一、免疫刺激復(fù)合物的佐劑作用及其在獸用疫苗上的應(yīng)用（論文文獻綜述）
張學武,宋仕花[1]（2021）在《蜂膠佐劑在獸用疫苗中的應(yīng)用》文中進行了進一步梳理蜂膠是一種天然保健食品,其含有大量營養(yǎng)物質(zhì),且具有抗菌、抗病毒、抗氧化作用。目前,蜂膠作為免疫佐劑在豬、牛、羊、禽等動物疫病的細菌苗、病毒苗佐劑中都具有廣泛應(yīng)用。將蜂膠作為疫苗佐劑,可有效提高畜禽機體的抵抗力及生產(chǎn)性能,提高相應(yīng)的產(chǎn)品品質(zhì),對我國畜牧業(yè)的發(fā)展意義重大。因此,本文著重介紹蜂膠佐劑在獸用疫苗中的應(yīng)用現(xiàn)狀及開發(fā)前景,為蜂膠佐劑的合理開發(fā)應(yīng)用和深入研究奠定基礎(chǔ)。
孫夏妹[2]（2021）在《分散性水滑石納米佐劑對小鼠體液免疫的影響》文中研究表明疫苗接種作為當今比較成功的一種公共衛(wèi)生干預(yù)手段,在很長一段時間內(nèi)為保障人類及動物生命安全做出了重大貢獻。近年來,多種重大動物傳染病相繼爆發(fā),新型毒株和變異毒株不斷發(fā)展,傳統(tǒng)疫苗無法滿足當今需要,人們開始大力研發(fā)更加有效的疫苗使得新型疫苗的發(fā)展取得重要突破。與傳統(tǒng)滅活苗相比,新型疫苗存在免疫原性差、難以穿過細胞膜和在體內(nèi)易被降解等問題,需要良好的佐劑作為輔助,因此我們需要開發(fā)性能更加優(yōu)良的疫苗佐劑。畜類疫苗與人用疫苗及寵物用疫苗相比,畜類疫苗對于成本控制的要求更加嚴格,這為新型畜類疫苗的研發(fā)帶來更大的挑戰(zhàn)。在新型畜類疫苗研發(fā)的過程中,除了疫苗的安全性及有效性,疫苗的成本也是決定性因素之一,這使得多種在人用疫苗中應(yīng)用的疫苗技術(shù)無法在畜類疫苗中應(yīng)用,新型畜類疫苗佐劑種類的選擇多樣性受限。在多種新型疫苗佐劑中,價格低廉,能夠規(guī)?；a(chǎn)且具備比表面積大、生物相容性好等特點的納米材料佐劑成為有潛力的佐劑之一。納米材料有著諸多優(yōu)勢,人們對其安全性也存在擔憂。驗證一種納米材料的安全性需要大量人力財力的投入以及時間的檢驗,從實際考慮,改造現(xiàn)有的臨床佐劑,通過簡單的加工處理改變其性質(zhì)使其具備更加優(yōu)良的特性是開發(fā)新型佐劑的捷徑。鎂鋁水滑石(Mg6Al2（OH）16CO3?4H2O)完全符合這個設(shè)想。本文的目的是為了找出能刺激機體產(chǎn)生最強體液免疫的LDH納米疫苗,為此我們制備了4種LDH與抗原質(zhì)量比不同即分散性不同的LDH納米疫苗與通用鋁佐劑疫苗對比,小鼠共免疫兩次,分別從血清中的抗體滴度、疫苗在注射位點的停留時間、疫苗對脾細胞的影響以及疫苗在皮下形成的結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)等方面來進行比較疫苗對于刺激機體產(chǎn)生體液免疫的能力。本文用水滑石（LDH）裝載牛血清蛋白（BSA）利用白蛋白包被的方法制成質(zhì)量比為OB:LDH 100:40、OB:LDH 25:40、OB:LDH 5:40、OB:LDH 1.25:40四種分散性不同的納米顆粒,再裝載同等質(zhì)量的雞卵清蛋白（OVA）作為模式抗原,制成不同的納米疫苗。與裝載同樣質(zhì)量雞卵清蛋白的鋁佐劑疫苗一起利用粒度分析儀（DLS）、X射線衍射儀（XRD）、傅里葉變換紅外光譜儀（FTIR）以及透射電鏡（TEM）等儀器進行物理表征,發(fā)現(xiàn)其尺寸大小、帶電性以及分散性都有所差異。在LDH質(zhì)量不變的情況下,隨著BSA的用量增加,納米顆粒尺寸先增大后減小,帶電性由負到正,當BSA:LDH100:40時,納米顆粒成穩(wěn)定分散狀態(tài)。隨后,將25只6周齡C57/Black雌鼠隨機均分成5組,在第一天及第21天每只鼠皮下注射100 mg LDH,鋁佐劑組注射體積相同的鋁佐劑疫苗,每只疫苗含有1.5 ug OVA。隨后利用酶聯(lián)免疫吸附測定法、活體成像技術(shù)以及流式細胞術(shù)等技術(shù)來探究疫苗對體液免疫的影響。免疫后的小鼠每周眼周取血測血清中Ig G、Ig G1、Ig G2a的滴度,結(jié)果發(fā)現(xiàn)OB:LDH25:40、OB:LDH5:40抗體滴度最高。在利用活體成像技術(shù)驗證疫苗皮下停留的時間實驗中,OB:LDH25:40皮下停留時間最長。在小鼠第一次免疫7天后,將小鼠脫頸處死,取皮下結(jié)節(jié)、淋巴結(jié),制成冰凍切片,染色后觀察其結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)OB:LDH100:40結(jié)構(gòu)較為疏松,OB:LDH25:40結(jié)構(gòu)與Alum組相似,較為致密,OB:LDH5:40結(jié)構(gòu)疏松程度位于二者中間。將小鼠的脾細胞制成細胞懸液,染色后用流式細胞儀進行分析,結(jié)果表明60天后,取心、肝、脾、肺、腎制成石蠟切片HE染色,證明五組小鼠臟器并無明顯病變。綜上所述,OB:LDH5:40組在刺激機體產(chǎn)生體液免疫方面效果更好。因此以LDH為佐劑的疫苗,如果想實現(xiàn)最強的體液免疫效應(yīng),抗原與LDH的質(zhì)量比應(yīng)設(shè)置為5:40。
曹洪恩[3]（2021）在《基于Tween 80復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫佐劑研究》文中提出對于常駐的傳染性病原微生物,通過接種疫苗形成群體免疫從而產(chǎn)生免疫屏障是恢復(fù)正常學習、工作和生活狀態(tài)唯一的辦法。鼻腔黏膜免疫具有無需注射、施用方便和免疫效力高的特點,不僅能夠誘導(dǎo)系統(tǒng)和黏膜免疫應(yīng)答,而且還可以激發(fā)細胞免疫反應(yīng),已成為人們?nèi)找媲嗖A的新接種途徑。然而,由于重組蛋白和多肽抗原免疫原性弱以及鼻腔特殊的環(huán)境和結(jié)構(gòu)特點,導(dǎo)致鼻用疫苗免疫活性低,需要開發(fā)新型鼻腔黏膜免疫佐劑,提高鼻用疫苗的免疫應(yīng)答水平。本論文選擇具有增強鼻腔給藥作用或潛在免疫調(diào)節(jié)活性的表面活性劑與促進蛋白折疊的化學伴侶Tween80（T80）形成復(fù)配體系,將復(fù)配體系與模型抗原卵清蛋白（OVA）配伍,分析了 T80復(fù)合體系和OVA的相互作用;根據(jù)影響復(fù)配體系鼻腔黏膜免疫性能的物理化學性質(zhì),以及OVA在復(fù)配體系中的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性優(yōu)化選擇了佐劑的組成;研究了 T80復(fù)配體系的溶血活性和OVA模型疫苗的鼻腔黏膜免疫活性,并將具有較強免疫性能的T80復(fù)配體系與存在免疫調(diào)節(jié)活性的硒碳納米粒子（Se/C）和模擬谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）活性的二芐基二硒醚（DDSe）聯(lián)用,實現(xiàn)了佐劑的協(xié)同免疫效應(yīng)。研究結(jié)果可用于指導(dǎo)開發(fā)安全、高效、價格低廉以及易于生產(chǎn)的鼻腔黏膜免疫佐劑。1.通過佐劑組成的優(yōu)化選擇,得到了 T80與非離子表面活性劑Brij 30（B30）復(fù)配的2wt%T80/B30（4:6）小囊泡體系。T80/B30（4:6）總濃度低于cac時,T80/B30單體的烷基鏈與OVA殘基非極性側(cè)鏈及非極性側(cè)鏈形成的疏水微區(qū)作用,使OVA的三級結(jié)構(gòu)略有變化;T80/B30（4:6）總濃度在cac-cmc*之間時,T80/B30在OVA上的吸附對蛋白三級結(jié)構(gòu)的影響不大;T80/B30（4:6）總濃度高于cmc*時,T80/B30混合膠束與OVA發(fā)生作用,對OVA的三級結(jié)構(gòu)產(chǎn)生輕微的影響。2wt%T80/B30（4:6）小囊泡體系的粒徑約為30nm,是疫苗佐劑的理想尺寸,且具有較低的表面張力和較小的接觸角,有利于疫苗對鼻黏膜的潤濕和鋪展,OVA在該囊泡體系中的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)保持相對完整。2 wt%T80/B30（4:6）體系存在較好的溶血安全性,誘導(dǎo)的OVA特異性IgG抗體滴度顯著高于對照OVA（p<0.001）,其免疫應(yīng)答類型是Th2型,介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)。2.選擇與第2章中B30疏水尾鏈相同,但聚氧乙烯鏈明顯較長的聚氧乙烯-9-月桂醚（P9LE）與T80復(fù)配。當T80/P9LE（4:6）總濃度在cac-cmc*之間時,OVA的熒光強度隨T80/P9LE濃度增加變化很小;當T80/P9LE（4:6）總濃度大于cmc*后,T80/P9LE混合膠束與OVA發(fā)生較弱的相互作用,使OVA三級結(jié)構(gòu)發(fā)生微小的變化。通過佐劑組成的優(yōu)化選擇獲得了 2 wt%T80/P9LE（4:6）混合膠束體系,OVA在該體系中的二級結(jié)構(gòu)和三級均比較穩(wěn)定,且其溶血活性相對較低,誘導(dǎo)的OVA特異性IgG抗體滴度顯著高于對照OVA（p<0.001）,激發(fā)Th2型免疫應(yīng)答。與第2章中2 wt%T80/B30（4:6）相比,雖然2 wt%T80/P9LE（4:6）的鼻腔黏膜免疫活性低于2 wt%T80/B30（4:6）,但其溶血性明顯好于2 wt%T80/B30（4:6）,且對抗原蛋白結(jié)構(gòu)的影響很小。3.根據(jù)鼻腔黏膜在生理pH條件下帶負電荷的特點,引入陽離子表面活性劑氯化十六烷基吡啶（CPC）,通過優(yōu)化組成得到了 0.5 wt%T80/CPC（8:2）混合膠束體系。T80/CPC（8:2）的總濃度低于cac時,T80/CPC單體主要通過靜電作用與OVA結(jié)合,OVA的熒光強度略微降低。T80/CPC（8:2）總濃度大于cmc*后,T80/CPC混合膠束與OVA作用,使OVA的三級結(jié)構(gòu)發(fā)生輕微的變化。0.5wt%T80/CPC（8:2）體系具有較低的溶血活性,經(jīng)鼻腔免疫小鼠后,產(chǎn)生的OVA特異性IgG抗體滴度顯著高于對照OVA（p<0.001）,與陽性對照霍亂毒素B亞單位（CTB）接近。該體系明顯增強了細胞免疫,激發(fā)了略偏向Th2型的混合型免疫反應(yīng),可在鼻黏膜和肺部誘導(dǎo)高水平的OVA特異性sIgA抗體。0.5 wt%T80/CPC（8:2）誘導(dǎo)的OVA特異性IgG抗體滴度與第2章中的2 wt%T80/B30（4:6）接近,但 sIgA 抗體水平顯著高于 2 wt%T80/B30（4:6）（p<0.001）。4.將T80與陽離子電荷密度高、生活物相容性好的新型高分子陽離子表面活性劑PN320復(fù)配,通過組成的優(yōu)化獲得了 1 wt%T80/PN320（3:5）混合膠束體系。該體系與OVA復(fù)配后,Zeta電勢約為20.31 mV,可在鼻腔黏膜較好地吸附,但又不會因過高的陽離子電荷密度產(chǎn)生細胞毒性;OVA在該體系中的α-螺旋結(jié)構(gòu)是純OVA的97.8%,熒光強度為純OVA的85.1%（λex=295 nm）,較好地保持了蛋白結(jié)構(gòu)的完整性。1 wt%T80/PN320（3:5）溶血活性低,誘導(dǎo)的IgG抗體滴度略高于第2章的2 wt%T80/B30（4:6）,明顯高于第 3 章的 2 wt%T80/P9LE（4:6）（p<0.01）,與第 4 章的 0.5 wt%T80/CPC（8:2）和CTB相近,免疫應(yīng)答類型為略微偏向于Th2型的混合免疫反應(yīng)。1 wt%T80/PN320（3:5）在鼻黏膜和肺部產(chǎn)生的sIgA抗體水平顯著高于2wt%T80/B30（4:6）（p<0.001）,是非常有潛力的鼻用疫苗佐劑。5.將論文中第2到第5章中具有優(yōu)良鼻腔黏膜免疫活性的T80復(fù)配體系與存在免疫調(diào)節(jié)功能的Se/C和模擬GSH-Px活性的DDSe混合,實現(xiàn)了佐劑的協(xié)同免疫作用。與Se/C混合后,2 wt%T80/B30（4:6）體系和1 wt%T80/PN320（3:5）體系的免疫性能明顯增強。1 wt%T80/PN320（3:5）+Se/C的鼻腔黏膜免疫活性明顯強于2 wt%T80/B30（4:6）+Se/C,與CTB接近,且Se/C的加入使1wt%T80/PN320（3:5）的免疫應(yīng)答類型從略偏向于Th2型的混合免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)為略偏向Th1型的混合免疫反應(yīng),有效地增強了細胞免疫應(yīng)答。合成的Se/C新材料還具有較強的抗菌性能,進一步拓展了佐劑的用途,如疫苗防腐和抗藥性等。與DDSe聯(lián)用后,0.5%T80/CPC（8:2）體系誘導(dǎo)的OVA特異性IgG和sIgA抗體水平顯著提升,與CTB相近,且免疫應(yīng)答類型從略偏向于Th2型的混合免疫反應(yīng)轉(zhuǎn)為略偏向Th1型的混合免疫反應(yīng),明顯地增強了細胞免疫、體液免疫和黏膜免疫反應(yīng)。
林漢[4]（2021）在《基于半抗原修飾策略的新型腫瘤糖疫苗設(shè)計及免疫活性研究》文中研究指明腫瘤細胞表面過量表達的異常糖鏈,即腫瘤相關(guān)糖抗原（Tumor-associated Carbohydrate Antigens,TACAs）,在腫瘤細胞的信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)移中起著重要的作用,并且與腫瘤的惡化以及患者的不良預(yù)后密切相關(guān),是腫瘤疫苗開發(fā)的重要靶點。然而,TACAs免疫原性差,是T細胞非依賴性抗原,不能直接與主要組織相容性復(fù)合物（Major histocompatibility complex,MHCs）結(jié)合,難以激活T細胞免疫反應(yīng),給疫苗的開發(fā)造成了巨大的障礙。為了解決這個問題,傳統(tǒng)的疫苗構(gòu)建策略是將TACAs與載體蛋白偶聯(lián)制備成糖蛋白疫苗,刺激機體產(chǎn)生特異性抗體用于腫瘤的免疫治療。但是,TACAs是人體自身抗原,容易誘導(dǎo)免疫耐受和免疫抑制,進一步增加了疫苗開發(fā)的難度。因此,增強TACAs的免疫原性及打破自身免疫耐受是發(fā)展腫瘤糖疫苗的關(guān)鍵問題之一。內(nèi)源性抗體是人類體內(nèi)天然產(chǎn)生的抗體,如抗2,4-二硝基苯（2,4-dinitrophenyl,DNP）和抗鼠李糖（Rhamnose,Rha）抗體,占人體血清蛋白含量的3-8%。本論文利用人體中天然存在的上述兩種內(nèi)源性抗體增強抗原呈遞和介導(dǎo)免疫系統(tǒng)殺傷靶細胞的能力,發(fā)展基于內(nèi)源性半抗原修飾的新型糖類腫瘤疫苗和抗腫瘤藥物。主要結(jié)果如下:（1）通過半抗原DNP修飾腫瘤相關(guān)糖抗原GM3,提高TACA的免疫原性,同時增強糖抗原呈遞能力。利用化學酶法將DNP修飾到腫瘤相關(guān)糖抗原GM3末端唾液酸的C5位置,再與鑰孔血藍蛋白（Keyhole Limpet Hemocyanin,KLH）載體蛋白綴合,得到GM3-NHDNP-KLH疫苗,糖抗原負載量為6%。體內(nèi)免疫活性研究表明,在高滴度抗DNP抗體小鼠模型中,可產(chǎn)生高滴度和高親和力的特異性抗GM3-NHDNP IgG抗體,其抗體滴度是對照組的43倍。結(jié)合糖代謝工程手段使腫瘤細胞表面表達DNP修飾的GM3抗原后,流式細胞實驗表明抗體血清可以識別糖代謝工程改造的腫瘤細胞;體外補體依賴性細胞毒實驗（Complement dependent cytotoxicity,CDC）表明,抗體血清可以通過抗DNP抗體與抗GM3-NHDNP抗體發(fā)揮協(xié)同作用介導(dǎo)顯著的CDC作用殺傷腫瘤細胞,殺傷率達到45.7%。（2）通過半抗原Rha多價修飾弱免疫原性糖蛋白結(jié)合疫苗sTn-BSA,增強TACA的免疫原性,同時減少了針對載體蛋白的免疫應(yīng)答。利用化學合成法將腫瘤相關(guān)糖抗原sTn和牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin,BSA）偶聯(lián),sTn抗原負載量為7.8%,再用Rha對sTn-BSA進行修飾,得到三種不同Rha負載量的疫苗,分別為sTn-BSA-Rha1、sTn-BSA-Rha2和sTn-BSA-Rha5,Rha負載量為0.5%、1%和2.8%。體內(nèi)免疫活性研究表明,在高滴度抗Rha抗體小鼠模型中,疫苗上Rha半抗原的含量越高,產(chǎn)生的抗sTn IgG抗體越多,其中sTn-BSA-Rha5免疫產(chǎn)生的抗體滴度最高,是對照組的64倍。流式細胞實驗和體外CDC實驗表明,抗體血清可以順利識別表達sTn抗原的腫瘤細胞并介導(dǎo)顯著的CDC作用以殺死癌細胞,sTn-BSA-Rha5免疫組血清引發(fā)的殺傷率達到57.3%。（3）通過多價Rha修飾的β-環(huán)糊精（β-Cyclodextrin,β-CD）和金剛烷（Adamantane,Ada）修飾的sTn-BSA自組裝形成非共價糖蛋白綴合物疫苗,發(fā)現(xiàn)β-CD上的多價Rha能高效招募內(nèi)源性抗Rha抗體來提高疫苗的免疫活性,增強糖抗原sTn的抗原呈遞能力。通過主客體自主裝方法制備了三種不同長度PEG連接臂的非共價鍵超分子疫苗,分別為sTn-BSA-Ada6/CD-PEG1-Rha7、sTn-BSA-Ada6/CD-PEG3-Rha7和sTn-BSA-Ada6/CD-PEG6-Rha7。體內(nèi)免疫活性研究表明,在高滴度抗Rha抗體小鼠模型中,非共價鍵sTn-BSA-Ada6/CD-PEG6-Rha7疫苗產(chǎn)生的抗sTn IgG抗體滴度最高,是對照組的9.5倍。同時發(fā)現(xiàn),在正常小鼠模型中（無抗Rha抗體）,免疫前期產(chǎn)生的抗Rha抗體在免疫后期可以起到自我增強免疫應(yīng)答的作用,sTn-BSA-Ada6/CD-PEG6-Rha7免疫產(chǎn)生的sTn IgG抗體滴度是對照組的8.8倍。流式細胞實驗和體外CDC實驗表明,所有組別的抗體血清均可以識別表達sTn抗原的腫瘤細胞并介導(dǎo)高活性CDC作用殺傷腫瘤細胞。（4）通過半抗原DNP多價修飾透明質(zhì)酸（Hyaluronan,HA）,增強了HA募集抗體和殺傷腫瘤的能力?；瘜W合成了9種DNP修飾的透明質(zhì)酸多價抗體募集糖聚合物（Multivalent antibody-recruiting glycopolymers,MARGs）,分別為HA-[PEG1-DNP]2、HA-[PEG1-DNP]4、HA-[PEG1-DNP]8、HA-[PEG3-DNP]2、HA-[PEG3-DNP]4、HA-[PEG3-DNP]8、HA-[PEG6-DNP]2、HA-[PEG6-DNP]4和HA-[PEG6-DNP]8。免疫熒光和流式細胞結(jié)合實驗表明,這些MARGs能夠?qū)⒖笵NP抗體特異地募集到表達CD44的癌細胞上,并且抗體募集能力與DNP半抗原負載量呈正相關(guān)。體外細胞毒實驗表明,MARGs可以通過介導(dǎo)抗體依賴性細胞介導(dǎo)的細胞毒作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC）或CDC作用殺傷靶細胞,其中HA-[PEG3-DNP]8具有最高的細胞毒作用,ADCC和CDC的裂解率分別為34.3%和50%。HA-[PEG3-DNP]8的體內(nèi)抗腫瘤實驗表明,治療結(jié)束后HA-[PEG3-DNP]8組的腫瘤抑制率達到55%,是HA對照組的12倍。
南黎[5]（2021）在《納米甘草酸增強家兔波氏桿菌OMV免疫效果的研究》文中指出兔波氏桿菌病是由兔支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）引起的一種慢性呼吸道傳染病。該病傳播廣泛,病程較長,較難治愈,給養(yǎng)兔業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。目前,預(yù)防該病的全菌滅活疫苗的保護力較低,并且傳統(tǒng)獸用疫苗佐劑無論在其安全性方面還是誘導(dǎo)能力等方面均存在著缺陷,因此現(xiàn)階段亟需開展新型疫苗的研究。鑒于腦膜炎奈瑟菌外膜囊泡（Outer Membrane Vesicle,OMV）疫苗的成功研制,本研究對波氏桿菌OMV的制備方法進行探索,將納米化的甘草酸（Nano-Glycyrrhizic acid,GAN）作為免疫佐劑,結(jié)合波氏桿菌OMV,構(gòu)建了GAN-OMV體系,并對其體內(nèi)、體外免疫效果進行研究,為兔波氏桿菌新型亞單位疫苗的研發(fā)提供科學依據(jù),同時也為新型獸用疫苗的研發(fā)提供新的思路。1.兔波氏桿菌外膜囊泡的制備及其蛋白質(zhì)成分分析本研究確立了波氏桿菌OMV的最佳制備工藝,并對其蛋白成分進行解析。波氏桿菌OMV產(chǎn)量較低,為了提高OMV產(chǎn)量,本研究以兔波氏桿菌毒力較強菌株FX-1為研究對象,篩選出制備OMV的最優(yōu)方法,并對培養(yǎng)時間、抗生素添加量及過濾方法進行逐一優(yōu)化。采用透射電鏡、掃描電鏡和DLS等方法檢測OMV的理化性質(zhì);Bradford蛋白定量分析法、SDS-PAGE及LC-MS/MS檢測OMV的蛋白含量及組分。試驗結(jié)果顯示,超濾濃縮法是制備兔波氏桿菌OMV的較適方法;最佳培養(yǎng)時間、頭孢氨芐濃度和過濾方法分別為18 h、64μg/m L和0.45μm濾膜過濾一次。制得的OMV呈納米球形囊泡狀,平均直徑為75.66±11.84 nm。對其蛋白分析結(jié)果表明,OMV包含多種與波氏桿菌毒力和感染有關(guān)的蛋白質(zhì)。該制備工藝能夠顯著提高兔波氏桿菌OMV的產(chǎn)量,為工業(yè)化生產(chǎn)提供可能。對其結(jié)構(gòu)和蛋白成分的分析,為研發(fā)新型亞單位疫苗提供科學依據(jù)。2.納米甘草酸結(jié)合波氏桿菌OMV對小鼠巨噬細胞活性的影響將甘草酸納米化后,通過機械擠出法制備GAN-OMV,并對制得的GAN-OMV亞單位疫苗的理化性質(zhì)進行綜合評估,包括形態(tài)、粒徑、Zeta電位等檢測。結(jié)果顯示GAN與OMV成功結(jié)合,呈現(xiàn)明顯的核-殼結(jié)構(gòu)。體外試驗結(jié)果顯示GAN-OMV對巨噬細胞增殖、細胞因子分泌和細胞吞噬功能等免疫功能的影響。結(jié)果表明:GAN-OMV有效促進巨噬細胞增殖,促進巨噬細胞分泌IL-6、IL-10、IL-1β及TNF-α。胞飲和網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑是GAN-OMV進入巨噬細胞并發(fā)揮作用的主要途徑,用共聚焦進一步觀察發(fā)現(xiàn)OMV主要富集在巨噬細胞內(nèi)的溶酶體上。3.納米甘草酸結(jié)合波氏桿菌OMV對小鼠免疫應(yīng)答的影響本研究設(shè)立GAN-OMV、Alum-OMV、OMV及空白對照四個組,用實驗鼠進行免疫和攻毒試驗。試驗結(jié)果表明GAN-OMV的結(jié)合,不僅是一種穩(wěn)定的賦形作用,而且還使其具有更好的免疫學性能。血常規(guī)檢測表明GAN-OMV有效刺激淋巴細胞水平升高;間接ELISA結(jié)果表明,GAN-OMV能夠刺激小鼠血清特異性Ig G抗體水平升高,并且有效刺激特異性抗體Ig G1和Ig G2a的水平升高;GAN-OMV能有效刺激脾臟淋巴細胞的增殖,提高了脾淋巴細胞中B細胞的水平和T細胞CD4+/CD8+比率,并促進了Th1型（IFN-γ）、Th2型（IL-4）和Th17（TNF-α和IL-6）細胞因子的分泌。以上結(jié)果均表明GAN-OMV能夠有效誘導(dǎo)免疫小鼠的體液免疫與細胞免疫。此外,血清殺菌試驗和肺部含菌量檢測顯示GAN-OMV更有效提升殺菌抗體水平,并顯著減少攻毒后肺部含菌量,表明GAN-OMV能有效預(yù)防波氏桿菌的感染。
李倩,王思遠,陳禮斌,范磊,任濤[6]（2020）在《新城疫疫苗新型佐劑的研究進展》文中研究說明新城疫作為我國的一類疫病嚴重制約著我國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展,目前疫苗接種是防控該病的主要手段。在疫苗研發(fā)中,優(yōu)秀的免疫佐劑在增強免疫效果方面發(fā)揮著重要作用,本文結(jié)合新城疫疫苗新型佐劑的研究進展,對常用禽類疫苗佐劑和新型疫苗佐劑的研究概況、作用功能和優(yōu)缺點進行簡要介紹,為今后更好地研究和利用疫苗佐劑以及研發(fā)高效疫苗防控新城疫提供理論基礎(chǔ)。
涂麗裙[7]（2020）在《轉(zhuǎn)化生長因子-β2反義寡核苷酸的微生物疫苗及腫瘤疫苗的佐劑作用》文中研究說明轉(zhuǎn)化生長因子-β2（TGF-β2）對免疫應(yīng)答有全方位的負調(diào)節(jié)作用,可調(diào)節(jié)幾乎每一種適應(yīng)性免疫應(yīng)答和固有免疫應(yīng)答的細胞,包括樹突狀細胞、T細胞、B細胞、粒細胞和固有免疫淋巴樣細胞。使用免疫檢查點抑制劑治療腫瘤的成功案例提示我們:抑制免疫抑制性細胞因子TGF-β2可能是一種新的策略去研制新型疫苗佐劑。為了研制出以核酸為基礎(chǔ)的TGF-β2的抑制劑,我們設(shè)計了三個靶向人鼠的TGF-β2 m RNA3’UTR保守區(qū)域的反義寡核苷酸,并將其命名為TIO1,TIO2,TIO3。在小鼠巨噬細胞,人單核細胞及人漿細胞樣樹突狀細胞,TIO1,TIO2及TIO3均明顯下調(diào)TGF-β2的表達。在小鼠中,TIO3和TIO1,均可顯著增強微生物疫苗所誘導(dǎo)的抗體反應(yīng)。其中TIO3為佐劑的流感疫苗可抵抗流感病毒的攻擊并減輕流感病毒引起的急性肺損傷。在小鼠中,TIO3可明顯下調(diào)淋巴結(jié)及脾臟細胞CD4+T細胞及CD19+B細胞上s TGF-β2的表達,上調(diào)CD19+B細胞及CD11c+DC表面CD40,CD80,CD86,CD69及MHC II分子的表達,促進CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生IFN-γ,促進CD4+T細胞產(chǎn)生IL-4,抑制調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）的產(chǎn)生,促進CD4+T細胞和CD19+B細胞的增殖與活化,促進流感病毒感染的小鼠的肺臟中CD4+T細胞和CD8+T細胞表面CD69的表達?？偟膩碚f,通過干擾TGF-β2的表達,TIO3或TIO1,可作為新型微生物疫苗佐劑增強疫苗誘導(dǎo)的抗體反應(yīng);此外,TIO3為佐劑的膠質(zhì)瘤細胞裂解物疫苗可顯著延長原位接種膠質(zhì)瘤預(yù)防模型小鼠的生存期。TIO3可通過抑制人和小鼠的膠質(zhì)瘤細胞、CD4+T細胞和CD8+T細胞表達TGF-β2,誘生膠質(zhì)瘤特異性的CD4+T細胞和CD8+T細胞,激活NK細胞,促進CD4+T細胞和CD8+T細胞產(chǎn)生IFN-γ,上調(diào)膠質(zhì)瘤細胞表面MHCI分子的表達進而增強膠質(zhì)瘤疫苗的抗腫瘤功效。單獨應(yīng)用TIO3可通過抑制膠質(zhì)瘤細胞表達TGF-β2、促進膠質(zhì)瘤細胞表達MHC I,IL-17A及IFN-α、抑制CD4+T細胞和CD8+T細胞表達s TGF-β2、抑制Tregs的產(chǎn)生、促進CD4+T細胞及CD8+T細胞的增殖而明顯延長原位接種膠質(zhì)瘤預(yù)防模型小鼠的生存期。單獨應(yīng)用TIO3可通過抑制胃癌細胞表達TGF-β2,促進MHC I,IL-13,IL-15,IL-17及IFN-γ的表達而顯著減少腫瘤體積、延長胃癌背部移植瘤小鼠的生存期。TGF-β2的反義寡核苷酸有潛能作為微生物疫苗和腫瘤疫苗的新型佐劑,或單獨治療膠質(zhì)瘤和胃癌的候選藥物。
鄭宇[8]（2020）在《疫苗免疫途徑和佐劑對小鼠免疫應(yīng)答的影響 ——RSV-F亞單位疫苗為例》文中研究指明呼吸道合胞病毒（RSV）是下呼吸道疾病的主要病原體之一,其主要感染對象為嬰兒,老年人以及免疫力不健全的成年人。鑒于上述人群的特殊性,以及福爾馬林滅活的RSV疫苗曾導(dǎo)致嚴重的呼吸道疾病增強現(xiàn)象,RSV疫苗的有效性和安全性一直是疫苗研究領(lǐng)域的熱點和難點。目前,在預(yù)防與治療方面,尚無獲得許可上市的RSV疫苗。在RSV編碼的11種蛋白中,融合蛋白（F）具有病毒-宿主膜融合功能,針對該蛋白的抗體可有效抑制病毒入侵。而F蛋白與宿主細胞膜受體發(fā)生相互作用后會形成穩(wěn)定的融合后構(gòu)象。研究表明融合前F蛋白比融合后F蛋白具有更豐富的有效抗原決定位點,并能誘導(dǎo)具有保護效力的高特異性免疫反應(yīng)。但與其他亞單位疫苗類似,融合前構(gòu)象的RSV-F蛋白免疫原性較弱,而且其本身具有體液免疫偏向。為了解決上述問題,本文以具有融合前構(gòu)象的RSV-F蛋白為抗原,以BALB/c小鼠為動物模型,考察了免疫途徑和佐劑對小鼠免疫應(yīng)答的影響。其中,免疫途徑聚焦在臨床最為常用的兩種途徑:肌肉注射和皮下注射。佐劑涵蓋氫氧化鋁（Alhydrogel）、MF59、AS03、AS02及乙二醇殼聚糖（GCS,Soluble Glycol Chitosan）,其中前三種佐劑已在相應(yīng)上市疫苗中使用。我們的考察范圍包括血清學檢測（特異性抗體滴度、中和抗體滴度、抗體分型以及血清細胞因子檢測）、脾細胞刺激細胞因子檢測、全血轉(zhuǎn)錄組測序以及攻毒后的肺部病理檢測（肺病毒載量以及肺病理切片）。實驗結(jié)果表明,無論有無佐劑,肌肉注射在免疫原性方面優(yōu)于皮下注射,肌肉注射低劑量抗原即可以實現(xiàn)與皮下注射10倍劑量抗原相當?shù)奶禺惪贵w水平,且無副反應(yīng)產(chǎn)生。所有佐劑均能提高抗原特異性抗體和病毒中和抗體水平。與其他佐劑相比,AS02能夠誘導(dǎo)較高的RSV-F特異抗體水平,且可持續(xù)到免疫后18周。而鯊烯納米乳佐劑AS03和MF59在免疫原性提升方面優(yōu)于Alhydrogel和GCS。此外,AS02能夠增強機體Th1型免疫水平促進Th1/Th2平衡。在攻毒保護實驗中,所有佐劑組可不同程度提高小鼠肺部病毒清除率,而AS02組小鼠相對于其他佐劑組顯示出更快的病理學恢復(fù)進程。進一步的轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明,AS02通過激活TLR-4調(diào)節(jié)免疫平衡并促進Th1型免疫反應(yīng)。綜上,肌肉注射是更適合的疫苗接種途徑,而AS02是重組融合前構(gòu)象RSV-F亞單位疫苗的優(yōu)秀候選佐劑。本研究為基于RSV-F蛋白的呼吸道合胞病毒疫苗研究提供了重要事實依據(jù)。
李帥[9]（2020）在《口蹄疫疫苗的穩(wěn)定、免疫活性與顆粒佐劑的研究》文中認為穩(wěn)定的抗原和安全、有效的佐劑是疫苗研究的重點和難點。針對滅活口蹄疫病毒（inactivated foot and mouth disease virus,iFMDV）抗原穩(wěn)定性差、極易發(fā)生裂解導(dǎo)致免疫活性降低,目前常用商業(yè)化的ISA 206乳液佐劑難以有效激發(fā)細胞免疫,且會進一步降低iFMDV穩(wěn)定性的問題,本課題在深入研究iFMDV抗原體外穩(wěn)定性對體內(nèi)免疫活性的影響規(guī)律基礎(chǔ)上,提出以具有良好生物相容性的正電荷固體脂質(zhì)納米顆粒（cationic solid lipid nanoparticles,cSLN）和表面修飾Zn2+的殼聚糖納米顆粒（CP-PEI-Zn）為佐劑,設(shè)計可以在保護抗原結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的同時,有效提升抗原免疫應(yīng)答效率的新佐劑和新的抗原運載方式。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:（1）研究了 iFMDV體外穩(wěn)定性對體內(nèi)免疫活性的影響及其規(guī)律。分別通過疏水層析、聚乙二醇沉淀、疏水層析結(jié)合分子排阻層析、以及疏水層析結(jié)合聚乙二醇沉淀等四種工藝純化制備iFMDV,發(fā)現(xiàn)第四種工藝所制備的抗原具有最好的穩(wěn)定性,免疫小鼠的抗體水平也最高。進一步改變第四種純化工藝制備抗原的溶液環(huán)境以準確調(diào)控iFMDV的穩(wěn)定性,在抗原純度和免疫劑量相同條件下開展細胞和動物實驗,進一步證實了抗原越穩(wěn)定,越能有效激活骨髓源樹突狀細胞（BMDC）,促進iFMDV特異性IgG和IgM抗體的分泌。（2）以山崳酸甘油酯為脂質(zhì)材料,以雙十二烷基二甲基溴化銨（DDAB）為陽離子脂質(zhì)體,通過O/W乳化法,制備出粒徑250 nm左右,分散性良好、帶有正電荷的cSLN,用于靜電吸附146S（即顆粒完整的iFMDV）。發(fā)現(xiàn)低離子強度有利于cSLN對146S的吸附,卻會導(dǎo)致146S的快速裂解。在10 mM PB,0.075 MNaCl（pH 8.0）的最適負載條件下,cSLN對146S的吸附效率為87.8%,負載量為70.2 μg/mg。透射電鏡可以觀測到cSLN表面完整的146S顆粒,且負載于cSLN上的146S裂解溫度Tm提高了 1.2℃;高效液相層析尺寸排阻色譜（HPSEC）分析從cSLN表面洗脫下來的146S,證實146S顆粒結(jié)構(gòu)的完整性。上述結(jié)果顯示cSLN作為iFMDV佐劑有利于保持抗原結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。（3）通過細胞和動物實驗評價了 cSLN作為iFMDV佐劑的效果。cSLN的運載使BMDC對146S的攝取比例提高了 6倍以上,BMDC表面共刺激因子及MHCI表達水平顯著提高。小鼠實驗結(jié)果顯示,cSLN顯著促進FMDV的體液免疫和細胞免疫,特異性抗體（IgG,IgG2a和IgG1）的分泌水平以及記憶T細胞的增殖活化,均優(yōu)于目前廣泛應(yīng)用的ISA 206油乳佐劑。（4）基于iFMDV表面存在大量組氨酸可以與過渡金屬離子配位結(jié)合的機理,制備表面修飾Zn2+的交聯(lián)殼聚糖納米顆粒（CP-PEI-Zn）,提出通過iFMDV-Zn2+配位結(jié)合運載抗原的新模式。HPSEC分析證實了 CP-PEI-Zn負載146S主要通過與Zn2+的配位作用,而PEI修飾的殼聚糖（CP-PEI）則通過靜電作用負載146S。146S@CP-PEI-Zn的Tm略高于146S@CP-PEI,表明配位結(jié)合更有利于146S的穩(wěn)定。動物實驗結(jié)果表明,CP-PEI-Zn和CP-PEI用于iFMDV佐劑,在誘導(dǎo)特異性抗體反應(yīng)、B淋巴細胞活化、T細胞增殖和效應(yīng)記憶T細胞分化方面均優(yōu)于ISA 206乳液佐劑。相比于CP-PEI,CP-PEI-Zn對效應(yīng)記憶T細胞的增殖和細胞因子的分泌有更強的促進作用,表明殼聚糖顆粒與146S配位結(jié)合方式誘導(dǎo)了更強烈的細胞免疫應(yīng)答。綜上所述,本研究所制備的正電荷固體脂質(zhì)納米顆粒和殼聚糖微球穩(wěn)定了抗原結(jié)構(gòu)并增強了抗原的體液免疫和細胞免疫水平,并且生物安全性好,制備簡單,成本低廉,有廣闊的應(yīng)用前景。
鄒勇娟[10]（2020）在《顆粒引入對傳統(tǒng)乳液佐劑效應(yīng)的影響》文中研究表明開發(fā)安全有效的疫苗是預(yù)防傳染病爆發(fā)的有效手段。由于新型抗原的免疫原性弱,因此佐劑的開發(fā)成為了疫苗研發(fā)的重點之一。復(fù)合佐劑能夠同時增強免疫強度和改變免疫類型,已成為疫苗佐劑研發(fā)的一大趨勢。臨床應(yīng)用的乳液佐劑由于能夠誘導(dǎo)良好的體液免疫獲得了廣泛關(guān)注,但不能胞內(nèi)遞送抗原,也無法誘導(dǎo)細胞免疫;而顆粒佐劑可有效被細胞內(nèi)吞,能誘導(dǎo)良好的細胞免疫,但無法模擬天然病原體的柔性。因此,本論文提出將顆粒引入乳液佐劑中組成復(fù)合佐劑,經(jīng)過合理設(shè)計可實現(xiàn)其細胞攝取和細胞內(nèi)行為研究,從而實現(xiàn)顆粒-乳液復(fù)合佐劑的協(xié)同增效,并考察顆粒在乳液中的不同分布對免疫機制的影響。論文具體開展的研究工作如下:1.發(fā)展殼聚糖基顆粒的制備技術(shù),為顆粒-乳液復(fù)合佐劑研究提供多樣化的顆粒材料。改進實驗室的快速膜乳化-熱固化技術(shù)、以及開發(fā)新型的單相凝膠成球技術(shù),使用殼聚糖溫敏水凝膠制備得到了微米級和亞微米級的殼聚糖基顆粒。開發(fā)均質(zhì)-熱固化技術(shù)、優(yōu)化殼聚糖-TPP離子膠凝法、優(yōu)化納米沉淀法,利用分子間的離子相互作用,制備得到了納米級的殼聚糖顆粒。對殼聚糖顆粒的粒徑大小、均一性、表面電荷以及親疏水性進行表征,為顆粒引入乳液中構(gòu)建穩(wěn)定的顆粒-乳液復(fù)合佐劑提供了多樣化的顆粒材料。2.將顆粒引入乳液內(nèi)部,構(gòu)建顆粒-乳液復(fù)合佐劑水包油包顆粒乳液（CSSE）,其能模擬病原體的動態(tài)內(nèi)吞過程,實現(xiàn)高效細胞攝取。CSSE乳液能夠高效包埋顆粒和抗原。其與細胞膜接觸時,外部應(yīng)力和內(nèi)部顆粒作用下發(fā)生明顯形變,呈扁平狀,從而增大與細胞膜的接觸區(qū)域;同時顆粒在CSSE內(nèi)吞過程中持續(xù)暴露以提供足夠的攝取信號,從而顯著增強抗原提呈細胞（antigen-presenting cells,APCs）的攝取及活化。作為口蹄疫（foot-and-mouth disease virus,FMDV）疫苗佐劑,與商品化疫苗ISA206相比,CSSE乳液能夠顯著增強體液免疫反應(yīng)及細胞毒性T細胞（cytotoxic T lymphocyte,CTL）免疫反應(yīng),具有明顯的佐劑節(jié)省效應(yīng),是一種有潛力的、安全有效的獸用疫苗佐劑。3.將顆粒引入乳液界面,構(gòu)建顆粒-乳液復(fù)合佐劑Pickering乳液（CSPE）,其具有胞內(nèi)向高分子穩(wěn)定乳液轉(zhuǎn)變的特征,實現(xiàn)高效可控的溶酶體逃逸,具有優(yōu)異的細胞免疫。由于Pickering乳液的柔性,CSPE乳液在細胞膜表面發(fā)生應(yīng)力形變,模擬天然病原體的變形性,促進了細胞對疫苗的高效攝取及細胞活化。在溶酶體的酸性條件下,CSPE乳液界面的殼聚糖顆粒向殼聚糖分子鏈轉(zhuǎn)變,殼聚糖分子上的氨基質(zhì)子化,利用乳液界面對顆粒的空間限域效應(yīng),實現(xiàn)了 CSPE乳液向分子鏈穩(wěn)定的乳液轉(zhuǎn)變,同時也實現(xiàn)了 CSPE乳液的質(zhì)子累積效應(yīng)。通過調(diào)節(jié)乳液上質(zhì)子數(shù)目,實現(xiàn)了對溶酶體逃逸效率的調(diào)控。最終在高效的溶酶體逃逸和分子鏈穩(wěn)定的乳液作用下,顯著提高了抗原在細胞質(zhì)內(nèi)的交叉遞呈。CSPE乳液能夠顯著促進細胞免疫應(yīng)答尤其是CTL免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)Th1型免疫偏向,在EG7-OVA和B16-MUC1的預(yù)防性及治療性腫瘤模型中均能顯著抑制腫瘤的生長和延長小鼠生存期。4.研究顆粒分布在乳液外-界面-內(nèi)部對顆粒-乳液復(fù)合佐劑免疫機制及佐劑效應(yīng)的影響。構(gòu)建了由殼聚糖顆粒和角鯊烯乳液組成的顆粒-乳液復(fù)合佐劑,顆粒分別分布在乳液外部、乳液界面以及乳液內(nèi)部。結(jié)果表明,顆粒分布在乳液內(nèi)部和界面產(chǎn)生的抗原儲庫效應(yīng)明顯,APCs募集能力強,淋巴結(jié)協(xié)同遞送能力強;注射部位的組織中,顆粒分布在乳液內(nèi)部和界面分別分泌更多的Th2和Th1型細胞因子。結(jié)果表明,顆粒分布在乳液界面具有最佳的Th1型免疫偏向,顆粒分布在乳液內(nèi)部具有最佳的Th2型免疫偏向,顆粒分布在乳液外部誘導(dǎo)的體液及細胞免疫效果均不及前兩者。
二、免疫刺激復(fù)合物的佐劑作用及其在獸用疫苗上的應(yīng)用（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、免疫刺激復(fù)合物的佐劑作用及其在獸用疫苗上的應(yīng)用（論文提綱范文）
（1）蜂膠佐劑在獸用疫苗中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 1 蜂膠在畜禽養(yǎng)殖中的作用 |
| 1.1 提高免疫功能 |
| 1.2 提高生產(chǎn)性能 |
| 1.3 改善產(chǎn)品品質(zhì) |
| 1.4 疫苗免疫佐劑 |
| 2 蜂膠在疫苗中的應(yīng)用 |
| 2.1 蜂膠在病毒類疫苗中的應(yīng)用 |
| 2.2 蜂膠在細菌類疫苗中的應(yīng)用 |
| 2.3 蜂膠在支原體疫苗中的應(yīng)用 |
| 3 結(jié)語 |
（2）分散性水滑石納米佐劑對小鼠體液免疫的影響（論文提綱范文）
| 符號說明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 獸用佐劑現(xiàn)狀 |
| 1.2 水滑石(Layered Double Hydroxides, LDH )概述 |
| 1.3 本研究的目的與意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 主要實驗材料 |
| 2.2 實驗儀器 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 水熱法制備LDH |
| 2.3.2 不同分散性LDH的制備與表征 |
| 2.3.3 細胞培養(yǎng) |
| 2.3.4 激光共聚焦顯微鏡探究細胞吞噬差異 |
| 2.3.5 動物免疫 |
| 2.3.6 ELISA法探究抗體滴度差異 |
| 2.3.7 活體成像探究疫苗體內(nèi)分布及留存時間 |
| 2.3.8 激光共聚焦顯微鏡皮下結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)分析 |
| 2.3.9 流式細胞儀探究脾細胞活化差異 |
| 2.3.10 疫苗生物安全性 |
| 2.3.11 LDH疫苗與商用疫苗抗體效價對比 |
| 2.4 動物實驗倫理說明 |
| 2.5 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 納米疫苗物理表征結(jié)果 |
| 3.2 疫苗分散性對于細胞吞噬及胞內(nèi)分布的影響 |
| 3.3 體液免疫結(jié)果分析 |
| 3.3.1 不同分散性疫苗導(dǎo)致抗體滴度差異 |
| 3.3.2 疫苗在皮下遷移能力不同 |
| 3.3.3 脾細胞活化結(jié)果差異 |
| 3.4 皮下結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)分析結(jié)果 |
| 3.4.1 激光共聚焦顯微鏡下結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)差異 |
| 3.4.2 結(jié)節(jié)中抗原提呈細胞差異 |
| 3.5 分散性差異對于生物安全性無影響 |
| 3.6 多種疫苗抗體效價差異 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 發(fā)表論文 |
（3）基于Tween 80復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫佐劑研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 疫苗與佐劑簡述 |
| 1.1.1 疫苗的作用 |
| 1.1.2 疫苗的分類 |
| 1.1.3 佐劑的作用 |
| 1.1.4 佐劑的分類 |
| 1.2 具有免疫調(diào)節(jié)活性的兩親分子 |
| 1.2.1 普通表面活性劑 |
| 1.2.2 生物表面活性劑 |
| 1.2.3 肺表面活性物質(zhì) |
| 1.2.4 皂苷 |
| 1.2.5 單磷酞脂A |
| 1.3 膠束佐劑系統(tǒng) |
| 1.3.1 γ-PGA |
| 1.3.2 兩親性聚酸酐 |
| 1.3.3 陽離子兩親性聚合物 |
| 1.3.4 POE-POP-POE |
| 1.3.5 其它兩親性聚合物 |
| 1.3.6 混合膠束 |
| 1.4 基于兩親分子的鼻腔黏膜佐劑系統(tǒng) |
| 1.4.1 兩親分子 |
| 1.4.2 膠束 |
| 1.4.3 囊泡 |
| 1.4.4 乳液 |
| 1.4.5 凝膠 |
| 1.5 鼻腔黏膜免疫佐劑活性的優(yōu)化 |
| 1.5.1 尺寸 |
| 1.5.2 形態(tài) |
| 1.5.3 表面電性 |
| 1.5.4 表面親疏水性 |
| 1.6 含硒物質(zhì)的保健、免疫調(diào)節(jié)功能和抗菌活性 |
| 1.6.1 含硒物質(zhì)的保健、免疫調(diào)節(jié)功能 |
| 1.6.2 含硒材料的抗菌活性 |
| 1.7 本論文選題依據(jù)、研究內(nèi)容與創(chuàng)新點 |
| 第2章 Tween 80/Brij 30復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗部分 |
| 2.2.1 實驗試劑 |
| 2.2.2 T80/B30復(fù)配體系和OVA模型疫苗的制備 |
| 2.2.3 表面張力和接觸角 |
| 2.2.4 熒光光譜 |
| 2.2.5 等溫滴定量熱 |
| 2.2.6 三元相圖的繪制 |
| 2.2.7 粒徑的測定 |
| 2.2.8 冷凍蝕刻電鏡 |
| 2.2.9 圓二色光譜 |
| 2.2.10 溶血活性 |
| 2.2.11 免疫和樣本采集 |
| 2.2.12 ELISA檢測OVA特異性抗體IgG、IgG1、IgG2a和sIgA |
| 2.2.13 體外細胞攝取 |
| 2.2.14 淋巴結(jié)內(nèi)樹突狀細胞攝取抗原 |
| 2.2.15 鼻腔的組織學分析 |
| 2.2.16 統(tǒng)計學分析 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 T80/B30復(fù)配體系與OVA的相互作用 |
| 2.3.2 T80/B30復(fù)配體系的物理化學性質(zhì)研究及佐劑組成的優(yōu)化選擇 |
| 2.3.3 T80/B30復(fù)配體系的溶血活性 |
| 2.3.4 T80/B30復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性 |
| 2.3.5 抗原的體外和體內(nèi)細胞攝取 |
| 2.3.6 鼻腔的組織學分析 |
| 2.3.7 T80/B30囊泡的免疫機理探討 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第3章 Tween 80/聚氧乙烯-9-月桂醚復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗部分 |
| 3.2.1 實驗試劑 |
| 3.2.2 實驗方法 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 T80/P9LE復(fù)配體系與OVA的相互作用 |
| 3.3.2 T80/P9LE復(fù)配體系的物理化學性質(zhì)研究及佐劑組成的優(yōu)化選擇 |
| 3.3.3 T80/P9LE復(fù)配體系的溶血活性 |
| 3.3.4 T80/P9LE復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性 |
| 3.3.5 抗原的體外和體內(nèi)細胞攝取 |
| 3.3.6 鼻腔的組織學分析 |
| 3.3.7 T80/P9LE混合膠束的免疫機理探討 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 Tween 80/氯化十六烷基吡啶復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗部分 |
| 4.2.1 實驗試劑 |
| 4.2.2 實驗方法 |
| 4.3 結(jié)果與討論 |
| 4.3.1 T80/CPC復(fù)配體系與OVA的相互作用 |
| 4.3.2 T80/CPC復(fù)配體系的物理化學性質(zhì)研究及佐劑組成的優(yōu)化選擇 |
| 4.3.3 T80/CPC復(fù)配體系的溶血活性 |
| 4.3.4 T80/CPC復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性 |
| 4.3.5 抗原的體外和體內(nèi)細胞攝取 |
| 4.3.6 鼻腔的組織學分析 |
| 4.3.7 T80/CPC混合膠束的免疫機理探討 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第5章 Tween 80/PN320復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 實驗部分 |
| 5.2.1 實驗試劑和實驗動物 |
| 5.2.2 實驗方法 |
| 5.3 結(jié)果與討論 |
| 5.3.1 T80/PN320復(fù)配體系與OVA的相互作用 |
| 5.3.2 T80/PN320復(fù)配體系的物理化學性質(zhì)研究及佐劑組成的優(yōu)化選擇 |
| 5.3.3 T80/PN320復(fù)配體系的溶血活性 |
| 5.3.4 T80/PN320復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫活性 |
| 5.3.5 抗原的體外和體內(nèi)細胞攝取 |
| 5.3.6 鼻腔的組織學分析 |
| 5.3.7 T80/PN320混合膠束的免疫機理探討 |
| 5.3.8 不同Tween 80復(fù)配體系鼻腔黏膜免疫活性的比較 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 第6章 Tween 80復(fù)配體系與含硒物質(zhì)鼻腔黏膜免疫的協(xié)同效應(yīng)研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 實驗部分 |
| 6.2.1 實驗試劑 |
| 6.2.2 實驗方法 |
| 6.3 結(jié)果與討論 |
| 6.3.1 Se/C的合成與表征 |
| 6.3.2 T80復(fù)配體系與Se/C鼻腔黏膜免疫的協(xié)同效應(yīng) |
| 6.3.3 免疫調(diào)節(jié)劑DDSe的合成與表征 |
| 6.3.4 T80復(fù)配體系與DDSe鼻腔黏膜免疫的協(xié)同效應(yīng) |
| 6.4 本章小結(jié) |
| 第7章 結(jié)論與展望 |
| 7.1 結(jié)論 |
| 7.2 展望 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間發(fā)表的研究成果 |
| 致謝 |
（4）基于半抗原修飾策略的新型腫瘤糖疫苗設(shè)計及免疫活性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 癌癥及免疫療法 |
| 1.2 糖類腫瘤疫苗簡介 |
| 1.2.1 基于TACAs的疫苗 |
| 1.2.2 糖蛋白綴合疫苗的作用機制 |
| 1.2.3 糖類腫瘤疫苗構(gòu)建策略 |
| 1.3 內(nèi)源性抗體簡介 |
| 1.3.1 內(nèi)源性抗體 |
| 1.3.2 內(nèi)源性抗體的應(yīng)用 |
| 1.4 本論文的立題依據(jù)、研究意義和主要研究內(nèi)容 |
| 1.4.1 立題依據(jù)與研究意義 |
| 1.4.2 主要研究內(nèi)容 |
| 第二章 DNP修飾GM3的抗腫瘤疫苗的合成與免疫活性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 原料與試劑 |
| 2.2.2 主要試劑配制 |
| 2.2.3 主要儀器 |
| 2.2.4 實驗方法 |
| 2.2.5 間苯二酚法測定糖抗原負載量 |
| 2.2.6 動物免疫實驗 |
| 2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定效價 |
| 2.2.8 流式細胞實驗 |
| 2.2.9 補體依賴的細胞毒實驗 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 GM3-NHDNP-KLH疫苗的合成與表征 |
| 2.3.2 GM3-NHDNP-KLH疫苗的免疫活性分析 |
| 2.3.3 免疫產(chǎn)生的抗體與糖工程化腫瘤細胞的結(jié)合能力分析 |
| 2.3.4 補體依賴的細胞毒實驗分析 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 多價鼠李糖修飾的sTn-BSA疫苗的合成與免疫活性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 原料與試劑 |
| 3.2.2 主要試劑配制 |
| 3.2.3 主要儀器 |
| 3.2.4 實驗方法 |
| 3.2.5 動物免疫實驗 |
| 3.2.6 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定效價 |
| 3.2.7 流式細胞實驗 |
| 3.2.8 補體依賴的細胞毒實驗 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 腫瘤相關(guān)糖抗原sTn和半抗原Rha的合成與表征 |
| 3.3.2 sTn-BSA-Rha_n的合成與表征 |
| 3.3.3 sTn-BSA-Rha_n疫苗的免疫活性分析 |
| 3.3.4 免疫產(chǎn)生的抗體與腫瘤細胞結(jié)合能力分析 |
| 3.3.5 補體依賴的細胞毒實驗分析 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第四章 基于主客體自主裝構(gòu)建超分子糖蛋白綴合疫苗及其免疫活性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 原料與試劑 |
| 4.2.2 主要試劑配制 |
| 4.2.3 主要儀器 |
| 4.2.4 實驗方法 |
| 4.2.5 等溫滴定量熱實驗 |
| 4.2.6 體外募集抗體能力實驗 |
| 4.2.7 動物免疫實驗 |
| 4.2.8 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定效價 |
| 4.2.9 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細胞因子 |
| 4.2.10 流式細胞實驗 |
| 4.2.11 補體依賴的細胞毒實驗 |
| 4.3 結(jié)果與討論 |
| 4.3.1 主體分子CD-PEG_n-Rha_7合成與表征 |
| 4.3.2 客體分子sTn-BSA-Ada6合成與表征 |
| 4.3.3 sTn-BSA-Ada_6/CD-PEG_n-Rha_7疫苗的自組裝與表征 |
| 4.3.4 sTn-BSA-Ada_6/CD-PEG_n-Rha_7疫苗的免疫活性分析 |
| 4.3.5 免疫產(chǎn)生的抗體與腫瘤細胞結(jié)合能力分析 |
| 4.3.6 補體依賴的細胞毒實驗分析 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第五章 多價DNP修飾的透明質(zhì)酸綴合物的合成與抗腫瘤活性研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料與方法 |
| 5.2.1 原料與試劑 |
| 5.2.2 主要試劑配制 |
| 5.2.3 主要儀器 |
| 5.2.4 實驗方案 |
| 5.2.5 細胞結(jié)合能力和抗體募集能力實驗 |
| 5.2.6 體外抗體介導(dǎo)細胞毒實驗 |
| 5.2.7 制備抗DNP血清實驗 |
| 5.2.8 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定效價 |
| 5.2.9 小鼠腫瘤模型實驗 |
| 5.3 結(jié)果與討論 |
| 5.3.1 HA-[PEG_m-DNP]_n的合成與表征 |
| 5.3.2 HA-[PEG_m-DNP]_n親和力和特異性分析 |
| 5.3.3 HA-[PEG_m-DNP]_n綴合物體外抗腫瘤活性評估 |
| 5.3.4 HA-[PEG_3-DNP]_891的體外溶血實驗分析 |
| 5.3.5 HA-[PEG_3-DNP]_891的體內(nèi)抗腫瘤功效分析 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 主要結(jié)論與展望 |
| 主要結(jié)論 |
| 展望 |
| 論文主要創(chuàng)新點 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄Ⅰ 附圖 |
| 附錄Ⅱ 化合物核磁與質(zhì)譜 |
| 附錄Ⅲ 作者在攻讀博士學位期間發(fā)表的論文 |
（5）納米甘草酸增強家兔波氏桿菌OMV免疫效果的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號說明 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1 革蘭氏陰性菌外膜囊泡(OMV)研究進展 |
| 1.1 OMV的生物發(fā)生 |
| 1.1.1 包膜交聯(lián)的調(diào)節(jié) |
| 1.1.2 膜曲率誘導(dǎo)分子的聚集 |
| 1.1.3 磷脂積累 |
| 1.2 OMV的生物醫(yī)學應(yīng)用 |
| 1.2.1 OMV作為細菌疫苗 |
| 1.2.2 OMV作為疫苗佐劑 |
| 1.2.3 OMV作為癌癥免疫治療劑 |
| 1.2.4 OMV作為藥物傳遞載體 |
| 1.3 展望 |
| 2 甘草酸的藥理作用及其納米化的研究進展 |
| 2.1 甘草酸的藥理作用 |
| 2.1.1 抗炎癥作用 |
| 2.1.2 器官保護作用 |
| 2.1.3 免疫調(diào)節(jié)作用 |
| 2.1.4 其他藥理作用 |
| 2.2 納米化研究 |
| 2.2.1 納米載體包裹甘草酸的研究 |
| 2.2.2 甘草酸自組裝納米載體應(yīng)用于多種藥物的遞送 |
| 2.3 展望 |
| 3 本研究的目的與意義 |
| 第二章 兔波氏桿菌外膜囊泡的制備及其蛋白質(zhì)成分分析 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株及主要試劑 |
| 1.1.2 儀器設(shè)備 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.2.1 OMV制備方法的篩選 |
| 1.2.2 OMV制備條件的優(yōu)化 |
| 1.2.3 OMV理化性質(zhì)的研究 |
| 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 OMV最優(yōu)制備工藝的建立 |
| 2.2 OMV理化性質(zhì)研究 |
| 2.2.1 OMV的 TEM、SEM和粒徑檢測結(jié)果 |
| 2.2.2 OMV蛋白成分的分析 |
| 3 討論 |
| 第三章 納米甘草酸結(jié)合波氏桿菌OMV體外對小鼠巨噬細胞活性的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 試驗細胞及主要試劑 |
| 1.1.2 儀器設(shè)備 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.2.1 GAN的制備及理化性質(zhì)研究 |
| 1.2.2 GAN結(jié)合波氏桿菌OMV的制備及評價 |
| 1.2.3 FITC-GAN的制備和OMV的熒光標記 |
| 1.2.4 巨噬細胞的培養(yǎng) |
| 1.2.5 CCK-8 法檢測GAN-OMV對巨噬細胞增殖的影響 |
| 1.2.6 巨噬細胞體外細胞因子的分泌 |
| 1.2.7 GAN-OMV在巨噬細胞內(nèi)的分布 |
| 1.2.8 巨噬細胞吞噬GAN-OMV的途徑 |
| 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 納米甘草酸結(jié)合波氏桿菌OMV理化性質(zhì)研究 |
| 2.1.1 GAN理化性質(zhì)研究 |
| 2.1.2 GAN-OMV理化性質(zhì)研究 |
| 2.2 GAN-OMV對巨噬細胞增殖的影響 |
| 2.3 GAN-OMV對巨噬細胞細胞因子分泌的影響 |
| 2.4 GAN-OMV富集到巨噬細胞的作用途徑 |
| 3 討論 |
| 第四章 納米甘草酸結(jié)合波氏桿菌OMV對小鼠免疫活性的評價 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 試驗動物及主要試劑 |
| 1.1.2 儀器設(shè)備 |
| 1.2 試驗方法 |
| 1.2.1 疫苗制備 |
| 1.2.2 試驗動物免疫 |
| 1.2.3 小鼠血清Ig G抗體及其亞型檢測 |
| 1.2.4 小鼠血清細胞因子的檢測 |
| 1.2.5 小鼠脾臟淋巴細胞增殖反應(yīng)檢測 |
| 1.2.6 小鼠脾臟淋巴細胞上清細胞因子檢測 |
| 1.2.7 小鼠B淋巴細胞和T淋巴細胞的流式檢測 |
| 1.2.8 建立波氏桿菌血清殺菌試驗 |
| 1.2.9 免疫小鼠攻毒后肺部含菌量的檢測 |
| 1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 GAN-OMV對小鼠淋巴細胞水平的影響 |
| 2.2 GAN-OMV對抗原特異性抗體及其亞型水平的影響 |
| 2.3 GAN-OMV對脾淋巴細胞增殖的影響 |
| 2.4 GAN-OMV對 T細胞、B細胞數(shù)量的影響 |
| 2.5 脾臟淋巴細胞上清、血清細胞因子水平的檢測 |
| 2.6 補體介導(dǎo)的小鼠血清殺菌試驗 |
| 2.7 GAN-OMV對攻毒后肺部含菌量的影響 |
| 3 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 論文創(chuàng)新點 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 攻讀學位期間取得的研究成果 |
（6）新城疫疫苗新型佐劑的研究進展（論文提綱范文）
| 1 禽用疫苗佐劑 |
| 1.1 禽用疫苗佐劑的作用 |
| 1.2 疫苗佐劑的作用方式 |
| 1.3 禽用疫苗佐劑的種類 |
| 2 傳統(tǒng)免疫佐劑 |
| 2.1 鋁鹽佐劑 |
| 2.2 油乳佐劑 |
| 3 天然來源免疫佐劑 |
| 3.1 細胞因子佐劑 |
| 3.2 中藥多糖佐劑 |
| 3.3 蜂膠 |
| 4 新型免疫佐劑 |
| 4.1 化學藥品類佐劑———左旋咪唑 |
| 4.2 免疫刺激性寡核苷酸（Cp G-ODN）佐劑 |
| 4.3 轉(zhuǎn)移因子佐劑 |
| 4.4 其他新型疫苗佐劑 |
| 5 小結(jié) |
（7）轉(zhuǎn)化生長因子-β2反義寡核苷酸的微生物疫苗及腫瘤疫苗的佐劑作用（論文提綱范文）
| 提要 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 文章縮略詞表 |
| 引言 |
| 第1章 文獻綜述 |
| 1.1 TGF-β的概述 |
| 1.1.1 TGF-β的來源 |
| 1.1.2 TGF-β的表達 |
| 1.1.3 TGF-β的結(jié)構(gòu) |
| 1.1.4 TGF-β的信號通路 |
| 1.2 TGF-β的生物學活性 |
| 1.2.1 TGF-β對胚胎發(fā)育的調(diào)節(jié) |
| 1.2.2 TGF-β對免疫應(yīng)答的負向調(diào)節(jié) |
| 1.2.3 TGF-β2對腫瘤的生長,侵襲及遷移的促進作用 |
| 1.2.4 TGF-β對組織損傷修復(fù)、創(chuàng)面愈合、瘢痕增生的促進作用及炎癥反應(yīng)的抑制作用 |
| 1.2.5 TGF-β2對纖維化的調(diào)節(jié)作用 |
| 1.2.6 TGF-β對腫瘤的抑制作用 |
| 1.3 靶向TGF-β2的藥物 |
| 1.3.1 TGF-β2的反義寡核苷酸 |
| 1.3.2 TGF-β2的micro RNA |
| 1.3.3 TGF-β2的sh RNA |
| 1.3.4 TGF-β2的抗體 |
| 1.3.5 TGF-β2的反義基因修飾的同種異體腫瘤疫苗 |
| 1.3.6 TGF-β2的反義基因修飾的同種異體腫瘤疫苗 |
| 1.3.7 TGF-β2的抑制劑 |
| 1.4 疫苗佐劑的概述及其研究進展 |
| 1.4.1 增強第一信號的佐劑 |
| 1.4.2 增強第二信號的佐劑 |
| 1.4.3 增強第三信號的佐劑 |
| 1.4.4 抑制T細胞抑制信號的佐劑 |
| 1.4.5 改善腫瘤免疫抑制微環(huán)境的佐劑 |
| 1.4.6 病毒載體佐劑 |
| 1.4.7 其他佐劑 |
| 1.4.8 多佐劑腫瘤疫苗 |
| 1.4.9 佐劑的接種途徑 |
| 1.4.10 佐劑發(fā)揮作用的機制 |
| 1.5 RNA靶向性寡核苷酸的研究進展 |
| 1.5.1 反義寡核苷酸(Antisense oligonucleotide) |
| 1.5.2 siRNA |
| 1.5.3 micro RNA |
| 1.5.4 反義寡核苷酸的化學修飾方法 |
| 第2章 材料方法 |
| 2.1 ODN及引物 |
| 2.2 實驗試劑,儀器與耗材 |
| 2.3 細胞與細胞系 |
| 2.4 實驗動物 |
| 2.5 IAV的擴增 |
| 2.6 IAV TCID50 的測定 |
| 2.7 IAV血凝效價的測定 |
| 2.8 聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR) |
| 2.9 小鼠PBMC、脾臟及淋巴結(jié)單細胞懸液的制備 |
| 2.10 TIO對 TGF-β2 m RNA表達的抑制實驗 |
| 2.11 流式細胞術(shù)(Flow cytometry) |
| 2.12 蛋白免疫印跡實驗(Western Blotting analysis) |
| 2.13 免疫熒光技術(shù) |
| 2.14 TIO在小鼠器官和組織中的分布檢測 |
| 2.15 小鼠的免疫 |
| 2.15.1 疫苗的制備 |
| 2.15.2 小鼠的免疫和血清的收集 |
| 2.16 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) |
| 2.17 流感病毒攻毒實驗 |
| 2.18 小鼠肺組織的病理學觀察 |
| 2.19 腦膠質(zhì)瘤細胞裂解物(TCL)的制備 |
| 2.20 GL261腦膠質(zhì)瘤原位模型的建立 |
| 2.21 腦膠質(zhì)瘤預(yù)防模型的建立 |
| 2.22 腦膠質(zhì)瘤治療模型的建立 |
| 2.23 腫瘤周圍浸潤的炎性細胞的檢測 |
| 2.24 腫瘤組織病理分析 |
| 2.25 胃癌背部移植瘤模型的建立 |
| 2.26 統(tǒng)計學分析 |
| 第3章 研究結(jié)果 |
| 3.1 靶向TGF-β2的反義寡核苷酸的設(shè)計與篩選 |
| 3.2 TIOs對 RAW264.7 細胞,U-937 細胞及CAL-1 細胞表達TGF-β2的影響 |
| 3.2.1 TIOs對 IL-4 誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞TGF-β2 m RNA表達的影響 |
| 3.2.2 TIOs對 IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細胞Arg1及TNF-αmRNA表達的影響 |
| 3.2.3 TIOs對 LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞TGF-β2 mRNA表達的影響 |
| 3.2.4 TIOs對 LPS誘導(dǎo)的U-937 細胞表達TGF-β2 mRNA的影響 |
| 3.2.5 TIOs對甲型流感病毒(IAV)誘導(dǎo)的CAL-1 細胞TGF-β2mRNA表達的影響 |
| 3.2.6 TIOs對 IL-4/LPS誘導(dǎo)的RAW264.7/U-937細胞表達TGF-β2蛋白的影響 |
| 3.3 TIO3在細胞和組織中的分布 |
| 3.4 TIOs的微生物疫苗佐劑效應(yīng) |
| 3.4.1 TIOs對微生物疫苗誘導(dǎo)的抗體產(chǎn)生水平的影響 |
| 3.4.2 TIO3對流感病毒疫苗誘導(dǎo)的抗流感病毒效率的增強作用 |
| 3.4.3 TIO1和TIO3 的微生物疫苗佐劑效應(yīng)的可能機制 |
| 3.4.4 TIOs的微生物疫苗佐劑的安全性評價 |
| 3.5 TIO的膠質(zhì)瘤疫苗的佐劑作用 |
| 3.5.1 TIOs為佐劑的膠質(zhì)瘤細胞裂解物疫苗對原位接種腦膠質(zhì)瘤預(yù)防模型小鼠的影響 |
| 3.5.2 TIOs為佐劑的膠質(zhì)瘤疫苗對原位接種膠質(zhì)瘤治療模型小鼠生存期的影響 |
| 3.6 單獨應(yīng)用TIO3的抗膠質(zhì)瘤及抗胃癌作用 |
| 3.6.1 單獨應(yīng)用TIO3對腦膠質(zhì)瘤原位移植瘤模型小鼠生存期的影響 |
| 3.6.2 單獨應(yīng)用TIO3對胃癌背部移植瘤模型小鼠體重、腫瘤大小及生存期的影響 |
| 3.6.3 單獨應(yīng)用TIO3對胃癌細胞腹腔種植模型小鼠生存期的影響 |
| 第4章 討論 |
| 4.1 TIOs的微生物疫苗佐劑效應(yīng) |
| 4.1.1 TIO3對CD4~+T細胞表面s TGF-β2 表達的抑制作用 |
| 4.1.2 TIO3 對 CD19~+ B 細胞表面 sTGF-β2 表達的抑制作用 |
| 4.1.3 TIO3的藥效動力學分析 |
| 4.1.4 TIO1,TIO2及TIO3 的不同功效的機理分析 |
| 4.1.5 TIO3用于微生物疫苗佐劑的副作用分析 |
| 4.1.6 TIO3用于微生物疫苗佐劑的可行性分析 |
| 4.2 TIO3的膠質(zhì)瘤疫苗佐劑效應(yīng) |
| 4.2.1 TIO3 對膠質(zhì)瘤細胞MHC I分子表達的上調(diào)作用 |
| 4.2.2 TIO3的膠質(zhì)瘤疫苗佐劑效應(yīng)的機理分析 |
| 4.3 單獨應(yīng)用TIO3的抗膠質(zhì)瘤和抗胃癌作用 |
| 4.4 總結(jié)和展望 |
| 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點 |
| 附錄1 |
| 附錄2 The College of Basic Medical Sciences of Jilin University Ethics Committee Approval Form |
| 參考文獻 |
| 作者簡介及在學期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（8）疫苗免疫途徑和佐劑對小鼠免疫應(yīng)答的影響 ——RSV-F亞單位疫苗為例（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 呼吸道合胞病毒疫苗 |
| 1.1.1 呼吸道合胞病毒 |
| 1.1.2.RSV疫苗的發(fā)展史 |
| 1.1.2.1.RSV滅活疫苗與福爾馬林滅活RSV疫苗介導(dǎo)的呼吸道疾病增強現(xiàn)象 |
| 1.1.2.2.RSV減毒疫苗 |
| 1.1.2.3.RSV亞單位疫苗 |
| 1.1.2.4.其他RSV疫苗及免疫策略 |
| 1.2.佐劑 |
| 1.2.1.佐劑與疫苗 |
| 1.2.2.許可人用佐劑及上市含佐劑疫苗 |
| 1.2.3.佐劑及其作用機制 |
| 1.2.3.1.鋁佐劑 |
| 1.2.3.2.殼聚糖 |
| 1.2.3.3.MF59 |
| 1.2.3.4.AS系列佐劑 |
| 1.2.3.4.1.AS03 |
| 1.2.3.4.2.AS02 |
| 1.3.RSV疫苗與佐劑 |
| 1.3.1.鋁佐劑與FI-RSV疫苗介導(dǎo)的ERD |
| 1.3.2.基于亞單位RSV-F疫苗的佐劑應(yīng)用 |
| 1.4.RSV疫苗免疫實驗的模式動物與免疫途徑 |
| 1.5.論文的立題依據(jù)、創(chuàng)新點和實驗設(shè)計 |
| 1.5.1.論文的立題依據(jù)及目的 |
| 1.5.2.實驗思路與設(shè)計 |
| 1.5.2.1.RSV疫苗免疫途徑及劑量研究 |
| 1.5.2.2.RSV疫苗佐劑免疫機理研究 |
| 1.5.3.論文的創(chuàng)新點 |
| 第二章 RSV疫苗免疫途徑及劑量研究 |
| 2.1.儀器、材料與試劑 |
| 2.1.1.主要儀器 |
| 2.1.2.主要材料及試劑 |
| 2.1.3.主要自制溶液的配制 |
| 2.2.實驗方法 |
| 2.2.1.RSV-F抗原制備與鑒定 |
| 2.2.2.水包油乳劑型佐劑制備 |
| 2.2.3.實驗分組與疫苗配置 |
| 2.2.4.動物倫理及動物免疫 |
| 2.2.5.ELISA法檢測RSV-F特異抗體及抗體分型 |
| 2.2.6.病毒培養(yǎng)及滴度檢測 |
| 2.2.7.蝕斑法檢測RSV-F中和抗體 |
| 2.2.8.脾細胞刺激上清細胞因子檢測 |
| 2.3.實驗結(jié)果 |
| 2.3.0.RSV-F抗原制備與鑒定 |
| 2.3.1.免疫后小鼠血清特異IgG水平檢測 |
| 2.3.2 免疫后小鼠血清IgG抗體分型檢測 |
| 2.3.3 免疫后小鼠血清中和抗體檢測 |
| 2.3.4.免疫后小鼠脾細胞刺激上清細胞因子檢測 |
| 2.3.5.長期免疫原性檢測 |
| 2.3.6.免疫后小鼠副反應(yīng) |
| 2.4.本章小結(jié) |
| 2.5.討論 |
| 第三章 佐劑對RSV疫苗免疫效果影響及其作用機理研究 |
| 3.1.材料、試劑與儀器 |
| 3.1.1.毒種及細胞株 |
| 3.1.2.主要儀器 |
| 3.1.3.主要試劑 |
| 3.1.4.主要溶液的配制方法 |
| 3.2.實驗方法 |
| 3.2.1.實驗分組與疫苗配置 |
| 3.2.2.動物免疫、攻毒、取血及肺組織提取 |
| 3.2.3.血清學檢測 |
| 3.2.4.肺病毒載量檢測 |
| 3.2.5.組織病理學檢測 |
| 3.2.6.轉(zhuǎn)錄組測序檢測及分析 |
| 3.3.實驗結(jié)果 |
| 3.3.1.含不同佐劑的RSV-F疫苗誘導(dǎo)的免疫水平比較 |
| 3.3.2.含不同佐劑的RSV-F疫苗誘導(dǎo)的免疫類型比較 |
| 3.3.3.含不同佐劑的RSV-F疫苗的保護力比較 |
| 3.3.4.基于小鼠轉(zhuǎn)錄組測序的差異表達基因分析結(jié)果 |
| 3.4.本章小結(jié) |
| 3.5.討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介及在學期間所獲得的科研成果 |
| 致謝 |
（9）口蹄疫疫苗的穩(wěn)定、免疫活性與顆粒佐劑的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符號說明 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 口蹄疫與口蹄疫病毒 |
| 1.1.1 口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)與侵染過程 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒與宿主細胞的相互作用 |
| 1.2 口蹄疫疫苗 |
| 1.3 口蹄疫疫苗抗原穩(wěn)定性與免疫原性的關(guān)系 |
| 1.4 提高口蹄疫疫苗抗原穩(wěn)定性的方法 |
| 1.5 口蹄疫疫苗佐劑 |
| 1.5.1 油乳佐劑 |
| 1.5.2 皂苷類佐劑 |
| 1.5.3 與模式識別受體結(jié)合的佐劑 |
| 1.5.4 胞苷磷酸鳥苷寡脫氧核苷酸(TLR9配體) |
| 1.5.5 咪唑喹啉(TLR8/TLR9配體)和鞭毛蛋白(TLR5激活劑) |
| 1.5.6 細胞因子和細菌毒素 |
| 1.5.7 顆粒佐劑 |
| 1.5.8 佐劑對抗原結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性的影響 |
| 1.6 固體脂質(zhì)納米顆粒(SLN) |
| 1.6.1 SLN的運載促進細胞對藥物的攝取 |
| 1.6.2 SLN的運載延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間 |
| 1.6.3 SLN實現(xiàn)藥物的靶向遞送 |
| 1.6.4 SLN實現(xiàn)藥物的緩控釋 |
| 1.6.5 SLN用于運載抗原以提高抗原免疫活性 |
| 1.7 殼聚糖佐劑 |
| 1.7.1 殼聚糖顆粒 |
| 1.7.2 殼聚糖凝膠 |
| 1.8 立題依據(jù)和研究目標 |
| 1.8.1 立題依據(jù) |
| 1.8.2 研究策略和目標 |
| 第2章 iFMDV穩(wěn)定性對免疫原性的影響 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 實驗材料及藥品 |
| 2.2.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 2.2.3 不同純化工藝制備iFMDV |
| 2.2.4 調(diào)節(jié)溶液環(huán)境制備穩(wěn)定性不同的iFMDV |
| 2.2.5 146S含量的測定 |
| 2.2.6 總蛋白含量測定 |
| 2.2.7 SDS-PAGE檢測樣品純度 |
| 2.2.8 iFMDV樣品穩(wěn)定性分析 |
| 2.2.9 骨髓DC細胞收集 |
| 2.2.10 DC細胞對抗原的吞噬攝取 |
| 2.2.11 DC的活化和成熟 |
| 2.2.12 接種小鼠 |
| 2.2.13 間接ELISA法檢測FMDV特異性抗體滴度 |
| 2.2.14 收集脾細胞 |
| 2.2.15 流式細胞術(shù)檢測T細胞的增殖 |
| 2.2.16 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.2.17 動物實驗倫理說明 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 不同純化工藝制備的iFMDV的純度和收率 |
| 2.3.2 不同純化工藝制備的iFMDV的穩(wěn)定性和免疫原性 |
| 2.3.3 調(diào)節(jié)緩沖體系組成制備穩(wěn)定性不同的iFMDV |
| 2.3.4 BMDC對穩(wěn)定性不同的iFMDV的攝取 |
| 2.3.5 穩(wěn)定性不同的iFMDV對DC細胞刺激活化的影響 |
| 2.3.6 不同穩(wěn)定性的iFMDV免疫對激發(fā)特異性抗體水平的影響 |
| 2.3.7 iFMDV穩(wěn)定性對刺激T細胞的增殖的影響 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第3章 正電荷固體脂質(zhì)納米顆粒的制備及對iFMDV的吸附 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.2.1 實驗材料及藥品 |
| 3.2.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 3.2.3 脂質(zhì)、油相和表面活性劑的選擇 |
| 3.2.4 cSLN的制備 |
| 3.2.5 cSLN的尺寸分布及形貌鑒定 |
| 3.2.6 差示掃描量熱(DSC)法檢測cSLN的熔解溫度 |
| 3.2.7 cSLN顆粒的細胞毒性 |
| 3.2.8 DOTAP-cSLN及DDAB-cSLN對iFMDV的吸附 |
| 3.2.9 DDAB濃度和制備工藝對cSLN理化性質(zhì)的影響 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 cSLN的制備及尺寸、形貌鑒定 |
| 3.3.2 cSLN的晶體形態(tài)分析 |
| 3.3.3 cSLN的毒性分析 |
| 3.3.4 DOTAP-cSLN及DDAB-cSLN對iFMDV的吸附 |
| 3.3.5 DDAB濃度和制備工藝對cSLN理化性質(zhì)的影響 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 cSLN用于iFMDV疫苗佐劑的免疫效果研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗方法 |
| 4.2.1 實驗材料及藥品 |
| 4.2.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 4.2.3 HPSEC檢測146S負載后的結(jié)構(gòu)完整性 |
| 4.2.4 DSF法檢測負載于DDAB-cSLN的146S的裂解溫度 |
| 4.2.5 透射電鏡觀察cSLN吸附前后146S的形態(tài) |
| 4.2.6 骨髓源樹突狀細胞對iFMDV的攝取 |
| 4.2.7 激光共聚焦觀察BMDCs對抗原的吞噬 |
| 4.2.8 DC的成熟和活化 |
| 4.2.9 接種小鼠 |
| 4.2.10 血清中FMDV特異性抗體檢測 |
| 4.2.11 收集脾細胞 |
| 4.2.12 流式細胞術(shù)檢測記憶T細胞的增殖 |
| 4.2.13 cSLN的理化性質(zhì)對其佐劑效應(yīng)的影響 |
| 4.2.14 數(shù)據(jù)分析 |
| 4.3 實驗結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 cSLN的運載對iFMDV穩(wěn)定性的影響 |
| 4.3.2 骨髓源樹突狀細胞(BMDCs)對iFMDV的攝取 |
| 4.3.3 血清中FMDV特異性抗體的檢測 |
| 4.3.4 記憶T細胞的增殖 |
| 4.3.5 cSLN的理化性質(zhì)對其佐劑效應(yīng)的影響 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第5章 基于iFMDV-Zn~(2+)配位相互作用運載抗原的殼聚糖顆粒佐劑 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 實驗方法 |
| 5.2.1 實驗材料及藥品 |
| 5.2.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 5.2.3 殼聚糖顆粒的制備與修飾 |
| 5.2.4 傅里葉紅外光譜檢測殼聚糖顆粒表面基團 |
| 5.2.5 殼聚糖顆粒的細胞毒性分析 |
| 5.2.6 殼聚糖顆粒與iFMDV混合體系的顆粒分散穩(wěn)定性分析 |
| 5.2.7 殼聚糖顆粒對iFMDV的吸附及洗脫 |
| 5.2.8 DSF法檢測結(jié)合到殼聚糖表面的iFMDV的熱穩(wěn)定性變化 |
| 5.2.9 DC細胞對iFMDV的攝取 |
| 5.2.10 DC細胞的活化 |
| 5.2.11 接種小鼠 |
| 5.2.12 特異性抗體水平檢測 |
| 5.2.13 脾細胞的收集及培養(yǎng) |
| 5.2.14 流式細胞術(shù)檢測脾細胞 |
| 5.2.15 細胞因子分泌 |
| 5.3 實驗結(jié)果 |
| 5.3.1 殼聚糖顆粒的制備和表征 |
| 5.3.2 殼聚糖顆粒以及與iFMDV混合體系的分散穩(wěn)定性 |
| 5.3.3 殼聚糖顆粒對iFMDV的負載及結(jié)合方式分析 |
| 5.3.4 骨髓源樹突狀細胞(BMDCs)對iFMDV的攝取 |
| 5.3.5 FMDV特異性抗體檢測 |
| 5.3.6 流式細胞術(shù)檢測脾細胞增殖活化 |
| 5.3.7 細胞因子的分泌 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 第6章 結(jié)論與展望 |
| 6.1 主要結(jié)論 |
| 6.2 主要創(chuàng)新點 |
| 6.3 后期工作建議 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果 |
（10）顆粒引入對傳統(tǒng)乳液佐劑效應(yīng)的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符號說明 |
| 第1章 文獻綜述 |
| 1.1 復(fù)合佐劑的研究進展 |
| 1.1.1 以分子鏈為載體的復(fù)合佐劑體系 |
| 1.1.2 以生物體為載體的復(fù)合佐劑體系 |
| 1.1.3 以硬顆粒為載體的復(fù)合佐劑體系 |
| 1.1.3.1 單相復(fù)合佐劑體系 |
| 1.1.3.2 多相復(fù)合佐劑體系 |
| 1.1.4 以柔性材料為載體的復(fù)合佐劑體系 |
| 1.2 顆粒乳液復(fù)合佐劑體系的合理化設(shè)計 |
| 1.3 立題依據(jù)與研究目標 |
| 1.3.1 立題依據(jù) |
| 1.3.2 研究目標 |
| 第2章 優(yōu)化殼聚糖基顆粒的制備工藝 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗材料和方法 |
| 2.2.1 實驗試劑 |
| 2.2.2 實驗儀器 |
| 2.2.3 乳化交聯(lián)顆粒的制備及表征 |
| 2.2.4 單相凝膠顆粒的制備及表征 |
| 2.2.5 離子膠凝顆粒的制備及表征 |
| 2.2.6 納米沉淀顆粒的制備及表征 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 快速膜乳化-熱固化法制備HTCC顆粒 |
| 2.3.1.1 制備條件對膜乳化顆粒的影響 |
| 2.3.1.2 不同粒徑膜乳化顆粒的制備及表征 |
| 2.3.2 均質(zhì)-熱固化法制備殼聚糖顆粒 |
| 2.3.3 單相凝膠顆粒的制備及表征 |
| 2.3.3.1 探索不同單相凝膠顆粒的制備條件 |
| 2.3.3.2 干燥條件對單相凝膠顆粒的影響 |
| 2.3.4 離子膠凝顆粒的制備及表征 |
| 2.3.5 納米沉淀顆粒的制備及表征 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第3章 水包油包顆粒乳液制備及其佐劑效果考察 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗材料和方法 |
| 3.2.1 實驗試劑 |
| 3.2.2 實驗儀器 |
| 3.2.3 水包油包顆粒乳液的制備及表征 |
| 3.2.4 疫苗制劑的制備 |
| 3.2.5 免疫實驗 |
| 3.2.5.1 血清抗體水平檢測 |
| 3.2.5.2 脾細胞懸液的制備 |
| 3.2.5.3 檢測淋巴細胞活化及細胞因子分泌 |
| 3.2.5.4 檢測分泌細胞因子的細胞 |
| 3.2.6 CTL殺傷實驗 |
| 3.2.7 抗原攝取及APCs活化 |
| 3.2.7.1 巨噬細胞提取及培養(yǎng) |
| 3.2.7.2 DC細胞提取及培養(yǎng) |
| 3.2.7.3 檢測細胞攝取及活化 |
| 3.2.7.4 檢測細胞攝取過程 |
| 3.2.8 小動物成像考察儲庫效應(yīng) |
| 3.2.9 安全性評價 |
| 3.2.10 統(tǒng)計學分析 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 水包油包顆粒乳液的表征 |
| 3.3.2 CSSE乳液與APCs的作用情況 |
| 3.3.3 注射部位抗原停留情況 |
| 3.3.4 CSSE乳液的體液及細胞免疫效果評價 |
| 3.3.5 CSSE乳液的安全性評價 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 Pickering乳液的構(gòu)建及效果評價 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗材料和方法 |
| 4.2.1 實驗試劑 |
| 4.2.2 實驗儀器 |
| 4.2.3 CSPE乳液及其對照組的制備 |
| 4.2.4 CSPE乳液及其對照組的表征 |
| 4.2.5 小鼠指標實驗 |
| 4.2.6 小鼠腫瘤實驗 |
| 4.2.7 抗原儲庫效應(yīng) |
| 4.2.8 注射部位APCs募集 |
| 4.2.9 細胞攝取實驗 |
| 4.2.10 淋巴DC細胞活化實驗 |
| 4.2.11 溶酶體逃逸實驗 |
| 4.2.12 CSPE乳液的生物安全性評價 |
| 4.2.13 統(tǒng)計學分析 |
| 4.3 結(jié)果與討論 |
| 4.3.1 CSPE乳液的優(yōu)化及表征 |
| 4.3.2 CSPE乳液對抗原的裝載 |
| 4.3.3 CSPE乳液促進抗原的攝取 |
| 4.3.4 抗原儲庫效應(yīng) |
| 4.3.5 注射部位抗原提呈細胞的募集 |
| 4.3.6 淋巴結(jié)內(nèi)DCs細胞的活化 |
| 4.3.7 CSPE乳液的溶酶體逃逸 |
| 4.3.7.1 溶酶體逃逸機理分析及逃逸效率 |
| 4.3.7.2 調(diào)節(jié)乳滴上質(zhì)子數(shù)目調(diào)控溶酶體逃逸 |
| 4.3.8 優(yōu)化的CSPE乳液體液及細胞免疫效果評價 |
| 4.3.9 優(yōu)化的CSPE乳液腫瘤效果評價 |
| 4.3.9.1 預(yù)防性腫瘤免疫效果 |
| 4.3.9.2 治療性腫瘤免疫效果 |
| 4.3.10 CSPE乳液安全性評價 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第5章 顆粒乳液結(jié)合方式對免疫的影響 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 實驗材料和方法 |
| 5.2.1 實驗試劑 |
| 5.2.2 實驗儀器 |
| 5.2.3 各疫苗制劑的制備及表征 |
| 5.2.4 組織切片實驗 |
| 5.2.5 小動物成像實驗 |
| 5.2.6 組織中細胞因子的分泌 |
| 5.2.7 注射部位APCs募集 |
| 5.2.8 淋巴結(jié)內(nèi)APCs數(shù)目及B細胞活化 |
| 5.2.9 免疫效果評價實驗 |
| 5.2.10 統(tǒng)計學分析 |
| 5.3 結(jié)果與討論 |
| 5.3.1 各疫苗佐劑的表征 |
| 5.3.2 各疫苗制劑中抗原的裝載 |
| 5.3.3 各疫苗制劑在注射部位的情況 |
| 5.3.4 各疫苗制劑在淋巴結(jié)內(nèi)的顆粒及乳液的數(shù)目 |
| 5.3.5 針對OVA和乙肝抗原的免疫效果評價 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 第6章 結(jié)論與展望 |
| 6.1 主要結(jié)論 |
| 6.2 主要創(chuàng)新點 |
| 6.3 后期工作建議 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果 |
四、免疫刺激復(fù)合物的佐劑作用及其在獸用疫苗上的應(yīng)用（論文參考文獻）
- [1]蜂膠佐劑在獸用疫苗中的應(yīng)用[J]. 張學武,宋仕花. 中國動物保健, 2021(12)
- [2]分散性水滑石納米佐劑對小鼠體液免疫的影響[D]. 孫夏妹. 山東農(nóng)業(yè)大學, 2021(01)
- [3]基于Tween 80復(fù)配體系的鼻腔黏膜免疫佐劑研究[D]. 曹洪恩. 揚州大學, 2021
- [4]基于半抗原修飾策略的新型腫瘤糖疫苗設(shè)計及免疫活性研究[D]. 林漢. 江南大學, 2021(01)
- [5]納米甘草酸增強家兔波氏桿菌OMV免疫效果的研究[D]. 南黎. 浙江師范大學, 2021(02)
- [6]新城疫疫苗新型佐劑的研究進展[J]. 李倩,王思遠,陳禮斌,范磊,任濤. 養(yǎng)禽與禽病防治, 2020(12)
- [7]轉(zhuǎn)化生長因子-β2反義寡核苷酸的微生物疫苗及腫瘤疫苗的佐劑作用[D]. 涂麗裙. 吉林大學, 2020(03)
- [8]疫苗免疫途徑和佐劑對小鼠免疫應(yīng)答的影響 ——RSV-F亞單位疫苗為例[D]. 鄭宇. 吉林大學, 2020(03)
- [9]口蹄疫疫苗的穩(wěn)定、免疫活性與顆粒佐劑的研究[D]. 李帥. 中國科學院大學(中國科學院過程工程研究所), 2020(01)
- [10]顆粒引入對傳統(tǒng)乳液佐劑效應(yīng)的影響[D]. 鄒勇娟. 中國科學院大學(中國科學院過程工程研究所), 2020(01)
標簽：抗體論文; 細胞免疫論文; 抗原抗體反應(yīng)論文; 免疫佐劑論文; 腫瘤免疫論文;