一、菊苣假單胞菌對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的降解作用初報(bào)（論文文獻(xiàn)綜述）
戈建珍[1]（2021）在《果園農(nóng)藥對白三葉青貯品質(zhì)及其微生物群落的影響》文中研究表明果園覆蓋模式在全球廣泛應(yīng)用,果園覆蓋植物對擴(kuò)大飼料資源具有十分重要的意義,但農(nóng)藥殘留很大程度上限制了其飼用價(jià)值。為探索科學(xué)、安全利用果園覆蓋植物的方法,緩解我國飼料供應(yīng)不足的問題,本文研究了果園農(nóng)藥對黃土高原蘋果園最廣泛種植的牧草白三葉（Trifolium repens）青貯品質(zhì)及微生物的影響。首先通過將5種果園常用農(nóng)藥（毒死蜱、敵百蟲、多菌靈、戊唑醇和高效氯氰菊酯）分別以低于推薦濃度（RU-）、推薦濃度（RU）、高于推薦濃度（RU+）噴施于白三葉表面,以噴水的白三葉為對照,在室溫下青貯發(fā)酵60 d,研究果園覆蓋植物白三葉青貯后5種果園農(nóng)藥的降解情況、農(nóng)藥濃度對其降解作用的影響以及5種農(nóng)藥對白三葉青貯品質(zhì)及其營養(yǎng)價(jià)值的影響。然后,利用16S高通量測序技術(shù)對噴施多菌靈的白三葉青貯關(guān)鍵時(shí)期的微生物菌群動(dòng)態(tài)變化情況進(jìn)行研究。主要研究結(jié)果如下:（1）青貯后高效氯氰菊酯降解率最高,不同噴施濃度下降解率均大于99%,戊唑醇為72.5%-80.3%,敵百蟲為71.1%-83.2%,多菌靈為59.6%-70.7%,毒死蜱為47.8%-64.8%。毒死蜱、敵百蟲、多菌靈、戊唑醇噴施的濃度越高,其降解率越高。白三葉噴施毒死蜱、敵百蟲、多菌靈后經(jīng)青貯發(fā)酵,農(nóng)藥殘留雖顯著減少（P<0.05）,但殘留量仍高于歐洲食品安全局規(guī)定的作物類動(dòng)物飼料中農(nóng)藥最大殘留量;噴施不同濃度戊唑醇、高效氯氰菊酯的白三葉經(jīng)發(fā)酵后農(nóng)藥殘留均遠(yuǎn)低于安全標(biāo)準(zhǔn)。（2）與對照相比,各處理均增加了白三葉青貯發(fā)酵乳酸、乙酸、丙酸的產(chǎn)生,p H值降低。高效氯氰菊酯（3.3-3.6 mg/kg、0.9-1.1 mg/kg）、多菌靈（3.0-3.5 mg/kg、0.6-0.7mg/kg）、戊唑醇（3.3-3.5 mg/kg、0.8-0.9 mg/kg）、敵百蟲（3.2-3.4 mg/kg、0.7-0.9 mg/kg）處理后青貯白三葉中乳酸、乙酸含量顯著高于毒死蜱（2.4-3.0 mg/kg、0.4-0.6 mg/kg）處理（P<0.05）,農(nóng)藥多菌靈、戊唑醇處理后,青貯白三葉中丙酸含量顯著高于其他處理（P<0.05）。（3）與RU-濃度相比,噴施RU+濃度毒死蜱的青貯白三葉中,乳酸含量顯著減少（P<0.05）,乙酸、丙酸含量顯著增加,p H值顯著減小（P<0.05）;RU+濃度敵百蟲處理的青貯白三葉中乳酸、乙酸含量減少,丙酸含量增加,p H值增大;RU+濃度多菌靈處理的青貯白三葉中乳酸、乙酸、丙酸含量均顯著增加（P<0.05）,p H值無顯著變化;RU+濃度戊唑醇處理的青貯白三葉中,乳酸、乙酸和丙酸含量顯著降低（P<0.05）,p H值無顯著變化;RU+濃度高效氯氰菊酯處理的青貯白三葉中,乳酸、丙酸含量和p H值均無顯著變化。（4）添加農(nóng)藥后青貯對白三葉的干物質(zhì)（DM）、粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、氨態(tài)氮的含量影響顯著（P<0.05）,對粗纖維（CF）、酸性洗滌纖維（ADF）和中性洗滌纖維（NDF）無顯著影響。（5）噴施多菌靈后顯著改變了白三葉青貯細(xì)菌的群落構(gòu)成（P<0.05）,多菌靈噴施促進(jìn)了青貯的菌群豐度、多樣性的增加;隨著時(shí)間的推移,多菌靈降解,菌群豐度先增加后減少、菌群多樣性持續(xù)增加。隨著青貯時(shí)間的推移,多菌靈逐漸降解,寡養(yǎng)單胞菌屬、腸桿菌屬、芽孢桿菌屬等具有降解多菌靈功能的菌群豐度減少。綜上所述,具高效氯氰菊酯、戊唑醇的白三葉青貯后,農(nóng)藥殘留達(dá)到安全飼用標(biāo)準(zhǔn);不同性質(zhì)的5種果園農(nóng)藥對青貯白三葉營養(yǎng)價(jià)值無負(fù)面影響,研究結(jié)果可為具有農(nóng)藥殘留的白三葉青貯飼料的飼用安全性和果園覆蓋植物資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
陳藝文,陳成聰,莊明珠,金珊[2]（2020）在《茶葉農(nóng)殘降解研究進(jìn)展》文中認(rèn)為農(nóng)藥在茶樹病蟲害的防控中發(fā)揮重要作用,但是農(nóng)藥大量、無節(jié)制的使用可能帶來茶葉食品安全問題,并造成環(huán)境污染。本文綜述了近年來茶葉農(nóng)藥殘留降解技術(shù)的相關(guān)研究,按照茶葉生產(chǎn)順序,從鮮葉、加工、成品茶到貯存時(shí)的農(nóng)藥殘留降解進(jìn)程與相關(guān)的農(nóng)殘降解方法進(jìn)行分析與探討,以期為提高茶葉品質(zhì)、保障生產(chǎn)和消費(fèi)安全提供參考。
張亞亞[3]（2019）在《有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的篩選及菌劑的制備》文中研究表明農(nóng)民通常以噴灑農(nóng)藥的方式防治作物中病蟲害。然而,隨著農(nóng)藥的廣泛使用,危害也與日俱增。微生物菌劑因具有高效、低成本、無污染、無副作用等優(yōu)點(diǎn),不僅能提高作物產(chǎn)量,同時(shí)也可降解農(nóng)藥殘留,已成為農(nóng)業(yè)綠色發(fā)展不可或缺的產(chǎn)品。本文旨在篩選出微生物,測定其對敵敵畏的降解性能,通過16S r DNA法對優(yōu)勢降解菌進(jìn)行鑒定,選出枯草芽孢桿菌、纖維化纖維微細(xì)菌、熱帶芽孢桿菌進(jìn)行后續(xù)拮抗性和生長特性試驗(yàn),最后通過響應(yīng)面法優(yōu)化確定三株菌的配比為4:2:3時(shí)對有機(jī)磷農(nóng)藥敵敵畏的降解率最高,達(dá)到60%,降低了環(huán)境中農(nóng)藥殘留量的同時(shí)也為敵敵畏的降解提供了菌種資源,對整個(gè)生態(tài)系統(tǒng)的修復(fù)具有重要意義。1、本研究以實(shí)驗(yàn)室原有菌種枯草芽孢桿菌（S-3）、自然腐敗變質(zhì)的食物及長期受有機(jī)磷農(nóng)藥污染的土壤為菌種來源,分離、篩選得到18株菌,將這些菌依次接種到含有敵敵畏濃度為100500mg/L的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中馴化培養(yǎng),篩選出在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中生長良好、傳代穩(wěn)定的菌種,然后通過鏡檢及形態(tài)觀察初步判斷菌種類型,利用氣相色譜法測定菌種對敵敵畏的降解性能。結(jié)果表明,經(jīng)過10h后,編號為E-1、S-3、Z-7、H-9的菌種對敵敵畏的降解效果較好,分別為32.88%、31.03%、37.82%和33.72%。由于菌種S-3枯草芽孢桿菌來源于實(shí)驗(yàn)室,因此只對其它三株菌進(jìn)行鑒定,通過16S r DNA鑒定結(jié)果表明:E-1、Z-7、H-9分別為銅綠假單胞菌、纖維化纖維微細(xì)菌、熱帶芽孢桿菌,由于銅綠假單胞菌是條件致病菌,實(shí)際使用時(shí)會(huì)對周圍環(huán)境造成污染,因此,選用另外三株菌進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)的研究。2、通過枯草芽孢桿菌、纖維化纖維微細(xì)菌、熱帶芽孢桿菌的拮抗性試驗(yàn),結(jié)果表明三株菌兩兩之間互不拮抗,能夠復(fù)合培養(yǎng)。研究各菌種生長特性發(fā)現(xiàn),枯草芽孢桿菌在pH為6,溫度30℃,接種量為4%,碳源為牛肉膏時(shí)生長量達(dá)到最大;纖維化纖維微細(xì)菌在pH為6,溫度為37℃,接種量為2%,碳源為葡萄糖時(shí)生長量最大;熱帶芽孢桿菌在pH為5,溫度為30℃,接種量3%,碳源為牛肉膏時(shí)生長量最大。三株菌的最佳氮源均為酵母膏。最后通過響應(yīng)面試驗(yàn)確定,當(dāng)三株菌的最優(yōu)配比為4:2:3時(shí),復(fù)合菌劑的生長量達(dá)到最大,且對敵敵畏的降解率可達(dá)60%。
楊貞妮,郭旋,鐘近藝,辛瑜,李由然,石貴陽,張梁[4]（2019）在《重組枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)缺陷假單胞菌磷酸三酯酶及其發(fā)酵優(yōu)化》文中提出磷酸三酯酶（phosphotriesterase, PTE, EC3.1.8.1）能夠水解有機(jī)磷化合物,但其應(yīng)用一直受限于酶表達(dá)量低的問題.為了獲得高效表達(dá)的有機(jī)磷水解酶,本文構(gòu)建了PTE基因來源于缺陷假單胞菌（Pseudomonas diminuta）的重組枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis WB600）,并采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,確定了重組菌產(chǎn)酶的最佳發(fā)酵條件,同時(shí)檢測重組酶對有機(jī)磷類化合物的降解作用.結(jié)果表明,最優(yōu)的培養(yǎng)基組成為蔗糖（40 g/L）、酵母膏（40 g/L）、蛋白胨（20 g/L）、磷酸氫二鉀（2 g/L）、硫酸錳（1 g/L）、硫酸鎂（6 g/L）.經(jīng)測定,該酶4 h內(nèi)對(5 mg/mL的甲基對硫磷、樂果以及神經(jīng)毒劑模擬劑甲基磷酸二甲酯（dimethyl methyl phosphonate, DMMP）的降解率分別達(dá)到98%, 92%, 73%,且DMMP在12 h內(nèi)也完全降解.本文實(shí)現(xiàn)了PTE的胞外分泌表達(dá),為研制有機(jī)磷化合物的酶基消毒劑提供了技術(shù)支持.
汪婭黎[5]（2016）在《浙江筍用竹林土壤農(nóng)藥污染特征及毒死蜱降解技術(shù)研究》文中指出竹筍素有“寒土山珍”之稱,是最受追捧的純天然綠色健康食品之一,也是我國傳統(tǒng)大宗出口的重要農(nóng)產(chǎn)品之一。目前,筍產(chǎn)業(yè)已成為我國林業(yè)產(chǎn)業(yè)的重要組成部分和區(qū)域社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要支柱。然而,隨著人們對筍用竹林經(jīng)營強(qiáng)度的不斷提高,尤其是冬筍覆蓋等高強(qiáng)度農(nóng)業(yè)經(jīng)營措施的廣泛應(yīng)用,竹筍病蟲害日趨嚴(yán)重。為防治竹筍病蟲害,上個(gè)世紀(jì)八九十年代,高毒速效化學(xué)農(nóng)藥被廣泛使用,造成了嚴(yán)重的竹林土壤農(nóng)藥污染,并引起竹筍農(nóng)藥殘留超標(biāo)等食品安全問題。本研究以浙江省主要筍用雷竹林為研究對象,通過取樣檢測分析筍用雷竹林土壤農(nóng)藥污染的現(xiàn)狀,并與筍用竹林土壤農(nóng)藥污染的歷史資料進(jìn)行對比,分析浙江省主要雷竹筍產(chǎn)區(qū)土壤農(nóng)藥污染的變化趨勢;根據(jù)土壤取樣分析結(jié)果,選擇農(nóng)藥殘留污染最重的毒死蜱為耙標(biāo),采用微生物降解和堿性物質(zhì)降解這兩種手段,研究筍用竹林土壤毒死蜱污染治理技術(shù)。研究結(jié)果如下:（1）在德清、臨安、富陽、龍游、縉云和慶元六個(gè)主要筍產(chǎn)區(qū)共采集土壤樣品349份,檢測到13種有機(jī)農(nóng)藥殘留,分別為α-HCH、β-HCH、γ-HCH、δ-HCH、p,p’-DDT、p,p’-DDE、五氯硝基苯、百菌清、三氯殺螨醇、毒死蜱、樂果、氯氰菊酯和氰戊菊酯;在所有檢出的農(nóng)藥種類中,毒死蜱的檢出率最高,其最高殘留量為200.00 ng/g;與2003-2004年的歷史檢測資料相比,農(nóng)藥污染的種類少了9種,檢出率和濃度均有所降低,表明浙江省雷竹筍用林土壤農(nóng)藥殘留污染水平呈明顯的下降趨勢。（2）有機(jī)材料覆蓋、土壤酸堿度、竹林土壤的歷史背景和新土覆蓋等經(jīng)營管理措施對土壤農(nóng)藥殘留有顯著的影響,是決定污染水平的主要因素。（3）室內(nèi)降解試驗(yàn)結(jié)果表明,不動(dòng)桿菌Acinetobacter sp.、蠟樣芽孢桿菌Bacillus cereus和銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa在20 d內(nèi)對毒死蜱的降解率分別為89.46±4.72%、83.07±5.83%和75.59±1.14%,無菌對照組對毒死蜱的降解率為59.33±4.39%,三種菌與對照間差異顯著（F=26.323,df=3;P=0.0002）;石灰能有效促進(jìn)毒死蜱的降解,在0.006 g/L的石灰濃度條件下,20 d內(nèi)毒死蜱的降解率為72.58±5.41%,顯著高于對照組的40.35±7.07%（F=38.873,df=1,P=0.0034）。（4）野外試驗(yàn)研究結(jié)果表明,石灰和堿性肥料石灰氮都能夠有效地促進(jìn)毒死蜱的降解。將石灰按照85、135、185和235 g/m2劑量均勻施于土壤,毒死蜱的半衰期分別為:12.38 d,8.25 d,6.73 d和10.35 d,而對照組毒死蜱的半衰期為19.80d;將石灰氮按照60、90和120 g/m2劑量均勻施于土壤,毒死蜱的半衰期分別為:16.12 d,11.75 d和11.00 d;堿性物質(zhì)處理的毒死蜱半衰期均比對照組有所縮短。（5）將蠟樣芽孢桿菌和不動(dòng)桿菌的菌懸液（菌體密度均為108個(gè)/m L）按照50ml/m2劑量噴灑于野外竹林土壤,63天后毒死蜱的降解率達(dá)到93.38±0.55%和94.69±0.92%,半衰期分別為17.77 d和15.75 d,空白對照的降解率為90.45±1.54%,半衰期為19.8 d,表明蠟樣芽孢桿菌和不動(dòng)桿菌在野外也能夠在一定程度上促進(jìn)毒死蜱的降解,但差異并不顯著（F=4.959,df=2,P=0.054）。（6）根據(jù)上述研究結(jié)果,結(jié)合冬筍覆蓋等高強(qiáng)度經(jīng)營引起的竹林土壤酸化問題,我們建議在冬筍覆蓋之前按照185 g/m2濃度施用石灰或者90 g/m2濃度施用石灰氮堿性肥料,可以有效修復(fù)毒死蜱在筍用竹林中的殘留污染。
馮推紫[6]（2015）在《沼澤紅假單胞菌PSB06抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的基因克隆與原核表達(dá)》文中認(rèn)為煙草花葉病毒TMV是重要的農(nóng)作物病害的病原物,危害農(nóng)作物并造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來,由于化學(xué)防治經(jīng)濟(jì)作物病害會(huì)造成對人體的危害和重大的環(huán)境污染,人們倡導(dǎo)使用無公害產(chǎn)品防治農(nóng)作物病害。蛋白農(nóng)藥是一種新型的生物農(nóng)藥,對人畜無害,環(huán)境友好,既能提高農(nóng)產(chǎn)品附加值,又能增加經(jīng)濟(jì)收益,具有廣闊的市場前景和良好的市場競爭力。光合細(xì)菌PSB是可以應(yīng)用于農(nóng)業(yè)作為有機(jī)肥、降解農(nóng)藥殘留等的一種有益菌,我們發(fā)現(xiàn)其有抗辣椒病毒病效果,但其作用機(jī)制卻未見報(bào)道。本研究首次發(fā)現(xiàn)光合細(xì)菌PSB06菌液中含有可以抑制TMV活性的蛋白成分高氯酸溶性酶PSP,并命名為Rhp-PSP。高氯酸溶性酶PSP是一種核糖核酸內(nèi)切酶,在無細(xì)胞翻譯體系中能抑制蛋白合成,根據(jù)報(bào)道,PSP大多數(shù)都是在動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn),而在微生物中鮮有被報(bào)道。為了進(jìn)一步闡述Rhp-PSP與TMV互作過程中的分子機(jī)制,需要大量獲取重組蛋白。本論文的目的是采用原核表達(dá)技術(shù),進(jìn)行蛋白基因的克隆分析,大量制備Rhp-PSP蛋白,為下一步抗病機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：（1）通過活化光合細(xì)菌PSB06菌株,提取PSB06菌株總DNA,進(jìn)行16S rDNA片段的PCR擴(kuò)增及測序,結(jié)果表明試驗(yàn)菌株為PSB06菌株；（2）通過設(shè)計(jì)篩選特異性高的PSP引物,PCR擴(kuò)增獲得Rhp-PSP全長片段基因,插入T5載體中進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化,測序分析結(jié)果確定了目的片段Rhp-PSP序列的完整性和準(zhǔn)確性；（3）將目的基因Rhp-PSP插入E1表達(dá)載體中,在Rosetta感受態(tài)細(xì)胞中轉(zhuǎn)化,加IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白,進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測,結(jié)果表明目的基因Rhp-PSP表達(dá)成功。
彭云,歐陽進(jìn),魯耀,劉智強(qiáng)[7]（2015）在《煙葉農(nóng)殘管控措施研究綜述》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理煙草病蟲害的發(fā)生是影響我國煙葉產(chǎn)質(zhì)量的主要因素之一,目前煙草病蟲害的防治主要以施用各種化學(xué)農(nóng)藥為主,長期、大量施用化學(xué)農(nóng)藥易造成土壤、灌溉水和煙葉中農(nóng)殘超標(biāo)的問題;煙草作為吸食品,隨著吸煙與健康問題越來越受到人們的關(guān)注,煙葉及卷煙產(chǎn)品農(nóng)藥殘留問題已經(jīng)引起世界各國的重視,而解決煙草農(nóng)藥殘留也成為煙草行業(yè)工作中的重點(diǎn)。由此,筆者從煙葉及卷煙產(chǎn)品農(nóng)殘最高限量標(biāo)準(zhǔn)、煙葉農(nóng)藥殘留來源及影響因素、煙葉農(nóng)藥殘留量及消解速度、煙葉農(nóng)殘向卷煙煙氣的轉(zhuǎn)移及從技術(shù)、管理和思想意識三個(gè)層面的煙葉農(nóng)殘管控措施進(jìn)行綜述,為解決煙草中農(nóng)殘問題提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
趙杰宏[8]（2009）在《有機(jī)磷水解酶基因OPD轉(zhuǎn)化番茄、黃瓜降解農(nóng)藥殘留的研究》文中研究指明化學(xué)農(nóng)藥給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來巨大經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí),由于施用不當(dāng)或?yàn)E用農(nóng)藥也給環(huán)境造成多種污染,其中使用量最大、毒性較高的有機(jī)磷類殺蟲劑和除草劑尤其如此。基于這種現(xiàn)狀,本研究試圖利用微生物源有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶OPH的編碼基因OPD,構(gòu)建組成性表達(dá)載體和果實(shí)特異性表達(dá)載體,分別遺傳轉(zhuǎn)化番茄和黃瓜,通過基因工程提高它們降解有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的能力,以減少番茄和黃瓜中農(nóng)藥殘留給人們的健康造成不良影響。獲得如下研究結(jié)果。（1）表達(dá)載體構(gòu)建與番茄瞬時(shí)表達(dá)分析構(gòu)建了CaMV 35S驅(qū)動(dòng)OPD的表達(dá)載體pSOP?？寺》压麑?shí)特異性啟動(dòng)子E8,構(gòu)建了E8驅(qū)動(dòng)OPD的表達(dá)載體pSE8OP。在番茄果實(shí)中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)分析,證明OPD基因能夠在番茄果實(shí)中獲得表達(dá)。利用全波長掃描和熒光檢測,亦證明番茄瞬時(shí)表達(dá)的OPH具有水解有機(jī)磷農(nóng)藥蠅毒磷的活性,最大酶活約11.59U/mg可溶性蛋白。建立的番茄瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng),可以在1周左右快速有效地檢測基因表達(dá)能力。（2）轉(zhuǎn)基因黃瓜表達(dá)有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶分析優(yōu)選出津研4號黃瓜（Cucumis sativus L.Jinyan 4）的再生和轉(zhuǎn)化條件。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo),把35S-OPD表達(dá)元件轉(zhuǎn)化到津研4號黃瓜中,篩選出9株Kan抗性轉(zhuǎn)化苗,檢測其中3株GUS陽性轉(zhuǎn)化苗的葉片對有機(jī)磷農(nóng)藥蠅毒磷的降解能力,其中c-2株系的活性最高,酶活達(dá)到7.82μmol/mg·min,c-1株系的酶活為5.6μmol/mg·min,c-3株系的酶活為3.8μmnol/mg·min。首次通過表達(dá)有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶OPH,提高了黃瓜降解有機(jī)磷農(nóng)藥的能力。（3）轉(zhuǎn)基因番茄表達(dá)有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶分析優(yōu)選出Micro-Tom番茄（Solanum lycopersicum cv.Micro-Tom）的再生和轉(zhuǎn)化條件。分別把35S-OPD和E8-OPD表達(dá)元件轉(zhuǎn)化到Micro-Tom番茄中。通過GUS染色、PCR檢測和Southern blotting分析,證明OPD基因已整合進(jìn)轉(zhuǎn)基因植株基因組中,具有1個(gè)拷貝。通過RT-PCR分析發(fā)現(xiàn),E8驅(qū)動(dòng)OPD基因在番茄果實(shí)中獲得表達(dá),但在葉片中未能檢測到OPD基因的表達(dá)。通過檢測不同時(shí)期果實(shí)中有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶的活性,發(fā)現(xiàn)番茄在幼果期就表現(xiàn)出水解蠅毒磷活性,酶活達(dá)到43.8±4.5μmol/mg·min;青果期酶活是非轉(zhuǎn)基因番茄的3倍以上,達(dá)到46.6±5.7μmol/mg·min;破色期酶活是非轉(zhuǎn)基因番茄的12倍以上,達(dá)到101.0±4.3μmol/mg·min。轉(zhuǎn)基因番茄OPH酶降解蠅毒磷的Vmax為2.73μmol/mg·min,Km為4.04μmol/L。比較轉(zhuǎn)基因番茄和非轉(zhuǎn)基因番茄對蠅毒磷的降解能力,結(jié)果表明非轉(zhuǎn)基因番茄對蠅毒磷有很低的酶活性,轉(zhuǎn)基因番茄通過表達(dá)有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶OPH提高了對蠅毒磷的降解能力。首次通過在番茄果實(shí)中特異性表達(dá)OPH,提高了果實(shí)降解有機(jī)磷農(nóng)藥的能力,同時(shí)也不足以降低葉子上噴施農(nóng)藥的藥效。（4）重組OPH酶性質(zhì)分析轉(zhuǎn)基因番茄重組表達(dá)OPH的最適反應(yīng)溫度為30℃,最適pH為9.0,溫度穩(wěn)定性高,70℃時(shí)仍保留54%的酶活;在Co2+存在時(shí)酶活最高,是天然Zn2+條件下酶活的2倍以上;易受到螯合劑EDTA和還原劑SDS、β-ME、TritonX-100和DTT的抑制;果實(shí)特異性表達(dá)OPH使番茄降解對硫磷的能力提高了2倍以上,降解毒死蜱能力提高了3-7倍,對樂果降解影響不明顯。HPLC分析20μg/ml對硫磷或毒死蜱中浸泡24h后番茄的農(nóng)藥殘留,結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因番茄葉子和果實(shí)中的對硫磷殘留比非轉(zhuǎn)基因番茄的分別少8.1%和40.0%,轉(zhuǎn)基因番茄果實(shí)中毒死蜱殘留比非轉(zhuǎn)基因番茄的少40.6%,轉(zhuǎn)基因番茄能顯著提高有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的降解能力,并且具有果實(shí)特異性。重組OPH降解對硫磷的Vmax為1.17μxmol/mg·min,Km為11.15μmol/L;降解毒死蜱的Vmax為8.80μmol/mg·min,Km為5.91μmol/L。表現(xiàn)出與微生物源OPH不同的特征,可能與OPH翻譯后修飾和定位有關(guān)。OPH翻譯后有8個(gè)絲氨酸、6個(gè)蘇氨酸和2個(gè)酪氨酸分別被磷酸化。這三種氨基酸往往是酶的活性中心,其磷酸化修飾會(huì)從結(jié)構(gòu)到功能上影響OPH的活性和代謝模式。（5）OPH、GUS和NptⅡ潛在致敏性的生物信息學(xué)評估首次按照FAO/WHO決策方案和Codex指標(biāo),使用3大過敏原預(yù)測網(wǎng)站的現(xiàn)存數(shù)據(jù)和預(yù)測算法,對OPH、GUS和NptⅡ的潛在食品致敏性進(jìn)行評估。在線Blast或Fasta比對分析發(fā)現(xiàn),OPH、GUS和NptⅡ的全序列匹配性和連續(xù)80aa匹配性皆不存在致敏性可能。連續(xù)6aa匹配中,OPH有2個(gè)片段與大豆、小麥和橡膠樹前纖維蛋白,以及德國蟑螂過敏原相關(guān)蛋白存在序列一致;GUS有1個(gè)片段與埃及伊蚊唾液腺過敏原存在序列一致;NptⅡ有1個(gè)片段與搖蚊血紅蛋白過敏原存在序列一致,但匹配的6aa序列皆不在各蛋白抗原性決定部位。初步說明用于轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)的OPH、GUS和NptⅡ不具有潛在的致敏性風(fēng)險(xiǎn)。（6）降解有機(jī)磷樂果菌株的分離與鑒定經(jīng)梯度富集和馴化,從貴陽花溪的農(nóng)田土壤中,分離、篩選出兩株具有降解有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的真菌菌株F1和F2。比較分析發(fā)現(xiàn),F1菌株降解樂果能力顯著比F2菌株高,但是耐受性不如F2菌株。進(jìn)一步分析三種碳源對F1菌株降解能力的影響,發(fā)現(xiàn)F1菌株在BM培養(yǎng)液中,能夠快速降解100mg/L樂果,但是補(bǔ)充的碳源會(huì)延遲菌株對樂果的降解。經(jīng)形態(tài)觀察和rDNA ITS序列分析,證明F1菌株屬于鐮刀菌屬（Fusarium sp.）。首次從貴州農(nóng)田土壤中篩選出降解樂果的鐮刀菌Fusarium sp.F1,為開發(fā)新穎的農(nóng)藥降解酶和降解基因用于進(jìn)一步轉(zhuǎn)基因植物培育奠定了基礎(chǔ)。
黃雅[9]（2009）在《微生物對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果在水—?dú)饨缑鎿]發(fā)與降解的研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理近年來,由于害蟲抗藥性的增強(qiáng),使用農(nóng)藥的濃度和次數(shù)不斷增加,濫用和亂用高毒、高殘留農(nóng)藥的現(xiàn)象屢禁不止,大量殘留在蔬菜上的農(nóng)藥會(huì)對人體產(chǎn)生直接毒害,在人體內(nèi)產(chǎn)生積累和富集,直接影響到人類的健康。利用新分離的蠟狀芽孢桿菌和購買的銅綠假單胞菌,采用固相萃取-氣相色譜法對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果進(jìn)行相應(yīng)的檢測,研究有機(jī)磷農(nóng)藥樂果在受試微生物和受試條件下的水解、微生物降解和揮發(fā)的規(guī)律,建立了樂果的水解動(dòng)力學(xué)方程和在水-氣界面的揮發(fā)動(dòng)力學(xué)方程。樂果的水解試驗(yàn)結(jié)果表明樂果的水解速率受pH值和溫度影響顯著。pH為5的酸性條件,樂果相對穩(wěn)定,隨著pH值的增大,樂果水解速率明顯增大。pH值升高兩個(gè)單位,樂果水解反應(yīng)速率平均增大了12倍。樂果的水解速率隨溫度升高而加快,溫度每升高10℃,樂果的水解速率常數(shù)增大為原來的2倍。從長期施用樂果的土壤中分離出一株高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的細(xì)菌,通過形態(tài)特征、生理生化、脂肪酸細(xì)菌鑒定系統(tǒng)和16s rDNA測序?qū)ζ滂b定為蠟狀芽孢桿菌（GB-1）。GB-1比文獻(xiàn)報(bào)道活躍的銅綠假單胞菌（P.a）對樂果具有更好的降解效果,120h時(shí)菌株P(guān).a對樂果的降解率為71.6%,菌株GB-1對樂果的降解率為88.9%。溫度變化對菌株的生長和降解率影響顯著。菌株GB-1和P.a能夠適應(yīng)的溫度范圍較廣,在pH5.09.0與1742℃均能生長并有效降解樂果,在中性條件下的生長優(yōu)于酸性和堿性條件,最佳降解溫度為32℃。在不同菌劑量的條件下,菌株GB-1和P.a對樂果降解率隨菌劑量的增加而提高,當(dāng)菌劑量增大到4%時(shí),降解率增加的趨勢將變緩。樂果在水-氣界面的揮發(fā)速率隨著溫度的升高、氣流速度的增大呈現(xiàn)增快的趨勢。溫度每升高10℃,樂果的揮發(fā)速率常數(shù)約增大為原來的1.5倍。氣流速度從40L/h增大到160h/L,揮發(fā)速率增大了2.8倍。通過對樂果的水解、微生物降解和揮發(fā)規(guī)律的研究,分別建立了樂果水解動(dòng)力學(xué)方程和樂果在水-氣界面的揮發(fā)動(dòng)力學(xué)方程,均符合一級動(dòng)力學(xué)方程。
黃雅,李政一,趙博生[10]（2009）在《有機(jī)磷農(nóng)藥樂果降解的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展》文中指出有機(jī)磷農(nóng)藥一方面能有效防治農(nóng)林病蟲害,造福于人類,另一方面也給人類賴于生存的環(huán)境帶來危害。有機(jī)磷農(nóng)藥在環(huán)境中的降解性能,是評價(jià)有機(jī)磷農(nóng)藥對環(huán)境危害影響的重要指標(biāo),有機(jī)磷農(nóng)藥在環(huán)境中的殘留時(shí)間越長,對環(huán)境的污染及其對各種環(huán)境生物,甚至對人類的危害也越大。有機(jī)磷農(nóng)藥在環(huán)境中的降解,包括微生物降解、光化學(xué)降解、化學(xué)氧化降解和超聲波降解。不同的降解方式,由于影響因素和相關(guān)機(jī)理的不同,各種降解特性存在著一定的差異。
二、菊苣假單胞菌對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的降解作用初報(bào)（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、菊苣假單胞菌對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的降解作用初報(bào)（論文提綱范文）
（1）果園農(nóng)藥對白三葉青貯品質(zhì)及其微生物群落的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 果園覆蓋植物的研究 |
| 1.1.1 果園覆蓋植物的發(fā)展概況 |
| 1.1.2 果園覆蓋植物對果園的作用 |
| 1.1.3 果園覆蓋植物的綜合利用 |
| 1.1.4 白三葉作為果園覆蓋植物的特點(diǎn)及價(jià)值 |
| 1.2 果園生產(chǎn)中農(nóng)藥殘留研究 |
| 1.2.1 果園中常用農(nóng)藥殘留研究 |
| 1.2.2 果園飼用植物農(nóng)藥殘留的研究 |
| 1.3 農(nóng)藥殘留降解研究 |
| 1.4 青貯技術(shù)研究 |
| 1.4.1 青貯概念及原理 |
| 1.4.2 青貯方法、品質(zhì)鑒定指標(biāo) |
| 1.4.3 青貯微生物的研究進(jìn)展 |
| 1.5 選題目的與意義 |
| 1.6 研究內(nèi)容 |
| 1.7 技術(shù)路線 |
| 第二章 白三葉青貯對不同初始濃度5 種殘留農(nóng)藥降解影響 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 2.1.3 樣品采集 |
| 2.1.4 農(nóng)藥殘留測定 |
| 2.1.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 不同濃度5 種農(nóng)藥對白三葉青貯飼料品質(zhì)的影響 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 3.1.3 樣品采集 |
| 3.1.4 測定指標(biāo)與方法 |
| 3.1.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 不同初始濃度5 種農(nóng)藥對白三葉青貯飼料品質(zhì)的影響 |
| 3.2.2 不同初始濃度5 種農(nóng)藥對白三葉青貯飼料營養(yǎng)價(jià)值的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 不同初始濃度5 種農(nóng)藥對白三葉青貯飼料品質(zhì)的影響 |
| 3.3.2 不同初始濃度5 種農(nóng)藥對白三葉青貯飼料營養(yǎng)價(jià)值的影響 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 多菌靈農(nóng)藥對白三葉青貯微生物細(xì)菌群落的影響 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 4.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 4.1.3 樣品采集 |
| 4.1.4 測定指標(biāo)與方法 |
| 4.1.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 4.2 結(jié)果分析 |
| 4.2.1 青貯微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性分析 |
| 4.2.2 微生物群落α多樣性分析 |
| 4.2.3 噴施多菌靈的白三葉青貯發(fā)酵過程中菌群結(jié)構(gòu)分析 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 5.1 結(jié)論 |
| 5.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 5.3 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄A |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡歷 |
（2）茶葉農(nóng)殘降解研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 茶鮮葉中農(nóng)藥殘留的降解 |
| 1.1 自然條件下農(nóng)藥殘留的降解 |
| 1.2 農(nóng)藝措施干預(yù)下農(nóng)藥殘留的降解 |
| 1.3 臭氧-光催化法降解農(nóng)藥殘留 |
| 1.4 生物技術(shù)降解農(nóng)藥殘留 |
| 2 加工過程對農(nóng)藥殘留的降解 |
| 2.1 高溫殺青 |
| 2.2 普洱茶固態(tài)發(fā)酵 |
| 3 成品茶中農(nóng)藥殘留的降解 |
| 4 貯藏過程中農(nóng)藥殘留的降解 |
| 5 問題與展望 |
（3）有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的篩選及菌劑的制備（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 本論文主要研究內(nèi)容 |
| 1.1.1 研究意義 |
| 1.1.2 研究內(nèi)容 |
| 1.1.3 技術(shù)路線 |
| 1.2 農(nóng)藥殘留概述 |
| 1.2.1 農(nóng)殘產(chǎn)生的原因 |
| 1.2.2 農(nóng)藥殘留的危害 |
| 1.2.3 農(nóng)藥殘留的控制與修復(fù) |
| 1.3 微生物修復(fù)概述 |
| 1.3.1 微生物菌劑的概念 |
| 1.3.2 微生物菌劑的分類 |
| 1.3.3 國外發(fā)展?fàn)顩r |
| 1.3.4 國內(nèi)發(fā)展?fàn)顩r |
| 1.3.5 微生物修復(fù)在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用 |
| 第二章 敵敵畏降解菌的分離、篩選及鑒定 |
| 2.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 菌種來源 |
| 2.1.2 培養(yǎng)基 |
| 2.1.3 化學(xué)試劑 |
| 2.1.4 儀器 |
| 2.1.5 敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)母液及工作液的配制 |
| 2.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 菌種的分離純化 |
| 2.2.2 微生物的馴化 |
| 2.2.3 鏡檢觀察 |
| 2.2.4 菌株降解能力的測定 |
| 2.2.5 降解菌的分子鑒定 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 菌株的分離篩選 |
| 2.3.2 鏡檢結(jié)果 |
| 2.3.3 菌株降解能力結(jié)果 |
| 2.3.4 菌株的鑒定 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 具有敵敵畏降解能力的復(fù)合菌劑的制備 |
| 3.1 試驗(yàn)材料 |
| 3.1.1 供試菌種 |
| 3.1.2 試劑、儀器 |
| 3.1.3 培養(yǎng)基 |
| 3.2 試驗(yàn)方法 |
| 3.2.1 菌種拮抗性試驗(yàn) |
| 3.2.2 液體種子液的培養(yǎng) |
| 3.2.3 菌株培養(yǎng)條件的優(yōu)化 |
| 3.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì) |
| 3.2.5 復(fù)合菌劑的制備及降解敵敵畏的測定 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 拮抗性試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.2 菌種生長特性的研究 |
| 3.3.3 響應(yīng)面結(jié)果及數(shù)據(jù)分析 |
| 3.3.4 復(fù)合菌劑的制備及降解敵敵畏的測定 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第四章 結(jié)論與討論 |
| 4.1 結(jié)論 |
| 4.2 討論 |
| 4.3 論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 4.4 不足與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
（4）重組枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)缺陷假單胞菌磷酸三酯酶及其發(fā)酵優(yōu)化（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 重組枯草芽孢桿菌表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 1.3 有機(jī)磷水解酶的篩選 |
| 1.4 酶活力的測定 |
| 1.5 重組酶的純化分析 |
| 1.6 重組蛋白的SDS-PAGE分析 |
| 1.7 培養(yǎng)基優(yōu)化 |
| 1.8 重組酶對有機(jī)磷化合物降解率的測定 |
| 2 結(jié)果和分析 |
| 2.1 有機(jī)磷水解酶的篩選 |
| 2.2 磷酸三酯酶基因在B.subtilis WB600中的表達(dá) |
| 2.3 搖瓶培養(yǎng)基的優(yōu)化 |
| 2.4 重組菌株培養(yǎng)基優(yōu)化驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.5 重組酶對有機(jī)磷化合物降解率的測定 |
| 3 討論 |
（5）浙江筍用竹林土壤農(nóng)藥污染特征及毒死蜱降解技術(shù)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 我國農(nóng)業(yè)土壤污染現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 我國農(nóng)藥使用現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 中國農(nóng)業(yè)土壤農(nóng)藥殘留污染現(xiàn)狀 |
| 1.1.2.1 有機(jī)氯類農(nóng)藥 |
| 1.1.2.2 有機(jī)磷類農(nóng)藥 |
| 1.1.2.3 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥 |
| 1.2 我國竹林土壤污染現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 竹產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展與病蟲災(zāi)害的發(fā)生 |
| 1.2.2 筍用竹林土壤污染現(xiàn)狀 |
| 1.3 農(nóng)業(yè)土壤農(nóng)藥污染的修復(fù) |
| 1.3.1 物理/化學(xué)修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.1.1 換土法 |
| 1.3.1.2 熱修復(fù)法 |
| 1.3.1.3 土壤淋洗技術(shù) |
| 1.3.1.4 光化學(xué)降解法 |
| 1.3.1.5 化學(xué)可滲活性柵（PRB）技術(shù) |
| 1.3.2 生物修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.2.1 動(dòng)物修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.2.2 植物修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.2.3 微生物修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.3 聯(lián)合修復(fù)技術(shù) |
| 1.3.3.1 生態(tài)化學(xué)修復(fù)法 |
| 1.3.3.2 淋洗與微生物聯(lián)合修復(fù)法 |
| 1.3.3.3 翻耕與微生物聯(lián)合修復(fù)法 |
| 1.4 本課題的研究目的和意義 |
| 第二章 浙江省竹林土壤有機(jī)農(nóng)藥污染特征與影響因子研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 樣點(diǎn)設(shè)置與取樣 |
| 2.1.2 土壤中有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留提取 |
| 2.1.3 農(nóng)藥殘留氣相色譜測定 |
| 2.1.4 農(nóng)藥殘留回收率測定 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 竹林土壤有機(jī)農(nóng)藥殘留分析 |
| 2.2.2 有機(jī)材料覆蓋對竹林土壤農(nóng)藥殘留量的影響 |
| 2.2.3 石灰對竹林土壤農(nóng)藥殘留的影響 |
| 2.2.4 竹林土壤背景對農(nóng)藥殘留的影響 |
| 2.2.5 新土覆蓋對竹林土壤農(nóng)藥殘留的影響 |
| 2.3 結(jié)論與討論 |
| 第三章 竹林土壤毒死蜱的降解研究 |
| 3.1 微生物對毒死蜱的降解研究 |
| 3.1.1 材料與方法 |
| 3.1.1.1 供試菌種 |
| 3.1.1.2 試劑和儀器 |
| 3.1.1.3 液體環(huán)境中毒死蜱的提取及液相色譜分析 |
| 3.1.1.4 土壤中毒死蜱的提取及氣相色譜分析 |
| 3.1.1.5 微生物法室內(nèi)降解試驗(yàn) |
| 3.1.1.6 野外降解試驗(yàn) |
| 3.1.2 結(jié)果與分析 |
| 3.1.2.1.毒死蜱的添加回收率 |
| 3.1.2.2 微生物室內(nèi)降解試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1.2.3 微生物野外降解試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2 堿性物質(zhì)對毒死蜱的降解研究 |
| 3.2.1 材料與方法 |
| 3.2.1.1 試劑和儀器 |
| 3.2.1.2 毒死蜱殘留的測定方法 |
| 3.2.1.3 石灰對毒死蜱的室內(nèi)降解試驗(yàn) |
| 3.2.1.4 堿性物質(zhì)對毒死蜱降解的野外試驗(yàn) |
| 3.2.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.2.1 石灰對毒死蜱的室內(nèi)降解試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.2.2 堿性物質(zhì)對毒死蜱降解的野外試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3 結(jié)論與討論 |
| 第四章 結(jié)論與展望 |
| 4.1 結(jié)論 |
| 4.2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介 |
| 致謝 |
（6）沼澤紅假單胞菌PSB06抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的基因克隆與原核表達(dá)（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 煙草花葉病毒 |
| 1.1.1 TMV的生物學(xué)特性 |
| 1.1.2 TMV的防治 |
| 1.2 光合細(xì)菌 |
| 1.2.1 光合細(xì)菌生物學(xué)特性 |
| 1.2.2 光合細(xì)菌的應(yīng)用 |
| 1.3 高氯酸溶性蛋白PSP的研究 |
| 1.4 研究的意義 |
| 第二章 Rhp-PSP基因的克隆與表達(dá) |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 供試材料 |
| 2.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 菌種活化培養(yǎng) |
| 2.2.2 CTAB法提取菌液總DNA |
| 2.2.3 菌株16S rDNA序列的PCR擴(kuò)增 |
| 2.2.4 PCR產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳檢測 |
| 2.2.5 PCR產(chǎn)物的純化回收 |
| 2.2.6 菌株DNA測序 |
| 2.2.7 DNA與T5載體的連接轉(zhuǎn)化 |
| 2.2.8 Rhp-PSP的誘導(dǎo)表達(dá) |
| 2.2.9 質(zhì)粒的提取 |
| 2.2.10 目的基因的表達(dá) |
| 2.2.11 蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 |
| 2.2.12 重組蛋白與原蛋白的活性測定 |
| 2.3 結(jié)果分析 |
| 2.3.1 光合細(xì)菌PSB06菌液總DNA的提取 |
| 2.3.2 16S rDNA擴(kuò)增的凝膠電泳檢測分析 |
| 2.3.3 16S rDNA回收的電泳檢測分析 |
| 2.3.4 Rhp-PSP序列的查找 |
| 2.3.5 Rhp-PSP序列的電泳檢測分析 |
| 2.3.6 Rhp-PSP序列回收純化的電泳檢測分析 |
| 2.3.7 Rhp-PSP與T5載體的連接轉(zhuǎn)化 |
| 2.3.8 Rhp-PSP序列與El載體的連接轉(zhuǎn)化 |
| 2.3.9 Rhp-PSP的誘導(dǎo)表達(dá) |
| 2.3.10 目的蛋白的活性測定 |
| 2.3.11 目的蛋白的質(zhì)譜分析 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄1 試劑及培養(yǎng)基配制方法 |
| 附錄2 常用試劑及儀器 |
| 致謝 |
（8）有機(jī)磷水解酶基因OPD轉(zhuǎn)化番茄、黃瓜降解農(nóng)藥殘留的研究（論文提綱范文）
| 縮略詞列表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 農(nóng)藥殘留現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 水土農(nóng)藥殘留 |
| 1.1.2 果蔬農(nóng)藥殘留 |
| 1.1.3 中藥材農(nóng)藥殘留 |
| 1.1.4 茶葉農(nóng)藥殘留 |
| 1.1.5 煙草農(nóng)藥殘留 |
| 1.1.6 農(nóng)藥殘留對人類的危害 |
| 1.2 農(nóng)藥殘留降解資源 |
| 1.2.1 農(nóng)藥降解微生物 |
| 1.2.2 真菌降解酶 |
| 1.2.3 細(xì)菌降解酶和降解基因 |
| 1.3 有機(jī)磷農(nóng)藥水解酶OPH的研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 OPH酶促降解機(jī)理 |
| 1.3.2 OPH的重組表達(dá)和定向改造 |
| 1.3.3 OPH在監(jiān)測環(huán)境農(nóng)殘上的應(yīng)用 |
| 1.3.4 展望 |
| 1.4 農(nóng)藥殘留的植物修復(fù) |
| 1.4.1 植物直接吸收并降解農(nóng)藥 |
| 1.4.2 植物根際與微生物的協(xié)同降解 |
| 1.4.3 植物修復(fù)技術(shù)的展望 |
| 1.5 立題思路 |
| 第二章 有機(jī)磷水解酶基因OPD轉(zhuǎn)化番茄、黃瓜降解農(nóng)藥殘留的研究 |
| 第一節(jié) 表達(dá)載體構(gòu)建與番茄瞬時(shí)表達(dá)研究 |
| 2.1.1 材料與方法 |
| 2.1.1.1 材料 |
| 2.1.1.2 方法 |
| 2.1.2 結(jié)果與分析 |
| 2.1.2.1 E8啟動(dòng)子的克隆 |
| 2.1.2.2 OPD表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 2.1.2.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化番茄的GUS染色 |
| 2.1.2.4 瞬時(shí)表達(dá)OPH酶活分析 |
| 2.1.2.5 瞬時(shí)轉(zhuǎn)化番茄的RT-PCR檢測 |
| 2.1.3 討論 |
| 第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因番茄、黃瓜表達(dá)OPH研究 |
| 2.2.1 材料與方法 |
| 2.2.1.1 材料 |
| 2.2.1.2 方法 |
| 2.2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.2.1 黃瓜再生體系 |
| 2.2.2.2 轉(zhuǎn)基因黃瓜GUS染色與PCR檢測 |
| 2.2.2.3 轉(zhuǎn)基因黃瓜OPH酶活分析 |
| 2.2.2.4 番茄再生體系 |
| 2.2.2.5 轉(zhuǎn)基因番茄GUS染色和PCR檢測 |
| 2.2.2.6 轉(zhuǎn)基因番茄Southern bloting檢測 |
| 2.2.2.7 轉(zhuǎn)基因番茄RT-PCR檢測 |
| 2.2.2.8 轉(zhuǎn)基因番茄OPH酶活分析 |
| 2.2.2.9 OPH降解蠅毒磷反應(yīng)曲線 |
| 2.2.3 討論 |
| 第三節(jié) 重組表達(dá)OPH酶的理化特征分析 |
| 2.3.1 材料與方法 |
| 2.3.1.1 材料 |
| 2.3.1.2 方法 |
| 2.3.2 結(jié)果與分析 |
| 2.3.2.1 溫度對OPH降解能力的影響 |
| 2.3.2.2 pH對OPH降解能力的影響 |
| 2.3.2.3 有機(jī)溶劑和鹽離子對OPH降解能力的影響 |
| 2.3.2.4 毒死蜱、樂果和對硝基苯酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
| 2.3.2.5 OPH底物特異性分析 |
| 2.3.2.6 OPH酶促降解蠅毒磷動(dòng)力學(xué)參數(shù) |
| 2.3.2.7 OPH酶促降解毒死蜱動(dòng)力學(xué)參數(shù) |
| 2.3.2.8 OPH酶促降解對硫磷動(dòng)力學(xué)參數(shù) |
| 2.3.2.9 HPLC檢測精密度和回收率 |
| 2.3.2.10 有機(jī)磷農(nóng)殘降解能力 |
| 2.3.2.11 成熟OPH的亞細(xì)胞定位 |
| 2.3.2.12 重組表達(dá)OPH的翻譯后磷酸化修飾 |
| 2.3.3 討論 |
| 第四節(jié) 轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白的潛在致敏性評價(jià) |
| 2.4.1 材料與方法 |
| 2.4.1.1 轉(zhuǎn)基因表達(dá)的蛋白序列 |
| 2.4.1.2 序列比對 |
| 2.4.1.3 蛋白質(zhì)3D結(jié)構(gòu)預(yù)測 |
| 2.4.1.4 抗原性預(yù)測 |
| 2.4.2 結(jié)果與分析 |
| 2.4.2.1 氨基酸序列完全比對分析 |
| 2.4.2.2 SDAP數(shù)據(jù)庫完全序列比對 |
| 2.4.2.3 Farrp數(shù)據(jù)庫完全序列比對 |
| 2.4.2.4 NCBI數(shù)據(jù)庫完全序列比對 |
| 2.4.2.5 80個(gè)氨基酸框架滑行比對 |
| 2.4.2.6 6個(gè)氨基酸滑行比對 |
| 2.4.2.7 氨基酸匹配序列的空間結(jié)構(gòu)特征 |
| 2.4.2.8 蛋白質(zhì)的抗原性特征 |
| 2.4.3 討論 |
| 第三章 樂果降解真菌的分離和鑒定 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 降解真菌的富集和分離 |
| 3.2.2 不同樂果濃度降解測試 |
| 3.2.3 不同碳源對樂果降解能力的影響 |
| 3.2.4 菌株F1的ITS序列克隆 |
| 3.2.5 菌株F1的ITS序列聚類分析 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 結(jié)論與展望 |
| 4.1 研究結(jié)論 |
| 4.2 研究創(chuàng)新 |
| 4.3 工作展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
（9）微生物對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果在水—?dú)饨缑鎿]發(fā)與降解的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究的目的和意義 |
| 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 影響有機(jī)磷農(nóng)藥遷移的因素 |
| 1.2.2 有機(jī)磷農(nóng)藥的在環(huán)境中的揮發(fā) |
| 1.2.3 有機(jī)磷農(nóng)藥的降解 |
| 1.2.4 有機(jī)磷農(nóng)藥的測定 |
| 1.3 研究的主要內(nèi)容 |
| 第二章 試驗(yàn)材料與方法 |
| 2.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 供試菌種 |
| 2.1.2 藥品試劑 |
| 2.1.3 儀器設(shè)備 |
| 2.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 樂果的檢測 |
| 2.2.2 樂果的水解試驗(yàn) |
| 2.2.3 微生物對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的降解試驗(yàn) |
| 2.2.4 有機(jī)磷農(nóng)藥樂果在水-氣界面揮發(fā)試驗(yàn) |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 3.1 氣相色譜繪制樂果標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
| 3.2 樂果的水解試驗(yàn)研究 |
| 3.2.1 溫度對樂果水解速率影響 |
| 3.2.2 pH 值對樂果水解速率影響 |
| 3.2.3 樂果的水解動(dòng)力學(xué)分析 |
| 3.2.4 樂果的水解動(dòng)力學(xué)方程 |
| 3.2.5 樂果的水解機(jī)理 |
| 3.3 微生物對樂果的降解性能 |
| 3.3.1 微生物的菌種形態(tài) |
| 3.3.2 GB-1 菌種的鑒定 |
| 3.3.3 微生物生長曲線的繪制 |
| 3.3.4 微生物對樂果降解率的測定 |
| 3.3.5 微生物在不同溫度條件下的生長及降解 |
| 3.3.6 微生物在不同pH 條件下的生長及降解 |
| 3.3.7 菌劑投放量不同時(shí)樂果的降解 |
| 3.4 樂果在水-氣界面的揮發(fā) |
| 3.4.1 初始濃度對樂果在水-氣界面揮發(fā)的影響 |
| 3.4.2 溫度對樂果在水-氣界面揮發(fā)的影響 |
| 3.4.3 氣流速度對樂果在水-氣界面揮發(fā)的影響 |
| 3.4.4 樂果在水-氣界面的揮發(fā)動(dòng)力學(xué) |
| 3.5 樂果在水-氣界面的揮發(fā)與降解曲線 |
| 3.5.1 不同初始濃度的樂果在水-氣界面的揮發(fā)降解 |
| 3.5.2 菌劑量對樂果在水-氣界面的揮發(fā)與降解的影響 |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄A 氣相色譜標(biāo)準(zhǔn)工作曲線譜圖 |
| 附錄B 樂果的揮發(fā)動(dòng)力學(xué)譜圖 |
| 附錄C 質(zhì)譜檢測譜圖 |
| 附錄D GB-1 菌株鑒定報(bào)告 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（10）有機(jī)磷農(nóng)藥樂果降解的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 微生物降解 |
| 2 光催化降解 |
| 3 化學(xué)氧化降解 |
| 4 超聲波降解 |
| 5 結(jié)語 |
四、菊苣假單胞菌對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果的降解作用初報(bào)（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]果園農(nóng)藥對白三葉青貯品質(zhì)及其微生物群落的影響[D]. 戈建珍. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2021
- [2]茶葉農(nóng)殘降解研究進(jìn)展[J]. 陳藝文,陳成聰,莊明珠,金珊. 茶葉學(xué)報(bào), 2020(01)
- [3]有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌的篩選及菌劑的制備[D]. 張亞亞. 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(02)
- [4]重組枯草芽孢桿菌分泌表達(dá)缺陷假單胞菌磷酸三酯酶及其發(fā)酵優(yōu)化[J]. 楊貞妮,郭旋,鐘近藝,辛瑜,李由然,石貴陽,張梁. 中國科學(xué):生命科學(xué), 2019(05)
- [5]浙江筍用竹林土壤農(nóng)藥污染特征及毒死蜱降解技術(shù)研究[D]. 汪婭黎. 浙江農(nóng)林大學(xué), 2016(05)
- [6]沼澤紅假單胞菌PSB06抗植物病毒蛋白Rhp-PSP的基因克隆與原核表達(dá)[D]. 馮推紫. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015(02)
- [7]煙葉農(nóng)殘管控措施研究綜述[A]. 彭云,歐陽進(jìn),魯耀,劉智強(qiáng). 云南省煙草學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)年會(huì)優(yōu)秀論文集, 2015
- [8]有機(jī)磷水解酶基因OPD轉(zhuǎn)化番茄、黃瓜降解農(nóng)藥殘留的研究[D]. 趙杰宏. 貴州大學(xué), 2009(12)
- [9]微生物對有機(jī)磷農(nóng)藥樂果在水—?dú)饨缑鎿]發(fā)與降解的研究[D]. 黃雅. 北京工商大學(xué), 2009(S2)
- [10]有機(jī)磷農(nóng)藥樂果降解的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J]. 黃雅,李政一,趙博生. 環(huán)境科學(xué)與管理, 2009(04)
標(biāo)簽：有機(jī)磷論文; 農(nóng)藥殘留論文; 毒死蜱論文; 有機(jī)磷農(nóng)藥論文; 微生物發(fā)酵論文;