一、PCR步行法克隆油菜自交不親和基因（論文文獻綜述）
王燦潔[1]（2018）在《白菜類蔬菜蠟質(zhì)基因和紅色基因的遺傳克隆與分析》文中研究指明普通白菜（Brassica rapa L.var.communis）和紅菜薹（Brassica rapa L.var.purpurea）均是十字花科蕓薹屬蔬菜作物。作為葉用和薹用蔬菜,其植物組織（葉片和薹莖）表皮蠟質(zhì)性狀是一種重要商品性狀,挖掘控制蠟質(zhì)的相關(guān)基因?qū)ζ浞肿訖C理進行研究,具有十分重要的應(yīng)用和理論價值。另外,紅菜薹起源我國,含有豐富的花青素,而植物中天然的花青素具有特殊的生理功能,如抗氧化,抑制癌細胞、預(yù)防心腦血管疾病等,因此,開展紅菜薹中花青素苷合成代謝相關(guān)基因的遺傳、基因克隆及其分子機理的研究,顯得尤為必要。綜上所述,以普通白菜（青梗菜）和紅菜薹為研究對象,分別針對普通白菜（青梗菜）和紅菜薹的表皮蠟質(zhì)性狀、紅菜薹的紅色性狀,開展3個品質(zhì)性狀的遺傳分析、基因克隆以及分子機理研究,對于促進白菜類蔬菜的品質(zhì)育種,探究組織表皮蠟質(zhì)和花青素合成代謝分子機理,都有很重要的理論和應(yīng)用價值。本課題主要包括三個部分,第一部分為普通白菜（青梗菜）蠟質(zhì)基因的克隆和相關(guān)分析;第二部分為紅菜薹蠟質(zhì)基因的克隆和相關(guān)分析;第三部分為紅菜薹紅色性狀pur07基因的克隆和相關(guān)分析。主要研究結(jié)果如下:1.蠟質(zhì)缺失體的表型分析和遺傳規(guī)律分析無蠟質(zhì)突變體普通白菜自交不親和系13S126和紅菜薹3號均具有葉片和薹莖光亮的特點,同時葉片表面和薹莖表面的蠟質(zhì)晶體缺失嚴重。掃描電鏡（SEM）觀察發(fā)現(xiàn)兩個蠟質(zhì)突變體的葉片和薹莖表面蠟質(zhì)結(jié)晶顯著減少。透射電鏡（TEM）觀察發(fā)現(xiàn)兩個突變體的薹莖片角質(zhì)層厚度明顯增厚,同時自交系13S126葉片的角質(zhì)層厚度也有所增厚。生理實驗表明兩個蠟質(zhì)突變體的細胞通透性都有所增高。GC-MS測定顯示自交系13S126蠟質(zhì)缺失成分包括烷烴類、醇類、脂肪酸類、酮類和蠟脂,而無蠟質(zhì)紅菜薹3號蠟質(zhì)缺失成分主要是初級醇類。以無蠟質(zhì)自交系13S126和有蠟質(zhì)自交系13S106為親本構(gòu)建F1代和F2代,其中F1代群體葉面均覆蓋有蠟質(zhì),F2代群體中有蠟質(zhì)和無蠟質(zhì)植株的分離比例符合3:1,推測自交系13S126蠟質(zhì)缺失性狀由1對隱性基因控制。2.普通白菜中蠟質(zhì)基因Br CER1的同源克隆和群體驗證在同源克隆技術(shù)基礎(chǔ)上,克隆Br CER1基因,該基因是CER1的同源基因。通過序列比對發(fā)現(xiàn)Brcer1基因在無蠟質(zhì)自交系13S126存在39-bp的序列丟失。同時,在一個F2群體（488個單株）中,根據(jù)丟失區(qū)域開發(fā)的基因特異引物顯示與無蠟質(zhì)性狀單株共分離。因此將Br CER1基因作為控制自交系13S106蠟質(zhì)性狀的候選基因。Br CER1基因的表達量在無蠟質(zhì)自交系13S126下降。3.紅菜薹中蠟質(zhì)基因Br CER4的精細定位和克隆利用遺傳方法成功將紅菜薹3號無蠟質(zhì)定位于1號染色體的標記M69和M87之間,兩個標記之間的物理距離為272.3 kb,該定位區(qū)間內(nèi)有兩個與蠟質(zhì)合成相關(guān)的基因,Bra011487和Bra011470。通過序列比對發(fā)現(xiàn),CER4同源基因-Bra011470（Br CER4）在無蠟質(zhì)紅菜薹3號中存在39bp序列丟失,同時據(jù)此所開發(fā)的標記與無蠟質(zhì)重組單株（34株）共分離。因此將Br CER4基因作為紅菜薹中蠟質(zhì)性狀的候選基因。4.BrCER1基因和Br CER4基因的表達量分析和轉(zhuǎn)錄本分析利用半定量RT-PCR和實時熒光RT-PCR實驗對Br CER1基因和Br CER4基因的表達量進行分析,Br CER1基因和Br CER4基因的表達量分別在兩個突變體中下降。同時對轉(zhuǎn)錄本序列的分析發(fā)現(xiàn),Brcer1基因在無蠟質(zhì)自交系13S126中有2個轉(zhuǎn)錄本,存在選擇性剪切;而Brcer4基因在無蠟質(zhì)紅菜薹3號中也存在選擇性剪切,有4個轉(zhuǎn)錄本。因此推測Brcer1基因和Brcer4基因中分別存在的39bp序列丟失引起m RNA的選擇性剪切是導(dǎo)致普通白菜自交系13S126和紅菜薹3號的無蠟質(zhì)表型原因。5.Brcer1基因和Brcer4基因在普通白菜和紅菜薹種質(zhì)資源中的分布在Brcer1基因和Brcer4基因中39bp序列丟失區(qū)域分別開發(fā)基因特異標記Gene-s1和Gene-s4對無蠟質(zhì)普通白菜和無蠟質(zhì)紅菜薹種質(zhì)資源的擴增表明,Brcer1基因只控制一部分普通白菜自交不親和系的無蠟質(zhì)表型,而Brcer4基因只控制本研究中收集的紅菜薹自交系的無蠟質(zhì)表型。6.逆境條件下Br CER1基因和Br CER4基因的表達量變化通過對有蠟質(zhì)普通白菜自交不親和系13S106和有蠟質(zhì)紅菜薹D×W進行干旱、冷害和鹽害處理,結(jié)果表明在Br CER1基因和Br CER4基因在不同處理條件下,表達量的變化也不盡相同。在干旱處理下下,普通白菜中Br CER1基因表達量在處理后24h最高,而紅菜薹中Br CER4基因的表達量最高是在處理后的48h;在冷害處理下,普通白菜中Br CER1基因在處理后6h達到最高表達量,而紅菜薹中Br CER4基因的表達量最高是在處理后12h;在鹽害處理條件下,普通白菜中Br CER1基因表達量最高也是在處理后的6h,而紅菜薹中Br CER4基因的表達量則是在處理后24h;7.紅菜薹中紅色基因pur07的精細定位和相關(guān)分析在前人對紅色基因pur07初定位的基礎(chǔ)上,通過開發(fā)分子標記和候選基因分析,將存在序列差異的Bra004162作為候選基因,該基因與MYB90同源。在紅色植株的啟動子區(qū)域存在5,409bp的序列插入,同時在第三個外顯子上存在一個堿基的替換（G替換為A）引起一個氨基酸的改變（G變?yōu)镈）。依據(jù)SNP差異開發(fā)的CAPS標記pur07-1顯示與綠色性狀（145株）共分離。此外pur07基因的表達量在紅色植株中上調(diào)。56-4分離群體（F2:3代）中表型為深紅（H）的紅色植株中花青素含量大小依次為:薹莖>葉>蕾>角果;表型為淺紅（M）的紅色植株中花青素含量的大小依次為:莖>葉。其中深紅（H）的薹莖含量最高,達到8.5mg/g,含量最低的部位是淺紅（M）的葉,不足1mg/g。
方彥,楊剛,孫萬倉,武軍艷,劉自剛,曾秀存,李學才,董云[2]（2016）在《蕓芥果膠酸裂解酶基因的克隆及序列分析》文中認為采用RACE技術(shù)從蕓芥自交親和系花藥中克隆出果膠酸裂解酶（Pectate lyases,PL）基因,全長1 657bp,其完整開放閱讀框（Open Read Frame,ORF）為1 371bp,編碼456個氨基酸,分子質(zhì)量51.179ku,等電點9.42。序列比對結(jié)果表明,該蛋白與其他植物的PL蛋白具有較高的同源性,因此命名為EsPL。進化樹分析表明,蕓芥EsPL基因與十字花科蕓薹屬植物甘藍型油菜、白菜型油菜的PL基因親緣關(guān)系較近。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,EsPL在蕓芥開花后自交親和系花藥中的表達量顯著高于自交不親和系花藥中表達量,該基因可能在蕓芥自交親和性狀調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。
方彥,孫萬倉,武軍艷,曾秀存,劉自剛,楊剛,楊寧寧[3]（2014）在《蕓芥自交親和相關(guān)基因的差異顯示及表達分析》文中提出為分離和篩選蕓芥自交親和相關(guān)基因,以蕓芥自交親和系（SC）和自交不親和系（SI）開花前及開花后的花藥和柱頭為試材,利用mRNA差異顯示技術(shù)篩選蕓芥自交親和相關(guān)差異表達基因,結(jié)合實時熒光定量PCR技術(shù)驗證差異表達基因在SI和SC開花前后不同時期的表達水平差異。結(jié)果共篩選得到了11條差異片段。差異表達基因包含木葡聚糖半乳糖基轉(zhuǎn)移酶、DnaJ伴侶蛋白、果膠酸裂解酶家族蛋白、40S核糖體蛋白s19-1和假設(shè)蛋白等。木葡聚糖半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因在SC開花前柱頭中表達量最大,其表達量是SI開花前柱頭中的4.41倍;SC8假設(shè)蛋白基因在蕓芥SC開花后花藥中表達量最大,是SI開花后花藥中的23.98倍。初步推測這些差異基因可能在蕓芥SI和SC性狀調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。
牛妍[4]（2014）在《芥菜型油菜遺傳物質(zhì)人工滲入白菜型油菜的研究》文中提出本研究通過芥菜型油菜和白菜型油菜種間雜交，將芥菜型油菜的有利性狀轉(zhuǎn)移到白菜型油菜中，創(chuàng)造新型白菜型油菜，以期拓寬白菜型油菜的遺傳基礎(chǔ)，為白菜型油菜的遺傳育種提供理論和材料。獲得主要研究結(jié)果如下：1.以芥菜型油菜作母本、白菜型油菜作父本的正交組合較易獲得雜交種子， F1植株染色體組成為AAB，2n=28，植株表型偏芥菜型，具有明顯的營養(yǎng)生長優(yōu)勢，花粉幾乎完全不育。芥白雜種后代變異廣泛，出現(xiàn)自交親和植株和黃籽植株，且獲得的自交親和性狀和黃籽性狀是可遺傳的。2.通過對芥白種間雜交后代群體進行形態(tài)學調(diào)查、花粉可染性觀察和細胞學觀察等，BC1F3群體已經(jīng)獲得124份導(dǎo)入芥菜型油菜遺傳物質(zhì)的新型白菜型油菜材料。由于導(dǎo)入芥菜型油菜遺傳片段程度的不同，新型白菜型油菜（AA，2n=20）形態(tài)學上具有較大差異，育性已經(jīng)恢復(fù)，花粉可染率均大于80%，結(jié)實率高，染色體水平已經(jīng)達到穩(wěn)定狀態(tài)。3.利用GISH技術(shù)對芥菜型油菜和白菜型油菜雜種后代的回交群體進行分析，共獲得3個AA-B附加系和7個代換系，一方面增加了白菜型油菜的遺傳多樣性，為青藏高原白菜型油菜的遺傳改良提供了育種材料，另一方面利用這些材料可以進一步研究A和B染色體組的起源和進化規(guī)律。4.為研究新型白菜型油菜的基因組變異，利用AFLP和SSR分子標記技術(shù)對芥白雜種后代已經(jīng)穩(wěn)定遺傳的BC1F4群體進行檢測，結(jié)果表明除芥菜型油菜的部分A組染色體片段導(dǎo)入新型白菜型油菜外，部分芥菜型油菜的B組染色體片段也導(dǎo)入到新型白菜型油菜。5.18份新型白菜型材料經(jīng)田間性狀考察后，發(fā)現(xiàn)4份特早熟材料和3份高產(chǎn)材料，可以直接作為育種原材料，選育適合青藏高原地區(qū)的白菜型油菜新品種。
李開祥[5]（2014）在《用于配制綜合雜交種的三個恢復(fù)系評價》文中研究表明本研究以3個特早熟甘藍型油菜恢復(fù)系、1個特早熟甘藍型不育系以及1個具有紫色心葉性狀的甘藍型油菜為材料。利用SSR標記構(gòu)建3個恢復(fù)系及其雜交F1代的指紋圖譜，并測定了3個恢復(fù)系的異交率；用苯胺藍熒光染色法觀察3個恢復(fù)系花粉管在柱頭表面及花柱中的生長情況，探究了3個恢復(fù)系的雜交和自交親和性強弱，并用具有紫色心葉性狀的甘藍型油菜作為共用父本進行混合授粉作以印證；分析了（不育系×恢復(fù)系）F1與（恢復(fù)系×恢復(fù)系）F1之間產(chǎn)量相關(guān)性狀雜種優(yōu)勢和雜種表現(xiàn)的強弱。主要研究結(jié)果如下：1.利用SSR分子標記技術(shù)構(gòu)建3個特早熟甘藍型油菜恢復(fù)系的指紋圖譜，篩選出這3個特早熟甘藍型油菜恢復(fù)系的共顯性SSR標記，測定了這3個恢復(fù)系的異交率。結(jié)果表明，恢復(fù)系材料4395、3509、4152的異交率分別為46.02%、33.32%、18.12%，在p<0.01時呈極顯著差異，說明3個特早熟甘藍型油菜恢復(fù)系的異交率差異明顯，為確定3個特早熟甘藍型油菜恢復(fù)系在綜合雜交種中比例高低提供依據(jù)。2.用苯胺藍熒光染色法觀察3個恢復(fù)系花粉管在柱頭表面及花柱中的生長情況，探究了3個恢復(fù)系的雜交和自交親和性強弱，并用具有紫色心葉性狀的甘藍型油菜作為共用父本進行混合授粉作以印證，結(jié)果表明恢復(fù)系材料4395作母本時雜交親和性最高、恢復(fù)系材料3509次之、恢復(fù)系材料4152最低。其中恢復(fù)系材料4395作母本時雜交親和性較自交高，恢復(fù)系材料3509作母本時雜交親和性比自交親和性高，恢復(fù)系材料4152作母本時雜交親和性比自交親和性低。混合授粉試驗F1苗期特征的觀察結(jié)果與花粉管觀察結(jié)果一致。3.對6個組合單株產(chǎn)量雜種優(yōu)勢分析結(jié)果顯示，3個恢復(fù)系與不育系S配制的組合以及3個恢復(fù)系相互雜交的組合（除4395×4152組合）雜種單株產(chǎn)量的雜種優(yōu)勢明顯，其中超親優(yōu)勢17.03%～31.22%之間，中親優(yōu)勢在18.17%～33.39%之間。4.對3個恢復(fù)系親本、雜交組合和混合種的小區(qū)產(chǎn)量差異分析結(jié)果表明，3個恢復(fù)系和不育系S配制的3個組合以及3個恢復(fù)系親本相互雜交組合（除4395×4152組合）在小區(qū)產(chǎn)量上與它們的親本存在顯著差異，且雜種優(yōu)勢明顯。5.結(jié)合恢復(fù)系的異交率、雜交親和性以及它們配制雜交組合的雜種優(yōu)勢分析可知，恢復(fù)系4395是較恢復(fù)系3509、4152優(yōu)良的優(yōu)勢親本，其次是恢復(fù)系3509、最弱的是恢復(fù)系4152。在確定綜合雜交種親本比例時，恢復(fù)系4395的比例應(yīng)當最高，其次是恢復(fù)系3509，最低的是恢復(fù)系4152。
高長斌[6]（2013）在《甘藍型油菜自交不親和分子恢復(fù)機理研究及應(yīng)用》文中研究表明自交不親和性是植物進化出的一種防止自交衰退、促進異交以更好地適應(yīng)環(huán)境的遺傳機制,在研究和應(yīng)用兩方面均具有重要意義。自交不親和是油菜雜種優(yōu)勢利用的重要途徑。栽培的甘藍型油菜（AACC）表現(xiàn)為自交親和,但是人工合成的甘藍型油菜及其兩個基本種白菜（AA）和甘藍（CC）卻是自交不親和的。本研究以人工創(chuàng)建的甘藍型油菜自交不親和系‘S-1300’,自然存在的親和甘藍型油菜‘10-9-8400’和‘Westar’等為材料,通過遺傳分析、基因克隆、表達分析、啟動子序列分析、遺傳轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)錄組測序等研究手段對甘藍型油菜自交親和/不親和的分子機制進行了研究,初步揭了示油菜自交親和的原因,為研究油菜花粉-柱頭互作的分子機理打下了基礎(chǔ)。同時本研究還創(chuàng)建了鑒別S單倍型的分子標記體系,用于選育自交不親和雜種,將提供育種效率、加快育種進程。主要結(jié)果如下：1.cS-1300,自交不親和性的遺傳分析鑒定‘S-1300’和‘10-9-8400’的S單倍型組成發(fā)現(xiàn),他們在C基因組上含有共同的S單倍型BnS-6,而A基因組不同,分別為BnS-1300和BnS-1。分析‘S-1300×10-9-8400’分離群體植株S位點基因型和表現(xiàn)型,證明‘S-1300’A基因組上的S單倍型BnS-1300決定其自交不親和性,來源于BrS-60。2.同源序列法克隆’S-1300,A基因組S位點基因根據(jù)白菜BrS-60的序列設(shè)計引物,克隆S單倍型BnS-1300上的自交不親和基因。發(fā)現(xiàn)BnSP11-1300全長為378bp,包括兩個外顯子和一個內(nèi)含子,序列比對分析發(fā)現(xiàn)其與BrSP11-60具有100%的序列相似性。BnSRK-1300長度為7967bp,包含7個外顯子與6個內(nèi)含子,與BrSRK-60的CDS序列具有100%的相似性,但是在內(nèi)含子1,內(nèi)含子3與內(nèi)含子5卻分別有數(shù)個堿基的差異。BnSP11-1300與BnSRK-1300均只在花蕾中、而不在根、莖、葉和角果中表達,符合蕓薹屬自交不親和基因的表達特點。3.自交不親和分子標記體系的建立克隆了恢復(fù)系‘10-9-8400’A基因組BnSRK-1的全長CDS序列和BnSP11-1全長序列。分析本研究得到的‘S-1300’和‘10-9-8400’以及本實驗室已有的保持系’Bing409’S位點基因序列,開發(fā)分子標記。標記SRK1-1和SCR1-1只在恢復(fù)系‘10-9-8400’中擴增,標記SRK-1300只在自交不親和系‘S-1300’中擴增,標記SCR7-2只在保持系‘Bing409’中擴增。優(yōu)化PCR反應(yīng)體系得到了兩個多重PCR分子標記SRK-1300/SRK1-1及SRK-1300/SCR7-2。這些標記在91份甘藍型油菜自交親和品系極其與‘S-1300’的雜種中得到了驗證。4. BnSP11-1啟動子區(qū)Helitron轉(zhuǎn)座子的發(fā)現(xiàn)及進化分析發(fā)現(xiàn)油菜品系’Westar’A基因組上BnSP11-1基因啟動子區(qū)的一個3.6kb長的片段為一個非自主的Helitron轉(zhuǎn)座子,該轉(zhuǎn)座子只出現(xiàn)在帶有BnS-1的油菜中。通過比對其在轉(zhuǎn)座過程中帶入的基因組片段,我們在BrS-47的SPll基因下游發(fā)現(xiàn)了另一個Helitron轉(zhuǎn)座子,但是在油菜的BnS-1上卻沒有這個轉(zhuǎn)座子。由于BnS-1來源于BrS-47,同時兩個轉(zhuǎn)座子有相同的邊界序列,相同的3’末端的莖環(huán)結(jié)構(gòu)。我們推測在甘藍型油菜的形成過程中,Helitron轉(zhuǎn)座子的移動改變了油菜的授粉方式（由異花授粉變?yōu)槌．惢ㄊ诜郏?從而使該物種能保存下來并對油菜的進化產(chǎn)生重大影響。5. BnSP11-1基因啟動子順式元件的鑒定去掉Helitron轉(zhuǎn)座子的BnSPl1-1基因啟動子能驅(qū)動GUS報告基因特異地在成熟花藥中表達。進一步通過兩輪的啟動子缺失分析,發(fā)現(xiàn)BnSP11-1基因啟動子有多個順式元件協(xié)同作用控制著SP11基因的時空特異性表達,其中最主要的一個順式元件被發(fā)現(xiàn)位于-227bp到-217bp （5’-TTCTAGGGAT-3’）的區(qū)域。6.基因BnSP11-1的功能互補分析通過轉(zhuǎn)基因手段將功能完整的BrSP11-47基因?qū)氲接筒似废怠疻estar’中,得到了自交不親和的甘藍型油菜。授粉實驗表明,野生型’Westar’的柱頭能接受自身的花粉,但拒絕轉(zhuǎn)基因材料的花粉。這些結(jié)果再次證明了SP11基因失活導(dǎo)致甘藍型油菜自交親和。7.柱頭親和／不親和反應(yīng)的RNA-seq分析利用野生型’Westar’柱頭針對自身花粉與轉(zhuǎn)基因花粉的不同授粉特性,提取授以不同花粉柱頭的RNA,對柱頭親和和不親和反應(yīng)進行RNA-seq分析。通過對差異表達基因進行功能注釋和分析,發(fā)現(xiàn)親和反應(yīng)可能比不親和反應(yīng)更復(fù)雜。親和反應(yīng)與不親和反應(yīng)有一些共同的信號傳導(dǎo)路徑,同時比較了轉(zhuǎn)錄因子,蛋白激酶及泛素化相關(guān)的基因在親和反應(yīng)與不親和反應(yīng)中的分布,并探討了一些可能起作用的信號路徑。
牛妍,趙志剛,余青蘭[7]（2013）在《芥菜型油菜和白菜型油菜雜種后代自交親和性研究》文中研究表明為獲得自交親和的白菜型油菜材料,利用芥菜型油菜和白菜型油菜種間雜交,將芥菜型油菜的自交親和性狀導(dǎo)入白菜型油菜,并揭示雜種后代自交親和性狀的滲入過程和狀態(tài)。芥白雜種后代BC1F1群體的自交親和指數(shù)介于0.050.88,群體自交不親和,而BC1F2和BC2F1群體自交親和指數(shù)最高達到14.33,自交親和的植株分別占35.5%和22.2%。對BC1F2和BC2F1植株自交親和性狀分離進行統(tǒng)計和測驗分析,表明白菜型油菜的自交親和性狀可能是單基因控制的顯性遺傳。BC1F3和BC2F2群體中自交親和植株顯著增多,分別占75.3%和87.5%。對BC1F2代和BC1F3代植株花粉管萌發(fā)觀察和自交親和指數(shù)比較均表明,芥白雜種后代植株獲得的自交親和性狀是可遺傳的。
富貴[8]（2013）在《利用大黃油菜人工合成甘藍型油菜S0、S1世代的遺傳分析》文中研究指明甘藍型油菜是由天然蕓苔屬基本種甘藍（Brassica oleracea,2n=18, CC）和白菜型油菜（Brassica rapa,2n=20, AA）或白菜（Brassica campestris,2n=20, AA）經(jīng)天然雜交和染色體自然加倍進化而來，為一個雙二倍體（2n=38,AACC）。其起源于歐洲，在我國的栽培歷史較短，遺傳基礎(chǔ)非常狹窄。人工合成甘藍型油菜可以有效的拓寬現(xiàn)有甘藍型油菜資源。蕓薹屬異源多倍體的進化一直是人們研究的熱點，人工合成的異源多倍體是研究異源多倍化早期分子機制的理想材料，因為用于合成多倍體的二倍體是已知的，便于人們對合成種和親本材料進行基因組合和基因表達的比較分析。本研究以青海省農(nóng)林科學院油菜所人工合成的一批甘藍型油菜為研究對象，在形態(tài)學、千粒重、自交親和性、細胞遺傳學及表觀遺傳學等多個方面對其做了系統(tǒng)的研究。獲得主要研究結(jié)果如下：1.人工合成的所有甘藍型油菜在形態(tài)上偏像父本甘藍，開白花，葉色、花瓣大小、形狀介于雙親之間。生育期介于120-140天之間。SSR分子標記和細胞學分析表明人工合成甘藍型油菜為真雜種。2.在不同親本組合S0后代中發(fā)現(xiàn)了23株大粒植株，其中大黃油菜×中遲芥藍雜交后代S0平均千粒重最高為7.453g，顯著高于甘藍型油菜品種青油14號和大黃油菜。最低的為大黃油菜×葉牡丹（5.482g），亦顯著高于甘藍型油菜品種青油14號。在S1代中，大黃油菜×黃花芥藍組合的平均千粒重最高，為7.145g，大黃油菜×中遲芥藍組合的平均千粒重最小，為6.077g。四個組合除大黃油菜×中遲芥藍外，三個組合S1平均千粒重顯著高于青油14號，其中大黃油菜×黃花芥藍、大黃油菜×中花芥藍S1世代平均千粒重極顯著高于青油14號。3.對A、B、C、D四個不同親本雜交組合S1代共183個不同單株自交親和指數(shù)大小做了比較，結(jié)果表明：不同單株自交親和指數(shù)之間存在廣泛變異，自交親和指數(shù)最小的為0，最大的為8.294。183個單株自交親和指數(shù)按大小可分為3類，親和指數(shù)小于1的單株總共有55株，占總株數(shù)的30%；介于1至3.0之間的75株，占總株數(shù)的49%，親和指數(shù)大于等于3的總共53株，占總株數(shù)的21%。不同組合內(nèi)S1自交親和指數(shù)比較發(fā)現(xiàn)，同一組合S1個體之間變異廣泛。4.花粉母細胞減數(shù)分裂觀察結(jié)果表明，人工合成甘藍型油菜單倍體所有終變期花粉母細胞都有二價體形成，其中一些細胞包含三價體和四價體，后期Ⅰ染色體的分離比主要是9/10、8/11、7/12。加倍后植株花粉母細胞終變期觀察到了19個二價體，后期I染色體主要呈19/19分離，未見到染色體落后現(xiàn)象。四個雜交組合S1花粉平均育性在82.24%―87.35%之間，同一株系S0和S12個不同世代花粉育性除F10為74%，其余植株均在80%以上，同一株系不同世代花粉育性不存在顯著差異。5.以A組合（大黃油菜×中花芥藍）S0世代、B組合（大黃油菜×中遲芥藍）S0和S12個世代人工甘藍型油菜為材料，分別利用AFLP和MSAP技術(shù)檢測了基因組變化及甲基化模式變化情況。結(jié)果表明，16對引物在A組合S0擴增到523條帶，其中4對引物擴增出9條變異帶，變異帶包括7條親本缺失帶和2條新增帶，分別占S0總條帶的1.33%和0.38%；45對引物在B組合雙親植株擴增到1093條帶，只有一對引物檢測到一條父本帶型在所有S0植株中缺失，約占S0總條帶的0.09%；在B9子代F19-1―F19-16總共擴增得到1092條帶，變異帶有10條，占總條帶的0.915%，其中包括9條缺失帶和一條新增帶，9條缺失帶全部位于C基因組。MSAP檢測發(fā)現(xiàn)，B組合S0植株中有3個位點發(fā)生了甲基化模式的改變，全部位于A基因組，甲基化模式改變位點占總檢測位點的1.37%。研究還發(fā)現(xiàn)B組合S0世代一個植株出現(xiàn)可遺傳的花色變異，推測該表型變異與B組合人工甘藍型油菜中C基因組變異有關(guān)。
范惠玲,白生文,張芬琴,肖占文,陳修斌,孫萬倉[9]（2012）在《蕓芥自交親和性的遺傳及自交親和基因mRNA差異顯示分析》文中研究指明以8份蕓芥自交親和系與4份蕓芥自交不親和系為試驗材料,通過正交和反交方式共組配了18個不同的雜交組合,調(diào)查了F1群體的自交親和性與否,及1 424株F2群體和626株BC1群體的性狀分離情況。同時,還采用mRNA差異顯示技術(shù)研究了蕓芥自交親和基因的表達器官,分離、篩選了與自交親和性相關(guān)的特異基因片段。結(jié)果表明:蕓芥自交親和性與細胞質(zhì)遺傳無關(guān),而是由一對核基因控制的簡單隱性遺傳性狀;蕓芥自交親和基因的表達不屬于組成性表達,而屬于組織特異性表達;在蕓芥自交親和系的柱頭cDNA擴增中共得到3條差異cDNA片段,其與蕓芥自交親和基因有密切關(guān)系。
安雯,曹陽,李俞濤,潘鳳榮,肖敏,鄭瑋,侯義龍[10]（2009）在《植物自交不親和性的研究進展與展望》文中進行了進一步梳理植物自交不親和性主要是由S位點多個等位基因決定的,目前已鑒定出大量S基因,且不親和反應(yīng)涉及到花粉與柱頭相互識別的一系列復(fù)雜過程.本文主要綜述了植物自交不親和性的機制、與不親和性有關(guān)的部分蛋白、對自交不親和的鑒定以及利用等方面的研究進展,并對植物自交不親和性的研究與發(fā)展前景進行了展望.
二、PCR步行法克隆油菜自交不親和基因（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、PCR步行法克隆油菜自交不親和基因（論文提綱范文）
（1）白菜類蔬菜蠟質(zhì)基因和紅色基因的遺傳克隆與分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 課題的提出 |
| 1.2 蠟質(zhì)研究進展 |
| 1.2.1 蠟質(zhì)的組成和生物功能 |
| 1.2.2 蠟質(zhì)的合成和轉(zhuǎn)運 |
| 1.2.3 環(huán)境對蠟質(zhì)合成的影響 |
| 1.2.4 調(diào)控蠟質(zhì)合成基因的研究 |
| 1.2.5 擬南芥蠟質(zhì)相關(guān)基因的研究 |
| 1.2.6 蕓薹屬作物無蠟質(zhì)性狀的研究進展 |
| 1.3 花青素研究進展 |
| 1.3.1 花青素的組成和生物功能 |
| 1.3.2 花青素合成代謝研究 |
| 1.3.3 花青素合成代謝途徑中的基因 |
| 1.3.4 影響花青素積累的因素 |
| 1.3.5 蕓薹屬作物中花青素的研究進展 |
| 1.4 植物中數(shù)量性狀研究方法 |
| 1.4.1 數(shù)量性狀的特點 |
| 1.4.2 連鎖分析 |
| 1.4.3 關(guān)聯(lián)分析 |
| 1.5 同源克隆法 |
| 1.6 圖位克隆法 |
| 1.7 本研究的目的與意義 |
| 第二章 普通白菜蠟質(zhì)基因的克隆和表達分析 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 實驗材料 |
| 2.1.2 兩個親本表型觀察 |
| 2.1.3 掃描電鏡和透射電鏡分析 |
| 2.1.4 葉片表面蠟質(zhì)組分的測定和分析 |
| 2.1.5 離體失水率和葉綠素浸出率分析 |
| 2.1.6 BrCER1基因克隆和群體驗證 |
| 2.1.7 BrCER1基因在親本中的表達量和轉(zhuǎn)錄本分析 |
| 2.1.8 BrCER1基因與普通白菜中蠟質(zhì)性狀的關(guān)系 |
| 2.1.9 BrCER1基因的生物信息學分析 |
| 2.1.10 BrCER1基因在逆境下表達量分析 |
| 2.2 結(jié)果與討論 |
| 2.2.1 蠟質(zhì)突變體遺傳分析 |
| 2.2.2 兩個親本表型觀察 |
| 2.2.3 無蠟質(zhì)突變體表面蠟質(zhì)的細胞學特征 |
| 2.2.4 無蠟質(zhì)突變體蠟質(zhì)成分的測定 |
| 2.2.5 無蠟質(zhì)突變體的生理特征 |
| 2.2.6 同源克隆法克隆BrCER1基因和群體驗證 |
| 2.2.7 BrCER1基因在親本中的表達量和轉(zhuǎn)錄本分析 |
| 2.2.8 BrCER1基因與普通白菜中蠟質(zhì)性狀的關(guān)系 |
| 2.2.9 BrCER1基因的進化分析 |
| 2.2.10 BrCER1基因在逆境下表達量的變化分析 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 紅菜薹蠟質(zhì)基因的精細定位和功能分析 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 實驗材料和種植 |
| 3.1.2 突變體表型觀察 |
| 3.1.3 掃描電鏡和透射電鏡分析 |
| 3.1.4 莖表面蠟質(zhì)組分的測定和分析 |
| 3.1.5 葉片離體失水率和葉片葉綠素浸出率分析 |
| 3.1.6 BrCER4基因的精細定位和克隆 |
| 3.1.7 BrCER4基因在親本中的表達量和轉(zhuǎn)錄本分析 |
| 3.1.8 BrCER4基因與紅菜薹中蠟質(zhì)性狀的關(guān)系 |
| 3.1.9 BrCER4基因的生物信息學分析 |
| 3.1.10 BrCER4基因在逆境下表達量分析 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 突變體的表型特征 |
| 3.2.2 突變體表面蠟質(zhì)的細胞學特征 |
| 3.2.3 突變體蠟質(zhì)成分的測定 |
| 3.2.4 突變體的滲透性變化 |
| 3.2.5 BrCER4基因的精細定位和克隆 |
| 3.2.6 BrCER4基因在親本中的表達量和轉(zhuǎn)錄本分析 |
| 3.2.7 BrCER4基因與紅菜薹中蠟質(zhì)性狀的關(guān)系 |
| 3.2.8 BrCER4基因的進化分析 |
| 3.2.9 BrCER4基因在逆境下表達量的變化分析 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 紅菜薹紅色基因pur07的精細定位和候選基因分析 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 實驗材料和種植 |
| 4.1.2 突變體pur07表型觀察 |
| 4.1.3 花青素含量的測定 |
| 4.1.4 pur07基因的精細定位和克隆 |
| 4.1.5 pur07基因的表達量分析 |
| 4.1.6 pur07基因超表達載體的構(gòu)建 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 單基因分離群體中pur07表型特征 |
| 4.2.2 花青素含量分析 |
| 4.2.3 多態(tài)性標記開發(fā)和pur07基因的精細定位 |
| 4.2.4 pur07基因序列的表達量分析 |
| 4.2.5 pur07基因超表達載體的構(gòu)建 |
| 4.3 討論 |
| 參考文獻 |
| 附錄一：植物總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄程序 |
| 附錄二：第二章節(jié)中所用的分子標記引物 |
| 附錄三：第三章節(jié)中所用的分子標記引物 |
| 附錄四：第四章節(jié)中所用的分子標記引物 |
| 附錄五：登錄基因信息 |
| 附錄六：BrCER1基因在13S106和13S126中的cDNA序列和氨基酸信息 |
| 附錄七：BrCER4基因在WT和glossy中的cDNA序列和氨基酸信息 |
| 附錄八：紅色植株中啟動子區(qū)域5,409bp插入序列信息 |
| 附錄九：pur07基因在紅色、綠色植株中的DNA序列和氨基酸信息 |
| 附錄十：在讀期間已發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（2）蕓芥果膠酸裂解酶基因的克隆及序列分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料 |
| 1.1.1 植物材料 |
| 1.1.2酶、試劑盒和主要化學試劑 |
| 1.2 總RNA提取及cDNA第一鏈合成 |
| 1.3 RACE |
| 1.3.1引物設(shè)計 |
| 1.3.2 EsPL基因5′端序列的獲得 |
| 1.3.3 EsPL基因3′端序列的獲得 |
| 1.3.4全長cDNA序列的拼接、編碼區(qū)(CDS)的克隆與序列分析 |
| 1.4 蕓芥EsPL基因編碼蛋白質(zhì)功能分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 蕓芥EsPL基因的RACE分析 |
| 2.2 全長cDNA序列的拼接與編碼區(qū)(CDS)片段的獲得 |
| 2.3 蕓芥EsPL基因預(yù)測蛋白的生物信息學分析 |
| 2.4 蕓芥EsPL基因編碼蛋白的同源性及進化樹分析 |
| 2.5 果膠酸裂解酶基因在蕓芥SI和SC開花前后的表達分析 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（3）蕓芥自交親和相關(guān)基因的差異顯示及表達分析（論文提綱范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 總RNA提取和檢測 |
| 1.3 第一鏈c DNA的合成 |
| 1.4 mRNA差異顯示PCR |
| 1.5 差異條帶的回收及二次擴增 |
| 1.6 差異顯示片段的克隆和測序 |
| 1.7 差異表達片段的序列分析 |
| 1.8 差異基因的驗證 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 mRNA差異顯示 |
| 2.2 差異片段二次擴增 |
| 2.3 差異帶的克隆及序列分析 |
| 2.4 差異基因在SI和SC中的表達分析 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（4）芥菜型油菜遺傳物質(zhì)人工滲入白菜型油菜的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文獻綜述 |
| 1.1 蕓薹屬的細胞遺傳學研究 |
| 1.2 遠緣雜交研究進展及應(yīng)用 |
| 1.2.1 遠緣雜交研究進展 |
| 1.2.2 遠緣雜交在作物遺傳育種的應(yīng)用 |
| 1.3 植物遠緣雜種后代的主要研究方法 |
| 1.3.1 細胞學鑒定 |
| 1.3.2 分子標記技術(shù) |
| 1.3.3 基因組原位雜交技術(shù) |
| 1.4 植物異染色體系的創(chuàng)建及利用 |
| 1.4.1 異附加系 |
| 1.4.2 異代換系 |
| 1.4.3 易位系 |
| 1.5 油菜自交親和的遺傳研究 |
| 1.5.1 油菜自交不親和的類型 |
| 1.5.2 油菜自交不親和的分子機制 |
| 1.5.3 克服自交不親和的研究 |
| 1.6 本研究的背景及目的意義 |
| 第2章 芥菜型油菜和白菜型油菜種間雜種遺傳分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 試驗材料 |
| 2.2.2 試驗方法 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 雜種 F1的獲得及遺傳分析 |
| 2.3.2 芥白雜種后代植株形態(tài)學分析 |
| 2.3.3 花粉育性的變異分析 |
| 2.3.4 芥白雜種后代細胞學研究 |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 正反交組合的差異 |
| 2.4.2 芥白雜交后代廣泛分離 |
| 2.4.3 芥白雜交后代的細胞遺傳學 |
| 第3章 芥菜型油菜優(yōu)良性狀導(dǎo)入白菜型油菜的研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 試驗材料 |
| 3.2.2 試驗方法 |
| 3.3 結(jié)果分析 |
| 3.3.1 自交親和性狀的滲入 |
| 3.3.2 黃籽材料的獲得 |
| 3.3.3 新型白菜型油菜的細胞學及形態(tài)學 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 滲入芥菜型油菜遺傳物質(zhì)的新型白菜型油菜變異豐富 |
| 3.4.2 自交親和材料的遺傳機制及利用前景 |
| 3.4.3 黃籽材料的獲得及意義 |
| 第4章 芥白雜種后代 GISH 分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料方法 |
| 4.2.1 試驗材料 |
| 4.2.2 試驗方法 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 雜種 F1的花粉母細胞減數(shù)分裂原位雜交分析 |
| 4.3.2 BC1F1植株原位雜交分析 |
| 4.3.3 BC1F2群體 GISH 分析 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 GISH 在減數(shù)分裂觀察中的重要作用 |
| 4.4.2 A 與 B 基因組的部分同源配對 |
| 4.4.3 異附加系和代換系材料的獲得及利用價值 |
| 第5章 新型白菜型油菜基因組水平變異研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料方法 |
| 5.2.1 試驗材料 |
| 5.2.2 試驗方法 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 AFLP 及 SSR 多態(tài)性分析 |
| 5.3.2 芥菜型油菜 A 基因組的滲入 |
| 5.3.3 新型白菜型油菜中外源染色體的滲入情況 |
| 5.3.4 聚類分析 |
| 5.3.5 主成分分析 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 新型白菜型油菜外源遺傳物質(zhì)的滲入 |
| 5.4.2 新型白菜型油菜的育種利用價值 |
| 第6章 新型白菜型油菜的農(nóng)藝性狀分析 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料與方法 |
| 6.2.1 試驗材料 |
| 6.2.2 試驗方法 |
| 6.2.3 數(shù)據(jù)處理 |
| 6.3 結(jié)果與分析 |
| 6.3.1 新型白菜型油菜性狀的變異 |
| 6.3.2 性狀間的相關(guān)性分析 |
| 6.3.3 主成分分析 |
| 6.3.4 方差分析 |
| 6.4 討論 |
| 6.4.1 新型白菜型油菜的性狀表現(xiàn) |
| 6.4.2 新型白菜型油菜在油菜育種的價值 |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 縮略詞 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（5）用于配制綜合雜交種的三個恢復(fù)系評價（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 研究的目的及意義 |
| 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 油菜雜種優(yōu)勢和利用 |
| 1.2.2 油菜綜合雜交種的研究概況 |
| 1.2.3 異交率的研究 |
| 1.2.4 油菜親和性研究 |
| 第二章 3 個恢復(fù)系異交率的測定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 引物篩選 |
| 2.3.2 指紋圖譜的構(gòu)建 |
| 2.3.3 異交率的測定 |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 分子標記在異交率測定中的應(yīng)用 |
| 2.4.2 親本基因型對異交率的影響 |
| 2.4.3 各材料異交率的分析 |
| 第三章 3 個恢復(fù)系雜交和自交花粉萌發(fā)、花粉管生長差異研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 恢復(fù)系材料 3509 作母本自交和雜交授粉后花粉管熒光觀察 |
| 3.3.2 恢復(fù)系材料 4152 作母本自交和雜交授粉后花粉管熒光觀察 |
| 3.3.3 恢復(fù)系材料 4395 作母本自交和雜交授粉后花粉管熒光觀察 |
| 3.3.4 混合授粉后雜種紫色心葉性狀觀察 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 雜交親和性和異交率 |
| 3.4.2 混合授粉實驗分析 |
| 第四章 3 個恢復(fù)系雜種優(yōu)勢的研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 初花期、成熟期調(diào)查 |
| 4.3.2 考種結(jié)果 |
| 4.3.3 農(nóng)藝性狀的雜種優(yōu)勢分析 |
| 4.3.4 小區(qū)產(chǎn)量的方差分析 |
| 4.4 討論 |
| 第五章 全文結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 作者簡介 |
（6）甘藍型油菜自交不親和分子恢復(fù)機理研究及應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語表 |
| 1 文獻綜述 |
| 1.1 自交不親和性概述 |
| 1.2 蕓薹屬自交不親和的分子機理 |
| 1.2.1 自交不親和識別基因的鑒定 |
| 1.2.2 S單倍型及其顯隱性關(guān)系 |
| 1.2.3 蕓薹屬植物自交不親和反應(yīng)機制 |
| 1.3 以擬南芥作模式的自交不親和研究 |
| 1.4 十字花科植物中花粉-柱頭的互作研究 |
| 1.5 甘藍型油菜中自交(不)親和性的研究和應(yīng)用 |
| 1.6 研究目的與意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 載體和菌株 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 油菜DNA提取 |
| 2.2.2 PCR反應(yīng)及片段的克隆,測序 |
| 2.2.3 油菜各組織總RNA的抽提及檢測 |
| 2.2.4 RT-PCR及Real time-PCR |
| 2.2.5 表達載體構(gòu)建 |
| 2.2.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的油菜遺傳轉(zhuǎn)化 |
| 2.2.7 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化及陽性植株的篩選 |
| 2.2.8 GUS分析 |
| 2.2.9 花藥半薄切片的制作 |
| 2.2.10 自交不親和表型鑒定 |
| 2.2.11 花粉萌發(fā)觀察 |
| 2.2.12 S單倍型與S位點基因的命名 |
| 2.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.3.1 遺傳分析 |
| 2.3.2 生物信息相關(guān)分析 |
| 2.4 轉(zhuǎn)錄組測序 |
| 2.4.1 cDNA文庫構(gòu)建和Solexa/Illumina測序 |
| 2.4.2 RNA-seq數(shù)據(jù)處理 |
| 2.4.3 DEGs(差異表達基因)的分析與注釋 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 自交不親和系‘S-1300’的遺傳特征 |
| 3.1.1 自交不親和系‘S-1300’與恢復(fù)系‘10-9-10-9-8400’中S單倍型的組成 |
| 3.1.2 自交不親和系‘S-1300’的遺傳分析 |
| 3.1.3 BnSP11-1300與BnSRK-1300基因的克隆 |
| 3.1.4 BnSP11-1300與BnSRK-1300基因的表達分析 |
| 3.2 自交不親和分子標記體系的建立 |
| 3.2.1 分析恢復(fù)系‘10-9-8400’中BnSRK-1與BnSP11-1基因的核酸序列 |
| 3.2.2 建立自交不親和分子標記體系 |
| 3.2.3 調(diào)查父本的基因型及其與F_1表型的關(guān)系 |
| 3.3 ‘10-9-8400’與‘Westar’自交親和性的研究 |
| 3.3.1 油菜中Helitron類轉(zhuǎn)座子的發(fā)現(xiàn)及進化分析 |
| 3.3.2 BnSP11-1基因啟動子分析 |
| 3.3.3 BnSP11-1基因的功能互補 |
| 3.4 基于RNA-seq技術(shù)的親和/不親和分子機理初探 |
| 3.4.1 差異表達基因的鑒定 |
| 3.4.2 差異表達基因的注釋 |
| 3.4.3 RNA-seq數(shù)據(jù)的驗證 |
| 4 討論 |
| 4.1 ‘S-1300’的自交不親和性 |
| 4.2 蕓薹屬S單倍型互作及顯隱性關(guān)系 |
| 4.3 ‘S-1300’的遺傳基礎(chǔ)及在SI分子標記體系在育種中的應(yīng)用 |
| 4.4 Helitrons在甘藍型油菜的進化中起著關(guān)鍵的作用 |
| 4.5 BnSP11-1基因啟動子的順式元件 |
| 4.6 野生型‘Westar’柱頭的授粉特性 |
| 4.7 親和/不親和的花粉-柱頭互作具有一些共同的信號傳導(dǎo)路徑 |
| 4.8 親和/不親和授粉中一些可能的信號傳導(dǎo)路徑 |
| 4.9 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 附錄1 |
| 附錄2 |
| 附錄3 |
| 附錄4 |
| 附錄5 |
（7）芥菜型油菜和白菜型油菜雜種后代自交親和性研究（論文提綱范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 供試材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 雜交方法 |
| 1.2.2 自交親和指數(shù)測定 |
| 1.2.3 花粉管萌發(fā)觀察 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 BC1F1植株自交親和性分析 |
| 2.2 BC1F2和BC2F1群體自交親和性分析 |
| 2.2.1 自交親和指數(shù) |
| 2.2.2 花粉管萌發(fā)觀察 |
| 2.3 BC1F3和BC2F2群體自交親和性分析 |
| 2.3.1 自交親和指數(shù) |
| 2.3.2 花粉管萌發(fā)觀察 |
| 2.4 BC1F2群體和BC1F3群體間自交親和性的遺傳規(guī)律 |
| 3 結(jié)論與討論 |
（8）利用大黃油菜人工合成甘藍型油菜S0、S1世代的遺傳分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 人工合成甘藍型油菜的途徑 |
| 1.2 人工合成甘藍型油菜細胞遺傳學研究 |
| 1.2.1 蕓薹屬 ABC 基因組起源關(guān)系 |
| 1.2.2 人工合成甘藍型油菜花粉母細胞減數(shù)分裂（PMCs）研究 |
| 1.3 人工合成甘藍型油菜基因組遺傳變異研究 |
| 1.3.1 人工合成甘藍型油菜二倍化過程中基因組變異 |
| 1.3.2 人工合成甘藍型油菜二倍化過程中表觀遺傳變異 |
| 1.3.2.1 甲基化變異 |
| 1.3.2.2 基因表達變異 |
| 1.4 幾種常見的分子標記技術(shù) |
| 1.4.1 SSR 標記 |
| 1.4.2 AFLP 標記 |
| 1.4.3 SRAP 標記 |
| 1.5 油菜千粒重的研究 |
| 1.5.1 千粒重的遺傳與 QTL 定位研究 |
| 1.5.2 環(huán)境對千粒重的影響 |
| 1.6 油菜自交親和性研究 |
| 1.6.1 自交親和性分子機制的研究 |
| 1.6.2 自交親和性遺傳研究 |
| 1.7 本研究的目的和意義 |
| 第二章 人工合成甘藍型油菜鑒定和形態(tài)學特征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料方法 |
| 2.2.1 試驗材料 |
| 2.2.2 試驗方法 |
| 2.2.2.1 細胞學觀察 |
| 2.2.2.2 DNA 提取 |
| 2.2.2.3 SSR 分子標記體系 |
| 2.2.2.4 擴增產(chǎn)物的 PAGE 膠檢測 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 人工合成甘藍型油菜形態(tài)學特征 |
| 2.3.2 人工合成甘藍型油菜鑒定 |
| 2.3.2.1 細胞學鑒定 |
| 2.3.2.2 SSR 分子標記鑒定 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 人工合成甘藍型油菜千粒重和自交親和性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 人工合成甘藍型油菜千粒重的研究 |
| 3.2.1 材料方法 |
| 3.2.1.1 試驗材料 |
| 3.2.1.2 試驗方法 |
| 3.2.3 結(jié)果與分析 |
| 3.2.3.1 人工合成甘藍型油菜 S_0千粒重測定 |
| 3.2.3.2 人工合成甘藍型油菜 S_1千粒重測定 |
| 3.2.4 討論 |
| 3.3 人工合成甘藍型油菜自交親和性研究 |
| 3.3.1 材料方法 |
| 3.3.1.1 試驗材料 |
| 3.3.1.2 試驗方法 |
| 3.3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.3.2.1 不同親本組合 S1自交親和性研究 |
| 3.3.2.2 不同世代自交親和指數(shù)比較 |
| 3.3.3 討論 |
| 3.3.3.1 人工合成種不同植株自交親和性變異廣泛性 |
| 3.3.3.2 自交親和性測定方法的研究 |
| 3.3.3.3 人工合成自交不親和甘藍型油菜在雜交油菜生產(chǎn)中的應(yīng)用前景 |
| 第四章 人工合成甘藍型油菜細胞遺傳穩(wěn)定性研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料方法 |
| 4.2.0 試驗材料 |
| 4.2.1 試驗方法 |
| 4.2.1.1 花粉母細胞（PMCs）減數(shù)分裂觀察 |
| 4.2.1.2 花粉活力測定 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 花粉母細胞（PMCs）減數(shù)分裂觀察 |
| 4.3.2 花粉育性 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 人工合成甘藍型油菜花粉母細胞減數(shù)分裂染色體配對 |
| 4.4.2 人工合成甘藍型油菜花粉育性 |
| 第五章 人工合成甘藍型油菜早期世代基因組變異研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料方法 |
| 5.2.1 試驗材料 |
| 5.2.2 試驗方法 |
| 5.2.2.1 基因組 DNA 提取 |
| 5.2.2.2 AFLP 分子標記體系 |
| 5.2.2.3 MSAP 分子標記體系 |
| 5.2.2.4 條帶統(tǒng)計和分析 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 形態(tài)學變異 |
| 5.3.2 A 組合基因組 AFLP 檢測 |
| 5.3.3 B 組合基因組 AFLP 檢測 |
| 5.3.4 B 組合 MSAP 分析 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 異源多倍化后基因組變化情況 |
| 5.4.2 人工合成種遺傳及表觀遺傳變異的基因組來源 |
| 5.4.3 異源多倍化后的表型變異及可能原因 |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 縮略詞 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（9）蕓芥自交親和性的遺傳及自交親和基因mRNA差異顯示分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 供試材料 |
| 1.2 引物序列 |
| 1.3 實驗方法 |
| 1.3.1 蕓芥自交親和性遺傳研究 |
| 1.3.2 取樣 |
| 1.3.3 RNA提取及檢測 |
| 1.3.4 cDNA第一鏈合成 |
| 1.3.5 DDRT-PCR擴增及電泳檢測 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 蕓芥自交親和性的遺傳特性 |
| 2.1.1 蕓芥F1群體自交親和性表現(xiàn) |
| 2.1.2 蕓芥F2群體自交親和性表現(xiàn) |
| 2.1.3 蕓芥BC1群體自交親和性表現(xiàn) |
| 2.2 蕓芥柱頭總RNA瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果 |
| 2.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA質(zhì)量檢測結(jié)果 |
| 2.4 蕓芥自交親和基因表達器官研究 |
| 2.4.1 蕓芥不同生育期根和莖中mRNA差異顯示結(jié)果 |
| 2.4.2 蕓芥不同生育期葉片和初花期花瓣中mRNA差異顯示結(jié)果 |
| 2.4.3 蕓芥柱頭mRNA差異顯示結(jié)果 |
| 2.5 蕓芥自交親和性相關(guān)基因的特異cDNA片段研究 |
| 2.5.1 蕓芥SC與SI開花前柱頭mRNA差異顯示結(jié)果 |
| 2.5.2 蕓芥SC與SI開花當天和開花后柱頭mRNA差異顯示結(jié)果 |
| 3 討論與小結(jié) |
| 3.1 蕓芥自交親和性與自交不親和性是由一對核基因控制的簡單遺傳性狀 |
| 3.2 蕓芥自交親和基因的表達屬于組織特異性表達 |
| 3.3 與蕓芥自交親和性相關(guān)的cDNA片段 |
（10）植物自交不親和性的研究進展與展望（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 SI機制 |
| 1.1 孢子體型自交不親和機制 |
| 1.2 配子體型自交不親和機制 |
| 2 自交不親和性相關(guān)蛋白 |
| 2.1 S糖蛋白 |
| 2.2 SRK底物蛋白ARC1、硫氧還蛋白THL1和THL2 |
| 2.3 HT蛋白 |
| 3 植物自交不親和鑒定方法 |
| 3.1 熒光測定法 |
| 3.2 等電聚焦電泳測定法 |
| 3.3 PCR法 |
| 4 植物自交不親和基因分離與研究 |
| 5 植物自交不親和的克服與應(yīng)用 |
| 6 展望 |
四、PCR步行法克隆油菜自交不親和基因（論文參考文獻）
- [1]白菜類蔬菜蠟質(zhì)基因和紅色基因的遺傳克隆與分析[D]. 王燦潔. 華中農(nóng)業(yè)大學, 2018(01)
- [2]蕓芥果膠酸裂解酶基因的克隆及序列分析[J]. 方彥,楊剛,孫萬倉,武軍艷,劉自剛,曾秀存,李學才,董云. 西北農(nóng)業(yè)學報, 2016(03)
- [3]蕓芥自交親和相關(guān)基因的差異顯示及表達分析[J]. 方彥,孫萬倉,武軍艷,曾秀存,劉自剛,楊剛,楊寧寧. 中國油料作物學報, 2014(05)
- [4]芥菜型油菜遺傳物質(zhì)人工滲入白菜型油菜的研究[D]. 牛妍. 青海大學, 2014(01)
- [5]用于配制綜合雜交種的三個恢復(fù)系評價[D]. 李開祥. 青海大學, 2014(01)
- [6]甘藍型油菜自交不親和分子恢復(fù)機理研究及應(yīng)用[D]. 高長斌. 華中農(nóng)業(yè)大學, 2013(10)
- [7]芥菜型油菜和白菜型油菜雜種后代自交親和性研究[J]. 牛妍,趙志剛,余青蘭. 河南農(nóng)業(yè)科學, 2013(09)
- [8]利用大黃油菜人工合成甘藍型油菜S0、S1世代的遺傳分析[D]. 富貴. 青海大學, 2013(01)
- [9]蕓芥自交親和性的遺傳及自交親和基因mRNA差異顯示分析[J]. 范惠玲,白生文,張芬琴,肖占文,陳修斌,孫萬倉. 干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究, 2012(06)
- [10]植物自交不親和性的研究進展與展望[J]. 安雯,曹陽,李俞濤,潘鳳榮,肖敏,鄭瑋,侯義龍. 信陽師范學院學報(自然科學版), 2009(04)