一、電針對半乳糖所致大鼠空間學習記憶障礙及海馬齒狀回LTP誘導的干預作用（論文文獻綜述）
戴雅玲[1]（2021）在《電針調控miR-219a促進血管性認知障礙大鼠內嗅-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性的機制》文中研究指明目的:本課題探討電針是否通過調控mi R-219a促進內嗅皮層-海馬神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性,進而改善VCI大鼠的空間學習記憶功能,以期豐富電針改善血管性認知障礙的實驗依據(jù)。方法:共納入70只雄性SD大鼠（280g±30g）,隨機選取10只作為假手術組,其余大鼠進行模型制備;將造模成功的VCI模型大鼠（n=50）,采用隨機數(shù)字表法分為5組,即模型組、電針組、模型+mi R-219a過表達組、電針+mi R-219a過表達組、電針+空載病毒組,每組10只。電針組、電針+空載病毒組、電針+mi R-219a過表達組采用電針“百會”、“神庭”穴進行干預,疏密波1/20Hz,30min/次,1次/天,5天/周,干預4周,其余組別采用同等抓取,固定30min不做任何處理;（1）構建神經(jīng)元特異性過表達mi R-219a的腺相關病毒,內嗅皮層區(qū)注射r VAACMV-Dio-mi R-219a-m Cherry-p A順示蹤病毒,海馬CA1區(qū)注射r AVV-h Syn-e GFP-2ACRE-WPRE-PA逆示蹤病毒;r VAA-CMV-Dio-m Cherry-p A空載病毒作為對照;（2）采用巴恩斯迷宮、Morris水迷宮檢測各組大鼠空間學習記憶功能;（3）應用磁共振波譜成像分析各組大鼠內嗅皮層區(qū)、海馬CA1區(qū)興奮性神經(jīng)物質代謝谷氨酸（glutamate,Glu）,抑制性神經(jīng)遞質γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）和N-乙酰天門冬氨酸（N-acetylaspartate,NAA）神經(jīng)遞質改變;（4）采用高爾基染色觀察各組大鼠內嗅皮層區(qū)、海馬CA1區(qū)突觸形態(tài)學變化;（5）采用膜片鉗電生理記錄各組大鼠內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路長時程增強（Long-tern potentiation,LTP）,全細胞電壓鉗模式檢測內嗅皮層、海馬自發(fā)性興奮性突觸后電流（Spontaneous Excitatory Post Synaptic Current,s EPSC）與N-甲基-D-天門冬氨酸受體（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）離子通道電流變化;（6）采用激光共聚焦顯微鏡下觀察內嗅皮層-海馬CA1 mi R-219a熒光定位;（7）采用RT-q PCR檢測各組大鼠內嗅皮層區(qū)、海馬區(qū)mi R-219a的定量表達。結果:（1）巴恩斯迷宮行為學進行模型檢驗。干預前,與假手術組相比,其余五組的逃避潛伏期均顯著增加（P<0.01）,各組間比較沒有明顯差異（P>0.05）。與假手術組相比,其余五組的正確洞口接觸次數(shù)以及目標象限時間明顯減少（P<0.01）,且相比五組間兩兩比較均未見明顯差異。（2）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a對VCI模型大鼠空間學習記憶功能的影響。干預后Morris水迷宮實驗結果顯示:學習階段,與假手術組相比,模型組逃避潛伏期延長（P<0.01）;與模型組相比,電針組與電針+空載病毒組逃避潛伏期出現(xiàn)縮短（P<0.05）,模型+mi R-219a過表達組在逃避潛伏期出現(xiàn)延長（P<0.05）;與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組逃避潛伏期明顯增加（P<0.05）。記憶測試階段,與假手術組相比,模型組穿越平臺次數(shù)以目標象限占比明顯減少（P<0.01）;與模型組相比,電針組與電針+空載病毒組大鼠的穿越平臺與目標象限占比顯著增加（P<0.05）;與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組穿越平臺與目標象限占比出現(xiàn)減少（P<0.05）。（3）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a對VCI模型大鼠內嗅皮層、海馬CA1區(qū)神經(jīng)物質代謝的影響。磁共振波譜結果顯示:與假手術組相比,模型組內嗅皮層、海馬CA1區(qū)NAA含量減少（P<0.01）,興奮性谷氨酸神經(jīng)遞質含量下降（P<0.01）,而GABA神經(jīng)遞質含量呈升高（P<0.01）;與模型組相比,電針組與電針空載病毒組均出現(xiàn)NAA含量升高（P<0.05）,興奮性Glu神經(jīng)遞質含量升高（P<0.05）,GABA神經(jīng)遞質含量降低（P<0.05）。與模型組對比,模型+mi R-219a過表達組NAA含量下調趨勢（P>0.05）,興奮性Glu神經(jīng)遞質呈下降趨勢（P>0.05）,GABA神經(jīng)遞質含量具有升高趨勢（P>0.05）;與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組NAA含量降低（P<0.05）,興奮性Glu神經(jīng)遞質含量降低趨勢（P>0.05）,GABA神經(jīng)遞質含量升高（P<0.05）。（4）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a改善VCI模型大鼠內嗅皮層和海馬CA1區(qū)突觸形態(tài)。內嗅皮層與海馬CA1區(qū),假手術組的樹突棘高分布且排列致密,其余五組的樹突棘呈現(xiàn)脫落萎縮,模型組的樹突棘數(shù)量顯著下降（P<0.01）;與模型組相比,模型+mi R-219a過表達組的樹突棘數(shù)量進一步減少（P<0.05）;電針組與電針+空載病毒組樹突棘數(shù)量明顯增加（P<0.05）;與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組樹突棘數(shù)量減少（P<0.05）。（5）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a改善VCI模型大鼠內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路場電位。與假手術組相比,模型組內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路f EPSP斜率顯著降低（P<0.01）,而電針組較模型組內嗅皮層-海馬CA1區(qū)神經(jīng)環(huán)路f EPSP斜率升高（P<0.05）,與模型組相比,模型+mi R-219a過表達組該環(huán)路f EPSP斜率進一步降低（P<0.05）,而與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組f EPSP斜率出現(xiàn)下調（P<0.05）。（6）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a影響VCI模型大鼠內嗅皮層、海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元放電模式。結果顯示:與假手術組相比,模型組內嗅皮層、海馬CA1區(qū)s EPSC的振幅與頻率顯著降低（P<0.01）,電針組較模型組內嗅皮層、海馬CA1區(qū)振幅與頻率均升高（P<0.05）;與模型組相比,模型+mi R-219a過表達組內嗅皮層-海馬CA1區(qū)s EPSC振幅、頻率均呈降低（P<0.05）;與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組內嗅皮層-海馬區(qū)s EPSC振幅與頻率均出現(xiàn)下降（P<0.05）。（7）電針“百會”、“神庭”調控mi R-219a上調VCI模型大鼠海馬NMDAR離子通道電流強度。結果顯示:與假手術組相比,模型組海馬區(qū)NMDAR通道電流顯著降低（P<0.01）;與模型組相比,電針組較海馬區(qū)NMDAR通道電流升高（P<0.05）;與模型組相比,模型+mi R-219a過表達組海馬區(qū)NMDAR通道電流顯著降低（P<0.05）;而與電針組相比,電針+mi R-219a過表達組海馬區(qū)NMDAR通道電流下調（P<0.05）。（8）電針“百會”、“神庭”對內嗅皮層、海馬CA1區(qū)mi R-219a表達的影響。RT-q PCR結果顯示:與假手術組相比,模型組內嗅皮層、海馬區(qū)mi R-219a表達量均呈上升（P<0.01）。電針組較模型組mi R-219a表達量顯著下降（P<0.05）;與模型組相比,mi R-219a過表達組大鼠的內嗅皮層與海馬CA1區(qū)mi R-219a表達量顯著上升（P<0.05）。（9）內嗅皮層-海馬CA1區(qū)神經(jīng)環(huán)路投射與mi R-219a定位表達情況:激光共聚焦顯微鏡觀察顯示,內嗅皮層-海馬CA1存在直接神經(jīng)纖維投射,且內嗅皮層、海馬CA1區(qū)見mi R-219a熒光定位表達。結論:電針“百會”、“神庭”穴調控mi R-219a可促進內嗅皮層-海馬神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性改善血管性認知障礙模型大鼠空間學習記憶功能,其電生理機制與NMDAR離子通道電流增強,促進神經(jīng)元興奮性放電,誘發(fā)內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路LTP形成有關。
林華偉[2]（2021）在《基于miRNAs調控突觸可塑性探討有氧跑臺運動改善慢性腦缺血大鼠記憶功能的機制》文中提出目的:慢性低灌注腦缺血會引起腦組織損傷和腦萎縮,導致血管性認知障礙（Vascular cognitive impairment,VCI）。本課題探討有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠空間學習記憶功能的影響,以及海馬突觸可塑性結構與功能的變化,并通過海馬組織基因高通量測序分析揭示其差異表達的微小RNAs（micro RNAs,miRNAs）,為有氧運動干預VCI提供實驗依據(jù)。方法:（1）將36只SPF級健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠采用隨機數(shù)字表法,分為假手術組12只,手術組24只。復制雙側頸總動脈永久結扎手術（2-Vessels Occlusion,2-VO）制備慢性腦缺血大鼠模型,假手術組僅分離血管不進行結扎。造模完成后采用小動物核磁共振3D time-of-fight（3D-TOF）血管成像檢測雙側頸總動脈結扎是否成功。（2）將手術組模型構建成功大鼠根據(jù)隨機數(shù)字表隨機分為2組,模型組和運動組,每組各12只。隨后進行有氧運動訓練,采用跑臺裝置對模型大鼠進行跑臺訓練,坡度設置為0°,跑臺速度設定為15 m/min,每天1小時,每周5天,持續(xù)4周。假手術組和模型組每日在同等條件下抓取,不干預。（3）有氧跑臺運動訓練后,采用Morris水迷宮行為學檢測各組大鼠的空間學習記憶能力;采用高爾基染色觀察大鼠海馬樹突棘的密度變化,以及電生理檢測各組大鼠海馬長時程增強（Long-term potentiation,LTP）反應;采用免疫蛋白印跡（Westen blotting,WB）檢測谷氨酸受體蛋白和即刻早期基因蛋白（Immediately early genes,IEGs）的表達情況;采用miRNA測序檢測miRNAs的差異表達,然后進行靶基因預測和和信號轉導通路富集分析,采用實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）驗證miRNAs表達水平,WB檢測下游信號通路相關蛋白表達。結果:（1）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠空間學習記憶能力的影響:在學習階段,與假手術組相比,模型組大鼠逃避潛伏期顯著升高（P<0.001）;與模型組相比,運動組大鼠逃避潛伏期顯著下降（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,在測試階段,與假手術組相比,模型組大鼠穿越平臺次數(shù)顯著降低（P<0.001）,目標象限持續(xù)時間的百分比顯著降低（P<0.001）;與模型組相比,運動組大鼠穿越平臺次數(shù)顯著升高（P<0.001）,目標象限持續(xù)時間的百分比顯著升高（P<0.001）,并且三組大鼠在該階段的游泳平均速度沒有統(tǒng)計學差異。（2）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠海馬樹突棘密度和LTP的影響:高爾基染色結果顯示,與假手術組相比,模型組大鼠海馬區(qū)樹突棘密度顯著降低（P<0.001）;與模型組相比,運動組大鼠海馬區(qū)樹突棘密度顯著升高（P<0.001）。電生理結果顯示,與假手術組相比,模型組在100 Hz單脈沖刺激誘導后海馬的興奮性突觸后電位（field excitatory postsynaptic potential,f EPSP）斜率下降（P<0.001）;與模型組相比,運動組海馬f EPSP斜率顯著升高（P<0.001）。（3）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠突觸可塑性相關蛋白以及學習記憶相關即刻早期基因蛋白的影響:WB結果顯示,模型組大鼠海馬區(qū)N-甲基-D-天冬氨酸受體1（N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1）及亞型NMDAR2A和NMDAR2B的表達水平較假手術組相比顯著下降（P<0.05,P<0.01）,α-氨基-3羥基-5甲基-4異惡唑受體1（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionate receptor 1,AMPAR1）的表達水平有下降趨勢（P=0.104）,NMDAR2A、NMDAR2B和AMPAR1的磷酸化水平都顯著下降（P<0.05）;與模型組相比,運動組大鼠海馬區(qū)NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,AMPAR1的表達水平都顯著升高（P<0.05）,NMDAR2A,NMDAR2B,AMPAR1的磷酸化水平也顯著升高（P<0.05,P<0.01）。另外,模型組大鼠海馬區(qū)c-Fos,早期生長應答因子1（Early Growth Response 1,Egr1）和活性調節(jié)細胞骨架蛋白（Activity-regulated cytoskeletal,Arc）表達水平相較于假手術組有顯著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）;而與模型組相比,運動組大鼠c-Fos,Egr1和Arc在海馬中的表達顯著升高（P<0.01）。（4）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠miRNA組學的影響:對三組大鼠海馬區(qū)進行miRNA測序分析顯示,與假手術組相比,模型組海馬差異表達≥1.5倍的miRNAs共有15個（P<0.05）,其中11個表達上調,4個表達下調;與模型組相比,運動組海馬差異表達≥1.5倍的miRNAs共有12個（P<0.05）,其中7個表達上調,5個表達下調。然后采用q RT-PCR驗證miRNAs測序結果,結果顯示miR-144-3p、miR-144-5p、miR-1188-5p、miR-130b-3p、miR-155-5p、miR-34b-5p、miR-15b-3p和miR-27b-5p的表達水平有顯著差異,其中miR-144-3p、miR-144-5p、miR-155-5p、miR-130b-3p和miR-15b-3p的表達水平同時在模型組和運動中有差異表達。（5）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠信號通路的影響:對測序后在三組大鼠海馬差異表達的miRNAs進行靶基因預測和信號轉導通路分析發(fā)現(xiàn),哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian target of rapamycin,mTOR）信號通路（P<0.05）與突觸可塑性密切相關。通過在線網(wǎng)站分析和文獻檢索發(fā)現(xiàn)miR-144-3p、miR-155-5p和miR-130b-3p的靶基因與磷酸酶與張力蛋白同源物（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）/磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（Protein kinase B,PKB/AKT）/mTOR信號通路密切相關。（6）有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠mTOR信號通路相關蛋白表達的影響:WB結果顯示,與假手術組相比,模型組大鼠海馬區(qū)PTEN的表達水平顯著升高（P<0.05）,PI3Kα的表達水平有下降的趨勢（P=0.239）,PI3Kβ,p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表達水平都有顯著下降（P<0.05）;與模型組相比,運動組大鼠海馬區(qū)PTEN的表達水平顯著降低（P<0.05）,PI3Kα的表達水平有上升的趨勢（P=0.337）,PI3Kβ,p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表達水平都有顯著升高（P<0.05,P<0.01）。結論:本研究提示有氧跑臺運動可能通過調控海馬miR-144-3p、miR-155-5p和miR-130b-3p的表達水平,影響下游PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路,增強慢性腦缺血模型大鼠的突觸可塑性,從而改善空間學習記憶能力。
張嘉泳[3]（2020）在《基于Neurogranin調控海馬突觸可塑性探討游泳運動改善慢性低灌注腦缺血致空間記憶障礙的機制》文中認為目的:近年研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)特異性突觸后蛋白——Neurogranin（Ng）可作為認知功能障礙新的診斷標志物之一。本課題利用Loxp-Cre基因編輯技術在神經(jīng)系統(tǒng)特異性敲除Ng基因,以探討游泳運動是否調控Ng改善慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間記憶功能,以及探討Ng介導海馬突觸可塑性在游泳運動改善空間記憶功能中的作用機制。方法:參考Shibata等學者方法采用雙側頸總動脈狹窄術制備慢性低灌注腦缺血致血管性認知障礙模型。將42只C57/B6小鼠按照隨機數(shù)字表隨機分為假手術組（12只）和手術組（30只）。手術組行雙側頸總動脈狹窄術,假手術組僅分離雙側頸總動脈不作狹窄。術后采用激光散斑檢測腦血流灌注判定造模是否成功,采用T迷宮檢測其空間記憶是否損傷。將造模成功并符合條件的手術組24只C57/B6小鼠按照隨機數(shù)字表隨機分為模型組（12只）和游泳運動組（12只）。32只Ng基因敲除小鼠行雙側頸總動脈狹窄術,采用同樣的方法進行模型檢驗。將造模成功并符合條件的24只Ng基因敲除小鼠按照隨機數(shù)字表隨機分為模型+Ng敲除組（12只）和游泳運動+Ng敲除組（12只）。術后1周開始干預,游泳運動組和游泳運動+Ng敲除組先進行1周的游泳運動適應,然后進行4周游泳運動的干預,每天60 min,每周5天。干預后采用T迷宮和Morris水迷宮檢測其空間記憶行為學的變化;采用膜片鉗電生理技術檢測海馬CA3-CA1長時程增強（long term potentiation,LTP）效應的改變;采用Western Blotting實驗檢測海馬組織突觸相關蛋白Ng、CaM和CaMKII的表達水平。結果:（1）游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間記憶能力的影響:T迷宮測試顯示:干預前,與假手術組相比,模型組、游泳運動組、模型+Ng敲除組和游泳運動+Ng敲除組T迷宮空間自主交替率均下降（P=0.025,P=0.012,P=0.001,P=0.001）;干預后,模型組與假手術組相比,空間自主交替率降低（P<0.001）,游泳運動組空間自主交替率高于模型組（P<0.001）,模型+Ng敲除組空間自主交替率低于模型組（P=0.032）,游泳運動+Ng敲除組空間自主交替率低于游泳運動組（P<0.001）。Morris水迷宮測試顯示:干預后,在水迷宮中定向導航學習的第2、和第4天,模型組逃避潛伏期較假手術組延長（P<0.001）;在水迷宮定向導航學習的第2、第3和第4天游泳運動組逃避潛伏期較模型組縮短（P<0.001,P=0.037,P<0.001）,而游泳運動組逃避潛伏期較游泳運動+Ng敲除組縮短（P<0.001,P=0.014,P<0.001）。在水迷宮空間探索測試中,模型組的穿越平臺次數(shù)少于假手術組（P<0.001）,游泳運動組的穿越平臺次數(shù)多于模型組（P=0.040）,模型+Ng敲除組的穿越平臺次數(shù)少于模型組（P=0.033）,游泳運動+Ng敲除組的穿越平臺次數(shù)少于游泳運動組（P=0.022）。（2）游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠海馬LTP的影響:與假手術組相比,模型組在100 Hz單脈沖刺激誘導后海馬CA3-CA1的興奮性突觸后電位（field excitatory postsynaptic potential,fEPSP）斜率下降（P<0.001）;與模型組相比,游泳運動組海馬CA3-CA1的fEPSP斜率增加（P=0.037）;與模型組相比,模型+Ng敲除組海馬CA3-CA1的fEPSP斜率下降（P=0.029）;與游泳運動組相比,游泳運動+Ng敲除組海馬CA3-CA1的fEPSP斜率下降（P=0.011）。（3）游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠海馬突觸相關蛋白表達水平的影響:模型組Ng表達水平較假手術組降低（P=0.003）,游泳運動組Ng表達水平較模型組升高（P=0.029）,模型+Ng敲除組Ng表達水平低于模型組（P=0.020）,游泳運動+Ng敲除組Ng表達水平低于游泳運動組（P<0.001）,模型+Ng敲除組與游泳運動+Ng敲除組相比無差異（P=0.950）。模型組與假手術組相比CaM表達水平下降（P=0.006）,游泳運動組與模型組相比CaM表達水平升高（P=0.026）,模型+Ng敲除組與模型組相比CaM表達水平下降（P=0.047）,游泳運動+Ng敲除組與游泳運動組相比CaM表達水平下降（P=0.003）,模型+Ng敲除組與游泳運動+Ng敲除組相比無差異（P=0.367）。與假手術組相比,模型組CaMKII表達水平下降（P=0.003）;與模型組相比,游泳運動組CaMKII表達水平升高（P=0.044）;與模型組相比,模型+Ng敲除組CaMKII表達水平下降（P=0.026）;與游泳運動組相比,游泳運動+Ng敲除組CaMKII表達水平降低（P=0.002）;模型+Ng敲除組與游泳運動+Ng敲除組相比無差異（P=0.490）。結論:本研究證實了游泳運動通過調控Ng的表達高慢性低灌注腦缺血致血管性認知障礙模型小鼠的空間記憶能力,同時Ng調控海馬長時程增強以及激活突觸可塑性鈣信號轉導蛋白是其作用機制之一。
劉珍洪[4]（2020）在《基于髓鞘及少突膠質細胞損傷探討參枝苓口服液對AD的保護作用》文中進行了進一步梳理目的本課題從中醫(yī)心腦相關理論出發(fā),選用“從心論治”代表方參枝苓口服液,基于髓鞘及少突膠質細胞損傷探討其干預阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）的作用機制。AD是老年癡呆癥最常見的類型。臨床可表現(xiàn)為記憶、情志和行為障礙,對患者家庭、護理人員造成了沉重的經(jīng)濟和精神負擔。近年來研究表明,髓鞘損傷與AD、帕金森疾?。≒arkinson’sdisease,PD）和中風等神經(jīng)退行性疾病相關。其中發(fā)現(xiàn)AD與髓鞘的破壞和丟失關系密切。研究發(fā)現(xiàn)髓鞘損傷早于認知障礙、老年斑（Senileplaque,SPs）和神經(jīng)纖維纏結（Neurofibrillary tangles,NFTs）等病理改變,髓鞘損傷可能在AD早期認知障礙中發(fā)揮關鍵作用。PI3K/Akt-mTOR通路是髓鞘形成的強大驅動力,是CNS髓鞘蛋白表達的主要驅動因素。一些研究顯示神經(jīng)元PI3K/Akt-mTOR信號傳導的異常和持續(xù)激活是AD的早期特征。mTOR在構成髓鞘的少突膠質細胞中對脂質合成,轉錄因子調節(jié),和細胞骨架具有顯著作用,這是少突膠質細胞發(fā)育不可或缺的過程。除外,表觀遺傳阻滯、脂質代謝異常皆與AD的病理密切相關。本研究通過體內實驗探索參枝苓口服液是否有改善損傷髓鞘的作用,同時觀察體外是否能通過保護Aβ42損傷的少突膠質細胞進而維持髓鞘完整性而防治早期AD。并基于PI3K/Akt-mTOR信號通路、表觀遺傳調控及脂質代謝探討其可能機制,為參枝苓口服液保護髓鞘提供可能的證據(jù)。方法1.36只3月齡雄性APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠隨機分為模型組,多奈哌齊組,參枝苓口服液組,每組12只。同背景、同月齡野生型C57BL/6J小鼠12只作為正常組。多奈哌齊組給予多奈哌齊（0.92mg.kg-1·d-1）灌胃給藥,參枝苓口服液組給予參枝苓口服液（2.9ml·kg-1·d-1）灌胃給藥。正常組和模型組灌予等體積的0.5%CMC。2.利用Y迷宮實驗研究參枝苓口服液灌胃3個月后對APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠空間識別和記憶能力的影響。3.利用透射電鏡研究參枝苓口服液灌胃3個月后對APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠海馬中淀粉樣斑塊、髓鞘及少突膠質細胞超微結構的影響。4.利用免疫組化和Western blot方法研究參枝苓口服液灌胃3個月后對APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠海馬中髓鞘相關蛋白MBP、PLP和MAG與Aβ42蛋白的表達變化影響。5.40只雄性SD成年大鼠（200±20g）隨機分為正常組和參枝苓口服液組,參枝苓口服液組以成人（70kg）等效劑量的2倍量進行灌胃,正常組灌服等體積0.5%CMC,每天1次,連續(xù)7d,制備參枝苓口服液含藥血清。6.UHPLC-MRM-MS/MS方法檢測參枝苓口服液含藥血清主要有效成分。7.Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞,建立擬AD體外細胞模型。8.利用CCK-8法篩選參枝苓口服液含藥血清及陽性藥多奈哌齊對OLN-93少突膠質細胞的安全劑量和有效劑量。9.利用Western blot、RT-qRCR法、免疫熒光研究參枝苓口服液含藥血清對Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞髓鞘相關蛋白和PI3K/Akt-mTOR信號通路蛋白及mRNA表達影響。10.利用PI3K/Akt-mTOR信號通路抑制劑LY294002（PI3K抑制劑）及Rapamycin（mTOR抑制劑）進一步確認PI3K/Akt-mTOR信號通路在參枝苓口服液髓鞘保護中的參與作用。11.利用染色質免疫共沉淀（CHIP）實驗觀察參枝苓口服液對Aβ42損傷少突膠質細胞OLN-93的乙?；M蛋白與MBP基因相互作用。12.利用LC-MS/MS法觀察參枝苓口服液對Aβ42損傷少突膠質細胞OLN-93脂質代謝的影響。結果1.體內動物實驗參枝苓口服液和陽性對照藥多奈哌齊連續(xù)灌胃3個月后可以明顯延長APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠在新異臂中活動的路程和持續(xù)時間。透射電鏡下可觀察到在損傷的少突膠質細胞附近淀粉樣斑塊的沉積,而正常組和治療組未觀察到。同時,透射電鏡下觀察到參枝苓口服液和多奈哌齊可以明顯改善髓鞘板層的結構、髓磷脂的崩解以及少突膠質細胞的結構破壞。在此基礎上,對各組小鼠海馬進行免疫組化及Western blot實驗結果也顯示,參枝苓口服液和多奈哌齊可以明顯上調APPswe/PS1dE9雙轉基因小鼠海馬中髓鞘相關蛋白MBP、PLP和MAG的蛋白表達。同時,APPswe/PS1dE9雙轉基因模型小鼠海馬中觀察到Aβ42的蛋白表達上調,參枝苓口服液和多奈哌齊可以明顯下調小鼠海馬中Aβ42的蛋白表達。2.UHPLC-MRM-MS/MS方法檢測參枝苓口服液及參枝苓含藥血清主要有效成分參枝苓口服液中,芍藥內酯苷、肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍藥苷這5種代謝物都能檢測到。且濃度含量:甘草酸>芍藥苷>芍藥內酯苷>肉桂酸>甘草苷。參枝苓口服液大鼠含藥血清中,可以檢測到肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍藥苷這4種代謝物。濃度含量:甘草酸>肉桂酸>芍藥苷>甘草苷。芍藥內酯苷雖然在質譜中可以檢測到峰,但是信號可能與噪音相似,定量檢測未檢測出含量。提示,參枝苓口服液確實可以經(jīng)過灌胃入血發(fā)揮作用,參枝苓口服液髓鞘保護作用可能與肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍藥苷這4種成分密切相關。3.體外細胞實驗Aβ42可以誘導OLN-93少突膠質細胞引起損傷,100μMAβ42孵育細胞16h以及1μM、10μM和100μM的Aβ42孵育細胞24h和48h后可以明顯降低細胞活力。同時,1～100μM的Aβ42孵育細胞24h,細胞的損傷率明顯增加。1～100μM的Aβ42孵育24h可以對細胞形態(tài)造成破壞,引起細胞固縮,碎裂,死亡。并且,Aβ42孵育24h可以顯著升高OLN-93細胞的凋亡水平。用CCK-8法篩選參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊的安全劑量、給藥時間范圍結果顯示,1%～20%濃度的參枝苓口服液含藥血清孵育3～48h對正常OLN-93細胞不具有細胞毒性,甚至16%和20%濃度的參枝苓口服液含藥血清孵育24h和48h可以顯著提高正常OLN-93細胞的細胞活力。多奈哌齊對正常OLN-93細胞的安全劑量及時間為:孵育 3h（0.01μM,0.1μM,1 μM,10μM,100μM）;孵育 24h（0.01 μM,0.1 μM,1μM,10μM,100μM）;孵育 48h（0.01 μM,0.1μM,1 μM,10μM）。CCK-8法篩選參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊的有效劑量、給藥時間范圍,16%,20%參枝苓口服液含藥血清孵育24h及48h。1 μM,10μM和100μM多奈哌齊孵育3h或24h;0.1μM,1μM和10μM多奈哌齊孵育48h。Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞,與體內動物實驗一致,表現(xiàn)為Aβ42明顯下調少突膠質細胞髓鞘相關蛋白MBP、PLP、MAG和MOG的表達,并且下調MBP和PLP的mRNA表達水平,而參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊干預后可以明顯逆轉這些蛋白和mRNA的表達水平。另一方面,Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞還表現(xiàn)為引起PI3K/Akt-mTOR信號通路的異常。Aβ42不僅可以下調PI3K,Akt及mTOR的蛋白和mRNA表達水平,還可以明顯下調p-PI3K,p-Akt及p-mTOR的蛋白表達水平,而參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊干預后可以明顯逆轉這些蛋白和mRNA的表達水平。參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊對Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞的保護作用可以被PI3K/Akt-mTOR信號通路的抑制劑完全逆轉,具體表現(xiàn)為,無論是使用LY294002,Rapamycin還是聯(lián)合使用LY294002與Rapamycin都可以完全逆轉參枝苓口服液含藥血清和多奈哌齊上調MBP的能力。CHIP實驗顯示:Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞后組蛋白H3乙?；缴摺６嗄芜啐R和參枝苓口服液含藥血清下調組蛋白H3乙?；?。同時,Aβ42損傷OLN-93少突膠質細胞后,更多的基因MBP發(fā)生了組蛋白H3乙?；?。多奈哌齊和參枝苓口服液含藥血清可以下調組蛋白H3乙?；腗BP基因水平。脂質代謝結果顯示:正常組的CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS顯著高于模型組。模型組的Cer、DG、SM和TG顯著高于正常組。兩組Cerp、Hex2Cer、HexCer和Sphingosine含量均等。多奈哌齊的Cer、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS顯著高于模型組。模型組的SM和TG明顯高于多奈哌齊組。參枝苓口服液的Cer、DG、CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS、SM顯著高于模型組。模型組的TG明顯高于參枝苓口服液組。結論參枝苓口服液具有改善損傷髓鞘的作用,同時參枝苓口服液含藥血清能保護Aβ42損傷的少突膠質細胞進而維持髓鞘完整性而防治早期AD。參枝苓口服液的髓鞘保護作用與PI3K/Akt-mTOR信號通路、表觀遺傳調控及脂質代謝密切相關。首先,參枝苓口服液可能通過上調PI3K,Akt及mTOR mRNA的水平,引起PI3K,Akt及mTOR蛋白的表達水平上調,增加PI3K,Akt及mTOR的磷酸化,增強PI3K/Akt-mTOR信號通路的活性,從而發(fā)揮少突膠質細胞及髓鞘保護作用。其次,參枝苓口服液通過下調組蛋白H3乙?；?、下調組蛋白H3乙酰化的MBP基因水平從而保護少突膠質細胞。再者,參枝苓口服液通過上調CL、PA、PC、PE、PG、PI、PS的含量,下調TG含量,調整脂質代謝紊亂從而保護少突膠質細胞。最后,參枝苓口服液髓鞘保護作用的物質基礎則可能與肉桂酸、甘草酸、甘草苷和芍藥苷這4種成分密切相關。
余超超[5]（2020）在《預電針調控中縫背核GSK3 β/mTOR通路防治AD樣大鼠認知損傷的表觀遺傳學機制研究》文中研究表明目的本研究結合國際阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）研究日趨重在防治的主流研究趨勢,結合衰老、表觀遺傳修飾與AD病理發(fā)生發(fā)展的高度相關性,以中縫背核GSK3β/m TOR信號通路介導的神經(jīng)原纖維纏結的形成和自噬清除過程為切入點,旨在探討預針刺對D-半乳糖誘導的AD樣病理模型大鼠認知功能的影響,初步闡明預針刺防治AD樣病理大鼠認知損傷的效應及表觀遺傳學作用機制,以期為促進、推廣針灸“治未病”防治AD提供科學的實驗依據(jù)。方法3月齡Sprague Dawley雄性大鼠72只,隨機分為正常組、模型組、預電針+抑制劑組、抑制劑組、預針刺組、預電針組,每組12只。各組大鼠在相同的環(huán)境下飼養(yǎng),除正常組外,其余各組予D-半乳糖（120mg/kg/天）連續(xù)腹腔注射7周。預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組大鼠自造模第一日起予針刺百會、腎俞干預。百會穴向前平刺3-5mm,腎俞穴向脊柱方向斜刺3-5mm,接上HANS-200A型電針治療儀,一對導線分別接百會和腎俞穴,左右側腎俞隔日交替使用。電針頻率50Hz,電流1m A,以穴位局部顫動為佳,留針20min,每日1次,共治療7周。預針刺組不接電針儀。另外,預電針+抑制劑組、抑制劑組在造模的第7周,加予DNA甲基轉移酶抑制劑5-aza-2’-deoxycytidine處理（腹腔注射給藥,0.4mg/kg/天）。正常組、模型組在其他組干預時進行相同的抓取捆綁固定。各組大鼠干預結束后進行開放曠場實驗、Morris水迷宮實驗等行為學檢測。行為學實驗結束后進行新鮮海馬、中縫背核組織取材和灌注取材并進行指標檢測。應用透射電鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元微管情況、突觸后致密帶厚度和突觸間隙寬度;應用高爾基染色法觀察海馬CA1區(qū)樹突棘密度;應用Western-Blot法檢測中縫背核GSK3β、GSK3β-p Tyr216、GSK3β-p Ser9、m TOR、m TOR-p S2448、LC3I/LC3II、Tau-5、Taup S262、PHF-1、DNMT1的蛋白表達水平,海馬Tau-5、Tau-p S262、PHF-1的蛋白表達水平;應用免疫組化法檢測中縫背核PHF-1的表達及定位,應用免疫熒光檢測中縫背核DNMT1、GSK3β的表達及定位;應用RT-PCR法檢測中縫背核GSK3βm RNA表達水平;應用重亞硫酸鹽測序法檢測中縫背核GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島的甲基化水平。結果1.預電針和預針刺均能夠改善D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠的認知損傷,且預電針的保護效應強于預針刺（1）曠場實驗結果:模型組大鼠的運動距離、直立次數(shù)和中央?yún)^(qū)域停留時間較之正常組均明顯下降（P<0.01）,與模型組相比,DNMT1抑制劑可加重此抑郁樣行為（P<0.01）,而預電針+DNMT1抑制劑組、預電針組大鼠的抑郁樣行為卻得到明顯緩解（P<0.01）。另外,預電針組大鼠的運動距離、直立次數(shù)和中央?yún)^(qū)域停留時間均顯著高于預電針+DNMT1抑制劑組（P<0.01）。同時,預針刺組大鼠的運動距離、直立次數(shù)和中央?yún)^(qū)域停留時間高于模型組（P<0.01）但均低于預電針組（P<0.05;P<0.01）,說明預電針防治D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠抑郁情緒的效應強于預針刺。（2）Morris水迷宮實驗結果:與正常組相比,模型組大鼠的逃避潛伏期顯著延長（P<0.01）,抑制劑組的逃避潛伏期較之模型組顯著延長（P<0.01）,其他干預組預電針+抑制劑組、預針刺組和預電針組的逃避潛伏期較之模型組均顯著減短（P<0.01）。同時,預電針組大鼠的逃避潛伏期較預針刺組短（P<0.01）?？臻g探索實驗中,與正常組相比,模型組在目標象限探索時間顯著降低（P<0.01）。干預結束后,與模型組相比,預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組大鼠在目標象限中的探索時間均延長（P<0.01）,且其運動軌跡亦主要集中分布在目標平臺周圍,而抑制劑組大鼠在目標象限中的探索時間較模型組顯著降低（P<0.01）。預電針干預較預針刺干預的保護效應更佳。2.預電針、預針刺均能夠改善D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠海馬CA1區(qū)的突觸損傷和神經(jīng)元微管損傷,且預電針的保護效應強于預針刺（1）樹突棘高爾基染色結果:與正常組相比,其余大鼠海馬CA1區(qū)樹突棘密度顯著降低（P<0.01）;與模型組相比,抑制劑組的樹突棘密度顯著降低（P<0.01）,而預電針+抑制劑組大鼠海馬CA1區(qū)的樹突棘密度與模型組之間無統(tǒng)計學差異變化。同時,預針刺組和預電針組均能升高AD樣大鼠海馬CA1區(qū)的樹突棘密度（P<0.05,P<0.01）,且預電針組大鼠的樹突棘密度較預針刺要高（P<0.01）。（2）突觸后致密帶厚度和突觸間隙結果:各組大鼠海馬CA1區(qū)的突觸間隙寬度均無統(tǒng)計學差異變化。而在影響突觸后致密帶厚度方面,與正常組相比,模型組大鼠海馬CA1區(qū)的突觸后致密帶厚度顯著減小（P<0.01）,抑制劑組的突觸后致密帶厚度較模型組顯著降低（P<0.01）。與模型組相比,預針刺、預電針干預能夠提高突觸后致密帶厚度（P<0.01）,且預電針+抑制劑能逆轉抑制劑的突觸損傷效應,提高突觸后致密帶厚度（P<0.01）。但是,預針刺組和預電針組大鼠海馬CA1區(qū)的突觸后致密帶厚度變化差異無統(tǒng)計學意義。（3）神經(jīng)元微管結果:正常組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元軸突內微管排列緊密、致密,成交叉致密網(wǎng)狀結構,微管無異常斷裂現(xiàn)象。模型組大鼠CA1區(qū)神經(jīng)元軸突內微管稀疏,以斷裂形式散在分布,可見自噬體存在。抑制劑組大鼠神經(jīng)元軸突內微管固縮,微管排列雜亂無章,呈云絮樣分布,線粒體固縮變性,可見自噬體。預電針+抑制劑組大鼠神經(jīng)元軸突內微管分布稀疏,但較抑制劑組、模型組致密、微管長度較長,無云絮樣分布。預針刺組和預電針組大鼠CA1區(qū)神經(jīng)元軸突內微管致密、排列均勻,無明顯異常斷裂現(xiàn)象,可見自噬體分布。3.預電針、預針刺均能抑制AD樣病理大鼠中縫背核GSK3β/m TOR信號通路和NFTs的沉積,但預電針僅在抑制tau蛋白磷酸化效應上強于預針刺（1）中縫背核NFTs免疫組化結果:與正常組相比,模型組大鼠NFTs水平升高（P<0.01）。與模型組比較,預針刺組、預電針組大鼠NFTs水平均降低（P<0.01）。抑制劑組和模型組比較,NFTs水平顯著升高（P<0.01）,而預電針+抑制劑組大鼠NFTs水平較之模型組顯著下降（P<0.01）。另外,預針刺組和預電針組大鼠NFTs水平差異無統(tǒng)計學意義。（2）中縫背核、海馬tau蛋白磷酸化水平結果:與正常組比較,模型組大鼠海馬、中縫背核tau-5,PHF-1和tau-p S262相對表達量顯著升高（P<0.01）。較之模型組,預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組tau-5,PHF-1和tau-p S262相對表達量顯著降低（P<0.01）但仍高于正常組（P<0.01）,而抑制劑組tau-5,PHF-1和tau-p S262相對表達量與模型組之間差異無統(tǒng)計學意義且仍高于正常組（P<0.01）。另外,預電針較預針刺更能顯著抑制tau蛋白異常過度磷酸化（P<0.05或P<0.01）。（3）中縫背核GSK3β/m TOR通路相關蛋白結果:與正常組比較,模型組GSK3β、GSK3β活性位點GSK3β-p Tyr216相對表達量顯著升高（P<0.01）,GSK3β抑制位點GSK3β-p Ser9相對表達量顯著降低（P<0.01）。較之模型組,預針刺組、預電針組大鼠中縫背核區(qū)GSK3β、GSK3β-p Tyr216的相對表達量顯著降低（P<0.05或P<0.01）但仍高于正常組,GSK3β-p Ser9相對表達量顯著升高（P<0.01）但仍低于正常組。抑制劑組大鼠GSK3β、GSK3β-p Tyr216的相對表達量較之模型組差異無統(tǒng)計學意義,但GSK3β-p Ser9的相對表達量卻顯著降低（P<0.01）。同時,與模型組比較,預電針+抑制劑干預能顯著下調中縫背核區(qū)GSK3β、GSK3β-p Tyr216水平（P<0.01）但仍高于正常組,而GSK3β-p Ser9的相對表達量差異卻無統(tǒng)計學差異。另外,預針刺和預電針抑制GSK3β活性的作用大小無統(tǒng)計學差異。與正常組相比,模型組中縫背核區(qū)m TOR,m TOR活性位點m TORp S2448相對表達量顯著升高（P<0.01）,LC3I/LC3II比值顯著升高（P<0.01）。較之模型組,預針刺組、預電針組大鼠m TOR、m TORp S2448相對表達量顯著降低（P<0.01）,LC3I/LC3II比值顯著降低（P<0.01）。另外,較之預電針組,預針刺組m TOR、m TOR-p S2448相對表達量升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組相比,抑制劑組大鼠m TOR、m TOR-p S2448相對表達量差異無統(tǒng)計學意義,但預電針+抑制劑組干預能夠上調m TOR、m TOR-p S2448相對表達量（P<0.01或P<0.05）。4.預電針、預針刺均能夠降低AD樣病理大鼠中縫背核GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島的甲基化水平并抑制GSK3β基因的轉錄及表達,但預電針僅在抑制GSK3β基因轉錄的效應上強于預針刺（1）中縫背核DNMT1 WB結果:與正常組相比,模型組大鼠中縫背核DNA甲基轉移酶DNMT1相對表達量顯著降低（P<0.01）。較之模型組,DNMT1抑制劑組DNMT1相對表達量顯著降低（P<0.05）,預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組大鼠中縫背核區(qū)DNMT1相對表達量顯著升高（P<0.05或P<0.01）但仍低于正常組（P<0.01或P<0.05）。另外,預電針對DNMT1抑制劑的阻斷效應要強于預針刺（P<0.05）。（2）中縫背核DNMT1免疫熒光結果:與正常組相比,模型組大鼠DNMT1陽性細胞率顯著降低（P<0.01）。與模型組相比較,抑制劑組DNMT1陽性細胞率顯著降低（P<0.05）,而預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組DNMT1陽性細胞率顯著升高（P<0.01）但仍低于正常組（P<0.01）,且預電針對DNMT1抑制劑的阻斷效應要強于預針刺（P<0.05）。（3）中縫背核GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島的甲基化水平結果:與正常組相比,模型組大鼠GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平顯著下降（P<0.01）。與模型組比較,抑制劑組大鼠GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平顯著下降（P<0.05）,而預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組大鼠GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平顯著升高（P<0.05或P<0.01）,但仍低于正常組水平（P<0.01）。預針刺和預電針組大鼠GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平差異無統(tǒng)計學差異。另外,通過對GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化位點比較分析發(fā)現(xiàn),位點118、215、284、26、57、221、205等位點為針刺效應靶點。（4）中縫背核GSK3βRT-PCR結果:與正常組相比,模型組大鼠GSK3βm RNA相對表達量顯著升高（P<0.01）,說明D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠中縫背核區(qū)GSK3β基因轉錄水平升高。與模型組比較,抑制劑組大鼠GSK3βm RNA相對表達量顯著升高（P<0.05）,而預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組GSK3βm RNA相對表達量顯著降低（P<0.01）,但仍高于正常組水平（P<0.01）,且預電針較預針刺干預更能顯著降低GSK3βm RNA相對表達量（P<0.01）。（5）中縫背核GSK3β免疫熒光結果:與正常組相比,模型組大鼠GSK3β陽性細胞率顯著升高（P<0.01）。與模型組相比較,抑制劑組GSK3β陽性細胞率無統(tǒng)計學差異,而預電針+抑制劑組、預針刺組、預電針組GSK3β陽性細胞率顯著降低（P<0.05或P<0.01）但仍高于正常組（P<0.01或P<0.05）。預針刺組和預電針組間中縫背核區(qū)GSK3β陽性細胞率差異無統(tǒng)計學意義。結論:1.預電針和預針刺均能夠改善D-半乳糖誘導的AD樣病理模型鼠的抑郁情緒和空間學習記憶能力,且預電針的保護效應較之預針刺佳。通過抑制NFTs沉積、減輕神經(jīng)元微管損傷和突觸功能障礙可能是預電針、預針刺防治AD樣病理模型鼠認知損傷的重要機制之一。2.預電針和預針刺均能夠通過抑制D-半乳糖誘導的AD樣病理模型鼠中縫背核GSK3β/m TOR通路,從NFTs的生成和自噬清除兩方面途徑抑制中縫背核NFTs的沉積,且預電針較預針刺抑制tau蛋白過度磷酸化的效應強,但在促進NFTs自噬清除的效應上無差異。3.預電針和預針刺均能夠上調D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠中縫背核區(qū)GSK3β基因啟動子區(qū)Cp G島甲基化水平,抑制GSK3β基因的轉錄和表達,從而抑制GSK3β/m TOR通路,進而抑制NFTs的生成和促進其自噬清除。但預電針僅在抑制GSK3β基因轉錄的效應上強于預針刺,提示其他表觀遺傳修飾機制可能參與預電針對GSK3β基因轉錄的抑制作用。
鄭清[6]（2020）在《預電針調控PI3K/AKT/mTOR信號通路對AD樣大鼠學習記憶認知障礙的影響》文中研究指明目的:本實驗在針灸“治未病”理論指導下,探究電針百會、腎俞穴對D-半乳糖誘導的阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）樣大鼠學習記憶和認知障礙的影響,并進一步研究其作用機制是否通過調控自噬相關通路PI3K/AKT/mTOR軸,誘導自噬發(fā)生,促進海馬神經(jīng)元內神經(jīng)原纖維纏結（neurofibrillary tangles,NFTs）清除,減輕神經(jīng)突觸損傷,從而改善阿爾茨海默?。ˋD）樣大鼠學習認知能力,為促進、推廣針灸“治未病”防治AD提供科學的實驗依據(jù)。方法:將48只雄性SD大鼠隨機分為空白對照組、模型組、電針組和假電針組,每組12只。除空白對照組外,其余各組予D-半乳糖120mg/kg/d連續(xù)腹腔注射7周以建立AD樣病理模型。電針組、假電針組于每日腹腔注射后針刺“百會”、“腎俞”,并連接電針治療儀,每次20min,其中電針組刺入穴位后通電,假電針組僅刺入皮膚且不通電。干預結束后,采用Morris水迷宮和開放曠場評估各組大鼠的學習認知能力,透射電鏡觀察海馬區(qū)突觸數(shù)密度,免疫組化觀察海馬區(qū)PHF-1表達水平,Western blot檢測海馬區(qū)自噬相關蛋白PI3K、AKT、P-AKT、mTOR表達水平。結果:1.預電針對各組大鼠行為學的影響在Morris水迷宮定位航行實驗中,第1天各組大鼠逃避潛伏期對比差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）,但隨著訓練天數(shù)的增加其逃避潛伏期均有所降低。與空白對照組第2-5天同時間相比,模型組和假電針組大鼠逃避潛伏期顯著較長（P<0.01）;電針組第2天逃避潛伏期差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）、第3天有統(tǒng)計學意義（P<0.05）、第4-5天有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與模型組第2-5天同時間比較,電針組逃避潛伏期明顯縮短（P<0.01）,假電針組與其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠第2-5天同時間逃避潛伏期顯著縮短（P<0.01）。在Morris水迷宮空間探索實驗中,與空白對照組相比,模型組和假電針組經(jīng)過原平臺象限時間較長,差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01）;電針組和其比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組相對比,電針組大鼠經(jīng)過原平臺象限時間比率明顯增加（P<0.01）;假電針組與其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠經(jīng)過原平臺象限的時間顯著延長（P<0.01）。在曠場實驗中,與空白對照組相比,模型組和假電針組大鼠運動距離,直立次數(shù)和中心區(qū)域運動時間有明顯增加（P<0.01）,差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01）;電針組和其比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組相對比,電針組大鼠運動距離,直立次數(shù)和中心區(qū)域運動時間比率都有明顯增加（P<0.01）;假電針組與其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠以上指標均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。2.預電針對各組大鼠海馬突觸數(shù)密度和突觸形態(tài)的影響與空白對照組相比,模型組與假電針組大鼠海馬區(qū)突觸數(shù)密度明顯較少（P<0.01）;電針組和其比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與模型組相比,電針組大鼠海馬區(qū)突觸數(shù)密度明顯較高（P<0.01）;假電針組與其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠突觸數(shù)密度明顯增高（P<0.01）。模型組大鼠海馬區(qū)出現(xiàn)神經(jīng)元突觸結構融合、后膜致密物質稀疏,前后膜界限不清,完整突觸數(shù)量減少的現(xiàn)象;電針組海馬區(qū)病理形態(tài)學顯示優(yōu)于模型組,電針組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元突觸結構恢復近正常水平。3.各組大鼠海馬區(qū)PHF-1的表達與空白對照組相比,模型組與假電針組大鼠海馬區(qū)PHF-1表達水平明顯升高（P<0.01）;電針組和其比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與模型組相比,電針組大鼠海馬區(qū)PHF-1表達水平明顯降低（P<0.01）;假電針組與其差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠PHF-1陽性表達降低（P<0.01）。4.各組大鼠海馬PI3K、AKT、P-AKT、mTOR表達比較與空白對照組相比,模型組與假電針組大鼠海馬區(qū)PI3K、AKT、P-AKT、mTOR的表達水平均明顯增多（P<0.01）;電針組以上蛋白表達與其比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）,假電針組與其比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與模型組相比,電針組大鼠海馬區(qū)PI3K、AKT、P-AKT、mTOR表達水平均明顯降低（P<0.01）;假電針組PI3K的表達與模型組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,其余指標差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與假電針組相比,電針組大鼠自噬相關蛋白表達降低（P<0.01）。結論:1.預電針可以改善AD樣病變模型大鼠的空間學習記憶能力和認知功能。2.預電針可以改善AD樣病變模型大鼠海馬區(qū)突觸損傷程度,促使突觸數(shù)密度增加,促進突觸再生,說明預電針可能通過改善海馬區(qū)突觸的形態(tài)學結構,提升AD病理模型大鼠的學習與認知能力。3.預電針可以通過抑制AD樣病變模型大鼠海馬區(qū)NFTs的病理性沉積,減輕突觸毒性,改善大鼠的學習認知功能。4.預電針可以下調AD樣病變模型大鼠海馬區(qū)自噬相關蛋白PI3K、AKT、P-AKT、mTOR的表達水平,誘導自噬的發(fā)生。說明預電針治療能改善AD樣大鼠的學習記憶和認知障礙,其機制可能是通過調控PI3K/AKT/mTOR信號通路,誘導自噬,促進NFTs清除,減輕神經(jīng)突觸損傷,進而改善學習記憶認知功能,從而達到防治AD的作用。
吳東南[7]（2020）在《基于突觸可塑性與神經(jīng)炎癥研究酸棗仁湯改善睡眠剝奪大鼠學習記憶的機制》文中研究說明目的:本課題理論研究部分通過總結中醫(yī)對失眠、學習記憶障礙與酸棗仁湯的認識,旨在為酸棗仁湯防治失眠引起的學習記憶障礙提供理論依據(jù);實驗研究部分通過構建慢性睡眠剝奪大鼠模型,并予酸棗仁湯干預,觀察干預前后大鼠學習記憶功能、突觸可塑性、NLRP3炎性小體等的變化,旨在明確酸棗仁湯介導突觸可塑性與神經(jīng)炎癥改善大鼠學習記憶的作用機制。方法:1.理論部分:基于中醫(yī)古籍與近年來的文獻資料,總結中醫(yī)對失眠病癥、學習記憶障礙病名、病因、病機的認識,對失眠與學習記憶障礙之間的關聯(lián)進行闡述,并結合酸棗仁湯的組方分析和臨床實驗研究,為酸棗仁湯防治失眠引起的學習記憶障礙提供理論依據(jù)。2.實驗部分:將60只SD雄性大鼠隨機分為5組,即正常對照組（Normal control Group,NG）、模型組（Model Group,MOD）、艾司唑侖組（ESTazolam Group,EST）、酸棗仁湯低劑量組（Suanzaoren Decoction Low-dose Group,SZRDL）和酸棗仁湯高劑量組（Suanzaoren Decoction High-dose Group,SZRDH）,每組12只。NG組常規(guī)飼養(yǎng),不造模,其他4組通過多平臺水環(huán)境法建立慢性睡眠剝奪模型。除NG組外,其他4組每天連續(xù)睡眠剝奪12h,持續(xù)剝奪30d。造模和給藥同時進行,NG組和MOD組按照10mL·kg-1·d-1的劑量灌胃純水,EST組按照0.54mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的劑量灌胃艾司唑侖藥液,SZRDL組按照4.59g·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的劑量灌胃酸棗仁湯藥液,SZRDH組按照18.36mg·kg-1·d-1,10mL·kg-1·d-1的劑量灌胃酸棗仁湯藥液。觀察造模及給藥期間各組大鼠的精神、飲食、攝水及體重等一般情況。灌胃結束之后進行以下的實驗:通過Morris水迷宮實驗與跳臺實驗評價各組大鼠的學習記憶能力;采用自主活動箱觀察各組大鼠的自主活動的能力;采用尼氏染色法和高爾基染色法觀察各組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元突觸的病理形態(tài)變化;通過免疫熒光和免疫組化觀察突觸可塑性關鍵蛋白PSD95、SYP及突觸信號傳遞的關鍵蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表達水平;采用ELISA檢測血清和海馬中IL-1β和TNF-α的表達水平;采用Real time-PCR檢測海馬中IL-1β、TNF-αmRNA表達水平;采用Real time-PCR、免疫組化和western bolt檢測NLRP3炎癥小體通路中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18關鍵因子的蛋白和mRNA表達水平。結果:1.理論研究結果失眠屬于中醫(yī)“不寐”病癥范疇,失眠的中醫(yī)病因復雜繁多,以情志異常、飲食不節(jié)、外淫邪氣等多見,這些病因引起陰陽失調、臟腑功能失調、氣血虧虛進而導致失眠病癥。學習記憶障礙屬于中醫(yī)“健忘”范疇,失眠與學習記憶障礙關系密切,一方面,陰血虧虛,神失所養(yǎng)是兩者重要的共同病機;另一方面,失眠可引起學習記憶損害。因此,養(yǎng)血安神法是防治失眠與學習記憶損害重要的治法。酸棗仁湯作為養(yǎng)血安神法的代表方劑,近年來研究顯示酸棗仁湯不僅能改善睡眠,減輕焦慮抑郁,還能改善學習記憶,為酸棗仁湯防治失眠引起的學習記憶損害提供理論依據(jù)。2.實驗一結果2.1各組大鼠一般情況:睡眠剝奪及給藥期間,NG組大鼠一般情況良好,毛發(fā)致密有光澤,尾巴、爪子顏色色紅有光澤,精神良好,反應靈敏,攝食、飲水和二便無明顯異常。與NG組比較,MOD組大鼠在睡眠剝奪前3天,攝食稍有增加,煩躁易激怒,但此后出現(xiàn)攝食和飲水明顯減少,毛發(fā)無光澤易脫落,尾巴、爪子色澤偏淡無光澤,精神萎靡,神情呆滯,反應遲鈍,時有落水現(xiàn)象。與MOD組比較,SZRDL組和SZRTH組大鼠攝食和飲水明顯增加,毛發(fā)脫落較少,精神較振奮,警覺力增加。但EST組大鼠表現(xiàn)有精神萎靡、反映遲鈍、嗜睡等趨向。2.2各組大鼠體重變化:睡眠剝奪及給藥期間,NG組大鼠體重迅速增加。MOD組大鼠體重略有增加,但其增幅明顯低于NG組大鼠。EST組、SZRDL組和SZRTH組大鼠體重也有增加,但其增幅明顯低于NG組大鼠。與NG組大鼠比較,MOD組大鼠體重偏低,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與MOD組大鼠比較,EST組、SZRDL組和SZRTH組大鼠體重有所增加,差異也沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）2.3 Morris水迷宮實驗結果:定位航行試驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠上平臺潛伏期和游泳總路程明顯增加（P<0.01）。與MOD比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠上平臺潛伏期和游泳總路程均有不同程度減少（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠上平臺潛伏期和游泳總路程也有減少,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠上平臺潛伏期和游泳總路程均有減少,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。空間探查試驗:與NG組比較,MOD組大鼠穿越平臺的次數(shù)與目標象限時間顯著減少（P<0.01）,而第1次抵原平臺時間則明顯增加（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠穿越平臺次數(shù)和目標象限時間有所增加（P<0.01,P<0.05）,而第1次抵原平臺時間則有所減少（P<0.05）;與MOD組比較,EST組大鼠大鼠穿越平臺次數(shù)和目標象限時間增加、第1次抵原平臺時間則減少,但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠穿越平臺次數(shù)、目標象限時間和第1次抵原平臺時間均有變化,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.4跳臺實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠出錯次數(shù)明顯增加（P<0.01）,而潛伏期則明顯減少（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠出錯次數(shù)均有不同程度減少（P<0.01,P<0.05）,而潛伏期則有不同程度增加（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠大鼠出錯次數(shù)減少、潛伏期增加,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠出錯次數(shù)和潛伏期均有變化,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.5自主活動實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠活動時間和運動距離顯著增加（P<0.01）,靜止時間有所減少（P<0.05）。與MOD組比較,EST組、SZRDL組和SZRDH組大鼠活動時間和運動距離減少（P<0.01,P<0.05）,靜止時間增加（P<0.01,P<0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠運動距離、活動時間和靜止時間均有變化,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3.實驗二結果3.1尼氏染色結果:NG組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元清晰完整,排列緊密,細胞結構完整,細胞內核仁清晰,胞質內可見豐富的尼氏小體。MOD組大鼠神經(jīng)元排列欠規(guī)則,細胞周圍間隙增寬,胞質內尼氏小體明顯減少。而給予睡眠剝奪大鼠酸棗仁湯后,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列好轉,尼氏體減少得以改善。但給予睡眠剝奪大鼠艾司唑侖,EST組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列紊亂和尼氏體數(shù)量減少情況改善不明顯。通過對各組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量統(tǒng)計,我們發(fā)現(xiàn)MOD組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3.2高爾基染色結果:NG組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元樹突棘數(shù)量豐富且密度較高。與NG組比較,MOD組大鼠CA3區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度明顯減少（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度也有所增加,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3.3免疫組化實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬CA3區(qū)NR1、NR2A和NR2B的IOD值明顯減少（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)NR1、NR2A和NR2B的IOD值有所增加（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬CA3區(qū)NR1、NR2A和NR2B的IOD值變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)NR1、NR2A和NR2B的IOD值變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。3.4免疫熒光實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬CA3區(qū)PSD95和SYP的綠色熒光強度和熒光數(shù)量明顯減少。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)PSD95和SYP的綠色熒光強度和熒光數(shù)量有所增加,而EST組大鼠海馬CA3區(qū)PSD95和SYP的綠色熒光強度和熒光數(shù)量變化不明顯。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬CA3區(qū)PSD95和SYP的綠色熒光強度和熒光數(shù)量變化不明顯。4.實驗三結果4.1ELISA實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠血清和海馬中IL-1β、TNF-α表達量明顯升高（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠血清和海馬中IL-1β、TNF-α表達量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠血清和海馬中IL-1β、TNF-α表達量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠血清和海馬中IL-1β、TNF-α的表達量變化也不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。4.2Real time-PCR實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬中IL-1β、TNF-αmRNA表達量明顯升高（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬中IL-1β、TNF-αmRNA表達量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬中IL-1β、TNF-αmRNA表達量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬中IL-1β、TNF-αmRNA的表達量變化也不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。5.實驗四結果5.1Real time-PCR實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表達量明顯升高（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表達量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表達量也有所減少,但差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-18 mRNA表達量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。5.2免疫組化實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值明顯升高（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的IOD值變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。5.3Western bolt實驗結果:與NG組比較,MOD組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表達量明顯升高（P<0.01）。與MOD組比較,SZRDL組和SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表達量表達量均有不同程度降低（P<0.01,P<0.05）,EST組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表達量有所減少,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與SZRDL組比較,SZRDH組大鼠海馬中NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表達量變化不明顯,差異沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論:1.理論研究結論:陰血虧虛,神失所養(yǎng)是失眠與學習記憶障礙重要的共同病機,酸棗仁湯作為養(yǎng)血安神法的代表方劑是防治失眠與學習記憶障礙的重要方藥。2.慢性睡眠剝奪可引起大鼠出現(xiàn)學習記憶障礙和焦慮樣行為,酸棗仁湯可以改善睡眠剝奪引起的學習記憶障礙和焦慮樣行為;3.睡眠剝奪可以導致大鼠海馬神經(jīng)元突觸受損,酸棗仁湯則可通過調節(jié)突觸可塑性關鍵蛋白PSD95、SYP及突觸信號傳遞關鍵蛋白NMDAR1（NR1）、NMDAR2A（NR2A）、NMDAR2B（NR2B）的表達水平以改善神經(jīng)元突觸損傷;4.睡眠剝奪可引起大鼠血清和海馬中出現(xiàn)炎性反應,酸棗仁湯可通過抑制IL-1β和TNF-α的表達水平減輕睡眠剝奪模型大鼠腦內神經(jīng)炎癥;5.酸棗仁湯可通過抑制NLRP3炎性小體通路,減輕神經(jīng)炎癥防治睡眠剝奪引起的學習記憶障礙和焦慮樣行為。
韓誠[8]（2019）在《從“腎腦相關”論衰老學習記憶功能減退的腦功能失衡機制》文中認為目的:研究衰老狀態(tài)下學習記憶功能減退在腦不同層次陰陽失衡的表現(xiàn)和發(fā)生機制,初步闡明地黃飲子對衰老模型小鼠海馬突觸可塑性的作用機制,為補腎健腦法提供現(xiàn)代生物學依據(jù)。方法:采用理論探討與實驗研究相結合的方法。1、理論探討:系統(tǒng)梳理中醫(yī)學和現(xiàn)代醫(yī)學對衰老及學習認知的認識,探討從腎論治衰老學習記憶功能減退的可能性。2、實驗研究:（1）實驗分組:設正常對照組、衰老模型組、地黃飲子（低、中、高劑量）組和鹽酸美金剛陽性藥物組共計6組。其中,以6月齡雄性SAMP8小鼠作為衰老動物模型,以同月齡雄性SAMR1小鼠為正常對照,其他各組采用同月齡雄性SAMP8小鼠并給予藥物干預。（2）給藥干預:各組動物正常飲食條件喂養(yǎng)至5月齡后,從第6個月開始地黃飲子（低、中、高劑量）組小鼠分別每天灌胃不同濃度的地黃飲子水煎液（7.51g/kg·d、15.02g/kg·d、30.04g/kg·d）,鹽酸美金剛組小鼠灌胃鹽酸美金剛混懸液（3.03mg/kg·d）,正常對照組和衰老模型組動物小鼠灌胃等量溶媒。各組動物每天灌胃給藥1次,連續(xù)1個月后,進行如下指標檢測。（3）學習記憶能力評價:采用Morris水迷宮和新物體識別實驗方法評價各組小鼠的空間學習能力、空間參考記憶力和新物體識別能力。（4）突觸結構可塑性檢測:采用透射電鏡技術觀察各組小鼠神經(jīng)元和突觸結構的形態(tài)變化。（5）突觸功能可塑性檢測:對各組小鼠海馬內“schaffer側枝-CA1區(qū)”突觸回路進行在體場電位記錄實驗,觀察LTP和LTD現(xiàn)象,評價突觸傳遞效率。（6）海馬神經(jīng)遞質檢測:采用酶聯(lián)免疫吸附實驗方法檢測各組小鼠海馬組織谷氨酸和γ-氨基丁酸含量的差異。（7）谷氨酸受體和鈣調素依賴性蛋白激酶II的檢測:采用蛋白免疫印跡法檢測各組小鼠海馬組織AMPAR2、NMDAR1、pNMDAR1、NMDA2A、pNMDA2A、NMDA2B、pNMDA2B、CaMKII、pCaMKII共9個蛋白的含量和磷酸化水平。結果:1.理論研究結果:基于“腎腦相關”理論,從經(jīng)絡聯(lián)系、精髓關系、元神、腎志與腦神的關系,以及陰陽變化5個方面探討了從腎論治衰老學習記憶功能減退的可能性;并且基于陰陽學說理論,認為現(xiàn)代腦科學相關研究成果都是陰陽之象,是對中醫(yī)陰陽理論的豐富和擴展,用陰陽的思維模式去認識腦具有可行性。2.實驗研究結果:（1）行為學檢測結果:Morris水迷宮檢測結果顯示,與正常對照組相比較,衰老模型組小鼠空間學習記憶能力顯著下降（P<0.05）;與衰老模型組相比,地黃飲子高劑量可以有效提升小鼠空間辨識和記憶提取能力,減少空間搜索時間（P<0.05）;新物體識別顯示,與正常對照組相比較,衰老模型組小鼠記憶力受損（P<0.05）;與衰老模型組相比,地黃飲子高、中劑量均能使小鼠準確區(qū)分被更換的物體（P<0.05）,并增加其對新物體辨識的時間（P<0.01）。（2）在體場電位記錄結果:快速老化的SAMP8小鼠的興奮性突觸后電位經(jīng)過200Hz的高頻刺激后增幅不明顯,LTP效應明顯低于相同月齡的抗老化SAMR1小鼠（P<0.001）,給予地黃飲子治療后,則可以有效增強模型小鼠的LTP效應（P<0.05）。而在2Hz的低頻刺激下,各組小鼠LTD的易化效應和EPSP的抑制程度具有明顯的差異。與6月齡的快速老化SAMP8小鼠相比,相同月齡的抗老化SAMR1小鼠LTD效應僅在低頻刺激后的小段時間內受到強化,隨著時間流逝,其LTD易化現(xiàn)象逐漸恢復,突觸后的興奮性電位逐漸恢復正常（P<0.001）;給予地黃飲子治療后,地黃飲子高劑量組小鼠的LTD效應也得到一定程度的恢復（P<0.05）。（3）透射電鏡檢測結果:通過透射電鏡我們可以觀察到,模型組小鼠的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細胞損傷、突觸間隙增大或消失,突觸前、后膜不清晰,突觸小泡減少,突觸后致密物質變薄;線粒體結構崩解,嵴斷裂或溶解。給予地黃飲子灌胃治療后,神經(jīng)元細胞器損傷減少,突觸結構得到修復。（4）ELISA檢測結果:衰老模型組小鼠海馬內Glu與GABA含量顯著增加（P<0.001）,經(jīng)過藥物治療后,各組小鼠海馬內Glu與GABA含量均有所降低,尤其是地黃飲子高劑量組的Glu與GABA含量降低最明顯（P<0.01）。（5）WB檢測結果:SAMP8模型小鼠海馬內AMPAR2、NMDAR1和NMDA2B的含量升高（P<0.05）,CaMKII含量降低（P<0.05）,pNMDAR1、pNMDA2A和pNMDA2B的含量增高（P<0.05）,pCaMKII含量降低（P<0.05）。運用地黃飲子治療后,中劑量地黃飲子可以有效降低NMDAR1的蛋白含量（P<0.01）;高劑量地黃飲子可以有效增加CaMKII的蛋白含量和磷酸化程度（P<0.05）,降低AMPAR2、NMDA2B和pNMDA2B的異常表達（P<0.05）。結論:1.海馬組織Glu和GABA含量增高、代謝失衡與衰老狀態(tài)小鼠學習記憶功能減退有關;2.海馬“schaffer側枝-CA1區(qū)”突觸回路的LTP/LTD效應失衡是衰老狀態(tài)下學習記憶功能減退的腦電生理層面陰陽失衡的機制;3.海馬神經(jīng)細胞內鈣離子超載是衰老狀態(tài)下腦電生理和氨基酸神經(jīng)遞質層面陰陽失衡的關鍵因素。4.補腎方劑地黃飲子可通過調節(jié)神經(jīng)細胞內鈣離子濃度,抑制鈣內流而易化神經(jīng)突觸可塑性,從而改善衰老小鼠的學習記憶功能。
彭靜[9]（2019）在《滌痰湯改善痰濁證老年MCI模型大鼠學習記憶及突觸可塑性的研究》文中提出目的本課題理論研究部分旨在從“痰邪為患”致“健忘”、“呆病”角度探討老年輕度認知功能障礙（mild cognitive impairment,MCI）的病因病機,闡明中醫(yī)經(jīng)典治痰古方“滌痰湯”以“健脾滌痰、益氣化濁、醒腦開竅”為基本治法,治療痰濁證老年MCI的理論依據(jù)。實驗研究部分通過構建痰濁證老年MCI大鼠模型,采用一般情況觀察、行為學、生物化學方法,旨在觀察和分析滌痰湯對模型大鼠痰濁證表現(xiàn)、學習記憶能力、脂代謝情況、氧化應激指標的影響;并進一步采用組織形態(tài)學、神經(jīng)電生理及蛋白檢測方法,旨在從突觸可塑性角度,探討和分析滌痰湯改善模型大鼠學習記憶障礙的可能機制。方法理論研究理論研究部分回顧和總結了祖國醫(yī)學對于MCI病名、病位、癥狀等的記載與認識,并著重從“痰邪為患”角度探討和分析了MCI病因、病機,歸納和分析了MCI的中醫(yī)基礎、臨床和中醫(yī)流行病學相關研究,結合“滌痰湯”組方分析和導師團隊前期研究,為“滌痰湯”從痰論治痰濁證老年MCI提供理論依據(jù)。實驗研究實驗研究分兩部分進行,采用SPF級雄性SD大鼠60只隨機分為老年對照組、模型組、西藥組、滌痰湯高劑量組及滌痰湯低劑量組,另設3月齡SPF級雄性SD大鼠12只為青年對照組。采用頸背部皮下注射D-半乳糖(50mg·kg-1)8周結合半高脂飼料喂食4周（前4周僅注射D-半乳糖,第5周起加喂半高脂飼料）的方法制備痰濁證老年MCI實驗動物模型。各組第5周起開始灌胃,連續(xù)4周,10 ml·kg-1,每日1次。西藥組給予鹽酸多奈哌齊,加水制成混懸液,0.9mg·kg-1;滌痰湯低、高劑量組給藥量分別按人體服用量1、2倍折算(折合成生藥量為4.275g·kg-1和8.55g·kg-1);其余3組（老年對照組、模型組、青年對照組）予等容積蒸餾水。前半部分實驗采用Morris水迷宮、穿梭箱實驗檢測評價各組大鼠學習記憶能力,通過生化分析儀檢測血脂水平,比色法測定海馬組織中T-AOC、GSH-PX含量,觀察和探討滌痰湯對模型大鼠學習記憶、脂代謝及氧化應激指標的影響。后半部分實驗采用Nissl染色法觀察和分析各組大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)量,Golgi染色法觀察和分析各組大鼠海馬組織樹突棘形態(tài)、數(shù)量及構成改變,神經(jīng)電生理方法檢測實驗各組海馬CA1區(qū)長時程增強效應,Western blot檢測SYP、PSD95、NR2B等突觸相關蛋白水平,從突觸可塑性角度,探討滌痰湯改善模型大鼠學習記憶障礙的可能機制。結果理論研究MCI歸屬中醫(yī)健忘、癡呆范疇,其病位在腦,發(fā)病關乎五臟,臨床表現(xiàn)以本虛標實,虛實兼雜為主要特點,“痰邪為患”致“呆”是其重要病機。無論是“呆病多痰”、“治痰即治呆”等中醫(yī)傳統(tǒng)理論,還是現(xiàn)有的中醫(yī)基礎、臨床和證候相關研究,均為從痰論治MCI提供了詳實的依據(jù)。滌痰湯從痰論治認知障礙,以健脾理氣化痰、益氣醒神開竅為基本大法,在基礎和臨床研究中均表現(xiàn)出較好的療效,滌痰湯組方中所有藥物均含有對認知功能有益的成分,可能通過彼此間的協(xié)同增效,發(fā)揮多靶向聯(lián)合作用,提升整體治療效果。實驗研究1.滌痰湯對痰濁阻竅型老年MCI模型大鼠學習記憶、脂代謝及氧化應激的影響:（1）一般情況:模型組大鼠表現(xiàn)出毛皮污穢,精神萎靡,嗜臥懶動,納差便溏等痰濁阻竅證型特征,滌痰湯對模型大鼠的痰濁證候具改善作用。（2）Morris水迷宮實驗:模型組定位航行逃避潛伏期明顯延長,空間探索實驗顯示首次穿臺耗時明顯延長,穿臺次數(shù)明顯減少,目標象限探索時間明顯減低,與對照組比較,有顯著性差異（P<0.01）;與模型組相比,中藥滌痰湯組與西藥鹽酸多奈哌齊組逃避潛伏期及首次穿臺耗時均明顯縮短,穿臺次數(shù)明顯增多,目標象限探索時間明顯延長（P<0.01或P<0.05）。（3）穿梭箱實驗:與對照組相比,模型組大鼠主動回避次數(shù)明顯減少、電擊次數(shù)明顯增多、主動回避潛伏期和電擊時間均明顯延長（P<0.01）;給藥后,與模型組比較,滌痰湯高、低劑量組、西藥組大鼠主動回避次數(shù)均顯著增多、電擊次數(shù)均顯著減少、主動回避潛伏期和電擊時間均顯著縮短（P<0.01或P<0.05）;滌痰湯高劑量組與西藥組相比,無顯著性差異（P>0.05）;滌痰湯高、低劑量組間相比,主動回避次數(shù)、電擊次數(shù)、電擊時間的改善有顯著性差異（P<0.05）。（4）血脂檢測:與對照組比較,模型組總膽固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）均增高（與青年對照組比較P<0.01,與老年對照組比較P<0.05）;與模型組比較,滌痰湯高劑量組TC、LDL-C、TG減低（P<0.05）,TG明顯減低（P<0.01）,滌痰湯低劑量組TG減低（P<0.05）,鹽酸多奈哌齊組無明顯變化（P>0.05）。（5）氧化應激指標T-AOC、GSH-PX含量檢測:與對照組相比,模型組大鼠海馬組織T-A0C及GSH-PX含量顯著下降（P<0.01）;與模型組相比,滌痰湯和鹽酸多奈哌齊均能顯著提高模型大鼠的海馬T-A0C及GSH-PX含量（P<0.01或P<0.05）。2.滌痰湯對痰濁型老年MCI模型大鼠突觸可塑性的影響:（1）Nissl染色:與對照組相比,模型組尼氏小體形態(tài)上變小,數(shù)量上減少,數(shù)據(jù)分析顯示神經(jīng)元數(shù)量明顯降低（P<0.01）;與模型組相比,滌高劑量組與西藥組神經(jīng)元數(shù)量增加,差異有顯著性（P<0.05）。（2）Golgi染色:模型組樹突棘形態(tài)不規(guī)則、排列松散、數(shù)量稀少,與老年對照組相比,樹突棘總數(shù)及蘑菇狀樹突棘數(shù)目均顯著減少（P<0.01）;滌痰湯高劑量組與西藥鹽酸多奈哌齊組樹突棘總數(shù)和蘑菇形態(tài)樹突棘數(shù)量均增加,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。（3）電生理LTP檢測:模型組大鼠無法順利誘導出穩(wěn)定的LTP,與對照組相比,LTP幅度低下,EPSP斜率下降明顯（P<0.01）;與模型組比較,高劑量滌痰湯組EPSP斜率和LTP幅度明顯增加（P<0.01）,西藥組、滌痰湯低劑量組變化不明顯（P>0.05）。（4）Western blot免疫印跡檢測:與對照組相比,模型組大鼠海馬組織突觸相關蛋白SYP、PSD95、NR2B表達均明顯降低（P<0.01）;與模型組相比,滌痰湯低劑量組和西藥鹽酸多奈哌齊PSD95表達明顯增加（P<0.01）,NR2B表達亦增加（P<0.05）;滌痰湯高劑量組PSD95、NR2B表達均明顯增加（P<0.01）,SYP表達亦增加（P<0.05）。結論1.MCI歸屬中醫(yī)健忘、癡呆范疇,其病位在腦,發(fā)病關乎五臟,“痰邪為患”是MCI發(fā)病的重要病機,從痰論治MCI有據(jù)可依,滌痰湯可能通過組方藥物的協(xié)同作用,對MCI發(fā)揮整體治療效果。2.D-半乳糖皮下注射結合半高脂餐復合造模方式成功構建了痰濁證型MCI模型,表現(xiàn)為:模型大鼠出現(xiàn)痰濁證候、空間學習記憶障礙和回避反應能力降低、脂代謝紊亂和氧化應激受損。3.滌痰湯能改善模型大鼠痰濁證候表現(xiàn)、可減輕模型大鼠的脂代謝紊亂和氧化應激損傷,改善模型大鼠的海馬依賴性學習記憶障礙。4.模型大鼠出現(xiàn)突觸可塑性受損的病理改變,表現(xiàn)為:海馬組織神經(jīng)元丟失、功能減退、突觸微結構和長時程增強效應受損、突觸相關蛋白表達降低。5.滌痰湯可能通過修復受損的海馬神經(jīng)元和突觸微結構損傷,增進長時程增強效應,上調突觸相關蛋白SYP、PSD95、NR2B表達,改善模型大鼠的突觸結構和功能損害,一定程度恢復模型大鼠受損的突觸可塑性,而發(fā)揮改善學習記憶障礙的作用。
盧夢晗[10]（2019）在《“通督啟神”法電針對AD小鼠海馬區(qū)小膠質細胞及TLR4通路的影響》文中進行了進一步梳理1目的和意義阿爾茨海默?。ˋD）是最常見的神經(jīng)退行性疾病,對當今老齡化社會人類健康產(chǎn)生了巨大的威脅,給社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。AD主要由淀粉樣蛋白β（Aβ）沉積,異常的Tau蛋白磷酸化和腦內神經(jīng)免疫炎性反應等原因引起。大量研究顯示,在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導下,電針療法在改善阿爾茨海默病患者臨床癥狀和在AD模型動物實驗研究中均顯現(xiàn)出一定的優(yōu)勢,本研究采用“通督啟神”法指導下的不同電針（脈沖電針和音樂電針）以及不同電針結合多奈哌齊對7月齡APPswe/PS1δE9轉基因小鼠進行干預,旨在探討其對于AD模型小鼠的行為學作用差異,并從小膠質細胞活化以及TLR4通路角度探討其發(fā)揮作用的可能機制。2研究方法7月齡APPswe/PS1δE9小鼠60只隨機分為6組,每組10只,分別為:AD模型組（M組）、藥物組（D組）、脈沖電針組（DZ組）、脈沖電針合藥物組（DZ+D組）、音樂電針組（YZ組）及音樂電針合藥物組（YZ+D組）。以7月齡相同遺傳背景的雄性C57BL6小鼠10只為正常對照組（N組）。N組:其他組干預時抓取一次,固定于自制鼠套,不做其他處理,1次/天;M組:同N組;D組:多奈哌齊溶液按體重以0.92 mg/kg標準灌胃,然后固定于自制鼠套,1次/天;DZ組:將小鼠固定于自制鼠套,選取小鼠百會穴（GV20）、印堂穴（GV29）、水溝穴（GV26）,其中百會向上、印堂穴向下平刺進針,進針深度為0.3 cm,脈沖電針正極連接百會穴處針柄,負極連接印堂處針柄,選擇疏密波,電流強度0.1 mA,頻率2/50 Hz,脈沖電針干預結束,取無菌針灸針快速點刺小鼠水溝穴,不留針不連接電針;DZ+D組:每天行脈沖電針干預,方法同DZ組,灌胃給藥方法同D組,連續(xù)15天;YZ組:取穴、針刺方法同DZ組,將音樂電針兩級連接小鼠百會、印堂穴處針柄,選擇“癡呆”音樂治療處方,強度以小鼠頭部輕輕顫動為標準;YZ+D組:每天行音樂電針干預,方法同YZ組,灌胃給藥方法同D組。以上干預,20min/次,1次/天,共計15天。15天干預結束后,將各組小鼠放于Morris水迷宮恒溫游泳池中進行可視平臺實驗,隨后開始進行為期5天的隱蔽平臺實驗和在隱蔽平臺實驗,結束后24小時內進行的定位航行實驗。采用HE染色方法觀察各組小鼠海馬區(qū)齒狀回組織結構和病理變化;利用免疫組織化學法標記海馬區(qū)小膠質細胞表面受體Iba1觀察小膠質細胞活化數(shù)量;采用免疫熒光雙標技術,觀察活化小膠質細胞表面蛋白CD11b和TLR4受體表達情況;運用免疫組織化學、Western blot（WB）和RT-PCR技術觀察并分析各組小鼠海馬區(qū)活化小膠質細胞關鍵通路中TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40的蛋白、mRNA相對表達情況。3研究結果3.1Morris水迷宮實驗結果:可視平臺實驗:各組小鼠逃避潛伏期和游泳速度均無明顯差異（p>0.05）;隱蔽平臺實驗;不同干預方式對各組小鼠的逃避潛伏期長短隨時間變化而變化（p<0.05）,第2-5天,M組逃避潛伏期高于N組（p（day 2-5）<0.05）;與M組相比,D組、DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組的逃避潛伏期縮短（均為p<0.05）,差異具有統(tǒng)計學意義。空間探索實驗:各組小鼠穿越平臺次數(shù)和目標象限（WS）停滯的時間占總游泳時間百分比（目標象限時間比）之間存在差異（均為p<0.05,）,具有統(tǒng)計學意義;M組的平臺穿越次數(shù)和目標象限時間顯著低于N組（p<0.01）;與M組相比,D組、DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組的平臺交叉數(shù)（均為p<0.05）和目標象限時間比增加（p<0.01）,有統(tǒng)計學意義;與D組相比,YZ+D組在目標象限停滯的時間增多,差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。3.2各組小鼠海馬區(qū)齒狀回組織形態(tài)、活化小膠質細胞數(shù)量蘇木精-伊紅（HE）染色后（圖1）,N組神經(jīng)元層次清晰,結構排列致密,神經(jīng)元形態(tài)大小正常,核仁清晰,核仁可見,細胞簇邊界清晰,胞漿呈淡紅色。M組的組織病理學形態(tài)與N組相比有明顯變化,神經(jīng)元細胞核固縮、核移位,細胞質和細胞核的邊界不明顯,神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞之間的細胞空間擴大,而海馬錐體神經(jīng)元變小組織結構松散,神經(jīng)、膠質細胞腫脹,出現(xiàn)廣泛的空泡變化,細胞排列紊亂;治療后,D組、DZ組、YZ組、DZ+D組和YZ+D組的病理變化有均所改善。免疫組化標記小膠質細胞表面受體（Iba1）結果顯示,N組小鼠海馬中Iba1標記的小膠質細胞數(shù)量較低,觀察到的小膠質細胞似乎處于靜止狀態(tài),細胞體較小,染色較淺,突起細長,M組小膠質細胞呈典型的激活狀態(tài),細胞體增大,細胞突起縮短,細胞形態(tài)呈圓形或阿米巴狀,Iba1陽性細胞在老年斑塊周圍聚集。各組小鼠海馬區(qū)活化小膠質細胞數(shù)量有顯著差異（p<0.01）;M組Iba1陽性細胞數(shù)也高于N組（p<0.01）;相比之下,D組、DZ組、YZ組、DZ+D組和YZ+D組的小膠質細胞多處于靜止狀態(tài),活化的小膠質細胞數(shù)量均低于M組（p均<0.01）;其中與D組比,DZ組（p<0.05）、YZ組（p<0.01）、DZ+D組（p<0.05）和YZ+D組（p<0.01）活化的小膠質細胞數(shù)量較少;另外,DZ組、YZ組、DZ+D組和YZ+D組活化小膠質細胞數(shù)量雖有差異,但無統(tǒng)計學意義。3.3各組小鼠TLR4通路相關蛋白、基因的表達水平利用激光共聚焦顯微鏡觀察各組CD11b與TLR4免疫熒光表達情況,結果顯示,與N組相比,M組有著較強的CD11b與TLR4熒光表達;D組、DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組CD11b與TLR4熒光共表達減弱。免疫組織化學結果顯示,與N組相比,7月齡APPswe/PS1δE9轉基因小鼠腦內海馬區(qū)TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40陽性細胞呈深棕色,數(shù)量較多,著色較深,且M組各指標積分光密度值顯著高于N組（p<0.01）;經(jīng)過15天干預后,與M組相比,D組、DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組各蛋白陽性表達積分光密度值均有不同程度下降（p<0.01或p<0.05）;其中與D組相比,YZ+D組TLR4和CD40蛋白陽性表達積分光密度值顯著降低（p<0.05）。WB和RT-PCR結果顯示,M組海馬區(qū)TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40的蛋白和mRNA相對表達量均顯著高于N組（p<0.01或p<0.05）,較之M組,D組、DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組各指標蛋白、mRNA相對表達量均有不同程度的降低（p<0.01或p<0.05）;與D組相比,DZ組、DZ+D組、YZ組和YZ+D組各指標蛋白、mRNA相對表達量也均有不同程度的降低（p<0.01或p<0.05）;其中,以YZ+D組下降程度最為顯著。4結論（1）基于“通督啟神”法的各干預措施對于7月齡APPswe/PS1δE9小鼠的空間學習能力和記憶保持能力均有一定改善,且效果優(yōu)于單純使用鹽酸多奈哌齊:其中音樂電針合多奈哌齊效果最為顯著;（2）7月齡APPswe/PS1δE9小鼠大腦海馬區(qū)神經(jīng)元數(shù)目減少,活化的小膠質細胞增多,基于“通督啟神”法的各干預措施能夠減少海馬區(qū)活化小膠質細胞的數(shù)量,改善海馬區(qū)神經(jīng)元形態(tài),減少神經(jīng)細胞的壞死,可能是改善AD模型小鼠學習認知障礙的機制;（3）基于“通督啟神”法的各干預措施能夠減少小膠質細胞與其TLR4模式識別受體的共表達,還能夠對TLR4及其信號通路下游蛋白MyD88、IRAK4、TAK1、TRAF6和NF-κB,氧化應激產(chǎn)物iNOS和共刺激分子CD40具有顯著負調節(jié)作用,可能是“通督啟神”法抑制小膠質細胞活化,減緩神經(jīng)元凋亡,從而發(fā)揮改善AD小鼠學習記憶能力的可能機制。（4）基于“通督啟神”法的各干預措施能夠減少TLR4及其信號通路下游蛋白MyD88、IRAK4、TAK1、TRAF6和NF-κB,氧化應激產(chǎn)物iNOS和共刺激分子CD40的基因表達,從遺傳學角度解釋了其發(fā)揮改善AD樣癥狀作用的可能機制。（5）在改善7月齡APPswe/PS1δE9小鼠學習記憶能力、保護其大腦海馬區(qū)神經(jīng)元、減少活化的小膠質細胞數(shù)量、降低TLR4通路相關蛋白和炎性因子表達方面,不同電針與陽性藥物多奈哌齊結合使用所產(chǎn)生的加載效應,優(yōu)于單純使用單一的藥物、脈沖電針和音樂電針。
二、電針對半乳糖所致大鼠空間學習記憶障礙及海馬齒狀回LTP誘導的干預作用（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結構并詳細分析其設計過程。在該MMU結構中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結構映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉換過程,TLB結構組織等。該MMU結構將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關系。
文獻研究法：通過調查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設計。
定性分析法：對研究對象進行“質”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、電針對半乳糖所致大鼠空間學習記憶障礙及海馬齒狀回LTP誘導的干預作用（論文提綱范文）
（1）電針調控miR-219a促進血管性認知障礙大鼠內嗅-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性的機制（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 電針可有效改善血管性認知障礙,但其機制尚未完全闡明 |
| 2 內嗅皮層-海馬CA1區(qū)神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性介導空間記憶編碼 |
| 3 miR-219a在NMDAR介導的突觸可塑性中發(fā)揮了重要調控作用 |
| 4 電針可調節(jié)內嗅皮層-海馬突觸可塑性改善VCI空間記憶障礙 |
| 5 研究假說 |
| 實驗材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 主要實驗設備耗材及試劑 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 動物分組及VCI模型建立 |
| 2.2 過表達miR-219a腺相關病毒注射 |
| 2.3 干預措施 |
| 2.4 小動物磁共振3D-TOF檢測 |
| 2.5 干預前后空間學習記憶能力測試 |
| 2.6 高爾基染色檢測 |
| 2.7 小動物核磁波譜檢測神經(jīng)物質代謝含量 |
| 2.8 RT-qPCR檢測miR-219a表達水平 |
| 2.9 電生理膜片鉗檢測 |
| 2.10 激光共聚焦觀察內嗅皮層-海馬CA1區(qū)miR-219a定位情況 |
| 3 統(tǒng)計方法 |
| 4 技術路線圖 |
| 實驗結果 |
| 1 VCI大鼠模型檢驗 |
| 2 電針調控miR-219a對VCI模型大鼠空間學習記憶功能的影響 |
| 3 電針調控miR-219a對VCI模型大鼠內嗅皮層、海馬CA1區(qū)神經(jīng)物質代謝的影響 |
| 4 電針調控miR-219a改善VCI模型大鼠內嗅皮層和海馬CA1區(qū)突觸形態(tài) |
| 5 電針調控miR-219a改善VCI模型大鼠內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路場電位 |
| 6 電針調控miR-219a影響VCI模型大鼠內嗅皮層、海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元放電模式 |
| 7 電針介導miR-219a調控VCI模型大鼠空間記憶相關NMDAR離子通道電流強度 |
| 8 電針對內嗅皮層、海馬CA1區(qū)miR-219a表達影響 |
| 9 內嗅皮層-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路投射情況 |
| 討論 |
| 1 空間記憶障礙是血管性認知障礙主要癥狀之一 |
| 2 電針可改善VCI大鼠空間學習記憶 |
| 3 電針可改善VCI大鼠內嗅皮層、海馬CA1區(qū)興奮/抑制平衡 |
| 4 電針調控miR-219a改善血管性認知障礙模型大鼠內嗅皮層-海馬神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性 |
| 5 電針調控miR-219a影響VCI模型大鼠內嗅皮層-海馬CA1區(qū)突觸可塑性的電生理機制 |
| 結論 |
| 不足與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 文獻綜述 電針改善血管性認知障礙的電生理機制研究進展 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡歷 |
（2）基于miRNAs調控突觸可塑性探討有氧跑臺運動改善慢性腦缺血大鼠記憶功能的機制（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 記憶障礙是血管性認知障礙的主要表現(xiàn)之一 |
| 2 有氧運動訓練是改善記憶障礙的有效手段之一 |
| 3 海馬突觸可塑性是記憶形成的神經(jīng)學基礎 |
| 4 miRNAs可以調控突觸可塑性 |
| 5 有氧運動訓練可以調控miRNAs的表達 |
| 6 研究假說 |
| 實驗材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 主要實驗設備 |
| 1.3 主要實驗試劑及耗材 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 實驗動物分組 |
| 2.2 慢性腦缺血大鼠模型制備 |
| 2.3 小動物核磁共振腦血管成像 |
| 2.4 巴恩斯迷宮測試 |
| 2.5 干預措施 |
| 2.6 Morris水迷宮測試 |
| 2.7 高爾基染色 |
| 2.8 電生理檢測 |
| 2.9 免疫印跡分析 |
| 2.10 miRNAs測序及分析 |
| 2.11 實時熒光定量PCR |
| 3 統(tǒng)計分析 |
| 4 技術路線圖 |
| 實驗結果 |
| 1 VD大鼠模型檢驗 |
| 1.1 小動物磁共振3D-TOF腦血管成像檢測 |
| 1.2 巴恩斯迷宮測試 |
| 2 有氧跑臺運動對慢性腦缺血大鼠空間學習記憶障礙的影響 |
| 3 有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠海馬突觸可塑性影響 |
| 3.1 有氧跑臺運動可以增加慢性腦缺血模型大鼠海馬樹突棘密度 |
| 3.2 有氧跑臺運動可以增強慢性腦缺血模型大鼠海馬LTP |
| 4 有氧跑臺運動對突觸可塑性相關和學習記憶相關蛋白表達的影響 |
| 4.1 有氧跑臺運動可以調控谷氨酸受體蛋白的表達情況及其磷酸化水平 |
| 4.2 有氧跑臺運動可以調控即刻早期基因蛋白表達的表達水平 |
| 5 有氧跑臺運動對慢性腦缺血模型大鼠miRNAs組學的影響 |
| 5.1 miRNAs測序 |
| 5.2 miRNAs表達的驗證結果 |
| 5.3 miRNAs靶基因預測及其信號通路富集分析 |
| 6 有氧跑臺運動可以調控PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路蛋白表達 |
| 討論 |
| 1 有氧運動訓練可以調控突觸可塑性改善空間學習記憶障礙 |
| 2 有氧運動訓練可以調控miRNAs的表達 |
| 3 miRNAs可以調控PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路的表達 |
| 4 有氧運動訓練可以通過調控PI3K/AKT/mTOR通路增強突觸可塑性 |
| 5 總結 |
| 結論 |
| 不足與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 文獻綜述 PI3K/AKT/mTOR信號通路在腦缺血疾病中治療的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡歷 |
（3）基于Neurogranin調控海馬突觸可塑性探討游泳運動改善慢性低灌注腦缺血致空間記憶障礙的機制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 引言 |
| 實驗材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 主要實驗設備 |
| 1.3 主要實驗試劑及耗材 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 基因敲除小鼠PCR鑒定 |
| 2.2 實驗動物分組 |
| 2.3 慢性低灌注腦缺血模型制備 |
| 2.4 激光散斑檢測腦血流灌注 |
| 2.5 干預方法 |
| 2.6 T迷宮實驗 |
| 2.7 Morris水迷宮實驗 |
| 2.8 蛋白表達檢測 |
| 2.9 電生理檢測 |
| 3 統(tǒng)計分析 |
| 4 技術路線圖 |
| 實驗結果 |
| 1 Ng敲除小鼠基因和蛋白表達的鑒定 |
| 1.1 PCR鑒定Ng敲除小鼠基因表達情況 |
| 1.2 Western blot檢測Ng敲除小鼠海馬組織Ng蛋白水平 |
| 2 慢性低灌注腦缺血模型檢驗 |
| 2.1 腦血流檢測 |
| 2.2 空間記憶行為學檢測 |
| 3 游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間記憶功能的影響 |
| 3.1 游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間工作記憶的影響 |
| 3.2 游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間學習記憶能力的影響 |
| 4 游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠海馬突觸可塑性活動的影響 |
| 5 游泳運動對慢性低灌注腦缺血模型小鼠突觸相關蛋白表達的影響 |
| 討論 |
| 1 慢性低灌注腦缺血導致認知障礙及其動物模型的選擇 |
| 2 游泳運動可以改善慢性低灌注腦缺血模型小鼠空間記憶功能 |
| 3 游泳運動增強慢性低灌注腦缺血模型小鼠海馬CA3-CA1 突觸活動 |
| 4 游泳運動增加慢性低灌注腦缺血模型小鼠海馬突觸相關蛋白的表達 |
| 5 總結 |
| 結論 |
| 不足與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 文獻綜述 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 作者簡歷 |
（4）基于髓鞘及少突膠質細胞損傷探討參枝苓口服液對AD的保護作用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號說明 |
| 綜述一“從心論治”阿爾茨海默病的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 綜述二 PI3K/Akt及其相關信號通路在AD中研究進展 |
| 參考文獻 |
| 前言 |
| 參考文獻 |
| 第一部分 參枝苓口服液對APP~(swe)/PS1~(dE9)雙轉基因AD模型小鼠認知行為及髓鞘的影響 |
| 材料與方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 參枝苓口服液對Aβ_(42)致少突膠質細胞OLN-93損傷的保護作用機制 |
| 參考文獻 |
| 實驗一 UHPLC-MRM-MS/MS方法檢測參枝苓口服液含藥血清主要化學成分 |
| 材料與方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗二 Aβ_(42)損傷少突膠質細胞OLN-93擬AD體外模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗三 參枝苓口服液含藥血清及多奈哌齊對OLN-93細胞安全劑量及有效劑量篩選 |
| 材料和方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗四 參枝苓口服液含藥血清對Aβ_(42)損傷OLN-93細胞髓鞘相關蛋白及PI3K/Akt-mTOR通路的影響 |
| 材料和方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗五 參枝苓口服液對Aβ_(42)損傷少突膠質細胞OLN-93的乙?；M蛋白與MBP基因相互作用影響 |
| 材料和方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗六 參枝苓口服液對Aβ_(42)損傷少突膠質細胞OLN-93脂質代謝的影響 |
| 材料和方法 |
| 結果 |
| 討論 |
| 參考文獻 |
| 結語 |
| 創(chuàng)新點 |
| 存在問題和不足 |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 在學期間主要研究成果 |
（5）預電針調控中縫背核GSK3 β/mTOR通路防治AD樣大鼠認知損傷的表觀遺傳學機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 實驗一 預電針對D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠認知功能的影響 |
| 1.材料與方法 |
| 1.1 實驗動物與分組 |
| 1.2 主要實驗儀器和試劑 |
| 1.3 干預方法 |
| 1.4 實驗動物行為學評估 |
| 1.5 統(tǒng)計分析 |
| 2.結果 |
| 2.1 曠場實驗結果 |
| 2.2 Morris水迷宮實驗結果 |
| 3.討論 |
| 結論 |
| 實驗二 預電針對D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠突觸超微結構和神經(jīng)元微管的影響 |
| 1.材料與方法 |
| 1.1 實驗動物分組、造模及干預方法 |
| 1.2 主要實驗儀器、試劑 |
| 1.3 透射電鏡觀察 |
| 1.4 高爾基染色觀察 |
| 1.5 統(tǒng)計分析 |
| 2.結果 |
| 2.1 各組大鼠海馬CA1 區(qū)突觸超微結構比較 |
| 2.2 各組大鼠海馬CA1 區(qū)神經(jīng)元微管結構比較 |
| 3.討論 |
| 結論 |
| 實驗三 預電針對D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠中縫背核GSK3β/mTOR通路及NFTs沉積的影響 |
| 1.材料與方法 |
| 1.1 實驗動物分組、造模及干預方法 |
| 1.2 免疫組化主要實驗試劑和儀器設備 |
| 1.3 WB主要實驗試劑和儀器設備 |
| 1.4 取材方法 |
| 1.5 中縫背核中NFTs表達水平 |
| 1.6 中縫背核中GSK3β/mTOR通路相關蛋白表達水平及海馬、中縫背核中磷酸化tau蛋白表達水平 |
| 1.7 統(tǒng)計分析 |
| 2.結果 |
| 2.1 各組大鼠中縫背核區(qū)NFTs水平 |
| 2.2 各組大鼠海馬區(qū)、中縫背核區(qū)tau蛋白磷酸化水平 |
| 2.3 各組大鼠中縫背核區(qū)GSK3β/mTOR通路相關蛋白水平 |
| 3.討論 |
| 結論 |
| 實驗四 預電針抑制D-半乳糖誘導的AD樣病理大鼠中縫背核NFTs沉積的表觀遺傳學機制 |
| 1.材料與方法 |
| 1.1 實驗動物分組、造模和干預方法 |
| 1.2 WB和免疫熒光主要實驗試劑和儀器設備 |
| 1.3 PCR和重亞硫酸鹽測序主要實驗試劑和儀器設備 |
| 1.4 取材方法 |
| 1.5 中縫背核中DNA甲基轉移酶DNMT1、GSK3β的蛋白表達水平 |
| 1.6 中縫背核神經(jīng)元中GSK3β基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化水平 |
| 1.7 中縫背核神經(jīng)元中GSK3βmRNA的表達水平 |
| 1.8 統(tǒng)計分析 |
| 2.結果 |
| 2.1 各組大鼠中縫背核區(qū)DNA甲基轉移酶DNMT1 的蛋白表達水平 |
| 2.2 各組大鼠中縫背核區(qū)DNMT1 免疫熒光結果 |
| 2.3 各組大鼠中縫背核區(qū)GSK3β基因啟動子區(qū)CpG島甲基化水平 |
| 2.4 各組大鼠中縫背核區(qū)GSK3β基因轉錄和蛋白表達水平 |
| 3.討論 |
| 結論 |
| 討論 |
| 1.中縫背核NFTs沉積是AD的早期病理現(xiàn)象 |
| 1.1 中縫背核的解剖結構和功能 |
| 1.2 中縫背核的病變與AD發(fā)病的關系 |
| 1.3 中縫背核的NFTs沉積早于其他腦區(qū) |
| 2.GSK3β/mTOR信號通路是影響NFTs沉積的關鍵 |
| 2.1 Tau蛋白異常過度磷酸化形成NFTs |
| 2.2 GSK3β/mTOR信號通路調控NFTs的形成和自噬清除 |
| 3.GSK3β的表觀遺傳調控參與AD的發(fā)病 |
| 3.1 GSK3β與 DNA甲基化 |
| 3.2 GSK3β與微小RNA |
| 3.3 GSK3β與組蛋白修飾 |
| 4.表觀遺傳修飾異常是衰老發(fā)展為AD的重要機制 |
| 5.模型動物的選擇 |
| 6.針灸“治未病”的應用—AD防治策略的潛在選擇 |
| 6.1 針灸“治未病”的理論內涵 |
| 6.2 “益腎調督”是針灸防治AD的重要取穴原則和實施途徑 |
| 7.電針頻率的選擇依據(jù) |
| 結語 |
| 本研究的創(chuàng)新點 |
| 問題及展望 |
| 參考文獻 |
| 附件 |
| 附件1 文獻綜述 |
| 參考文獻 |
| 附件2 博士在讀期間發(fā)表的學術論文和獲得的獎項 |
| 致謝 |
（6）預電針調控PI3K/AKT/mTOR信號通路對AD樣大鼠學習記憶認知障礙的影響（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 略縮詞表 |
| 前言 |
| 實驗一 預電針對AD樣大鼠空間學習記憶與認知障礙的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實驗結果 |
| 3 討論 |
| 實驗二 預電針對AD樣大鼠海馬突觸密度和形態(tài)的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實驗結果 |
| 3 討論 |
| 實驗三 預電針對AD樣大鼠海馬區(qū)PHF-1 的表達影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實驗結果 |
| 3 討論 |
| 實驗四 預電針對AD樣大鼠海馬區(qū)PI3K、AKT、P-AKT、mTOR的表達影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實驗結果 |
| 3 討論 |
| 討論 |
| 結語 |
| 參考文獻 |
| 附錄一 綜述 |
| 參考文獻 |
| 碩士期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（7）基于突觸可塑性與神經(jīng)炎癥研究酸棗仁湯改善睡眠剝奪大鼠學習記憶的機制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名稱縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 中醫(yī)理論研究 |
| 1.中醫(yī)對失眠病癥病名的認識 |
| 2.中醫(yī)對失眠病癥病因病機的認識 |
| 2.1 中醫(yī)對失眠病癥的病因的認識 |
| 2.2 中醫(yī)對失眠病癥病機的認識 |
| 3.中醫(yī)對學習記憶障礙的認識 |
| 3.1 中醫(yī)對學習記憶障礙病名的認識 |
| 3.2 中醫(yī)對學習記憶障礙病位、病因病機的認識 |
| 4.中醫(yī)對失眠與學習記憶障礙相關性的認識 |
| 4.1 陰血虧虛,神失所養(yǎng)是兩者重要的共同病機 |
| 4.2 失眠是引起學習記憶障礙重要的因素 |
| 5.養(yǎng)血安神法是改善睡眠與學習記憶的重要治法 |
| 6.酸棗仁湯方義與臨床、實驗研究 |
| 6.1 酸棗仁湯的藥物組成與方義 |
| 6.2 酸棗仁湯的臨床與實驗機制研究 |
| 7.酸棗仁湯對學習記憶作用的研究 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 實驗部分 |
| 實驗一 酸棗仁湯對睡眠剝奪模型大鼠學習記憶行為學及自主活動的影響 |
| 1.引言 |
| 2.實驗材料 |
| 3.實驗方法 |
| 4.統(tǒng)計學方法 |
| 5.實驗結果 |
| 6.討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗二 酸棗仁湯對睡眠剝奪模型大鼠海馬區(qū)突觸可塑性的影響 |
| 1.引言 |
| 2.實驗材料 |
| 3.實驗方法 |
| 4.統(tǒng)計學方法 |
| 5.實驗結果 |
| 6.討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗三 酸棗仁湯對睡眠剝奪模型大鼠海馬中炎癥因子的的影響 |
| 1.引言 |
| 2.實驗材料 |
| 3.實驗方法 |
| 4.統(tǒng)計學方法 |
| 5.實驗結果 |
| 6.討論 |
| 參考文獻 |
| 實驗四 酸棗仁湯對睡眠剝奪模型大鼠海馬 NLRP3 炎性小體通路的影響 |
| 1.引言 |
| 2.實驗材料 |
| 3.實驗方法 |
| 4.統(tǒng)計學方法 |
| 5.實驗結果 |
| 6.討論 |
| 參考文獻 |
| 結語 |
| 附錄 |
| 附錄一 綜述 |
| 參考文獻 |
| 附錄二 博士在讀期間參與科研情況 |
| 致謝 |
（8）從“腎腦相關”論衰老學習記憶功能減退的腦功能失衡機制（論文提綱范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 理論探討 |
| 一、中醫(yī)學對學習記憶功能的認識 |
| (一)“神”乃精神意識思維活動 |
| (二)五臟藏神協(xié)調認知過程 |
| (三)腦主元神啟發(fā)靈機神明 |
| 二、中醫(yī)學對衰老的認識 |
| (一)陰陽失衡而衰 |
| (二)五臟衰而壽盡 |
| (三)腎乃壽夭關鍵 |
| 三、從“腎腦相關”論衰老學習記憶功能減退 |
| (一)經(jīng)絡不通,腎腦失聯(lián) |
| (二)腎精不足,腦髓不滿 |
| (三)元氣衰竭,神去機息 |
| (四)志無所藏,神無所化 |
| (五)陰陽失調,迷惑健忘 |
| 四、現(xiàn)代醫(yī)學對學習記憶功能的認識 |
| (一)學習記憶活動的行為模式 |
| (二)學習記憶活動的結構基礎 |
| (三)學習記憶活動的物質基礎 |
| 五、現(xiàn)代醫(yī)學對衰老的認識 |
| (一)基因功能紊亂與衰老 |
| (二)細胞自噬與衰老 |
| (三)氧化應激-炎癥-免疫與衰老 |
| (四)與衰老相關的其他學說及認識 |
| 六、衰老與學習記憶功能的關系 |
| (一)相關腦區(qū)突觸可塑性的改變 |
| (二)中樞神經(jīng)遞質的改變 |
| (三)離子通道通透性與功能的改變 |
| (四)激素水平的改變 |
| 七、從腎論治衰老腎虛狀態(tài)下學習記憶功能減退 |
| (一)基于陰陽失衡探究學習記憶功能減退 |
| (二)運用地黃飲子從腎論治學習記憶功能減退 |
| 實驗研究 |
| 實驗一 地黃飲子對SAM小鼠學習記憶功能的影響 |
| 一、實驗材料 |
| (一)實驗動物 |
| (二)實驗儀器 |
| (三)藥品與試劑 |
| 二、實驗方法 |
| (一)實驗設計 |
| (二)主要試劑及藥品配制備 |
| (三)行為學實驗檢測 |
| (四)在體海馬場電位記錄 |
| (五)海馬組織樣本采集、固定與制片方法 |
| (六)統(tǒng)計方法 |
| 三、實驗結果 |
| (一)地黃飲子對SAM小鼠空間學習記憶能力下降的改善作用 |
| (二)地黃飲子對SAM小鼠短期學習記憶能力下降的改善作用 |
| (三)地黃飲子對SAM小鼠海馬突觸結構可塑性的改善作用 |
| (四)地黃飲子對SAM小鼠海馬突觸功能可塑性的改善作用 |
| 四、討論 |
| (一)地黃飲子參與調節(jié)學習記憶 |
| (二)地黃飲子參與調節(jié)海馬突觸可塑性 |
| (三)LTP/LTD效應失衡是衰老腎虛證腦電生理陰陽失衡的表現(xiàn)之一 |
| 五、小結 |
| 實驗二 地黃飲子對SAM小鼠海馬突觸可塑性的作用機制研究 |
| 一、實驗材料 |
| (一)實驗動物 |
| (二)實驗儀器 |
| (三)藥品與試劑 |
| 二、實驗方法 |
| (一)實驗設計、分組情況及實驗流程 |
| (二)主要試劑及藥品配制 |
| (三)待測樣本的收集與檢測 |
| (六)統(tǒng)計方法 |
| 三、實驗結果 |
| (一)酶聯(lián)免疫法檢測海馬內Glu、GABA含量 |
| (二)Western blot檢測海馬內谷氨酸受體、CaMKII的表達 |
| 四、討論 |
| (一)興奮性與抑制性氨基酸神經(jīng)遞質代謝失衡是腦內神經(jīng)遞質陰陽失衡的表現(xiàn)之一 |
| (二)衰老狀態(tài)下腦不同層次陰陽失衡的關鍵在于鈣離子代謝異常 |
| (三)地黃飲子可以有效調節(jié)衰老狀態(tài)下的學習記憶能力下降 |
| 五、小結 |
| 結語 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 附錄1.Master8 刺激器各階段刺激模式程序 |
| 附錄2.fEPSPs計算公式 |
| 附錄3.各組小鼠海馬透射電鏡觀察結果 |
| 致謝 |
| 查新報告 |
| 論文著作 |
（9）滌痰湯改善痰濁證老年MCI模型大鼠學習記憶及突觸可塑性的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 理論研究 |
| 中醫(yī)對MCI病名與癥狀的描述與記載 |
| 中醫(yī)對MCI病位的認識 |
| 中醫(yī)對MCI的病因病機認識 |
| MCI的主要證型與證候分布 |
| 滌痰湯組方分析與導師團隊前期研究 |
| 第二部分 實驗研究 |
| 實驗一 滌痰湯對痰濁證老年MCI模型大鼠學習記憶、脂代謝及氧化應激相關指標的影響 |
| 材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 2 實驗方法 |
| 結果 |
| 1 一般情況觀察 |
| 2 Morris水迷宮實驗 |
| 3 穿梭箱實驗 |
| 4 血脂水平檢測 |
| 5 氧化應激指標測定 |
| 討論 |
| 1 痰濁證老年輕度認知功能障礙大鼠模型的構建 |
| 2 滌痰湯組方各藥功效及藥理作用 |
| 3 滌痰湯改善模型大鼠的學習記憶能力 |
| 4 滌痰湯緩解模型大鼠的脂代謝紊亂 |
| 5 滌痰湯減輕模型大鼠的氧化應激損傷 |
| 實驗二 滌痰湯對痰濁證老年MCI模型大鼠突觸可塑性的影響 |
| 材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 2 實驗方法 |
| 結果 |
| 1 Nissl染色 |
| 2 Golgi染色 |
| 3 電生理LTP檢測 |
| 4 Western blot檢測突觸相關蛋白表達水平 |
| 討論 |
| 1 學習記憶與突觸可塑性 |
| 2 滌痰湯對模型大鼠海馬突觸結構可塑性的影響 |
| 3 滌痰湯對模型大鼠海馬組織LTP的作用 |
| 4 滌痰湯對模型大鼠海馬突觸相關蛋白SYP、PSD95、NR2B表達的影響 |
| 結語 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 文獻綜述 中醫(yī)藥治療輕度認知功能障礙的研究現(xiàn)狀 |
| 參考文獻 |
| 博士在讀期間參與科研情況 |
| 致謝 |
（10）“通督啟神”法電針對AD小鼠海馬區(qū)小膠質細胞及TLR4通路的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號說明 |
| 文獻綜述 |
| 綜述一 阿爾茨海默病的現(xiàn)代研究進展 |
| 1 流行病學現(xiàn)狀 |
| 1.1 阿爾茨海默病的診斷 |
| 1.2 阿爾茨海默病的患病率 |
| 1.3 阿爾茨海默病的經(jīng)濟負擔 |
| 1.4 患病的危險因素 |
| 2 阿爾茨海默病的發(fā)病機制研究進展 |
| 2.1 β淀粉樣蛋白假說 |
| 2.2 膽堿能系統(tǒng)假說 |
| 2.3 Tau蛋白假說 |
| 2.4 神經(jīng)炎癥 |
| 2.5 氧化應激假說 |
| 2.6 載脂蛋白E假說 |
| 2.7 細胞自噬 |
| 3 阿爾茨海默病的現(xiàn)代醫(yī)學治療研究進展 |
| 3.1 當前藥物 |
| 3.2 針對淀粉樣蛋白生成途徑的藥物 |
| 3.3 針對Tau蛋白的藥物 |
| 3.4 針對神經(jīng)炎性反應的藥物 |
| 4 總結與展望 |
| 綜述二 小膠質細胞在阿爾茨海默病神經(jīng)炎癥中的作用 |
| 1 神經(jīng)炎癥與阿爾茨海默病 |
| 2 小膠質細胞參與神經(jīng)炎癥在阿爾茨海默病中的作用 |
| 2.1 小膠質細胞的起源與分布 |
| 2.2 小膠質細胞的功能分型 |
| 2.3 小膠質細胞的激活 |
| 2.4 阿爾茨海默病中激活小膠質細胞的主要Aβ受體 |
| 2.5 小膠質細胞參與AD中特異性細胞因子信號的傳導 |
| 3 總結與展望 |
| 綜述三 電針治療阿爾茨海默病的研究進展 |
| 1 傳統(tǒng)醫(yī)學中對阿爾茨海默病的認識 |
| 1.1 阿爾茨海默病的中醫(yī)診斷與治療 |
| 1.2 阿爾茨海默病的針刺選穴依據(jù) |
| 2 電針治療阿爾茨海默病臨床療效研究 |
| 2.1 電針與藥的療效比較 |
| 2.2 電針加藥與藥的療效比較 |
| 2.3 單純電針療效 |
| 2.4 其他報道 |
| 3 電針對AD模型動物實驗相關機制的研究 |
| 3.1 電針對AD模型動物Aβ沉積的影響 |
| 3.2 電針對AD模型動物Tau蛋白磷酸化的影響 |
| 3.3 電針對AD模型動物突觸可塑性及突觸傳遞效果的影響 |
| 3.4 電針對AD模型動物大腦葡萄糖代謝的影響 |
| 3.5 電針對AD模型動物炎性因子表達的影響 |
| 3.6 電針對AD模型動物膽堿能受體的影響 |
| 3.7 電針對AD模型動物細胞凋亡、神經(jīng)元保護相關因子的影響 |
| 3.8 電針對AD模型動物氧化應激的影響 |
| 3.9 電針對AD模型動物自噬水平的影響 |
| 3.10 電針對AD模型動物線粒體功能的影響 |
| 3.11 音樂電針治療阿爾茨海默病的研究進展 |
| 4 總結與展望 |
| 參考文獻 |
| 前言 |
| 實驗研究 |
| 實驗研究技術路線圖 |
| 實驗一 “通督啟神”法電針對AD模型小鼠學習記憶能力的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實驗材料 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計分析方法 |
| 2 實驗結果 |
| 2.1 Morris水迷宮可視平臺實驗結果 |
| 2.2 Morris水迷宮隱蔽平臺實驗結果 |
| 2.3 Morris水迷宮空間探索實驗結果 |
| 3 討論 |
| 3.1 動物模型選擇依據(jù) |
| 3.2 水迷宮檢測選擇依據(jù) |
| 3.3 干預方法選擇依據(jù) |
| 實驗二 “通督啟神”法電針對AD模型小鼠海馬區(qū)形態(tài)學與小膠質細胞活化情況的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實驗材料 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計分析方法 |
| 2 實驗結果 |
| 2.1 各組小鼠海馬區(qū)齒狀回組織形態(tài)學的情況 |
| 2.2 各組小鼠海馬區(qū)小膠質細胞活化的情況 |
| 3 討論 |
| 實驗三 基于小膠質細胞TLR4信號通路探討“通督啟神”針法的效應機制 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實驗材料 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計分析方法 |
| 2 實驗結果 |
| 2.1 CD11b與TLR4免疫熒光共表達情況 |
| 2.2 各組小鼠海馬區(qū)TLR4蛋白表達情況 |
| 2.3 各組小鼠海馬區(qū)MyD88蛋白表達情況 |
| 2.4 各組小鼠海馬區(qū)IRAK4蛋白表達情況 |
| 2.5 各組小鼠海馬區(qū)TAK1蛋白表達情況 |
| 2.6 各組小鼠海馬區(qū)TRAF6蛋白表達情況 |
| 2.7 各組小鼠海馬區(qū)NF-κB蛋白表達情況 |
| 2.8 各組小鼠海馬區(qū)iNOS蛋白表達情況 |
| 2.9 各組小鼠海馬區(qū)CD40蛋白表達情況 |
| 3 討論 |
| 實驗四 “通督啟神”法電針對AD模型小鼠TLR4 信號通路相關蛋白mRNA表達的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實驗材料 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計分析方法 |
| 2 實驗結果 |
| 2.1 各組小鼠海馬區(qū)TLR4mRNA表達水平 |
| 2.2 各組小鼠海馬區(qū)MyD88mRNA表達水平 |
| 2.3 各組小鼠海馬區(qū)IRAK4mRNA表達水平 |
| 2.4 各組小鼠海馬區(qū)TAK1mRNA表達水平 |
| 2.5 各組小鼠海馬區(qū)TRAF6mRNA表達水平 |
| 2.6 各組小鼠海馬區(qū)NF-κBmRNA表達水平 |
| 2.7 各組小鼠海馬區(qū)iNOSmRNA表達水平 |
| 2.8 各組小鼠海馬區(qū)CD40mRNA表達水平 |
| 3 討論 |
| 實驗研究小結 |
| 結語 |
| 1 結論 |
| 2 創(chuàng)新點 |
| 3 存在問題與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 附錄1 各組各指標免疫組化表達情況 |
| 附錄2 各指標RT-PCR溶解、擴增曲線 |
| 致謝 |
| 在學期間主要研究成果 |
四、電針對半乳糖所致大鼠空間學習記憶障礙及海馬齒狀回LTP誘導的干預作用（論文參考文獻）
- [1]電針調控miR-219a促進血管性認知障礙大鼠內嗅-海馬CA1神經(jīng)環(huán)路突觸可塑性的機制[D]. 戴雅玲. 福建中醫(yī)藥大學, 2021(01)
- [2]基于miRNAs調控突觸可塑性探討有氧跑臺運動改善慢性腦缺血大鼠記憶功能的機制[D]. 林華偉. 福建中醫(yī)藥大學, 2021(01)
- [3]基于Neurogranin調控海馬突觸可塑性探討游泳運動改善慢性低灌注腦缺血致空間記憶障礙的機制[D]. 張嘉泳. 福建中醫(yī)藥大學, 2020(08)
- [4]基于髓鞘及少突膠質細胞損傷探討參枝苓口服液對AD的保護作用[D]. 劉珍洪. 北京中醫(yī)藥大學, 2020(04)
- [5]預電針調控中縫背核GSK3 β/mTOR通路防治AD樣大鼠認知損傷的表觀遺傳學機制研究[D]. 余超超. 湖北中醫(yī)藥大學, 2020(08)
- [6]預電針調控PI3K/AKT/mTOR信號通路對AD樣大鼠學習記憶認知障礙的影響[D]. 鄭清. 湖北中醫(yī)藥大學, 2020(12)
- [7]基于突觸可塑性與神經(jīng)炎癥研究酸棗仁湯改善睡眠剝奪大鼠學習記憶的機制[D]. 吳東南. 湖北中醫(yī)藥大學, 2020(08)
- [8]從“腎腦相關”論衰老學習記憶功能減退的腦功能失衡機制[D]. 韓誠. 山東中醫(yī)藥大學, 2019(05)
- [9]滌痰湯改善痰濁證老年MCI模型大鼠學習記憶及突觸可塑性的研究[D]. 彭靜. 湖北中醫(yī)藥大學, 2019(08)
- [10]“通督啟神”法電針對AD小鼠海馬區(qū)小膠質細胞及TLR4通路的影響[D]. 盧夢晗. 北京中醫(yī)藥大學, 2019(04)
標簽：突觸傳遞論文; 神經(jīng)元細胞論文;