一、樹突狀細胞可用于自身免疫性疾病的預防和治療（論文文獻綜述）
孫琳[1]（2021）在《1型糖尿病患者免疫細胞表面SLAMF分子異常表達與機制研究》文中研究說明研究目的:1型糖尿?。╰ype 1 diabetes mellitus,T1DM）是一種由遺傳因素和環(huán)境因素共同誘導,細胞免疫及體液免疫共同介導胰島β細胞損傷的自身免疫性疾病,在兒童和青少年中更為常見。近年來,流行病學研究表明,我國T1DM發(fā)病率明顯增加,而患者進行性的胰島功能下降導致其需要終身應用胰島素治療,鑒于其逐年增長的發(fā)病率和隨之出現(xiàn)的多系統(tǒng)并發(fā)癥,T1DM已成為重大的公共衛(wèi)生挑戰(zhàn)。目前,T1DM的發(fā)病機制尚未完全明確,T細胞相關(guān)的研究一直是1型糖尿病的研究熱點,而近年來除了CD4+T細胞,越來越多的研究表明CD8+T細胞在1型糖尿病的發(fā)病進程中有著重要作用。淋巴細胞活化信號分子家族（signaling lymphocyte activated molecular family,SLAMF）被報道在多種免疫異常疾病中表達異常,并顯著影響包括CD8+T細胞在內(nèi)的免疫細胞分化及功能。然而對T1DM免疫細胞表面SLAMF分子的表達情況未被報道,且對于T1DM中SLAMF分子如何通過影響CD8+T細胞功能仍不明確。為探討這一問題,本課題通過對T1DM患者及非肥胖的糖尿病小鼠模型（non-obese diabetic,NOD）免疫細胞分化情況及SLAMF分子表達情況進行分析,并進行mRNA測序及相關(guān)的體外細胞實驗,以期探討T1DM免疫系統(tǒng)異常分化及SLAMF分子表達對T1DM免疫微環(huán)境下CD8+T細胞功能和命運的影響。研究方法:（1）對T1DM患者及健康對照組（health control,HC）的一般臨床資料進行統(tǒng)計,利用流式細胞分析法對外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中T細胞及其亞群、NK細胞及其亞群、B細胞等免疫細胞比例進行分析,并檢測T細胞、B細胞和NK細胞表面SLAM分子家族的表達情況;（2）利用流式細胞分析法對T1DM患者外周血中T細胞SLAMF4分子表達及促炎性細胞因子IFN-γ和TNF-a的分泌情況進行檢測,分析SLAMF4分子與細胞活化狀態(tài)和細胞因子分泌能力之間的相關(guān)性;分析SLAMF4分子表達與1型糖尿病一般臨床資料的相關(guān)性;（3）對自發(fā)性1型糖尿病小鼠模型NOD小鼠進行體重、隨機血糖監(jiān)測及小鼠尾靜脈采血,對小鼠胰腺組織留取病理,進行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosi,HE）染色,觀察其組織細胞形態(tài)、炎細胞浸潤情況;用流式細胞分析法檢測小鼠外周血免疫細胞分化及外周血、胰腺引流淋巴結(jié)CD8+T細胞表面SLAMF4分子表達情況;（4）采用流式細胞分選技術(shù)得到純化的T1DM患者的SLAMF4+CD8+T細胞和SLAMF4-CD8+T細胞,并進行mRNA轉(zhuǎn)錄組測序,分析差異表達基因的分布及臨床意義;（5）應用免疫磁珠分選技術(shù)分選臍帶血細胞中CD8+T細胞,在體外給予抗CD3/CD28單克隆抗體刺激下進行培養(yǎng),檢測作用不同時間CD8+T細胞表面SLAMF4分子表達情況;（6）采用磁珠分選聯(lián)合流式細胞分選技術(shù)正常健康人SLAMF4陽性CD8 T細胞和SLAMF4陰性CD 8 T細胞分別進行分選,在體外給予抗CD3/CD28單克隆抗體的刺激下進行體外擴增,用CFSE標記細胞,檢測細胞增殖情況,并于Day6檢測兩種細胞的凋亡情況。研究結(jié)果:（1）T1DM患者外周血PBMC中免疫細胞比例與HCs比較存在異常,表現(xiàn)為CD4+T細胞和B細胞比例增多,Treg細胞的比例降低,總NK細胞及其CD56dim亞群的NK細胞比例減低,CD56bright亞群的NK細胞比例升高。與HCs相比,T1DM患者外周血PBMC中SLAMF4陽性的總T細胞百分比降低,且SLAMF4陽性的CD8+T細胞明顯降低;SLAMF3分子表達在B淋巴細胞比例有所降低,SLAMF5在NK細胞表面表達升高,差異均有統(tǒng)計學意義。（2）T1DM患者T細胞表面SLAMF4分子表達與細胞活化的狀態(tài)有關(guān),且與SLAMF4陰性CD8+T細胞相比,SLAMF4陽性CD8+T細胞具備更強的分泌促炎因子IFN-γ和TNF-a的能力;在與T1DM相關(guān)的一般臨床指標的分析中,發(fā)現(xiàn)SLAMF4陽性CD8+T細胞百分比與糖化血紅蛋白水平及T1DM病程呈負相關(guān)。（3）與同周齡的Balb/c小鼠相比,NOD小鼠CD4+T細胞及CD4+CD25+的調(diào)節(jié)性T細胞百分比明顯降低,隨著NOD小鼠1型糖尿病的發(fā)生發(fā)展,SLAMF4陽性CD8+T細胞百分比逐漸下降,且明顯低于對照Balb/c小鼠。（4）mRNA轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明,1型糖尿病中SLAMF4作用后的CD8+T細胞表現(xiàn)出多個信號通路的異常改變,包括T細胞受體信號相關(guān)的信號通路、細胞因子分泌及細胞凋亡通路,差異表達的基因中也有多個與凋亡相關(guān)的基因,說明SLAFM4在1型糖尿病中調(diào)控CD8+T細胞的活性與命運。（5）通過體外培養(yǎng)人臍帶血CD8+T淋巴細胞發(fā)現(xiàn),一定程度的抗原刺激可促進SLAMF4在臍帶血na?ve CD8+T細胞表面上調(diào)表達,隨著免疫活化的時間延長,SLAMF4陽性CD8+T細胞百分比逐漸下調(diào)。（6）通過SLAMF4陽性CD8+T細胞和SLAMF4陰性CD8+T細胞經(jīng)CFSE標記后體外培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)SLAMF4陰性CD8+T細胞對抗CD3/CD28單克隆抗體的TCR刺激更敏感、更易擴增,增殖能力強,而SLAMF4陽性CD8+T細胞更容易凋亡。研究結(jié)論:（1）T1DM患者外周血PBMC中免疫細胞分化比例與HCs相比存在異常,且外周血T細胞及B細胞表面多種SLAM分子表達水平發(fā)生變化,結(jié)合課題組前期結(jié)果,這在T1DM及T2DM之間存在一定共性和不同之處。（2）與HCs相比,T1DM患者SLAMF4陽性CD8 T細胞百分比顯著下降,且SLAMF4分子表達與細胞活化的狀態(tài)及促炎性細胞因子IFN-γ和TNF-a的分泌有關(guān)。在T1DM患者中,SLAMF4+CD8+T細胞百分比與患者的糖化血紅蛋白水平和1型糖尿病病程呈負相關(guān)。（3）在動物模型中我們發(fā)現(xiàn)NOD小鼠也存在外周血T細胞異常分化狀態(tài)。且隨著NOD小鼠1型糖尿病的發(fā)生發(fā)展,SLAMF4陽性CD8+T百分比逐漸下降,明顯低于對照Balb/c小鼠。（4）SLAMF4分子表達與1型糖尿病患者CD8+T細胞功能調(diào)控及凋亡顯著相關(guān),SLAMF4陽性的CD8+T細胞增殖能力較差且更容易凋亡,故體內(nèi)持續(xù)抗原刺激會導致表達SLAMF4的CD8+T細胞的百分比降低,使其發(fā)揮類似調(diào)定點作用。綜上所述,本課題首次分析了T1DM疾病模型中的SLAMF分子家族的表達譜,為SLAMF分子與T1DM免疫細胞的調(diào)控提供了實驗證據(jù),證實了在1型糖尿病免疫微環(huán)境中SLAMF4表達對CD8+T細胞的功能影響和命運的調(diào)控及SLAMF4陽性CD8+T細胞比例變化的具體機制,提示SLAMF4分子可能為T1DM的早期診斷,臨床分期或免疫干預提供新靶點。
高雪[2]（2021）在《納米藥物遞送系統(tǒng)通過促進抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞擴增增強自身免疫性腦脊髓炎治療效果的研究》文中研究說明實驗背景與目的:目前,針對自身免疫性疾病的治療,主要使用廣普性的免疫抑制劑,患病后高致殘率、強烈的副作用以及終身服藥等問題,為患者的生活和經(jīng)濟帶來不可小覷的負面影響。機體免疫平衡被破壞,發(fā)揮免疫抑制作用的調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cell,Treg）被抑制,導致識別自身抗原的效應T細胞被活化是自身免疫性疾病發(fā)病的主要原因。采用體外擴增Treg回輸?shù)交颊唧w內(nèi),從而提高Treg水平的治療策略已經(jīng)成為目前治療自身免疫性疾病的研究熱點。然而,體外擴增Treg存在培養(yǎng)周期長、增殖效率低、細胞穩(wěn)定性和功能降低等局限性。因此,在體內(nèi)條件下誘導Treg,尤其是抗原特異性Treg的有效增值就成為提高自身免疫性疾病治療效果的關(guān)鍵。耐受性樹突狀細胞（dendritic cell,DCs）通過細胞表面的主要組織相容復合物（major histocompatibility complex,MHC）分子將抗原呈遞給T細胞的抗原受體（T cell receptor,TCR）,同時表面低表達的共刺激分子不能有效地與T細胞表面的受體結(jié)合,導致Th1/Th2細胞失衡,抑制Th17細胞,促進Treg細胞增殖。已有研究證明1α,25-hydroxyvitamin D3（VD3）可以在體外誘導耐受性DCs。然而VD3是一種脂溶性藥物,難以在體內(nèi)達到有效的藥物濃度,阻礙了其在體內(nèi)條件下通過產(chǎn)生耐受性DCs誘導Treg增殖的作用。此外,將耐受性DCs與自身抗原結(jié)合有助于抗原特異性Treg的擴增,但體內(nèi)相關(guān)研究比較少。因此,為實現(xiàn)抗原特異性Treg細胞在體內(nèi)的有效增殖,用于自身免疫性疾病的治療,需要在體內(nèi)條件下將VD3和抗原共同遞送到DCs中并達到有效劑量。納米藥物遞送系統(tǒng)能夠提高藥物溶解度、延長藥物在體內(nèi)半衰期、增強藥物的靶向性及降低毒副作用等,有望實現(xiàn)體內(nèi)誘導抗原特異性Treg增殖的目的。本研究目的是開發(fā)一種VD3和抗原共同遞送到DCs中的藥物遞送系統(tǒng),在體內(nèi)條件下實現(xiàn)誘導樹突狀細胞向耐受性表型分化,同時遞送抗原,達到擴增抗原特異性Treg的目的,利用實驗性自身免疫性腦脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）疾病模型對抗原特異性Treg的治療作用進行驗證。方法:本研究首先使用雙乳化法制備同時攜載VD3和MOG抗原肽的PEG-PLGA納米藥物遞送系統(tǒng),通過粒度儀表征納米藥物遞送系統(tǒng)的粒徑和表面電勢。在體外,將Blank NP、NP/VD3、NP/VD3/MOG與小鼠骨髓細胞樹突狀細胞共培養(yǎng),在經(jīng)過15μg/mL OVA刺激24小時后,用流式細胞術(shù)檢測BMDCs的MHC-Ⅱ和共刺激分子的表達情況。通過向C57BL/6小鼠腹股溝皮內(nèi)注射NP/DID,24小時后處死小鼠,分離腹股溝淋巴結(jié),利用熒光成像、流式細胞術(shù)和共聚焦顯微成像檢測淋巴結(jié)內(nèi)DID的分布情況。通過向B10.A5R-gfp-Foxp3小鼠腹股溝皮內(nèi)注射PBS、NP/VD3、NP/MOG或NP/VD3/MOG,24小時后處死小鼠,分離引流淋巴結(jié)中淋巴細胞,通過流式細胞儀檢測MOG特異性的Treg細胞的水平。通過向C57BL/6小鼠腹股溝皮內(nèi)注射PBS、free VD3、free MOG、NP/VD3、NP/VD3/MOG,24小時后處死小鼠,分離獲得小鼠引流淋巴結(jié)種淋巴細胞,用流式細胞術(shù)檢測小鼠Treg細胞比例和水平的變化。通過向C57BL/6小鼠腹股溝皮內(nèi)注射PBS、free VD3、free MOG、Blank/NP、NP/VD3、NP/MOG或NP/VD3/MOG,24小時后對各組小鼠誘導實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）,觀察小鼠EAE發(fā)病情況。在PBS組發(fā)病高峰期時,取各組小鼠的脊髓,H&E染色觀察炎性細胞浸潤狀況。結(jié)果:1.雙乳化法制備納米藥物遞送系統(tǒng),成功獲得NP/VD3/MOG,粒徑為343 nm,表面電勢為-27.3 m V。2.NP/VD3和NP/VD3/MOG可以在體外誘導樹突狀細胞向耐受性表型分化。3.皮內(nèi)注射的NP/DID能夠富集到引流淋巴結(jié)中,主要分布在淋巴結(jié)中樹突狀細胞內(nèi)。4.NP/VD3和NP/VD3/MOG顯著提高小鼠引流淋巴結(jié)內(nèi)Treg細胞的比例。5.NP/VD3/MOG能夠顯著延長EAE模型小鼠的發(fā)病時間,減輕發(fā)病程度,促進發(fā)病后的恢復。結(jié)論:本研究成功制備了同時包載VD3和抗原肽（MOG）的納米藥物遞送系統(tǒng)。此納米藥物遞送系統(tǒng)可在體外誘導樹突狀細胞向耐受性表型方向分化,皮下注射后靶向淋巴結(jié)內(nèi)樹突狀細胞遞送藥物,誘導耐受性DCs,促進抗原特異性Treg細胞的擴增,提高Treg細胞介導的免疫抑制作用,顯著抑制了小鼠EAE模型的發(fā)病,增強了疾病的緩解。
任賽賽[3]（2021）在《嗜酸乳桿菌通過誘導調(diào)節(jié)性γδT細胞緩解實驗性自身免疫性腦脊髓炎》文中認為背景多發(fā)性硬化（Multiple sclerosis,MS）是一種較為多見且以自身免疫介導所引起的中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病,也是在青壯年群體中較常見的一類非創(chuàng)傷性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,其所造成的身體傷殘影響終身。多發(fā)性硬化病因不明,可能與環(huán)境和遺傳有關(guān)。隨著人們對該病認識及相關(guān)診斷技術(shù)的提高,目前MS的診斷率逐年提高。由于多發(fā)性硬化發(fā)病機制尚未明確,目前對其還沒有有效的預防手段和治療方法。自身反應性的、髓磷脂特異性的CD4+T細胞的活化被認為是導致MS發(fā)生的關(guān)鍵。相關(guān)研究已經(jīng)證實CD4+T細胞亞群Th1和Th17細胞在MS發(fā)生發(fā)展中充當著促進炎癥的作用,Th2和Treg則能夠抑制炎癥,起到保護中樞神經(jīng)的作用。除此之外,中樞神經(jīng)中的髓性抑制性細胞（Myeloid-derived suppressor cells,MDSC）、樹突狀細胞（Dendritic cell,DC）也發(fā)揮抑制炎癥的作用。因此,誘導保護性免疫偏移和調(diào)節(jié)性細胞是MS的一個重要治療策略。隨著人們對腸道菌群的重視及相關(guān)研究的不斷深入,越來越多的證據(jù)表明腸道菌-腸道-大腦反應軸的信號交流與MS的發(fā)生密切相關(guān)。目前已知腸道益生菌產(chǎn)生的保護性短鏈脂肪酸（SCFA）可以起到調(diào)節(jié)腸道內(nèi)外淋巴組織和器官免疫平衡的作用,其能進一步誘導未分化的CD4+T細胞由Th1/Th17向Th2/Treg發(fā)生分化偏移,進而達到抗炎的目的。γδT細胞是細菌作用的首要靶標,腸道菌能刺激巨噬細胞、樹突狀細胞等產(chǎn)生IL-1和IL-23等細胞因子,通過鳥苷酸交換因子1（VAV1）等信號通路活化γδ17T細胞。我們先前的研究初步表明,EAE抵抗性小鼠腸道乳酸桿菌的重要菌株——嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidipiscis,L.acidipiscis）能夠減輕EAE小鼠的嚴重程度。L.acidipiscis屬于一種好氧的革蘭氏陽性嗜酸乳桿菌,是近些年才被發(fā)現(xiàn)和分離出來的。此外,有研究發(fā)現(xiàn)L.acidipiscis也存在于健康人的肺部,其與肺部γδT細胞的功能有關(guān)。目前已知γδT細胞產(chǎn)生的效應因子之一是IL-17,這種細胞稱為γδ17T細胞。在EAE動物模型中,已經(jīng)證實γδ17T細胞具有正反兩個方面的作用,其不僅可以通過增加Th17細胞產(chǎn)生而加重病情,也可以通過促進炎性Th凋亡和增強Treg的功能而緩解病情。γδ17T細胞這種正反作用可能與γδT細胞的異質(zhì)性有關(guān),如:Vγ1+γδ17T細胞表達CCR5,進而可以增強Treg的功能,并能通過Fas-Fas L信號誘導αβTh細胞的凋亡;而Vγ4+γδ17T細胞表達CCR6,則能促進病理性的Th17細胞產(chǎn)生。L.acidipiscis與MS的臨床關(guān)聯(lián)性及其在MS臨床治療中的應用還未有報道,因此我們在該方面已經(jīng)取得的相關(guān)研究成果為本課題進一步的研究提供了更為深入的科學依據(jù)。具體而言,我們前期的實驗結(jié)果表明了CD44KO小鼠（KO）與CD44野生型小鼠（WT）相比對EAE誘導具有更高的抵抗性。我們前期的結(jié)果表明,小鼠CD44基因缺失后出現(xiàn)的EAE抵抗性可能是由小鼠腸道微生物種群和相關(guān)短鏈脂肪酸的改變所引起的,但是與其發(fā)病相關(guān)的具體菌株及作用靶細胞尚未明確。目的使用腸道益生菌治療MS是一個新思路,但是目前的相關(guān)臨床試驗結(jié)果仍不理想。同時,腸道益生菌治療MS的效果還未達到令人滿意的程度,尚需在三個方面做出努力:（1）為發(fā)現(xiàn)與MS發(fā)生發(fā)展高度相關(guān)的特異性菌株;（2）闡明L.acidipiscis誘導的調(diào)節(jié)性γδT細胞對EAE的發(fā)生發(fā)展具有一定的抑制作用;（3）研究L.acidipiscis誘導的調(diào)節(jié)性γδT細胞在EAE中對CD4+T細胞的調(diào)節(jié)作用。材料與方法首先,我們通過對C57BL/6（EAE易感性小鼠）和CD44KO小鼠（EAE抵抗性小鼠）皮下注射含有MOG35-55肽段的CFA,于當天及48小時后對實驗小鼠腹腔注射PTX溶液以建立EAE動物疾病模型。在用MOG35-55肽段成功免疫實驗小鼠后的第15天,此時小鼠處于發(fā)病高峰期。收集小鼠腸道內(nèi)容物,對CD44KO小鼠和C57BL/6小鼠的腸道菌群分別進行16s r DNA V4測序分析,對比并分析兩種小鼠發(fā)病后腸道中的菌群差異并挑選出優(yōu)勢菌株,以便后續(xù)進一步的深入探討。完成上述實驗后,我們從EAE抵抗性小鼠腸道內(nèi)中分離出特征性菌株L.acidipiscis。在對C57BL/6小鼠進行MOG35-55肽段免疫的前7天,我們通過對C57BL/6小鼠灌喂青霉素和鏈霉素混合液以達到清除小鼠腸道菌群的目的,接著通過給予小鼠灌喂L.acidipiscis菌懸液以達到復植的效果。如上面所述,在用MOG35-55肽段免疫小鼠后的第15天,收集小鼠腸道內(nèi)容物并制成懸液,使用氣相色譜-火焰離子化檢測器測定灌喂L.acidipiscis菌懸液后小鼠腸道內(nèi)容物中SCFA的含量。運用相同的方法和材料對小鼠腸道菌群進行清除與復植環(huán)節(jié),給予C57BL/6小鼠灌喂CD44KO小鼠糞便懸液或L.acidipiscis菌懸液,在用MOG35-55肽段對小鼠免疫后,每天觀察小鼠并對小鼠發(fā)病情況進行觀察并評分。同時,運用同樣的手段,將L.acidipiscis復植到γδТ細胞缺乏(TCRδ-/-)小鼠腸道內(nèi),在用MOG35-55肽段對小鼠免疫后,每天觀察小鼠并對小鼠發(fā)病情況進行觀察并評分。在用MOG35-55肽段免疫小鼠后的第15天,收集灌喂L.acidipiscis的C57BL/6小鼠腸系膜淋巴結(jié)并制成單T細胞,然后對其進行細胞內(nèi)染色,以對其中的CD4+T進行分群。同時,運用ELISA對細胞培養(yǎng)上清液進行檢測。此外,我們將γδT及CD4+T細胞與L.acidipiscis共培養(yǎng)后,然后進行細胞流式檢測,觀察細胞亞群的分化情況。結(jié)果（1）L.acidipiscis在EAE抵抗性小鼠腸道中顯著增高;（2）L.acidipiscis誘導了小鼠腸道中SCFA的產(chǎn)生;（3）L.acidipiscis能夠誘導EAE易感性小鼠對EAE產(chǎn)生抵抗;（4）L.acidipiscis可以誘導CD4+T細胞向Treg分化,并且抑制病理性Th1和Th17細胞的產(chǎn)生;（5）EAE抵抗性小鼠腸道內(nèi)的γδT細胞數(shù)量顯著增高;（6）L.acidipiscis能夠誘導Vγ1+γδT細胞產(chǎn)生,并且抑制Vγ4+γδT細胞產(chǎn)生。結(jié)論我們的結(jié)果進一步揭示了EAE-CD44KO小鼠較EAE-WT小鼠在細菌種類及數(shù)量層面表現(xiàn)出顯著差異性,證實了小鼠腸道L.acidipiscis的數(shù)量與EAE的進展呈負相關(guān),L.acidipiscis對γδT細胞和EAE發(fā)病起著重要調(diào)控作用。本研究也闡明L.acidipiscis是通過誘導調(diào)節(jié)性γδT細胞的產(chǎn)生以及相應調(diào)節(jié)性CD4+T細胞來達到抑制MS發(fā)生、發(fā)展的目的。通過腸道益生菌誘導保護性的調(diào)節(jié)性γδT細胞產(chǎn)生是MS治療的又一新策略,而L.acidipiscis的應用為多發(fā)性硬化的發(fā)病機制提供新思路,為多發(fā)性硬化的診斷及治療提供新方法。
杜志榮[4]（2021）在《小麥依賴—運動誘發(fā)嚴重過敏反應患者的預后及腸道菌群研究》文中進行了進一步梳理食物依賴-運動誘發(fā)嚴重過敏反應（food-dependent exercise-induced anaphylaxis,FDEIA）是一種少見,但可危及生命的食物過敏,它是指進食特定食物變應原數(shù)小時內(nèi)運動可發(fā)生嚴重過敏反應。小麥、堅果、海鮮等多種食物均可導致FDEIA,其中小麥是導致FDEIA最常見的致敏原,該類型又稱作小麥依賴-運動誘發(fā)嚴重過敏反應（wheat-dependent exercise-induced anaphylaxis,WDEIA）。當進食小麥聯(lián)合某些輔因子（如運動、酒精和非甾體抗炎藥物）時,WDEIA患者會發(fā)生過敏反應;但無輔因子存在時,患者可耐受小麥。WDEIA缺乏有效的治療手段,目前關(guān)于WDEIA的長期預后研究較少。本課題第一部分對165例WDEIA患者進行長期隨訪,旨在明確WDEIA患者的長期控制現(xiàn)狀。本研究發(fā)現(xiàn),121例應答的患者中,中位隨訪時間92個月,分別有19.0%、32.2%和11.6%的患者選擇完全禁食小麥、運動前禁食小麥和減少小麥攝入量聯(lián)合運動回避,9.2%（6/76）的患者再發(fā)嚴重過敏反應。14.9%、12.4%和9.9%的患者選擇間歇性禁食小麥、減少小麥攝入量和不改變飲食習慣,有40%（18/45）的患者在確診后出現(xiàn)嚴重過敏反應?？梢?不同飲食習慣選擇的臨床結(jié)局不同。除完全禁食小麥以外,減少小麥攝入聯(lián)合避免運動可能是一個不錯的選擇,可能能提高患者對小麥的耐受性,但需警惕無意運動帶來的過敏風險。WDEIA的病因尚不清楚。越來越多的研究表明,腸道菌群在食物過敏發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。但目前對于WDEIA患者腸道菌群的結(jié)構(gòu)和組成知之甚少。為研究WDEIA患者腸道菌群特征及其與WDEIA的相關(guān)性,本課題第二部分從25例WDEIA患者和25例健康對照者中采集糞便樣本。同時收集環(huán)境暴露因子,檢測血清總IgE、小麥特異性IgE、面筋和ω-5醇溶蛋白水平。糞便樣品采用16SrRNA基因測序。研究發(fā)現(xiàn),與健康對照組相比,WDEIA患者腸道菌群中Blautia（P<0.05）,Erysipela tocl os tridium（P<0.01）,Akkermansia（P<0.05）及LachnospiraceaeNK4A136group（P<0.05）顯著增多,乳桿菌科（P=0.001）及小桿菌屬（P<0.05）顯著減少。微生物多樣性在WDEIA患者和健康對照組之間沒有差異。ω-5醇溶蛋白特異性IgE水平與顫螺旋菌屬相對豐度呈正相關(guān)（r=0.48,P<0.05）,與明串珠菌屬呈負相關(guān)（r=-0.49,P<0.05）?？侷gE水平與雙歧桿菌顯著負相關(guān)（P<0.05）。WDEIA患者腸道微生物組成與健康對照組不同。本研究發(fā)現(xiàn)腸道微生物與WDEIA的發(fā)病存在潛在的關(guān)聯(lián)。此發(fā)現(xiàn)可能為預防和治療WDEIA提供新的方法?；?6S rRNA的高通量測序研究雖然能夠在一定程度上反應WDEIA患者微生態(tài)的結(jié)構(gòu)變化,但這種方法無法實現(xiàn)對腸道微生態(tài)的全面認識。與16S rRNA相比,宏基因組測序可以更好的辨別菌種和菌株,對菌群多樣性的評估更準確。同時,該技術(shù)可以分辨更低的分類學水平并進行潛在的功能注釋,能夠為WDEIA的發(fā)生發(fā)展提供更深層面的證據(jù),有助于我們對WDEIA發(fā)病機制更加深入的認識。因此,本課題第三部分希望通過宏基因組測序技術(shù),將采集到的21例WDEIA患者,17例其他食物誘發(fā)嚴重過敏反應患者（AN組）和15例健康對照者糞便樣本進行宏基因組測序。同時收集環(huán)境暴露因子,檢測血清總IgE、小麥特異性IgE、面筋和ω-5醇溶蛋白、類胰蛋白酶水平。研究發(fā)現(xiàn),與健康對照組相比,WDEIA患者腸道菌群中肉食桿菌屬,熱袍菌,馬賽擬桿菌,Eubacteriumrectale,Parabacteroidesdistasonis 相對含量顯著高于健康對照組;Bacteroidescoprocola 及 Bacteroidesstercoris 相對含量較低。WDEIA 組腸道微生物組成不同于AN組與健康對照組,提示W(wǎng)DEIA患者具有獨特的腸道菌群組成。腸道菌群多樣性在WDEIA患者AN組與健康對照組之間無差異。腸道菌群與臨床指標之間進行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)硫還原菌目和硫還原菌科作為在WDEIA組富集的腸道菌群,均與ω5醇溶蛋白sIgE呈正相關(guān)。Roseburiainulinivorans 和 Roseburiasp.CAG:18 分別與 ω5 醇溶蛋白 sIgE和面筋sIgE呈正相關(guān),但其在兩組的富集情況無顯著差異。雖然WDEIA組與健康對照組腸道菌群真菌組成有所不同,但spearman相關(guān)性分析未發(fā)現(xiàn)差異真菌與臨床指標的相關(guān)性,進一步證實了腸道微生物中的細菌在WDEIA發(fā)病中起主要作用。KEGG數(shù)據(jù)庫比對分析發(fā)現(xiàn),WDEIA組、AN組與健康對照組三組研究對象腸道菌群的功能基因富集存在差異。脂多糖生物合成在健康對照組中富集,從而推測脂多糖生物合成可能在WDEIA中起保護作用。本課題第二部分研究進一步證實了腸道菌群與WDEIA發(fā)病的相關(guān)性,探討了腸道菌群在WDEIA發(fā)病中可能的作用機制,為WDEIA的診治及機制研究提供了新的思路。WDEIA典型的臨床表現(xiàn)可累及多個系統(tǒng),具有潛在的致死性。但部分WDEIA患者進食小麥后運動僅出現(xiàn)瘙癢、蕁麻疹,而不發(fā)生嚴重過敏反應,稱為小麥依賴-運動誘發(fā)蕁麻疹（wheat-dependent exercise-induced urticaria,WDEIU）。WDEIU患者相對罕見,國內(nèi)缺乏關(guān)于WDEIU患者臨床特征的相關(guān)報道,本課題第四部分研究對9例WDEIU患者及18例WDEIA患者的臨床特征進行回顧性分析,總結(jié)WDEIU患者的臨床特征,旨在探討WDEIU與WDEIA之間的聯(lián)系,以期提高臨床醫(yī)生對該疾病的認識,為疾病的早期診斷和治療提供指導。針對WDEIU患者臨床特征的研究發(fā)現(xiàn),9例WDEIU患者均以蕁麻疹起病,平均發(fā)病年齡為23.4±11.8歲。從起病到明確診斷的中位時間為36個月。18例WDEIA患者嚴重過敏反應的平均發(fā)病年齡為42.9±12.2歲,72.2%的患者（13/18）既往有蕁麻疹病史,從蕁麻疹起病到出現(xiàn)嚴重過敏反應的中位時間為7（1.5-47）年。WDEIU組患者的發(fā)病年齡明顯低于WDEIA組（P=0.001）,其血清面筋特異性IgE 水平顯著低于 WDEIA 組（0.55 kUA/L vs 1.34 kUA/L,P=0.014）,WDEIU 組患者的ω-5醇溶蛋白特異性IgE水平較低,但差異無統(tǒng)計學意義（4.2 kUA/L vs 9.09 kUA/L,P=0.069）。該研究發(fā)現(xiàn),WDEIU是一種少見病,可能為WDEIA的早期表現(xiàn),臨床難以識別。診斷依靠病史、血清特異性IgE檢測和/或皮膚點刺試驗。提高臨床醫(yī)生對WDEIU的認識,有助于早期診斷及干預,從而預防嚴重過敏反應的發(fā)生。
王爽[5]（2021）在《過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet+ CXCR3+ Treg細胞的影響及機制研究》文中研究指明自身免疫調(diào)節(jié)因子（autoimmune regulator,AIRE）是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,AIRE的缺失和突變會引發(fā)自身免疫性多腺體綜合征1型,其臨床表現(xiàn)包括1型糖尿病、自身免疫性肝炎和橋本氏甲狀腺炎等多器官自身免疫病。AIRE主要表達在胸腺髓質(zhì)上皮細胞（thymic medullary epithelial cells,mTECs）和樹突狀細胞（dendritic cells,DCs）上。在維持自身免疫耐受,防止自身免疫病發(fā)生中具有重要作用。調(diào)節(jié)性T細胞（regulatory T cells,Tregs）作為一類具有抑制功能的細胞,在維持免疫耐受中也扮演著重要角色。近年研究發(fā)現(xiàn)除維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)外,Treg細胞也定居于某些正常組織,稱為組織定居Treg細胞。研究表明,AIRE敲除小鼠胸腺中Treg比例顯著低于野生型小鼠。并且人類AIRE基因突變引起的自身免疫病中也發(fā)現(xiàn)Treg細胞受損,提示Treg細胞缺陷可能與AIRE缺失有關(guān)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),將AIRE敲除鼠和野生鼠的BMDC分別和初始CD4+T細胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)AIRE敲除鼠組的Treg細胞數(shù)量明顯少于野生組;將轉(zhuǎn)導AIRE的BMDC通過尾靜脈注射至1型糖尿病模型NOD鼠中,小鼠脾臟中CD4+Treg細胞數(shù)量明顯增多。提示AIRE可能影響CD4+Treg細胞的產(chǎn)生,但AIRE具體影響何種類型Treg細胞及其作用機制尚不清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)在胰腺中富集的CXCR3+Treg細胞與NOD鼠糖尿病發(fā)病密切相關(guān)。T-bet+CXCR3+Treg細胞的缺失導致NOD鼠糖尿病患病概率大大增加,胰腺炎癥狀明顯加重。IL-35具有調(diào)控T-bet+CXCR3+Treg細胞產(chǎn)生的作用。因此我們設想,AIRE是否可通過調(diào)控DC上的分子（如IL-35）表達進而影響T-bet+CXCR3+Treg細胞分化從而抑制1型糖尿病。基于上述設想,本文將AIRE轉(zhuǎn)導的BMDC尾靜脈注射至NOD鼠體內(nèi),觀察其對NOD鼠的治療或預防作用,進而探討AIRE是否通過調(diào)控IL-35的表達從而影響T-bet+CXCR3+Treg細胞的分化:一.觀察過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet+CXCR3+Treg細胞的影響為了了解過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet+CXCR3+Treg細胞的影響,我們通過轉(zhuǎn)染表達AIRE的慢病毒載體至BMDC,建立過表達AIRE的BMDC,將其經(jīng)尾靜脈注射至NOD鼠體內(nèi),結(jié)果發(fā)現(xiàn)表達AIRE的BMDC對NOD鼠有明顯的治療/預防作用,且預防組/治療組胰腺、脾臟、胰腺引流淋巴結(jié)中T-bet+CXCR3+Treg細胞比例顯著高于對照組,提示過表達AIRE的BMDC可能影響NOD鼠T-bet+CXCR3+Treg細胞產(chǎn)生。二.研究過表達AIRE的BMDC對T-bet+CXCR3+Treg細胞的影響及其機制為了明確過表達AIRE的BMDC對T-bet+CXCR3+Treg細胞分化的影響,將過表達AIRE的BMDC與初始CD4+T細胞進行共培養(yǎng),通過流式細胞術(shù)檢測Tbet+CXCR3+Treg細胞變化,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染AIRE組的T-bet+CXCR3+Treg細胞比例高于對照組,說明過表達AIRE的BMDC可能影響T-bet+CXCR3+Treg細胞分化。進一步研究過表達AIRE的BMDC是否通過IL-35影響T-bet+CXCR3+Treg細胞分化,結(jié)果顯示過表達AIRE的BMDCs中IL-35的表達量高于對照組;進而在體外將轉(zhuǎn)導AIRE的BMDC經(jīng)IL-35抗體阻斷后,與初始CD4+T細胞共培養(yǎng),結(jié)果顯示阻斷IL-35表達之后,T-bet+CXCR3+Treg細胞數(shù)量低于未阻斷組。最后,將轉(zhuǎn)導AIRE的BMDC中的IL-35基因沉默,再移植至NOD鼠體內(nèi),結(jié)果顯示在NOD鼠體內(nèi),IL-35沉默組的T-bet+CXCR3+Treg細胞數(shù)量小于AIRE組,說明AIRE可通過調(diào)控IL-35的表達進而影響T-bet+CXCR3+Treg細胞分化,進而可能影響NOD鼠糖尿病的發(fā)展。本研究表明,AIRE可通過調(diào)控IL-35的表達進而影響T-bet+CXCR3+Treg細胞分化,從而可能在NOD鼠糖尿病發(fā)生中發(fā)揮抑制作用。這為全面了解外周AIRE的功能及意義提供實驗依據(jù),并AIRE治療（預防）自身免疫病提供可能的思路。
賈佳[6]（2021）在《芪葵顆粒調(diào)節(jié)1型糖尿病Th17/Treg平衡的實驗研究及T1DM臨床證型的橫斷面分析》文中進行了進一步梳理目的1.進行芪葵顆粒誘導的imDC干預初始T細胞的1型糖尿?。═1DM）相關(guān)NOD小鼠的體內(nèi)實驗,闡明芪葵顆粒通過誘導生成imDC（1）促使T細胞向Treg分化,上調(diào)抑炎因子IL-10分泌,減輕炎癥反應,恢復Th17/Treg平衡;（2）導致T細胞克隆無能,無法分泌IL-2,從而建立免疫耐受,是其發(fā)揮預防和減輕T1DM的作用途徑和有效機制。芪葵顆粒調(diào)節(jié)免疫作用機制的闡明,為芪葵顆粒的臨床應用提供客觀依據(jù),予以中醫(yī)治未病理論運用于T1DM預防科學支持。2.通過臨床研究,觀察T1DM患者中醫(yī)證候特點,探討T1DM患者各中醫(yī)證型與血糖控制水平及并發(fā)癥的相關(guān)性。3.根據(jù)臨床研究,分析T1DM患者免疫、炎癥指標的變化特征。方法1實驗研究成熟的樹突狀細胞其抗原提呈功能增強,破壞T細胞分化導致破免疫耐受失衡,引起胰島β細胞自身免疫性炎癥,是T1DM致病的重要機制。本研究基于NOD小鼠T1DM的發(fā)病過程,采用芪葵顆粒干預NOD小鼠胰島炎及T1DM模型,觀察芪葵顆粒對T細胞免疫耐受的影響。檢測芪葵顆粒對NOD小鼠和NOD小鼠T1DM血糖、發(fā)病的影響、調(diào)控DC細胞成熟、調(diào)節(jié)Th17/Treg的能力及調(diào)節(jié)IL-10、IL-17的能力。探討芪葵顆粒通過形成未成熟樹突狀細胞,促進Th17/Treg恢復平衡及導致T細胞克隆無能,誘導免疫耐受,從而發(fā)揮預防和治療1型糖尿病的作用機制。2臨床研究2.1回顧性分析2012年1月～2019年12月在南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院治療的1型糖尿病患者,分析患者的臨床資料、理化指標、急慢性并發(fā)癥等,并依據(jù)國家中醫(yī)藥管理局印發(fā)的“消渴?。?型糖尿?。┲嗅t(yī)診療方案（2017年版）”、中華中醫(yī)藥學會《糖尿病中醫(yī)防治指指南》（2007年）和“國家中醫(yī)藥管理局‘十一五’重點?？茀f(xié)作組消渴病（2型糖尿?。┰\療方案”,對所收集的T1DM患者進行中醫(yī)辨證,應用SPSS統(tǒng)計軟件,分析T1DM患者中醫(yī)證型與西醫(yī)理化指標、并發(fā)癥的相關(guān)性,總結(jié)T1DM中醫(yī)證型分布的臨床意義和證型發(fā)展的規(guī)律。2.2選取2015年1月～2019年12月在南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院治療的糖尿病患者及門診隨訪的健康人群,應用SPSS統(tǒng)計軟件,對所收集的T1DM病例檢測T細胞亞群、細胞因子十二項、免疫五項,以分析T1DM的免疫異常情況,以利于更好的研究T1DM的免疫發(fā)病機制。結(jié)果1實驗研究1.1芪葵顆粒給藥可干擾NOD小鼠糖尿病發(fā)病,降低作用機制可能與保護胰島C-肽功能有關(guān)。1.2芪葵顆粒能夠減輕T1DM小鼠癥狀,保護胰島C-肽功能。1.3芪葵顆粒能夠抑制NOD小鼠及T1DM小鼠模型中DC細胞成熟,減少成熟DC細胞數(shù)量,提高DC細胞抗原提取的能力、DC刺激T細胞增殖能力,降低IL-2和IL-12的表達水平。1.4芪葵顆粒能夠增加NOD小鼠及T1DM小鼠模型中Treg/Th17比率,升高Foxp3表達水平。1.5芪葵顆粒能夠減輕NOD小鼠及T1DM小鼠模型中炎癥,降低IL-17表達水平,升高IL-10表達水平。2 臨床研究2.1 T1DM患者主證中氣陰兩虛證患者最多（88.76%）,陰虛火旺證者次之（11.33%）,陰陽兩虛證所占比例最低（1.18%）,兼證分布血瘀證最多,痰濕證其次。T1DM主證、兼證與T1DM年齡、BMI、病程、FBG、PBG、HbA1c及急性并發(fā)癥并無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）。慢性并發(fā)癥方面,陰虛火旺證的糖尿病腎病發(fā)生率明顯高于其他各組（P<0.05）。比較其余各組中醫(yī)證型的DPN、DR、動脈粥樣硬化、冠心病、腦梗的發(fā)生率,差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。2.2 T1DM患者的IL-10、IFN-y、IL-8、IL-12P70、TNF-α低于2型糖尿病患者及正常人群（P<0.05）;T1DM患者較正常人群相比,免疫功能降低（P<0.05）。結(jié)論1.動物實驗證實芪葵顆粒能夠抑制DC成熟,釋放抑炎細胞因子IL-10,上調(diào)表達Foxp3,促進Treg細胞生成,負性調(diào)控Th17細胞的生成和分化,調(diào)節(jié)Th17/Treg細胞平衡,并致T細胞克隆無能,從而誘導免疫耐受。這條路徑可能是芪葵顆粒防治T1DM的作用機制。2.臨床觀察發(fā)現(xiàn)T1DM中醫(yī)辨證分型與糖尿病腎病發(fā)生相關(guān),與其他理化指標及并發(fā)癥的相關(guān)性不大。3.臨床研究提示T1DM患者存在免疫異常,與正常人相比明顯免疫力減低。
郭云柯[7]（2020）在《滋陰疏肝法對原發(fā)性干燥綜合征B淋巴細胞的影響及雷公藤甲素對NOD小鼠唾液腺損傷的研究》文中指出研究目的經(jīng)過多年的臨床觀察,我們發(fā)現(xiàn)原發(fā)性干燥綜合征（pSS）患者出現(xiàn)焦慮癥、抑郁癥或合并焦慮狀態(tài)、抑郁狀態(tài)者非常多,這與患者因疾病引起的不適癥狀、藥物的不良反應等均有密切關(guān)系。祖國醫(yī)學中,郁責之于肝,郁證的發(fā)生與肝密切相關(guān)。故我們認為pSS以肝陰（血）不足、肝失疏泄為主要病機,提出以滋陰疏肝為治療大法,運用一貫煎加減方治療pSS陰虛肝郁證患者。本研究:1.在從肝論治,滋陰疏肝理論指導下運用一貫煎加減方治療pSS陰虛肝郁證患者,通過臨床觀察和動物實驗,從多角度系統(tǒng)探討從肝論治,滋陰疏肝治療pSS的理論和臨床依據(jù)。2.通過JAK/STAT和NF-K B信號通路,觀察不同劑量雷公藤甲素對NOD小鼠唾液腺損傷的療效,探討雷公藤甲素治療pSS的機制。研究方法1.一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者療效及B淋巴細胞影響的臨床研究本研究選擇60例江蘇省中醫(yī)院已經(jīng)確診的pSS陰虛肝郁證患者,10例健康對照者為研究對象,取pSS陰虛肝郁證患者及健康對照者外周血5-10ml,檢測B細胞活化、分化表面標記、Tfh細胞比率、B細胞增殖能力、B細胞凋亡水平及IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10和IL-27水平。再將pSS陰虛肝郁證患者分為2組,試驗組30例,對照組30例,分別服用一貫煎加減方及羥氯喹,觀察治療前后的臨床療效,以及測定治療后B細胞活化、分化表面標記、Tfh細胞比率、B細胞增殖能力、B細胞凋亡水平以及血清IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10 和 IL-27 水平。2.一貫煎加減方對NOD小鼠B淋巴細胞的影響選擇NOD小鼠60只及正常ICR小鼠10只,NOD小鼠隨機分為6組,每組10只,即模型組、高濃度復方藥組、中濃度復方藥組、低濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組,ICR小鼠為正常組。觀察小鼠每天飲水量,每周測定小鼠唾液流量,8周后處死小鼠,計算脾指數(shù)、頜下腺指數(shù),測定每組小鼠外周血B細胞活化、分化表面標記、Tfh細胞比率、B細胞增殖能力、B細胞凋亡水平以及血清IgG、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、BAFF和IL-27水平。3.雷公藤甲素（TP）通過JAK/STAT和NF-κB信號通路減輕NOD小鼠唾液腺損傷的研究選擇雌性NOD小鼠48只,隨機分為4組,每組12只,即對照組（安慰劑）小劑量TP組、中劑量TP組、大劑量TP組。每隔2周檢測小鼠唾液分泌量。90天后處死小鼠,取唾液腺和脾臟稱重,計算唾液腺指數(shù)和脾臟指數(shù);檢測TNF-α、IL-2和IL-6;取唾液腺,評價組織病理學;分析小鼠唾液腺淋巴細胞分布;進行脾臟T細胞和B細胞增殖試驗;提取唾液腺組織蛋白,檢測蛋白表達情況。研究結(jié)果1.一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者療效及B淋巴細胞影響的臨床研究1.1對ESR、CRP、球蛋白、免疫球蛋白的影響:治療12周后,治療組血沉、C反應蛋白、球蛋白、IgG與治療前比較有顯著差異（P<0.05）,IgA、IgM與治療前比較無顯著差異（P>0.05）。對照組血沉、球蛋白、IgG與治療前比較有顯著差異（P<0.05）,C反應蛋白、IgA、IgM無顯著差異（P>0.05）。治療組治療后與對照組治療后比較,血沉、C反應蛋白、球蛋白、IgG、IgA、IgM均無顯著差異（P>0.05）。1.2對淚流量、唾液流率的影響:治療12周后,治療組雙眼淚流量、唾液流率與治療前比較有顯著差異（P<0.05）,對照組雙眼淚流量、唾液流率與治療前比較無顯著差異（P>0.05）,治療組治療后與對照組治療后比較,雙眼淚流量、唾液流率有顯著差異（P<0.05）。1.3對焦慮、抑郁自評量表的影響:治療12周后,治療組焦慮、抑郁自評量表與治療前比較有顯著差異（P<0.05）,對照組焦慮、抑郁自評量表與治療前比較無顯著差異（P>0.05）,治療組治療后與對照組治療后比較,焦慮、抑郁自評量表有顯著差異（P<0.05）。1.4對外周血B細胞活化的影響:治療前,與健康對照者比較,治療組和對照組外周血B細胞活化率均顯著增加,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組外周血B細胞活化率均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組外周血B細胞活化率組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1.5對外周血B細胞分化的影響:治療前,與健康對照者比較,治療組和對照組外周血B細胞分化（分化為記憶B細胞）率顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組外周血B細胞分化率均顯著提升,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組外周血B細胞分化率組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1.6對外周血Tfh細胞比率的影響:治療前,與健康對照者比較,對照組和對照組外周血Tfh細胞比率（Q2象限）顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組外周血Tfh細胞比率均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組外周血Tfh細胞比率組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1.7對外周血B細胞增殖的影響:治療前,與健康對照者比較,治療組和對照組外周血B細胞增殖率顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組外周血B細胞增殖率均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組外周血B細胞增殖率組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1.8對外周血B細胞凋亡的影響:治療前,與健康對照者比較,治療組和對照組外周血B細胞凋亡率顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組外周血B細胞凋亡率均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組外周血B細胞凋亡率組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1.9對血清細胞因子的影響:治療前,與健康對照者比較,治療組和對照組血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-27、IFN-γ等炎癥細胞因子水平均顯著增加,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與治療前比較,治療后,治療組和對照組血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-27、IFN-γ等炎癥細胞因子水平均顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;但治療組和對照組上述指標的組間差異均無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）。2.一貫煎加減方對NOD小鼠B淋巴細胞的影響2.1對NOD小鼠飲水量、唾液流量、脾臟指數(shù)、頜下腺指數(shù)的影響:與空白組相比,NOD小鼠飲水量增加,唾液流量減少,脾臟指數(shù)、頜下腺指數(shù)基本相同。2.2對外周血B細胞活化的影響:與空白組比較,模型組外周血B細胞活化率顯著增加差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血B細胞活化率均有降低,其中低濃度復方藥組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）,中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組差異均具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。2.3對外周血B細胞分化的影響:與空白組比較,模型組外周血B細胞分化（分化為記憶B細胞）率顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血B細胞分化率均有所提升,其中低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、雷公藤組無統(tǒng)計學差異（P均>0.05）;高濃度復方藥組、羥氯喹組差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。2.4對外周血Tfh細胞比率的影響:與空白組比較,模型組外周血Tfh細胞比率（Q2象限）顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血Tfh細胞比率均有所降低,其中低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、雷公藤組差異無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）;高濃度復方藥組、羥氯喹組差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。2.5對外周血B細胞增殖的影響:與空白組比較,模型組外周血B細胞增殖率顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血B細胞增殖率均有所降低,其中低濃度復方藥組、中濃度復方藥組無統(tǒng)計學意義（P均>0.05）,高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組差異有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。2.6對外周血B細胞凋亡的影響:與空白組比較,模型組外周血B細胞凋亡率顯著升高,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血B細胞凋亡率均有所下降,其中低濃度復方藥組、中濃度復方藥組無統(tǒng)計學差異（P均>0.05）;高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組差異具有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）。2.7對血清細胞因子的影響:與空白組比較,模型組BAFF、IFN-γ、IgG、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;與模型組比較,低濃度復方藥組、中濃度復方藥組、高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組上述指標均有所下降,其中低濃度復方藥組 BAFF、IFN-γ、IgG、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27 水平無統(tǒng)計學差異（P 均>0.05）;中濃度復方藥組IL-4水平無統(tǒng)計學差異（P>0.05）,BAFF、IFN-γ、IgG、IL-6、IL-10、IL-27水平有統(tǒng)計學差異（P均<0.05）;高濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組BAFF、IFN-γ、IgG、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27 水平均有統(tǒng)計學差異（P 均<0.05）。3·雷公藤甲素（TP）通過JAK/STAT和NF-κB信號通路減輕NOD小鼠唾液腺損傷的研究3.1 TP對NOD小鼠唾液腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和唾液流量的保護作用:TP組NOD小鼠唾液腺指數(shù)顯著高于對照組,脾臟指數(shù)明顯低于對照組。對照組NOD小鼠唾液流量隨時間延長而降低。第6～12周唾液流速明顯低于TP組。隨著TP濃度的增加,唾液流速與對照組相比差異較大。3.2 TP抑制NOD小鼠自身免疫損傷:TP治療組有少量淋巴細胞浸潤,無淋巴結(jié)形成。組織病理學評分分別為2.4±0.18、1.8±0.17和1.5±0.19。與對照組相比,TP治療組NOD小鼠血清中IgG、IgM、IL-2、IL-6和TNF-α抗體水平顯著降低。CD4+、CD8+和B220+/CD45+細胞顯著減少。與0.05%二甲基亞砜相比,TP處理的NOD小鼠脾臟中T細胞和B細胞的增殖顯著降低。3.3 TP抑制NOD小鼠唾液腺JAK/STAT和NF-κB信號通路:Western blot結(jié)果顯示,TP通過抑制JAK1/2和STAT的磷酸化顯著抑制JAK/STAT信號通路;通過抑制p65和Iκ Bα的磷酸化顯著抑制NF-κB信號通路。3.4 TP通過抑制JAK/STAT和NF-κB信號通路降低IFN-γ誘導的唾液腺上皮細胞炎癥損傷:10ng/ml、20ng/ml和40ng/ml的TP處理72h后,細胞活性無明顯變化。TP顯著抑制炎癥因子的表達。TP對JAK1/2、STAT3、IκBα、NF-κB的表達水平無明顯影響,但p-JAK1/2、p-STAT3、p-IκBα 和 p-NF-κB被顯著抑制（p<0.001）。結(jié)論1.一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者療效及B淋巴細胞影響的臨床研究1.1與健康人相比,pSS患者B細胞活化、增殖、凋亡明顯增加,記憶B細胞減少,Tfh細胞比率明顯增高,經(jīng)過治療后B細胞活化數(shù)量減少,增殖水平下降,凋亡減少,記憶B細胞增多,漿細胞減少,血Tfh細胞比率降低。1.2pSS患者血清中IL-4、IL-6、IL-10、IL-27、IFN-γ細胞因子水平增加,經(jīng)治療后IL-4、IL-6、IL-10、IL-27、IFN-γ細胞因子水平降低。1.3一貫煎加減方能降低pSS患者血沉、C反應蛋白、球蛋白、IgG指數(shù),對B淋巴細胞有調(diào)節(jié)作用,與羥氯喹相比未見明顯統(tǒng)計學差異,但在改善患者干燥癥狀及情緒方面顯示出了較好療效。為一貫煎加減方治療原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者提供了較好的理論基礎(chǔ)。2.一貫煎加減方對NOD小鼠B淋巴細胞的影響2.1與空白組相比,NOD小鼠飲水量增加,唾液流量減少,脾臟指數(shù)、頜下腺指數(shù)基本相同。2.2 NOD小鼠外周血B細胞活化率、外周血Tfh細胞比率、外周血B細胞增殖率、外周血B細胞凋亡率顯著增加,外周血B細胞分化（分化為記憶B細胞）率顯著降低,BAFF、IFN-γ、IgG、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27 水平明顯升高。2.3低、中、高不同濃度復方藥組、雷公藤組、羥氯喹組外周血B細胞活化率、外周血Tfh細胞比率、外周血B細胞增殖率、外周血B細胞凋亡率均有所降低,外周血B細胞分化率均有所提升,BAFF、IFN-γ、IgG、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27水平亦有所下降。其中高濃度復方組、雷公藤組、羥氯喹組顯示出了較好的療效。3.雷公藤甲素（TP）通過JAK/STAT和NF-κB信號通路減輕NOD小鼠唾液腺損傷的研究3.1隨著年齡的增長,對照組NOD小鼠的唾液流量逐漸降低,唾液腺內(nèi)出現(xiàn)更嚴重的淋巴細胞浸潤性病變。小鼠血清中IgG和IgM濃度逐漸升高,炎癥因子表達增加。3.2與對照組相比,TP治療組明顯改善了唾液腺流速,減少了淋巴細胞浸潤,IgG和IgM濃度及炎性因子的表達。TP抑制了T、B淋巴細胞增殖,改善NOD小鼠干燥癥狀,且沒有明顯的組織損傷。3.3 TP通過抑制JAK/STAT途徑和NF-κB途徑,減輕NOD小鼠的炎癥反應和組織損傷。
馬占川[8]（2020）在《MDSC分泌的Arg-1對腸炎小鼠Th17細胞的影響及橡黃素治療機制的研究》文中指出研究背景與目的:在炎癥性腸炎（Inflammatory bowel disease,IBD）中,多種免疫細胞和腸道菌群相互影響共同導致腸炎進展。其中,由于Th17細胞在腸炎中的關(guān)鍵作用成為近年來研究的熱點。我們先前的研究結(jié)果表明髓系來源抑制性細胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSC）通過分泌 Ⅰ 型精氨酸酶（arginase-1,Arg-1）促進Th17細胞的分化,從而加重系統(tǒng)性紅斑狼瘡的進展。但是在炎癥性腸炎中,MDSC與Th17細胞的關(guān)系仍不明確,阻礙了腸炎治療的研究。此外,橡黃素在腸炎治療中的表現(xiàn)出一定功效,但其作用機制還有待于進一步研究。因此,本研究以髓系細胞Arg-1敲除（ArgmyeKO）小鼠構(gòu)建腸炎模型,研究MDSC對Th17細胞功能的影響,并探究橡黃素在腸炎治療中的作用機制,為炎癥性腸炎的治療提供新的思路。研究方法:（1）3.5%葡聚糖硫酸鈉喂養(yǎng)ArgmyeKO小鼠或野生型小鼠8～12天得到腸炎小鼠。從喂養(yǎng)之日起每天記錄小鼠體重,對糞便硬度,糞便潛血水平進行評分,直至小鼠死亡,測量結(jié)直腸長度。以時間為橫坐標評分為縱坐標繪制腸炎小鼠疾病得分曲線,以時間為橫坐標存活率為縱坐標繪制腸炎小鼠生存曲線,對比兩組腸炎小鼠結(jié)直腸長度,借此評估腸炎狀態(tài)下Arg-1對小鼠的影響。（2）流式分選純化腸炎小鼠脾臟MDSC,與帶有CFSE標記的CD3、CD28刺激的小鼠T細胞共培養(yǎng)3天,流式檢測評估Arg-1敲除對MDSC功能的影響。（3）在腸炎發(fā)病前后收集小鼠外周血,脾臟細胞以及派氏集合淋巴結(jié)細胞檢測MDSC、Th17細胞、Treg細胞以及γδT細胞的比例。取腸炎小鼠結(jié)直腸做HE染色評估免疫細胞浸潤狀態(tài)和腸粘膜屏障受損情況。（4）流式檢測腸炎小鼠MDSC Arg-1的分泌,檢測Th17細胞IL-17A、IL-17F以及IL-22的分泌;熒光定量PCR檢測腸炎小鼠結(jié)直腸組織中ACTI、IL-22、IL-23、OCLN、COX-2 的表達。（5）流式分選純化野生型小鼠脾臟MDSC,轉(zhuǎn)輸給ArgmyeKO小鼠,記錄小鼠體重,糞便硬度,便血程度,結(jié)直腸長度。流式檢測轉(zhuǎn)輸MDSC后腸炎小鼠派氏集合淋巴結(jié)和腸黏膜淋巴結(jié)中Th17細胞IL-17A、IL-17F的表達水平。（6）在第0,3,5,7天給腸炎小鼠腹腔注射橡黃素,橡黃素用量按0.5 μM/g體重計算。記錄小鼠體重,糞便硬度,便血程度,結(jié)直腸長度。流式檢測腸炎小鼠外周血,脾臟以及腸道固有層中MDSC 比例以及Arg-1和pSTAT3的水平,分選脾臟MDSC熒光定量PCR檢測ESRI、ESR2的水平,檢測小鼠脾臟和外周血派氏集合淋巴結(jié)和腸黏膜淋巴結(jié)中Th17細胞和γδT細胞IL-17A、IL-17F的表達水平。熒光定量PCR檢測橡黃素治療后腸炎小鼠結(jié)直腸組織中ACT1、IL-22、IL-23、OCLN、COX-2 的表達。研究結(jié)果:（1）腸炎期間Argmye KO小鼠體重下降明顯,便血嚴重,腸組織中大量免疫細胞浸潤,死亡率高于WT組小鼠。（2）腸炎期間ArgmyeKO小鼠結(jié)直腸組織IL-17A表達水平低于WT組小鼠;IL-17F表達水平高于WT組小鼠。ArgmyeKO小鼠派氏集合淋巴結(jié)中Th17細胞IL-17A的分泌量低于WT組小鼠,而IL-17F表達量則高于WT組小鼠。（3）腸炎期間ArgmyeKO小鼠腸組織和外周血中MDSC L比例低于WT組小鼠;其中M-MDSC 比例顯著低于WT組,G-MDSC 比例組間無統(tǒng)計學意義。脾臟MDSC 比例在組間無統(tǒng)計學意義。此外,ArgmyeKO小鼠MDSC三個抑制分子Arg-1,iNOS,IDO表達水平低于WT組小鼠。ArgmyeKO小鼠結(jié)直腸中ACT1和COX-2表達量高于WT組小鼠;IL-22,IL-23,OCLN表達量在ArgmyeKO小鼠結(jié)直腸中更低。（4）轉(zhuǎn)輸WT來源的MDSC后,ArgmyeKCO小鼠便血減輕,體重流失程度減輕,結(jié)直腸比對照組小鼠更長。流式結(jié)果顯示轉(zhuǎn)輸MDSC后,ArgmyeKO小鼠派氏集合淋巴結(jié)和腸黏膜淋巴結(jié)中Th17細胞分泌更多的IL-17A;而IL-17F的表達量低于對照組。（5）給予橡黃素治療后,腸炎小鼠疾病評分降低,體重降低程度減輕,結(jié)直腸長度比對照組小鼠更長。流式結(jié)果顯示治療組小鼠外周血,脾臟和腸組織中MDSC 比例明顯升高。MDSC表面雌激素受體表達量上升,胞內(nèi)pSTAT3水平提高,MDSC分泌更多Arg-1。（6）給予橡黃素治療后,腸炎小鼠結(jié)直腸組織IL-17A、IL-17F表達量升高。流式結(jié)果顯示派氏集合淋巴結(jié),腸黏膜淋巴結(jié)中Th17細胞和γδ T細胞分泌更多IL-17A;而IL-17F水平也高于對照組小鼠。治療組小鼠結(jié)直腸中ACT1,IL-22,IL-23和OCLN表達量高于對照組小鼠;COX-2表達水平下降。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)在DSS誘導的小鼠結(jié)腸炎模型中,激活MDSC中ESR/STAT3信號通路可以上調(diào)MDSC Arg-1的分泌水平。經(jīng)橡黃素治療后,腸炎小鼠體內(nèi)MDSC 比例顯著升高并分泌大量Arg-1。Arg-1提高Th17細胞IL-17A的表達同時抑制IL-17F的水平,促進腸粘膜修復相關(guān)因子的表達,從而緩解腸炎。我們的數(shù)據(jù)強調(diào)了 MDSC來源的Arg-1在小鼠腸炎中對Th17細胞IL-17A和IL-17F的調(diào)節(jié)作用,揭示了橡黃素緩解腸炎發(fā)病的機制,并為腸炎的治療提供了新的思路。
盧夏英[9]（2020）在《MKP-1作為潛在抗炎藥物作用靶點用于治療膿毒癥的研究》文中研究指明膿毒癥（Sepsis）是由感染引起的全身炎癥反應綜合,可導致多器官功能障礙甚至死亡。膿毒癥是當前重癥監(jiān)護病房（Intensive Care Unit,ICU）面臨的棘手難題,是除冠心病外ICU病人死亡的首要原因。一方面因為膿毒癥由不同的微生物引起,導致相應的疫苗難以開發(fā);另一方面,由于抗生素的濫用,耐藥菌株不斷產(chǎn)生,應用抗生素控制感染越發(fā)困難。因此,盡管對于膿毒癥的發(fā)病機制的研究取得了很大的進展,目前對于膿毒癥的治療,仍然沒有特效的藥物。所以,人們迫切需要發(fā)展新型的治療膿毒癥的方法。第一部分DUSP1啟動子熒光素酶報告基因RAW264.7細胞體系的建立以及測試絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1（Mitogen-activated protein kinase phosphatase 1,MKP-1）是一種可誘導的細胞核磷酸酶,能使絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPKs）去磷酸化,因此,它是MAPK活動的負性調(diào)控因子。研究發(fā)現(xiàn)MKP-1在固有免疫和適應性免疫反應中都是一個關(guān)鍵的內(nèi)源性負性調(diào)控因子,用敲除MKP-1的小鼠研究發(fā)現(xiàn)MKP-1對于膿毒癥小鼠具有保護作用。而且,某些抗炎藥物能使MKP-1的表達和蛋白功能上調(diào),如糖皮質(zhì)激素,MKP-1也調(diào)控它們的抗炎作用。因此,MKP-1可以作為一個潛在抗炎藥物作用的靶點。在本研究,我們想明確哪些藥物通過上調(diào)MKP-1發(fā)揮抗炎作用,并且旨在通過上調(diào)MKP-1篩選出新的抗炎藥物。因此,我們構(gòu)建了一個含MKP-1基因DUSP1的啟動子和熒光素酶報告基因的RAW264.7細胞穩(wěn)定表達細胞系。通過96孔板逐步稀釋法獲得了 13個單克隆,其中2個克隆用LPS誘導24 h其熒光素酶活性分別是對照組的7.6和8.8倍;用地塞米松和Rolipram都能使LPS誘導的熒光素酶活性增強;用LPS分別刺激穩(wěn)定表達細胞6 h、12 h、24 h和36 h發(fā)現(xiàn)24 h熒光素酶的生成量達到最高,與刺激時間存在依賴關(guān)系。這些數(shù)據(jù)表明含MKP-1啟動子和熒光素酶報告基因的RAW264.7細胞穩(wěn)定表達體系構(gòu)建成功,通過96孔板可高效篩選抗炎藥物;Rolipram能上調(diào)MKP-1啟動子的活性,推測Rolipram可能對炎癥性疾病如膿毒癥和膿毒性休克具有保護作用。第二部分 Rolipram對膿毒癥小鼠治療作用的研究研究發(fā)現(xiàn)MKP-1對于膿毒癥和膿毒性休克小鼠具有保護作用。我們在第一部分用構(gòu)建的穩(wěn)定表達MKP-1啟動子熒光素酶報告基因的RAW264.7細胞體系篩選抗生素時發(fā)現(xiàn),Rolipram能增加MKP-1啟動子的活性。而且,Rolipram在膿毒癥和膿毒性休克小鼠保護作用的研究未見報道。因此我們提出假設:Rolipram對于炎癥性疾病如膿毒癥和膿毒性休克具有保護作用。為了驗證這一假設,我們進行了細胞實驗和動物實驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn),Rolipram能使LPS引起的RAW264.7細胞釋放炎癥細胞因子減少。在動物模型,Rolipram預防性給藥能使LPS引起的膿毒癥小鼠的存活率從29.2%提高到100%;Rolipram治療性給藥能使LPS引起的膿毒癥小鼠的存活率從36.4%提高到100%;用Luminex技術(shù)檢測小鼠血清發(fā)現(xiàn)Rolipram能降低TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-5、IL-12（p40）的產(chǎn)生,能增強抗炎因子IL-10的生成,能抑制趨化因子MCP-1、IP-10、MIP-1β、MIP-2、Eotaxin、KC、MIG和LIF的生成,以及抑制生長因子VEGF的生成;肺、肝和腎HE染色顯示Rolipram能減輕這些器官的損傷。肺泡灌洗液實驗發(fā)現(xiàn)Rolipram能減輕LPS引起的肺炎癥反應,小鼠血清肝和腎生化指標檢測發(fā)現(xiàn)Rolipram能抑制ALT、AST、Cr和BUN的生成;Western-blot結(jié)果顯示Rolipram能抑制LPS引起的肺組織NF-κB p65磷酸化以及ERK,JNK和p38 MAPK的磷酸化,免疫熒光結(jié)果顯示Rolipram能抑制肺組織NF-κB p65入核;Rolipram還能改善致病性大腸桿菌引起的膿毒癥小鼠和CLP模型小鼠的存活率。因此我們得出結(jié)論,Rolipram能抑制LPS引起的RAW264.7細胞釋放炎癥細胞因子,對于LPS引起的膿毒癥小鼠、大腸桿菌引起的膿毒癥小鼠和CLP模型小鼠具有保護作用。本研究表明上調(diào)MKP-1可能成為治療炎癥性疾病的策略,如膿毒癥和膿毒性休克。Rolipram可用于治療膿毒癥和膿毒性休克,而它是美國批準的用于治療COPD的藥物,這種“Drug re-positionl strategy”相對于開發(fā)新藥而言,節(jié)省了大量的時間、精力和金錢。
劉芮伶[10]（2020）在《MiR-21-Tipe2調(diào)控口服免疫耐受和miR-21-Pdcd4調(diào)控葡萄糖耐受的機制研究》文中認為miR-21是較早發(fā)現(xiàn)的人類微小RNA（miRNA）之一,其作為癌基因參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控,在細胞的分化、增殖以及凋亡中等都發(fā)揮著非常重要的作用。雖然關(guān)于miR-21在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中的作用和機制研究取得了較大的進展,但是由于miR-21可以調(diào)控多個靶點的表達,因此越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miR-21在其它的生物學功能中也發(fā)揮了重要的作用。樹突狀細胞（DC）在免疫調(diào)控中發(fā)揮了重要的作用。骨髓來源的樹突狀細胞（BMDCs）在分化完成以后處于半成熟狀態(tài),可發(fā)揮免疫耐受的作用,而BMDCs在遇到刺激以后可變成完全成熟的狀態(tài),從而激活相關(guān)的免疫反應,因此DC的分化和發(fā)育有一個從半成熟到成熟的過程,而半成熟和成熟階段的DC對免疫反應可發(fā)揮相反的調(diào)控作用。有研究報道m(xù)iR-21在腎缺血再灌注模型中抑制DC的完全成熟,我們的前期研究發(fā)現(xiàn)miR-21在BMDCs的分化過程中抑制DC的半成熟,而作為miR-21的直接靶基因,雖然腫瘤壞死因子-α誘導蛋白8樣2（TNFAIP8L2或Tipe2）抑制刺激介導的DC完全成熟,但是在BMDCs的分化過程中Tipe2促進細胞的半成熟。雖然miR-21和Tipe2在調(diào)控DC完全成熟過程中的作用和機制已經(jīng)有了相關(guān)的研究,但由于調(diào)控DC半成熟和完全成熟的機制不盡相同,因此miR-21和Tipe2在BMDCs分化過程中調(diào)控DC半成熟的機制及在免疫耐受中的作用目前尚不清楚;此外,亦有報道在胰島細胞株中過表達miR-21降低GSIS（葡萄糖刺激介導的胰島素分泌）。但是,考慮到利用細胞株和過表達微小RNA進行研究的局限性,從細胞株中得到的結(jié)論仍然需要在原代細胞中進行驗證,而利用基因缺失小鼠來進行相關(guān)研究仍然是揭示疾病發(fā)病機制的金標準。在本研究中,我們利用miR-21全身性缺失小鼠(miR-21-/-)、Tipe2全身性缺失小鼠(Tipe2-/-)和miR-21胰島β細胞特異性缺失小鼠（miR-21βKO）來探索miR-21及其靶基因調(diào)控口服免疫耐受和葡萄糖耐受的機制。我們的結(jié)果主要體現(xiàn)在以下兩個方面:1.miR-21-Tipe2通路在BMDCs分化過程中抑制DC半成熟并促進口服免疫耐受通過檢測BMDCs分化過程中miR-21和Tipe2的表達,我們發(fā)現(xiàn)miR-21和Tipe2的表達呈現(xiàn)負相關(guān)的關(guān)系,即在BMDCs分化初期miR-21的表達水平較低,Tipe2的表達水平較高,而在BMDCs分化后期miR-21的表達水平逐漸升高,Tipe2的表達水平逐漸降低。已知Tipe2是miR-21的直接調(diào)控靶點,我們的數(shù)據(jù)也顯示在缺失miR-21的BMDCs中Tipe2的表達較WT（野生型,wild type）明顯升高,并且缺失miR-21的BMDCs表達更強的成熟標志,而缺失Tipe2的BMDCs表達較低的成熟標志,因此我們認為miR-21可能通過負調(diào)控Tipe2的表達從而在BMDCs分化過程中抑制細胞半成熟。機制研究發(fā)現(xiàn),Tipe2在BMDCs分化過程中可以激活PDK1-PKC?-MAPK信號通路,進而促進BMDCs成熟標志的表達。成熟度低的DC可以在外周誘導調(diào)節(jié)性T細胞（pTregs）的產(chǎn)生,我們的研究發(fā)現(xiàn),Tipe2的缺失導致腸道粘膜中外周調(diào)節(jié)性T細胞（pTreg）的比例顯著增加。2.miR-21-Pdcd4通路維持葡萄糖耐受通過比較野生型和miR-21βKO小鼠的葡萄糖耐受能力,我們發(fā)現(xiàn)胰島β細胞特異性缺失miR-21小鼠呈現(xiàn)嚴重的葡萄糖耐受缺陷和胰島素分泌缺陷,這與用胰島細胞株得到的結(jié)果不一致;機制研究發(fā)現(xiàn),雖然β細胞特異性缺失miR-21不影響胰島?細胞的數(shù)目和大小、胰島素的合成以及胰島素的轉(zhuǎn)運和釋放,但是miR-21βKO小鼠胰島的葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2（Glut2）表達顯著降低。進一步研究發(fā)現(xiàn),miR-21通過miR-21-Pdcd4-AP-1信號通路促進Glut2的表達。更為重要的是,我們的研究發(fā)現(xiàn)在2型糖尿病db/db小鼠胰腺中特異性增加miR-21可以顯著降低血糖水平。綜上所述,我們的研究發(fā)現(xiàn):1)在BMDCs分化過程中,miR-21可能通過負調(diào)控Tipe2的表達從而抑制BMDCs的半成熟,而Tipe2通過激活PDK1-PKC?-MAPK信號通路來促進BMDCs的半成熟并抑制口服免疫耐受;2)在胰島β細胞中,miR-21-Pdcd4通路促進Glut2的表達從而促進胰島素的分泌和維持葡萄糖耐受,在2型糖尿病小鼠胰腺中特異性增加miR-21可以顯著降低血糖水平。以上結(jié)果也提示,miR-21可能是預防和治療炎癥相關(guān)疾病以及2型糖尿病的一個重要靶點。
二、樹突狀細胞可用于自身免疫性疾病的預防和治療（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、樹突狀細胞可用于自身免疫性疾病的預防和治療（論文提綱范文）
（1）1型糖尿病患者免疫細胞表面SLAMF分子異常表達與機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞對照表 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 研究背景及意義 |
| 1.2 課題的假設與提出 |
| 第2章 文獻綜述 |
| 2.1 1型糖尿病免疫系統(tǒng)異常概述 |
| 2.1.1 適應性免疫系統(tǒng)與1型糖尿病 |
| 2.1.2 先天性免疫系統(tǒng)與1型糖尿病 |
| 2.1.3 免疫治療在1型糖尿病中的應用 |
| 2.2 SLAM分子家族在免疫系統(tǒng)異常疾病中的表達 |
| 2.2.1 SLAM分子家族概述 |
| 2.2.2 SLAM分子家族在多種疾病中異常表達 |
| 2.3 SLAMF4(CD244)研究現(xiàn)狀綜述 |
| 2.3.1 SLAMF4(CD244)的結(jié)構(gòu)與功能 |
| 2.3.2 SLAMF4(CD244)的異常表達與疾病 |
| 2.3.3 SLAMF4(CD244)的應用前景與展望 |
| 第3章 T1DM患者免疫系統(tǒng)變化及SLAM分子家族表達 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 實驗材料 |
| 3.2.1 人外周血來源 |
| 3.2.2 材料和試劑 |
| 3.2.3 儀器 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 研究對象入組及排除標準 |
| 3.3.2 生化的測定 |
| 3.3.3 密度梯度離心法分離PBMC |
| 3.3.4 細胞外標志物染色 |
| 3.3.5 細胞內(nèi)Foxp3 染色 |
| 3.3.6 統(tǒng)計分析 |
| 3.4 結(jié)果 |
| 3.4.1 T1DM患者及HCs基線指標及生化檢測結(jié)果 |
| 3.4.2 T1DM患者及HCs外周血PBMC中T細胞表達 |
| 3.4.3 T1DM患者及HCs外周血PBMC中B細胞表達 |
| 3.4.4 T1DM患者及HCs外周血PBMC中NK細胞表達 |
| 3.4.5 T1DM患者及HCs外周血PBMC中髓系細胞表達 |
| 3.4.6 各免疫細胞表面SLAM分子家族表達 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 小結(jié) |
| 第4章 T1DM患者T細胞表面SLAMF4 分子表達 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 實驗材料 |
| 4.2.1 人外周血來源 |
| 4.2.2 材料和試劑 |
| 4.2.3 儀器 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 研究對象入組及排除標準 |
| 4.3.2 生化及一般臨床資料的測定 |
| 4.3.3 密度梯度離心法分離PBMC |
| 4.3.4 細胞外標志物染色 |
| 4.3.5 細胞內(nèi)IFN-γ/TNF-a染色 |
| 4.3.6 統(tǒng)計分析 |
| 4.4 結(jié)果 |
| 4.4.1 T1DM患者及HCs外周血T細胞SLAMF4分子表達 |
| 4.4.2 T1DM患者及HCs外周血T細胞亞群SLAMF4分子表達 |
| 4.4.3 SLAMF4分子表達與細胞活化的狀態(tài)有關(guān) |
| 4.4.4 T1DM患者外周血SLAMF4分子表達與一般臨床資料相關(guān)性 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 小結(jié) |
| 第5章 NOD小鼠免疫細胞分化及SLAMF4分子表達 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 實驗材料和動物 |
| 5.2.1 材料和試劑 |
| 5.2.2 實驗儀器 |
| 5.2.3 實驗動物 |
| 5.2.4 墊料與飼料 |
| 5.3 實驗方法 |
| 5.3.1 NOD小鼠體重及一般情況 |
| 5.3.2 NOD小鼠血糖的測量 |
| 5.3.3 檢測小鼠外周血免疫細胞分化及血清分離 |
| 5.3.4 胰腺淋巴結(jié)單細胞懸液制備 |
| 5.3.5 小鼠尾靜脈采血及血清分離 |
| 5.3.6 密度梯度離心法分離小鼠外周血單個核細胞 |
| 5.3.7 細胞外標志物染色 |
| 5.3.8 蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin stain,HE)染色 |
| 5.3.9 統(tǒng)計分析 |
| 5.4 結(jié)果 |
| 5.4.1 NOD小鼠1型糖尿病發(fā)病情況 |
| 5.4.2 NOD小鼠外周血T細胞亞群分布異常 |
| 5.4.3 NOD小鼠T細胞表面SLAMF4分子異常表達 |
| 5.5 討論 |
| 5.6 小結(jié) |
| 第6章 SLAMF4調(diào)控CD8~+T細胞的增殖與凋亡 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 實驗材料 |
| 6.2.1 人臍帶血來源 |
| 6.2.2 正常人外周血來源 |
| 6.2.3 T1DM患者外周血來源 |
| 6.2.4 材料與試劑 |
| 6.2.5 儀器 |
| 6.3 實驗方法 |
| 6.3.1 密度梯度離心法分離臍帶血單個核細胞 |
| 6.3.2 磁珠分選臍帶血CD8~+T細胞 |
| 6.3.3 體外培養(yǎng)臍帶血來源的CD8~+T細胞 |
| 6.3.4 流式分選T1DM患者SLAMF4~+及SLAMF4~-CD8+T細胞轉(zhuǎn)錄組測序 |
| 6.3.5 磁珠分選正常人外周血來源的CD8~+T細胞 |
| 6.3.6 流式分選正常人SLAMF4~+CD8+T細胞及SLAMF4~-CD8+T細胞 |
| 6.3.7 細胞凋亡檢測 |
| 6.3.8 細胞增殖檢測 |
| 6.3.9 統(tǒng)計分析 |
| 6.4 結(jié)果 |
| 6.4.1 體外培養(yǎng)臍帶血來源CD8~+T細胞SLAMF4表達情況 |
| 6.4.2 T1DM患者SLAMF4~+及SLAMF4~-CD8+T細胞的RNA測序 |
| 6.4.3 SLAMF4與CD8+T細胞凋亡 |
| 6.4.4 SLAMF4與CD8+T細胞增殖 |
| 6.5 討論 |
| 6.6 小結(jié) |
| 第7章 T1DM免疫損傷機理及SLAMF分子異常表達的思考 |
| 第8章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介及在讀期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（2）納米藥物遞送系統(tǒng)通過促進抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞擴增增強自身免疫性腦脊髓炎治療效果的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文縮寫對照 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 自身免疫性疾病治療的現(xiàn)狀 |
| 1.2 抗原特異性免疫耐受研究進展 |
| 1.3 Treg治療自身免疫性疾病的研究現(xiàn)狀 |
| 1.4 耐受性DCs對Treg的影響 |
| 1.5 1α,25-hydroxyvitaminD3的研究現(xiàn)狀 |
| 1.6 本實驗的研究目的與主要內(nèi)容 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 實驗動物 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.1.3 主要儀器與器材 |
| 2.1.4 MOG_(35-55)多肽序列 |
| 2.1.5 主要試劑配方 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 PEG-PLGA納米載藥遞送系統(tǒng)的合成 |
| 2.2.2 PEG-PLGA納米載藥遞送系統(tǒng)粒徑和表面電勢的測定 |
| 2.2.3 PEG-PLGA納米載藥遞送系統(tǒng)樣品凍干 |
| 2.2.4 PLGA/VD3和MOG/NP/VD3納米載藥遞送系統(tǒng)中VD3包封率(entrapment efficiency,EE)的測定 |
| 2.2.5 PLGA/MOG和MOG/NP/VD3納米載藥遞送系統(tǒng)中MOG多肽包載率的測定 |
| 2.2.6 流式細胞術(shù)檢測納米載藥遞送系統(tǒng)在體外對骨髓誘導樹突狀細胞活化的影響 |
| 2.2.7 納米載藥遞送系統(tǒng)誘導的BMDC檢測 |
| 2.2.8 流式細胞術(shù)檢測納米載藥遞送系統(tǒng)對正常小鼠淋巴結(jié)免疫細胞的影響 |
| 2.2.9 熒光檢測和流式細胞術(shù)檢測NP/DID小鼠體內(nèi)分布 |
| 2.2.10 給共聚焦顯微鏡成像實驗 |
| 2.2.11 流式細胞術(shù)檢測納米載藥遞送系統(tǒng)誘導MOG特異性Treg |
| 2.2.12 EAE模型實驗的制備 |
| 2.2.13 觀察納米載藥遞送系統(tǒng)對EAE模型小鼠的治療作用 |
| 2.2.14 EAE模型小鼠脊髓H&E染色 |
| 2.3 統(tǒng)計學分析 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 雙乳化法制備PEG-PLGA納米載藥遞送系統(tǒng) |
| 3.2 載藥納米載藥遞送系統(tǒng)的表征 |
| 3.3 納米載藥遞送系統(tǒng)體外誘導DCs以及耐受性DCs |
| 3.3.1 不同濃度的NP/VD3在體外可抑制DCs表面共刺激分子的表達 |
| 3.3.2 不同濃度的NP/VD3在體外誘導耐受性DCs |
| 3.3.3 小結(jié) |
| 3.4 NP/VD3/MOG擴增抗原特異性的Treg水平 |
| 3.5 納米載藥遞送系統(tǒng)在淋巴結(jié)內(nèi)的分布 |
| 3.6 NP/VD3/MOG可顯著提高C57BL/6小鼠淋巴結(jié)內(nèi)Treg的水平 |
| 3.7 MOG/NP/VD3可推遲EAE模型小鼠的發(fā)病時間并減輕發(fā)病程度 |
| 第4章 討論 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介及在學期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（3）嗜酸乳桿菌通過誘導調(diào)節(jié)性γδT細胞緩解實驗性自身免疫性腦脊髓炎（論文提綱范文）
| 縮略語表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 實驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 益生菌對CD4+T細胞亞群的影響及其在自身免疫性疾病中的應用 |
| 參考文獻 |
| 附錄 實驗動物福利倫理審查報告 |
| 個人簡歷及研究成果 |
| 致謝 |
（4）小麥依賴—運動誘發(fā)嚴重過敏反應患者的預后及腸道菌群研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 縮略詞表 |
| 第一部分 小麥依賴-運動誘發(fā)嚴重過敏反應患者的預后研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料與方法 |
| 三、結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 第二部分 腸道菌群與小麥依賴-運動誘發(fā)嚴重過敏反應的關(guān)聯(lián)性研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料與方法 |
| 三、結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 第三部分 小麥依賴-運動誘發(fā)嚴重過敏反應患者腸道菌群宏基因組研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料與方法 |
| 三、結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 第四部分 小麥依賴-運動誘發(fā)蕁麻疹患者的臨床特征分析 |
| 一、前言 |
| 二、材料與方法 |
| 三、結(jié)果 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 道菌群在食物過敏發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究進展 |
| 參考文獻 |
| 博士期間學術(shù)成果 |
| 致謝 |
（5）過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet+ CXCR3+ Treg細胞的影響及機制研究（論文提綱范文）
| 提要 |
| 詳細摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞 |
| 文獻綜述 |
| 1 AIRE的研究背景 |
| 1.1 AIRE的發(fā)展歷程 |
| 1.2 AIRE與免疫耐受 |
| 2 DC對Treg細胞的作用 |
| 2.1 DC誘導Treg的產(chǎn)生 |
| 2.2 DC可以擴增Treg細胞 |
| 2.3 DC可以影響Treg的遷移 |
| 3 組織Treg特性及其功能 |
| 3.1 組織Treg不穩(wěn)定性與可塑性 |
| 3.2 組織Treg的分類 |
| 3.3 組織Treg與自身免疫病 |
| 課題設計思路 |
| 技術(shù)路線 |
| 實驗研究 |
| 一.過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet~+CXCR3~+Treg細胞的影響 |
| 1 實驗材料和方法 |
| 1.1 實驗對象 |
| 1.2 實驗試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 1.4 實驗方法 |
| 1.5 統(tǒng)計學分析 |
| 2 實驗結(jié)果 |
| 2.1 建立AIRE轉(zhuǎn)導BMDC模型 |
| 2.2 監(jiān)測NOD鼠T1D病情進展 |
| 2.3 檢測過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet~+CXCR3~+Treg細胞的影響 |
| 二.研究過表達AIRE的BMDC對T-bet~+CXCR3~+Treg細胞的影響及其機制 |
| 1 實驗材料和方法 |
| 1.1 實驗對象 |
| 1.2 實驗試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 1.4 實驗方法 |
| 1.5 統(tǒng)計學分析 |
| 2 實驗結(jié)果 |
| 2.1 檢測過表達AIRE的BMDC對T-bet~+CXCR3~+Treg分化的影響 |
| 2.2 研究AIRE對BMDC中IL-35表達的影響 |
| 2.3 闡明AIRE通過影響B(tài)MDC中IL-35的表達調(diào)控T-bet~+CXCR3~+Treg細胞 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 作者簡介及在校期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（6）芪葵顆粒調(diào)節(jié)1型糖尿病Th17/Treg平衡的實驗研究及T1DM臨床證型的橫斷面分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要縮略詞 |
| 第一部分 實驗研究:基于imDC誘導T細胞耐受研究芪葵顆粒干預T1DM的作用機制 |
| 引言 |
| 實驗一: 觀察芪葵顆粒對NOD小鼠的影胰島炎的影響 |
| 1 實驗目的 |
| 2 實驗材料 |
| 3 實驗分組 |
| 4 實驗方法 |
| 5 統(tǒng)計處理 |
| 6 實驗結(jié)果 |
| 實驗二: 觀察芪葵顆粒對NOD小鼠T1DM模型的影響 |
| 1 實驗目的 |
| 2 實驗材料 |
| 3 實驗分組 |
| 5 統(tǒng)計處理 |
| 6 實驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 實驗結(jié)論 |
| 第二部分 1型糖尿病的證型分布 |
| 1 資料及方法 |
| 2 診斷標準 |
| 3 觀察指標及方法 |
| 4 統(tǒng)計分析 |
| 5 結(jié)果 |
| 6 討論 |
| 7 結(jié)論 |
| 第三部分 1型糖尿病免疫異常的臨床研究 |
| 1 資料及方法 |
| 2 診斷標準 |
| 3 觀察指標及方法 |
| 4 統(tǒng)計分析 |
| 5 結(jié)果 |
| 6 討論 |
| 7 結(jié)論 |
| 全文總結(jié) |
| 1 本次研究的主要成果 |
| 2 本次研究存在的不足和展望 |
| 綜述一 1型糖尿病的發(fā)病機制及免疫治療 |
| 綜述二 1型糖尿病中醫(yī)認識 |
| 參考文獻 |
| 攻讀博士學位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
（7）滋陰疏肝法對原發(fā)性干燥綜合征B淋巴細胞的影響及雷公藤甲素對NOD小鼠唾液腺損傷的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 原發(fā)性干燥綜合征中西醫(yī)研究進展 |
| 1. 西醫(yī)對原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病的機制研究 |
| 1.1 原發(fā)性干燥綜合征患者中B淋巴細胞異常 |
| 1.2 原發(fā)性干燥綜合征患者中細胞因子分泌異常 |
| 1.3 原發(fā)性干燥綜合征與JAK/STAT信號通路 |
| 1.4 原發(fā)性干燥綜合征與NF-κB信號通路 |
| 2. 原發(fā)性干燥綜合征患者合并焦慮、抑郁者多見 |
| 2.1 原發(fā)性干燥綜合征患者生活質(zhì)量、焦慮抑郁情緒與疾病活動度的研究 |
| 2.2 原發(fā)性干燥綜合征患者情緒障礙可能是其中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累的表現(xiàn)之一 |
| 2.3 原發(fā)性干燥綜合征患者焦慮抑郁可能與機體免疫異常有關(guān) |
| 2.4 免疫功能紊亂導致或加重情緒障礙的可能機制 |
| 3. 祖國醫(yī)學認為七情失調(diào)導致和加重原發(fā)性干燥綜合征 |
| 4. 從肝論治原發(fā)性干燥綜合征 |
| 4.1 肝的生理病理與原發(fā)性干燥綜合征發(fā)病的關(guān)系 |
| 4.2 干燥綜合征局部證候表現(xiàn)與肝關(guān)系密切 |
| 4.3 歷代醫(yī)家從肝論治原發(fā)性干燥綜合征 |
| 4.4 一貫煎加減方治療原發(fā)性干燥綜合征 |
| 4.5 雷公藤治療原發(fā)性干燥綜合征的研究 |
| 小結(jié) |
| 第二部分 一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者療效及B淋巴細胞影響的臨床研究 |
| 1. 病例選擇 |
| 1.1 病例來源 |
| 1.2 診斷標準 |
| 1.3 中醫(yī)辨證診斷標準 |
| 1.4 納入標準 |
| 1.5 排除標準 |
| 1.6 剔除標準 |
| 1.7 退出標準 |
| 1.8 研究用藥及給藥方法 |
| 1.9 療程與觀察項目 |
| 1.10 療效評價 |
| 1.11 倫理要求 |
| 2. 試驗材料 |
| 2.1 試驗取材 |
| 2.2 試驗試劑和儀器 |
| 3. 試驗方法及步驟 |
| 3.1 外周血單個核細胞分離 |
| 3.2 流式細胞術(shù)檢測外周血B細胞活化、分化表面標記以及Tfh細胞比率 |
| 3.3 CFSE標記檢測外周血B細胞增殖能力 |
| 3.4 Annexin V標記檢測外周血B細胞調(diào)亡水平 |
| 3.5 IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-27檢測 |
| 3.6 臨床療效觀察 |
| 4. 統(tǒng)計學處理 |
| 5. 試驗結(jié)果 |
| 5.1 一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者臨床療效的觀察 |
| 5.2 一貫煎加減方對原發(fā)性干燥綜合征陰虛肝郁證患者B淋巴細胞影響的臨床研究 |
| 6. 討論 |
| 第三部分 一貫煎加減方對NOD小鼠B淋巴細胞的實驗研究 |
| 1. 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 實驗試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 2. 試驗方法 |
| 2.1 實驗分組 |
| 2.2 標本收集 |
| 2.3 飲水量測定 |
| 2.4 唾液流量測定 |
| 2.5 脾指數(shù)、頜下腺指數(shù)測定 |
| 2.6 外周血B淋巴細胞檢測 |
| 3. 實驗結(jié)果 |
| 3.1 飲水量檢測 |
| 3.2 唾液流量測定 |
| 3.3 脾臟指數(shù)和頜下腺指數(shù) |
| 3.4 唾液腺病理切片及HE染色 |
| 3.5 外周血單個核細胞分離 |
| 3.6 各組外周血B細胞活化情況 |
| 3.7 各組外周血B細胞分化情況 |
| 3.8 各組外周血Tfh細胞比率情況 |
| 3.9 各組外周血B細胞增殖情況 |
| 3.10 各組外周血B細胞凋亡情況 |
| 3.11 各組血清細胞因子及IgG水平 |
| 4. 討論 |
| 第四部分 雷公藤甲素通過JAK/STAT和NF-κB信號通路減輕NOD小鼠唾液腺損傷的實驗研究 |
| 1. 實驗材料 |
| 1.1 實驗動物 |
| 1.2 實驗試劑 |
| 1.3 實驗儀器 |
| 2. 實驗方法 |
| 2.1 治療和分組 |
| 2.2 唾液流量的測量 |
| 2.3 唾液腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的計算 |
| 2.4 ELISA試驗 |
| 2.5 蘇木精-伊紅染色 |
| 2.6 流式細胞術(shù)分析小鼠唾液腺淋巴細胞分布 |
| 2.7 脾臟T細胞和B細胞增殖試驗 |
| 2.8 唾液腺上皮細胞的分離培養(yǎng) |
| 2.9 免疫印跡(Western blot) |
| 2.10 統(tǒng)計分析 |
| 3. 結(jié)果 |
| 3.1 TP對NOD小鼠唾液腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和唾液流量的保護作用 |
| 3.2 TP抑制NOD小鼠自身免疫損傷 |
| 3.3 TP抑制NOD小鼠唾液腺JAK/STAT和NF-κB信號通路 |
| 3.4 TP通過抑制JAK/STAT和NF-κB信號通路降低IFN-γ誘導的唾液腺上皮細胞炎癥損傷 |
| 4. 討論 |
| 結(jié)語 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 附錄一：綜述 |
| 綜述參考文獻 |
| 附錄二 |
| 附錄三 |
| 主要縮略語表 |
| 攻讀博士期間科研情況 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（8）MDSC分泌的Arg-1對腸炎小鼠Th17細胞的影響及橡黃素治療機制的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 炎癥性腸炎 |
| 1.2.1 炎癥性腸炎概述 |
| 1.2.2 炎癥性腸炎的機制 |
| 1.2 Th17細胞 |
| 1.2.1 Th17細胞概述 |
| 1.2.2 Th17細胞的起源和發(fā)育 |
| 1.2.3 Th17細胞的可塑性 |
| 1.2.4 Th17細胞在IBD中的功能 |
| 1.3 調(diào)節(jié)性免疫細胞概述 |
| 1.3.1 調(diào)節(jié)性T細胞 |
| 1.3.2 調(diào)節(jié)性B細胞 |
| 1.3.3 調(diào)節(jié)性紅細胞 |
| 1.3.4 調(diào)節(jié)性的髓系細胞 |
| 1.4 MDSC與自身免疫病 |
| 1.4.1 MDSC的起源 |
| 1.4.2 MDSC的功能 |
| 1.4.3 MDSC擴增的調(diào)控機制 |
| 1.4.4 MDSC功能的調(diào)控機制 |
| 1.4.5 MDSC與自身免疫病 |
| 1.4.6 MDSC在炎癥性腸炎中的作用 |
| 1.5 自身免疫病中MDSC與Th17細胞的關(guān)系 |
| 1.6 炎癥性腸病中MDSC和Th17細胞的展望 |
| 第2章 腸炎小鼠中MDSC影響Th17細胞IL-17A和IL-17F的表達 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗材料 |
| 2.2.1 實驗動物 |
| 2.2.2 實驗材料和試劑 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 Arg~(myeKO)小鼠的構(gòu)建 |
| 2.3.2 炎癥性腸炎小鼠模型的構(gòu)建 |
| 2.3.3 腸炎分級評分標準 |
| 2.3.4 外周血單個核細胞的分離 |
| 2.3.5 脾臟單細胞懸液制備 |
| 2.3.6 小腸派氏集合淋巴結(jié)細胞分離 |
| 2.3.7 腸系膜淋巴結(jié)細胞分離 |
| 2.3.8 結(jié)直腸固有層淋巴結(jié)細胞分離 |
| 2.3.9 體外刺激PBMC實驗 |
| 2.3.10 細胞表面染色 |
| 2.3.11 細胞內(nèi)染色 |
| 2.3.12 抑制實驗 |
| 2.3.13 抑制實驗檢測 |
| 2.3.14 熒光定量PCR |
| 2.3.15 轉(zhuǎn)輸實驗 |
| 2.3.16 統(tǒng)計分析 |
| 2.4 實驗結(jié)果 |
| 2.4.1 腸炎條件下Arg~(myeKO)小鼠Th17細胞IL-17A表達降低,IL-17F表達升高 |
| 2.4.2 腸炎條件下Arg~(myKO)小鼠MDSC比例下降 |
| 2.4.3 腸炎條件下Arg~(myeKO)小鼠腸組織中保護性因子表達下調(diào) |
| 2.4.4 轉(zhuǎn)輸WT小鼠來源的MDSC緩解Arg~(myeKO)小鼠腸炎 |
| 2.5 實驗討論 |
| 2.6 小結(jié) |
| 第3章 橡黃素通過ESR/STAT3通路促進MDSC存活 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗材料 |
| 3.2.1 數(shù)據(jù)庫 |
| 3.2.2 軟件 |
| 3.2.3 儀器設備 |
| 3.2.4 試劑耗材 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 Arg~(myeKO)小鼠的構(gòu)建 |
| 3.3.2 體外實驗橡黃素處理髓系細胞 |
| 3.3.3 橡黃素治療腸炎小鼠 |
| 3.3.4 腸炎分級評分標準 |
| 3.3.5 橡黃素互作基因的預測 |
| 3.3.6 基因富集和通路分析 |
| 3.3.7 小鼠骨髓細胞的分離 |
| 3.3.8 荷瘤小鼠脾臟細胞的分離 |
| 3.3.9 人臍帶血單個核細胞的分離 |
| 3.3.10 細胞表面染色 |
| 3.3.11 細胞內(nèi)染色 |
| 3.3.12 熒光定量PCR |
| 3.3.13 數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計方法 |
| 3.4 實驗結(jié)果 |
| 3.4.1 MDSC雌激素受體的激活通過STAT3通路上調(diào)Arg-1的分泌 |
| 3.4.2 擴增的MDSC減輕DSS誘導的小鼠腸炎 |
| 3.5 實驗討論 |
| 3.6 小結(jié) |
| 第4章 在腸炎小鼠中橡黃素通過MDSC產(chǎn)生的Arg-1調(diào)節(jié)Th17細胞因子分泌 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實驗材料 |
| 4.2.1 實驗動物 |
| 4.2.2 實驗材料和試劑 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 Arg~(myeKO)小鼠的構(gòu)建 |
| 4.3.2 橡黃素治療實驗 |
| 4.3.3 外周血單個核細胞的分離 |
| 4.3.4 脾臟單細胞懸液制備 |
| 4.3.5 小腸派氏集合淋巴結(jié)細胞分離 |
| 4.3.6 腸系膜淋巴結(jié)細胞分離 |
| 4.3.7 結(jié)直腸固有層淋巴結(jié)細胞分離 |
| 4.3.8 體外刺激PBMC實驗 |
| 4.3.9 細胞表面染色 |
| 4.3.10 細胞內(nèi)染色 |
| 4.3.11 熒光定量PCR |
| 4.3.12 統(tǒng)計分析 |
| 4.4 實驗結(jié)果 |
| 4.4.1 橡黃素通過上調(diào)ESR/pSTAT3促進MDSC促進Arg-1分泌 |
| 4.4.2 MDSC分泌的Arg-1促進Th17細胞IL-17A的表達,抑制IL-17F的水平 |
| 4.4.3 MDSC來源的Arg-1促進小鼠腸組織中保護性因子表達下調(diào) |
| 4.5 實驗討論 |
| 4.6 小結(jié) |
| 第5章 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點 |
| 參考文獻 |
| 博士在讀期間科研成果 |
| 致謝 |
（9）MKP-1作為潛在抗炎藥物作用靶點用于治療膿毒癥的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 DUSP1啟動子熒光素酶報告基因RAW264.7細胞體系的建立以及測試 |
| 前言 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 主要試劑 |
| 1.1.2 主要儀器 |
| 1.1.3 RAW264.7細胞的培養(yǎng) |
| 1.1.4 pGL4.19/PrDUSP1質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 |
| 1.1.5 挑陽性克隆,搖菌,提質(zhì)粒(用去內(nèi)毒素中提試劑盒) |
| 1.1.6 G418最佳濃度的篩選 |
| 1.1.7 電轉(zhuǎn)染、細胞篩選和單克隆化 |
| 1.1.8 熒光素酶活性檢測 |
| 1.1.9 RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄 |
| 1.1.10 實時熒光定量PCR (RT-PCR) |
| 1.1.11 統(tǒng)計分析 |
| 1.2 結(jié)果 |
| 1.2.1 pGL4.19質(zhì)粒載體圖譜 |
| 1.2.2 RAW264.7/PrDUSP1穩(wěn)定表達細胞的篩選 |
| 1.2.3 穩(wěn)定表達細胞熒光素酶活性呈時間依賴性 |
| 1.2.4 Rolipram可增加熒光素酶活性的表達 |
| 1.2.5 Rolipram能上調(diào)RAW264.7細胞MKP-1 mRNA的表達 |
| 1.3 討論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 Rolipram對膿毒癥小鼠治療作用的研究 |
| 前言 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 主要試劑 |
| 2.1.2 主要儀器 |
| 2.1.3 實驗動物 |
| 2.1.4 RAW264.7細胞的培養(yǎng) |
| 2.1.5 細胞培養(yǎng)上清的收集 |
| 2.1.6 LPS引起的膿毒癥小鼠生存率實驗 |
| 2.1.7 小鼠血清、肺、肝和腎樣品收集 |
| 2.1.8 細胞因子檢測 |
| 2.1.9 石蠟切片和HE染色 |
| 2.1.10 血清生化指標檢測 |
| 2.1.11 支氣管肺泡灌洗、灌洗液總細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)和總蛋白測定 |
| 2.1.12 細胞總蛋白和組織總蛋白的提取與BCA蛋白定量 |
| 2.1.13 Western-blot |
| 2.1.14 肺組織免疫熒光 |
| 2.1.15 致病性大腸桿菌引起的膿毒小鼠生存率實驗 |
| 2.1.16 CLP模型小鼠生存率實驗 |
| 2.1.17 統(tǒng)計分析 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 Rolipram能抑制LPS引起的RAW264.7細胞培養(yǎng)上清中促炎細胞因子的釋放 |
| 2.2.2 Rolipram能大幅提高LPS引起的膿毒癥小鼠的生存率 |
| 2.2.3 Rolipram能降低LPS引起的膿毒癥小鼠血清中促炎細胞因子的生成 |
| 2.2.4 Rolipram能減輕LPS引起膿毒癥小鼠的肺損傷 |
| 2.2.5 Rolipram能減輕LPS引起的肝和腎功能損傷 |
| 2.2.6 Rolipram能抑制小鼠肺中LPS引起的NF-κB信號通路的激活 |
| 2.2.7 Rolipram能抑制小鼠肺中LPS引起的MAPK信號通路的激活 |
| 2.2.8 Rolipram能大幅提高大腸桿菌引起的膿毒癥小鼠的生存率和CLP模型小鼠的生存率 |
| 2.3 討論 |
| 參考文獻 |
| 英文縮寫詞表 |
| 攻讀博士學位期間成果 |
| 致謝 |
（10）MiR-21-Tipe2調(diào)控口服免疫耐受和miR-21-Pdcd4調(diào)控葡萄糖耐受的機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)在口服免疫耐受中的研究進展 |
| 1.1.1 口服免疫耐受的研究現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 Treg與口服免疫耐受 |
| 1.1.2.1 Treg與口服免疫耐受的相關(guān)性 |
| 1.1.2.2 腸道Treg的分類 |
| 1.1.2.3 口服免疫耐受中Treg的積累機制研究 |
| 1.1.3 小結(jié)與展望 |
| 1.2 糖耐受異常和2型糖尿病發(fā)病機制研 |
| 1.2.1 糖耐受異常 |
| 1.2.2 2型糖尿病的發(fā)病機制研究進展 |
| 1.2.2.1 2型糖尿病的發(fā)病機制研究進展概論 |
| 1.2.2.2 miRNA在2型糖尿病發(fā)病中的作用研究進展 |
| 1.2.2.2.1 miRNA在2型糖尿病發(fā)病中的作用研究進展概論 |
| 1.2.2.2.2 miR-21 在2型糖尿病發(fā)生中的作用研究進展 |
| 1.3 miR-21,Pdcd4和Tipe2 |
| 1.3.1 miR-21 簡介 |
| 1.3.2 miR-21 和PDCD4 |
| 1.3.3 miR-21 和Tipe2 |
| 1.4 本論文的研究內(nèi)容 |
| 1.4.1 miR-21-Tipe2通路調(diào)控口服免疫耐受的研究 |
| 1.4.2 miR-21-Pdcd4通路調(diào)控葡萄糖耐受的研究 |
| 第2章 MiR-21 在口服免疫耐受和葡萄糖耐受中的作用和機制 |
| 2.1 MiR-21-Tipe2通路促進口服免疫耐受 |
| 2.1.1 引言 |
| 2.1.2 材料和方法 |
| 2.1.2.1 實驗材料 |
| 2.1.2.1.1 實驗小鼠 |
| 2.1.2.1.2 主要試劑 |
| 2.1.2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.2.1.4 主要儀器 |
| 2.1.2.2 實驗方法 |
| 2.1.2.2.1 細胞培養(yǎng)基配置 |
| 2.1.2.2.2 小鼠基因型鑒定 |
| 2.1.2.2.3 BMDCs的誘導 |
| 2.1.2.2.4 流式檢測細胞表面標記物以及分子信號通路 |
| 2.1.2.2.5 Western blot |
| 2.1.2.2.6 斑點雜交 |
| 2.1.2.2.7 構(gòu)建載體pGL3-PU.1, pLVX-IRES-Zs Green1-Tipe2 |
| 2.1.2.2.8 構(gòu)建Tipe2穩(wěn)定表達的Hela細胞株 |
| 2.1.2.2.9 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞并檢測雙熒光素酶 |
| 2.1.2.2.10 熒光定量PCR |
| 2.1.2.2.11 過繼性T細胞轉(zhuǎn)移和口服抗原誘導pTreg |
| 2.1.2.2.12 統(tǒng)計學分析 |
| 2.1.3 實驗結(jié)果 |
| 2.1.3.1 miR-21 和Tipe2的表達在BMDCs分化過程中呈現(xiàn)負相關(guān) |
| 2.1.3.2 缺失miR-21 的BMDCs的CD80和CD86表達顯著上調(diào) |
| 2.1.3.3 缺失Tipe2的BMDCs的CD80和CD86表達顯著下調(diào) |
| 2.1.3.4 Tipe2的表達在缺失miR-21 的BMDCs中顯著上調(diào) |
| 2.1.3.5 過表達Tipe2促進轉(zhuǎn)錄因子PU.1 的活性 |
| 2.1.3.6 Tipe2缺失的BMDC分化時磷酸化PKCδ(Thr505)和ERK(Thr202/Tyr204) 表達顯著下調(diào) |
| 2.1.3.7 Tipe2缺失的BMDC分化時磷酸化PDK1 (Ser241)水平顯著下調(diào) |
| 2.1.3.8 Tipe2促進BMDC分化時磷酸酰肌醇代謝 |
| 2.1.3.9 Tipe2缺失的BMDC分化時磷酸化的AKT(Thr308)表達顯著下調(diào) |
| 2.1.3.10 小鼠腸道淋巴結(jié)中誘導調(diào)節(jié)性T細胞的設計圖 |
| 2.1.3.11 Tipe2缺失促進腸道黏膜pTregs的誘導 |
| 2.1.3.12 Tipe2調(diào)控DC半成熟的分子信號通路圖 |
| 2.1.4 小結(jié)與討論 |
| 2.2 MiR-21-Pdcd4 通路維持葡萄糖耐受能力 |
| 2.2.1 引言 |
| 2.2.2 材料與方法 |
| 2.2.2.1 實驗材料 |
| 2.2.2.1.1 實驗小鼠 |
| 2.2.2.1.2 細胞系 |
| 2.2.2.1.3 實驗試劑 |
| 2.2.2.1.4 主要耗材 |
| 2.2.2.1.5 主要儀器 |
| 2.2.2.2 實驗方法 |
| 2.2.2.2.1 miR-21β KO小鼠的構(gòu)建及基因鑒定 |
| 2.2.2.2.2 胰島及胰島細胞的分離 |
| 2.2.2.2.3 胰島石蠟切片及H&E染色 |
| 2.2.2.2.4 胰島冰凍切片及免疫熒光 |
| 2.2.2.2.5 腹腔葡萄糖耐量試驗 |
| 2.2.2.2.6 體外葡萄糖刺激分泌胰島素 |
| 2.2.2.2.7 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測胰島素 |
| 2.2.2.2.8 G6P檢測 |
| 2.2.2.2.9 脂代謝檢測 |
| 2.2.2.2.10 RNA提取及熒光定量PCR檢測 |
| 2.2.2.2.11 載體構(gòu)建(Pgl3-Glut2, p RK5-c-Jun) |
| 2.2.2.2.12 β-TC6的質(zhì)粒,si RNA轉(zhuǎn)染 |
| 2.2.2.2.13 雙熒光素酶檢測 |
| 2.2.2.2.14 免疫蛋白印跡(Western blot)檢測 |
| 2.2.2.2.15 靶向小鼠胰腺注射miR-21agomir |
| 2.2.2.2.16 統(tǒng)計學分析 |
| 2.2.3 實驗結(jié)果 |
| 2.2.3.1 2型糖尿病db/db小鼠的體重、血糖水平、胰島素分泌和胰島中miR-21 的表達顯著增加 |
| 2.2.3.2 ob/ob小鼠的體重、血糖水平、胰島素分泌和胰島中miR-21的表達 |
| 2.2.3.3 各種2型糖尿病相關(guān)小鼠的表征及miR-21 在其胰島中的表達 |
| 2.2.3.4 β 細胞缺失miR-21 后不影響小鼠的體重和血糖水平 |
| 2.2.3.5 β 細胞miR-21 缺失不影響小鼠胰島以及 β 細胞的數(shù)目和大小 |
| 2.2.3.6 β 細胞缺失miR-21 后導致葡萄糖刺激下的胰島素分泌缺陷 |
| 2.2.3.7 miR-21βKO小鼠的葡萄糖耐受和胰島素分泌受損 |
| 2.2.3.8 β 細胞特異性缺失miR-21 不影響胰島素合成 |
| 2.2.3.9 β 細胞缺失miR-21 后不影響胰島素的轉(zhuǎn)運和釋放 |
| 2.2.3.10 miR-21βKO小鼠胰島中Glut2的表達顯著降低 |
| 2.2.3.11 miR-21 通過 miR-21-Pdcd4-AP-1 途徑促進 Glut2 的表達 |
| 2.2.3.12 miR-21 agomir能有效地降低2型糖尿病小鼠的血糖水平 |
| 2.2.3.13 驗證miR-21 agomir被特異性輸送到胰腺 |
| 2.2.3.14 miR-21 agomir增加2型糖尿病小鼠胰島中Glut2的表達和胰島素的產(chǎn)生 |
| 2.2.3.15 miR-21 agomir處理不影響小鼠的體重和脂代謝 |
| 2.2.3.16 miR-21 促進Glut2表達和胰島素分泌的示意圖 |
| 2.2.4 小結(jié)與討論 |
| 第3章 結(jié)論與展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果 |
四、樹突狀細胞可用于自身免疫性疾病的預防和治療（論文參考文獻）
- [1]1型糖尿病患者免疫細胞表面SLAMF分子異常表達與機制研究[D]. 孫琳. 吉林大學, 2021(01)
- [2]納米藥物遞送系統(tǒng)通過促進抗原特異性調(diào)節(jié)性T細胞擴增增強自身免疫性腦脊髓炎治療效果的研究[D]. 高雪. 吉林大學, 2021(01)
- [3]嗜酸乳桿菌通過誘導調(diào)節(jié)性γδT細胞緩解實驗性自身免疫性腦脊髓炎[D]. 任賽賽. 廣州醫(yī)科大學, 2021(02)
- [4]小麥依賴—運動誘發(fā)嚴重過敏反應患者的預后及腸道菌群研究[D]. 杜志榮. 北京協(xié)和醫(yī)學院, 2021(02)
- [5]過表達AIRE的BMDC對NOD鼠T-bet+ CXCR3+ Treg細胞的影響及機制研究[D]. 王爽. 吉林大學, 2021(01)
- [6]芪葵顆粒調(diào)節(jié)1型糖尿病Th17/Treg平衡的實驗研究及T1DM臨床證型的橫斷面分析[D]. 賈佳. 南京中醫(yī)藥大學, 2021(01)
- [7]滋陰疏肝法對原發(fā)性干燥綜合征B淋巴細胞的影響及雷公藤甲素對NOD小鼠唾液腺損傷的研究[D]. 郭云柯. 南京中醫(yī)藥大學, 2020(01)
- [8]MDSC分泌的Arg-1對腸炎小鼠Th17細胞的影響及橡黃素治療機制的研究[D]. 馬占川. 吉林大學, 2020(08)
- [9]MKP-1作為潛在抗炎藥物作用靶點用于治療膿毒癥的研究[D]. 盧夏英. 南方醫(yī)科大學, 2020(01)
- [10]MiR-21-Tipe2調(diào)控口服免疫耐受和miR-21-Pdcd4調(diào)控葡萄糖耐受的機制研究[D]. 劉芮伶. 中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術(shù)研究院), 2020(07)