一、下丘腦神經(jīng)肽的研究進(jìn)展（論文文獻(xiàn)綜述）
龔雪娜[1]（2021）在《不同海拔分布大絨鼠面對食物質(zhì)量變化的生理和行為響應(yīng)》文中提出野外小型哺乳動物生存和繁殖的一大挑戰(zhàn)是依托于棲息地環(huán)境生態(tài)因子的不確定性和不穩(wěn)定性,尤其是隨季節(jié)性變化而波動的食物資源條件。冬季溫度低、食物資源差,對于行動能力較差的小型嚙齒類動物的生存能量需求和為春季繁殖儲備能量都是極大挑戰(zhàn)。而所能獲得的食物質(zhì)量的高低則能決定小型嚙齒類動物絕對能量的攝入和是否需要增減活動行為。體重調(diào)節(jié)是野外小型哺乳動物應(yīng)對食物資源變化的表觀策略之一。血清瘦素（Leptin）作為一種脂肪分泌因子,主要由白色脂肪組織分泌,在體重調(diào)節(jié)中具有重要作用。下丘腦具有多個攝食調(diào)控中樞,其中弓狀核（Arcuate nucleus,ARC）內(nèi)的兩大類食欲神經(jīng)肽在調(diào)節(jié)攝食,控制體重方面具有重要作用。分別是促食類神經(jīng)肽Y（Neuropeptide Y,NPY）和刺鼠相關(guān)蛋白（Agouti related peptide,Ag RP）;抑食類神經(jīng)肽阿片促黑色素原（Pro-opiomelanocortin,POMC）和可卡因-安他非明轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)肽（Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART）。靜止代謝率（Resting metabolic rate,RMR）在一定程度能反映動物極端生存環(huán)境的耐受力。高海拔地區(qū)生存的物種通常都有較高的RMR,也更能適應(yīng)和應(yīng)對極端環(huán)境條件的脅迫。消化道形態(tài)的調(diào)節(jié)和行為模式改變是動物適應(yīng)不同環(huán)境條件的另一生存策略,活動行為的差異不僅表現(xiàn)在種間,種內(nèi)因棲息地差異也會存在顯著差異。橫斷山脈因其特殊的地質(zhì)、地貌、水文等生物特性而具有豐富的植被資源和豐富的野生動物資源。大絨鼠（Eothenomys miletus）是橫斷山固有種,為了更全面而系統(tǒng)地理解大絨鼠適應(yīng)于橫斷山地區(qū)而未遷移和擴(kuò)散的生存機(jī)制,在本課題組先前的研究基礎(chǔ)上,本論文從食物因子方面,探究大絨鼠面對食物質(zhì)量變化差異的生存機(jī)制,不同海拔地區(qū)的大絨鼠是否存在不同的調(diào)節(jié)機(jī)制?冬季是食物條件最差的季節(jié),也是野外小型嚙齒類動物對能量需求最大的季節(jié)。高脂食物和高糖食物在提供能量方面占有足夠優(yōu)勢。因此本研究選取表型分化明顯的香格里拉地區(qū)和劍川地區(qū)的大絨鼠為研究對象,在冬季采樣,進(jìn)行高脂和高糖食物對其生理指標(biāo)和行為模式影響的研究,喂以高脂食物或高糖食物4周和重喂標(biāo)準(zhǔn)食物4周,在實(shí)驗(yàn)過程中測定大絨鼠的體重和食物攝入量,靜止代謝率和活動行為,并在0天、28天、56天測定了大絨鼠的血清瘦素、下丘腦神經(jīng)肽表達(dá)量和身體組成等指標(biāo)。探討不同地區(qū)間大絨鼠面對不同食物質(zhì)量變化的生存適應(yīng)機(jī)制差異。本論文主要包括兩個部分:（1）橫斷山不同海拔地區(qū)大絨鼠面對高脂食物變化的生理和行為適應(yīng)差異對兩地區(qū)大絨鼠進(jìn)行了高脂食物處理的實(shí)驗(yàn)并測量了上述指標(biāo)。結(jié)果表明:地區(qū)和高脂食物對體重、攝食量和RMR的影響顯著,地區(qū)對活動行為影響差異顯著,但高脂食物對活動行為影響不顯著。同時,地區(qū)和高脂食物對瘦素和NPY表達(dá)量的影響差異顯著,瘦素和體重呈正相關(guān),和NPY表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。此外,兩個地區(qū)大絨鼠生理特征也表現(xiàn)出地區(qū)差異,如香格里拉大絨鼠的RMR和食物攝入量均高于劍川地區(qū),但是體重低于劍川地區(qū)。劍川地區(qū)大絨鼠在重喂標(biāo)準(zhǔn)食物后體重下降較快,香格里拉地區(qū)逐漸下降。以上結(jié)果表明在面對高脂食物時兩地區(qū)的大絨鼠體重均增加,重喂食后兩個地區(qū)大絨鼠的體重均回到對照組水平,表現(xiàn)出了較強(qiáng)的可塑性。瘦素和NPY表達(dá)量可能在其體重調(diào)節(jié)和能量平衡中占有重要地位。地區(qū)之間的表型差異可能和海拔差異導(dǎo)致的地區(qū)間食物資源、溫度等條件密切相關(guān)。（2）橫斷山不同海拔地區(qū)大絨鼠面對高糖食物變化的生理和行為適應(yīng)差異對兩地區(qū)大絨鼠進(jìn)行了高糖食物處理的實(shí)驗(yàn)并測量了上述指標(biāo)。結(jié)果表明:地區(qū)和高糖食物對體重、攝食量影響顯著,而RMR和活動行為僅存在地區(qū)差異。同時,地區(qū)和高糖食物對瘦素影響差異顯著,下丘腦神經(jīng)肽表達(dá)量僅NPY存在顯著地區(qū)差異。瘦素和體重呈正相關(guān),和神經(jīng)肽表達(dá)量不相關(guān)。此外,兩個地區(qū)大絨鼠生理特征也表現(xiàn)出地區(qū)差異,如香格里拉大絨鼠的RMR和食物攝入量均高于劍川地區(qū),但是體重低于劍川地區(qū)。劍川地區(qū)大絨鼠在重喂標(biāo)準(zhǔn)食物后體重仍然較高,香格里拉地區(qū)逐漸下降。以上結(jié)果表明,在面對高糖食物時兩地區(qū)的大絨鼠體重均增加,重喂食后兩個地區(qū)大絨鼠的體重變化差異顯著,表現(xiàn)出了較大的地區(qū)間差異。瘦素和NPY表達(dá)量可能在各地區(qū)大絨鼠的體重調(diào)節(jié)和能量平衡中占有重要地位。不同海拔地區(qū)決定的環(huán)境因素如食物資源、溫度等可能是決定生物地區(qū)間表型差異和其應(yīng)對極端環(huán)境適應(yīng)性的核心要素?？傊?食物質(zhì)量對大絨鼠在冬季生存至關(guān)重要,不同地區(qū)間大絨鼠面對不同食物質(zhì)量生理和行為模式存在顯著差異。香格里拉大絨鼠對食物質(zhì)量變化更敏感,但可塑性也更強(qiáng),其對極端環(huán)境或生態(tài)因子（Ecological factor）波動性較大的棲息地的耐受性也更強(qiáng);對棲息地食物資源等生境（Habitat）條件的長期自然選擇（Natural selection）是造成不同地區(qū)間大絨鼠表型分化差異的主要原因。
趙雪瑩[2]（2021）在《RFRP-3對子宮內(nèi)膜和人源子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的影響及分子機(jī)制》文中研究指明促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,Gn IH）是2000年發(fā)現(xiàn)的一種新型下丘腦神經(jīng)肽,其在攝食、能量平衡和生殖等方面發(fā)揮重要作用。該神經(jīng)肽結(jié)構(gòu)高度保守,RF酰胺相關(guān)肽-1（RFamide-related peptide-1,RFRP-1）和RF酰胺相關(guān)肽-3（RFamide-related peptide-1,RFRP-3）是Gn IH在哺乳動物中的同系物,其中RFRP-3起主要作用。Gn IH可通過其受體—G蛋白偶聯(lián)受體147（the G protein-coupled receptor147,GPR147）作用于下丘腦,垂體等組織器官以抑制生殖。子宮是女性重要的生殖器官,研究發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射RFRP-3可引起大鼠子宮發(fā)育延遲,其機(jī)制及其它作用尚不清楚。因此,深入探索Gn IH對子宮作用的分子機(jī)制對哺乳動物乃至人類生殖有著重要意義。子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma,EC）是女性常見的三大惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅女性生命健康,其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)逐年上升,并呈現(xiàn)年輕化趨勢。目前其主要的治療措施有傳統(tǒng)手術(shù)治療,放、化療及激素治療,但對于晚期癌,復(fù)發(fā)癌以及滿足年輕患病女性生育需求治療效果欠佳。因此,尋找更加有效的治療方法,從而降低病死率,延緩復(fù)發(fā),并提高患者生活質(zhì)量,是國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注的焦點(diǎn)。本課題組前期實(shí)驗(yàn)表明,側(cè)腦室注射RFRP-3 6 h對卵巢摘除術(shù)后補(bǔ)充雌激素（ovariectomized estrogen primed,OEP）大鼠作用顯著,RFRP-3可通過抑制POMC、kisspeptin神經(jīng)元,刺激NPY神經(jīng)元抑制Gn RH神經(jīng)元,以抑制Gn RH的釋放,進(jìn)而抑制垂體促性腺激素的釋放,從而發(fā)揮對下丘腦-垂體生殖軸的調(diào)節(jié)作用。子宮是下丘腦-垂體生殖軸的下游靶器官,RFRP-3是否可通過下丘腦-垂體生殖軸對其進(jìn)行調(diào)節(jié)尚不清楚。因此,本研究利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）技術(shù)對側(cè)腦室微量注射RFRP-3及生理鹽水的OEP大鼠子宮腔液中的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定,對所篩選的差異蛋白（differentially expressed proteins,DEPs）進(jìn)行GO（Genetic Ontology）功能富集分析、KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析和蛋白-蛋白間相互作用（Protein-Protein Interaction,PPI）網(wǎng)絡(luò)等生物信息學(xué)分析,探索RFRP-3作用于子宮的影響及潛在分子機(jī)制。應(yīng)用子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A進(jìn)行細(xì)胞增殖、凋亡檢測,旨在闡明RFRP-3作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的分子機(jī)制,探索RFRP-3對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的影響,此結(jié)果可能為深入探索RFRP-3對子宮的影響提供新思路。第一部分基于蛋白質(zhì)組學(xué)對側(cè)腦室注射RFRP-3的OEP大鼠子宮腔液分泌蛋白的研究目的:探討側(cè)腦室注射促性腺激素抑制激素對卵巢摘除術(shù)后補(bǔ)充雌激素模型大鼠子宮腔液的蛋白組改變的影響及其潛在分子機(jī)制。方法:1.子宮腔液的收集及分組:取成年雌性SD大鼠30只,建立卵巢摘除術(shù)后補(bǔ)充雌激素大鼠模型。將30只造模成功的OEP大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組和RFRP-3實(shí)驗(yàn)組（n=15）,按16μl/kg側(cè)腦室注射生理鹽水及RFRP-3。注射后6 h取子宮腔液,分別將實(shí)驗(yàn)組（n=15）和對照組（n=15）大鼠的子宮腔液混合后分成三份。2.利用LC-MS/MS法比較6 h后側(cè)腦室注射RFRP-3實(shí)驗(yàn)組（n=15,16μl/kg）與生理鹽水對照組（n=15,16μl/kg）的蛋白質(zhì)組分,利用Maxquant軟件進(jìn)行定性分析,利用Uniport數(shù)據(jù)庫篩選差異蛋白。3.利用GO功能富集分析分生物學(xué)過程、細(xì)胞成分和分子功能三部分分析差異蛋白的功能。4.利用KEGG通路分析對差異蛋白涉及到的信號途徑進(jìn)行分析。5.利用Omicsbean軟件繪制PPI網(wǎng)絡(luò)篩選中心節(jié)點(diǎn)蛋白。結(jié)果:1.側(cè)腦室注射RFRP-3影響子宮腔液蛋白變化利用LC-MS/MS技術(shù)檢測子宮腔液蛋白變化情況。結(jié)果顯示,與生理鹽水對照組相比,側(cè)腦室注射RFRP-3 6 h對OEP大鼠的子宮腔液蛋白成分及表達(dá)水平產(chǎn)生顯著影響（P<0.05）。根據(jù)P<0.05,FC=2的標(biāo)準(zhǔn),篩選出了417個差異表達(dá)蛋白,其中包括279個上調(diào)的DEPs和138個下調(diào)的DEPs。2.側(cè)腦室注射RFRP-3后所得DEPs的生物學(xué)功能分析GO分析顯示,差異表達(dá)蛋白主要定位于胞外區(qū)(及膜結(jié)合囊泡;生物過程涉及對有機(jī)物質(zhì)的反應(yīng)、對含氧化合物的反應(yīng)、內(nèi)源性刺激反應(yīng)、脅迫反應(yīng)等,參與蛋白結(jié)合,蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)合,大分子復(fù)合物結(jié)合等分子功能。3.側(cè)腦室注射RFRP-3后所得DEPs涉及到的信號途徑分析KEGG通路分析顯示,側(cè)腦室注射RFRP-3后DEPs顯著富集（P<0.05）的前十位通路為:碳代謝、縫隙連接、長期抑制、肌動蛋白骨架調(diào)控、氨基酸生物合成、補(bǔ)體和凝血級聯(lián)、糖酵解/糖異生、癌癥蛋白多糖、血小板活化和甲狀腺激素合成。4.側(cè)腦室注射RFRP-3后所得DEPs的蛋白互作分析利用STRING數(shù)據(jù)庫獲取蛋白質(zhì)間相互作用數(shù)據(jù),并利用Omicsbean軟件對PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化。通過分析比較蛋白間相互作用的密切程度,共篩選出5個蛋白為中心節(jié)點(diǎn)蛋白,分別為Gna13、Gnaq、Gnai3、Kras、Mmp9。其中Mmp9上調(diào),Gna13、Gnaq、Gnai3、Kras下調(diào)。結(jié)論:RFRP-3可能通過上調(diào)Mmp9和下調(diào)Gna13、Gnaq、Gnai3、Kras等中心節(jié)點(diǎn)蛋白改變OEP大鼠子宮腔液的蛋白表達(dá)譜。第二部分RFRP-3對人源子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的作用及機(jī)制研究目的:探索RFRP-3對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖和凋亡的影響及其作用的分子機(jī)制。方法:1.利用UALCAN數(shù)據(jù)庫搜索中心節(jié)點(diǎn)蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況。2.利用CCK8實(shí)驗(yàn)檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞（HEC-1A、Ishikawa）在不同濃度RFRP-3作用24、48h后的增殖能力。3.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A加入RFRP-3 24h后的細(xì)胞凋亡情況。4.蛋白印跡法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)水平。5.蛋白印跡法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組Kras（中心節(jié)點(diǎn)蛋白）蛋白的表達(dá)水平。6.RT-qPCR檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組PI3K/AKT/mTOR通路基因的轉(zhuǎn)錄水平。7.蛋白印跡法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組PI3K/AKT/mTOR通路蛋白的表達(dá)水平。8.RT-qPCR檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組ERK通路的基因的轉(zhuǎn)錄水平。9.蛋白印跡法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組ERK通路蛋白的表達(dá)水平。10.RT-qPCR和蛋白印跡法分別從基因、蛋白水平檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組自噬發(fā)生情況。11.蛋白印跡法檢測子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A對照組與RFRP-3組GPR147蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:1.子宮內(nèi)膜癌組織中Gna13、Gnaq、Kras、Mmp9表達(dá)發(fā)生顯著改變在UALCAN數(shù)據(jù)庫對5個中心節(jié)點(diǎn)蛋白進(jìn)行搜索后,結(jié)果顯示,Gna13、Gnaq、Kras、Mmp9均在子宮內(nèi)膜癌組織與正常組織的比較中存在差異。與正常組織相比,Kras、Mmp9在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)上調(diào),Gna13、Gnaq在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)下調(diào)。2.RFRP-3抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A的增殖在雌激素受體陰性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A和雌激素受體陽性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa中,選取0.1、1、10、100、1000、10000 ng/ml6個RFRP-3濃度,24 h和48 h兩個時間點(diǎn)進(jìn)行CCK8實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,10000ng/ml RFRP-3抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A的增殖,加藥24 h效果最好。0.1、1、10、100、1000、10000 ng/ml 6個RFRP-3濃度,24 h和48 h兩個時間點(diǎn)加入RFRP-3,未對雌激素受體陽性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Ishikawa產(chǎn)生影響。3.RFRP-3誘導(dǎo)HEC-1A發(fā)生凋亡Annexin V-FITC/PI雙染法對加入RFRP-3 24 h后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A的凋亡率進(jìn)行了檢測,本實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)的凋亡率為晚期凋亡與早期凋亡的總和（UR區(qū)+LR區(qū)）。結(jié)果顯示,相對于對照組,10000 ng/ml RFRP-3組凋亡率上升（P<0.05）。4.RFRP-3改變HEC-1A中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,10000 ng/ml RFRP-3組抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表達(dá)低于對照組（P<0.05）,促凋亡蛋白Bax蛋白表達(dá)量高于對照組（P<0.05）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.RFRP-3降低HEC-1A中Kras蛋白表達(dá)量對在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)發(fā)生顯著變化的中心節(jié)點(diǎn)蛋白進(jìn)行檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,與對照組相比,10000 ng/ml RFRP-3組中Kras蛋白表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。6.RFRP-3下調(diào)HEC-1A中PI3K/AKT/mTOR通路基因的轉(zhuǎn)錄水平為進(jìn)一步驗(yàn)證中心節(jié)點(diǎn)蛋白Kras在RFRP-3影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖與凋亡中的作用,我們對Kras下游通路進(jìn)行了RT-qPCR檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取RNA進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示:相對于對照組,10000 ng/ml RFRP-3加藥組PI3K的m RNA相對表達(dá)水平降低（P<0.001）;AKT的m RNA相對表達(dá)水平降低（P<0.01）;mTOR的m RNA相對表達(dá)水平降低（P<0.01）。7.RFRP-3下調(diào)HEC-1A中PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表達(dá)水平為進(jìn)一步驗(yàn)證中心節(jié)點(diǎn)蛋白Kras在RFRP-3影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖與凋亡中的作用,我們對Kras下游通路進(jìn)行了蛋白印跡檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:與對照組相比,10000 ng/ml RFRP-3組PI3K蛋白相對表達(dá)水平降低（P<0.01）;p-AKT蛋白相對表達(dá)水平降低（P<0.05）;AKT總蛋白相對表達(dá)水平未發(fā)生變化;mTOR蛋白相對表達(dá)水平低于對照組（P<0.05）。8.RFRP-3下調(diào)HEC-1A中ERK通路基因的轉(zhuǎn)錄水平為進(jìn)一步驗(yàn)證中心節(jié)點(diǎn)蛋白Kras在RFRP-3影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖與凋亡中的作用,我們對Kras下游ERK通路進(jìn)行了RT-qPCR檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取RNA進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:與對照組相比,10000 ng/ml RFRP-3加藥組ERK的m RNA相對表達(dá)水平降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。9.RFRP-3下調(diào)HEC-1A中ERK通路蛋白表達(dá)水平為進(jìn)一步驗(yàn)證中心節(jié)點(diǎn)蛋白Kras在RFRP-3影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A增殖與凋亡中的作用,我們對Kras下游ERK通路進(jìn)行了蛋白印跡檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn):相對于對照組,10000 ng/ml RFRP-3組p-ERK蛋白相對表達(dá)水平下降（P<0.05）;ERK1/2蛋白相對表達(dá)水平未發(fā)生改變。10.RFRP-3引起HEC-1A發(fā)生自噬由于自噬調(diào)控因子mTOR活化,進(jìn)而檢測了檢測自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-I/Ⅱ及自噬底物p62的表達(dá)情況。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取RNA進(jìn)行RT-qPCR實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:10000 ng/ml RFRP-3組LC3-Ⅱ的m RNA轉(zhuǎn)錄水平高于對照組（P<0.01）。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:相對于對照組,10000 ng/ml RFRP-3組LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高（P<0.05）;自噬降解產(chǎn)物p62蛋白相對表達(dá)水平降低（P<0.05）。11.RFRP-3增加HEC-1A中受體GPR147的蛋白表達(dá)為了闡釋RFRP-3作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A的起效機(jī)制,我們利用蛋白印跡法對GPR147的蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測。RFRP-3作用于HEC-1A細(xì)胞24 h后,提取蛋白進(jìn)行蛋白印記實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:相較于對照組,10000 ng/ml RFRP-3加藥組GPR147蛋白相對表達(dá)升高（P<0.05）。結(jié)論:RFRP-3對HEC-1A細(xì)胞的抑制作用可能通過激活受體GPR147并與之結(jié)合,影響中心節(jié)點(diǎn)蛋白Kras,激活其下游PI3K/AKT/mTOR通路和ERK通路,降低Bcl-2的表達(dá)、促進(jìn)Bax的表達(dá),引起自噬發(fā)生發(fā)揮作用。
周雨辰[3]（2020）在《神經(jīng)肽spexin對小鼠攝食的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究》文中提出背景spexin（SPX）,即神經(jīng)肽Q（NPQ）,是一種新發(fā)現(xiàn)的肽類激素。spexin最初是通過基于隱馬爾可夫模型的生物信息學(xué)方法在人類基因組中鑒定的,之后通過生化法確認(rèn)spexin的含量,并在小鼠食道和胃中被檢測到。spexin的氨基酸序列在不同物種中高度保守,表明該肽在生物進(jìn)化過程中具有穩(wěn)定性。spexin是甘丙肽受體2/3（Galanin receptor type 2/3,GalR 2/3）的天然配體。甘丙肽作為一種典型的神經(jīng)肽,對許多生理和病理生理過程具有調(diào)節(jié)作用。spexin蛋白在人類、嚙齒動物、金魚等中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周組織中廣泛表達(dá),提示spexin可能參與調(diào)節(jié)多種生理和病理功能。最近研究發(fā)現(xiàn)spexin在胃腸運(yùn)動、肥胖、糖尿病、能量代謝、內(nèi)分泌、精神疾病和心血管功能中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。然而,speixn對哺乳動物的攝食影響仍然是未知的。攝食是一個復(fù)雜的行為,涉及多個下丘腦神經(jīng)通路,目前已知有多種神經(jīng)肽類物質(zhì)都被證實(shí)在攝食調(diào)控中發(fā)揮正向或負(fù)向作用。spexin在大鼠下丘腦、消化道等部位的分布提示spexin在能量代謝中發(fā)揮著重要作用。本研究擬探索speixn對小鼠攝食的影響及其機(jī)制。目的探討腹腔注射spexin對小鼠攝食的調(diào)控作用,闡明其作用機(jī)制。方法1.檢測注射spexin 1 h,2h,4h,6h,24h后小鼠的累計(jì)攝食量。按照注射藥物的不同分為三組:①對照組:生理鹽水;②低劑量組:spexin 1 nmol/只;③高劑量組:spexin 10 nmol/只。給予事先稱重過的鼠糧,按照上述時間節(jié)點(diǎn)稱重鼠糧變化。（1）小鼠禁食12 h,光周期開始前腹腔注射spexin。（2）小鼠自由進(jìn)食,黑暗周期開始前腹腔注射spexin。（3）小鼠自由進(jìn)食,光周期開始前腹腔注射spexin后給予事先稱重過的高脂飼料。2.檢測注射spexin、GalR2/3拮抗劑后小鼠0-6 h的累計(jì)攝食量。小鼠自由進(jìn)食,在黑暗周期開始時給藥。按照注射藥物的不同分為六組:（1）對照組:生理鹽水;（2）spexin 10 nmol/只;（3）GalR2 拮抗劑 M871 10 nmol/只;（4）GalR2 拮抗劑 M871+spexin 10 nmol/只;（5）GalR3拮抗劑SNAP37889 10 nmol/只;（6）GalR3拮抗劑SNAP37889+spexin 10 nmol/只。給予事先稱重過的鼠糧,按照上述時間節(jié)點(diǎn)稱重鼠糧變化。3.腹腔注射spexin 1 h后,取小鼠腦組織,提RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,用RT-PCR技術(shù)檢測小鼠下丘腦、腦干組織中與食欲調(diào)節(jié)相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平。4.腹腔注射spexin 1h后,4%多聚甲醛心臟灌注固定,取腦組織,用免疫組織化學(xué)法檢測NPY和c-Fos蛋白在下丘腦的表達(dá),并用Image J軟件計(jì)算下丘腦各區(qū)域陽性細(xì)胞數(shù)目。5.腹腔注射spexin 1h后,取小鼠血液,酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測血清中NPY的含量。同時取小鼠腦組織,用蛋白質(zhì)免疫印跡分析法（Western blot）檢測相關(guān)的蛋白表達(dá)水平的變化。6.小鼠禁食20h腹腔注射spexin,計(jì)算小鼠2h內(nèi)胃排空率。小鼠腹腔注射spexin,進(jìn)行排便測試。7.小鼠禁食8 h腹腔注射spexin,4 h后注射葡萄糖2 g/kg或胰島素1 IU/kg,進(jìn)行GTT及ITT測試,檢測第0 min,15 min,30 min,60 min,201min的血糖水平變化。8.腹腔注射spexin 45 min后,小鼠箱中適應(yīng)15 min,進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn),檢測其自發(fā)活動、行走總路程和平均速度的變化。結(jié)果1.對禁食小鼠,低劑量spexin可明顯減少光照期間4 h的累計(jì)攝食量;高劑量spexin可顯著抑制2h、4h和6h的累計(jì)攝食量。對自由攝食小鼠,低劑量與高劑量spexin均可顯著降低小鼠黑暗期間4 h和6 h的累計(jì)攝食量;但spexin對小鼠各時間點(diǎn)的高脂飼料累計(jì)攝食量無顯著影響。2.GalR2拮抗劑M871與spexin聯(lián)合注射不能阻斷spexin對小鼠攝食的抑制作用,而GalR3拮抗劑SNAP37889與spexin聯(lián)合注射能顯著拮抗spexin對小鼠攝食的抑制作用,這表明spexin的厭食作用是由GalR3介導(dǎo)的。3.RT-PCR結(jié)果表明,spexin顯著降低了下丘腦Npy mRNA的表達(dá)水平,對Agrp,Pomc,Cart,Crh,Orexin,Mch等食欲調(diào)節(jié)相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平?jīng)]有影響。spexin對腦干組織中與食欲調(diào)節(jié)相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平?jīng)]有影響。4.NPY免疫組化結(jié)果顯示,spexin能顯著降低下丘腦背內(nèi)側(cè)核NPY陽性細(xì)胞的數(shù)量,但對前核、弓狀核、外側(cè)區(qū)、室旁核、視上核、視交叉上核和腹內(nèi)側(cè)核的陽性細(xì)胞數(shù)目無顯著影響。5.ELISA結(jié)果表明,spexin注射組小鼠血清NPY濃度與對照組相比無顯著性差異。6.c-Fos免疫組化結(jié)果顯示spexin能顯著增加下丘腦前核和視交叉上核中c-Fos 陽性細(xì)胞的數(shù)量,但對下丘腦弓狀核、背內(nèi)側(cè)核、外側(cè)區(qū)、室旁核、視上核、腹內(nèi)側(cè)核的陽性細(xì)胞數(shù)目無顯著影響。7.Western blot分析表明,spexin能顯著提高p-CaMK Ⅱ蛋白表達(dá)水平。8.胃排空實(shí)驗(yàn)中,spexin注射組的小鼠胃排空率較對照組略有下降,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平。排便測試中,spexin注射組的小鼠排便個數(shù)和糞便干重較對照組略有下降,但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平。9.糖耐量實(shí)驗(yàn)中,葡萄糖注射后30 min和60 min,spexin注射組的血糖水平較對照組略有下降,但在各時間點(diǎn)均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平。在胰島素耐受實(shí)驗(yàn)中,spexin注射組與對照組在注射胰島素后的差異無顯著性。10.曠場實(shí)驗(yàn)中,低劑量與高劑量spexin對小鼠自發(fā)活動、總行程、平均速度無顯著影響。結(jié)論1.腹腔注射spexin（1,10nmol/只）對小鼠的攝食行為發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用。2.spexin可能通過GalR3,繼而通過p-CaMKⅡ誘導(dǎo)AHA和SCN中c-Fos的表達(dá),抑制下丘腦NPY的表達(dá),從而產(chǎn)生抑制攝食的作用。
葉城[4]（2020）在《草魚大腦和垂體中神經(jīng)肽挖掘及速激肽功能鑒定》文中指出在脊椎動物中,大腦和垂體是機(jī)體內(nèi)極其重要的器官。大腦可以通過合成與釋放神經(jīng)肽調(diào)節(jié)垂體激素的合成與分泌,進(jìn)而參與機(jī)體生長、生殖、應(yīng)激和免疫等生理過程的調(diào)控。與哺乳動物不同,魚類的下丘腦-垂體軸缺失了門脈系統(tǒng),因此調(diào)控垂體激素合成與分泌的上游神經(jīng)肽變得更為龐大和復(fù)雜?；诖?本研究以草魚（Ctenopharyngodon idellus）為研究對象,首先,通過組織切片技術(shù)分析草魚不同大腦亞區(qū)及垂體的形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu),并結(jié)合生物信息學(xué)方法初步探究草魚各腦區(qū)和垂體的功能及各腦區(qū)間的相互關(guān)系。接著,基于草魚基因組數(shù)據(jù)庫和草魚大腦各亞區(qū)和垂體的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),挖掘草魚大腦和垂體中的神經(jīng)肽編碼基因及其相關(guān)受體信息,并對它們在草魚大腦不同亞區(qū)和垂體內(nèi)的分布進(jìn)行分析。最后,以挖掘出的速激肽家族的神經(jīng)肽為切入點(diǎn),分別研究了TAC3編碼產(chǎn)物NKB和NKBRP以及TAC4編碼產(chǎn)物HK1和HK2在草魚垂體內(nèi)的功能及其作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1、草魚大腦和垂體的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)H.E染色切片結(jié)果顯示,草魚大腦主要由6個亞區(qū)構(gòu)成,包括嗅球、端腦、視頂蓋、下丘腦、小腦和延腦。與軟骨魚類和哺乳類不同,草魚大腦和垂體間無下丘腦-垂體門脈系統(tǒng),下丘腦的神經(jīng)元直接伸入并終止于前腺垂體內(nèi)。通過分析草魚不同腦區(qū)和垂體的轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),本研究發(fā)現(xiàn)嗅球可能與生殖和免疫有關(guān);端腦可能參與食欲和生殖的調(diào)控;視頂蓋不僅在視覺系統(tǒng)中發(fā)揮重要功能,并可能涉及攝食行為的調(diào)控;下丘腦在攝食和生殖過程中扮演重要角色;延腦與聽覺系統(tǒng)有關(guān);垂體在能量代謝、器官發(fā)育和生殖過程中起關(guān)鍵作用。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,下丘腦和端腦不僅在結(jié)構(gòu)上高度相關(guān),其功能也存在重疊性,表明端腦和下丘腦可能是硬骨魚類攝食和生殖的調(diào)控中心。2、結(jié)合草魚基因組數(shù)據(jù)庫和草魚大腦各亞區(qū)及垂體的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),本研究系統(tǒng)地挖掘了來自23個家族共計(jì)91個神經(jīng)肽前體編碼基因,以及上述神經(jīng)肽相對應(yīng)的112個受體基因?；赗NA-seq數(shù)據(jù),對上述基因在草魚6個不同大腦亞區(qū)和垂體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平進(jìn)行分析。最后,結(jié)合已有研究和本研究的結(jié)果,對神經(jīng)肽及其受體在草魚大腦和垂體的主要合成區(qū)域和功能行使位置進(jìn)行了預(yù)測。3、以草魚垂體細(xì)胞為研究對象,轉(zhuǎn)錄組分析表明NKB能夠誘導(dǎo)垂體內(nèi)729個基因的差異表達(dá),這些基因涉及了激素活性、食物攝入、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝等。體外細(xì)胞培養(yǎng)和RT-q PCR結(jié)果顯示,NKB在草魚垂體細(xì)胞中可以以時間和劑量依賴的方式誘導(dǎo)四種厭食肽（UTS1、CART、POMCb和NMB）m RNA的表達(dá)。受體選擇性和受體后信號通路實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,NKB對草魚垂體中UTS1、CART、POMCb和NMB表達(dá)的刺激作用均能由NK3R介導(dǎo)。這些反應(yīng)激活了腺苷酸環(huán)化酶/蛋白激酶A（c AMP/PKA）通路、磷脂酶C/肌醇1,3,5-三磷酸/蛋白激酶C（PLC/IP3/PKC）通路和Ca2+/鈣調(diào)蛋白/Ca M-依賴性蛋白激酶II(Ca2+/Ca M/Ca MK-II)通路。此外,腹腔注射NKBa能夠顯著誘導(dǎo)草魚垂體內(nèi)這四種厭食肽m RNA表達(dá)。此外,攝食實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,草魚進(jìn)食后下丘腦內(nèi)的TAC3a和TAC3b m RNA表達(dá)顯著提高。這些結(jié)果表明,NKB是一個飽感因子,它能夠通過調(diào)節(jié)垂體中厭食肽的表達(dá)參與硬骨魚類攝食調(diào)節(jié)。4、以草魚為研究對象,本研究從草魚大腦和垂體中克隆得到TAC4基因及其受體NK1Rb和NK3Ra1。序列分析顯示草魚TAC4能夠編碼HK1和HK2成熟肽。組織表達(dá)分析表明TAC4在下丘腦、嗅球和延腦中高表達(dá),受體NK1Rb、NK3Ra2和NK3Rb等均在垂體中有較高的表達(dá),預(yù)示TAC4在草魚垂體中可能發(fā)揮重要功能。通過在HEK293T細(xì)胞膜上表達(dá)NKRs,HK2對6個NKRs均有較高的激活效率,其中對NK2R應(yīng)是HK2的特異性受體;而HK1僅能微弱激活NK2R、NK3Ra2和NK3Rb。轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,HK2能夠誘導(dǎo)垂體細(xì)胞內(nèi)1051個基因差異表達(dá),這些基因主要涉及食欲的負(fù)調(diào)節(jié)、激素活性、受體配體結(jié)合和G蛋白偶聯(lián)受體信號通路等。在草魚垂體原代細(xì)胞中,HK2能夠以時間依賴性和劑量依賴性的方式促進(jìn)PRL、SLα、UTS1、NMB1、CART2和SN2 m RNA表達(dá),而HK1對上述基因均無顯著反應(yīng)。為了解析HK1在草魚垂體內(nèi)的失活原因,本研究將含VFGLM基序的HK1修改為FFGLM基序的HK1突變體（HK1-M）。受體-配體反應(yīng)表明,不同于HK1,HK1-M對6個NKRs展現(xiàn)了很高的激活效率。同時,HK1-M能夠顯著誘導(dǎo)草魚垂體細(xì)胞內(nèi)UTS1、PRL和SLαm RNA表達(dá)。此外,HK1和HK2共處理垂體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示,HK1不能有效阻斷HK2在垂體中的功能,表明HK1不是HK2的內(nèi)源性拮抗劑。綜上結(jié)果表明,HK2可以直接作用于草魚垂體細(xì)胞,通過受體NKRs的介導(dǎo),促進(jìn)垂體內(nèi)PRL、SLα、UTS1、CART2、NMB1和SN2的m RNA表達(dá);而HK1因其FXGLM序列突變致使其功能丟失。綜上所述,本研究建立了草魚不同大腦亞區(qū)和垂體的解剖學(xué)和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫,對草魚不同腦區(qū)以及垂體的結(jié)構(gòu)和功能做出了初步分析,深入挖掘了草魚大腦和垂體內(nèi)的神經(jīng)肽前體及其受體基因,并以速激肽家族為切入點(diǎn),研究了TAC3編碼產(chǎn)物和TAC4編碼產(chǎn)物在垂體中的功能及作用機(jī)制。本研究有助于豐富我們對魚類大腦不同亞區(qū)顯微結(jié)構(gòu)和功能的認(rèn)識,為進(jìn)一步深入研究魚類神經(jīng)肽的功能提供了基礎(chǔ)。
羅皓燦[5]（2020）在《不同脂肪酸對鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng)及食欲調(diào)控的影響》文中研究說明中樞神經(jīng)系統(tǒng)的脂肪酸感知機(jī)制是魚類腦部檢測周圍脂肪酸濃度水平,并參與體內(nèi)生理代謝,攝食調(diào)控以及維持機(jī)體能量平衡與穩(wěn)態(tài)的重要調(diào)控機(jī)制。鱖魚（Siniperca chuatsi）作為一種典型的淡水肉食性魚類,具有特殊的食性,即開口起就以鮮活餌料為食,通常拒食死餌以及人工配合飼料。并且,鱖魚對碳水化合物利用的能力較低,脂質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)是其重要能量來源。因此,本研究以鱖魚作為典型兇猛性淡水魚的模型,從活體水平和細(xì)胞水平分別探究不同脂肪酸對鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng)以及食欲調(diào)控機(jī)制的作用。首先,在活體實(shí)驗(yàn)中評估不同脂肪酸對鱖魚攝食量和體內(nèi)脂質(zhì)代謝物水平的影響;其次,通過RT-PCR技術(shù)從m RNA水平上分析鱖魚下丘腦對不同脂肪酸感知作用和攝食調(diào)控的分子機(jī)制;最后,在細(xì)胞水平上,采用RT-PCR檢測和PPARα特異性抑制劑處理等生物學(xué)技術(shù),驗(yàn)證鱖魚中樞神經(jīng)對不飽和脂肪酸（UFA）的直接感知作用以及PPARα在脂肪酸感知過程中的關(guān)鍵作用。本研究以期為鱖魚脂肪酸代謝與攝食調(diào)控機(jī)制提供理論支持。實(shí)驗(yàn)一,為了研究鱖魚下丘腦脂肪酸感知系統(tǒng)及其對不同飽和度水平的脂肪酸的感知能力。我們通過腦室內(nèi)注射脂肪酸的方法研究硬脂酸（SA;C18:0）,油酸（OA;C18:1 n-9）,亞油酸（LA;C18:2 n-6）和α-亞麻酸（ALA;C18:3 n-3）對鱖魚下丘腦脂肪酸感知系統(tǒng)的影響。第一階段,在腦室注射脂肪酸2、4、6、8和12 h后分別統(tǒng)計(jì)鱖魚攝食量。第二階段,在腦室注射脂肪酸6 h后檢測下丘腦組織中脂肪酸感知機(jī)制相關(guān)基因（cd36、cpt1c、pparα和srebp1c）以及食欲相關(guān)神經(jīng)肽基因（pomc、cart、agrp和npy）的表達(dá)量。結(jié)果顯示,腦室注射OA、LA和ALA均能激活脂肪酸感知信號通路中的FAT/CD36和PPARα并調(diào)節(jié)下丘腦食欲神經(jīng)肽的表達(dá)水平。而在鱖魚腦室注射OA、LA和ALA 6和8 h后觀察到其攝食量顯著下降,這與基因檢測顯示下丘腦脂肪酸感知系統(tǒng)被激活的狀態(tài)相一致。研究表明,哺乳動物研究中的脂肪酸感知機(jī)制也存在于鱖魚的下丘腦中,即能感知單不飽和脂肪酸（MUFA）。值得注意的是,與哺乳動物不同的是多不飽和脂肪酸（PUFA）也能激活鱖魚的下丘腦脂肪酸感知系統(tǒng)。此外,脂肪酸的飽和度似乎對鱖魚下丘腦的脂肪酸感知極為重要,因?yàn)镾A對鱖魚下丘腦感知沒有產(chǎn)生明顯影響。我們的發(fā)現(xiàn)將有助于魚類下丘腦脂肪酸感知機(jī)制的研究,并突出了PUFA在魚類中的重要地位。實(shí)驗(yàn)二,為了驗(yàn)證鱖魚中樞神經(jīng)脂肪酸感知系統(tǒng)能夠直接感知UFAs,而不依賴外周信號傳導(dǎo)以及其它激素的調(diào)控,我們在細(xì)胞水平上做了進(jìn)一步研究。我們在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加100μM的OA、LA和ALA刺激鱖魚腦細(xì)胞,孵育6 h后提取細(xì)胞RNA,檢測脂肪酸感知機(jī)制相關(guān)基因的表達(dá)量,例如fas、cpt1c、cd36、pparα和srebp1c,以及食欲神經(jīng)肽npy的基因表達(dá)。結(jié)果顯示,OA、LA和ALA能夠直接激活鱖魚腦細(xì)胞脂肪酸感知信號通路,并調(diào)節(jié)神經(jīng)肽npy基因表達(dá)水平。因此,研究證明UFAs能夠直接作用鱖魚腦部的脂肪酸感知神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)三,為了進(jìn)一步探究PPARα在鱖魚腦神經(jīng)元感知脂肪酸過程中的功能以及對其它脂肪酸代謝因子的影響。我們通過在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加100μM的OA、LA和ALA外加PPARα特異性抑制劑共同孵育鱖魚腦細(xì)胞6 h,同樣提取細(xì)胞RNA檢測脂肪酸感知機(jī)制相關(guān)基因（fas、cpt1c、cd36、pparα和srebp1c）以及食欲神經(jīng)肽npy基因的表達(dá)量。結(jié)果顯示,在核受體PPARα功能受抑制后,OA、LA和ALA無法激活鱖魚腦細(xì)胞脂肪酸感知信號通路,從而導(dǎo)致腦細(xì)胞的食欲神經(jīng)肽npy基因表達(dá)水平無明顯變化。因此,PPARα作為脂肪酸代謝的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子在鱖魚的脂肪酸感知機(jī)制中具有重要作用。綜上所述,我們分別從活體水平和細(xì)胞水平探究了不同脂肪酸對鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng)以及攝食調(diào)控的作用機(jī)制。結(jié)果顯示脂肪酸的不飽和度是脂肪酸能否被鱖魚中樞神經(jīng)系統(tǒng)感知的關(guān)鍵。其中,UFAs可能通過脂肪酸代謝（fas和cpt1c）和脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)（cd36和pparα）途徑激活鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng),隨后通過某種連接機(jī)制可調(diào)節(jié)下游食欲基因（pomc、cart、agrp和npy）的表達(dá),進(jìn)而影響鱖魚的食欲。本研究將為魚類脂肪酸感知及攝食調(diào)控機(jī)制的研究提供重要的理論依據(jù)。
王蓓[6]（2020）在《白術(shù)粗多糖調(diào)節(jié)吊尾大鼠腸道菌群及感知能力的機(jī)制研究》文中研究表明航天員在航天失重環(huán)境中罹患感染性疾病的問題逐漸展現(xiàn)在人們的面前。在失重環(huán)境中機(jī)體各系統(tǒng)發(fā)生的一系列生理病理變化,如微生物性狀及致病性的改變,給航天醫(yī)學(xué)研究和實(shí)施帶來重大挑戰(zhàn)。失重對胃腸黏膜屏障功能可造成一定影響,人體中腸道菌群與腸道關(guān)系密切,腸道中豐富的腸神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)與腦腸軸系統(tǒng)致使腸道環(huán)境的變化對機(jī)體各組織產(chǎn)生影響。在近期研究中發(fā)現(xiàn),在空間環(huán)境下腸道菌群豐度會發(fā)生改變。只是目前沒有深入的研究,一些研究發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖可以調(diào)節(jié)腸道菌群穩(wěn)態(tài)破壞反應(yīng)治療具有良好的效果。因此,白術(shù)多糖可能在模擬微重力下,具有調(diào)節(jié)腸道菌群變化的潛力。作為一種預(yù)防劑和治療劑。本文所用實(shí)驗(yàn)材料為Wistar大鼠,采用尾吊的方法,建立模擬微重力模型,培養(yǎng)28天分為五組實(shí)驗(yàn)。即地面組、吊尾組、低、中、高劑量組。實(shí)驗(yàn)通過收集28天不同組的大鼠糞便,從糞便中提取六種代表菌群DNA,應(yīng)用實(shí)時定量PCR技術(shù)測定其基因組DNA。結(jié)果發(fā)現(xiàn):模擬微重力可導(dǎo)致腸道微環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡,表現(xiàn)為相比于地面對照組,擬桿菌、乳桿菌、腸球菌、雙歧桿菌的益生菌數(shù)量減少顯著;梭菌、大腸桿菌的致病菌數(shù)量增加顯著。而低、中、高劑量的灌胃白術(shù)多糖組中,發(fā)現(xiàn)相比于吊尾組益生菌的數(shù)量出現(xiàn)增加顯著、致病菌的數(shù)量出現(xiàn)減少顯著的現(xiàn)象。劑量組的顯著性根據(jù)不同菌群而表現(xiàn)各有不同。在第28天分別用熱刺痛儀測定大鼠感知痛覺能力,以大鼠后肢感知痛覺后抬起的時間為依據(jù);用大鼠跑步機(jī)測定運(yùn)動協(xié)調(diào)能力,以大鼠跌落在電刺激軌道區(qū)域的次數(shù)為依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):模擬微重力可導(dǎo)致感知痛覺能力和運(yùn)動協(xié)調(diào)能力受到影響,表現(xiàn)為相比于地面對照組,感知痛覺敏感度顯著性降低、運(yùn)動協(xié)調(diào)能力顯著性下降。而低、中、高劑量灌有白術(shù)多糖組中,發(fā)現(xiàn)相比于吊尾組感知痛覺能力顯著性恢復(fù)、運(yùn)動協(xié)調(diào)能力顯著性恢復(fù)。劑量組顯著性表現(xiàn)各有不同。并依據(jù)前期實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果,通過Biogps數(shù)據(jù)庫信息分析發(fā)現(xiàn),神經(jīng)肽Y、P物質(zhì)、血管活性腸肽與感知能力的密切聯(lián)系。為以后對于白術(shù)多糖調(diào)節(jié)調(diào)尾對感知能力的具體機(jī)制研究提供重要的理論依據(jù)。綜上,在模擬失重后腸道菌群發(fā)生紊亂。機(jī)體感覺知覺發(fā)生改變,運(yùn)動協(xié)調(diào)能力發(fā)生異常。而白術(shù)多糖可以緩解腸道菌群與機(jī)體感知與運(yùn)動方便的影響。可能作為以后對于航天員進(jìn)行航天作業(yè)時的一種對于身體健康損害的防護(hù)藥劑。
石靖[7]（2020）在《GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)及其路徑分析》文中認(rèn)為課題組前期研究顯示氨基葡萄糖（GlcN）是一有效的采食調(diào)節(jié)劑,但對蛋雞采食的調(diào)節(jié)機(jī)制不清。鑒此,通過考察GlcN對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響,探討GlcN對血液中代謝產(chǎn)物及調(diào)節(jié)采食激素或因子分泌調(diào)節(jié);制作組織切片觀察腸道形態(tài)結(jié)構(gòu),高通量測序技術(shù)分析GlcN對腸道微生物區(qū)系的影響;用RNA-seq技術(shù)測定下丘腦基因的轉(zhuǎn)錄組,篩選表達(dá)差異基因,分析信號通路,并用免疫組化法和RT-PCR從蛋白和轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證差異基因的表達(dá)。聯(lián)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)及基因表達(dá)、菌群組成數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,得到GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)的信號通路,以闡釋GlcN對蛋雞采食調(diào)控機(jī)理,為GlcN在蛋雞飼糧中的合理應(yīng)用和新型誘食劑的研發(fā)提供理論依據(jù)。研究分為3部分:試驗(yàn)一:GlcN對蛋雞產(chǎn)蛋性能及相關(guān)血液生化指標(biāo)影響挑選290日齡,健康且產(chǎn)蛋率相近的高峰期羅曼蛋雞432只,隨機(jī)分成4組,每組6個重復(fù),每個重復(fù)18只雞。各組蛋雞分別采食添加0%、0.4%、0.6%和0.8%GlcN的飼糧。預(yù)試期7d,正試期60d。結(jié)果顯示:1)GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)呈二次曲線關(guān)系（Y=124.30+35.43X-39.41X2（R2=0.367,P=0.000,n=48））,隨GlcN水平提高,蛋雞采食隨之增加至0.45%時達(dá)到最大后降低。2)GlcN對產(chǎn)蛋高峰期蛋雞產(chǎn)蛋率和平均蛋重均無顯著影響（P>0.05）,增大料蛋比,但降低異常蛋率（P<0.05）。3)GlcN影響蛋雞機(jī)體代謝,GlcN提高蛋雞血糖、TG和LDL含量（P<0.05）,但GlcN組間血糖無顯著差異（P>0.05）,HDL與GlcN水平間呈二次曲線變化;0.4%GlcN蛋雞血清Ig Y含量（P<0.05）最高;GlcN高于0.6%時血清胰島素含量升高（P<0.05）;Leptin分泌隨著GlcN水平呈二次曲線變化,0.8%GlcN組顯著高于對照組30.08%（P<0.05）;GlcN促進(jìn)NO分泌（P<0.05）,但GlcN組間差異不顯著（P>0.05）;GlcN水平高于0.6%時顯著抑制血清IL-6和TNF-α分泌（P<0.05）。試驗(yàn)二:GlcN對蛋雞腸道形態(tài)和菌群的影響試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)一,于試驗(yàn)0d、30d、60d,從每個試驗(yàn)組中挑選健康且體重相近的試雞6只,共24只。取下十二指腸、空腸。試驗(yàn)60d時,從0.0%GlcN組和0.4%組分別挑選3只試雞取盲腸。十二指腸和空腸制作組織切片用于腸道微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察,采集的盲腸內(nèi)容物用于高通量測序分析腸道的菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示:1)0.4%和0.6%GlcN顯著提高蛋雞十二指腸的絨毛高度和絨毛高度與隱窩深度比（P<0.05）,對隱窩深度無顯著影響（P>0.05）。試驗(yàn)60d時,0.8%GlcN組十二指腸絨毛高度和絨隱比顯著低于對照組;試驗(yàn)30d時,添加0.4%～0.6%GlcN顯著增加空腸絨毛高度,0.4%GlcN組空腸絨毛高度與隱窩深度比值最大,試驗(yàn)60d時,GlcN對空腸絨毛高度和隱窩深度無顯著影響,與對照組相比0.8%GlcN組空腸絨毛高度與隱窩深度的比值顯著降低（P<0.05）。2)在門水平上,厚壁菌門為各組中的最優(yōu)勢菌門,相對豐度均在44%以上。在屬水平上,擬桿菌屬、理研菌科＿RC9、Ruminococcus、柔嫩梭菌屬、毛螺菌屬和乳酸菌屬（Lactobacillus）等為優(yōu)勢菌屬,且0.4%GlcN組乳酸桿菌屬相對豐度顯著增加（P<0.05）。試驗(yàn)三:GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)的信號通路分析試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)一,于試驗(yàn)60d,從0.0%、0.4%和0.8GlcN組各挑選蛋雞9只,取下丘腦,液氮保存。其中3只用于轉(zhuǎn)錄組測序,以篩選表達(dá)差異基因和富集信號通路。然后另6只下丘腦分別用免疫組化和RT-PCR從蛋白水平和轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果。另采集十二指腸和腺胃分析胃腸采食基因的表達(dá)。結(jié)果表明:0.4%GlcN組比對0.0%GlcN組共篩選出588個差異基因,其中328個基因表達(dá)上調(diào),260個差異基因表達(dá)下調(diào),差異基因功能注釋后分布于102條通路;0.8%GlcN組比對0.0%GlcN組,共篩選出445個差異基因,其中236個基因表達(dá)上調(diào),209個差異基因表達(dá)下調(diào),差異基因功能注釋后分布于87條通路;經(jīng)GO和KEGG共同富集分析顯示GlcN激活脂肪細(xì)胞因子信號通路和神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路,其中在脂肪細(xì)胞因子信號通路中胰島素信號通路和MAPK信號通路為關(guān)鍵路徑。0.4%GlcN組關(guān)鍵基因POMC表達(dá)下調(diào),0.8%GlcN組NPY表達(dá)上調(diào),通過免疫組化試驗(yàn)和RT-PCR檢測結(jié)果也一致。另外,在胃腸道中0.4%GlcN極顯著下調(diào)腺胃中Ghrelin的m RNA表達(dá)量（P<0.01）,GlcN水平達(dá)到0.8%時,Ghrelin的m RNA表達(dá)量又顯著上升（P<0.01）;GlcN對十二指腸中CCK的m RNA表達(dá)無顯著影響（P>0.05）。結(jié)論:（1）GlcN與蛋雞采食量呈二次曲線規(guī)律,0.45%GlcN時采食達(dá)到最大,隨后降低,GlcN還可降低異常蛋率;（2）GlcN提高血糖、TG、LDL和HDL,促進(jìn)胰島素、Leptin和NO分泌,提高蛋雞免疫,GlcN抑制炎癥因子反應(yīng);（3）GlcN改善蛋雞腸道形態(tài),增加盲腸中有益菌群乳酸菌的數(shù)量;（4）GlcN通過下丘腦的脂肪細(xì)胞因子信號通路和神經(jīng)活性配體-受體相互作用通路,及腸道Ghrelin分泌調(diào)節(jié)蛋雞采食。（5）GlcN調(diào)節(jié)蛋雞采食的作用途徑:1)GlcN通過提高血糖和TG水平,刺激Leptin分泌,與分布在下丘腦Leptin受體結(jié)合后,作用于下丘腦促食神經(jīng)元NPY/Ag RP和抑食神經(jīng)元POMC/CART,減弱Leptin對促食因子NPY抑制作用,顯著上調(diào)NPY表達(dá),抑制POMC合成,減少胃腸調(diào)節(jié)肽Ghrelin分泌,從而增強(qiáng)蛋雞食欲,提高采食量,而高GlcN水平則增強(qiáng)Ghrelin表達(dá),抑制采食。2)GlcN還可能通過增加盲腸中乳酸菌屬的相對豐度,激活蛋雞免疫系統(tǒng),降低促炎性細(xì)胞因子IL-6和TNF-α分泌,增強(qiáng)免疫力,進(jìn)而增加采食。
陳旭[8]（2020）在《刺參生殖相關(guān)神經(jīng)肽挖掘及特征研究》文中研究指明本論文以刺參生殖發(fā)育相關(guān)神經(jīng)肽的功能基因篩選及活性研究為核心,通過生物信息學(xué)分析、分子克隆、細(xì)胞水平的活性驗(yàn)證及生理功能評價,開展較為系統(tǒng)的研究探索,以期為刺參生殖發(fā)育的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)控研究奠定基礎(chǔ)。具體基于刺參基因組、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)篩選到4條刺參生殖發(fā)育相關(guān)神經(jīng)肽編碼基因,并重點(diǎn)圍繞刺參Kisspeptin神經(jīng)肽,初步闡明了分子結(jié)構(gòu)、活性特征及生理功能。主要研究成果如下:1、篩選獲得4條刺參生殖調(diào)控相關(guān)的神經(jīng)肽樣蛋白編碼基因序列（AjKisspeptin、NPS/CCAP型肽（NG）、F-likeSALMF（FS）、L-likeSALMF（LS））。其中刺參kisspepetin前體肽ORF區(qū)長543bp,預(yù)測編碼180個氨基酸長度的前體肽,包含長23aa信號肽、兩段長度分別為32aa（AjKiss1a（AGSLDcEDVERRGRQPNRNAHYRTLPF-NH2））和18aa（AjKiss1b（SAVKNKNKSRARPPLLPF-NH2））的成熟肽。預(yù)測其前體肽的等電點(diǎn)（pI）為4.90,分子量（Mw）為20.283 kD。通過熒光定量基因表達(dá)分析,初步研究了篩選得到的4個神經(jīng)肽編碼基因在刺參生殖發(fā)育過程中的時空分布變化規(guī)律,為后期生物學(xué)功能研究提供參考。2、運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)研究手段,分析和闡明了1個刺參Kisspeptin成熟肽的活性特征。以實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的刺參Kisspeptin受體融合表達(dá)載體（AjGPR54-EGFP）為基礎(chǔ),通過人工合成的刺參Kisspeptin成熟肽的運(yùn)用,激活HEK293中表達(dá)的受體,并檢測受體內(nèi)吞及介導(dǎo)的胞內(nèi)鈣離子濃度和MAPK通路的ERK1/2磷酸化信號。研究結(jié)果證明人工合成的AjKiss1b-10（十肽）可以成功激活受體,說明預(yù)測的刺參Kisspeptin具有明顯的生物活性。研究結(jié)果為進(jìn)一步查明刺參Kisspeptin的生理功能奠定基礎(chǔ)。3、通過體內(nèi)外生理實(shí)驗(yàn),初步查明刺參Kisspeptin成熟肽（AjKiss1b-10）的生理功能。研究通過基因表達(dá)分析、免疫熒光組織化學(xué)檢測,查明Kisspeptin在生殖發(fā)育過程中具有明顯的高表達(dá)特征,同時主要分布在刺參呼吸樹、雄性性腺和神經(jīng)環(huán)組織中;體外生理實(shí)驗(yàn)中,AjKiss1b-10可激活體外培養(yǎng)的卵巢細(xì)胞中的Kisspeptin受體并介導(dǎo)ERK1/2磷酸化;通過活體注射生理實(shí)驗(yàn)開展,證實(shí)AjKiss1b-10參與呼吸樹和消化道器官功能調(diào)節(jié),并導(dǎo)致消化道顯著退化。研究結(jié)果說明Kisspeptin信號系統(tǒng)參與了刺參的生殖和代謝調(diào)控。
易善勇[9]（2020）在《應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制》文中研究表明應(yīng)激是機(jī)體對內(nèi)外環(huán)境各種應(yīng)激原刺激作用所產(chǎn)生的一種全身性的非特異適應(yīng)性反應(yīng)。在社會高速發(fā)展的今天,應(yīng)激是機(jī)體存在的一種普遍性生物學(xué)現(xiàn)象,緊張的工作和生活節(jié)奏、消極的人際關(guān)系、突發(fā)性的災(zāi)害及重大生活事件均可作為應(yīng)激原使機(jī)體發(fā)生病理生理學(xué)變化。經(jīng)過長期的進(jìn)化,生命體形成了完整的高度保守的調(diào)節(jié)系統(tǒng),即由神經(jīng)內(nèi)分泌、免疫和心血管等機(jī)體多系統(tǒng)在內(nèi)組成的可以應(yīng)對機(jī)體內(nèi)外應(yīng)激原作用并作出適應(yīng)性反應(yīng)的應(yīng)激系統(tǒng)。機(jī)體適度的應(yīng)激屬于正常的生理現(xiàn)象,但如果應(yīng)激程度過強(qiáng)或持續(xù)時間過長,則可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)、心血管、內(nèi)分泌和自身免疫疾病等一系列機(jī)體損傷,甚至死亡。應(yīng)激可導(dǎo)致機(jī)體全身性的內(nèi)分泌改變,其中下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)（Hypothalamus-pituitary-adrenal,HPA）軸和藍(lán)斑-交感-腎上腺髓質(zhì)（Locus ceruleus norepinephrine axis,LC/NE）軸在機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)中起核心作用。當(dāng)機(jī)體受到內(nèi)外應(yīng)激原刺激時,下丘腦被激活可以通過HPA軸促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)合成和釋放糖皮質(zhì)激素（Glucocorticoid,GC）,LC/NE軸興奮可以促進(jìn)腎上腺髓質(zhì)增加腎上腺素（Epinephrine,E）和去甲腎上腺素（Norepinephrine,NE）的分泌。GC、E和NE的分泌有利于機(jī)體動員能量和調(diào)節(jié)代謝變化從而增強(qiáng)機(jī)體抵抗內(nèi)外界危險因素造成的影響。但是高強(qiáng)度的應(yīng)激可使機(jī)體的自適應(yīng)調(diào)節(jié)能力發(fā)生失代償,導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)不同程度的行為異常、功能障礙及病理性損傷。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激本質(zhì)上是應(yīng)激過程中組織細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮的一種自我保護(hù)機(jī)制,但是高強(qiáng)度的應(yīng)激導(dǎo)致的持續(xù)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激也可造成組織細(xì)胞的損傷甚至死亡。當(dāng)前的研究顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在多種神經(jīng)退行性疾病和外傷性腦損傷導(dǎo)致的細(xì)胞死亡及其發(fā)病機(jī)制中起重要作用。作為細(xì)胞內(nèi)參與合成、修飾、折疊及分泌蛋白質(zhì)的重要細(xì)胞器,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的蛋白合成過程受到多種調(diào)控蛋白分子、蛋白折疊催化酶、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)外Ca2+水平等眾多因素的調(diào)節(jié)。正常情況下,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白折疊能力總是與機(jī)體蛋白合成能力相匹配的。當(dāng)機(jī)體受到一系列外界因素刺激時,細(xì)胞會出現(xiàn)低糖、缺血缺氧、體內(nèi)鈣離子水平失衡或調(diào)節(jié)因子及激素水平紊亂,可導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化還原穩(wěn)態(tài)失衡和Ca2+水平紊亂,從而引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)未折疊蛋白或錯誤折疊蛋白的堆積,引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）,并激活機(jī)體的適應(yīng)機(jī)制來應(yīng)對,即未折疊蛋白反應(yīng)（Unfolded protein response,UPR）。Ⅰ型跨膜蛋白激酶（Inositol requirement 1,IRE1）和雙鏈RNA依賴的蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK）,作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的重要感受元件和主要的損傷通路啟動因子,當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生時,二者與熱休克蛋白家族（Heat shock Proteins,HSPs）的糖調(diào)節(jié)蛋白78（Glucose-regulated protein 78,GRP78）分離進(jìn)而激活下游信號通路,通過減少蛋白質(zhì)的翻譯和促進(jìn)伴侶蛋白的生成,促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)恢復(fù)穩(wěn)態(tài)。但是當(dāng)機(jī)體處于過強(qiáng)或者較長時間的應(yīng)激時,應(yīng)激細(xì)胞也可以通過PERK和IRE1分別激活轉(zhuǎn)錄激活因子4（Activating transcription factor 4,ATF4）和細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1（Apoptosis signal regulating kinase 1,ASK1）,進(jìn)而促進(jìn)生長抑制因子（Growth arrest and DNA-damage-inducible gene 153,CHOP）和c-Jun氨基酸末端激酶（c-Jun amino-terminal kinase,JNK）的表達(dá)上調(diào),二者的持續(xù)表達(dá)可以誘導(dǎo)細(xì)胞的損傷。本研究團(tuán)隊(duì)前期研究結(jié)果顯示應(yīng)激可以導(dǎo)致各臟器組織細(xì)胞出現(xiàn)損傷。作為應(yīng)激反應(yīng)最重要的腦區(qū),目前下丘腦在不同時程應(yīng)激刺激下的病理性損傷改變及其損傷機(jī)制,尚無系統(tǒng)詳細(xì)的研究。因此本研究模擬人類應(yīng)激時的生理和心理狀態(tài),建立了不同時程束縛加冰水游泳復(fù)合應(yīng)激大鼠模型,檢測應(yīng)激相關(guān)激素及受體的變化,觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)改變,并從病理學(xué)角度探究應(yīng)激對大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞的影響,同時對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK信號通路相關(guān)蛋白在應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)損傷中的變化規(guī)律及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討,旨在深入探究應(yīng)激導(dǎo)致機(jī)體損傷的發(fā)病機(jī)制,揭示應(yīng)激性損傷形態(tài)學(xué)改變。第一部分不同時程應(yīng)激大鼠模型的建立及病理學(xué)觀察目的:建立不同時程的束縛加冰水游泳復(fù)合應(yīng)激大鼠模型,通過酶聯(lián)免疫吸附（Elisa）實(shí)驗(yàn)、曠場實(shí)驗(yàn)、常規(guī)HE染色、免疫組織化學(xué)染色及組織化學(xué)特殊染色（硫堇和焦油紫染色）,觀察不同時程應(yīng)激對大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞的影響。方法:1. 建立每天束縛6小時后強(qiáng)迫冰水游泳5min的應(yīng)激大鼠模型。通過觀察大鼠體重和曠場行為學(xué)變化,確認(rèn)成功建立不同時程應(yīng)激大鼠模型。2.Elisa實(shí)驗(yàn)檢測應(yīng)激大鼠血清應(yīng)激相關(guān)激素及其受體、HSP70的水平變化。3.HE染色觀察不同時程應(yīng)激大鼠下丘腦的病理學(xué)改變。4.小膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記物（IBA1）檢測應(yīng)激大鼠下丘腦小膠質(zhì)細(xì)胞增生變化規(guī)律。5.硫堇染色和焦油紫染色觀察不同時程應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞尼氏體及形態(tài)改變。結(jié)果:1. 隨著時間延長,對照組大鼠體重不斷增加;與對照組相比,應(yīng)激組大鼠體重增長速度明顯下降（P<0.05）,并且在1d、3d時體重顯著降低。與對照組相比,應(yīng)激組大鼠在曠場內(nèi)排便次數(shù)數(shù)明顯增加,中央?yún)^(qū)運(yùn)動距離和中央?yún)^(qū)運(yùn)動時間明顯降低。2.Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示應(yīng)激大鼠血清的應(yīng)激相關(guān)激素及其受體和HSP70水平出現(xiàn)顯著動態(tài)變化。3.HE染色結(jié)果顯示隨著應(yīng)激時間的延長,下丘腦出現(xiàn)組織水腫、膠質(zhì)細(xì)胞增生,細(xì)胞固縮等病理性改變。4.IBA1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,應(yīng)激14d、21d組大鼠下丘腦小膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)增生、體積變大、突起減少等激活改變。5.硫堇和焦油紫染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示應(yīng)激大鼠下丘腦出現(xiàn)組織輕度水腫、神經(jīng)細(xì)胞水腫、尼氏體固縮甚至變性壞死等病理性改變。小結(jié):本部分實(shí)驗(yàn)在成功建立不同時程應(yīng)激大鼠模型的基礎(chǔ)上,通過HE染色、IBA1免疫組織化學(xué)染色、硫堇和焦油紫特殊染色得出如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:隨著應(yīng)激時間的延長,應(yīng)激大鼠下丘腦出現(xiàn)組織水腫、小膠質(zhì)細(xì)胞增生和激活、神經(jīng)細(xì)胞尼氏體固縮甚至變性死亡等病理性改變,提示應(yīng)激可導(dǎo)致下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷甚至變性死亡。第二部分PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK信號通路參與應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷過程目的:應(yīng)用PERK磷酸化抑制劑和IRE1磷酸激酶抑制劑建立7d應(yīng)激大鼠模型,系統(tǒng)觀察下丘腦病理學(xué)改變及PERK-ATF4-CHOP和IRE1α-ASK1-JNK信號通路相關(guān)m RNA和蛋白的表達(dá)變化,探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷過程及詳細(xì)機(jī)制。方法:1.硫堇染色法觀察應(yīng)激刺激對大鼠下丘腦區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞的影響。2. 免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測應(yīng)激刺激對大鼠下丘腦區(qū)域GRP78表達(dá)的影響。3.免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測應(yīng)激刺激對大鼠下丘腦區(qū)域的PERK-ATF4-CHOP信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)的影響。4.免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測應(yīng)激刺激對大鼠下丘腦區(qū)域的IRE1α-ASK1-JNK信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)的影響。5.RNAScope檢測應(yīng)激刺激對大鼠下丘腦區(qū)域的CHOP和JNK m RNA表達(dá)的影響。結(jié)果:1.硫堇染色結(jié)果:與對照相比,應(yīng)激組大鼠出現(xiàn)水腫,神經(jīng)細(xì)胞固縮等病理性改變;而給予GSK2606414和KIRA6處理的應(yīng)激大鼠上述損傷改變明顯減輕。2. 免疫組織化學(xué)染色和Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,stress（P<0.01）、stress+GSK2606414（P<0.01）及stress+KIRA6（P<0.01）組的GRP78表達(dá)水平明顯增加。3. 免疫組織化學(xué)染色和Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,GSK2606414組的PERK、ATF4、CHOP的表達(dá)水平?jīng)]有顯著改變,Stress（P<0.05）和Stress+GSK2606414（P<0.05）組表達(dá)水平顯著升高,與Stress組相比,Stress+GSK2606414（P<0.05）組表達(dá)水平顯著降低。4. 免疫組織化學(xué)染色和Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,KIRA6組的IRE1、ASK1、JNK的表達(dá)水平?jīng)]有顯著改變,Stress（P<0.05）和Stress+KIRA6（P<0.05）組表達(dá)水平顯著升高,與Stress組相比,Stress+KIRA6（P<0.05）組表達(dá)水平顯著降低。5. RNAScope檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,GSK2606414組的CHOP m RNA的表達(dá)水平?jīng)]有顯著改變,Stress（P<0.05）和Stress+GSK2606414（P<0.05）組表達(dá)水平顯著升高,與Stress組相比,Stress+GSK2606414（P<0.05）組表達(dá)水平顯著降低;與對照組相比,KIRA6組的JNK m RNA的表達(dá)水平?jīng)]有顯著改變,Stress（P<0.05）和Stress+KIRA6（P<0.05）組表達(dá)水平顯著升高,與Stress組相比,Stress+KIRA6（P<0.05）組表達(dá)水平顯著降低。小結(jié):PERK磷酸化抑制劑和IRE1磷酸激酶抑制劑的應(yīng)用可以顯著減輕應(yīng)激導(dǎo)致的下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷和變性死亡程度,并顯著降低PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK信號通路相關(guān)蛋白和m RNA的表達(dá)水平,提示PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK信號通路可能參與應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷過程。第三部分糖皮質(zhì)激素致PC12細(xì)胞損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制研究目的:根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示應(yīng)激大鼠血清GC和GR水平出現(xiàn)動態(tài)變化設(shè)置,旨在細(xì)胞水平探究GC能否導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷及損傷機(jī)制,進(jìn)一步驗(yàn)證整體實(shí)驗(yàn)結(jié)論,為應(yīng)激導(dǎo)致的下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷以及GC是否參與提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.細(xì)胞免疫熒光法檢測PC12細(xì)胞Map2和GR表達(dá)情況。2.CCK-8法檢測25μM、50μM、100μM、200μM、400μM地塞米松（Dexamethasone,DEX）對PC12細(xì)胞存活率的影響;CCK-8法檢測100μM DEX處理PC12細(xì)胞24h,36h,48h對細(xì)胞存活率的影響。3.細(xì)胞免疫熒光法檢測DEX對PC12細(xì)胞C-fos表達(dá)的影響。4.細(xì)胞免疫熒光法檢測DEX對PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、p-IRE1、ATF4、ASK1、CHOP、JNK表達(dá)的影響。結(jié)果:1.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PC12細(xì)胞豐富表達(dá)Map2和GR。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對照組相比,25μM、50μM DEX對細(xì)胞存活率沒有影響,100μM（P<0.01）,200μM（P<0.01）和400μM（P<0.01）組細(xì)胞存活率明顯降低;與對照組相比,100μM DEX處理細(xì)胞24h,36h,48h導(dǎo)致細(xì)胞存活率顯著降低（P<0.01）。3.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對照組相比,DEX組C-fos表達(dá)明顯增高（P<0.01）。4.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對照組相比,4-PBA組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-PERK、p-IRE1、ATF4、ASK1、CHOP、JNK的表達(dá)水平?jīng)]有顯著改變,DEX（P<0.05）和DEX+4-PBA（P<0.05）組表達(dá)水平顯著升高,與DEX組相比,Stress+4-PBA（P<0.05）組表達(dá)水平明顯降低。小結(jié):豐富表達(dá)Map2和GR的PC12細(xì)胞適合用于后續(xù)GC致神經(jīng)細(xì)胞損傷機(jī)制的研究。GC可以抑制PC12細(xì)胞的活性,并顯著降低細(xì)胞存活率,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK通路參與了上述損傷過程。結(jié)論:本研究以束縛加冰水游泳應(yīng)激模型為研究對象,觀察應(yīng)激大鼠行為學(xué)改變、應(yīng)激相關(guān)激素及其受體水平變化和下丘腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷狀態(tài),并應(yīng)用PERK磷酸化抑制劑GSK2606414和IRE1磷酸激酶抑制劑KIRA6來明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在上述損傷中的作用;建立PC12細(xì)胞模型,探究PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK通路在GC致PC12細(xì)胞損傷中的作用。得出以下結(jié)論:1.應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)損傷甚至變性死亡,該損傷可能與GC的水平變化有關(guān)。2.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK信號通路可能參與了應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷過程。3.較高濃度的GC可導(dǎo)致PC12細(xì)胞存活率顯著降低,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了上述損傷過程。綜上,束縛加冰水游泳應(yīng)激刺激可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP和IRE1-ASK1-JNK通路導(dǎo)致下丘腦神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)損傷甚至死亡,GC及其受體水平變化可能參與了上述損傷過程。
肖燃[10]（2020）在《小黃魚神經(jīng)肽FF及其受體基因的克隆、表達(dá)及功能研究初探》文中研究說明神經(jīng)肽FF是屬于RFamide相關(guān)肽家族中的一種八肽,在多種生物過程中具有調(diào)節(jié)功能。本文克隆了小黃魚（Larimichthys polyactis）神經(jīng)肽FF相關(guān)基因（LpNPFF:Accession No.MT012894）及其兩種受體（LpNPFFR1:Accession No.MT012894和LpNPFFR2:Accession No.MT12896）。序列分析結(jié)果顯示小黃魚神經(jīng)肽FF相關(guān)基因cDNA全長835bp,開放閱讀框（ORF）編碼了127個氨基酸殘基,包含一個21個氨基酸殘基的信號肽和兩個成熟的PQRFamide肽,預(yù)測其蛋白質(zhì)相對分子量（MW）為29.8 kDa,等電點(diǎn)（pI）為5.90。LpNPFFR1和LpNPFFR2屬于典型的G蛋白偶聯(lián)受體家族,均具有7個跨膜區(qū)域,他們的ORF區(qū)域分別編碼了427和444個氨基酸殘基。多序列同源性比對與系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示小黃魚神經(jīng)肽FF及其兩種受體基因皆與大黃魚（Larimichthys crocea）的親緣關(guān)系最近;RT-PCR和RT-qPCR結(jié)果顯示,小黃魚神經(jīng)肽FF及其受體基因在性未成熟期（第Ⅱ期）的小黃魚的腦和性腺中表達(dá)含量較高,其次是頭腎和腎臟,在心臟和脾臟中也有表達(dá);原位雜交結(jié)果顯示,在小黃魚中腦的視頂蓋（OTec）、圓環(huán)體（TL）、結(jié)節(jié)前核（NAT）、外側(cè)結(jié)節(jié)核（NLT）、下丘腦彌散核（NDLI）以及延腦（MO）中檢測到大量LpNPFF mRNA陽性的細(xì)胞,而端腦和小腦部分的表達(dá)較少,這可能表示LpNPFF通過不同的途徑向不同組織傳遞信號。并且在第Ⅱ期的小黃魚卵巢細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中也能觀察到明顯的陽性信號;免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,在小黃魚腦部表層細(xì)胞和卵巢壁周圍的結(jié)締組織中可見明顯的RFamide免疫陽性纖維;本實(shí)驗(yàn)還探究了LpNPFF對中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1）蛋白分泌活性和小鼠巨噬細(xì)胞（RAW264.7）一氧化氮（NO）產(chǎn)生量的影響。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,0.01μM10μM的LpNPFF（1）和0.01μM、0.1μM的LpNPFF（2）對CHO-K1細(xì)胞總蛋白分泌活性抑制效果具有顯著性（p<0.05）。0.01μM100μM的LcGnRH3對CHO-K1細(xì)胞總蛋白的分泌量具有促進(jìn)作用（p<0.05）,當(dāng)LpNPFF兩個RFamide成熟肽分別和LcGnRH3共同作用于細(xì)胞時,LpNPFF（0.01μM100μM）對由LcGnRH3引起的蛋白分泌量增加起到明顯的抑制作用（p<0.05）。LpNPFF（1）和LpNPFF（2）能夠抑制靜止和LPS活化狀態(tài)下RAW264.7細(xì)胞中NO的產(chǎn)生;此外,通過NPFF受體拮抗劑（RF9）初步驗(yàn)證了配體與受體之間的相互作用,RF9能夠阻斷配體與受體的結(jié)合,也進(jìn)一步證明LpNPFF抑制了細(xì)胞分泌NO的量。上述研究結(jié)果有助于神經(jīng)肽進(jìn)化的進(jìn)一步研究,也為進(jìn)一步探索NPFF相關(guān)基因在生殖調(diào)控方面的功能提供了新的思路。
二、下丘腦神經(jīng)肽的研究進(jìn)展（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、下丘腦神經(jīng)肽的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
（1）不同海拔分布大絨鼠面對食物質(zhì)量變化的生理和行為響應(yīng)（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞 |
| 第1章 研究進(jìn)展 |
| 1.1 能量預(yù)算影響野外小型哺乳動物的生存和分布 |
| 1.2 高脂高糖食物作為高質(zhì)量食物能增加能量攝入 |
| 1.3 血清瘦素影響下丘腦食欲神經(jīng)肽的表達(dá)進(jìn)而調(diào)節(jié)體重 |
| 1.4 改變活動行為是野外小型哺乳動物積極應(yīng)對食物變化的策略之一 |
| 1.5 大絨鼠(Eothenomys miletus)具有良好的表型可塑性以適應(yīng)橫斷山的生存 |
| 第2章 橫斷山不同海拔地區(qū)大絨鼠面對高脂食物變化的生理和行為適應(yīng)差異 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物介紹 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物處理 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 體重和攝食量 |
| 2.2.2 活動行為和RMR |
| 2.2.3 血清瘦素含量和下丘腦神經(jīng)肽基因表達(dá)量 |
| 2.2.4 身體組成和消化道 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 體重、攝食量、血清瘦素含量和下丘腦神經(jīng)肽基因表達(dá)量 |
| 2.3.2 活動行為和RMR |
| 第3章 橫斷山不同海拔地區(qū)大絨鼠面對高糖食物變化的生理和行為適應(yīng)差異 |
| 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物介紹 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)動物處理 |
| 3.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 體重和攝食量 |
| 3.2.2 活動行為和RMR |
| 3.2.3 血清瘦素含量和下丘腦神經(jīng)肽基因表達(dá)量 |
| 3.2.4 身體組成和消化道 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 體重、攝食量、血清瘦素含量和下丘腦神經(jīng)肽基因表達(dá)量 |
| 3.3.2 活動行為和RMR |
| 第4章 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文和獲獎情況 |
| 致謝 |
（2）RFRP-3對子宮內(nèi)膜和人源子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的影響及分子機(jī)制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文縮略詞 |
| 第一部分 基于蛋白質(zhì)組學(xué)對側(cè)腦室注射RFRP-3的OEP大鼠子宮腔液分泌蛋白的研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 附表 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 RFRP-3 對人源子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的作用及機(jī)制研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 附表 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 GnIH 對女性生殖功能調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（3）神經(jīng)肽spexin對小鼠攝食的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略表 |
| 引言 |
| 1. 材料、儀器、試劑 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 1.3 主要試劑配制 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法與步驟 |
| 2.1 提RNA、反轉(zhuǎn)錄,RT-PCR |
| 2.2 Western blot檢測 |
| 2.3 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 2.4 ELISA |
| 2.5 胃排空實(shí)驗(yàn)及排便測試 |
| 2.6 糖耐量實(shí)驗(yàn)及胰島素耐量實(shí)驗(yàn) |
| 2.7 曠場實(shí)驗(yàn) |
| 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 3. 結(jié)果 |
| 3.1 腹腔注射spexin可抑制普通飼料的攝入 |
| 3.2 GalR3參與調(diào)控spexin抑制攝食的作用 |
| 3.3 spexin下調(diào)神經(jīng)肽Y(Npy)基因在小鼠下丘腦的表達(dá) |
| 3.4 spexin減少小鼠下丘腦DMH中NPY陽性細(xì)胞的數(shù)量 |
| 3.5 spexin對小鼠血清NPY濃度無影響 |
| 3.6 spexin能增加小鼠下丘腦前區(qū)和視交叉上核中c-Fos陽性細(xì)胞的數(shù)量 |
| 3.7 spexin上調(diào)p-CaMKⅡ蛋白在小鼠下丘腦的表達(dá) |
| 3.8 spexin對胃腸運(yùn)動無影響 |
| 3.9 spexin對葡萄糖耐量和自發(fā)活動無影響 |
| 3.9.1 spexin對葡萄糖耐量和胰島素耐量實(shí)驗(yàn)的影響 |
| 3.9.2 spexin對小鼠自發(fā)活動的影響 |
| 4. 討論 |
| 5. 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 spexin/NPQ的生理和病理生理作用 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 科研成果 |
（4）草魚大腦和垂體中神經(jīng)肽挖掘及速激肽功能鑒定（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1 脊椎動物大腦和垂體研究概況 |
| 2 大腦和垂體中調(diào)節(jié)機(jī)體功能的重要調(diào)控因子 |
| 3 速激肽家族研究進(jìn)展 |
| 4 研究主要目的及意義 |
| 第二章 草魚大腦與垂體的結(jié)構(gòu)和功能的初步研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2 主要儀器和試劑 |
| 2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.3 草魚腦和垂體組織樣品獲得 |
| 2.4 石蠟組織切片的制作 |
| 2.4.1 常規(guī)石蠟切片制作過程 |
| 2.4.2 H.E染色 |
| 2.5 總RNA提取 |
| 2.6 RNA-seq測序、質(zhì)控、參考序列比對和基因注釋 |
| 2.7 差異表達(dá)基因的富集分析和組織間關(guān)系分析 |
| 2.8 RT-q PCR驗(yàn)證及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 3.1 草魚大腦和垂體的整體結(jié)構(gòu) |
| 3.2 草魚大腦各亞區(qū)和垂體的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)總覽 |
| 3.3 草魚嗅球的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.4 草魚端腦的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.5 草魚視頂蓋的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.6 草魚下丘腦的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.7 草魚小腦的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.8 草魚延腦的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.9 草魚垂體的顯微結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.10 草魚各腦區(qū)和垂體的關(guān)聯(lián)分析 |
| 4 討論 |
| 4.1 嗅球可能在免疫響應(yīng)中起重要作用 |
| 4.2 端腦參與食欲和生殖調(diào)節(jié) |
| 4.3 視頂蓋在視覺系統(tǒng)和攝食中的重要性 |
| 4.4 下丘腦作為潛在的攝食和生殖的調(diào)節(jié)中樞 |
| 4.5 草魚小腦未解之謎 |
| 4.6 延腦在聽覺系統(tǒng)中的潛在作用 |
| 4.7 垂體在機(jī)體生長、生殖、能量代謝以及器官發(fā)育中的重要功能 |
| 4.8 端腦和下丘腦—可能的攝食和生殖調(diào)控中樞 |
| 第三章 草魚大腦和垂體內(nèi)神經(jīng)肽及其受體的挖掘和分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2 主要儀器和試劑 |
| 2.3 草魚各腦亞區(qū)及垂體總RNA提取 |
| 2.4 轉(zhuǎn)錄組測序 |
| 2.5 草魚大腦和垂體內(nèi)神經(jīng)肽及其受體的挖掘和轉(zhuǎn)錄本表達(dá)分布 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 |
| 3.1 Apelin家族 |
| 3.2 NMB/GRP家族 |
| 3.3 Calcitonin家族 |
| 3.4 CART家族 |
| 3.5 CRH家族 |
| 3.6 CCK/Gastrin家族 |
| 3.7 GRL/MLN家族 |
| 3.8 Glucagon家族 |
| 3.9 GnRH家族 |
| 3.10 INS/IGF家族 |
| 3.11 MCH家族 |
| 3.12 NPP家族 |
| 3.13 NPB/NPW家族 |
| 3.14 NTS家族 |
| 3.15 Neuromedin家族 |
| 3.16 NPY家族 |
| 3.17 Opioid家族 |
| 3.18 HCRT家族 |
| 3.19 PTH家族 |
| 3.20 RFamide家族 |
| 3.21 SST家族 |
| 3.22 TAC家族 |
| 3.23 TRH家族 |
| 第四章 TAC3編碼產(chǎn)物在草魚垂體中的功能及機(jī)制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2 主要儀器和試劑 |
| 2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.3 轉(zhuǎn)錄組測序與生物信息學(xué)分析 |
| 2.4 NKBa在草魚垂體細(xì)胞中的功能分析 |
| 2.5 NKBa促進(jìn)垂體攝食因子表達(dá)的受體選擇性和信號通路分析 |
| 2.6 草魚NKBa在體功能驗(yàn)證 |
| 2.6.1 草魚腹腔注射NKBa |
| 2.6.2 草魚攝食實(shí)驗(yàn) |
| 2.7 數(shù)據(jù)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 3.1 NKBa誘導(dǎo)草魚垂體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.2 NKBa對草魚垂體細(xì)胞中CART、UTS1、NMB和 POMCb的調(diào)節(jié) |
| 3.3 NKBa誘導(dǎo)草魚垂體細(xì)胞中CART、UTS1、NMB和 POMCb合成的受體選擇性實(shí)驗(yàn) |
| 3.4 NKBa誘導(dǎo)CART、UTS1、NMB和 POMCb m RNA表達(dá)的受體后信號通路. |
| 3.5 在體實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NKBa對草魚垂體內(nèi)CART、UTS1、NMB和 POMCb合成的調(diào)控作用 |
| 3.6 攝食實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NKB與攝食調(diào)控的關(guān)系 |
| 4 討論 |
| 第五章 TAC4編碼產(chǎn)物對草魚垂體中攝食肽的調(diào)控研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2 主要儀器和試劑 |
| 2.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.3 草魚TAC4和NKRs的分子克隆和組織表達(dá)分析 |
| 2.3.1 總RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄 |
| 2.3.2 引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增 |
| 2.3.3 草魚TAC4和NKRs序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建 |
| 2.3.4 草魚TAC4和NKRs的組織表達(dá)分布 |
| 2.4 轉(zhuǎn)錄組測序與生物信息學(xué)分析 |
| 2.5 HKs在草魚垂體細(xì)胞中的功能分析 |
| 2.6 草魚NKRs在 HEK293T細(xì)胞中的功能表達(dá) |
| 2.7 HK1在草魚垂體中的功能失活分析 |
| 2.8 數(shù)據(jù)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 3.1 草魚TAC4和NKRs的基因克隆及序列分析 |
| 3.2 草魚TAC4和NKRs的組織表達(dá)分析 |
| 3.3 草魚HKs和 NKRs的受體配體選擇性實(shí)驗(yàn) |
| 3.4 HK2誘導(dǎo)草魚垂體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組分析 |
| 3.5 HK1和HK2 對草魚垂體細(xì)胞中關(guān)鍵DEGs mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié) |
| 3.6 HK1突變體在草魚垂體中的功能分析及受體配體驗(yàn)證 |
| 4 討論 |
| 第五章 總結(jié)與展望 |
| 1 研究總結(jié) |
| 2 創(chuàng)新性 |
| 3 存在問題 |
| 4 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
（5）不同脂肪酸對鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng)及食欲調(diào)控的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 縮略語表 |
| 論文中提及的動物名稱中英拉對照表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1 脂肪酸感知系統(tǒng) |
| 1.1 哺乳動物中的脂肪酸感知系統(tǒng) |
| 1.2 魚類中的特殊脂肪酸感知系統(tǒng) |
| 2 魚類的攝食調(diào)控機(jī)制 |
| 3 脂肪酸對攝食調(diào)控的影響 |
| 3.1 脂肪酸對食物攝入量的影響 |
| 3.2 脂肪酸對食欲相關(guān)神經(jīng)肽的影響 |
| 4 PUFA在魚類生理代謝中的作用 |
| 5 PPARα在脂肪酸代謝和感知中的作用 |
| 6 研究的目的與意義 |
| 第二章 長鏈脂肪酸對鱖魚下丘腦脂肪酸感知的影響 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 主要儀器與試劑 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)魚及養(yǎng)殖環(huán)境 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集 |
| 2.4 代謝物水平檢測 |
| 2.5 RNA提取和反轉(zhuǎn)錄 |
| 2.6 熒光定量PCR |
| 2.7 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 腦室注射不同脂肪酸對鱖魚攝食量的影響 |
| 3.2 腦室注射不同脂肪酸對鱖魚代謝物水平的影響 |
| 3.3 脂肪酸處理對脂肪酸感知機(jī)制的影響 |
| 3.4 脂肪酸處理對下丘腦神經(jīng)肽的影響 |
| 4 討論 |
| 第三章 鱖魚腦細(xì)胞對不飽和脂肪酸的直接感知能力 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 主要儀器與試劑 |
| 2.2 鱖腦細(xì)胞的分離與培養(yǎng) |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集 |
| 2.4 細(xì)胞RNA提取和反轉(zhuǎn)錄 |
| 2.5 實(shí)時定量PCR檢測m RNA表達(dá)水平 |
| 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 基于脂肪酸代謝機(jī)制 |
| 3.2 基于脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制 |
| 3.3 食欲神經(jīng)肽NPY |
| 4 討論 |
| 第四章 PPARα在鱖魚腦細(xì)胞脂肪酸感知機(jī)制的作用 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 |
| 2.2 鱖腦細(xì)胞的分離與培養(yǎng) |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集 |
| 2.4 細(xì)胞RNA提取和反轉(zhuǎn)錄 |
| 2.5 實(shí)時定量PCR檢測m RNA表達(dá)水平 |
| 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 基于脂肪酸代謝機(jī)制 |
| 3.2 基于脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制 |
| 3.3 食欲神經(jīng)肽NPY |
| 4 討論 |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在讀期間科研成果 |
| 致謝 |
（6）白術(shù)粗多糖調(diào)節(jié)吊尾大鼠腸道菌群及感知能力的機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 課題研究背景 |
| 1.2 微重力與模擬微重力研究進(jìn)展 |
| 1.3 腸道與腸道菌群研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 腸道菌群與疾病研究進(jìn)展 |
| 1.3.2 腸道菌群與腸神經(jīng)肽研究進(jìn)展 |
| 1.3.3 失重對腸道的影響 |
| 1.4 腦與腦內(nèi)神經(jīng)肽研究進(jìn)展 |
| 1.4.1 腦神經(jīng)肽與疾病研究進(jìn)展 |
| 1.4.2 失重對腦組織的影響 |
| 1.4.3 失重對腦神經(jīng)肽的影響 |
| 1.5 白術(shù)及白術(shù)多糖研究進(jìn)展 |
| 1.5.1 白術(shù)多糖與疾病研究進(jìn)展 |
| 1.6 研究意義和主要研究內(nèi)容 |
| 1.6.1 本文研究目的及意義 |
| 1.6.2 主要研究內(nèi)容及技術(shù)路線 |
| 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與試劑盒 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 白術(shù)組多糖的提取 |
| 2.2.2 大鼠飼養(yǎng)及模型建立 |
| 2.2.3 大鼠灌胃實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.4 大鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.5 大鼠處死及取樣 |
| 2.2.6 DNA的提取 |
| 2.2.7 實(shí)時定量PCR |
| 第3章 白術(shù)多糖對模擬失重腸道菌群的影響 |
| 3.1 白術(shù)多糖對模擬失重下有益代表菌的影響 |
| 3.2 白術(shù)多糖對模擬失重下有害代表菌的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 白術(shù)多糖對模擬失重下感知能力的影響 |
| 4.1 白術(shù)多糖對模擬失重下大鼠痛覺感知的影響 |
| 4.2 白術(shù)多糖對模擬失重下大鼠運(yùn)動協(xié)調(diào)功能的影響 |
| 4.3 神經(jīng)肽VIP、SP、NPY與感知能力的影響 |
| 4.3.1 神經(jīng)肽VIP與感知能力的影響 |
| 4.3.2 神經(jīng)肽SP與感知能力的影響 |
| 4.3.3 神經(jīng)肽NPY與感知能力的影響 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（7）GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)及其路徑分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 家禽采食量 |
| 1.2 影響家禽采食量的因素 |
| 1.3 采食的調(diào)節(jié) |
| 1.4 家禽下丘腦及胃腸道中的主要采食調(diào)節(jié)因子 |
| 1.4.1 神經(jīng)肽Y(NPY) |
| 1.4.2 刺鼠相關(guān)蛋白(AgRP) |
| 1.4.3 食欲素(OX) |
| 1.4.4 阿黑皮素原(POMC) |
| 1.4.5 可卡因-安菲他明調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄肽(CART) |
| 1.4.6 胰島素(insulin) |
| 1.4.7 瘦素(Leptin) |
| 1.4.8 單磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK) |
| 1.4.9 mTOR |
| 1.5 氨基葡萄糖(GlcN)的相關(guān)研究 |
| 1.5.1 GlcN在骨骼代謝中的作用 |
| 1.5.2 GlcN對采食的影響及機(jī)制研究 |
| 1.6 本研究內(nèi)容、目的及意義 |
| 1.6.1 研究內(nèi)容 |
| 1.6.2 研究目的及意義 |
| 1.6.3 研究的技術(shù)路線 |
| 2 試驗(yàn)一GlcN對蛋雞產(chǎn)蛋性能和血液生化指標(biāo)的影響 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和地點(diǎn) |
| 2.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動物選擇 |
| 2.1.3 試驗(yàn)飼糧 |
| 2.1.4 飼養(yǎng)管理 |
| 2.1.5 樣品采集、指標(biāo)測定及方法 |
| 2.1.6 數(shù)據(jù)處理 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.2.1 GlcN對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 |
| 2.2.2 GlcN對蛋雞血液生化指標(biāo)的影響 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 GlcN對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響 |
| 2.3.2 GlcN對蛋雞血液生化指標(biāo)的影響 |
| 2.4 小結(jié) |
| 3 試驗(yàn)二GlcN對蛋雞腸道形態(tài)和菌群的影響 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和地點(diǎn) |
| 3.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 3.1.3 樣品采集與處理 |
| 3.1.4 指標(biāo)檢測與方法 |
| 3.1.5 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 3.1.6 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 GlcN對蛋雞腸道形態(tài)及組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響 |
| 3.2.2 GlcN對蛋雞腸道菌群的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 GlcN對蛋雞腸道形態(tài)的影響 |
| 3.3.2 GlcN對蛋雞腸道菌群的影響 |
| 3.4 小結(jié) |
| 4 試驗(yàn)三GlcN對蛋雞采食的調(diào)節(jié)路徑分析 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和地點(diǎn) |
| 4.1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 4.1.3 樣品采集與處理 |
| 4.1.4 轉(zhuǎn)錄組分析的材料與方法 |
| 4.1.5 免疫組化材料方法 |
| 4.1.6 基因表達(dá)量分析 |
| 4.1.7 數(shù)據(jù)處理 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 基因差異表達(dá)分析 |
| 4.2.2 Venn圖 |
| 4.2.3 GO分析 |
| 4.2.4 KEGG Pathway分析 |
| 4.2.5 Glc N對蛋雞下丘腦NPY表達(dá)的影響 |
| 4.2.6 Glc N對蛋雞下丘腦POMC表達(dá)的影響 |
| 4.2.7 下丘腦采食相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄組的RT-PCR驗(yàn)證 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 GlcN對蛋雞采食的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究 |
| 4.3.2 GlcN對蛋雞下丘腦采食相關(guān)基因表達(dá)的影響 |
| 4.3.3 GlcN對蛋雞胃腸道采食相關(guān)基因表達(dá)的影響 |
| 4.4 小結(jié) |
| 5 總討論 |
| 6 結(jié)論 |
| 6.1 結(jié)論 |
| 6.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 6.3 有待進(jìn)一步研究的問題 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 附錄 |
（8）刺參生殖相關(guān)神經(jīng)肽挖掘及特征研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 生殖相關(guān)的重要神經(jīng)肽綜述 |
| 1.1 Kisspeptin研究進(jìn)展 |
| 1.2 GnRH研究進(jìn)展 |
| 1.3 GnIH及其同源多肽研究進(jìn)展 |
| 1.4 NPS/CCAP型肽研究進(jìn)展 |
| 1.5 本論文研究思路及技術(shù)分析 |
| 第二章 刺參生殖發(fā)育相關(guān)神經(jīng)肽的預(yù)測篩選及表達(dá)特征研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 |
| 2.2.3 總RNA提取 |
| 2.2.4 刺參各組織cDNA合成 |
| 2.2.5 Real-timePCR定量分析 |
| 2.2.6 序列分析及比對 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 Kisspeptin |
| 2.3.2 SALMFamide |
| 2.3.3 NPS/CCAP(NG)型肽 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 刺參Kisspeptin神經(jīng)肽活性特征研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 AjGPR54-EGFP亞細(xì)胞定位 |
| 3.3.2 AjKiss1b-10 激發(fā)AjGPR54-like內(nèi)吞 |
| 3.3.3 胞內(nèi)Ca2+流信號檢測 |
| 3.3.4 蛋白免疫印跡分析 |
| 3.4 討論 |
| 第四章 刺參Kisspeptin神經(jīng)肽的生理功能分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 |
| 4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 AjKisspeptin時空表達(dá) |
| 4.3.2 AjKiss1b的免疫熒光定位分析 |
| 4.3.3 AjKiss1b-10 組織層面激活ERK1/2 磷酸化 |
| 4.3.4 體內(nèi)注射AjKiss1b-10 功能驗(yàn)證 |
| 4.4 討論 |
| 第五章 總結(jié)及展望 |
| 5.1 全文總結(jié) |
| 5.2 主要結(jié)果 |
| 5.3 本文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 5.4 本研究后續(xù)的展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果 |
（9）應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文縮寫 |
| 引言 |
| 第一部分 不同時程應(yīng)激大鼠模型的建立及病理學(xué)觀察 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 PERK-ATF4-CHOP和 IRE1-ASK1-JNK信號通路參與應(yīng)激大鼠下丘腦神經(jīng)細(xì)胞損傷過程 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 糖皮質(zhì)激素致PC12細(xì)胞損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 結(jié)論 |
| 綜述 下丘腦神經(jīng)細(xì)胞分類和神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（10）小黃魚神經(jīng)肽FF及其受體基因的克隆、表達(dá)及功能研究初探（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 神經(jīng)肽FF相關(guān)研究進(jìn)展 |
| 1.3 神經(jīng)肽FF受體相關(guān)研究進(jìn)展 |
| 1.4 神經(jīng)肽FF相關(guān)功能 |
| 1.4.1 神經(jīng)肽FF與生殖 |
| 1.4.2 神經(jīng)肽FF相關(guān)調(diào)節(jié)因子 |
| 1.5 研究的目的和意義 |
| 第二章 小黃魚神經(jīng)肽FF克隆與表達(dá)分析 |
| 2.1 小黃神經(jīng)肽FF基因克隆及生物信息學(xué)分析 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1.4 討論 |
| 2.2 小黃魚神經(jīng)肽FF基因組織表達(dá)特異性分析 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.2.4 討論 |
| 2.3 LpNPFF在小黃魚腦和卵巢中m RNA的定位分析 |
| 2.3.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.4 討論 |
| 2.4 FaRPs成熟肽在小黃魚腦和卵巢中的定位分析 |
| 2.4.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.4.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.4 討論 |
| 第三章 小黃魚神經(jīng)肽FF受體的克隆與表達(dá)分析 |
| 3.1 小黃魚神經(jīng)肽FF受體基因克隆及生物信息學(xué)分析 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1.4 討論 |
| 3.2 小黃魚神經(jīng)肽FF受體基因組織表達(dá)特異性分析 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.4 討論 |
| 第四章 小黃魚神經(jīng)肽FF功能初步研究 |
| 4.1 LpNPFF對 CHO-K1 細(xì)胞分泌蛋白活性的影響 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 4.1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.1.3 討論 |
| 4.2 LpNPFF對 RAW264.7 細(xì)胞分泌NO的影響 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.2.3 討論 |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 5.1 結(jié)論 |
| 5.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 5.3 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果 |
四、下丘腦神經(jīng)肽的研究進(jìn)展（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]不同海拔分布大絨鼠面對食物質(zhì)量變化的生理和行為響應(yīng)[D]. 龔雪娜. 云南師范大學(xué), 2021(08)
- [2]RFRP-3對子宮內(nèi)膜和人源子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A的影響及分子機(jī)制[D]. 趙雪瑩. 承德醫(yī)學(xué)院, 2021(01)
- [3]神經(jīng)肽spexin對小鼠攝食的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D]. 周雨辰. 河南大學(xué), 2020(04)
- [4]草魚大腦和垂體中神經(jīng)肽挖掘及速激肽功能鑒定[D]. 葉城. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020(02)
- [5]不同脂肪酸對鱖魚中樞脂肪酸感知系統(tǒng)及食欲調(diào)控的影響[D]. 羅皓燦. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020(02)
- [6]白術(shù)粗多糖調(diào)節(jié)吊尾大鼠腸道菌群及感知能力的機(jī)制研究[D]. 王蓓. 哈爾濱工業(yè)大學(xué), 2020(01)
- [7]GlcN對蛋雞采食調(diào)節(jié)及其路徑分析[D]. 石靖. 貴州大學(xué), 2020
- [8]刺參生殖相關(guān)神經(jīng)肽挖掘及特征研究[D]. 陳旭. 浙江海洋大學(xué), 2020(01)
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標(biāo)簽：下丘腦論文; 對照組論文; 基因合成論文; 腦神經(jīng)論文; 脂肪酸論文;