表達(dá)基因進行比較,通過熱圖可以發(fā)現(xiàn),正常大鼠的基因表達(dá)中通過不同基因的上調(diào)和下調(diào)或者不表達(dá)來維持免疫穩(wěn)態(tài),模型組和給藥組的基因也出現(xiàn)了上調(diào)與下調(diào)來應(yīng)對哮喘的發(fā)生,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,發(fā)現(xiàn)與哮喘有關(guān)的上調(diào)基因有18個,下調(diào)基因有7個。通過各個基因作用對比分析,實驗結(jié)果與已經(jīng)發(fā)表的一些相關(guān)文獻報道一致,也與基因的功能相一致。結(jié)論1.差異表達(dá)基因與哮喘發(fā)生機制的關(guān)系:與EOS有關(guān),參與氣道炎癥形成、氣道高反應(yīng)性、氣道重塑過程的基因有:EOS趨化性細(xì)胞因子CCR3、Ccl11、Ccl2、Ccl22;有抗炎作用的基因:ADM、Pla2g4c、Fcgr3a、Nr1d1、Acox1;參與氣道炎癥的基因有:C3、SelP、Sele、Serpina3n、CX3CR1;參與氣道炎癥和氣道重塑的基因有:MMP-9、TLR1;抗氣道炎癥和氣道重塑的基因有:Timp1;與哮喘密切相關(guān),但是尚不清楚發(fā)生機制的基因有:prim1、Serpinb10、FMO3、Scd1、per3、DBP、ANKRD1、CD177、DES。2.正常組和模型組A組比較,基因上下調(diào)明顯,基因與哮喘形成的三種機制均有關(guān)系,哮喘模型建立成功,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。正常組、模型組A組分別和模型組B組、給藥組相比,差異表達(dá)基因相同,給藥組基因上下調(diào)倍數(shù)高于模型組B組,兩組組間比較,差異表達(dá)基因全部是上調(diào),無下調(diào)基因,說明天灸藥物白芥子散治療哮喘大鼠后,較之模型組A組、B組哮喘情況有所好轉(zhuǎn),較之正常組仍有哮喘炎癥的存在,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。3.正常情況下,免疫穩(wěn)態(tài)維持大鼠生命的基本狀態(tài),哮喘大鼠伴隨著免疫穩(wěn)態(tài)的打破,與哮喘相關(guān)的基因也發(fā)生變化,在熱圖中可以明顯看出基因上下調(diào)變化,原本應(yīng)該上調(diào)的基因,轉(zhuǎn)變?yōu)橄抡{(diào),原本下調(diào)的基因轉(zhuǎn)變?yōu)樯险{(diào),原本不表達(dá)或者低表達(dá)的基因開始表達(dá),將正常組、模型組和給藥組的差異表達(dá)基因進行比較,發(fā)現(xiàn)與哮喘有關(guān)的上調(diào)基因有18個,下調(diào)基因有7個,通過各個基因作用對比分析,實驗結(jié)果與已經(jīng)發(fā)表的一些相關(guān)文獻報道一致,也與基因的功能相一致,在基因上,哮喘大鼠的基因發(fā)生了改變,其中部分基因或者基因多態(tài)性在在哮喘中明確發(fā)揮著重要的作用,能夠為治療哮喘的免疫穩(wěn)態(tài)的重建過程提供一個方向。
李寧[6]（2017）在《白芥子涂法穴位貼敷對哮喘豚鼠氣道高敏感性的作用及機制研究》文中研究指明目的:本研究通過檢測經(jīng)白芥子涂法穴位貼敷治療后支氣管哮喘豚鼠受乙酰甲膽堿激發(fā)實驗的呼氣阻力、吸氣阻力及肺順應(yīng)性等指標(biāo),觀察穴位貼敷對哮喘中氣道高敏感性的作用,并從其對氣道上皮屏障的保護及神經(jīng)-炎癥級聯(lián)相關(guān)因子在穴位-臟腑分布的的影響,揭示穴位貼敷療法對哮喘的調(diào)節(jié)機制,以期為相關(guān)新療法的研發(fā)和改進提供理論依據(jù)。材料與方法:1、采用卵蛋白致敏法,制備豚鼠過敏性哮喘模型,通過大體觀察、肺組織病理切片等指標(biāo),觀察正常組和哮喘模型組豚鼠差異。并采用乙酰甲膽堿攻擊法檢測各組豚鼠呼氣阻力、吸氣阻力及肺順應(yīng)性,反應(yīng)白芥子涂法穴位貼敷對哮喘豚鼠氣道高敏感性的作用。2、采用Western Blot法檢測肺組織中TGF-β、MMP9、TIMP1、Pan-Cadherin含量,并采用明膠酶譜法檢測肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶活性,磷酸化Western Blot法檢測肺組織Erk1/2、p38磷酸化水平。從白芥子涂法抑制TGF-β/MAPK/MMPs減少鈣黏連蛋白破壞角度,探討穴位貼敷通過對氣道上皮屏障的保護機制抑制哮喘中的氣道高敏感性。3、通過病理切片染色檢測穴位皮膚經(jīng)貼敷后的變化,及免疫組化、免疫熒光法檢測、免疫印跡法,檢測穴位貼敷后穴位皮膚及肺組織中NGF、SP、TRPV1等神經(jīng)-炎性因子與受體的含量和分布,討論穴位貼敷通過活化穴位,調(diào)控神經(jīng)-免疫級聯(lián),抑制過敏性哮喘。結(jié)果:1動物造模與穴位貼敷對氣道高敏感性的作用1.1成功制備卵蛋白致敏的豚鼠模型,且穴位貼敷顯效。1.1.1動物大體觀察顯示:造模動物均出現(xiàn)口鼻耳緣發(fā)紺、點頭呼吸、躁動等現(xiàn)象,顯示造模成功。1.1.2肺組織病理切片HE染色顯示:哮喘組豚鼠支氣管周圍組織結(jié)構(gòu)不清,可見大量嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤,氣道平滑肌增厚,管腔狹窄,可見痰栓,肺泡壁增厚;與哮喘組相比,貼敷治療組在炎癥細(xì)胞浸潤、支氣管壁平滑肌增厚、肺泡壁水腫增厚等方面均有改善。1.2白芥子涂法穴位貼敷具有調(diào)節(jié)乙酰甲膽堿所致哮喘豚鼠氣道高敏感性的作用1.2.1吸氣阻力:哮喘組豚鼠相比正常組,在受到0.125、0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿刺激時,吸氣阻力平均值和吸氣阻力平均值均明顯升高,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）;而貼敷組在受到0.125、0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿刺激時,吸氣阻力平均值和相比哮喘組均明顯降低,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）。1.2.2呼氣阻力:哮喘組豚鼠相比正常組,在受到0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿刺激時,呼氣阻力平均值和曲線下面積均明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.01）;而貼敷組在受到0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿給藥時,呼氣阻力平均值和曲線下面積相比哮喘組均明顯降低,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）。1.2.3肺順應(yīng)性:哮喘組豚鼠相比正常組,在受到0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿刺激時,肺順應(yīng)性平均值及其與時間積分明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.01）;而貼敷組在受到0.25、0.5mg/ml乙酰甲膽堿刺激時,肺順應(yīng)性平均值及其與時間積分值相比哮喘組均明顯降低,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01）。1.2.4氣道阻力峰持續(xù)時間:相比哮喘模型組,穴位貼敷組在0.125mg/ml處,氣道阻力峰持續(xù)時間減少,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。2.白芥子涂法穴位貼敷通過調(diào)控TGFβ/MAPK/MMPs通路保護過敏性哮喘豚鼠氣道上皮屏障相關(guān)蛋白。2.1白芥子涂法穴位貼敷對肺組織中轉(zhuǎn)化因子β表達(dá)量的影響:Western Blot法檢測各實驗組豚鼠肺組織中TGFβ相對表達(dá)量表達(dá)。結(jié)果顯示模型組TGFβ/β相對表達(dá)量相對表達(dá)量相比正常組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;而貼敷組相對表達(dá)量相比模型組明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。2.2磷酸化Western Blot法檢測白芥子涂法穴位貼敷對肺組織中Erk1/2、p38磷酸化水平的影響:結(jié)果顯示,模型組Erk1/2、p38 MAPK磷酸化水平相比正常組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組相比模型組Erk1/2、p38 MAPK磷酸化水平明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。2.3白芥子涂法穴位貼敷對肺組織中金屬蛋白酶活性、金屬蛋白酶9及其抑制因子的影響:2.3.1明膠酶譜法檢測白芥子涂法穴位貼敷對肺組織中金屬蛋白酶活性的影響:哮喘模型組MMP9和MMP2蛋白酶活性與正常組相比明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組相比模型組MMP9和MMP2蛋白酶活性明顯下降,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。2.3.2 Western Blot法檢測白芥子涂法穴位貼敷對肺組織中MMP9、TIMP1含量的影響:結(jié)果顯示,模型組MMP9相對表達(dá)相比正常組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組MMP9相對表達(dá)量對比模型組明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。模型組TIMP1相對表達(dá)量相比正常組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組TIMP1相對表達(dá)量相比模型組平均值略有降低,但結(jié)果不具有顯著性差異（p<0.05）。2.4白芥子涂法穴位貼敷對哮喘豚鼠肺組織中上皮粘附連接蛋白的影響:Western Blot法檢測各實驗組豚鼠肺組織中Pan-Cadherin相對表達(dá)量表達(dá)。結(jié)果顯示,模型組Pan-Cadherin相對表達(dá)量相比正常組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組Pan-Cadherin相對表達(dá)量相比模型組明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。3.白芥子涂法穴位貼敷調(diào)制臟腑-穴位間神經(jīng)-免疫級聯(lián)相關(guān)因子機制。3.1白芥子涂法穴位貼敷對豚鼠穴位皮膚的影響:3.1.1大體觀察結(jié)果顯示,經(jīng)白芥子涂法穴位貼敷后,見皮膚略有發(fā)紅、輕微腫脹反應(yīng),次日見貼敷部位被毛根脫落,至下次貼敷時,穴位貼敷處被毛已全部長出,但略短于周圍,顯示穴位貼敷對局部皮膚有刺激作用。3.1.2病理切片染色顯示,正常組與哮喘組豚鼠在穴位皮膚病理切片表現(xiàn)在表皮層、真皮層和皮膚附屬器方面無明顯差異,表皮棘層和毛根結(jié)締組織鞘由兩到三層細(xì)胞組成,部分哮喘組切片見角質(zhì)層脫落及皮脂腺略有增生;哮喘組豚鼠穴位皮膚可見表皮棘層和毛根結(jié)締組織鞘增厚,棘層部分細(xì)胞核固縮消失,真皮中可見淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤。顯示穴位貼敷后激起穴位局部皮膚的炎性反應(yīng)。3.2穴位貼敷對臟腑與穴位皮膚NGF含量的影響:3.2.1白芥子涂法對肺組織內(nèi)NGF、SP、TRPV1含量與定位的影響:3.2.1.1免疫熒光結(jié)果顯示,正常組豚鼠肺組織中有微弱陽NGF或SP表達(dá),氣道內(nèi)皮細(xì)胞中支氣管周圍組織中偶見陽性表達(dá);哮喘模型組在細(xì)支氣管部分氣道上皮細(xì)胞、上皮下基質(zhì)細(xì)胞和支氣管周圍組織中有強陽性NGF或SP信號,光密度指數(shù)值（IOD）與正常組相比明顯升高,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組陽性細(xì)胞主要集中于支氣管周圍組織中,在哮喘組中的氣道上皮細(xì)胞的特征性強陽性表達(dá)幾乎消失,NGF或SP熒光信號IOD值與模型組相比明顯降低,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,正常組豚鼠肺組織中有弱陽性TRPV1受體表達(dá),分布于支氣管上皮細(xì)胞、上皮下基質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞膜上;而哮喘模型氣道上皮細(xì)胞管腔側(cè)胞膜和支氣管周圍浸潤的炎癥細(xì)胞出現(xiàn)TRPV1強陽性表達(dá),平均光密度值與正常組相比明顯上升,具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組相比哮喘模型組,TRPV1受體表達(dá)下調(diào),平均光密度值與模型組相比,具有顯著性差異（p<0.05）。3.2.1.2免疫印跡法檢測NGF和TRPV1肺內(nèi)表達(dá)量:哮喘模型組豚鼠肺組織NGF相對表達(dá)含量相比正常組明顯上升,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）;而貼敷組豚鼠肺組織NGF相對表達(dá)量相比哮喘組平均值明顯下降,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。哮喘組豚鼠肺組織TRPV1相對表達(dá)量平均值較正常組略有上升,但結(jié)果無顯著性差異（p<0.05）;貼敷組豚鼠TRPV1受體相對含量與哮喘組相比明顯下降,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。3.2.2白芥子涂法穴位貼敷對豚鼠貼敷部位穴位皮膚內(nèi)NGF、SP和TRPV1含量與定位的影響:免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,正常組豚穴位皮膚中表皮棘層、毛根結(jié)締組織鞘和真皮組織中部分細(xì)胞具有陽性NGF表達(dá);而哮喘模穴位皮膚與正常組表達(dá)部位相似,近在部分毛根結(jié)締組織鞘中觀察到NGF陽性細(xì)胞有所減少,平均陽性區(qū)域面積率相比正常組略有降低,但組間比較不具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組與前兩組表達(dá)部位相似,陽性面積隨棘層及毛根結(jié)締組織鞘層厚而擴大,同時真皮層內(nèi)浸潤的大部分炎性細(xì)胞均有NGF陽性表達(dá),與哮喘組相比,陽性面積率明顯增大,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。正常組豚穴位皮膚中具有弱的陽性SP表達(dá),主要存在于表皮棘層部分細(xì)胞、皮脂腺和毛根結(jié)締組織鞘內(nèi)側(cè);而哮喘模穴位皮膚與正常組表達(dá)部位相似,但各部位中陽性細(xì)胞占比略有增高,與正常組相比陽性區(qū)域面積率略有上升但無顯著性差異（p<0.05）而陽性區(qū)域光密度值明顯上升,具有顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組穴位皮膚中,不僅棘層、皮脂腺和毛根結(jié)締組織鞘具有強陽性表達(dá),且在真皮組織細(xì)胞中具有大量的細(xì)胞顯示出SP陽性,與哮喘組相比,陽性面積率明顯增大,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）,陽性區(qū)域光密度與模型組相比,無顯著差異（p<0.05）。正常組豚鼠皮膚組織內(nèi)的棘層、毛根結(jié)締組織鞘、皮脂腺及真皮層散在TRPV1弱陽性表達(dá),陽性面積率為16.5%±1.1%;哮喘組豚鼠棘層、毛根結(jié)締組織鞘、皮脂腺等處中TRPV1表達(dá)細(xì)胞數(shù)略減少,但毛根結(jié)締組織鞘表達(dá)強度略增加,陽性面積率與正常組相比,無顯著性差異（p<0.05）;穴位貼敷組豚鼠不僅棘層和毛根結(jié)締組織鞘處隨貼敷刺激組織層厚陽性面積增大,另外真皮層內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)量也有所增加,陽性面積率與哮喘組相比明顯上升,結(jié)果具有顯著性差異（p<0.05）。結(jié)論:1.白芥子涂法穴位貼敷對于過敏性哮喘豚鼠具有降低氣道高敏感性的作用。2.白芥子涂法穴位貼敷能夠通過抑制TGF-β及其下游的Erk1/2和p38 MAPK磷酸化減少基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)并抑制其酶活,并從而保護氣道上皮屏障相關(guān)蛋白。其對氣道高敏感性的調(diào)節(jié)作用可能與此有關(guān)。3.白芥子涂法穴位貼敷能夠調(diào)控神經(jīng)-炎癥關(guān)鍵因子和受體在穴位臟腑之間的空間分布關(guān)系,從而刺激穴位,調(diào)節(jié)臟腑功能,起到抑制哮喘中氣道高敏感性的作用。
曹園[7]（2017）在《瘤果黑種草子抗慢性阻塞性肺病的組分優(yōu)化及免疫作用機理研究》文中研究表明目的:確定抗慢性阻塞性肺?。╤ronic obstructive pulmonary disease,COPD）的瘤果黑種草子（nigella glandulifera seeds,NGS）有效部位黃酮和揮發(fā)油的最優(yōu)組合,并探索其抗COPD的效應(yīng)及作用機制。方法:1)采用固定劑量法觀察瘤果黑種草子黃酮和揮發(fā)油組合物（nigella glandulifera seeds flavonoids and volatile oil composition,NFVC）的急性毒性反應(yīng);2)于小鼠足趾注射角叉菜膠,觀察NFVC抑制小鼠足趾腫脹度的影響;于大鼠足趾注射弗氏佐劑,觀察NFVC對抑制大鼠足趾腫脹程度的影響;采用脂多糖（lioPosacchrid,LPS）誘導(dǎo)RAW264.7體外炎癥模型,觀察NFVC對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7分泌白介素-8（Interleukin-8,IL-8）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、一氧化氮（nitric oxide,NO）炎癥因子水平的影響;采用乙酰膽堿（acetylcholine chloride,Ach）和組胺（histamine,His）所致豚鼠離體氣管環(huán)平滑肌痙攣,觀察NFVC對離體豚鼠氣管平滑肌解痙作用的影響。通過上述整體動物實驗,細(xì)胞實驗,動物離體組織實驗,篩選出瘤NFVC最優(yōu)組合;3)采用氣管內(nèi)滴入LPS加煙熏建立大鼠COPD模型,觀察大鼠的一般狀況,肺組織的病理改變,進行支氣管肺泡灌洗液（Bronchial alveolar lavage fluid,BALF）和血液炎性細(xì)胞分類,采用ELISA法測分別定BALF和血液中的IL-8、γ干擾素（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-4（Interleukin-4,IL-4）、白介素-17（Interleukin-17,IL-17）、白介素-10（Interleukin-10,IL-10）和轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）的含量水平以及血液中的α1-抗胰蛋白酶、纖維鏈接蛋白含量;采用流式細(xì)胞儀檢測血液中不同類型的T淋巴細(xì)胞:Th1、Th2、Th17及Treg淋巴細(xì)胞。結(jié)果:1)NFVC無明顯急性毒性;2)與單劑量黃酮組和揮發(fā)油組比較,NFVC200:40mg/kg劑量組（即200mg/kg黃酮加40mg/kg揮發(fā)油）抑制角叉菜膠致小鼠足跖腫脹度明顯（P<0.01）;NFVC140:10mg/kg、140:20mg/kg劑量組抑制佛氏完全佐劑致大鼠足趾腫脹度明顯（P<0.01）;NFVC80:12.5μg/ml、80:25μg/ml劑量組抑制RAW264.7釋放NO、IL-8、IL-6等炎癥細(xì)胞因子作用明顯（P<0.01）;NFVC1:10mg/ml、2:5mg/ml劑量組降低Ach和His致豚鼠氣管平滑肌收縮張力作用明顯（P<0.01）;3)NFVC與黃酮組、揮發(fā)油組比較:改善COPD模型大鼠活動少、飲食飲水減少等精神狀態(tài),對其肺組織的病理變化有不同程度的減輕;血清中IL-4、IL-8、IL-17、纖維鏈接蛋白的含量水平均降低（P<0.05）,IL-10、α1-抗胰蛋白酶的含量水平均升高（P<0.05）,白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量下降（P<0.05）,Th1、Th17淋巴細(xì)胞比例下降（P<0.05）;BALF中IL-4、IL-8、IL-17的含量水平均降低（P<0.05）,白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量下降（P<0.05）。結(jié)論:NFVC70:20mg/kg、140:10mg/kg、140:20mg/kg對角叉菜膠和佐劑性關(guān)節(jié)足趾腫脹有抑制作用,對RAW264.7細(xì)胞釋放IL-8、IL-6和NO有抑制作用,緩解豚鼠支氣管痙攣,結(jié)果提示為最優(yōu)組合物的配比劑量。NFVC140:20mg/kg劑量組具有較好的抗COPD的作用,其作用機理可能與抑制中性粒細(xì)胞及以Th1、Th17為主的T淋巴細(xì)胞,阻止RAW264.7細(xì)胞釋放IL-8、IL-6減緩炎癥反應(yīng);增加α1-抗胰蛋白酶的含量,減輕氣道的炎癥刺激,減緩小、細(xì)支氣管結(jié)構(gòu)重建和肺大泡的形成有關(guān)。
張秀英[8]（2016）在《基于皮部絡(luò)脈理論探討清肺通絡(luò)膏對幼齡大鼠RSV肺炎多靶點作用機制》文中研究表明目的:基于皮部絡(luò)脈理論探討清肺通絡(luò)膏的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及生物傳輸途徑,確定其最佳提取工藝;建立呼吸道合胞病毒（RSV）誘導(dǎo)幼齡大鼠肺炎模型并進行差異蛋白分析,明確毒熱閉肺證階段的生物標(biāo)記物;闡明清肺通絡(luò)膏及其拆方對幼齡大鼠RSV肺炎肺組織病毒載量、MAPK p38/NF-κB p65信號通路及外周血T細(xì)胞亞群和相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)控作用,闡釋清肺通絡(luò)膏的多靶點作用機制及藥輔共生理論,為清肺通絡(luò)膏進一步研發(fā)提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。材料與方法:1.應(yīng)用高效液相色譜法（HPLC）,采用L9（34）正交試驗設(shè)計,以清肺通絡(luò)膏中大黃素、大黃酸、黃芩苷含量及出膏率為指標(biāo),對乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)等參數(shù)進行考察,確立清肺通絡(luò)膏的最佳提取工藝。2.選取改良的Franz擴散裝置,以離體大鼠皮膚為透皮屏障,運用高效液相色譜法（HPLC）,測定大黃素、大黃酸及黃芩苷的經(jīng)皮滲透量,考察清肺通絡(luò)膏有效成分的透皮吸收特性及傳輸機制。3.采用鼻腔接種RSV Long株誘導(dǎo)幼齡Wistar大鼠致肺炎,觀察大鼠在一般狀態(tài)、肺組織的病理切片等方面的差異,并應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-PCR）技術(shù)檢測病毒載量,從多角度進行模型鑒定。4.應(yīng)用雙向熒光差異凝膠電泳（2D-DIGE）結(jié)合基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）鑒定技術(shù),對幼齡大鼠RSV肺炎肺組織差異蛋白進行分析,尋找毒熱閉肺證階段的生物標(biāo)記物及干預(yù)靶點。5.采用實時熒光定量PCR（Real-time PCR技術(shù)）及蛋白免疫印跡（Western Blot）技術(shù)檢測幼齡大鼠RSV肺炎不同時間點肺組織RSV F蛋白m RNA,MAPK p38、NF-κB m RNA及蛋白表達(dá)水平,比較清肺通絡(luò)膏及其拆方對肺組織病毒載量及MAPK p38/NF-κB信號通路的影響。6.選用流式細(xì)胞技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測幼齡大鼠RSV肺炎外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞及IL-4、IFN-γ的變化,比較清肺通絡(luò)膏及其拆方對T細(xì)胞亞群及相關(guān)細(xì)胞因子的影響。結(jié)果:1.清肺通絡(luò)膏的最佳提取工藝:A3B1C3D1,即6倍量70%乙醇提取3次每次1小時。2.清肺通絡(luò)膏的透皮特性:大黃素、大黃酸、黃芩苷均可透皮;黃芩苷的單位面積累積透皮量及透皮速率最快,且其透皮時滯最長（0.598/h）;大黃素、大黃酸、黃芩苷8 h體外經(jīng)皮滲透Q與t相關(guān)性較好,二者呈線性關(guān)系,體外經(jīng)皮滲透均符合零級動力學(xué)過程。不同組方中清肺通絡(luò)膏的主要成分大黃素、大黃酸、黃芩苷的體外滲透符合零級動力學(xué)模型;各組的大黃素、大黃酸、黃芩苷8h的Qn和J各不相同,全方組>主藥組,且有顯著性差異（P<0.05）。3.大鼠肺臟病理組織學(xué)變化:正常組大鼠肺間隔及支氣管完整,肺泡結(jié)構(gòu)正常。感染后第3天可見肺泡壁上皮細(xì)胞輕微受損,肺間隔增寬不明顯,肺間質(zhì)可見少量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤;感染后第5天可見大鼠肺泡壁輕中度增厚,肺間質(zhì)見中等量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤;感染后第7天可見大鼠肺泡壁明顯增厚,肺間質(zhì)見大量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞浸潤。4.RT-PCR擴增產(chǎn)物:正常組中沒有RSV表達(dá),模型組可見到RSV表達(dá),其中模型組的表達(dá)強度隨時間逐漸增高,第7天最高（p<0.05）。5.2D-DIGE及蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果:模型組與正常組大鼠肺組織樣本之間有41個表達(dá)量差異大于1.5倍的蛋白質(zhì)點。其中正常組與模型組比,有4個點升高;模型組與正常組比有37個點升高。共鑒定出8種蛋白質(zhì),即血紅素結(jié)合蛋白、珠蛋白、激肽原1、激肽原2、膜突蛋白、埃茲蛋白、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3、波形蛋白。6.各組大鼠肺組織病毒載量的動態(tài)變化:正常組肺組織中未檢測到呼吸道合胞病毒;模型組肺組織中病毒載量持續(xù)升高,第7天最高,與同一時間正常組比,均有顯著性差異（P<0.05）;清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與同時點模型組比較,肺組織病毒載量均有不同程度降低,但以全方組降低最明顯（p<0.05）。7.各組大鼠肺組織MAPK p38 m RNA表達(dá)的情況:正常組可以檢測到少量的MAPK p38 m RNA表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,MAPK p38 m RNA表達(dá)增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組MAPK p38 m RNA表達(dá)水平均明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組MAPK p38 m RNA表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥組及輔藥組比較,MAPK p38 m RNA表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。8.各組大鼠肺組織NF-κB m RNA表達(dá)情況:正常組可以檢測到少量的NF-κB m RNA表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,NF-κB m RNA增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組NF-κB m RNA表達(dá)水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組NF-κB m RNA表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,NF-κB m RNA表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。9.各組大鼠肺組織TSLP m RNA表達(dá)情況:正常組可以檢測到少量的TSLP m RNA表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,TSLP m RNA增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組TSLP m RNA表達(dá)水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組TSLP m RNA表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,TSLP m RNA表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。10.各組大鼠肺組織MAPK p-p38蛋白表達(dá)情況:正常組可以檢測到少量的MAPK p-p38蛋白表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,MAPK p-p38蛋白表達(dá)增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組MAPK p-p38蛋白表達(dá)水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組MAPK p-p38蛋白表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,MAPK p-p38蛋白表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。11.各組大鼠肺組織NF-κB p65蛋白表達(dá)情況:正常組可以檢測到少量的NF-κB p65蛋白表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,NF-κB p65蛋白增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組NF-κB p65蛋白表達(dá)水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組NF-κB p65蛋白表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,NF-κB p65蛋白表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。12.各組大鼠肺組織TSLP蛋白表達(dá)的情況:正常組可以檢測到少量的TSLP蛋白表達(dá)。模型組、清肺通絡(luò)膏及拆方各治療組與正常組比較,TSLP蛋白增高,有顯著性差異（P<0.05）。各治療組與模型組比較,全方組TSLP蛋白表達(dá)水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）;主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組TSLP蛋白表達(dá)水平有所降低,但無顯著性差異（P>0.05）,但均高于正常組。全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,TSLP蛋白表達(dá)明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。13.各組大鼠外周血T細(xì)胞亞群的情況:模型組與正常組比較,模型組CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）,CD4+/CD8+T明顯增高,有顯著性差異（P<0.05）;清肺通絡(luò)膏全方組及拆方各治療組與模型組比較,CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞水平均增高,有顯著性差異（P<0.05）,CD4+/CD8+T明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組與全方組比較,主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組CD3+、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞水平均降低,有顯著性差異（P<0.05）,CD4+/CD8+T升高,有顯著性差異（P<0.05）。14.各組大鼠外周血IL-4/INF-γ的情況:模型組IL-4明顯高于正常組,有顯著性差異（P<0.05）;清肺通絡(luò)膏全方組及拆方各治療組與模型組比較,IL-4水平降低,有顯著性差異（P<0.05）;全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,IL-4水平明顯降低,有顯著性差異（P<0.05）。模型組INF-γ明顯低于正常組,有顯著性差異（P<0.05）;全方組及拆方各治療組與模型組比較,INF-γ水平升高,有顯著性差異（P<0.05）;全方組與主藥（大黃、黃芩）組及輔藥（大蒜）組比較,INF-γ水平明顯升高,有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論:1.大黃素、大黃酸、黃芩苷為清肺通絡(luò)膏的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),輔藥大蒜對其透皮滲透量有促進作用,皮部絡(luò)脈為其生物傳輸途徑。2.雙向熒光差異凝膠電泳結(jié)合基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)是研究RSV肺炎發(fā)病機制的手段,可以發(fā)現(xiàn)肺炎毒熱閉肺證階段的新的生物標(biāo)志物及干預(yù)靶點。3.清肺通絡(luò)膏對幼齡大鼠RSV肺炎肺組織病毒載量、MAPK p38/NF-κB信號通路、外周血T細(xì)胞亞群及相關(guān)細(xì)胞因子均具有調(diào)控作用,輔藥能提高主藥的療效。
丁偉偉,徐增梅,童佳兵,楊程,童祥麗,陸梅,李澤庚[9]（2016）在《陽和平喘顆粒對哮喘大鼠肺組織MMP-9和VEGF表達(dá)影響》文中提出目的:探討陽和平喘顆粒對哮喘大鼠肺組織金屬基質(zhì)蛋白酶-9和血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響,從氣道重塑的角度探討陽和平喘顆粒治療支氣管哮喘的作用機制。方法:SD大鼠90只隨機分為正常組（N組）、模型組（M組）、陽和平喘顆粒低、中、高劑量治療組（YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H組）和地塞米松組（DXM組）。其中,M、YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM組均采用國際通用的方法,即卵蛋白腹腔注射致敏及霧化吸入激發(fā)的方法建立哮喘大鼠模型,同時,應(yīng)用氫化可的松進行腹腔注射以復(fù)制腎陽虛模型,N組均使用生理鹽水作為對照。HE染色檢測各組大鼠肺組織的病理學(xué)改變;Real-time PCR和Western-blot分別檢測各組大鼠肺組織MMP-9和VEGF m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:與N組相比,M組大鼠肺組織MMP-9和VEGF的表達(dá)量顯著升高（P<0.01）;與M組相比,經(jīng)低、中、高劑量的陽和平喘顆粒治療后大鼠肺組織MMP-9和VEGF的表達(dá)量明顯下降（P<0.01）。結(jié)論:陽和平喘顆?？赏ㄟ^下調(diào)MMP-9和VEGF的表達(dá)而調(diào)控氣道重塑,從而起到治療支氣管哮喘的作用。
官菊梅[10]（2015）在《“肺腸合治法”對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑的免疫調(diào)節(jié)作用機制研究》文中進行了進一步梳理實驗?zāi)康模罕菊n題在建立大鼠腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘的基礎(chǔ)上,予肺腸合治法的代表方劑加味升降散進行干預(yù),通過對本動物實驗的觀察,選擇與哮喘氣道重塑相關(guān)的多項指標(biāo),探討肺腸合治法對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑的影響,為“肺與大腸相表里”臟腑相關(guān)理論尋找實證依據(jù)。實驗方法：以SD大鼠為研究對象,在抗生素誘導(dǎo)其腸道菌群失調(diào)模型基礎(chǔ)上采用卵清蛋白（OVA）、氫氧化鋁（Al（OH）3）混懸液在大鼠雙側(cè)胸部、腹股溝及腹腔進行注射和霧化吸入激發(fā)哮喘,建立腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠模型。加味升降散干預(yù)后,通過肺、腸同步觀察的研究思路,用病理學(xué)方法觀察大鼠肺腸組織的病理形態(tài)變化,用ELISA法檢測大鼠血清和支氣管肺泡灌洗液（BALF）中TGF-β1、IL-17含量；用免疫組化法檢測肺、腸內(nèi)MMP-9、TIMP-1的含量與比值。實驗結(jié)果：1.行為學(xué)觀察：與腸道菌群合并過敏性哮喘大鼠模型組相比,中藥肺腸合治干預(yù)組大鼠呼吸困難、流涕、抓撓等癥狀有不同程度減輕；在飼養(yǎng)過程中,大鼠毛色光澤度、整體情況也較好；2.組織病理形態(tài)顯示,肺腸合治組大鼠肺內(nèi)支氣管壁及周圍組織炎性細(xì)胞浸潤、黏膜上皮損傷較模型組有減輕,各組腸組織內(nèi)炎癥反應(yīng)及腸黏膜的損傷也較模型組有緩解；3.肺功能實驗中模型組呼吸頻率（F）與正常對照組相比有顯著增高（P<0.05）),每分鐘通氣量（MVb）、吸氣流量峰值（PIFb）呼氣流量峰值（PEFb）顯著減小（P<0.05或P<0.01）。與模型組相比較,肺腸合治組可降低大鼠F（P<0.05或P<0.01）,升高MVb、PIFb、PEFb （P<0.05或P<0.01）;4.模型組鼠BALF及腸黏液中sIgA含量明顯低（P<0.05或P<0.01）空白對照組；與模型組比較,陽性組及治療組大鼠BALF及腸黏液中sIgA含量較模型組升高（P<0.05或P<0.01）；5.相關(guān)細(xì)胞因子水平1)模型組大鼠血清及BALF中TGF-β1、IL-17含量明顯高于空白對照組大鼠（P<0.05或P<0.01）；與模型組比較,陽性組及肺腸合治組對TGF-β1、IL-17有不同程度下調(diào)作用（P<0.05）,具有顯著性差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2)免疫組化結(jié)果顯示：模型組與空白組比較MMP-9/TIMP-1比值失衡嚴(yán)重（<1）；陽性組及肺腸合治干預(yù)組與模型組比較MMP-9水平升高緩慢、TIMP-1水平升高明顯（P<0.05）；對MMP-9/TIMP-1的比值接近正常,有顯著調(diào)節(jié)作用。實驗結(jié)論：肺腸合治法改善腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑的調(diào)節(jié)機制可能有二：其一,通過減少肺組織的炎性細(xì)胞的浸潤,達(dá)到修復(fù)氣道粘膜損傷,進而恢復(fù)損傷組織的結(jié)構(gòu)；其二,調(diào)控TGF-β1、IL-17表達(dá)、降低肺組織中MMP-9、 TIMP-1水平,調(diào)節(jié)MMP-9/TIMP-1比值趨于平衡,達(dá)早期拮抗氣道重塑的作用。
二、巴布膏對豚鼠哮喘模型基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制物水平的影響（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、巴布膏對豚鼠哮喘模型基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制物水平的影響（論文提綱范文）
（1）不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE-/-小鼠炎癥免疫平衡的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號說明 |
| 第一部分 文獻綜述 |
| 綜述一 動脈粥樣硬化中免疫炎癥反應(yīng)的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 綜述二 艾葉化學(xué)成分與藥理作用的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 綜述三 艾燃燒生成物化學(xué)成分及藥理作用的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 前言 |
| 第二部分 實驗研究 |
| 第一章 不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE~(-/-)小鼠主動脈及肝臟病理形態(tài)的影響 |
| 第一節(jié) 概述 |
| 第二節(jié) 材料與方法 |
| 第三節(jié) 實驗結(jié)果 |
| 第四節(jié) 討論與小結(jié) |
| 第二章 不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE~(-/-)小鼠炎性因子及免疫平衡的影響 |
| 第一節(jié) 概述 |
| 第二節(jié) 材料與方法 |
| 第三節(jié) 實驗結(jié)果 |
| 第四節(jié) 討論與小結(jié) |
| 第三章 不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE~(-/-)小鼠斑塊穩(wěn)定性的影響 |
| 第一節(jié) 概述 |
| 第二節(jié) 材料與方法 |
| 第三節(jié) 實驗結(jié)果 |
| 第四節(jié) 討論與小結(jié) |
| 討論 |
| 結(jié)語 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間主要研究成果 |
（2）清血毒顆粒合劑經(jīng)Spred-1蛋白治療尋常型銀屑?。ㄑ獰嶙C）機制的研究（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 注釋表 |
| 引言 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.中醫(yī)藥治療尋常型銀屑病的機制研究 |
| 1.1 尋常型銀屑病病因病機的認(rèn)識 |
| 1.2 尋常型銀屑病中藥治療的機制研究 |
| 1.3 小結(jié) |
| 2.SPRED蛋白家族實驗研究進展 |
| 2.1 SPRED蛋白家族結(jié)構(gòu)及功能 |
| 2.2 SPRED蛋白家族與Ras/MAPK信號通路 |
| 2.3 SPRED蛋白家族與疾病 |
| 2.4 小結(jié) |
| 3.銀屑病與SPRED-1蛋白 |
| 3.1 Ras/ERK 通路與銀屑病 |
| 3.2 SPRED-1蛋白可能是潛在的銀屑病治療靶點 |
| 3.3 清血毒顆粒合劑“從毒論治”銀屑病 |
| 3.4 本研究的著眼點和假說的提出 |
| 第二章 SPRED蛋白在尋常型銀屑病患者表達(dá)研究 |
| 1.實驗材料 |
| 2.實驗方法 |
| 3.實驗結(jié)果 |
| 4.討論與分析 |
| 第三章 Spred-1基因過表達(dá)對銀屑病樣小鼠模型的影響 |
| 1.實驗材料 |
| 2.實驗方法 |
| 3.實驗結(jié)果 |
| 4.討論與分析 |
| 第四章 清血毒顆粒合劑對銀屑病樣小鼠模型的干預(yù)作用 |
| 1.實驗材料 |
| 2.實驗方法 |
| 3.實驗結(jié)果 |
| 4.討論與分析 |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 1.結(jié)論 |
| 2.不足與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄1 知情同意書 |
| 攻讀博士期間主要研究成果 |
| 個人簡介 |
（3）化濁生新膏在鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的療效觀察及對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、7、9表達(dá)影響的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理論研究 |
| 1. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對慢性鼻-鼻竇炎的認(rèn)識 |
| 1.1 慢性鼻-鼻竇炎定義及診斷 |
| 1.2 慢性鼻-鼻竇炎的病因及機制 |
| 1.3 慢性鼻-鼻竇炎的治療方法 |
| 2. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對慢性鼻-鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后上皮化的認(rèn)識 |
| 2.1 鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后上皮化和新生病變 |
| 2.2 鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后上皮化進程的分期 |
| 2.3 鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的治療方法 |
| 3. 中醫(yī)學(xué)對慢性鼻-鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后上皮化的認(rèn)識 |
| 3.1 從中醫(yī)學(xué)角度分析慢性鼻-鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的上皮化 |
| 3.2 中醫(yī)中藥對慢性鼻-鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的治療 |
| 第二部分 臨床試驗研究 |
| 1. 臨床病例資料 |
| 1.1 研究病例來源 |
| 1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)、分期及手術(shù)適應(yīng)證 |
| 1.3 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) |
| 2. 臨床研究材料 |
| 2.1 相關(guān)手術(shù)設(shè)備及換藥器械 |
| 2.2 Real-time PCR材料 |
| 3. 臨床研究方法 |
| 3.1 一般資料 |
| 3.2 治療方法 |
| 4. 觀測指標(biāo)與方法 |
| 4.1 客觀療效評定 |
| 4.2 療效指數(shù) |
| 4.3 綜合療效評定標(biāo)準(zhǔn) |
| 4.4 MMP-2、7、9的檢測方法 |
| 4.5 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 5. 實驗數(shù)據(jù)結(jié)果 |
| 5.1 對照組治療組間一般資料分析 |
| 5.2 臨床客觀療效比較 |
| 5.3 兩組綜合療效比較 |
| 5.4 不良反應(yīng) |
| 5.5 基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、7、9mRNA相對表達(dá)量比較 |
| 第三部分 討論 |
| 1. 鼻-鼻竇炎鼻黏膜組織黏膜重塑的研究進展 |
| 2. 對基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs家族的研究 |
| 3. 治療用藥分析 |
| 3.1 “化濁生新膏”的組成和研究進展 |
| 3.2 “化濁生新膏”的組方分析和藥理分析 |
| 4. 臨床療效分析 |
| 4.1 對照組和治療組一般資料分析 |
| 4.2 術(shù)前資料組間分析 |
| 4.3 組內(nèi)三個時間點治療前后療效比較分析 |
| 4.4 FESS手術(shù)前后不同時間點組間組內(nèi)療效比較分析 |
| 4.5 綜合療效分析 |
| 5. 樣本MMP-2、7、9mRNA相對表達(dá)量比較分析 |
| 5.1 兩組患者術(shù)中標(biāo)本MMP2、7、9mRNA相對表達(dá)量比較分析 |
| 5.2 兩組患者治療前后組內(nèi)標(biāo)本MMP2、7、9mRNA相對表達(dá)量比較分析 |
| 5.3 兩組術(shù)后8周標(biāo)本MMP2、7、9mRNA相對表達(dá)量比較分析 |
| 6. 研究存在的問題及展望 |
| 第四部分 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 縮略語表 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果 |
| 致謝 |
（4）從哮喘氣道平滑肌增厚探討“防風(fēng)—烏梅”配伍的機制（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 中醫(yī)藥防治哮喘優(yōu)勢 |
| 3 假說提出及研究內(nèi)容 |
| 第一部分 “防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠ASMC病理變化的影響及其機制研究 |
| 1 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 主要藥品、試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 動物分組 |
| 2.2 模型建立(OVA+氫氧化鋁法) |
| 2.3 分組及給藥 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 HE染色觀察小鼠肺組織病理變化 |
| 2.6 掃描電子顯微鏡觀察小鼠氣道上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu) |
| 2.7 ELISA檢測MMP-9、TIMP-1、IL-6、IL-8、VEGF、TGF-β1、TNF-α含量 |
| 2.8 RT-PCR檢測CyclinD1、P27kip1、bcl-2、caspase-3、α-actin、OPNmRNA |
| 2.9 Western-blot實驗檢測CyclinD1、P27kip1、bcl-2、caspase-3、α-actin、OPN蛋白表達(dá)量 |
| 2.10 免疫組化檢測CyclinD1、P27kip1、bcl-2、caspase-3、α-actin、OPN蛋白表達(dá)量及分布 |
| 2.11 統(tǒng)計方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 “防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織結(jié)構(gòu)的影響 |
| 3.2 “防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠肺組織氣道重塑相關(guān)因子的影響 |
| 3.3 “防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠細(xì)胞周期、凋亡相關(guān)基因的影響 |
| 3.4 “防風(fēng)-烏梅”配伍對哮喘模型小鼠表型轉(zhuǎn)化的影響 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 “防風(fēng)-烏梅”含藥血清對PDGF誘導(dǎo)人支氣管平滑肌細(xì)胞HBSMC增殖模型的影響及其機制研究 |
| 1 實驗動物及實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 主要藥品、試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 含藥血清制備 |
| 2.2 建立細(xì)胞模型 |
| 2.3 細(xì)胞分組及給藥 |
| 2.4 平板遷移實驗 |
| 2.5 跨膜遷移實驗 |
| 2.6 ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-8、MMP-9、TIMP-1 表達(dá) |
| 2.7 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 “防風(fēng)-烏梅”含藥血清對HBSMC細(xì)胞平行遷移能力的影響 |
| 3.2 “防風(fēng)-烏梅”含藥血清對HBSMC TNF-α、IL-8、MMP-9、TIMP-1 表達(dá)及MMP-9/TIMP-1 的影響 |
| 4 小結(jié) |
| 討論 |
| 1 實驗對象及造模方法選擇 |
| 2 配伍藥對“防風(fēng)-烏梅”的確定 |
| 3 藥液濃度及給藥途徑 |
| 4 中醫(yī)藥對氣道平滑肌增厚的干預(yù)機制探討 |
| 結(jié)論 |
| 問題與展望 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 綜述 中醫(yī)藥防治哮喘機制研究進展 |
| 參考文獻 |
| 附圖 |
| 在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果 |
（5）基于全基因表達(dá)譜揭示天灸藥物白芥子散對哮喘大鼠免疫穩(wěn)態(tài)重建的分子機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 1.實驗材料 |
| 2.實驗方法 |
| 3.實驗結(jié)果 |
| 4.討論 |
| 5.結(jié)論 |
| 6.不足與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 綜述 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（6）白芥子涂法穴位貼敷對哮喘豚鼠氣道高敏感性的作用及機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 論文一 白芥子涂法穴位貼敷對過敏性支氣管哮喘豚鼠的氣道高敏感性的影響 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文二 白芥子涂法穴位貼敷通過調(diào)控 TGFβ/MAPK/MMPs 通路保護過敏性哮喘豚鼠氣道上皮屏障 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文三 白芥子涂法調(diào)節(jié)臟腑-穴位間神經(jīng)-免疫級聯(lián)相關(guān)因子分布 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 本研究創(chuàng)新性的自我評價 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 個人簡介 |
| 在學(xué)期間科研成績 |
| 致謝 |
（7）瘤果黑種草子抗慢性阻塞性肺病的組分優(yōu)化及免疫作用機理研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究內(nèi)容與方法 |
| 1 組合物的急性毒性實驗 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 組合物析因設(shè)計與篩選試驗 |
| 2.1 組合物劑量配比 |
| 2.2 篩選試驗1:小鼠角叉菜膠致小鼠足趾腫脹實驗 |
| 2.3 篩選試驗2:大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎實驗 |
| 2.4 篩選試驗3:體外刺激RAW264.7體外抗炎篩選實驗 |
| 2.5 篩選試驗4:豚鼠肺氣管螺旋條實驗 |
| 2.6 篩選試驗分析 |
| 2.7 統(tǒng)計分析 |
| 3 NFVC對COPD大鼠模型的作用及其機理研究 |
| 3.1 實驗材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 統(tǒng)計分析 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 綜述 慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機制研究進展 |
| 參考文獻 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 教師評閱意見表 |
（8）基于皮部絡(luò)脈理論探討清肺通絡(luò)膏對幼齡大鼠RSV肺炎多靶點作用機制（論文提綱范文）
| 中文論著摘要 |
| 英文論著摘要 |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 論文一 皮部絡(luò)脈理論研究 |
| 1 皮部絡(luò)脈理論的內(nèi)涵和外延 |
| 2 皮部絡(luò)脈與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相關(guān)性 |
| 3 傳統(tǒng)與現(xiàn)代經(jīng)皮治療的異同 |
| 4 皮部絡(luò)脈與生物傳輸?shù)耐緩?/td> |
| 論文二 清肺通絡(luò)膏藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及傳輸途徑研究 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果（附論文圖片） |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文三 基于 2D-DIGE的幼齡大鼠RSV肺炎差異蛋白研究 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果（附論文圖片） |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文四 清肺通絡(luò)膏干預(yù)幼齡大鼠RSV肺炎效應(yīng)機制研究 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果（附論文圖片） |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 本研究創(chuàng)新性的自我評價 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 個人簡介 |
| 在學(xué)期間科研成績 |
| 致謝 |
（9）陽和平喘顆粒對哮喘大鼠肺組織MMP-9和VEGF表達(dá)影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 藥物及試劑 |
| 1.3 模型復(fù)制 |
| 1.4 給藥方法 |
| 1.5 標(biāo)本采集 |
| 2 指標(biāo)觀測 |
| 2.1 證候?qū)W觀察 |
| 2.2 實驗室指標(biāo)檢測 |
| 2.2.1 肺組織病理學(xué)表現(xiàn) |
| 2.2.2 Real-time PCR檢測MMP-9和VEGF m RNA表達(dá)水平 |
| 2.2.3 Western-blot檢測MMP-9和VEGF蛋白表達(dá)水平 |
| 2.3 統(tǒng)計方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 肺組織病理學(xué)表現(xiàn) |
| 3.2 陽和平喘顆粒對哮喘大鼠肺組織MMP-9和VEGF表達(dá)的影響 |
| 4 討論 |
（10）“肺腸合治法”對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑的免疫調(diào)節(jié)作用機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 理論探討 |
| 1. “肺腸合治”的中醫(yī)認(rèn)識 |
| 1.1 “肺與大腸相表里”理論指導(dǎo)下的生理病理認(rèn)識 |
| 1.2 肺腸合治的臨床研究 |
| 1.3 肺腸合治法與加味升降散 |
| 2 腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘的現(xiàn)代研究 |
| 2.1 過敏性哮喘 |
| 2.2 腸道菌群失調(diào) |
| 2.3 腸道菌群失調(diào)與過敏性哮喘 |
| 2.4 腸道菌群合并過敏性哮喘氣道重塑相關(guān)機制 |
| 第二部分 實驗研究 |
| 1. 技術(shù)路線 |
| 2 實驗材料 |
| 2.1 實驗動物 |
| 2.2 主要實驗儀器 |
| 2.3 實驗藥物 |
| 2.4 主要試劑 |
| 2.5 實驗方法 |
| 2.6 實驗標(biāo)本采集及檢測方法 |
| 2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 |
| 3. 實驗結(jié)果 |
| 3.1 各組實驗大鼠一般情況比較 |
| 3.2 肺、腸組織病理改變 |
| 3.3 肺腸合治法干預(yù)對大鼠支氣管厚度及支氣管平滑肌厚度的影響 |
| 3.4 肺功能觀察結(jié)果 |
| 3.5 腸道菌群培養(yǎng)計數(shù) |
| 3.6 BALF及全血中細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù) |
| 3.7 BLAF及腸黏液中slgA表達(dá)的影響 |
| 3.8 血清及BLAF中IL-17及TGF-β 1的表達(dá)的影響 |
| 3.9 大鼠左肺及結(jié)腸組織MMP-9、TIMP-1表達(dá)水平 |
| 4 討論 |
| 4.1 腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠模型構(gòu)建及評價 |
| 4.2 陽性藥物枯草桿菌二聯(lián)活菌顆粒和氨茶堿的選擇 |
| 4.3 肺腸合治法防治腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘疾病的理論基礎(chǔ) |
| 4.4 加味升降散對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑影響的實驗研究 |
| 4.5 調(diào)節(jié)相關(guān)效應(yīng)物質(zhì)表達(dá),改善氣道重塑 |
| 結(jié)語 |
| 展望與問題 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄1：綜述 |
| 參考文獻 |
| 附圖1 |
| 附圖2 |
| 附圖3 |
| 附圖4 |
| 附圖5 |
| 附圖6 |
| 在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果 |
四、巴布膏對豚鼠哮喘模型基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制物水平的影響（論文參考文獻）
- [1]不同處理方式下艾燃燒生成物對ApoE-/-小鼠炎癥免疫平衡的影響[D]. 黃躍平. 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2021
- [2]清血毒顆粒合劑經(jīng)Spred-1蛋白治療尋常型銀屑?。ㄑ獰嶙C）機制的研究[D]. 龔堅. 江西中醫(yī)藥大學(xué), 2020
- [3]化濁生新膏在鼻竇炎內(nèi)鏡手術(shù)后的療效觀察及對基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、7、9表達(dá)影響的研究[D]. 嚴(yán)嘯天. 南京中醫(yī)藥大學(xué), 2019(08)
- [4]從哮喘氣道平滑肌增厚探討“防風(fēng)—烏梅”配伍的機制[D]. 賀前松. 成都中醫(yī)藥大學(xué), 2019(04)
- [5]基于全基因表達(dá)譜揭示天灸藥物白芥子散對哮喘大鼠免疫穩(wěn)態(tài)重建的分子機制研究[D]. 閆興柱. 山西中醫(yī)藥大學(xué), 2018(01)
- [6]白芥子涂法穴位貼敷對哮喘豚鼠氣道高敏感性的作用及機制研究[D]. 李寧. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué), 2017(05)
- [7]瘤果黑種草子抗慢性阻塞性肺病的組分優(yōu)化及免疫作用機理研究[D]. 曹園. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2017(05)
- [8]基于皮部絡(luò)脈理論探討清肺通絡(luò)膏對幼齡大鼠RSV肺炎多靶點作用機制[D]. 張秀英. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué), 2016(01)
- [9]陽和平喘顆粒對哮喘大鼠肺組織MMP-9和VEGF表達(dá)影響[J]. 丁偉偉,徐增梅,童佳兵,楊程,童祥麗,陸梅,李澤庚. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2016(01)
- [10]“肺腸合治法”對腸道菌群失調(diào)合并過敏性哮喘大鼠氣道重塑的免疫調(diào)節(jié)作用機制研究[D]. 官菊梅. 成都中醫(yī)藥大學(xué), 2015(05)
標(biāo)簽：哮喘論文; 基質(zhì)金屬蛋白酶論文; 顯著性差異論文; 血清蛋白論文; 顯著性水平論文;