一、間變性大細(xì)胞淋巴瘤的免疫逃逸機制（論文文獻綜述）
方佳成[1]（2021）在《泛實體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用》文中認(rèn)為癌癥已經(jīng)成為危害人類健康的主要疾病,據(jù)世衛(wèi)組織國際癌癥研究機構(gòu)數(shù)據(jù)顯示,2020年,全球男性和女性將合計出現(xiàn)約1930萬和1000萬的新發(fā)病例和癌癥死亡病例,其中的1800萬例和930萬例將來自實體瘤。然而,對腫瘤治療的系統(tǒng)評估數(shù)據(jù)顯示,歐洲藥物管理局在2009-2013年度批準(zhǔn)的大多數(shù)抗癌藥物未能對患者的整體生命質(zhì)量產(chǎn)生重大改善。因此,需要繼續(xù)提高抗腫瘤藥物的臨床療效。抗體偶聯(lián)藥物（Antibody-Drug Conjugates,ADC）和嵌合抗原受體（Chimeric Antigen Receptor,CAR）T細(xì)胞療法是發(fā)展迅速的腫瘤靶向治療技術(shù),它們通過特異性識別在惡性細(xì)胞和正常組織細(xì)胞之間差異過表達的靶標(biāo)抗原,達到辨識腫瘤和消融腫瘤的目的。ADC和CAR-T實現(xiàn)安全性與有效性的關(guān)鍵,在于其所識別的靶標(biāo)抗原是否具備足夠的腫瘤特異性。因而,鑒別出理想的靶標(biāo)抗原至關(guān)重要。理想的靶標(biāo)抗原由惡性細(xì)胞特異性表達,然而腫瘤特異性抗原屈指可數(shù)。腫瘤相關(guān)抗原在腫瘤細(xì)胞上表達升高,在正常細(xì)胞上限制性表達,這一特性使得它們亦能夠作為有效定位惡性腫瘤的靶標(biāo)分子。目的:以發(fā)現(xiàn)理想的腫瘤相關(guān)抗原為出發(fā)點,著力于打造腫瘤相關(guān)抗原發(fā)現(xiàn)新平臺,構(gòu)建全面的泛實體瘤腫瘤相關(guān)抗原圖譜,為癌癥研究人員和廣泛的科學(xué)與醫(yī)藥界科研工作者提供研究便利。方法:1.使用經(jīng)統(tǒng)一處理的TCGA和GTEx的RNA序列數(shù)據(jù),對19種類型實體瘤中的20242個HUGO基因進行差異分析;通過將閾值設(shè)置為Benjamini-Hochberg adjusted p值為0.01,log2Fold Change為1.0,保留那些在腫瘤細(xì)胞群中顯著差異表達的HUGO基因;結(jié)合蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位信息,排除不具備胞外結(jié)構(gòu)域的蛋白;使用集成了GTEx,HPA和FANTOM5的m RNA表達信息和HPA和HPM的蛋白質(zhì)豐度信息的數(shù)據(jù)集,獲取在正常組織中受限表達的蛋白分子;使用公開的Blood Spot平臺,發(fā)現(xiàn)那些在骨髓Lin-CD34+CD38-CD90+CD45RA-HSCs和Lin-CD34+CD38-CD90-45RA-MPPs中限制性表達的蛋白分子。2.將RNA測序的讀段計數(shù)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為TPM格式,并將每個基因在其配對適應(yīng)癥和正常組織中的TPM值作為差異表達分析的輸入數(shù)據(jù)。采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗分析,計算并繪制每個候選靶標(biāo)分子在特定適應(yīng)癥中的表達相比其在各個人體正常組織中的表達的差異表達譜。3.提取并整理TCGA中泛癌表型數(shù)據(jù)中的癌組織學(xué)分級,病理分級和TNM分期信息;通過挖掘MC3（“多中心多癌種突變識別”）TCGA MAF（“突變注釋格式”）數(shù)據(jù),確定靶標(biāo)基因的非沉默體細(xì)胞突變（SNP和INDEL）。結(jié)合m RNA表達數(shù)據(jù),匯編用于評價靶標(biāo)基因的異質(zhì)表達模式的綜合數(shù)據(jù)集。4.從TCGA下載并提取靶標(biāo)基因組變異數(shù)據(jù),從Onco KB收集致癌或功能性基因組變異信息,注釋并統(tǒng)計靶標(biāo)基因的變異類型及發(fā)生頻率,確定在臨床上有應(yīng)用價值的攜帶特異性驅(qū)動變異的功能性靶標(biāo)。5.通過雜交瘤技術(shù)制備CDH17特異性單克隆抗體,進而運用流式細(xì)胞術(shù)、過表達共定位分析、結(jié)合親和力檢測、抗體測序和可變區(qū)序列進化關(guān)系分析等,多重表征抗體的各項指標(biāo)。通過偶聯(lián)mc-Val Cit PABC-MMAE,制備CDH17靶向型ADC。結(jié)合體外殺傷實驗與細(xì)胞內(nèi)化評估,完成效應(yīng)分子的初篩驗證。6.通過構(gòu)建KM12SM和COLO205結(jié)腸癌細(xì)胞系CDX動物模型,綜合評估chi2E21-MMAE和chi2F12-MMAE的體內(nèi)抗腫瘤活性。通過制備和人鼠CDH17蛋白交叉反應(yīng)的ADC分子,并對給藥的荷瘤小鼠的心/肺/肝/腎/結(jié)腸/直腸/脾臟進行HE染色,評估CDH17靶向型ADC對小鼠的組織毒性。7.通過慢病毒載體感染CD3+T細(xì)胞,制備LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞。通過對CAR-T細(xì)胞進行分化檢測,確定其向效應(yīng)細(xì)胞持續(xù)分化的能力。通過體外細(xì)胞殺傷實驗和細(xì)胞因子分泌檢測,研究LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的的特異性殺傷作用。通過對荷瘤小鼠循環(huán)血中的CAR-T細(xì)胞進行計數(shù)和檢測腫瘤組織中的T細(xì)胞浸潤水平,揭示LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞在小鼠體內(nèi)發(fā)揮持久抗腫瘤作用的機制。結(jié)果:1.開發(fā)專門的算法和匯編整合有泛實體瘤和正常組織的大型轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和基因組信息的綜合數(shù)據(jù)集。2.系統(tǒng)地識別腫瘤相關(guān)抗原。通過我們的腫瘤相關(guān)抗原發(fā)現(xiàn)平臺,篩選得到75個潛在的腫瘤相關(guān)抗原分子。特別是BACE2、CDH17、CELSR1、CELSR2、COL17A1、COL23A1、CRIM1、DSC3、GPR87、LYPD3、MUC17、NOX1、PTPRN2、SCTR、TRPM8、VCAM1等分子值得做進一步的臨床前研究。3.基于CDH17蛋白定向開發(fā)的ADC分子可以在體內(nèi)顯著消融KM12SM和COLO205異種移植瘤,并對高表達CDH17蛋白的結(jié)腸癌病人來源的異種移植瘤表現(xiàn)出一定的腫瘤抑制效果。chi2F12-MMAE在體外對高藥敏度的COLO205顯示高水平的細(xì)胞毒性（IC50=60.9p M）,chi2E21-MMAE和chi1A13-MMAE對COLO205的抑瘤水平相當(dāng)（IC50:925.8 p M vs.998.3 p M）。兩次單藥靜脈注射（Q2W）chi2E21-MMAE或chi2F12-MMAE,均能以劑量依賴性的方式抑制KM12SM在小鼠體內(nèi)的生長,但無法完全清除腫瘤。在COLO205 CDX模型中,按同樣的給藥方式靜注chi2F12-MMAE,1.5 mg/kg劑量的第一針治療可以起到平緩異種移植腫瘤增長的效果,且兩周后的第二針治療亦能繼續(xù)起到溶瘤效果;3 mg/kg的中劑量治療組有部分小鼠的腫瘤在后期出現(xiàn)反彈;6 mg/kg的高劑量治療可以根治異種移植瘤。4.CDH17靶向型ADC在小鼠體內(nèi)具有相對可控的組織毒性。制備了能和人鼠CDH17蛋白交叉反應(yīng)的ADC分子677-MMAE,觀察到在677-MMAE給藥組小鼠的結(jié)直腸的局部組織中有炎癥反應(yīng),聚集了大量的淋巴細(xì)胞;但在其它組織中沒有出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。此外,在觀察期內(nèi),小鼠對chi2E21-MMAE、chi2F12-MMAE或677-MMAE的體內(nèi)耐受良好,用藥期間未有小鼠死亡個例出現(xiàn),亦沒有觀察到10%以上的減重。5.LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞能夠在小鼠體內(nèi)對PC9異種移植腫瘤發(fā)揮持久的抗腫瘤作用。且小鼠對LYPD3-CAR-T的耐受良好,在觀察期內(nèi)未有小鼠死亡個例出現(xiàn),亦沒有觀察到10%以上的減重。進一步調(diào)查發(fā)現(xiàn),LYPD3-CAR-T細(xì)胞不僅在小鼠外周血中大量存在,還在高響應(yīng)LYPD3-CAR-T治療的PC9異種移植瘤組織中大量浸潤。此外,LYPD3-CAR-T治療組的小鼠脾臟內(nèi)出現(xiàn)大量CD3+T細(xì)胞,但在對照組中卻沒有。CAR-T細(xì)胞的記憶表型對于激發(fā)持久的免疫應(yīng)答至關(guān)重要。數(shù)據(jù)顯示,LYPD3-CAR-T細(xì)胞在輸注前,其中的Tn/Tscm細(xì)胞和Tcm細(xì)胞比例分別高達52.4%和21.7%,具有良好的向效應(yīng)細(xì)胞分化的潛能。結(jié)論:通過開發(fā)腫瘤相關(guān)抗原識別算法和整合來自19種實體瘤和正常組織的大型轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和基因組數(shù)據(jù),完成了泛實體瘤相關(guān)抗原的探索。通過考察CDH17靶向型ADC和LYPD3靶向型CAR-T細(xì)胞在模型小鼠中的抗腫瘤活性,例證了CDH17和LYPD3蛋白分別作為ADC和CAR-T靶標(biāo)開發(fā)的可行性。
張青青[2]（2021）在《單中心兒童惡性淋巴瘤5年臨床特點分析及意義》文中研究指明目的:通過回顧性研究分析河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2015年1月1日至2019年12月31日確診的惡性淋巴瘤患兒的臨床特點、生存情況及預(yù)后相關(guān)危險因素,為我院兒童淋巴瘤的診治及預(yù)后評估提供參考。方法:1.將河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2015年1月1日至2019年12月31日確診的47例惡性淋巴瘤患兒作為研究對象,采用回顧性研究分析其臨床特點,并通過電話隨訪的方式了解患兒生存情況,進行生存分析,并對性別、年齡、病理分型、臨床分期、B組癥狀、肝脾受累、骨髓受累、中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累、巨大瘤灶、白蛋白水平、LDH水平等因素進行統(tǒng)計學(xué)分析,了解這些因素對患兒預(yù)后的影響情況。2.統(tǒng)計分析是通過采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行,以率（%）表示計量資料,非正態(tài)分布的計量資料使用中位數(shù)表示;通過Kaplan-Meier法分析生存特點,檢驗水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計意義,單因素生存分析采用Log-rank檢驗,多因素生存分析則采用COX比例風(fēng)險回歸模型,若P<0.05則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.2015年至2019年間共確診惡性淋巴瘤47例,分別為5例、12例、5例、12例、13例。2.確診的淋巴瘤患兒中,霍奇金淋巴瘤10例,非霍奇金淋巴瘤37例,兩者發(fā)病比例約為1:3.7。3.47例淋巴瘤患兒,發(fā)病年齡均<14歲,年齡最小者為11月齡,年齡最大者13歲,霍奇金淋巴瘤與非霍奇金淋巴瘤中位發(fā)病年齡均為9歲,霍奇金淋巴瘤以5-9歲年齡段發(fā)病者最多為5例（50%）,非霍奇金淋巴瘤以10-14歲年齡段發(fā)病者最多為21例（56.8%）。4.男性患兒居多共32例,女性患兒15例,無論霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤男性發(fā)病率均較女性高,總男女比例約2.1:1。5.霍奇金淋巴瘤常見臨床表現(xiàn)為不明原因腫物8例（80%）,均表現(xiàn)為頸部腫物,非霍奇金淋巴瘤臨床表現(xiàn)多樣,以不明原因腫物就診者16例（43.2%）,以消化系統(tǒng)癥狀就診者9例（24.3%）,以全身癥狀為主者5例（13.5%）,以呼吸系統(tǒng)癥狀為主要表現(xiàn)者3例（8.1%）,以骨骼、肌肉疼痛為首發(fā)表現(xiàn)者3例（8.1%）,以頭顱五官癥狀為首發(fā)表現(xiàn)者1例（2.7%）。6.常見病理類型霍奇金淋巴瘤21.2%,伯基特淋巴瘤29.8%,間變性大細(xì)胞淋巴瘤21.2%,T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤12.8%,未明確分型者8.5%,彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤4.3%,皮下脂膜炎樣T細(xì)胞淋巴瘤1例2.1%。7.多數(shù)病例確診時臨床分期已達Ⅲ期或Ⅳ期,約占93.6%。8.47例惡性淋巴瘤患兒1年累積生存率為83%,1年累積無事件生存率74.5%;5年累積生存率為77.7%,5年累積無事件生存率為72.1%。9.單因素分析顯示肝脾受累是影響患兒5年累積生存率的危險因素,多因素分析顯示影響患兒5年累積生存率的獨立預(yù)后危險因素是巨大瘤灶,而性別、年齡、病理分型、臨床分期、B組癥狀、骨髓受累、中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累、白蛋白水平、LDH水平等不是影響患兒生存率的危險因素。結(jié)論:1.2015年1月1日-2019年12月31日河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院確診兒童惡性淋巴瘤例數(shù)總體呈上升趨勢。2.霍奇金淋巴瘤發(fā)病率較非霍奇金淋巴瘤發(fā)病率低,均以男性患兒多見,中位發(fā)病年齡均為9歲。3.兒童惡性淋巴瘤大多以不明原因腫塊為主要臨床表現(xiàn),霍奇金淋巴瘤多侵及頸部,非霍奇金淋巴瘤中不同病理類型起病部位有所差異,常見病理類型為伯基特淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤,且在確診時多已達Ⅲ期或Ⅳ期。4.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2015年1月1日-2019年12月31日確診的惡性淋巴瘤患兒1年累積生存率為83%,1年累積無事件生存率74.5%;5年累積生存率為77.7%,5年累積無事件生存率為72.1%。5.影響患兒5年累積生存率的獨立預(yù)后危險因素是巨大瘤灶。
鄭佳彬[3]（2020）在《復(fù)方苦參注射液對惡性T細(xì)胞淋巴瘤作用機制研究》文中研究說明立題依據(jù):研究背景:惡性淋巴瘤（ML）是一組起源于淋巴系統(tǒng)的惡性腫瘤,多發(fā)生于淋巴結(jié)和（或）結(jié)外部位淋巴組織,通過腫瘤細(xì)胞表面的白細(xì)胞分化抗原不同可將其分為T細(xì)胞來源淋巴瘤及B細(xì)胞來源淋巴瘤兩大類。T細(xì)胞淋巴瘤臨床較B細(xì)胞淋巴瘤較為少見,僅約占所有淋巴瘤的10%-15%。但這類淋巴瘤由于其亞洲人群高發(fā)病率、明顯的個體異質(zhì)性、廣泛的癥狀特異性、較差的治療預(yù)后和轉(zhuǎn)歸及大多數(shù)在治療2-3年內(nèi)復(fù)發(fā)的特點,也一直受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。復(fù)方苦參注射液由于其抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、增強免疫等功效,常用于晚期患者的維持治療及放化療輔助治療。中國中醫(yī)科學(xué)院首席研究員、中國中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院腫瘤科前主任林洪生教授在多年的淋巴瘤患者診治過程中發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦參注射液在治療緩慢進展的T細(xì)胞淋巴瘤,尤以伴以多種形式皮膚損傷的患者效果顯著,填補了緩慢進展或除皮膚受累癥狀外并無其他淋巴結(jié)或結(jié)外器官受累癥狀的患者等待觀察期無藥可用的空白,緩解了患者癥狀,顯著改善生活質(zhì)量。研究目的:本研究分別通過體內(nèi)及體外實驗設(shè)計,探索復(fù)方苦參注射液對不同人源淋巴瘤細(xì)胞系的干預(yù)作用,并在小鼠體內(nèi)模型中進一步驗證和探索其免疫調(diào)控作用機制。為復(fù)方苦參注射液臨床有效性是否源于其對淋巴瘤抑制調(diào)節(jié)作用提供進一步科學(xué)依據(jù)。研究方法:1.復(fù)方苦參注射液對淋巴瘤細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期的影響1.1復(fù)方苦參注射液對不同淋巴瘤細(xì)胞系增殖的影響及篩選分別培養(yǎng)Hut78（人源皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株）、Loucy（人源T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株）、Jurkat（人源T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株）、Raji（人源B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株）、EL4（鼠源T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株）5種不同淋巴瘤細(xì)胞株。通過比較CCK8及prestoblue敏感度及復(fù)方苦參注射液顏色帶來的影響,選擇prestoblue法作為細(xì)胞活力檢測試劑。使用prestoblue法及細(xì)胞計數(shù)法重復(fù)驗證不同濃度（0.039-5mg/ml）復(fù)方苦參注射液對不同細(xì)胞株干預(yù)后24h、48h、72 h、96h后對其增殖的影響。從而篩選增殖抑制有效及敏感的細(xì)胞株。1.2復(fù)方苦參注射液對T細(xì)胞淋巴瘤Hut78、Loucy細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用對上一步篩選敏感細(xì)胞株Hut78、Loucy細(xì)胞采用PI染色,通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期,分析不同劑量復(fù)方苦參注射液對細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用。1.3復(fù)方苦參注射液對T細(xì)胞淋巴瘤Hut78、Loucy細(xì)胞凋亡的影響對敏感細(xì)胞株Hut78、Loucy細(xì)胞采用7AAD/AnnexinV雙染色,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率,分析不同劑量復(fù)方苦參注射液對細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。并通過Western Blot法檢測凋亡相關(guān)內(nèi)切酶casepase3、casepase7表達進一步證實凋亡的發(fā)生。2.復(fù)方苦參注射液對Hut78、Loucy細(xì)胞信號調(diào)控通路蛋白表達的影響應(yīng)用反向蛋白陣列術(shù)（RPPA）檢測敏感細(xì)胞株Hut78經(jīng)不同劑量復(fù)方苦參注射液干預(yù)24h后蛋白表達差異,聚類分析潛在作用通路,蛋白質(zhì)印跡法（WB）驗證相關(guān)有效通路蛋白在復(fù)方苦參注射液干預(yù)的Hut78、Loucy細(xì)胞蛋白表達中的影響,明確復(fù)方苦參注射液抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等生物學(xué)行為的調(diào)控機制。3.復(fù)方苦參注射液對Hut78、Loucy細(xì)胞能量代謝的影響使用高壓液相和質(zhì)譜聯(lián)用的方法定量檢測敏感細(xì)胞株Hut78、Loucy經(jīng)不同劑量復(fù)方苦參注射液干預(yù)24h后代謝產(chǎn)物表達差異,明確復(fù)方苦參注射液影響腫瘤細(xì)胞能量代謝生物學(xué)行為的調(diào)控機制。4.復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤動物模型的體內(nèi)實驗研究4.1復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤模型生存期的影響使用C57BL/6J小鼠構(gòu)建EL4淋巴瘤動物模型,將荷瘤小鼠隨機分為低、中、高劑量（2ml/kg、4ml/kg、8ml/kg）復(fù)方苦參注射液組,甲氨喋呤（MTX）組,生理鹽水組以腹腔注射方式干預(yù)荷瘤小鼠14天,觀察記錄其對瘤體大小、小鼠體重及生存期的影響,探索CKI治療的最佳劑量。4.2復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤模型免疫調(diào)節(jié)及腫瘤能量代謝的影響使用C57BL/6J小鼠構(gòu)建EL4淋巴瘤動物模型,將荷瘤小鼠隨機分為最佳劑量復(fù)方苦參注射液組（2ml/kg,4ml/kg）及生理鹽水組以腹腔注射方式干預(yù)荷瘤小鼠7天,觀察比較瘤體大小,繪制瘤體生長曲線;通過免疫細(xì)胞亞群測定檢測小鼠腫瘤及脾臟免疫細(xì)胞分型表達;通過高壓液相和質(zhì)譜聯(lián)用的方法進行腫瘤組織代謝產(chǎn)物檢測。以進一步驗證探索復(fù)方苦參注射液體內(nèi)作用機制;小鼠腫瘤組織石蠟切片的制作及Cleave Casepase3 IHC染色用以檢測腫瘤組織凋亡情況。以進一步驗證探索復(fù)方苦參注射液體內(nèi)作用機制。研究結(jié)果:1.通過細(xì)胞活力鑒定的方法學(xué)摸索,CCK8及Prestoblue均具有良好的敏感性,但復(fù)方苦參注射液顏色對Prestoblue讀數(shù)的影響程度更小。因此選擇prestoblue法及細(xì)胞計數(shù)法重復(fù)驗證CKI在淋巴瘤細(xì)胞增殖中發(fā)揮的作用。Prestoblue法結(jié)果顯示復(fù)方苦參注射液對5種淋巴瘤細(xì)胞均顯示出生長抑制作用。其中T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Hut-78、EL4、Loucy、Jurkat要顯著強于B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞Raji,在人源T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系中,復(fù)方苦參注射液對Hut-78（人源皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）抑制效果最強,Loucy（人源T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株）的抑制效果次之,均呈現(xiàn)顯著的劑量及時間依賴性。細(xì)胞計數(shù)法結(jié)果與Prestoblue檢測結(jié)果趨勢一致,也進一步驗證Prestoblue細(xì)胞增殖-活力檢測方法檢測結(jié)果的真實性及準(zhǔn)確性。細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示CKI處理后Hut-78、Loucy細(xì)胞的細(xì)胞周期G0-G1,S,G2/M期并未見明顯的周期停滯作用。但是subG 1期的比例呈明顯劑量依賴性增加,提示細(xì)胞凋亡在CKI的作用機制中或許扮演著重要作用。細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果顯示CKI可以誘導(dǎo)Hut-78、Loucy細(xì)胞的凋亡,凋亡相關(guān)內(nèi)切酶casepase3、casepase7蛋白表達的Western Blot檢測也進一步證實了這一點。不同的是,CKI在48h更多的引起Hut-78細(xì)胞的早期凋亡,其凋亡率增高明顯;但在Loucy細(xì)胞中,晚期凋亡和壞死細(xì)胞比率更多,這說明CKI誘導(dǎo)Loucy細(xì)胞死亡的方式或機制與Hut-78可能純在差異。2.通過分析反向蛋白陣列術(shù)（RPPA）結(jié)果發(fā)現(xiàn)CKI的潛在作用通路可以聚焦在 PI3K/Akt/mTOR、NF-KB、MEK/ERK 等通路,其中 PI3K/Akt/mTOR 通路的多數(shù)蛋白表達調(diào)節(jié)符合CKI調(diào)節(jié)分子機制的構(gòu)想。Western Blot驗證結(jié)果證實CKI可通過下調(diào)Hut-78細(xì)胞中PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表達,進一步調(diào)控其下游AMPK/TSC1/mTor/S6通路,從而影響細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)凋亡。這種現(xiàn)象在Loucy細(xì)胞中同樣可見。可見,調(diào)控PI3K/Akt/mTOR通路及AMPK/TSC1/mTor/S6通路也許是CKI作用T細(xì)胞淋巴瘤的主要分子機制。3.高壓液相和質(zhì)譜聯(lián)用的方法檢測提示CKI具有潛在調(diào)控谷氨酸及乳酸代謝的作用。CKI可以通過直接減少谷氨酸或乳酸代謝的途徑抑制糖解途徑酵,減少腫瘤能量代謝。Western Blot蛋白表達驗證結(jié)果證實CKI具有潛在下調(diào)GLS1、LDHA蛋白表達的作用,從而干預(yù)腫瘤能量代謝途徑,減少腫瘤能量供應(yīng)。4.通過對C57BL/6J小鼠構(gòu)建EL4淋巴瘤動物模型,我們發(fā)現(xiàn)CKI、MTX干預(yù)相比生理鹽水組可顯著提高生存率,延長生存期,相較于化療藥物MTX,CKI表現(xiàn)出非劣勢的作用。比較兩個實驗的小鼠瘤體生長曲線,發(fā)現(xiàn)CKI干預(yù)后瘤組織的瘤體積增長速度呈降低趨勢,與生存期研究結(jié)果相一致,相較于化療藥物MTX,CKI依然表現(xiàn)出非劣勢的腫瘤抑制作用。免疫細(xì)胞亞群結(jié)果提示CKI可以選擇性上調(diào)T細(xì)胞亞群（CD3+）,而其中發(fā)揮作用的主要免疫細(xì)胞群體可能是上調(diào)輔助T細(xì)胞（CD3+CD4+）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+FoxP3）,或下調(diào)Th17細(xì)胞（CD3+CD4+IL17）比例達成的。這一發(fā)現(xiàn)提示CKI的抗腫瘤作用可能與免疫調(diào)控有關(guān)。通過對腫瘤組織代謝產(chǎn)物的高壓液相和質(zhì)譜聯(lián)用的方法發(fā)現(xiàn)CKI在谷氨酸途徑代謝中,可以顯著降低谷氨酰胺、谷氨酸及乳酸含量。這與Hut-78及Loucy的實驗結(jié)果相一致,也進一步提示CKI可以通過抑制谷氨酸及糖酵解途徑影響腫瘤能量代謝,降低腫瘤供能,從而發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用。小鼠腫瘤組織石蠟切片的制作及Cleave Casepase3 IHC染色的結(jié)果顯示CKI的抑瘤作用可能是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的,這也進一步印證了體外實驗的結(jié)論。研究結(jié)論:1.復(fù)方苦參注射液對淋巴瘤細(xì)胞均顯示出生長抑制作用。其中對T細(xì)胞淋巴瘤要顯著強于B細(xì)胞淋巴瘤。其發(fā)揮細(xì)胞增殖抑制的作用可能是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡完成;2.調(diào)控PI3K/Akt/mTOR通路及AMPK/TSC1/mTor/S6通路也許是CKI作用T細(xì)胞淋巴瘤的主要分子機制;3.CKI具有降低谷氨酸及乳酸代謝的作用,從而抑制糖解酵途徑,減少腫瘤能量代謝,這一點在體內(nèi)外實驗中均得到了驗證;4.CKI干預(yù)EL4淋巴瘤動物模型可以提高生存率,延長生存期,降低腫瘤生長速度,相較于化療藥物MTX,CKI表現(xiàn)出非劣勢的作用;5.CKI發(fā)揮腫瘤免疫調(diào)節(jié)的機制可能是下調(diào)Th17（CD3+CD4+IL17）/Treg（CD4+FoxP3）比例,提示CKI的抗腫瘤作用可能是通過抑制腫瘤相關(guān)性炎癥發(fā)揮的。
趙燕春[4]（2020）在《血小板-淋巴細(xì)胞比值和中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值在外周T細(xì)胞淋巴瘤患者治療反應(yīng)及預(yù)后中的價值》文中研究指明背景:外周T細(xì)胞淋巴瘤（peripheral T-cell lymphoma,PTCL）是一種高度異質(zhì)性的非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma,NHL）亞型。為了預(yù)測PTCL患者的預(yù)后,目前已有多種預(yù)后模型被相繼提出。然而,影響PTCL患者預(yù)后的因素仍未完全闡明。因此,積極探索與不良預(yù)后相關(guān)的指標(biāo)具有重要的意義。方法:本文回顧性分析了2012年1月至2017年12月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院診斷為PTCL的213例成人患者的臨床資料,并進行了長期的隨訪工作,旨在評估血小板-淋巴細(xì)胞比值（platelet-lymphocyte ratio,PLR）和中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值（neutrophil-lymphocyte ratio,NLR）在PTCL患者治療反應(yīng)及預(yù)后中的價值。結(jié)果:所有PTCL患者的中位年齡為52歲。男性135例（63.4%,135/213）,女性78例（36.6%,78/213）。相比于PLR<232.5組,PLR≥232.5組的患者獲得了更低的完全緩解（complete response,CR）率（18.5%vs.56.6%,P<0.001）。而NLR≥3.7組的患者的CR率也明顯低于NLR<3.7組的患者（31.7%vs.60.7%,P<0.001）。在Cox單因素分析中,高PLR和高NLR均與較差的總生存期（overall survival,OS）相關(guān)。而Cox多因素分析提示PLR≥232.5、骨髓侵犯、IPI>2、低白蛋白水平和ALC≤0.8×109/L是PTCL患者的獨立預(yù)后因素。此外,根據(jù)存在的危險因素數(shù)目,所有患者被分為4組,包括低危組（0-2個因素）、中低危組（3個因素）、中高危組（4個因素）和高危組（5個因素）,各組的3年OS分別為84.2%、41.9%、16.3%和0.0%（P<0.001）。結(jié)論:本文的回顧性研究表明高PLR和高NLR與PTCL患者的治療反應(yīng)以及預(yù)后密切相關(guān),可用于改善患者的危險分層,指導(dǎo)臨床治療。
朱曦[5]（2020）在《HBV陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中PD-L1的表達及其臨床意義》文中提出目的:了解程序性細(xì)胞死亡受體配體1（PD-L1）在HBV陽性的B細(xì)胞性非霍奇金性淋巴瘤（B-NHL）患者腫瘤組織和血清中的表達水平,揭示PD-L1表達水平與HBV感染的相關(guān)性,并探討PD-L1在HBV陽性B-NHL患者中的臨床意義。方法:先收集92例初診未治,且HBV陽性的B-NHL患者為實驗組,33例HBV陰性的B-NHL患者為對照組;免疫組織化學(xué)染色（EnVision法）檢測腫瘤組織中PD-L1和HBx蛋白表達水平;同時收集47例初診未治、HBV陽性的且保存有血清樣本B-NHL患者為實驗組,同期初診且保存有血清樣本的47例HBV陰性的B-NHL患者為對照組（對照組與實驗組臨床基線特征已進行1:1配對篩選）。ELISA法檢測血清可溶性PD-L1（sPD-L1）水平;收集患者的臨床病理資料及生存數(shù)據(jù),然后采用卡方檢驗分析PD-L1及血清sPD-L1表達水平與HBV陽性的B-NHL患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,采用Kaplan-Meier法分析PD-L1和血清sPD-L1表達水平與其預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果:（1）HBV+HBx+組、HBV+HBx-組及HBV陰性組的PD-L1表達強度分別為（37.13±2.61）%、（24.39±3.70）%和（3.94±2.08）%;統(tǒng)計分析結(jié)果表明HBV+HBx+組的PD-L1表達強度顯著高于HBV+HBx-（p=0.0065）和HBV-組（p=0.0001）,而HBV+HBx-組的PD-L1表達強度顯著高于HBV-組（p=0.0001）。（2）HBV陽性B-NHL患者血清中sPD-L1濃度顯著高于HBV陰性B-NHL患者（HBV+=94.81±64.72 pg/mL,HBV-=46.55±13.13pg/mL,p<0.0001）;且腫瘤組織中PD-L1表達水平與血清sPD-L1水平呈顯著正相關(guān)性（r=0.6300,p<0.0001）。（3）HBV陽性的B-NHL患者中PD-L1高表達組3年OS率53.1%,3年P(guān)FS率43.8%;PD-L1低表達組3年OS率70.4%,3年P(guān)FS率65.9%;PD-L1陰性表達組3年OS率87.5%,3年P(guān)FS率81.3%。對三組間OS及PFS進行生存分析比較,發(fā)現(xiàn)p值分別為0.007和0.001,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。（4）對HBV陽性的B-NHL患者血清sPD-L1的進行K-M生存曲線分析,發(fā)現(xiàn)血清sPD-L1高表達組3年OS率63.2%,3年P(guān)FS率50.0%;血清sPD-L1低表達組3年OS率77.8%,3年P(guān)FS率77.8%;對組間OS及PFS進行生存分析,發(fā)現(xiàn)p值分別為0.024和0.047,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。（5）多因素Cox風(fēng)險模型分析結(jié)果表明腫瘤組織PD-L1高表達、ECOG≧2分、疾病分期IIIIV期、化療未緩解是OS的獨立不良預(yù)后因素,而PD-L1高表達、疾病晚期、化療未緩解是PFS的獨立不良預(yù)后因素。而在血清sPD-L1預(yù)后模型中,血清sPD-L1高表達及疾病分期晚期是患者OS的獨立不良預(yù)后因素,B癥狀、化療未緩解是患者PFS的獨立不良預(yù)后因素。結(jié)論:1、HBV陽性的B-NHL患者腫瘤組織PD-L1表達水平和血清中sPD-L1濃度均顯著高于HBV陰性患者。2、B-NHL患者腫瘤組織中PD-L1表達水平和血清中sPD-L1濃度呈顯著正相關(guān)。3、PD-L1高表達可能是影響HBV陽性的B-NHL患者OS及PFS的獨立預(yù)后危險因素。
陳羲[6]（2020）在《PARP1通過核糖基化STAT3轉(zhuǎn)錄抑制PD-L1表達的作用及機制研究》文中研究表明研究目的:聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1（Poly（ADP-ribose）polymerases 1,PARP1）是真核細(xì)胞內(nèi)具有多聚腺苷二磷酸核糖基催化活性的蛋白酶,能催化多種底物蛋白發(fā)生聚核糖基化修飾,對DNA損傷修復(fù)及基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮重要的調(diào)控作用。關(guān)于PARP1在DNA同源重組修復(fù)中的作用研究較為深入,臨床用于腫瘤治療的PARP抑制劑正是基于該功能發(fā)展而來。而PARP1對基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用則是近年來逐漸被關(guān)注的問題,PARP1通過核糖基化修飾轉(zhuǎn)錄因子抑制其轉(zhuǎn)錄活性,抑制相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄,從而在免疫細(xì)胞成熟及脂肪形成等多種生物學(xué)過程發(fā)揮重要調(diào)控作用。但由于核糖基化修飾位點特征性較弱,當(dāng)前缺乏高效篩選技術(shù)來發(fā)現(xiàn)可被核糖基化修飾的底物蛋白,PARP1對基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究進展緩慢。腫瘤細(xì)胞存在多種機制逃避機體免疫系統(tǒng)識別和攻擊,包括免疫抑制分子表達、低免疫原性、抗原調(diào)變以及物理屏障產(chǎn)生等,從而得以在體內(nèi)生存和增殖。其中腫瘤細(xì)胞表達的免疫抑制分子程序性死亡配體-1（Programmed death ligand-1,PD-L1）在腫瘤免疫逃逸過程中具關(guān)鍵作用。正常組織也表達PD-L1,與T細(xì)胞表面的程序性死亡受體-1（Programmed death-1,PD-1）結(jié)合從而抑制T細(xì)胞激活,以避免由于T細(xì)胞過度激活而引發(fā)的自身免疫病。因此,PD-L1/PD-1在維持機體保護性免疫和免疫耐受平衡中起重要作用。然而,腫瘤細(xì)胞因為進化過程中癌基因激活、微環(huán)境細(xì)胞因子刺激及信號通路持續(xù)活化等原因高度表達PD-L1,以抑制T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力,從而實現(xiàn)免疫逃逸致使腫瘤細(xì)胞無限生長和增殖。因此,深入研究PD-L1的調(diào)控機制對發(fā)展基于PD-L1的腫瘤干預(yù)策略非常重要。PARP抑制劑作為主要靶向PARP1蛋白的小分子抑制劑,通過抑制腫瘤細(xì)胞的DNA修復(fù)而發(fā)揮合成致死效應(yīng),目前臨床上已經(jīng)應(yīng)用于卵巢癌的治療中。然而,臨床數(shù)據(jù)顯示PARP抑制劑對卵巢癌患者的總生存時間（Overall survival,OS）并無顯著改善作用,如何進一步提高PARP抑制劑的臨床治療效果成為該領(lǐng)域的焦點問題。有研究表明PARP抑制劑療效欠佳的原因是其它具有DNA同源重組修復(fù)作用的蛋白發(fā)揮了代償作用,但這也只是在部分患者中得到了證實?？傮w來說,PARP抑制劑臨床效果欠佳的原因遠未闡明。綜上,本研究旨在考察PARP1對卵巢癌細(xì)胞免疫檢查點蛋白PD-L1的調(diào)控作用及相關(guān)分子機制:（1）PARP1對腫瘤細(xì)胞PD-L1轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用;（2）PARP1通過核糖基化轉(zhuǎn)錄因子STAT3抑制PD-L1的轉(zhuǎn)錄;（3）STAT3核糖基化修飾與磷酸化修飾之間的相互關(guān)系。本項目發(fā)現(xiàn)PARP1在腫瘤免疫逃逸中的新生物學(xué)功能,進一步完善了 PARP1調(diào)控基因表達的理論;發(fā)現(xiàn)PD-L1新的調(diào)控機制;STAT3新的生物學(xué)功能;有可能從免疫逃逸這一新的角度揭示影響PARP抑制劑臨床療效欠佳的原因。第一部分PARP1對PD-L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用研究研究方法:本研究分別采用人源卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及OVCAR8、人源肺癌細(xì)胞株A549及PC9、人源結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620及Co1o205、人源乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人原代卵巢癌細(xì)胞、人原代肺癌細(xì)胞,以及體外T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞共孵育模型評價PARP1的沉默或活性抑制對PD-L1的調(diào)控以及對T細(xì)胞活性抑制的作用。（1）通過siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)干擾PARP1的表達,采用qRT-PCR法考察不同腫瘤細(xì)胞中PARP1活性抑制對PD-L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用;（2）通過雙熒光素酶報告基因法考察PARP1活性抑制后對PD-L1轉(zhuǎn)錄的影響;（3）通過流式細(xì)胞術(shù)和Western blotting法考察不同細(xì)胞株中PARP1活性抑制后對PD-L1膜蛋白及總蛋白的影響;（4）通過單細(xì)胞分離技術(shù)分離出腫瘤病人的原代腫瘤細(xì)胞,通過Western blotting考察PARP1對PD-L1蛋白的調(diào)控作用;（5）構(gòu)建PARP1質(zhì)粒,考察PARP1蛋白高表后對PD-L1的影響;（6）分離出人的外周血單核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）構(gòu)建腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞的共孵育模型,考察PARP 1調(diào)控PD-L1后對T細(xì)胞活性的影響;（7）采用免疫組化手段,考察卵巢癌病人腫瘤組織切片中PARP1和PD-L1的表達關(guān)系;（8）通過流式細(xì)胞術(shù)及磺酰羅丹明B（Sulforhodamine B,SRB）實驗考察PARP抑制劑對細(xì)胞增殖及凋亡的影響;（9）通過T細(xì)胞共孵育實驗,采用酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked immuno sorbent assay,Elisa）檢測PARP1干預(yù)后對T細(xì)胞分泌IL-2和Granzyme B的影響。研究結(jié)果:（1）PARP1抑制PD-L1的轉(zhuǎn)錄水平通過siRNA干擾技術(shù)瞬時沉默卵巢癌細(xì)胞株中的PARP1蛋白,結(jié)果顯示,沉默PARP1后,PD-L1的轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào);且沉默PARP1的細(xì)胞株中PD-L1的膜表面蛋白及總蛋白水平顯著上調(diào)并且與其沉默效率相關(guān);同時在多株腫瘤細(xì)胞肺癌細(xì)胞株、結(jié)腸癌細(xì)胞株及乳腺癌細(xì)胞株中對PARP1進行沉默,均能觀察到PD-L1的蛋白水平顯著上調(diào)。提示,PARP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控PD-L1水平的生物學(xué)現(xiàn)象在多種腫瘤中均存在。（2）PARP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控PD-L1與其酶活相關(guān)性的考察為了考察PARP1調(diào)控PD-L1的作用是否依賴其核糖基化聚合酶活性,我們引入了 PARP抑制劑。在卵巢癌OVCAR8和SKOV3細(xì)胞上給予多種PARP抑制劑作用后,在不影響腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的情況下,PD-L1的mRNA水平及蛋白水平均有顯著上調(diào),而PD-L1的蛋白穩(wěn)定性不受影響;同時通過Luciferase實驗我們發(fā)現(xiàn)使用PARP抑制劑后可以顯著增強PD-L1的蛋白的轉(zhuǎn)錄活性,這進一步提示PARP1的活性抑制或者缺失是通過轉(zhuǎn)錄途徑調(diào)控PD-L1的表達的。我們還評估了另一種細(xì)胞表面免疫抑制因子CD47的表達,在PARP1沉默后其mRNA水平上沒有顯著改變,并且細(xì)胞表面CD47的表達不受PARP抑制劑Olaparib的顯著影響。（3）PARP1調(diào)控PD-L1的表達對T細(xì)胞活性的影響我們通過構(gòu)建腫瘤細(xì)胞與T細(xì)胞共孵育模型考察抑制PARP1活性、沉默PARP1以及過表達PARP1蛋白所引起的PD-L1蛋白水平的變化對T細(xì)胞功能的影響,結(jié)果顯示,過表達PARP1蛋白可以恢復(fù)T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用,促進T細(xì)胞中IL-2和Granzyme B的分泌;而抑制PARP1的活性及沉默PARP1均抑制T細(xì)胞的活性,減少IL-2和Granzyme B的分泌;同樣的在人原代腫瘤細(xì)胞中給予了 PARP抑制劑抑制PARP1的活性或者沉默PARP1均可以顯著上調(diào)PD-L1的水平,且PARP1過表達能抑制PD-L1的表達;此外我們在原代病人腫瘤樣本的組織切片中也發(fā)現(xiàn)PARP1與PD-L1存在負(fù)相關(guān),提示在病人腫瘤細(xì)胞中也存在PARP1調(diào)控PD-L1的情況。第二部分PARP1通過核糖基化STAT3調(diào)控PD-L1的作用研究研究方法:本研究采用卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及OVCAR8對PD-L1的轉(zhuǎn)錄因子進行篩選,鎖定STAT3是參與PARP1調(diào)控PD-L1的轉(zhuǎn)錄因子,并通過工具細(xì)胞HEK 293T細(xì)胞體外蛋白結(jié)合以及核糖基化反應(yīng)的模型對STAT3參與調(diào)控的作用進行明確。（1）通過siRNA干擾技術(shù)對PD-L1的轉(zhuǎn)錄因子STAT3、STAT1以及MYC等進行干擾,再采用流式細(xì)胞術(shù)考察在幾種轉(zhuǎn)錄因子缺失的情況下,PARP1對PD-L1的上調(diào)作用;（2）通過siRNA干擾技術(shù)篩選到轉(zhuǎn)錄因子STAT3,采用qRT-PCR法考察卵巢癌細(xì)胞中STAT3在PARP抑制劑Olaparib調(diào)控PD-L1中的作用;（3）通過外源性過表達PARP1和STAT3,采用雙熒光素酶報告基因法考察兩者的存在對PD-L1轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用;（4）采用染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）的實驗方法,考察 PARP 1 活性抑制后,STAT3 與 PD-L1 promotor區(qū)域的結(jié)合情況;（5）通過對TCGA數(shù)據(jù)庫對563位卵巢癌病人進行數(shù)據(jù)分析,考察STAT3靶基因的表達與PD-L1表達之間的相關(guān)性;（6）通過免疫共沉淀的方法,考察STAT3與PARP1之間的結(jié)合情況以及STAT3發(fā)生核糖基化修飾的情況;（7）通過雙熒光素酶報告基因法考察核糖基化位點突變的P ARP 1對STAT3介導(dǎo)的PD-L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響;（8）通過流式細(xì)胞術(shù)考察核糖基化位點突變的PARP1對PD-L1膜表面蛋白的影響。研究結(jié)果:（1）PARP1通過STAT3調(diào)控PD-L1的轉(zhuǎn)錄首先對PD-L1轉(zhuǎn)錄因子STAT1、STAT3以及MYC進行siRNA干擾,再給予P ARP抑制劑進行干預(yù)處理,通過流式細(xì)胞術(shù)進行檢測,我們發(fā)現(xiàn)在MYC和ST AT 1沉默的情況下PARP抑制劑仍舊能夠上調(diào)PD-L1的膜蛋白水平,而沉默STAT3之后,PARP抑制劑上調(diào)PD-L1的作用被顯著抑制了;為了進一步明確我們得到的結(jié)果,我們在卵巢癌細(xì)胞以及乳腺癌細(xì)胞中都對STAT3進行了沉默,得到的結(jié)果均一致;同時我們發(fā)現(xiàn)沉默了 STAT3之后,PARP抑制劑促進PD-L1的轉(zhuǎn)錄的功能也被顯著抑制了;為了進一步明確STAT3的確參與到了 PARP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控PD-L1的作用中,我們又進行了 Luciferase實驗以及ChIP實驗,結(jié)果顯示STAT3外源性過表達后的確能夠顯著促進PD-L1的轉(zhuǎn)錄,并且這種作用在外源性過表達PARP1后被顯著削弱了,而當(dāng)使用PARP抑制劑抑制PARP1活性后,STAT3蛋白與PD-L1 promotor區(qū)的結(jié)合也顯著增強了;我們基于cBio-Portal提供的大規(guī)模癌癥基因組學(xué)數(shù)據(jù)分析了 TCGA數(shù)據(jù)庫中包含563個樣本的卵巢漿液性囊腺癌數(shù)據(jù)集,發(fā)現(xiàn)五個著名的STAT3靶基因MCL1,CCL5,IFNG,IL4R和IL2RA的mRNA表達與CD274（PD-L1的編碼基因）的mRNA表達相關(guān),進一步表明PD-L1的表達與STAT3活性呈正相關(guān)?；谝陨蠈嶒炍覀兛梢悦鞔_STAT3參與了 PARP1調(diào)控PD-L1的轉(zhuǎn)錄過程中。（2）PARP1和STAT3結(jié)合并發(fā)生核糖基化修飾為了考察STAT3與PARP1之間存在的關(guān)系,我們通過免疫共沉淀的方法,發(fā)現(xiàn)無論是在內(nèi)源表達的情況下還是在PARP1與STAT3過表達的情況下,STAT3與PARP1之間都存在結(jié)合,并且這種結(jié)合在抑制PARP1活性后被打破;同時在PARP1存在的情況下我們又對STAT3上的修飾進行考察,我們發(fā)現(xiàn)STAT3能夠發(fā)生核糖基化修飾;在給予PARP抑制劑抑制PARP1活性后我們發(fā)現(xiàn)STAT3的核糖基化修飾也隨之消失了?；谝陨蠈嶒?我們可以明確PARP1通過其核糖基化酶活功能對STAT3產(chǎn)生核糖基化修飾作用。（3）PARP1通過核糖基化STAT3調(diào)控PD-L1的表達為了進一步明確PARP1對STAT3的核糖基化修飾作用是否會影響PD-L1的轉(zhuǎn)錄,我們考察了 STAT3對PD-L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用是否會受PARP1核糖基化酶活突變的質(zhì)粒（PARP1-H862A和PARP1-E988K）的影響。結(jié)果顯示,PARP1活性缺失后,STAT3的確無法發(fā)生核糖基化修飾,并且核糖基化功能缺失的PARP1喪失了抑制STAT3轉(zhuǎn)錄活性的作用,且對PD-L1蛋白水平也沒有產(chǎn)生抑制作用,提示PARP1的確通過核糖基化STAT3來發(fā)揮調(diào)控PD-L1水平的作用。第三部分STAT3核糖基化與磷酸化修飾之間的關(guān)系研究研究方法:本研究分別采用人源卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及OVCAR8、人源肺癌細(xì)胞株A549及PC9、人源結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620及Co1o205、人源乳腺癌細(xì)胞株MCF-7對PARP1調(diào)控p-STAT3的作用進行考察明確。通過構(gòu)建STAT3不同磷酸化程度的質(zhì)粒考察其核糖基化水平的變化,進一步再采用流式分選、流式雙染以及免疫組化等手段對STAT3的PARylation和Phosphorylation之間的關(guān)系進行明確,并進一步在工具細(xì)胞上對STAT3的PARylation如何影響其Phosphorylation的機制進行了探討。（1）通過Western blotting在多種腫瘤細(xì)胞中,對PARP抑制劑以及siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)干擾PARP1后p-STAT3水平的變化情況進行考察;（2）通過免疫熒光手段及核質(zhì)分離技術(shù),對PARP1活性抑制或者沉默后STAT3的核內(nèi)外分布情況進行考察;（3）對膜表面的PD-L1以及核內(nèi)的p-STAT3進行雙染,通過流式細(xì)胞術(shù),考察沉默PARP1后同時表達這兩種蛋白的細(xì)胞比例的變化;（4）通過Western blotting,考察野生型PARP1以及核糖基化功能缺失的PARP1對p-STAT3水平的影響;（5）通過分子克隆構(gòu)建STAT3野生型質(zhì)粒、STAT3持續(xù)磷酸化的質(zhì)粒STAT3C,以及STAT3磷酸化功能突變的質(zhì)粒STAT3Y705F,并進行免疫共沉淀實驗考察STAT3 PARylation水平的變化;（6）通過流式分選,分離出Olaparib作用后PD-L1高水平的細(xì)胞以及PD-L1低水平的細(xì)胞,并考察其p-STAT3的水平變化,同時待兩群分選出的細(xì)胞培養(yǎng)一段時間使其恢復(fù)基線水平后,又通過Western blotting對這兩群細(xì)胞的核糖基化水平進行明確;（7）通過Western blotting,對比不同腫瘤細(xì)胞中p-STAT3水平以及PARylation水平之間的關(guān)系;（8）通過免疫組化對腫瘤病人組織芯片中PARylation和Phosphorylation之間的關(guān)系進行考察;（9）通過Western blotting,對PARP1調(diào)控p-STAT3的激酶以及磷酸酶的途徑進行考察,明確影響途徑;（10）通過免疫共沉淀的方法對參與STAT3去磷酸化作用的磷酸化酶進行篩選,并考察PARR1對STAT3與其磷酸酶的結(jié)合作用的影響。研究結(jié)果:（1）PARP1可以調(diào)控STAT3的磷酸化在不同腫瘤細(xì)胞上對P ARP 1進行沉默或者使用不同的P ARP抑制劑對P ARP 1的核糖基化酶活功能進行抑制,結(jié)果顯示,在多種腫瘤中沉默或者抑制PARP1活性后均能上調(diào)p-STAT3的水平;同時,免疫熒光及核質(zhì)分離的結(jié)果顯示沉默或者抑制PARP1活性后能促進STAT3蛋白的入核;為了考察PARP1引起的STAT3的磷酸化的確會對PD-L1蛋白產(chǎn)生影響,我們又通過流式雙染考察了 p-STAT3與PD-L1雙陽性的細(xì)胞在PARP1沉默后的比例變化,結(jié)果顯示,沉默PARP1可以顯著上調(diào)同時表達p-STAT3以及PD-L1的細(xì)胞數(shù)量;為了更加明確PARP1的核糖基化功能對STAT3磷酸化作用的影響,我們又引入了 PARP1核糖基化酶活位點突變的質(zhì)粒,結(jié)果顯示,PARP1核糖基化功能缺失之后,其抑制STAT3磷酸化水平的功能消失了。通過以上實驗,我們發(fā)現(xiàn)PARP1可以通過影響STAT3的磷酸化使其發(fā)揮調(diào)控PD-L1的作用。（2）STAT3的磷酸化與核糖基化之間的關(guān)系明確了 PARP1能通過核糖基化影響STAT3的磷酸化水平,接著我們就對PARylation和Phosphorylation之間的關(guān)系進行考察。我們構(gòu)建了三種不同磷酸化水平的STAT3質(zhì)粒,STAT3野生型、STAT3持續(xù)磷酸化的質(zhì)粒STAT3C以及STAT3磷酸化功能缺失的質(zhì)粒STAT3Y705F,通過外源性過表達PARP1和這三種質(zhì)粒從而考察STAT3 PARylation水平的變化,結(jié)果顯示磷酸化水平最高的STAT3C的核糖基化水平最高,野生型STAT3次之,而磷酸化缺失的質(zhì)粒則無核糖基化修飾。同樣的使用JAK2抑制劑AZD1480抑制p-STAT3后其核糖基化修飾消失,以此看出STAT3的磷酸化水平也會影響到STAT3的核糖基化水平;通過對給予PARP抑制劑的腫瘤細(xì)胞進行流式分選發(fā)現(xiàn),PD-L1表達高的一群細(xì)胞的p-STAT3水平也高,且當(dāng)PD-L1高表和低表的兩群細(xì)胞經(jīng)過幾次培養(yǎng)回到基線水平后,我們發(fā)現(xiàn)能被PARP抑制劑上調(diào)的那群細(xì)胞中,其原本基礎(chǔ)核糖基化水平較高,即PARP1的基礎(chǔ)活性較高,這也進一步明確了 PARP1的活性與STAT3的磷酸化以及PD-L1的水平間的相關(guān)性;最后我們對人卵巢癌病人組織芯片進行了組化染色,發(fā)現(xiàn)核糖基化水平與磷酸化STAT3的水平之間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。綜上所述,STAT3核糖基化修飾與磷酸化修飾存在相互影響,并呈負(fù)相關(guān)作用。（3）PARP1通過PTPN9調(diào)控STAT3的磷酸化為了確定PARP1如何調(diào)控STAT3的磷酸化,我們對STAT3的激酶JAK2以及磷酸酶進行考察,我們發(fā)現(xiàn),沉默了 PARP1后對JAK2的磷酸化無影響;當(dāng)我們使用了磷酸酶抑制劑后,PARP 1調(diào)控STAT3的磷酸化作用消失。由此我們推測PARP1通過影響STAT3的磷酸酶來調(diào)控其磷酸化水平的作用;為此我們又對已報道的STAT3的磷酸酶進行篩選,結(jié)果顯示,PTPN9可以與STAT3以及PARP1形成復(fù)合物,并且過表達PARP1或抑制PARP1活性可以增加或減少PTPN9與STAT3的結(jié)合。由此我們可以得出的結(jié)論是PARP1通過PTPN9來發(fā)揮抑制STAT3磷酸化的作用。研究結(jié)論:在這項研究中,我們發(fā)現(xiàn)PARP1蛋白的沉默或通過PARP抑制劑抑制其核糖基化酶活功能,均能顯著增強不同腫瘤細(xì)胞中PD-L1的轉(zhuǎn)錄,并伴隨著PD-L1蛋白在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞表面的表達上調(diào)。而在轉(zhuǎn)錄因子STAT3缺失的情況下,PARP1對PD-L1的調(diào)控作用被明顯抑制。體外實驗研究表明PARP1與STAT3直接相互作用,并引起STAT3發(fā)生核糖基化修飾。同時,STAT3對PD-L1轉(zhuǎn)錄的激活被野生型PARP1的過表達所消除,而外源性過表達PARP1核糖基化功能突變的質(zhì)粒則對STAT3的轉(zhuǎn)錄活性沒有抑制作用,這提示,PARP1對STAT3的核糖基化修飾在PD-L1的調(diào)控中非常重要。同樣,PARP1的沉默或活性抑制均增強了 STAT3的磷酸化水平,野生型PARP1的外源性過表達可以顯著抑制這種STAT3的磷酸化上調(diào),而核糖基化位點突變的PARP1則不能。在臨床卵巢癌樣本中還觀察到PARP1和PD-L1以及PARylation和Phosphorylation呈負(fù)性相關(guān)?？傮w而言,我們的研究表明PARP1介導(dǎo)的STAT3的PARylation是抑制PD-L1轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵步驟,這種機制存在于多種腫瘤細(xì)胞中。
王笑[7]（2020）在《腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌腫瘤發(fā)生發(fā)展及其免疫微環(huán)境形中CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用研究》文中研究表明目的:結(jié)直腸癌（Colorectal cancer,CRC）是常見的消化道腫瘤之一,近幾年來其已逐漸發(fā)展成為發(fā)病率位居世界第三的惡性腫瘤。目前全球每年新增CRC患者人數(shù)超過一百萬,且這一數(shù)量仍在逐年遞增。腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌（Colitis-associated colorectal cancer,CAC）是CRC的一種亞型,該病患者治愈困難,死亡率極高,因此給現(xiàn)代醫(yī)學(xué)帶來極大挑戰(zhàn)。目前,關(guān)于CAC的發(fā)病機制尚不完全清楚,因此探索CAC發(fā)病機制的相關(guān)研究突顯得尤為重要。CD30和CD30配體（CD30 ligand,CD30L,CD153）,分別屬于腫瘤壞死因子受體超家族（Tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRSF）和腫瘤壞死因子超家族（Tumor necrosis factor superfamily,TNFSF）成員。本項目組以往工作中利用CD30L或CD30基因敲除小鼠,探討了CD30L和CD30在腸黏膜免疫細(xì)胞上的表達以及對小鼠炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease,IBD）腸道炎癥發(fā)生和發(fā)展的影響。證明了CD30L/CD30信號在小鼠IBD腸道炎癥性病變形成機制中發(fā)揮重要的促炎作用。提示CD30L/CD30信號可能在CAC“炎-癌”轉(zhuǎn)變及腫瘤炎癥微環(huán)境形成過程中發(fā)揮潛在作用。重要的是,以往有關(guān)CD30、CD30L與腫瘤的相關(guān)的研究多局限于淋巴系或血液來源腫瘤范疇,而關(guān)于CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌的發(fā)病機制中的作用研究卻鮮有報道。因此,為了深入探討CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)如何調(diào)控腫瘤免疫微環(huán)境,進而影響CAC的發(fā)生發(fā)展,本研究利用了CD30L基因敲除小鼠建立腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌CAC模型,探討CD30L基因缺失后對小鼠CAC腫瘤免疫微環(huán)境的形成及腫瘤進展的影響,為今后進一步深入研究CD30L/CD30信號在實體腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用機制提供可參考的理論依據(jù)。研究方法:1.利用AOM聯(lián)合DSS建立C57BL/6小鼠CAC動物模型:取小鼠結(jié)直腸和腸腫瘤組織,提取總蛋白,利用Western Blot技術(shù)檢測樣本組織內(nèi)CD30L和CD30蛋白的表達變化;提取樣本組織RNA,利用Real time-PCR技術(shù)檢測樣本組織內(nèi)CD30L和CD30基因的mRNA表達變化。2.利用WT、CD30LKO小鼠建立CAC動物模型:動態(tài)比較觀測CD30L基因缺失對小鼠CAC病變形成過程中體重、生存率、腸道長度、不同級別腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、脾臟的體積和重量的變化情況。同時用小鼠內(nèi)窺鏡檢測了WT和CD30LKO小鼠誘導(dǎo)CAC前后腸道腫瘤的變化情況,以及利用HE染色技術(shù)檢測小鼠腸道組織的病理學(xué)變化。3.利用Real time-PCR技術(shù)檢測WT和CD30LKO小鼠腸腫瘤組織內(nèi)抑癌基因、促癌基因、抑凋亡基因、促炎細(xì)胞因子、趨化因子等的mRNA表達變化,以及小鼠腸黏膜組織內(nèi)細(xì)胞因子的變化情況。4.利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測WT和CD30LKO小鼠腫瘤免疫微環(huán)境中MDSCs表型變化,及其PD-L1表達情況;TAMs表型變化,及其PD-L1表達情況。利用ELISA檢測腫瘤免疫微環(huán)境中細(xì)胞因子變化情況。5.利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測誘導(dǎo)CAC前后WT小鼠腫瘤免疫微環(huán)境中CD4+和CD8+T細(xì)胞經(jīng)TCR刺激0h、16h、32h后表達CD30和CD30L的變化情況;6.利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測WT及CD30LKO小鼠腫瘤免疫微環(huán)境中CD4+和CD8+T細(xì)胞分泌的效應(yīng)性細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-2等;T細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Tbet;表面抑制性分子PD-1;增殖標(biāo)志物Ki-67表達變化情況。利用ELISA法檢測效應(yīng)性細(xì)胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-2分泌水平。研究結(jié)果:1.與正常對照組相比,誘導(dǎo)CAC后腸黏膜組織內(nèi)CD30L和CD30蛋白表達顯著增加。CAC小鼠腸道腫瘤組織和癌旁組織內(nèi)CD30L和CD30的mRNA水平也明顯高于遠端腸組織。即誘導(dǎo)CAC腸道腫瘤發(fā)生后,小鼠腸黏膜組織內(nèi)CD30L和CD30的表達異常升高,提示CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可能在CAC病變形成中發(fā)揮潛在的重要作用。2.CD30LKO與WT小鼠相比其體重和生存率降低,腸道腫瘤數(shù)目顯著增多,組織病理學(xué)分析顯示CD30LKO小鼠腸黏膜組織內(nèi)肌層明顯增厚,腺體更不完整,炎性細(xì)胞浸潤顯著增加。結(jié)果證明,CD30L基因缺失導(dǎo)致小鼠對CAC的易感性顯著增強,腫瘤負(fù)荷明顯加重,暗示CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)可能通過調(diào)控腸道腫瘤免疫微環(huán)境的形成,在CAC病變形成中發(fā)揮重要的抗腫瘤作用。3.CD30L基因缺失導(dǎo)致腸道腫瘤組織內(nèi)mRNA水平上的抑癌基因APC、p53下調(diào),抑凋亡基因Bcl-xl、Bcl2下調(diào),血管內(nèi)皮生長因子表達顯著上調(diào)。T細(xì)胞活化與分化相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、Granzyme B、perforin、TNF-α、IFN-γ和IL-2 mRNA的表達均下調(diào),同時IL-1β、IL-6和IL-10等炎癥性細(xì)胞因子mRNA表達升高。趨化因子CXCL1,CXCL2上調(diào),CCL2下調(diào),而CCL5和CCL20表達無明顯差異。在CAC腸黏膜組織中,CD30L基因缺失同樣導(dǎo)致IL-17A、Perforin、Granzyme B、TNF-α、IFN-γ和IL-2 mRNA表達下調(diào),而IL-10和IL-6的表達上調(diào)。結(jié)果暗示了CD30L基因缺失可導(dǎo)致CAC小鼠腸道腫瘤免疫微環(huán)境向有利于腫瘤發(fā)生發(fā)展的方向轉(zhuǎn)化,進而促進CAC病變形成。4.WT小鼠誘導(dǎo)CAC后,腸黏膜固有層內(nèi)MDSCs細(xì)胞比例增加,其表達的PD-L1上調(diào),CD30L表達也上調(diào)。提示,CD30L基因缺失可能影響MDSCs分化。與WT小鼠相比,誘導(dǎo)CAC后,CD30LKO小鼠腸組織內(nèi)MDSCs的比例明顯升高,且G-MDSCs和M-MDSCs的比例和數(shù)量均增高,MDSCs表面表達的PD-L1顯著增強。CD30L基因缺失雖然沒有影響TAMs的比例和數(shù)量,但卻顯著上調(diào)了MHCII+TAMs和MHCII-TAMs細(xì)胞PD-L1的表達。與WT小鼠相比,CD30LKO小鼠LPL培養(yǎng)上清中IL-1β,IL-6和IL-10明顯升高。結(jié)果暗示,CD30L可能通過抑制腸道腫瘤免疫微環(huán)境中MDSCs的蓄積,以及MDSCs和TAMs細(xì)胞表面免疫檢查點-PD-L1的表達,進而促進CD30+效應(yīng)性T細(xì)胞所介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答。5.新鮮的CD4+和CD8+T-LPL細(xì)胞可表達低水平的CD30L和CD30,在體外培養(yǎng)16小時或32小時后,活化的CD4+和CD8+T細(xì)胞表面CD30L和CD30的表達逐漸增強。CAC小鼠腸黏膜固有層內(nèi)的CD4+和CD8+T細(xì)胞表面CD30L和CD30的表達與正常小鼠相比顯著增強。并且TCR刺激可顯著上調(diào)CD4+和CD8+T細(xì)胞表面CD30L和CD30表達的強度。結(jié)果提示,CD30L和CD30通過分子間相互作用調(diào)控腸黏膜固有層CD8+和CD4+T細(xì)胞的分化與效應(yīng)功能,進而在CAC腸道腫瘤發(fā)生及腫瘤免疫微環(huán)境形成中發(fā)揮重要的保護性作用。6.誘導(dǎo)CAC后CD30LKO小鼠腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞（LPL）內(nèi)CD4 TEM顯著降低,且LPL和腸系膜淋巴結(jié)（MLN）中CD4 TEM表面PD-1的表達強度上調(diào);IFN-γ+,TNF-α+,IL-17A+,IFN-γ+TNF-α+、TNF-α+IL-17A+、IL-2+CD4+T細(xì)胞明顯降低。而且,CD30L基因缺失導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子RORγt和Tbet的表達被抑制。CD44+CD4+T細(xì)胞的IFN-γ和Ki-67的表達也降低。ELISA結(jié)果顯示CD30LKO小鼠分泌的IL-17A,IFN-γ,TNF-α和IL-2水平降低。此外誘導(dǎo)CAC后CD30LKO小鼠LPL內(nèi)CD8 TEM降低,且LPL和MLN中CD8 TEM表面PD-1的表達強度上調(diào),但Ki-67的表達減弱。而且,效應(yīng)性CD44+CD8+CTL細(xì)胞IFN-γ,Perforin,Granzyme B和Ki-67的表達均顯著下調(diào)。結(jié)果證明CD30L基因缺失抑制小鼠腸固有層CD4+Th細(xì)胞和CD8+CTL細(xì)胞活化、分化及增殖,進而抑制腸道腫瘤免疫微環(huán)境內(nèi)T細(xì)胞所介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答,最終導(dǎo)致小鼠對CAC易感性顯著增強。結(jié)論:1.小鼠誘導(dǎo)CAC后CD30L和CD30呈現(xiàn)高表達。2.CD30L基因缺失可增加小鼠對CAC敏感性,使CD30LKO小鼠腫瘤加重。3.CD30L基因缺失使MDSCs蓄積增多,表面抑制分子PD-L1表達增強,腸道腫瘤免疫微環(huán)境向有利于腫瘤發(fā)生發(fā)展的方向轉(zhuǎn)化。4.CD30L/CD30信號缺失抑制小鼠腸固有層CD4+和CD8+T細(xì)胞活化、分化及增殖,抑制腸道腫瘤免疫微環(huán)境內(nèi)T細(xì)胞所介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答,促進CAC進展。
劉璐[8]（2019）在《PD-1/PD-L1免疫抑制軸激活外周T細(xì)胞淋巴瘤胞內(nèi)癌基因信號通路的探索及其對患者預(yù)后影響的初步研究》文中認(rèn)為目的:本研究主要的目的是初步探索PD-1多肽刺激下PD-l/PD-L1免疫抑制軸直接激活外周T細(xì)胞淋巴瘤（PTCL）胞內(nèi)癌基因信號通路情況,并通過體外進行驗證,同時在PTCL腫瘤組織中探索PD-Ll和癌基因信號通路關(guān)鍵蛋白表達之間的相關(guān)性以及與患者臨床基本特征和預(yù)后的關(guān)系。以此探討PTCL中PD-1/PD-L1免疫抑制軸除通過PD-1調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能之外,還可通過PD-L1調(diào)控腫瘤細(xì)胞內(nèi)在癌基因信號通路的新型免疫逃逸機制,并為PTCL患者的免疫治療聯(lián)合靶向治療提供新的思路。方法:搜索Oncomine公共數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù),研究PTCL組織PD-L1 mRNA表達情況;采用免疫印跡技術(shù)檢測PTCL細(xì)胞株中PD-L1總表達;PD-1多肽刺激PD-L1高表達PTCL細(xì)胞系,采用蛋白質(zhì)磷酸化組學(xué)檢測PTCL細(xì)胞內(nèi)在癌基因信號通路活化情況。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測PTCL細(xì)胞系膜上PD-L1表達;PD-1多肽刺激高表達PD-L1的PTCL細(xì)胞系,在0-2h動態(tài)檢測細(xì)胞內(nèi)在AKT總蛋白和活化AKT（p-AKT）水平的變化,體外驗證PD-1/PD-L1直接激活PTCL胞內(nèi)AKT/mTOR癌基因信號通路。收集2006年1月至2016年1月時間段內(nèi)確診的PTCL患者的臨床資料和信息。同時收集這些患者福爾馬林固定石蠟包埋的組織蠟塊,采用多色免疫熒光技術(shù)檢測PTCL患者組織中PD-L1和p-AKT的表達,分別評價以上兩種生物學(xué)標(biāo)記物的表達水平,采用卡方檢驗分析患者石蠟組織中PD-L1和p-AKT表達相關(guān)性以及與患者臨床特征之間的關(guān)系。對患者進行隨訪,采用GraPhPad Prism5.0軟件分別分析PTCL患者組織中PD-L1和p-AKT表達對患者生存的影響,進一步分析PD-L1和磷酸化AKT的共同表達關(guān)系及對患者生存和預(yù)后的影響。結(jié)果:Oncomine公共數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)顯示,相比正常組織細(xì)胞,PTCL組織中PD-L1 mRNA高表達;五株P(guān)TCL細(xì)胞系細(xì)胞內(nèi)總PD-L1也均呈高表達狀態(tài);蛋白質(zhì)磷酸化組學(xué)結(jié)果顯示,PD-1多肽刺激PD-L1陽性的PTCL細(xì)胞后胞內(nèi)405個磷酸化位點出現(xiàn)上調(diào),131個磷酸化位點出現(xiàn)下調(diào),且鑒定到磷酸化位點氨基酸的比例分布絲氨酸最高,為84%,其次為蘇氨酸14%,賴氨酸2%;KEGG對鑒定蛋白進行通路分析顯示,上調(diào)的磷酸化蛋白參包括RNA轉(zhuǎn)運、剪切、DNA復(fù)制、賴氨酸降解及AKT/mTOR信號通路等10個信號通路,下調(diào)的磷酸化蛋白參與B細(xì)胞受體信號通路、RNA轉(zhuǎn)運、MAPK信號通路及HTLV等10種信號通路;流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,五株P(guān)TCL細(xì)胞膜上PD-L1皆呈高表達狀態(tài);經(jīng)人重組PD-l多肽刺激五株P(guān)TCL細(xì)胞0-2h后,各細(xì)胞系內(nèi)p-AKT均有不同程度的升高。對所收集75例PTCL患者FFPE研究,多色免疫熒光結(jié)果顯示PTCL組織PD-L1的陽性率為53.3%,p-AKT陽性率為37.3%,其中PD-L1和p-AKT共表達為26.7%。X2檢驗顯示,PD-L1與p-AKT表達為正相關(guān)（R=0.280,P=0.015）。PD-L1表達與患者臨床分期和IPI相關(guān)（R=0.278,P=0.016;R=0.280,P=0.015）,p-AKT表達與患者臨床分期相關(guān)（R=0.255,P=0.027）。Kaplan-Meier（log-rank）生存分析顯示PD-L1或p-AKT單陽性表達的患者較其陰性表達患者預(yù)后更差,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001,P=0.006）。根據(jù)PD-L1、p-AKT表達情況,將患者分為4組,其中PD-L1陽性且p-AKT陽性的患者預(yù)后最差,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）。結(jié)論:1.PTCL組織中PD-L1 mRNA高表達;PTCL細(xì)胞系PD-L1也高表達,PD-1/PD-L1結(jié)合導(dǎo)致PTCL細(xì)胞內(nèi)多個磷酸化位點上調(diào)或下調(diào),且鑒定到磷酸化位點氨基酸的比例分布絲氨酸最高;上調(diào)或者下調(diào)的磷酸化蛋白參與多達10個癌基因信號通路的調(diào)控;2.PTCL細(xì)胞在細(xì)胞膜上高表達PD-L1,PD-1/PD-L1通路可直接激活PTCL腫瘤細(xì)胞內(nèi)在AKT/m TOR癌基因信號通路。3.PTCL患者組織中PD-L1和p-AKT的陽性表達率為53.3%和37.3%,PD-L1和p-AKT表達皆與患者臨床分期相關(guān),另外PD-L1表達還與IPI評分相關(guān);4.PTCL患者組織PD-L1和p-AKT共表達為26.7%,二者表達呈顯著正相關(guān),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;5.PD-L1或p-AKT陽性患者較陰性患者預(yù)后更差,總生存時間更短,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;此外,根據(jù)PD-L1、p-AKT表達情況,將患者進一步分為4組,其中PD-L1陽性且p-AKT陽性的患者預(yù)后最差,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
郭玉虹[9]（2019）在《EB病毒相關(guān)性胃癌臨床病理分析》文中進行了進一步梳理研究目的:相對于經(jīng)典型胃癌而言,EB病毒相關(guān)性胃癌（Epstein-Barr Virus-associated gastric carcinoma,EBVaGC）似乎具有獨特的臨床病理學(xué)特征,與經(jīng)典型胃癌不同的胃癌發(fā)生機制以及相對較好的預(yù)后。因此,盡管EBVaGC僅占胃癌總體的相對小比例,其應(yīng)被視為胃癌的一個獨特亞組進行研究和分析。雖然EBER-ISH被認(rèn)定為確診EBVaGC的金標(biāo)準(zhǔn),但是其具體組織病理學(xué)特點仍然不明確。因此本研究擬通過觀察較比已確診的EBVaGC病理切片,總結(jié)其與經(jīng)典型胃癌不同的組織病理學(xué)特點,為后續(xù)腫瘤發(fā)生機制研究提供可能的線索。研究方法:收集2016年1月-2017年12月天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院行根治性手術(shù)切除的胃癌病例的組織切片,由兩名高年資病理主診醫(yī)師,按照胃癌和EBER-ISH（+）的規(guī)范診斷標(biāo)準(zhǔn),復(fù)查診斷,篩選出EBVaGC確診病例,對其HE和免疫組化染色切片進行統(tǒng)計,并分析臨床病理學(xué)特征、免疫組化、原位雜交結(jié)果,結(jié)合相關(guān)參考文獻進行討論。研究結(jié)果:收集2016年1月-2017年12月天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院單純行胃癌根治性手術(shù)切除的病例538例,經(jīng)篩選符合EBVaGC診斷標(biāo)準(zhǔn)27例,占比5.02%。其中,男性24例,女性3例;年齡43-76歲（57.48±8.33歲）?；颊吲R床主要癥狀為間斷上腹部疼痛,偶有嘔血,黑便。27例腫瘤中25例位于胃體,1例位于賁門,1例位于胃底。所有患者均接受了腹腔鏡下胃癌根治術(shù),術(shù)后隨訪1-3年,27例患者均無瘤存活。腫瘤位于賁門1例,胃底1例,胃體25例。其中24例單發(fā)腫瘤,3例多發(fā)腫瘤。標(biāo)本肉眼所見:27例均為潰瘍型。腫瘤長徑2-8cm。切面灰紅、灰白色,晚期腫瘤邊界不清、質(zhì)硬。光學(xué)顯微鏡下觀察:大量的淋巴細(xì)胞浸潤,呈條索狀、小巢狀。腫瘤細(xì)胞中等大小,圓形或不規(guī)則形,胞質(zhì)嗜雙色,核呈空泡狀,核膜較厚,可見核仁,有的可見核分裂象,間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞,漿細(xì)胞,少見纖維組織。EBER原位雜交27例均顯示核陽性,陽性信號均勻分布在腫瘤細(xì)胞核中,周圍的非腫瘤細(xì)胞中不表達。免疫組化顯示:所有27例CK8&18、CD3、CD4、CD8均為陽性。研究結(jié)論:EBVaGC是胃癌的一個獨特的亞組,占世界上所有胃癌病例的約10%。本研究觀察到EBVaGC顯示出一些獨特的臨床病理學(xué)特征,包括男性優(yōu)勢,高齡易感傾向性,近端胃易感,潰瘍型為主,及HE染色切片中大量淋巴細(xì)胞浸潤、伴CD3、CD4、CD8均為陽性高表達的特點;以及EBVaGC相對較好的臨床預(yù)后。然而,EBV在胃癌發(fā)生中的確切作用仍未完全了解。需要進一步的研究來證實EBV感染、環(huán)境因素和EBVaGC遺傳背景之間的相互作用。
成海倫[10]（2019）在《干擾E2F1基因表達對EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移的影響》文中認(rèn)為[目的]:E2F轉(zhuǎn)錄因子1（E2F transcription factor 1,E2F1）在人類多種腫瘤中過度表達,我們前期實驗也發(fā)現(xiàn)E2F1基因在EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞LCLs中高表達。本實驗通過構(gòu)建穩(wěn)定低表達E2F1基因的Raji細(xì)胞,通過q RT-PCR和Western blot檢測E2F1基因的表達情況,采用CCK-8實驗、軟瓊脂克隆形成實驗、檢測細(xì)胞周期和遷移侵襲實驗觀察干擾E2F1基因表達后Raji細(xì)胞的增殖和遷移能力,觀察E2F1基因表達改變前后EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移能力的影響,為EBV相關(guān)腫瘤的分子機制研究提供依據(jù)。[方法]:采用q RT-PCR及Western Blot檢測EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞（LCL7）與EBV陽性Raji細(xì)胞中E2F1基因的表達情況,構(gòu)建針對E2F1基因的慢病毒干擾載體E2F1-sh RNA-GFP-PURO,建立E2F1穩(wěn)定低表達的Raji細(xì)胞系（Raji/E2F1 sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2）,通過倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光情況,采用q RT-PCR和Western Blot驗證E2F1基因的干擾效果。通過CCK-8實驗和遷移侵襲實驗觀察干擾E2F1基因表達對EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞系增殖和遷移的影響。[結(jié)果]:1.EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞中E2F1的表達水平高于EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞（LCL7）本研究采用q RT-PCR和Western blot方法檢測Raji細(xì)胞和LCL7細(xì)胞中E2F1基因的表達情況,發(fā)現(xiàn)Raji細(xì)胞中E2F1基因的表達量高于LCL7細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。提示可選用Raji細(xì)胞進行后續(xù)實驗。2.成功建立穩(wěn)定低表達E2F1基因的Raji細(xì)胞系經(jīng)測序結(jié)果顯示目的基因的干擾質(zhì)粒E2F1-sh RNA1-GFP-PURO與設(shè)計的干擾序列完全吻合,表明載體構(gòu)建成功;通過倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染組和組細(xì)胞的綠色熒光攜帶率,達80%;通過q RT-PCR、Western Blot比較轉(zhuǎn)染E2F1-sh RNA-GFP-PURO質(zhì)粒的細(xì)胞Raji/E2F1sh RNA1、Raji/E2F1 sh RNA2中E2F1干擾效率,選擇干擾效率更高的Raji/E2F1 sh RNA1進入后續(xù)實驗;之后比較q RT-PCR、Western Blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染E2F1-sh RNA1-GFP-PURO質(zhì)粒的細(xì)胞（干擾組,Raji/E2F1 sh RNA1）中E2F1的表達水平較轉(zhuǎn)染Raji-SH-GFP-PURO質(zhì)粒的細(xì)胞（空載體組,Raji/NC）和普通Raji細(xì)胞（空白組）明顯降低,提示干擾效果良好,可繼續(xù)進行后續(xù)實驗。3.干擾E2F1基因的表達可抑制EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移能力CCK-8實驗結(jié)果顯示:干擾組Raji/E2F1 shRNA1較空載體組Raji/NC增殖明顯減慢,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,表明干擾E2F1基因表達可抑制Raji細(xì)胞的增殖。軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)果顯示:干擾組Raji/E2F1 sh RNA1較空載體組Raji/NC克隆形成能力降低（P<0.05）。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示:干擾組Raji/E2F1 sh RNA1較空載體組Raji/NC的S前期比例顯著增高,G1與G2期細(xì)胞百分比下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,表明干擾E2F1基因表達可導(dǎo)致淋巴瘤Raji細(xì)胞S期阻滯。遷移實驗結(jié)果顯示:干擾組Raji/E2F1 sh RNA1較空載體組Raji/NC,遷移細(xì)胞明顯減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,表明干擾E2F1基因表達可使淋巴瘤Raji細(xì)胞遷移能力明顯減弱。侵襲實驗結(jié)果顯示:干擾組Raji/E2F1 sh RNA1穿過Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)顯著低于空載體Raji/NC,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,表明干擾E2F1基因表達可抑制淋巴瘤Raji細(xì)胞的侵襲能力。[結(jié)論]:干擾E2F1基因表達可抑制EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移能力。
二、間變性大細(xì)胞淋巴瘤的免疫逃逸機制（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、間變性大細(xì)胞淋巴瘤的免疫逃逸機制（論文提綱范文）
（1）泛實體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語對照表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 抗體偶聯(lián)藥物的知識現(xiàn)狀 |
| 引言 |
| 1.1.1 ADC發(fā)展簡史 |
| 1.1.2 獲得監(jiān)管批準(zhǔn)的上市ADC |
| 1.1.3 臨床試驗中的在研ADC及其靶標(biāo)圖譜 |
| 1.1.4 抗體骨架和靶標(biāo)的選擇 |
| 1.1.5 連接子類型和偶聯(lián)技術(shù) |
| 1.1.6 有效載荷 |
| 1.1.7 ADC在體內(nèi)的工作原理 |
| 1.1.8 ADC對難治性癌癥的治療 |
| 1.1.9 ADC的毒性問題 |
| 1.1.10 ADC耐藥機制 |
| 1.1.11 未來展望 |
| 1.2 嵌合抗原受體T細(xì)胞的知識現(xiàn)狀 |
| 引言 |
| 1.2.1 CAR-T發(fā)展簡史 |
| 1.2.2 CAR-T細(xì)胞的工作原理 |
| 1.2.3 CAR和T細(xì)胞受體的結(jié)構(gòu) |
| 1.2.4 獲得監(jiān)管批準(zhǔn)的CAR-T |
| 1.2.5 CAR-T細(xì)胞療法的毒性 |
| 1.2.6 未來挑戰(zhàn)、機會和應(yīng)用 |
| 1.3 本課題的研究目標(biāo) |
| 第二章 基于多組學(xué)構(gòu)建泛實體瘤相關(guān)抗原圖譜 |
| 引言 |
| 2.1 數(shù)據(jù)采集與分析方法 |
| 2.1.1 正常組織轉(zhuǎn)錄組和蛋白組的數(shù)據(jù)采集 |
| 2.1.2 蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位數(shù)據(jù)的采集與編譯 |
| 2.1.3 人體組織器官的重排與映射 |
| 2.1.4 正常組織的表達及其分級 |
| 2.1.5 基因在腫瘤及其癌旁組織之間的差異表達分析 |
| 2.1.6 基因在腫瘤與其他正常組織之間的差異表達分析 |
| 2.1.7 腫瘤組織轉(zhuǎn)錄組、基因組和表型數(shù)據(jù)的編譯 |
| 2.1.8 功能相關(guān)突變的注釋 |
| 2.1.9 預(yù)測腫瘤相關(guān)抗原的蛋白過表達率 |
| 2.1.10 腫瘤相關(guān)抗原與癌細(xì)胞功能狀態(tài)的相關(guān)性分析 |
| 2.1.11 基因集富集得分分析 |
| 2.1.12 臨床試驗的檢索策略 |
| 2.1.13 統(tǒng)計分析 |
| 2.2 分析結(jié)果 |
| 2.2.1 組裝綜合數(shù)據(jù)集并通過算法識別腫瘤相關(guān)抗原 |
| 2.2.2 腫瘤相關(guān)抗原的表達譜與差異表達譜 |
| 2.2.3 腫瘤相關(guān)抗原的異質(zhì)表達譜 |
| 2.2.4 預(yù)測腫瘤相關(guān)抗原的蛋白過表達率 |
| 2.2.5 癌癥驅(qū)動基因變異全景 |
| 2.2.6 候選腫瘤相關(guān)抗原的組合評估 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 靶向CDH17 的新型ADC的制備及抗結(jié)直腸癌活性研究 |
| 引言 |
| 3.1 實驗動物 |
| 3.2 實驗儀器及試劑 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 TCGA與 GTEx中 CDH17的m RNA數(shù)據(jù)的獲取與分析 |
| 3.3.2 免疫原的設(shè)計與制備 |
| 3.3.3 制備靶向CDH17 的單克隆抗體的免疫方案 |
| 3.3.4 抗體可變區(qū)基因測序 |
| 3.3.5 鼠-人嵌合抗體的構(gòu)建與表達純化 |
| 3.3.6 抗體結(jié)合親和力的測定 |
| 3.3.7 CDH17 靶向抗體偶聯(lián)vc MMAE |
| 3.3.8 細(xì)胞內(nèi)吞實驗 |
| 3.3.9 細(xì)胞膜蛋白的提取 |
| 3.3.10 免疫沉淀 |
| 3.3.11 免疫沉淀產(chǎn)物的銀染 |
| 3.3.12 蛋白免疫印跡 |
| 3.3.13 免疫組化 |
| 3.3.14 免疫熒光 |
| 3.3.15 流式細(xì)胞實驗 |
| 3.3.16 體外細(xì)胞毒性實驗 |
| 3.3.17 體內(nèi)抑瘤活性實驗 |
| 3.3.18 統(tǒng)計分析 |
| 3.4 實驗結(jié)果 |
| 3.4.1 CDH17 在消化道腫瘤和正常組織中的表達 |
| 3.4.2 CDH17 靶向抗體的多重表征 |
| 3.4.3 CDH17 靶向ADC的制備與表征 |
| 3.4.4 CDH17 靶向ADC在體外的抗腫瘤活性 |
| 3.4.5 CDH17 靶向ADC在 KM12SM結(jié)腸癌異種移植模型中的抗腫瘤活性 |
| 3.4.6 CDH17 靶向ADC在 COLO205 結(jié)腸癌異種移植模型中的抗腫瘤活性 |
| 3.4.7 荷瘤小鼠對CDH17 靶向ADC的耐受性 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 第四章 靶向LYPD3的CAR-T細(xì)胞的抗肺腺癌活性研究 |
| 引言 |
| 4.1 實驗動物 |
| 4.2 試劑耗材及設(shè)備 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 TCGA與 GTEx中 LYPD3 m RNA數(shù)據(jù)的獲取與分析 |
| 4.3.2 抗體人源化 |
| 4.3.3 慢病毒包裝 |
| 4.3.4 CD3+T細(xì)胞的復(fù)蘇與激活 |
| 4.3.5 CD3+T細(xì)胞慢病毒感染 |
| 4.3.6 CAR-T細(xì)胞分化與耗竭的檢測 |
| 4.3.7 CAR-T體外細(xì)胞殺傷 |
| 4.3.8 CAR-T體內(nèi)活性實驗 |
| 4.3.9 細(xì)胞因子的檢測 |
| 4.3.10 統(tǒng)計分析 |
| 4.4 實驗結(jié)果 |
| 4.4.1 LYPD3 蛋白在腫瘤和正常組織中的表達 |
| 4.4.2 LYPD3 靶向的CAR-T細(xì)胞的體外抗腫瘤活性 |
| 4.4.3 LYPD3 靶向的CAR-T細(xì)胞在PC9 肺腺癌異種移植模型中抗腫瘤活性 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 本章小結(jié) |
| 第五章 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 攻讀博士期間取得的科研成果 |
| 致謝 |
（2）單中心兒童惡性淋巴瘤5年臨床特點分析及意義（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮寫 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 兒童惡性淋巴瘤最新治療進展 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（3）復(fù)方苦參注射液對惡性T細(xì)胞淋巴瘤作用機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略語 |
| 第一部分 文獻綜述 |
| 文獻綜述一: T細(xì)胞淋巴瘤的治療現(xiàn)狀及進展 |
| 參考文獻 |
| 文獻綜述二: 復(fù)方苦參注射液抗腫瘤作用及其機制實驗研究進展 |
| 參考文獻 |
| 前言 |
| 第二部分 復(fù)方苦參注射液對惡性T細(xì)胞淋巴瘤作用機制研究 |
| 實驗一 復(fù)方苦參注射液對不同淋巴瘤細(xì)胞系增殖的影響及篩選 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 實驗二 復(fù)方苦參注射液對T細(xì)胞淋巴瘤Hut78、Loucy細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 實驗三 復(fù)方苦參注射液對T細(xì)胞淋巴瘤Hut78、Loucy細(xì)胞凋亡的影響 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 結(jié)論 |
| 討論 |
| 第三部分 復(fù)方苦參注射液對Hut78、Loucy細(xì)胞信號調(diào)控通路蛋白表達的影響 |
| 方法 |
| 結(jié)果 |
| 結(jié)論 |
| 討論 |
| 第四部分 復(fù)方苦參注射液對Hut78、Loucy細(xì)胞能量代謝的影響 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 結(jié)論 |
| 討論 |
| 第五部分 復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤動物模型體內(nèi)實驗研究 |
| 實驗一 復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤模型生存期的影響 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 實驗二 復(fù)方苦參注射液對EL4淋巴瘤模型免疫調(diào)節(jié)及腫瘤能量代謝的影響 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 結(jié)論 |
| 討論 |
| 結(jié)語 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間主要研究成果 |
| 個人簡歷 |
| 中醫(yī)藥科技查新報告書 |
（4）血小板-淋巴細(xì)胞比值和中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值在外周T細(xì)胞淋巴瘤患者治療反應(yīng)及預(yù)后中的價值（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 縮略詞表 |
| 1 引言 |
| 2 對象與方法 |
| 2.1 病例來源 |
| 2.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.3 數(shù)據(jù)收集 |
| 2.4 PLR和 NLR的定義 |
| 2.5 Ann Arbor分期和IPI評分的標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.6 完全緩解(complete response,CR)的評價標(biāo)準(zhǔn) |
| 2.7 終點事件 |
| 2.8 統(tǒng)計方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 患者的一般臨床特點 |
| 3.2 不同PLR組別之間的比較 |
| 3.3 不同NLR組別之間的比較 |
| 3.4 影響PTCL患者治療反應(yīng)的因素 |
| 3.5 影響PTCL患者預(yù)后的因素 |
| 3.6 PLR和 NLR在不同分期組別中對預(yù)后的影響 |
| 3.7 PLR和 NLR在不同IPI組別中對預(yù)后的影響 |
| 3.8 建立預(yù)后模型 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 結(jié)外鼻型自然殺傷/T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)病機制的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果 |
（5）HBV陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中PD-L1的表達及其臨床意義（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要縮略詞中英文對照索引 |
| 第1章 緒論 |
| 第2章 材料及方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 主要試劑 |
| 2.3 主要儀器 |
| 2.4 實驗步驟 |
| 2.5 結(jié)果判讀 |
| 2.6 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 患者臨床特征 |
| 3.2 HBx蛋白在HBV陽性及陰性B-NHL腫瘤組織中表達情況 |
| 3.3 PD-L1在HBV陽性及陰性的B-NHL腫瘤組織中表達 |
| 3.4 PD-L1 在 HBV 陽性/陰性患者腫瘤組織中的表達強度 |
| 3.5 血清sPD-L1在HBV陽性及陰性組患者血清中表達 |
| 3.6 PD-L1表達與患者基線特征的關(guān)系 |
| 3.7 PD-L1與臨床病理特征的關(guān)系 |
| 3.8 PD-L1與療效的關(guān)系 |
| 3.9 PD-L1與預(yù)后的關(guān)系 |
| 3.10 血清sPD-L1與預(yù)后的關(guān)系 |
| 第4章 討論 |
| 4.1 PD-L1在B-NHL腫瘤組織中的表達上調(diào) |
| 4.2 HBx陽性的B-NHL患者PD-L1 表達上調(diào) |
| 4.3 HBV陽性組血清sPD-L1 水平升高 |
| 4.4 PD-L1 影響HBV陽性的B-NHL患者的預(yù)后 |
| 4.5 血清sPD-L1 影響HBV陽性B-NHL的生存及預(yù)后 |
| 4.6 總結(jié)與展望 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 攻讀碩士期間主要的研究成果 |
| 致謝 |
（6）PARP1通過核糖基化STAT3轉(zhuǎn)錄抑制PD-L1表達的作用及機制研究（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 緒論 |
| 1 第一部分 PARP1對PD-L1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用研究 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 實驗材料與儀器 |
| 1.2.1 細(xì)胞株＆細(xì)菌＆原代細(xì)胞株 |
| 1.2.2 質(zhì)粒 |
| 1.2.3 藥物與主要試劑 |
| 1.2.4 實驗儀器 |
| 1.3 實驗方法 |
| 1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 1.3.2 siRNA轉(zhuǎn)染 |
| 1.3.3 流式細(xì)胞術(shù) |
| 1.3.4 質(zhì)粒擴增 |
| 1.3.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 |
| 1.3.6 Western blotting法檢測蛋白含量 |
| 1.3.7 qRT-PCR檢測目的基因mRNA水平 |
| 1.3.8 分離原代腫瘤細(xì)胞 |
| 1.3.9 T細(xì)胞共孵育 |
| 1.3.10 免疫組化(Immunohistochemistry, IHC) |
| 1.3.11 碘化丙啶(PI)細(xì)胞凋亡檢測 |
| 1.3.12 磺酰羅丹明B(sulforhodamine B,SRB)實驗考察增殖活性 |
| 1.3.13 雙熒光素酶報告基因法(Dual-Luciferase reporter assay) |
| 1.3.14 雙熒光素酶報告基因信號測定 |
| 1.3.15 數(shù)據(jù)分析 |
| 1.4 實驗結(jié)果 |
| 1.4.1 PARP1抑制PD-L1的轉(zhuǎn)錄水平 |
| 1.4.2 PARP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控PD-L1與其酶活相關(guān)性的考察 |
| 1.4.3 PARP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控PD-L1可以影響T細(xì)胞活性 |
| 1.5 討論 |
| 2 第二部分PARP1通過核糖基化STAT3調(diào)控PD-L1的作用研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗材料與儀器 |
| 2.2.1 細(xì)胞株與細(xì)菌 |
| 2.2.2 質(zhì)粒 |
| 2.2.3 藥物與主要試劑 |
| 2.2.4 實驗儀器 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 2.3.2 siRNA轉(zhuǎn)染 |
| 2.3.3 流式細(xì)胞術(shù) |
| 2.3.4 質(zhì)粒擴增 |
| 2.3.5 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 |
| 2.3.6 免疫共沉淀 |
| 2.3.7 實時熒光定量PCR (qRT-PCR)檢測目標(biāo)基因mRNA水平變化 |
| 2.3.8 質(zhì)粒點突變 |
| 2.3.9 雙熒光素酶報告基因(Dual-Luciferase reporter assay)檢測 |
| 2.3.10 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP) |
| 2.3.11 TCGA數(shù)據(jù)庫分析 |
| 2.3.12 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.4 實驗結(jié)果 |
| 2.4.1 PARP1通過STAT3調(diào)控PD-L1的轉(zhuǎn)錄 |
| 2.4.2 PARP1和STAT3結(jié)合并使其發(fā)生核糖基化修飾 |
| 2.4.3 PARP1通過核糖基化STAT3調(diào)控PD-L1的表達 |
| 2.5 討論 |
| 3 第三部分STAT3核糖基化與磷酸化修飾之間的關(guān)系研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗材料與儀器 |
| 3.2.1 細(xì)胞株&細(xì)菌 |
| 3.2.2 質(zhì)粒 |
| 3.2.3 藥物與主要試劑 |
| 3.2.4 實驗儀器 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 3.3.2 siRNA轉(zhuǎn)染 |
| 3.3.3 質(zhì)粒擴增 |
| 3.3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 |
| 3.3.5 Western blotting檢測蛋白變化 |
| 3.3.6 免疫共沉淀 |
| 3.3.7 免疫組化 |
| 3.3.8 流式雙染 |
| 3.3.9 免疫熒光 |
| 3.3.10 流式分選 |
| 3.3.11 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.4 實驗結(jié)果 |
| 3.4.1 PARP1可以調(diào)控STAT3的磷酸化 |
| 3.4.2 STAT3的磷酸化與核糖基化之間的關(guān)系 |
| 3.4.3 PARP1通過PTPN9調(diào)控STAT3的磷酸化 |
| 3.5 討論 |
| 4 總結(jié)和展望 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果 |
（7）腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌腫瘤發(fā)生發(fā)展及其免疫微環(huán)境形中CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略語 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 主要試劑和儀器 |
| 2.1.1 實驗動物 |
| 2.1.2 實驗試劑 |
| 2.1.3 實驗儀器 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠CAC模型的建立 |
| 2.2.2 AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠CAC模型中生存率監(jiān)測 |
| 2.2.3 腸固有層淋巴細(xì)胞(LPL)分離提取 |
| 2.2.4 RNA提取實驗 |
| 2.2.5 RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA步驟 |
| 2.2.6 Real time PCR實驗 |
| 2.2.7 流式細(xì)胞染色 |
| 2.2.8 ELISA實驗 |
| 2.2.9 組織總蛋白的提取 |
| 2.2.10 BCA法測定組織蛋白含量及蛋白變性 |
| 2.2.11 Western Blot實驗試劑配制 |
| 2.2.12 十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠電泳 |
| 2.2.13 制作腸組織病理標(biāo)本 |
| 2.2.14 HE染色 |
| 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 AOM/DSS誘導(dǎo)CAC后顯著上調(diào)CD30L和CD30 mRNA和蛋白的表達 |
| 3.2 CD30L基因缺失導(dǎo)致小鼠對AOM/DSS誘導(dǎo)的CAC易感性顯著增強 |
| 3.3 CAC病變形成中CD30L基因缺失對腸道腫瘤免疫微環(huán)境形成的影響 |
| 3.4 CD30L基因缺失對腸道TIME內(nèi)MDSCs和TAMs表型及功能的影響 |
| 3.5 CAC小鼠腸固有層活化的CD4~+和CD8~+T細(xì)胞表面CD30和CD30L呈高表達 |
| 3.6 CD30L基因缺失抑制腸道TIME內(nèi) T細(xì)胞的活化與增殖 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 本研究的創(chuàng)新性的自我評價 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（8）PD-1/PD-L1免疫抑制軸激活外周T細(xì)胞淋巴瘤胞內(nèi)癌基因信號通路的探索及其對患者預(yù)后影響的初步研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語/符號說明 |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、PD-1/PD-L1免疫抑制軸激活外周T細(xì)胞淋巴瘤胞內(nèi)癌基因信號通路的探索 |
| 1.1 對象和方法 |
| 1.1.1 細(xì)胞系 |
| 1.1.2 所用試劑 |
| 1.1.3 所用儀器和耗材 |
| 1.1.4 所用試劑配制 |
| 1.1.5 試驗方法 |
| 1.2 結(jié)果 |
| 1.2.1 人PTCL組織樣本中PD-L1的mRNA表達 |
| 1.2.2 PTCL細(xì)胞株總PD-L1的表達 |
| 1.2.3 蛋白質(zhì)樣本的質(zhì)控 |
| 1.2.4 質(zhì)譜結(jié)果的質(zhì)量評估 |
| 1.2.5 磷酸化位點分析 |
| 1.2.6 差異磷酸化的計算 |
| 1.2.7 差異磷酸化蛋白質(zhì)GO功能富集分析 |
| 1.2.8 差異磷酸化蛋白KEGG通路富集分析 |
| 1.3 討論 |
| 1.4 小結(jié) |
| 二、PD-1/PD-L1免疫抑制軸激活外周T細(xì)胞淋巴瘤胞內(nèi)癌基因信號通路的驗證 |
| 2.1 對象和方法 |
| 2.1.1 細(xì)胞系 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.1.3 主要儀器和耗材 |
| 2.1.4 所用試劑配制 |
| 2.1.5 實驗方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 PTCL細(xì)胞系中PD-L1在膜上的表達 |
| 2.2.2 PD-1 刺激下的PTCL細(xì)胞內(nèi)p-AKT上調(diào) |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 三、PTCL患者腫瘤組織中PD-L1和p-AKT表達與外周T細(xì)胞淋巴瘤患者預(yù)后的關(guān)系 |
| 3.1 對象和方法 |
| 3.1.1 包埋組織 |
| 3.1.2 主要試劑 |
| 3.1.3 主要儀器和耗材 |
| 3.1.4 所用試劑配制 |
| 3.1.5 試驗方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 PTCL患者的基本臨床特征 |
| 3.2.2 PTCL患者的病理亞型 |
| 3.2.3 PTCL患者病理組織中PD-L1和p-AKT的表達 |
| 3.2.4 PTCL患者PD-L1表達與患者臨床特征的關(guān)系 |
| 3.2.5 PTCL患者PD-L1表達與患者預(yù)后的關(guān)系 |
| 3.2.6 PTCL患者p-AKT表達與患者臨床特征的關(guān)系 |
| 3.2.7 PTCL患者p-AKT表達與患者預(yù)后的關(guān)系 |
| 3.2.8 PTCL患者PD-L1和p-AKT表達的相關(guān)性 |
| 3.2.9 PTCL患者組織中PD-L1和p-AKT共表達的患者與預(yù)后的關(guān)系 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說明 |
| 綜述 原發(fā)性和獲得性耐藥性PD-1/PD-L1在癌癥治療中的應(yīng)用 |
| 綜述參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（9）EB病毒相關(guān)性胃癌臨床病理分析（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語 |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、對象和方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 試劑及儀器 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.3.1 組織處理 |
| 1.3.2 組織H&E染色 |
| 1.3.3 EBER-ISH |
| 1.3.4 免疫組化染色 |
| 1.3.5 EBVaGC診斷判定標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.3.6 EBVaGC的組織病理學(xué)特征的觀察 |
| 二、結(jié)果 |
| 2.1 臨床數(shù)據(jù) |
| 2.2 病理學(xué)特征 |
| 2.2.1 腫瘤部位 |
| 2.2.2 大體檢查 |
| 2.2.3 組織學(xué)病理 |
| 2.2.4 EBER-ISH |
| 2.2.5 免疫表型 |
| 三、討論 |
| 3.1 EB病毒 |
| 3.1.1 EB病毒的主要特征 |
| 3.1.2 EB病毒株的地理區(qū)域分布特點 |
| 3.1.3 EB病毒與疾病 |
| 3.2 EBVaGC的流行病學(xué)特征 |
| 3.2.1 地理分布 |
| 3.2.2 年齡和性別分布 |
| 3.2.3 風(fēng)險因素 |
| 3.3 EBVaGC的臨床病理學(xué)特征 |
| 3.3.1 臨床病理特征 |
| 3.3.2 組織病理學(xué)鑒別診斷 |
| 3.3.3 EBVaGC的分子生物學(xué)特點 |
| 3.3.4 EBVaGC中的局部免疫 |
| 3.4 EBVaGC的治療 |
| 3.4.1 早期EBVaGC的治療 |
| 3.4.2 晚期EBVaGC的治療 |
| 3.5 預(yù)后 |
| 四、結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說明 |
| 綜述 EB病毒相關(guān)性胃癌 |
| 綜述參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（10）干擾E2F1基因表達對EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文縮略詞表 |
| 第1章 緒論 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 細(xì)胞 |
| 2.1.2 主要實驗儀器 |
| 2.1.3 主要實驗試劑及耗材 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 Raji細(xì)胞與永生化細(xì)胞LCLs的培養(yǎng) |
| 2.2.2 熒光定量PCR(qRT-PCR) |
| 2.2.3 Western blot |
| 2.2.4 構(gòu)建干擾載體 |
| 2.2.5 構(gòu)建穩(wěn)定低表達E2F1的Raji細(xì)胞系 |
| 2.2.6 CCK-8 實驗 |
| 2.2.7 軟瓊脂克隆形成實驗 |
| 2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期實驗 |
| 2.2.9 遷移實驗 |
| 2.2.10 侵襲實驗 |
| 2.2.11 統(tǒng)計分析 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 檢測EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞和EBV轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞LCL中E2F1 基因的表達水平 |
| 3.1.1 qRT-PCR檢測E2F1在mRNA水平的表達情況 |
| 3.1.2 Western Blot檢測E2F1 在蛋白水平的表達情況 |
| 3.2 構(gòu)建穩(wěn)定低表達E2F1 基因的Raji細(xì)胞系 |
| 3.2.1 干擾載體DNA測序鑒定 |
| 3.2.2 獲得穩(wěn)定干擾E2F1的Raji細(xì)胞株 |
| 3.2.3 qRT-PCR和 WesternBlot檢測Raji/E2F1shRNA1、Raji/E2F1 shRNA2 細(xì)胞中E2F1 的表達情況 |
| 3.2.4 qRT-PCR和 Western Blot檢測Raji組、Raji/NC組和Raji/E2F1 shRNA1 組中E2F1 的表達 |
| 3.3 下調(diào)E2F1 的表達對Raji細(xì)胞增殖和遷移的影響 |
| 3.3.1 CCK-8 實驗檢測各組細(xì)胞增殖能力 |
| 3.3.2 軟瓊脂克隆形成實驗檢測各組克隆形成能力 |
| 3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期 |
| 3.3.4 遷移實驗檢測細(xì)胞遷移能力 |
| 3.3.5 侵襲實驗檢測細(xì)胞侵襲能力 |
| 第4章 討論 |
| 4.1 調(diào)節(jié)細(xì)胞周期 |
| 4.2 遷移侵襲 |
| 4.3 增殖、生長能力 |
| 4.4 通路聯(lián)系 |
| 4.5 促進腫瘤發(fā)生 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 文獻綜述 |
| 1 EB病毒免疫逃逸的方式 |
| 2 EB病毒免疫逃逸的分子機制 |
| 3 EB 病毒免疫逃逸的不良影響 |
| 4 EB 病毒免疫逃逸相關(guān)的防治 |
| 參考文獻 |
| 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果 |
| 本研究課題資助項目 |
| 致謝 |
四、間變性大細(xì)胞淋巴瘤的免疫逃逸機制（論文參考文獻）
- [1]泛實體瘤相關(guān)抗原圖譜的構(gòu)建及其在抗體偶聯(lián)藥物和嵌合抗原受體T細(xì)胞上的應(yīng)用[D]. 方佳成. 西北大學(xué), 2021(12)
- [2]單中心兒童惡性淋巴瘤5年臨床特點分析及意義[D]. 張青青. 河北醫(yī)科大學(xué), 2021(02)
- [3]復(fù)方苦參注射液對惡性T細(xì)胞淋巴瘤作用機制研究[D]. 鄭佳彬. 中國中醫(yī)科學(xué)院, 2020(01)
- [4]血小板-淋巴細(xì)胞比值和中性粒細(xì)胞-淋巴細(xì)胞比值在外周T細(xì)胞淋巴瘤患者治療反應(yīng)及預(yù)后中的價值[D]. 趙燕春. 浙江大學(xué), 2020(02)
- [5]HBV陽性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中PD-L1的表達及其臨床意義[D]. 朱曦. 南華大學(xué), 2020
- [6]PARP1通過核糖基化STAT3轉(zhuǎn)錄抑制PD-L1表達的作用及機制研究[D]. 陳羲. 浙江大學(xué), 2020(10)
- [7]腸炎相關(guān)結(jié)直腸癌腫瘤發(fā)生發(fā)展及其免疫微環(huán)境形中CD30L/CD30信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用研究[D]. 王笑. 中國醫(yī)科大學(xué), 2020(01)
- [8]PD-1/PD-L1免疫抑制軸激活外周T細(xì)胞淋巴瘤胞內(nèi)癌基因信號通路的探索及其對患者預(yù)后影響的初步研究[D]. 劉璐. 天津醫(yī)科大學(xué), 2019(02)
- [9]EB病毒相關(guān)性胃癌臨床病理分析[D]. 郭玉虹. 天津醫(yī)科大學(xué), 2019(02)
- [10]干擾E2F1基因表達對EBV陽性淋巴瘤Raji細(xì)胞增殖和遷移的影響[D]. 成海倫. 南華大學(xué), 2019(01)
標(biāo)簽：淋巴瘤論文; 彌漫大b細(xì)胞淋巴瘤論文; 腫瘤免疫論文; 蛋白質(zhì)磷酸化論文; 細(xì)胞免疫論文;