一、PTEN在乳腺癌研究中的進(jìn)展（論文文獻(xiàn)綜述）
劉瓊晴[1]（2021）在《FBI-1蛋白在乳腺癌腫瘤干細(xì)胞和化療抗性中的作用及其機(jī)制研究》文中認(rèn)為目的:原癌基因FBI-1在正常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的過程中是不可或缺的,在腫瘤形成中有著特殊的作用。腫瘤干細(xì)胞是腫瘤形成和發(fā)展以及復(fù)發(fā)中的關(guān)鍵因子,它與化療抗性密切相關(guān)。因此本課題組通過FBI-1在乳腺癌干細(xì)胞中以及化療抗性中的作用,來鑒定FBI-1是否可以作為一個化療預(yù)后的指標(biāo)。方法:1.用MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行mammosphere形成實驗,檢測FBI-1的表達(dá)是否在mammosphere中升高。敲減FBI-1并與對照細(xì)胞進(jìn)行mammosphere形成實驗,檢測敲減FBI-1是否顯著降低mammosphere的大小和數(shù)量。然后利用流式細(xì)胞儀來檢測FBI-1敲減的細(xì)胞與親代細(xì)胞中CD44+/CD24-數(shù)量的變化。2.利用Transewll進(jìn)行細(xì)胞的遷移和侵襲實驗,檢測敲減FBI-1是否顯著降低乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。建立荷瘤小鼠模型檢測腫瘤的生長。8周后處死小鼠,收集腫瘤和肺組織,處理后在顯微鏡下計數(shù)肺轉(zhuǎn)移小節(jié)的數(shù)量。3.建立MCF-7耐藥細(xì)胞株,然后利用MTT法來鑒定獲得細(xì)胞株是否獲得了對阿霉素的耐藥性。利用western blot來檢測MCF-7/ADR細(xì)胞中FBI-1蛋白表達(dá)的變化,研究FBI-1是否在耐藥細(xì)胞中表達(dá)升高。然后,敲減耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR中的FBI-1,用MTT實驗來檢測細(xì)胞對阿霉素敏感性的變化。4.用Real-time PCR和western blot來檢測敲減FBI-的MCF-7細(xì)胞中PTEN m RNA和蛋白表達(dá)水平變化。用抗FBI-1的抗體對上述細(xì)胞進(jìn)行染色質(zhì)免疫共沉淀（Ch IP）實驗。根據(jù)PTEN啟動子的序列和已經(jīng)發(fā)表的研究設(shè)計了8對引物,利用這8對引物將得到的免疫沉淀物進(jìn)行Real-time PCR,分析FBI-1是否結(jié)合在PTEN啟動子上及其結(jié)合的區(qū)域。5.敲減MCF-7/ADR細(xì)胞中的FBI-1后,對該細(xì)胞利用攜帶PTEN sh RNA的和對照慢病毒感染進(jìn)行第二次感染,并用western blot實驗來鑒定兩個蛋白的敲減效果。進(jìn)行MTT實驗來檢測對照細(xì)胞、FBI-1敲減、雙敲減細(xì)胞對阿霉素敏感性的變化。結(jié)果:1.通過western blot分析,發(fā)現(xiàn)FBI-1的表達(dá)在mammosphere中表達(dá)升高。沉默F(xiàn)BI-1的表達(dá),使得mammosphere的形成和腫瘤干細(xì)胞的數(shù)量顯著地降低。2.細(xì)胞的遷移和侵襲實驗結(jié)果表明,敲減FBI-1能夠降低MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲能力。3.裸鼠成瘤實驗表明,敲減FBI-1不僅能夠抑制腫瘤的生長,而且能夠減少腫瘤向肺癌中的轉(zhuǎn)移。4.Western blot的結(jié)果表明在MCF-7耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR中FBI-1的表達(dá)顯著地增強(qiáng)。并發(fā)現(xiàn)敲減FBI-1能夠增強(qiáng)耐藥細(xì)胞株對阿霉素藥物的敏感性。5.Real-time PCR和western blot的結(jié)果表明敲減FBI-1能夠在m RNA和蛋白水平上增強(qiáng)PTEN的表達(dá)。FBI-1很可能結(jié)合在PTEN啟動子的+400到900bp的區(qū)域內(nèi)。6.MTT實驗表明敲減PTEN后可以抑制FBI-1對阿霉素敏感性的效果結(jié)論:利用細(xì)胞學(xué)和裸鼠實驗發(fā)現(xiàn)FBI-1能夠影響乳腺癌干細(xì)胞和乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移;同時發(fā)現(xiàn)在抗性細(xì)胞中FBI-1表達(dá)升高,而且敲減FBI-1后能夠增強(qiáng)抗性細(xì)胞對阿霉素的敏感性。通過研究我們發(fā)現(xiàn)了FBI-1能夠直接結(jié)合在PTEN基因的啟動子上從而抑制PTEN基因的表達(dá)。這些研究結(jié)果表明,FBI-1在腫瘤干細(xì)胞以及化療抗性中發(fā)揮著十分重要的作用。這為更進(jìn)一步的機(jī)制研究提供了線索。
趙彬[2]（2021）在《基于條件重編程細(xì)胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究》文中研究指明目的:乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤,三陰性乳腺癌是指ER、PR及HER-2表達(dá)均為陰性的乳腺癌。與其他類型的乳腺癌相比,三陰性乳腺癌進(jìn)展快,侵襲性強(qiáng),容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。目前三陰性乳腺癌術(shù)后的輔助治療手段比較單一,缺乏特異性的治療靶點,亟需尋找個體化的、有效的治療靶點。條件重編程細(xì)胞模型是一種可在不轉(zhuǎn)入外源基因的情況下誘導(dǎo)體細(xì)胞的無限增殖的細(xì)胞模型,具有培養(yǎng)成功率高,成本低,與原腫瘤一致性強(qiáng)的優(yōu)點,具有用于個體化腫瘤藥敏預(yù)測的潛力。本研究中,我們構(gòu)建了三陰性乳腺癌的條件重編程細(xì)胞模型,并使用該模型進(jìn)行了高通量敏感藥物篩選實驗,以探索條件重編程細(xì)胞藥敏試驗在三陰性乳腺癌的個體化治療中的應(yīng)用。方法:（1）前瞻性收集2019年3月1日至2020年3月1日就診于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院乳腺外科、確診為乳腺癌并擬行手術(shù)治療的乳腺癌病例信息。術(shù)中留取腫瘤組織及配對正常乳腺組織的標(biāo)本并培養(yǎng)條件重編程細(xì)胞。選擇病理證實的三陰性乳腺癌條件重編程細(xì)胞傳代擴(kuò)增。（2）通過全外顯子測序和轉(zhuǎn)錄組測序檢測條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞及原腫瘤組織的DNA突變譜和轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜,對比條件重編程細(xì)胞與原腫瘤組織在常見突變基因位點的一致性,通過Pearson相關(guān)性分析檢驗條件重編程細(xì)胞與原腫瘤組織轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜的一致性。（3）使用高通量藥敏試驗檢測上述細(xì)胞對110種藥物的敏感性,分別構(gòu)建劑量-效應(yīng)曲線,計算藥物敏感性評分（DSS）,并根據(jù)DSS評分尋找每株條件重編程細(xì)胞的敏感藥物。使用RRA算法整合DSS評分,得到反應(yīng)藥物有效性的綜合藥物排序。（4）檢索外顯子測序結(jié)果中與相關(guān)藥物敏感性相關(guān)的基因,并與藥敏結(jié)果進(jìn)行比對。通過基因集變異分析（GSVA）計算經(jīng)典通路或重要基因集的活化程度評分,通過Pearson相關(guān)性分析檢驗各通路GSVA評分與條件重編程細(xì)胞藥物敏感性DSS評分的關(guān)聯(lián)。（5）獲取GEO數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中三陰性乳腺癌的高通量mRNA芯片數(shù)據(jù)和轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),通過差異基因篩選、差異基因富集分析以及Kaplan-Meier生存分析尋找三陰性乳腺癌預(yù)后生物標(biāo)記;通過GSVA分析和Kaplan-Meier生存分析尋找與三陰性乳腺癌患者預(yù)后顯著相關(guān)的生物通路。結(jié)果:（1）成功構(gòu)建了 6株條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞和6株配對正常乳腺組織的條件重編程細(xì)胞。條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞和原腫瘤組織的DNA突變譜相似,二者的轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)也具有較強(qiáng)的相關(guān)性（R=0.855）。（2）PF-04691502,一種PI3K/Akt和mTOR雙靶點抑制劑是RRA綜合藥物敏感性評分最佳的藥物,而其他排名前十位的藥物中,有2種mTOR抑制劑,2種Akt靶向藥物,1種Syk（脾酪氨酸激酶）抑制劑,1種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑,1種EGFR抑制劑,1種植物來源的小分子藥物（重樓皂苷VI）。mTOR抑制劑西羅莫司、替西羅莫司、利羅莫司和Torin1的DSS評分具有較高的相關(guān)性（R=0.82～0.97）。EGFR靶向藥物阿法替尼、吉非替尼、拉帕替尼的DSS評分具有較高的相關(guān)性（R=0.61～0.93）。（3）條件重編程細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組中PI3K-Akt通路的GSVA評分與Ipatasertib的DSS評分顯著相關(guān)（R=0.587,P=0.045）。mTOR通路的GSVA評分與Torin 1的DSS評分顯著相關(guān)（R=0.62,P=0.030）。EGF通路的GSVA評分與吉非替尼的DSS評分具有顯著相關(guān)性（R=0.60,P=0.039）。（4）我們進(jìn)一步通過GEO和TCGA數(shù)據(jù)分析了 GSVA評分與三陰性乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)Akt1/mTOR信號通路、HIF信號通路、VEGF信號通路和脂肪合成相關(guān)通路的GSVA評分升高與三陰性乳腺癌患者的較短的總體生存期相關(guān)（P<0.05）。T細(xì)胞抗原受體信號通路GSVA高評分或抗原加工和呈遞通路GSVA評分較高的患者總體生存期較長（P<0.05）。結(jié)論:（1）本研究培養(yǎng)的6株條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞與原腫瘤組織具有較高的一致性,可以作為個體化腫瘤模型用于三陰性乳腺癌發(fā)病機(jī)制研究和藥敏試驗。（2）條件重編細(xì)胞藥敏試驗結(jié)果較穩(wěn)定,可以用于三陰性乳腺癌藥物敏感性預(yù)測。本研究中的條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞對靶向PI3K-Akt、mTOR、EGFR、Syk通路的藥物以及拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抑制劑比較敏感。（3）條件重編程細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA評分與針對相應(yīng)通路的靶向藥物的有效性成正相關(guān),三陰性乳腺癌腫瘤組織中轉(zhuǎn)錄組PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA評分與三陰性乳腺癌患者總體生存顯著相關(guān),因而GSVA評分也可以用于三陰性乳腺癌的藥物敏感性預(yù)測以及患者預(yù)后的評價。
張美清[3]（2021）在《miR-4521和FAM129A異常表達(dá)影響乳腺癌進(jìn)展及作用機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理背景:乳腺癌（Breast cancer,BC）是世界上女性中最常見的癌癥,據(jù)報道,2020年全球癌癥新發(fā)病例中,乳腺癌估計達(dá)230萬例,在癌癥發(fā)病率中居首位,同時發(fā)布2020年全球女性乳腺癌死亡人數(shù)高達(dá)68萬,死亡率居全球女性癌癥死亡類型首位。近年研究表明,腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)已成為乳腺癌患者生存的主要障礙,也是大多數(shù)乳腺癌患者死亡的原因。所以,篩選、鑒定與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移和乳腺癌進(jìn)展密切相關(guān)的調(diào)控分子并研究其作用機(jī)制對乳腺癌的診療有一定科學(xué)價值。microRNA（miRNA）是一種小的非編碼RNA分子,與多種癌癥和惡性腫瘤有關(guān),參與調(diào)控細(xì)胞活性、侵襲性轉(zhuǎn)移和細(xì)胞程序性死亡等,可作為特定診斷標(biāo)記和針對不同腫瘤的新治療靶標(biāo)。Family with sequence similarity 129 member A（FAM129A）,在許多類型的癌癥中均過表達(dá),一些研究報道FAM129A在非小細(xì)胞肺癌、腎癌和甲狀腺癌組織中過表達(dá),調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。我們通過生物信息學(xué)網(wǎng)站（Target Scan）分析發(fā)現(xiàn)miR-4521與FAM129A存在特異性結(jié)合位點,為了解決二者間是否存在靶向關(guān)系的問題,我們課題組前期采用雙熒光素酶報告實驗證實了FAM129A是miR-4521的靶分子。因此,我們認(rèn)為二者在乳腺中的特異性調(diào)控關(guān)系及其作用機(jī)制值得深入研究。目的:1.研究miR-4521在乳腺癌中與FAM129A的表達(dá)關(guān)系;2.探究miR-4521對FAM129A的特異性調(diào)節(jié)作用;3.研究miR-4521或FAM129A調(diào)控乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能及作用機(jī)制。方法:1.收集25例手術(shù)患者的乳腺癌癌組織和癌旁組織樣本,qRT-PCR法檢測miR-4521在樣本中的表達(dá)水平;WB法檢測FAM129A在樣本中的表達(dá)水平。2.我們用miR-4521 mimic轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞24小時后,qRT-PCR和WB分析miR-4521和FAM129A的特異性調(diào)控關(guān)系。3.以轉(zhuǎn)染miR-NC組作對照,用MTT比色法,Transwell法和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測miR-4521mimic轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,乳腺癌細(xì)胞存活率,遷移侵襲率和細(xì)胞程序性死亡率的變化,采用同樣的方法檢測FAM129A-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,以轉(zhuǎn)染NC組作對照,乳腺癌細(xì)胞存活率,遷移侵襲率和細(xì)胞程序性死亡率的變化;4.WB法分析miR-4521 mimic和FAM129A-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,二者分別對促進(jìn)遷移侵襲相關(guān)蛋白分子MMP2和MMP9及影響凋亡的通路蛋白p-AKT,Bcl-2和Bax表達(dá)水平的影響。結(jié)果:1.qRT-PCR定量分析結(jié)果表明,乳腺癌患者癌組織中miR-4521表達(dá)量顯著低于癌旁乳腺組織（71.4%,P<0.0001）;WB結(jié)果表明,FAM129A蛋白表達(dá)水平在乳腺癌患者癌組織中顯著高于癌旁乳腺組織（71.6%,P=0.0006）Spearman相關(guān)性分析顯示,miR-4521表達(dá)水平與乳腺癌臨床標(biāo)本中FAM129A表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.5014,P=0.0107）。FAM129A表達(dá)水平與幾種可能影響B(tài)C患者治療和預(yù)后的臨床病理特征相關(guān)性分析結(jié)果表明,與TNM分期中T1期乳腺癌患者相比,T2期乳腺癌患者的FAM129A表達(dá)水平顯著增加（P=0.0265）,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者FAM129A水平更高（P=0.0202）,FAM129A的表達(dá)水平與BC患者的其他預(yù)后因素,包括患者年齡、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人表皮生長因子受體2（HER-2）之間沒有明顯的相關(guān)性。2.miR-NC和miR-4521 mimic轉(zhuǎn)染于MCF-7和T47D細(xì)胞后,用轉(zhuǎn)染miR-NC的細(xì)胞作對照,miR-4521表達(dá)水平在MCF-7和T47D細(xì)胞中分別上調(diào)2120倍（P=0.0017）和3220倍（P=0.0032）,FAM129A在m RNA表達(dá)水平分別降低37.6%（P=0.0148）和59.0%（P=0.0062）;FAM129A在蛋白表達(dá)水平分別降低30.5%（P=0.0425）和38.0%（P=0.0323）。3.miR-4521轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,乳腺癌細(xì)胞存活率和遷移侵襲率降低,細(xì)胞程序性死亡率升高;4.FAM129A-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,乳腺癌細(xì)胞存活率和遷移侵襲率降低,細(xì)胞程序性死亡率升高;5.miR-4521轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,MMP2、MMP9、p-AKT和Bcl-2表達(dá)水平降低,Bax表達(dá)水平升高;6.FAM129A-si RNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后,MMP2、MMP9、p-AKT和Bcl-2表達(dá)水平降低,Bax表達(dá)水平升高。結(jié)論:1.在BC患者組織中,miR-4521低表達(dá)而FAM129A高表達(dá),二者表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān);FAM129A高表達(dá)與乳腺癌臨床進(jìn)展相關(guān),FAM129A表達(dá)水平較高的BC患者可能比FAM129A表達(dá)水平較低的患者預(yù)后更差。2.在乳腺癌細(xì)胞中,miR-4521可特異性結(jié)合FAM129A并抑制其表達(dá)。3.miR-4521上調(diào)可通過降低遷移侵襲途徑中相關(guān)蛋白MMP2和MMP9表達(dá)來抑制MCF-7和T47D體外遷移和侵襲;miR-4521上調(diào)通過降低蛋白p-AKT和Bcl-2的表達(dá),上調(diào)Bax表達(dá),促進(jìn)MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡,減弱細(xì)胞增殖能力。4.FAM129A低表達(dá)可通過降低遷移侵襲途徑中相關(guān)蛋白MMP2和MMP9表達(dá)來抑制MCF-7和T47D體外遷移和侵襲;FAM129A低表達(dá)可通過降低蛋白p-AKT和Bcl-2表達(dá),升高Bax表達(dá)來促進(jìn)MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡,減弱細(xì)胞增殖能力。
陳亞軍[4]（2020）在《PRMT2及PRMT2β介導(dǎo)的自噬在乳腺癌發(fā)生中的作用及機(jī)制》文中研究說明乳腺癌（breast cancer）作為一種高度異質(zhì)性疾病,根據(jù)分子標(biāo)志物雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progesterone receptor,PR）和人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2,H E R 2）表達(dá)的差異分為多個分子亞型。自噬（autophagy）是存在于細(xì)胞中的一種溶酶體降解途徑,為維持細(xì)胞存活、生長、分化和穩(wěn)態(tài)所必須。最近大量的研究表明,自噬與腫瘤關(guān)系密切,并在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演著促癌和抑癌的雙重角色。蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（protein arginine methyltransferase,PRMT）主要包含9個家族成員,作為一種常見酶類存在于哺乳動物中,參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、DNA損傷修復(fù)及m RNA剪接等多種生物學(xué)過程,并與腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。作為PRMTs家族的一個成員,PRMT2充當(dāng)ERα的共激活因子,以雌激素不依賴的形式與ERα直接結(jié)合,并以雌激素依賴方式提高ERα的轉(zhuǎn)錄活性。同時在細(xì)胞周期調(diào)控、炎癥反應(yīng)、肺組織功能、瘦素信號通路及Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生物學(xué)過程中,PRMT2均發(fā)揮著不可或缺的作用,其在乳腺腫瘤中的作用機(jī)理至今仍不清楚。本研究分析了乳腺癌組織芯片中PRMT2蛋白和自噬相關(guān)蛋白LC3蛋白、P62蛋白、Beclin1蛋白在不同組織類型和不同分子分型中的表達(dá)差異。在此基礎(chǔ)上,觀察PRMT2過表達(dá)對乳腺癌MCF7和MDA-MB-231細(xì)胞自噬的影響,并探討可能機(jī)制。同時,為了進(jìn)一步探討PRMT2新的剪接體PRMT2β與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,采用組織芯片技術(shù)分析PRMT2β與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系,并觀察PRMT2β過表達(dá)對乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖、凋亡和自噬的影響,并探討可能機(jī)制。第一部分PRMT2對乳腺癌細(xì)胞自噬的影響目的:探討PRMT2及自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、P62蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義,觀察PRMT2過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞自噬的影響,并探討其可能的機(jī)制。方法:采用免疫組織化學(xué)法,檢測組織芯片中159例乳腺癌組織中PRMT2蛋白及自噬相關(guān)蛋白LC3B、Beclin1和P62在不同分化和不同分子分型乳腺癌組織中的表達(dá)差異。構(gòu)建PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株,通過透射電鏡觀察PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞株MCF7和MDA-MB-231中自噬泡的影響,通過激光共聚焦顯微鏡觀察PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞株MCF7和MDA-MB-231中LC3免疫熒光的改變,通過Western Blot及WES檢測PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞株MCF7和MDA-MB-231中自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、P62的改變及隨時間的變化,通過激光共聚焦顯微鏡觀察m RFP-EGFP-LC3雙熒光在PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后MCF7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中自噬體形成過程。磷酸化抗體芯片檢測MCF7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中穩(wěn)定過表達(dá)PRMT2影響細(xì)胞自噬的可能信號分子。采用Western Blot檢測PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后對MCF-7細(xì)胞MDA-MB-231細(xì)胞中自噬通路相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果:PRMT2和Beclin1蛋白的表達(dá)水平在患者年齡、TNM分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分子分型等參數(shù)中無顯著差異（P>0.05）,在組織病理分級Ⅲ級中LC3B高表達(dá)組所占例數(shù)顯著高于LC3B低表達(dá)組（P=0.0332）,同時LC3B高表達(dá)組在Luminal型乳腺癌中所占例數(shù)顯著低于LC3B低表達(dá)組（P=0.0068）,兩組在患者年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等參數(shù)中無顯著差異（P>0.05）。P62高表達(dá)組在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中所占例數(shù)顯著高于P62低表達(dá)組（P<0.0001）,兩組在患者年齡、TNM分期、病理分級及分子分型等參數(shù)中無顯著性差異（P>0.05）。透射電鏡觀察PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)使MCF-7細(xì)胞中自噬泡面積縮小,Dox處理12h開始與無Dox處理組相比自噬泡減少,處理24h、48h組自噬泡明顯減少。MDA-MB-231細(xì)胞中自噬泡面積增加,Dox處理12h開始與無Dox處理組相比自噬泡增加,處理24h、48h組自噬泡明顯增加。激光共聚焦顯微鏡觀察PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后MCF7細(xì)胞中LC3熒光減少,MDA-MB-231細(xì)胞中LC3熒光增加。Western Blot檢測PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后MCF7細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3II/I表達(dá)量隨時間增加逐漸減少,12h、24h、48h組變化較為明顯。MDA-MB-231細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3II/I表達(dá)量隨時間增加逐漸增加,12h、24h、48h組變化較為明顯。WES檢測PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后MCF7細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Beclin1表達(dá)量隨時間增加逐漸減少,P62表達(dá)量隨時間增加而逐漸增多。MDA-MB-231細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白Beclin1表達(dá)量隨時間增加逐漸增加,而P62蛋白表達(dá)量隨時間增加而逐漸減少。在MCF7細(xì)胞中,PRMT2敲低能上調(diào)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3II/I的蛋白表達(dá)水平。通過激光共聚焦顯微鏡觀察m RFP-EGFP-LC3雙熒光在PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后MCF7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中自噬體形成過程顯示,在MCF7細(xì)胞中,PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后,自噬體（黃色斑點）和自噬溶酶體（紅色斑點）減少,提示自噬被抑制。而在MDA-MB-231細(xì)胞中,PRMT2穩(wěn)定過表達(dá)后,自噬體（黃色斑點）和自噬溶酶體（紅色斑點）增多,提示自噬被促進(jìn)。磷酸化抗體芯片檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),在MCF7細(xì)胞中,PRMT2上調(diào)m TOR、P53、Caspase9磷酸化水平,下調(diào)AMPK、Akt、GSK3β、NFκB、MAPK、PTEN、STAT1的磷酸化水平。在MDA-MB-231細(xì)胞中,PRMT2上調(diào)AMPK、GSK3β、NFκB、MAPK、P53、STAT1磷酸化水平,下調(diào)Akt、Caspase9、m TOR、MAPK、PTEN的磷酸化水平。Western Blot檢測結(jié)果顯示在MCF7細(xì)胞中,誘導(dǎo)PRMT2過表達(dá)后,p-m TOR蛋白水平升高,ULK1、p-AMPK、PI3K、PTEN、p-AKT蛋白表達(dá)水平下降。在MDA-MB-231細(xì)胞中,誘導(dǎo)PRMT2過表達(dá)后,p-m TOR、PI3K、PTEN、p-AKT蛋白表達(dá)水平下降,ULK1、p-AMPK蛋白表達(dá)水平增加。其中,在MCF7和MDA-MB-231細(xì)胞中,誘導(dǎo)PRMT2過表達(dá)后,p-m TOR、ULK1和p-AMPK蛋白變化趨勢相反,而PI3K、PTEN、p-AKT蛋白變化趨勢一致。結(jié)論:LC3B在組織病理分級Ⅲ級乳腺癌中表達(dá)較高,而在Luminal型乳腺癌中表達(dá)較低;P62在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中表達(dá)較高。PRMT2過表達(dá)抑制MCF7細(xì)胞自噬,促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞自噬。PRMT2通過下調(diào)Beclin1信號通路和AMPK-m TOR-ULK1/2信號通路抑制MCF7細(xì)胞自噬;PRMT2通過上調(diào)Beclin1信號通路和AMPK-m TOR-ULK1/2信號通路促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞自噬。第二部分乳腺癌組織中PRMT2及其剪接體PRMT2β蛋白的表達(dá)及意義目的:探討PRMT2及其剪接體PRMT2β蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法:采用免疫組織化學(xué)方法,檢測組織芯片中138例乳腺癌,6例正常乳腺組織和6例良性乳腺組織中PRMT2及PRMT2β蛋白的表達(dá),分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果:PRMT2β蛋白盡管在不同乳腺組織中表達(dá)無顯著性差異（P=0.096）,但仍然隨著乳腺癌組織類型惡性程度的增加而呈下降的趨勢:在正常乳腺組織中陽性率為66.7%,乳腺良性腫瘤中陽性表達(dá)率為50.0%,乳腺癌組織中陽性表達(dá)率為29.0%惡性腫瘤。相反,PRMT2蛋白表達(dá)陽性率從正常乳腺組織到乳腺癌組織逐漸增加:在正常乳腺組織中陽性率為33.3%,在乳腺良性腫瘤中陽性率為83.3%,乳腺癌組織中陽性率占95.7%,統(tǒng)計學(xué)分析差異有顯著性（P=0.0002）。在乳腺癌組織中PRMT2β的表達(dá)與HER2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（P=0.033）,而與雄激素受體（AR）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Ki-67、和p53表達(dá)無明顯的相關(guān)性（P>0.05）。乳腺癌組織中PRMT2的表達(dá)與PR和HER2顯示明顯的負(fù)相關(guān)（分別P=0.039和P=0.019）。結(jié)論:PRMT2β蛋白在正常乳腺組織和良性乳腺腫瘤組織中表達(dá)較乳腺癌組織中較高。在乳腺癌組織中PRMT2β蛋白的表達(dá)與HER2呈負(fù)相關(guān)。PRMT2蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著高于正常乳腺組織和良性乳腺腫瘤組織。在乳腺癌組織中PRMT2蛋白的表達(dá)與HER2、PR呈負(fù)相關(guān)。第三部分PRMT2剪接體PRMT2β抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞生長及自噬目的:探討PRMT2剪接體PRMT2β對乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響。方法:構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)PRMT2β的MCF7細(xì)胞系,通過MTT、克隆形成、細(xì)胞周期及凋亡分析,探討PRMT2β在乳腺癌細(xì)胞中的作用,通過熒光素酶活性檢測和Western Blot技術(shù)分析PRMT2β對細(xì)胞周期蛋白cyclin D1啟動子轉(zhuǎn)錄活性及Akt信號通路的影響,通過透射電鏡、Western Blot技術(shù)探討PRMT2β對乳腺癌細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果:成功構(gòu)建PRMT2β-Tet-on穩(wěn)定過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞系。PRMT2β過表達(dá)能明顯抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖和克隆形成,同時誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡,抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞自噬。PRMT2β過表達(dá)能抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞中CCND1啟動子轉(zhuǎn)錄活性,并通過抑制Akt/GSK-3β信號通路抑制CCND1的表達(dá)。結(jié)論:PRMT2β抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞增殖和自噬,誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和凋亡;PRMT2β通過抑制Akt/GSK-3β信號傳導(dǎo)通路抑制乳腺癌MCF7細(xì)胞中CCND1表達(dá)。
程凱[5]（2020）在《組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶介導(dǎo)乳腺癌腫瘤耐藥機(jī)制的實驗研究》文中研究指明第一部分 tTG評估乳腺癌新輔助化療療效的臨床意義研究目的:探討tTG評估新輔助化療療效的臨床意義,從臨床水平為乳腺癌腫瘤耐藥提供新的理論依據(jù)。研究方法:（1）回顧性收集濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院從2014年1月-2019年6月間病理科存檔的接受新輔助化療的女性單側(cè)乳腺癌病人71例,記錄完善的臨床病理資料;（2）利用免疫組織化學(xué)檢測新輔助化療前后乳腺癌組織中tTG蛋白表達(dá)的變化;（3）分別根據(jù)RECIST1.1、Miller-Payne分級標(biāo)準(zhǔn)對新輔助化療療效進(jìn)行臨床評估和病理學(xué)評估,依據(jù)評估結(jié)果將病人分為:新輔助化療敏感組和新輔助化療耐藥組,分別統(tǒng)計分析新輔助化療前后tTG的表達(dá)與新輔助化療療效、新輔助化療后耐藥組tTG的表達(dá)與應(yīng)用的化療藥物以及新輔助化療前后tTG的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。研究結(jié)果:（1）新輔助化療后乳腺癌組織中tTG的表達(dá)較新輔助化療前乳腺癌組織中tTG的表達(dá)升高;（2）新輔助化療前tTG的表達(dá)水平與新輔助化療療效的臨床評估和病理學(xué)評估均無明顯相關(guān)性,而新輔助化療后tTG的表達(dá)升高,與新輔助化療療效臨床評估和病理學(xué)評估均有相關(guān)性,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）;（3）新輔助化療后耐藥組中tTG的表達(dá)與應(yīng)用的化療藥物之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義;（4）新輔助化療前乳腺癌組織中tTG的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ki67增殖指數(shù)有明顯相關(guān)性（p<0.05）,而與年齡、月經(jīng)、腫瘤直徑、臨床分期、組織學(xué)分級以及ER、PR、Her-2的表達(dá)無明顯相關(guān)性;新輔助化療后tTG的表達(dá)與腫瘤直徑、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性,而與年齡、月經(jīng)、組織學(xué)分級以及ER、PR、Her-2、Ki67增殖指數(shù)無相關(guān)性。研究結(jié)論:（1）新輔助化療前tTG的表達(dá)與新輔助化療療效臨床評估和病理學(xué)評估無明顯相關(guān)性,說明tTG可能不是預(yù)測新輔助化療療效的一個有效因子;（2）新輔助化療后tTG的表達(dá)升高,并與新輔助化療療效臨床評估和病理學(xué)評估均具有相關(guān)性,說明tTG參與了乳腺癌新輔助化療的耐藥,新輔助化療后tTG的表達(dá)升高可能是后續(xù)新輔助化療療效評估的一個重要因素;（3）新輔助化療后tTG的表達(dá)與應(yīng)用的化療藥物無相關(guān)性,說明tTG參與乳腺癌新輔助化療耐藥的過程,與應(yīng)用的化療藥物無關(guān);（4）tTG可能在促進(jìn)乳腺癌的細(xì)胞增殖與腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用。創(chuàng)新點:經(jīng)過文獻(xiàn)復(fù)習(xí)與檢索,關(guān)于tTG評估乳腺癌新輔助化療療效的臨床意義的研究未見有報道。由于新輔助化療可以預(yù)估腫瘤對藥物的敏感性,從新輔助化療的角度出發(fā),研究tTG乳腺癌新輔助化療療效的臨床意義可以為乳腺癌腫瘤耐藥提供更可靠的理論依據(jù)。第二部分tTG介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7對阿霉素耐藥機(jī)制的研究研究目的:探討tTG介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7對阿霉素耐藥可能的作用機(jī)制,為解決乳腺癌腫瘤耐藥問題提供新的理論依據(jù)。研究方法:（1）設(shè)計小干擾RNA序列,利用熒光顯微鏡觀察綠色轉(zhuǎn)染蛋白的轉(zhuǎn)染率,采用RT-PCR和western-blot篩選基因沉默TGM2（tTG的編碼基因）的最佳序列。（2）將細(xì)胞分為 MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+tTG siRNA 三組,tTG、P-gp、MRP、LRP的mRNA的表達(dá)水平通過RT-PCR檢測,tTG、P-gp、MRP、LRP的蛋白表達(dá)水平通過 western-blot 檢測。（3）MTT 法檢測 MCF-7、MCF-7/ADR 的 IC50,確定作用于MCF-7/ADR阿霉素合適的濃度。（4）將細(xì)胞分為MCF-7、MCF/ADR、MCF-7/ADR+tTG siRNA、MCF-7/ADR+阿霉素、MCF-7/ADR+tTG siRNA+阿霉素五組,對乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行測定,細(xì)胞生長情況通過MTT法檢測,細(xì)胞凋亡情況通過流式細(xì)胞術(shù)檢測。研究結(jié)果:（1）熒光顯微鏡下顯示綠色轉(zhuǎn)染蛋白轉(zhuǎn)染率達(dá)到90%以上,且RT-PCR和western-blot結(jié)果顯示,siRNA 3序列是基因沉默TGM2的最佳序列。（2）tTG的mRNA和蛋白表達(dá)水平分別通過RT-PCR和western-blot檢測,結(jié)果顯示,與MCF-7相比,MCF-7/ADR的tTG的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高,基因沉默TGM2后,tTG的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下降,說明轉(zhuǎn)染成功。（3）RT-PCR和western-blot分別檢測P-gp、MRP、LRP的mRNA和蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示,與MCF-7相比,MCF-7/ADR的P-gp、MRP、LRP的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高,基因沉默TGM2后,P-gp、MRP、LRP的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下降。（4）MTT法確定 MCF-7 和 MCF-7/ADR 的 IC50 分別為 2.43ug/ml、89.44ug/ml。（5）MTT 測定細(xì)胞的生長情況,結(jié)果顯示,MCF-7與MCF-7/ADR的細(xì)胞生長抑制率最低,MCF-7/ADR+tTG siRNA+阿霉素細(xì)胞生長抑制率最高。與MCF-7/ADR組相比,MCF-7/ADR+tTG siRNA組細(xì)胞生長抑制率明顯升高（p<0.05）,并且呈現(xiàn)時間依賴性;與MCF-7/ADR+阿霉素組相比,MCF-7/ADR+tTG siRNA+阿霉素組生長抑制率升高（p<0.05）。（6）細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率最高的為MCF-7/ADR+tTG siRNA+阿霉素組,明顯高于 MCF-7/ADR+阿霉素組（p<0.05）。與 MCF-7/ADR 相比,MCF-7/ADR+tTG siRNA 組細(xì)胞凋亡率升高（p<0.05）。研究結(jié)論:（1）tTG與P-gp、MRP、LRP在MCF-7/ADR中高表達(dá),說明tTG與P-gp、MRP、LRP參與了 MCF-7對阿霉素耐藥的過程。（2）基因沉默TGM2后,MCF-7/ADR的P-gp、MRP、LRP mRNA和蛋白表達(dá)水平下降,說明tTG可能通過調(diào)控P-gp、MRP、LRP的表達(dá)介導(dǎo)MCF-7對阿霉素的耐藥。（3）基因沉默TGM2后,細(xì)胞生長受到抑制,細(xì)胞凋亡率升高,基因沉默TGM2聯(lián)合阿霉素組的細(xì)胞生長抑制率和細(xì)胞凋亡率最高,說明基因沉默TGM2聯(lián)合阿霉素可以抑制細(xì)胞生長,促進(jìn)MCF-7/ADR細(xì)胞凋亡,使MCF-7/ADR對阿霉素的化療敏感性增強(qiáng)。創(chuàng)新點:耐藥蛋白是腫瘤耐藥的主要機(jī)制之一,本部分研究從耐藥蛋白的角度出發(fā),研究了 tTG可能通過調(diào)控P-gp、MRP、LRP介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的腫瘤耐藥,既往復(fù)習(xí)文獻(xiàn)和檢索,發(fā)現(xiàn)關(guān)于tTG與P-gp在腫瘤領(lǐng)域的個別研究,尚未見關(guān)于tTG與MRP、LRP方面的相關(guān)研究。第三部分基因沉默TGM2抑制MCF-7/ADR細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的研究研究目的:從動物水平,進(jìn)一步探討基因沉默TGM2對MCF-7/ADR細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響。研究方法:（1）MCF-7/ADR注射于裸鼠腋窩脂肪墊,建立裸鼠移植瘤動物模型;（2）根據(jù)是否注射基因沉默TGM2載體和阿霉素,將裸鼠分為五組:空白對照組、ADR組、ADR+tTG siRNA組、ADR+阿霉素組、ADR+tTG siRNA組+阿霉素組,按照分組給予瘤體內(nèi)注射基因沉默載體和阿霉素進(jìn)行干預(yù);（3）28天后動物處死,腫瘤稱重,并行免疫組化檢測瘤內(nèi)tTG、P-gp、MRP、LRP的蛋白表達(dá)。研究結(jié)果:（1）與ADR組相比,ADR+tTG siRNA組腫瘤抑制作用更明顯（p<0.05）;與ADR+阿霉素相比,ADR+tTG siRNA+阿霉素組腫瘤抑制作用更明顯（p<0.05）;其中ADR+tTG siRNA+阿霉素組腫瘤抑制作用最明顯。（2）與ADR組相比,ADR+tTGsiRNA組tTG、P-gp、MRP、LRP的蛋白表達(dá)水平下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與ADR+阿霉素相比,ADR+tTG siRNA+阿霉素組的tTG、P-gp、MRP、LRP蛋白表達(dá)的水平下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)論:基因沉默TGM2聯(lián)合阿霉素可以明顯抑制裸鼠移植瘤生長,其機(jī)制可能與基因沉默后tTG、P-gp、MRP、LRP蛋白表達(dá)的水平下降有關(guān),與體外實驗結(jié)果一致。創(chuàng)新點:本部分從動物水平進(jìn)一步探討了基因沉默TGM2抑制MCF-7/ADR細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的作用。第四部分MCF-7/ADR外泌體傳遞tTG參與MCF-7耐藥的研究研究目的:探討MCF-7/ADR通過外泌體傳遞tTG介導(dǎo)MCF-7對阿霉素耐藥的形成。研究方法:（1）利用低溫梯度離心法進(jìn)行外泌體的提取與純化;（2）采用透射電鏡觀察外泌體的大小與形態(tài);（3）外泌體的特異性標(biāo)志物CD63、TSG101的表達(dá)及其陰性對照Calnexin的表達(dá)通過western-blot方法檢測以鑒定外泌體;（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測EXO/S、EXO/ADR中tTG的表達(dá)水平;（5）利用PKH67標(biāo)記的外泌體EXO/ADR,倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞對外泌體的攝取情況;（6）western-blot檢測tTG 蛋白在 MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR 中的表達(dá)水平;（7）CCK8法檢測MCF-7、MCF-7/ADR、與EXO/ADR共培養(yǎng)的MCF-7對阿霉素的IC50,評估EXO/ADR與MCF-7共培養(yǎng)后細(xì)胞對阿霉素的藥物敏感性。研究結(jié)果:（1）透視電鏡觀察到外泌體透視電鏡觀察到外泌體直徑介于30-150nm之間,呈典型的圓形或杯口狀形態(tài);（2）外泌體的鑒定:western-blot結(jié)果顯示,Exo/S、Exo/ADR表達(dá)外泌體的特異性標(biāo)志物CD63、TSG101,而陰性對照Calnexin不表達(dá);（3）EXO/S與EXO/ADR中tTG的表達(dá)水平:流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,EXO/S與EXO/ADR中都有tTG的表達(dá),但與EXO/S相比,EXO/ADR中tTG的表達(dá)升高（p<0.05）;（4）倒置熒光顯微鏡觀察到標(biāo)記PKH67的外泌體與MCF-7共培養(yǎng) 12h 后,MCF-7 攝取率>90%;（5）MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR中tTG的表達(dá):western-blot結(jié)果顯示,與MCF-7相比,與EXO/ADR共培養(yǎng)的MCF-7 tTG 表達(dá)水平升高（p<0.05）;（6）MCF-7、MCF-7/ADR、MCF-7+EXO/ADR對阿霉素的藥物敏感性:CCK8結(jié)果顯示,與EXO/ADR共培養(yǎng)的MCF-7對阿霉素的 IC50 為 6.16±1.15,MCF-7 對阿霉素的 IC50 是 1.91±0.18,與 EXO/ADR 共培養(yǎng)的MCF-7對阿霉素的IC50是MCF-7對阿霉素IC50的3.23倍。研究結(jié)論:（1）耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR和敏感細(xì)胞株MCF-7均可以分泌外泌體。（2）耐藥細(xì)胞株MCF-7/ADR和敏感細(xì)胞株MCF-7的外泌體中都有tTG蛋白表達(dá),且MCF-7/ADR外泌體的tTG表達(dá)水平更高。（3）MCF-7/ADR可以通過外泌體傳遞tTG,被敏感細(xì)胞MCF-7攝取。（4）MCF-7/ADR可能通過外泌體傳遞tTG介導(dǎo)MCF-7對阿霉素的耐藥。創(chuàng)新點:經(jīng)過復(fù)習(xí)文獻(xiàn)及檢索,未見有乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR外泌體傳遞tTG介導(dǎo)MCF-7對阿霉素耐藥的相關(guān)研究,本部分研究第一次發(fā)現(xiàn)了 MCF-7/ADR通過外泌體傳遞tTG介導(dǎo)MCF-7對阿霉素的耐藥。
范小慶[6]（2020）在《Micro RNA-204調(diào)控PI3K/AKT通路影響乳腺癌增殖和轉(zhuǎn)移等行為的作用及機(jī)制研究》文中指出乳腺癌是我國女性第一位高發(fā)的惡性腫瘤,每年新增患者逐年增多,且有呈逐漸年輕化的趨勢。盡管早期乳腺癌篩查的開展和綜合治療水平的提高改善了治療效果,仍有30%的乳腺癌患者出現(xiàn)晚期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,嚴(yán)重威脅女性生命健康安全。隨著對乳腺癌等腫瘤的不斷深入研究,人們逐漸認(rèn)識到“MicroRNA”在腫瘤發(fā)生中的作用,多種類的miRNA才是腫瘤基因遺傳程序調(diào)控的基礎(chǔ),能調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞的惡性行為。針對miRNA與乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤相關(guān)性研究則顯示與患者病理資料和預(yù)后關(guān)系密切。其中,miRNA-204與乳腺癌的關(guān)系正是本研究的重點。探明miRNA在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中的影響和作用方式,對于乳腺癌的預(yù)防和治療有重要意義。而明確miRNA-204在乳腺癌患者中表達(dá)意義及影響方式,有助于尋找乳腺癌早期診斷的標(biāo)記物和精準(zhǔn)治療的分子靶點,同時能為乳腺癌新治療方案的制定提供依據(jù)。第一部分Micro RNA-204表達(dá)與乳腺癌臨床病理資料的關(guān)系研究目的明確miR-204表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理資料的相關(guān)性方法利用RT-qPCR法檢測miR-204在乳腺癌病理組織中的表達(dá)情況,結(jié)合病理資料分析miR-204與臨床病理床資料的相關(guān)性。結(jié)果1、miR-204在正常乳腺組織和癌變組織中均有表達(dá),且在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯低于正常乳腺組織（P<0.05）。2、miR-204水平與患者年齡、腫瘤直徑、ER、RP及HER2表達(dá)強(qiáng)度均無明顯相關(guān)性;而miR-204水平隨著病理組織組織學(xué)分級的增高而明顯降低;隨著臨床分期的增高而明顯降低,且淋巴轉(zhuǎn)移的病理組織中miR-204水平明顯低于未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的組織（P<0.05）。第二部分Micro RNA-204對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響目的明確miR-204對乳腺癌MCF-7細(xì)胞株增殖、侵襲及凋亡等行為的影響。方法利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染miR-204 mimics至MCF-7細(xì)胞過表達(dá)miR-204,利用MTT法檢測MCF-7細(xì)胞增殖情況;利用Hoechst染色法檢測細(xì)胞凋亡水平;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期情況,及Transwell法檢測細(xì)胞侵襲及遷移能力變化。結(jié)果1、外源轉(zhuǎn)染miR-204 mimics至MCF7細(xì)胞顯著提高miR-204水平,且與miR-NC組比較,過表達(dá)miR-204能明顯抑制MCF7細(xì)胞活力。2、Hoechst 33342結(jié)果顯示,與miR-NC組比較,miR-204 mimics組細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增高;Annexin V/PI檢測結(jié)果也顯示miR-204 mimics組細(xì)胞凋亡率明顯高于miR-NC組。3、過表達(dá)miR-204能誘導(dǎo)乳腺癌MCF7細(xì)胞G2/M細(xì)胞周期阻滯4、與miR-NC組細(xì)胞比較轉(zhuǎn)染miR-204 minics的MCF7細(xì)胞穿膜數(shù)量明顯減少。5、與miR-NC組比較,MCF7細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-204 minics過表達(dá)miR-204后侵襲能力明顯降低。第三部分Micro RNA204過表達(dá)對乳腺癌PI3K/AKT信號通路的影響目的探討miR-204影響MCF-7細(xì)胞生物學(xué)行為及乳腺癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。方法比較PTEN在乳腺癌細(xì)胞和人乳腺細(xì)胞中的表達(dá)差異;利用Target Scan靶基因預(yù)測軟件篩選出PTEN為miR-204的調(diào)控靶基因;檢測miR-204對PTEN表達(dá)的影響進(jìn)行驗證;過表達(dá)MCF-7細(xì)胞中miR-204分析對PTEN mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響;并檢測PI3K/AKT信號通路相關(guān)蛋白活性變化。結(jié)果1、PTEN在MCF-7細(xì)胞中的表達(dá)水平低于Hs 841.T細(xì)胞;2、Target Scan靶基因預(yù)測報告顯示miR-204與PTEN序列中存在互補(bǔ)片段,提示PTEN是miR-204潛在調(diào)控的下游靶基因;3、MCF-7細(xì)胞中過表達(dá)miR-204能提高PTEN mRNA和蛋白表達(dá)水平;4、過表達(dá)MCF-7細(xì)胞中miR-204能明顯抑制PI3K/AKT通路相關(guān)蛋白活性。結(jié)論:1、miR-204在乳腺癌組織中低表達(dá),且與乳腺癌臨床資料有相關(guān)性;2、過表達(dá)miR-204能影響乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期及侵襲等生物學(xué)行為;3、miR-204靶向調(diào)控PTEN抑制PI3K/AKT信號通路抑制乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。
全東令[7]（2020）在《LncRNA AFAP1-AS1通過調(diào)控miR-21/PTEN軸影響乳腺癌增殖和遷移的機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:尋找乳腺癌的特異性分子標(biāo)志是乳腺癌診斷和治療的要點,非編碼RNA作為新型靶點,在腫瘤治療中的作用受到越來越多的關(guān)注。通過生物信息學(xué)分析尋找乳腺癌的特異性lncRNA標(biāo)志物,發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1和是乳腺癌增殖和遷移的潛在標(biāo)志物,miR-21是它的潛在靶點。旨在研究AFAP1-AS1對乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響,探討AFAP1-AS1對miR-21是否具有靶向作用,闡明AFAP1-AS1參與乳腺癌進(jìn)程的機(jī)制是否與調(diào)控miR-21/PTEN軸有關(guān),以期為乳腺癌治療尋找新的分子標(biāo)志和有效靶點。方法:使用生物信息學(xué)方法尋找乳腺癌的lncRNA標(biāo)志物;采用qRT-PCR檢測mRNA的水平;Western blot實驗檢測蛋白的水平;采用LF-2000對乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行多種序列的瞬時轉(zhuǎn)染。采用MTT、克隆形成和EdU實驗檢測乳腺癌細(xì)胞的增殖能力;劃痕實驗、Transwell實驗檢測乳腺癌細(xì)胞的遷移能力。采用RNA pull down實驗研究AFAP1-AS1與miR-21的結(jié)合;通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒烌炞CmiR-21對PTEN的靶向作用。用無胸腺裸鼠構(gòu)建乳腺癌異種移植瘤模型,研究AFAP1-AS1穩(wěn)定敲低對乳腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長的影響。結(jié)果:1.生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示AFAP1-AS1和miR-21在人體乳腺癌組織中異常表達(dá),細(xì)胞水平與人體組織水平驗證顯示二者在乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá);PTEN在乳腺癌組織和細(xì)胞中則呈現(xiàn)低表達(dá)。2.沉默AFAP1-AS1乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞的增殖、遷移能力被顯著降低。3.轉(zhuǎn)染miR-21 mimic后乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移能力顯著提高;轉(zhuǎn)染miR-21 inhibitor后乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移的能力顯著降低。4.沉默AFAP1-AS1后miR-21的表達(dá)減少;RNA pulldown結(jié)果顯示AFAP1-AS1與miR-21存在直接結(jié)合;沉默AFAP1-AS1后再恢復(fù)miR-21的表達(dá),AFAP1-AS1對乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移的作用被逆轉(zhuǎn)。5.Western blot和qRT-PCR實驗顯示miR-21對PTEN的mRNA和蛋白水平具有負(fù)調(diào)控作用;熒光素酶報告基因?qū)嶒烇@示miR-21對PTEN具有靶向調(diào)節(jié)作用。過表達(dá)miR-21后再恢復(fù)PTEN的表達(dá),miR-21高表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞的效應(yīng)被逆轉(zhuǎn);低表達(dá)miR-21后再降低PTEN的表達(dá),miR-21低表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞的效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)。6.沉默AFAP1-AS1可增加PTEN的mRNA和蛋白水平。沉默AFAP1-AS1后再恢復(fù)miR-21的表達(dá),AFAP1-AS1對PTEN調(diào)節(jié)作用被逆轉(zhuǎn)。7.用shRNA穩(wěn)定敲低AFAP1-AS1,乳腺癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長速度顯著減慢。結(jié)論:1.AFAP1-AS1和miR-21在乳腺癌細(xì)胞及人體乳腺癌組織中高表達(dá),AFAP1-AS1在人體乳腺癌組織中的表達(dá)水平與患者的患病年齡成正比,有望成為乳腺癌早期篩選的分子標(biāo)志物和臨床治療靶標(biāo)。2.AFAP1-AS1對miR-21具有靶向正調(diào)控作用,并通過miR-21影響乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移。3.miR-21對PTEN具有靶向負(fù)調(diào)控作用,AFAP1-AS1沉默后通過下調(diào)miR-21的水平,升高抑癌基因PTEN的表達(dá),參與癌細(xì)胞的增殖、遷移過程。
張矯[8]（2020）在《miR-1225-5p在乳腺癌中的作用及機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理背景:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。盡管患者相對預(yù)后好,生存期長,但腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍然是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。因此,探索疾病發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在機(jī)制,尋求新的治療靶點,成為研究關(guān)注的重點。Micro RNA（miRNA）是最重要的一類nc RNA（non-coding RNAs）,與細(xì)胞生長、增殖、分化及凋亡等密切相關(guān),在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中具有重要意義。許多疾病中,miRNA出現(xiàn)異常表達(dá)現(xiàn)象,并與疾病的表型相關(guān)聯(lián),其在癌癥中的作用尤為引人關(guān)注。miRNA具有多基因調(diào)控性,能夠調(diào)節(jié)惡性腫瘤進(jìn)程中關(guān)鍵基因的表達(dá),導(dǎo)致各種信號通路失常,影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。越來越多的研究表明,miRNA具有成為生物標(biāo)志物的潛力,在惡性腫瘤診斷、治療及預(yù)后中發(fā)揮作用。目的:通過數(shù)據(jù)庫的篩選發(fā)現(xiàn),miR-1225-5p在乳腺癌中表達(dá)升高。雖然在胰腺癌、喉癌中,miR-1225-5p已有相關(guān)研究,但乳腺癌中未見文獻(xiàn)報道。因此,實驗將探索miR-1225-5p在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,并闡明內(nèi)在分子機(jī)制。方法:1.收集乳腺癌臨床組織標(biāo)本,檢測miR-1225-5p的表達(dá)量,并分析與預(yù)后的關(guān)系。2.通過MTT、Ed U、克隆形成及凋亡檢測,觀察差異表達(dá)miR-1225-5p對乳腺癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響。3.篩選miR-1225-5p靶基因,表達(dá)定量及熒光素酶實驗驗證?；謴?fù)靶基因的表達(dá)水平,開展細(xì)胞營救實驗,觀察乳腺癌細(xì)胞生長的變化。4.免疫缺陷小鼠皮下成瘤實驗,觀察不同組間腫瘤生長狀況。適時解剖,稱重測量腫瘤組織。5.Linked Omics網(wǎng)站尋找靶基因ZNF37A的關(guān)聯(lián)基因,DAVID網(wǎng)站富集信號通路。6.Ch IP實驗檢測ZNF37A與Smad4啟動子區(qū)的結(jié)合,明確二者的調(diào)控關(guān)系。7.周期實驗明確miR-1225-5p對細(xì)胞周期的影響,western blot檢測周期蛋白變化。8.免疫組化染色靶基因、增殖指標(biāo)Ki67及周期蛋白指標(biāo),觀察表達(dá)變化。結(jié)果:1.miR-1225-5p在乳腺癌組織中高表達(dá),并與不良預(yù)后呈正相關(guān)。2.過表達(dá)miR-1225-5p,促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞增殖。而降表達(dá)miR-1225-5p,抑制MCF-7細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。3.ZNF37A為miR-1225-5p的調(diào)控靶基因。MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系中恢復(fù)ZNF37A表達(dá)水平,可逆轉(zhuǎn)miR-1225-5p促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖的作用。4.體內(nèi)動物實驗,過表達(dá)miR-1225-5p的MDA-MB-231細(xì)胞腫瘤生長的速度及腫瘤體積、重量均高于對照組細(xì)胞。5.轉(zhuǎn)錄因子ZNF37A可以與Smad4的啟動子區(qū)結(jié)合,轉(zhuǎn)錄激活Smad4的表達(dá),二者表達(dá)呈正相關(guān)。6.過表達(dá)miR-1225-5p的MDA-MB-231細(xì)胞S期比例明顯升高。蛋白檢測可見促進(jìn)細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期的周期蛋白Cyclin D1表達(dá)水平升高。7.免疫組化染色,過表達(dá)miR-1225-5p組中靶基因ZNF37A及其下游調(diào)控基因Smad4表達(dá)降低,而增殖指標(biāo)Ki67和周期蛋白指標(biāo)Cyclin D1表達(dá)升高。結(jié)論:miR-1225-5p在乳腺癌組織中高表達(dá),而高表達(dá)的miR-1225-5p靶向下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子ZNF37A,進(jìn)而轉(zhuǎn)錄抑制Smad4,導(dǎo)致細(xì)胞周期中G1期關(guān)鍵周期蛋白Cyclin D1表達(dá)升高,促進(jìn)細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期,發(fā)揮促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞生長增殖,抑制凋亡的作用。
塔依爾·吐爾松[9]（2020）在《LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2信號軸調(diào)控乳腺癌進(jìn)程的機(jī)制研究》文中提出目的:乳腺癌是婦科常見的惡性腫瘤,是女性癌癥死亡的主要原因之一。為了發(fā)現(xiàn)LINC00536在乳腺癌細(xì)胞系增殖和遷移中的作用,以及LINC00536在乳腺癌細(xì)胞系中的作用及其分子機(jī)制,本研究分為四個部分。1)基于生物信息學(xué)方法探索乳腺癌進(jìn)程關(guān)鍵基因的篩選。2)長鏈非編碼RNA LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床病理特征分析。3)LINC00536在乳腺癌中的異常表達(dá)及其對乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。4)LINC00536的下游分子miR-204-5p和TGFBR2在乳腺癌細(xì)胞中三者之間的靶向作用驗證。方法:1)在TCGA數(shù)據(jù)庫共下載1222份乳腺癌患者的RNA-seq數(shù)據(jù);2)基于miRcode和miRTarBase數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了乳腺癌ceRNA網(wǎng)絡(luò)。前10位lncRNA采用Cox回歸分析;3)生存分析采用KM（Kaplan-Meier）曲線分析;4)從TCGA數(shù)據(jù)庫下載LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2單基因數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù),采用單基因分析方法,分析乳腺癌組織及相應(yīng)鄰近正常組織標(biāo)本中的表達(dá)情況及臨床特征;5)采用qRT-PCR方法檢測30對乳腺癌組織中LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2的表達(dá),采用雙變量相關(guān)分析驗證LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2表達(dá)與年齡,腫瘤大小,臨床分期,腫瘤部位,TNM分期的相關(guān)性;6)免疫組織化學(xué)法檢測TGFβ-2在乳腺癌組織和相應(yīng)的鄰近正常乳腺組織的表達(dá)情況;7)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測定乳腺癌患者血液樣品中TGFBR2相關(guān)指標(biāo)表達(dá)量;8)用1H-NMR血漿代謝組學(xué)法分析不同代謝產(chǎn)物;9)針對人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-453,TD-47D和SK-RB-3細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)后,通過qRT-PCR進(jìn)行目標(biāo)基因即LINC00536表達(dá)水平檢測,篩選LINC00536上調(diào)和下調(diào)的細(xì)胞系;10)對LINC00536基因沉默的T47D和MDA-MB-453細(xì)胞系和LINC00536過表達(dá)的MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞系進(jìn)行增殖實驗（CCK8檢測）;11)利用EdUApollo?567體外成像試劑盒檢測T47D、MDA-MB-453、MDA-MB-231和MCF-7的增殖情況,分別用Hoechst染色、Apollo染色細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì);12)劃痕實驗和平板克隆形成實驗檢測T47D和MDA-MB-453細(xì)胞系的增殖、生長和傷口愈合能力;13)利用生物信息學(xué)分析預(yù)測LINC00536和miRNA-204-5p,miRNA-204-5p和TGFBR2的潛在相互作用;14)構(gòu)建報告基因重組載體pmir GLO-Wt3’UTR-LINC00536,pmirGLO-Mt3’UTR-LINC00536,pmirGLO-Wt3’UTR-TGFBR2和pmirGLO-Mt3’UTR-TGFBR2。采用雙熒光素酶報告實驗驗證TGFBR2、miRNA-204-5p、LINC00536調(diào)控關(guān)系;15)Western-blot檢測T47D細(xì)胞TGF-β信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1)我們鑒定了1028個與乳腺癌相關(guān)的lncRNA和89個miRNA（fold change>2,P<0.05）;其中,93個lncRNA和19個miRNA和27個mRNA構(gòu)成ceRNA網(wǎng)絡(luò);2)我們選擇了10個lncRNA并分析了它們的總生存期;最終發(fā)現(xiàn)了5個lncRNA（ADAMTS9-AS1,AL513123.1,C10orf126,LINC00536,WT1-AS）與總生存期顯著相關(guān)（log-rank P<0.05）;3)單基因分結(jié)果顯示,乳腺癌組織中LINC00536的表達(dá)水平高于正常組織,miR-204-5p的表達(dá)水平在乳腺癌組織中的表達(dá)低于正常組織,乳腺癌組織中TGFBR2的表達(dá)下調(diào)。乳腺癌患者性別、初步診斷無顯著性差異,但人種、民族、診斷年齡、腫瘤分期程度與患者生存情況有關(guān)（P<0.05）。在1081例乳腺癌患者回歸單因素分析中,人種、民族、診斷年齡、初步診斷與LINC00536表達(dá)水平有關(guān)（P<0.05）。在1070例乳腺癌患者回歸單因素分析中,人種、民族、診斷年齡、初步診斷與miR-204-5p表達(dá)水平有關(guān)（P<0.05）。在1090例乳腺癌患者回歸單因素分析中,人種、診斷年齡、初步診斷、腫瘤分期程度與TGFBR2表達(dá)水平有關(guān)（P<0.05）;4)qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與正常組織相比,LINC00536在乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯上調(diào)（P<0.05）。miR-204-5p/TGFβ-2在乳腺癌組織中的表達(dá)水平下調(diào)（P<0.05）。LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2表達(dá)與年齡,腫瘤大小,臨床分期,腫瘤部位,TNM分期均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;5)免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示,與正常乳腺組織相比,乳腺癌組織中的TGFBR2陽性細(xì)胞、胞質(zhì)染色和胞外陽性染色均降低（P<0.05）;6)在乳腺癌組TGFBR1、Smad2水平升高,TGFBR2,Smad3,Smad4水平顯著降低;7)與正常組比較,乳腺癌組丙酮酸、檸檬酸、膽固醇、甘氨酸、乙酰乙酸、甲胺、二甲胺、天冬酰胺、亮氨酸、β-葡萄糖升高;8)在MDA-MB-231、T47D、MCF-7、MDA-MB-453和SKBR-3細(xì)胞系中檢測到LINC00536表達(dá),在T47D和MDA-MB-453細(xì)胞中明顯升高;MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞系中下調(diào);9)CCK8法檢測結(jié)果顯示在T47D和MDA-MB-453細(xì)胞中,si-LINC00536組細(xì)胞較空白組和無關(guān)序列對照組吸光度顯著減少,且隨著時間的持續(xù),差異越來越大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;LINC00536表達(dá)上調(diào)后,乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞的活力較對照組明顯增加（P<0.05）。10)利用EdUApollo?567染色T47D和MDA-MB-453細(xì)胞,si-LINC00536組細(xì)胞較空白組和無關(guān)序列對照組陽性染色細(xì)胞數(shù)明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;EdU細(xì)胞實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,LINC00536過表達(dá)組乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增加（P<0.05）。11)劃痕實驗檢測結(jié)果顯示在T47D和MDA-MB-453細(xì)胞中,si-LINC00536組細(xì)胞較空白組和無關(guān)序列對照組劃痕愈合能力降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;12)平板克隆形成實驗結(jié)果顯示在T47D和MDA-MB-453細(xì)胞中,si-LINC00536組細(xì)胞較空白組和無關(guān)序列對照組細(xì)胞克隆形成數(shù)顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;13)生物信息學(xué)分析推測miRNA204-5p與LINC00536和TGFBR2存在潛在的相互作用的種子區(qū)（seed region）區(qū)有特異結(jié)合位點;14)雙熒光素酶報告實驗顯示TGFBR2是miRNA-204-5p的一個靶基因,miRNA-204-5p與LINC00536有結(jié)合位點;15)乳腺癌細(xì)胞中異常高表達(dá)的LINC00536可下調(diào)miR-204-5p的表達(dá),并通過影響TGFBR2的表達(dá)量其發(fā)揮生物學(xué)作用。結(jié)論:生信分析篩選出93個lncRNA和19個miRNA和27個mRNA構(gòu)成乳腺癌相關(guān)的ceRNA網(wǎng)絡(luò)。發(fā)現(xiàn)了5個lncRNA（ADAMTS9-AS1,AL513123.1,C10orf126,LINC00536,WT1-AS）與總生存期顯著相關(guān)。體外下調(diào)乳腺癌細(xì)胞LINC00536可以抑制細(xì)胞生長,降低細(xì)胞遷移能力。LINC00536通過負(fù)調(diào)控miRNA-204-5p來影響TGFBR2的表達(dá),從而發(fā)揮其生物學(xué)功能。LINC00536具有促進(jìn)腫瘤生長的作用,有望成為乳腺癌基因治療的新靶點。
劉巖巖[10]（2019）在《NEMP1在乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的作用以及機(jī)制研究》文中研究指明乳腺癌被認(rèn)為是全球女性惡性腫瘤中最常見的癌癥形式之一。在乳腺癌的所有治療方法中,放療和化療是兩種主要的臨床治療手段。盡管在不同的乳腺癌類型中采用不同的治療方式,但是耐藥性在所有乳腺癌類型中都很常見,是臨床上的一大挑戰(zhàn)。性類固醇激素在癌癥發(fā)展和乳腺發(fā)育中起著至關(guān)重要的作用。雌激素是乳腺癌發(fā)生和發(fā)展過程中的主要調(diào)節(jié)因子。研究表明,雌激素降低或者抗雌激素策略對乳腺癌治療具有積極的治療效果,主要表現(xiàn)在雌激素受體依賴的乳腺癌類型中。在降低乳腺癌發(fā)病率的藥物中,一種選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑-他莫昔芬,它能夠作為ER拮抗劑發(fā)揮作用,對于ER陽性的乳腺癌中是非常有希望的治療藥物。盡管一系列的研究顯示他莫昔芬可以顯著降低女性乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險,但他莫昔芬引起的耐藥性仍然是乳腺癌治療中的一個世界關(guān)注點。內(nèi)分泌治療耐藥性的產(chǎn)生是由于遺傳（DNA序列的變化）和表觀遺傳因素引起的。目前,研究者們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾種對他莫昔芬產(chǎn)生耐藥的機(jī)制,但是這對于理解乳腺癌中他莫昔芬耐藥性的產(chǎn)生是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。因此,我們需要迫切探索乳腺癌中他莫昔芬耐藥性的詳細(xì)機(jī)制,為乳腺癌治療找到新的突破口。目的1.為了揭示MCF7/TAMR細(xì)胞中他莫昔芬耐藥性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,我們在他莫昔芬耐藥性的MCF7/TAMR細(xì)胞和他莫昔芬敏感性的MCF7細(xì)胞中檢測NEMP1的m RNA和蛋白質(zhì)水平。此外,我們也在乳腺癌病人的癌旁正常組織和癌癥組織中檢測NEMP1的蛋白和m RNA水平。2.第一部分的結(jié)果發(fā)現(xiàn)NEMP1的蛋白和m RNA水平在乳腺癌組織中均升高,并且NEMP1的表達(dá)在他莫昔芬耐藥的乳腺癌細(xì)胞系MCF7/TAMR中也顯著上調(diào)。因此,第二部分主要是為了探討NEMP1是否參與了對乳腺癌中他莫昔芬耐藥性的調(diào)節(jié)。3.前面兩部分的結(jié)果顯示NEMP1與乳腺癌的發(fā)生高度相關(guān),并且能夠增強(qiáng)MCF7細(xì)胞對他莫昔芬產(chǎn)生耐藥性。而研究表明核受體輔激活因子1也被認(rèn)為是乳腺癌的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,并且與乳腺癌的他莫昔芬耐藥性正相關(guān)?？傊?基于NEMP1和NCOA1是乳腺癌發(fā)展的兩個潛在調(diào)節(jié)因子的假設(shè),我們想要揭示這兩個基因在乳腺癌發(fā)展中的具體分子機(jī)制。最重要的是,本研究的目的是為已經(jīng)產(chǎn)生他莫昔芬耐藥性的乳腺癌患者找到潛在的治療靶點和可行的治療策略。方法1.我們首先用4羥基他莫昔芬（他莫昔芬的活性代謝產(chǎn)物）處理MCF7細(xì)胞,一種雌激素受體陽性并且對他莫昔芬敏感的乳腺癌細(xì)胞系,以獲得他莫昔芬耐藥性的MCF7細(xì)胞系,命名為MCF7/TAMR細(xì)胞。通過MTT試驗不同劑量的4羥基他莫昔芬處理96小時后MCF7和MCF7/TAMR細(xì)胞的增殖能力。接著,利用蛋白免疫印跡和實時定量PCR檢測他莫昔芬敏感性MCF7細(xì)胞和他莫昔芬耐藥性MCF7/TAMR細(xì)胞中NEMP1的蛋白和m RNA表達(dá)水平。此外,我們也通過免疫組織化學(xué)檢測癌癥病人中癌旁正常組織和乳腺癌組織中NEMP1的蛋白表達(dá)水平。而且,我們通過實時定量PCR檢測了53個乳腺癌組織和18個配對的癌旁正常組織中NEMP1的m RNA水平。2.首先利用慢病毒包裝系統(tǒng)獲得MCF7/TAMR敲低NEMP1和MCF7過表達(dá)NEMP1的穩(wěn)定細(xì)胞系,并且利用蛋白免疫印跡分別檢測NEMP1敲低和過表達(dá)的效率。接著,利用細(xì)胞總數(shù)測定、MTT試驗和克隆形成實驗分別檢測NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞和NEMP1過表達(dá)的MCF7細(xì)胞在他莫昔芬處理與未處理時的細(xì)胞狀態(tài)。3.首先利用慢病毒包裝系統(tǒng)獲得MCF7/TAMR敲低NEMP1的穩(wěn)定細(xì)胞系,然后在對照組細(xì)胞和敲低NEMP1的MCF7/TAMR細(xì)胞中利用實時定量PCR檢測參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的主要調(diào)節(jié)因子HER2、EGFR、MYC、CCND1、PTEN、NCOA1、BCL2以及SRC的m RNA水平。另外,利用蛋白免疫印跡的方法檢測對照組和敲低NEMP1的MCF7/TAMR細(xì)胞中NCOA1的表達(dá)水平。結(jié)果1.（1）結(jié)果顯示,當(dāng)4羥基他莫昔芬的濃度逐漸升高時,MCF7細(xì)胞的增殖能力顯著受到抑制,并且呈現(xiàn)濃度依賴效應(yīng)。而當(dāng)4羥基他莫昔芬的濃度為0.2μM、0.5μM和1μM時,MCF7/TAMR細(xì)胞的增殖能力反而增強(qiáng),并且細(xì)胞數(shù)目顯著多于MCF7細(xì)胞。當(dāng)4羥基他莫昔芬濃度為2μM時,與未加4羥基他莫昔芬相比,雖然MCF7/TAMR細(xì)胞增殖受到輕微抑制,但是細(xì)胞數(shù)目也多于增殖受到顯著抑制的MCF7細(xì)胞。（2）蛋白免疫印跡和實時定量PCR結(jié)果顯示,與MCF7細(xì)胞相比,NEMP1在MCF7/TAMR細(xì)胞中的蛋白和m RNA水平都顯著升高。（3）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,與癌旁正常組織相比,在乳腺癌組織中NEMP1的表達(dá)顯著升高。實時定量PCR結(jié)果顯示,與癌旁正常組織相比,在腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)NEMP1的m RNA水平顯著升高。2.（1）蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,與對照組相比,sh RNA穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞中NEMP1的蛋白水平顯著下調(diào)。（2）他莫昔芬處理或者未處理組之間對照組細(xì)胞的生長、增殖能力以及克隆形成能力都沒有顯著差異。然而,在NEMP1敲低后,與未處理組相比,他莫昔芬處理組中細(xì)胞的生長、增殖能力以及克隆形成能力被顯著抑制。（3）蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,與對照組相比,穩(wěn)定過表達(dá)NEMP1-CDS的MCF7細(xì)胞中NEMP1的蛋白水平顯著上調(diào)。（4）在對照組細(xì)胞中,與未處理相比,他莫昔芬處理顯著抑制了細(xì)胞的生長、增殖能力以及克隆形成能力。但是,在NEMP1過表達(dá)細(xì)胞中,他莫昔芬處理與未處理組之間細(xì)胞的生長、增殖能力以及克隆形成能力并沒有明顯差異。3.（1）與對照組細(xì)胞相比,在NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞中只有NCOA1的m RNA水平下降了,而其他的調(diào)節(jié)因子HER2、EGFR、MYC、CCND1、PTEN、BCL2以及SRC的m RNA水平的水平在兩組之間并沒有顯著變化。（2）蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,在NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞中NCOA1的蛋白水平也顯著下降。結(jié)論1.與MCF7細(xì)胞相比,MCF7/TAMR細(xì)胞對他莫昔芬產(chǎn)生了耐藥性。并且,在MCF7/TAMR細(xì)胞中NEMP1的蛋白和m RNA的水平顯著升高。此外,我們也發(fā)現(xiàn)了與癌旁正常組織相比,乳腺癌組織中NEMP1的蛋白水平和m RNA水平也顯著升高,表明NEMP1與乳腺癌以及乳腺癌耐藥性的產(chǎn)生密切相關(guān)。2.利用慢病毒系統(tǒng),我們成功獲得了NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞系和NEMP1過表達(dá)的MCF7細(xì)胞系。在NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞系中,通過細(xì)胞數(shù)目測定、MTT試驗以及克隆形成實驗,我們發(fā)現(xiàn)NEMP1的敲低抑制了MCF7/TAMR細(xì)胞的他莫昔芬耐藥性。此外,在NEMP1過表達(dá)的MCF7細(xì)胞系中,我們發(fā)現(xiàn)NEMP1過表達(dá)降低了MCF7細(xì)胞對他莫昔芬的敏感性,增強(qiáng)了MCF7細(xì)胞對他莫昔芬的耐藥性。3.在NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞中,結(jié)果顯示只有NCOA1的m RNA水平下降了,而其他的調(diào)節(jié)因子如HER2、EGFR、MYC、CCND1、PTEN、BCL2以及SRC的m RNA水平在兩組之間并沒有顯著變化。另外,我們也發(fā)現(xiàn)在NEMP1敲低的MCF7/TAMR細(xì)胞中NCOA1的蛋白水平也顯著下降。這些實驗結(jié)果表明,NEMP1是通過調(diào)控NCOA1的表達(dá),從而調(diào)節(jié)MCF7/TAMR細(xì)胞中的他莫昔芬耐藥性。
二、PTEN在乳腺癌研究中的進(jìn)展（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、PTEN在乳腺癌研究中的進(jìn)展（論文提綱范文）
（1）FBI-1蛋白在乳腺癌腫瘤干細(xì)胞和化療抗性中的作用及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1 乳腺癌化療藥物抗性 |
| 2 乳腺癌干細(xì)胞 |
| 3 乳腺癌干細(xì)胞與化療抗性 |
| 4 FBI-1 蛋白在腫瘤的作用 |
| 第二章 實驗材料與方法 |
| 1 實驗材料 |
| 1.1 實驗細(xì)胞和動物 |
| 1.2 主要試劑與耗材 |
| 1.3 主要實驗儀器 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 2 實驗方法 |
| 2.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 2.2 乳腺干細(xì)胞小球(Mammosphere)培養(yǎng) |
| 2.3 Westernbloting實驗 |
| 2.4 慢病毒的包裝和細(xì)胞感染 |
| 2.5 流式細(xì)胞術(shù) |
| 2.6 Transwell實驗 |
| 2.7 裸鼠皮下移植瘤模型的建立 |
| 2.8 免疫組化IHC實驗 |
| 2.9 乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/ADR的誘導(dǎo)建立 |
| 2.10 MTT細(xì)胞增殖實驗 |
| 2.11 實時熒光定量PCR實驗 |
| 2.12 染色質(zhì)免疫共沉淀實驗 |
| 3 統(tǒng)計方法 |
| 第三章 實驗結(jié)果 |
| 1 FBI-1 在乳腺癌干細(xì)胞維持中的作用 |
| 2 FBI-1 在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的作用 |
| 3 FBI-1 在阿霉素耐藥細(xì)胞株中的作用 |
| 4 研究FBI-1對PTEN表達(dá)的影響 |
| 5 FBI-1 通過下調(diào)PTEN來影響抗性細(xì)胞對藥物的反應(yīng) |
| 第四章 討論 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（2）基于條件重編程細(xì)胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分: 條件重編程細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定 |
| 一、實驗材料 |
| 1、患者與樣本 |
| 2、主要試劑、耗材 |
| 3、主要儀器 |
| 二、實驗方法 |
| 1、條件重編程細(xì)胞培養(yǎng)及傳代 |
| 2、高通量測序 |
| 三、實驗結(jié)果 |
| 1、條件重編程細(xì)胞及其鏡下形態(tài) |
| 2、條件重編程細(xì)胞與腫瘤組織的一致性 |
| 四、討論 |
| 1、條件重編程培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展過程 |
| 2、條件重編程細(xì)胞與原腫瘤組織的一致性 |
| 五、小結(jié) |
| 第二部分: 條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞高通量藥篩試驗 |
| 一、實驗方法 |
| 1、藥物組設(shè)計 |
| 2、敏感藥物篩選實驗 |
| 3、藥篩實驗數(shù)據(jù)分析 |
| 二、實驗結(jié)果 |
| 1、條件重編程細(xì)胞藥敏篩查 |
| 2、條件重編程細(xì)胞藥敏試驗DSS評分的整合 |
| 3、條件重編程藥敏試驗的穩(wěn)定性 |
| 三、討論 |
| 1、條件重編程細(xì)胞藥敏試驗的穩(wěn)定性 |
| 2、PI3K-Akt通路靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應(yīng)用 |
| 3、mTOR通路靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應(yīng)用 |
| 4、表皮生長因子受體靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應(yīng)用 |
| 5、靶向血管形成在三陰性乳腺癌中的應(yīng)用 |
| 6、拓?fù)洚悩?gòu)酶靶向藥物在三陰性乳腺癌治療中的應(yīng)用 |
| 7、靶向乏氧在三陰性乳腺癌治療中的應(yīng)用 |
| 四、小結(jié) |
| 第三部分: 條件重編程細(xì)胞的高通量測序 |
| 一、實驗方法 |
| 1、條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞的外顯子基因突變分析 |
| 2、條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞與條件重編程正常乳腺組織細(xì)胞總體轉(zhuǎn)錄組差異分析 |
| 3、條件重編程細(xì)胞基因集變異分析 |
| 二、實驗結(jié)果 |
| 1、外顯子基因突變情況 |
| 2、條件重編程三陰性乳腺癌細(xì)胞與條件重編程正常乳腺組織細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組差異 |
| 3、三陰性乳腺癌來源的條件重編程細(xì)胞的基因集變異分析 |
| 4、基因集變異分析與藥物敏感性的相關(guān)性 |
| 三、討論 |
| 1、靶點基因外顯子突變對藥物敏感性的預(yù)測作用 |
| 2、基因集變異分析對藥物敏感性的預(yù)測作用 |
| 四、小結(jié) |
| 第四部分: 三陰性乳腺癌預(yù)后相關(guān)通路分析 |
| 一、實驗方法 |
| 1、數(shù)據(jù)獲取及批間差校正 |
| 2、差異基因篩選及基因集富集分析 |
| 3、生存分析 |
| 二、實驗結(jié)果 |
| 1、批間差校正 |
| 2、差異基因篩選 |
| 3、基因集富集分析 |
| 4、差異基因?qū)θ幮匀橄侔┗颊呱娴挠绊?/td> |
| 5、GSVA評分對患者生存的影響 |
| 三、討論 |
| 1、三陰性乳腺癌的預(yù)后生物標(biāo)記 |
| 2、GSVA評分可作為三陰性乳腺患者的預(yù)后評估手段 |
| 四、小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 綜述: 個體化腫瘤模型在乳腺癌中的應(yīng)用 |
| 背景 |
| 一、2D腫瘤模型 |
| 二、腫瘤類器官 |
| 三、PDX模型 |
| 四、條件重編程細(xì)胞模型 |
| 五、微流控芯片腫瘤模型 |
| 六、3D生物打印腫瘤模型 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 縮略詞表 |
| 博士在讀期間發(fā)表的文章 |
| 致謝 |
（3）miR-4521和FAM129A異常表達(dá)影響乳腺癌進(jìn)展及作用機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 乳腺癌樣本中miR-4521和FAM129A的表達(dá)水平與臨床病理特征相關(guān)性 |
| 材料與方法 |
| 1.實驗材料 |
| 1.1.臨床樣本 |
| 1.2.實驗儀器與試劑 |
| 2.實驗方法 |
| 2.1.分析乳腺癌組織中miR-4521表達(dá)水平 |
| 2.2.WB檢測乳腺癌組織中FAM129A表達(dá)水平 |
| 2.3.統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1.miR-4521在乳腺癌組織中低表達(dá) |
| 2.FAM129A在乳腺癌組織中高表達(dá)并與臨床病理特征相關(guān) |
| 3.乳腺癌中miR-4521與FAM129A表達(dá)水平差異相關(guān)性 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第二部分 miR-4521上調(diào)對FAM129A表達(dá)的影響 |
| 材料與方法 |
| 1.實驗材料 |
| 1.1.細(xì)胞株及培養(yǎng)條件 |
| 1.2.實驗儀器與試劑 |
| 2.實驗方法 |
| 2.1.在乳腺癌細(xì)胞中上調(diào)miR-4521 |
| 2.2.分析miR-4521上調(diào)對FAM129A表達(dá)水平的影響 |
| 2.3.統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1.分析miR-4521和FAM129A潛在靶向關(guān)系 |
| 2.miR-4521上調(diào)抑制乳腺癌細(xì)胞中FAM129A的表達(dá) |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第三部分 探討miR-4521上調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制 |
| 材料和方法 |
| 1.實驗材料 |
| 1.1.細(xì)胞株及培養(yǎng)條件 |
| 1.2.實驗儀器與試劑 |
| 2.實驗方法 |
| 2.1.在 MCF-7和T47D細(xì)胞中上調(diào)miR-4521 |
| 2.2.miR-4521上調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞增殖影響 |
| 2.3.miR-4521上調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞遷移的影響 |
| 2.4.miR-4521上調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞侵襲的影響 |
| 2.5.miR-4521上調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡的影響 |
| 2.6.WB法檢測miR-4521上調(diào)對MMP2/MMP9和p-AKT/Bcl-2/Bax通路分子表達(dá)水平的影響 |
| 2.7.統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1.miR-4521上調(diào)抑制MCF-7和T47D體外增殖 |
| 2.miR-4521上調(diào)抑制MCF-7和T47D體外遷移 |
| 3.miR-4521過表達(dá)抑制MCF-7和T47D體外侵襲 |
| 4.miR-4521過表達(dá)促進(jìn)MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡 |
| 5.miR-4521上調(diào)對MMP2/MMP9和p-AKT/Bcl-2/Bax表達(dá)的影響 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第四部分 探討FAM129A下調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及作用機(jī)制 |
| 材料與方法 |
| 1.實驗材料 |
| 1.1.細(xì)胞株及培養(yǎng)條件 |
| 1.2.實驗儀器與試劑 |
| 2.實驗方法 |
| 2.1.在 MCF-7和T47D細(xì)胞中下調(diào)FAM129A |
| 2.2.WB法檢測FAM129A下調(diào)效率 |
| 2.3.FAM129A下調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞增殖的影響 |
| 2.4.FAM129A下調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞遷移的影響 |
| 2.5.FAM129A下調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞侵襲的影響 |
| 2.6.FAM129A下調(diào)對MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡的影響 |
| 2.7.FAM129A下調(diào)對MMP2/MMP9和p-AKT/Bcl-2/Bax通路分子表達(dá)水平的影響 |
| 2.8.統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1.WB法檢測FAM129A下調(diào)效率 |
| 2.FAM129A下調(diào)抑制MCF-7和T47D體外增殖 |
| 3.FAM129A下調(diào)抑制MCF-7和T47D體外遷移 |
| 4.FAM129A下調(diào)抑制MCF-7和T47D體外侵襲 |
| 5.FAM129A下調(diào)促進(jìn)MCF-7和T47D細(xì)胞凋亡 |
| 6.FAM129A下調(diào)對MMP2/MMP9和p-AKT/Bcl-2/Bax表達(dá)的影響 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 miRNA與PTEN/AKT信號通路在乳腺癌中的研究 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（4）PRMT2及PRMT2β介導(dǎo)的自噬在乳腺癌發(fā)生中的作用及機(jī)制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞 |
| 前言 |
| 第一章 PRMT2 對乳腺癌細(xì)胞自噬的影響 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 乳腺癌組織芯片 |
| 1.1.2 細(xì)胞株 |
| 1.2 主要試劑 |
| 1.3 主要試劑的配制 |
| 1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)基 |
| 1.3.2 細(xì)胞裂解液 |
| 1.3.3 細(xì)胞凍存液 |
| 1.3.4 PBS緩沖液 |
| 1.3.5 多西四環(huán)素溶液 |
| 1.3.6 Western Blot試劑配制 |
| 1.4 主要儀器及設(shè)備 |
| 1.5 實驗方法 |
| 1.5.1 免疫化學(xué)法 |
| 1.5.2 組織芯片掃描及分析 |
| 1.5.3 細(xì)胞培養(yǎng)及處理 |
| 1.5.4 透射電鏡 |
| 1.5.5 免疫熒光 |
| 1.5.6 Western Blot |
| 1.5.7 WES全自動蛋白質(zhì)印跡定量分析 |
| 1.5.8 雙熒光探針GFP-m RFP-LC3 檢測自噬軸 |
| 1.5.9 磷酸化抗體芯片檢測 |
| 1.5.10 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 實驗結(jié)果 |
| 2.1 PRMT2 蛋白與自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、P62 在乳腺癌組織中的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系 |
| 2.2 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞中自噬泡的改變 |
| 2.3 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞中LC3 免疫熒光的改變 |
| 2.4 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的改變 |
| 2.5 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)后乳腺癌細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)量隨時間的變化 |
| 2.6 PRMT2 敲低后MCF7 細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的改變 |
| 2.7 分別使用自噬誘導(dǎo)劑和自噬抑制劑后PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞自噬的影響 |
| 2.8 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞自噬軸的影響 |
| 2.9 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)后影響乳腺癌細(xì)胞自噬的磷酸化信號分子 |
| 2.10 PRMT2 穩(wěn)定過表達(dá)影響乳腺癌細(xì)胞自噬機(jī)制 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二章 乳腺癌組織中PRMT2 及其剪接體PRMT2β蛋白的表達(dá)及意義 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要試劑 |
| 1.3 試劑的配制 |
| 1.3.1 DAB顯色液的配制 |
| 1.3.2 PBS的配制 |
| 1.3.3 檸檬酸溶液的配制 |
| 1.3.4 檸檬酸三鈉溶液的配制 |
| 1.3.5 抗原修復(fù)液檸檬酸緩沖液的配制 |
| 1.4 主要儀器及設(shè)備 |
| 1.5 實驗方法 |
| 1.5.1 HE(蘇木精-伊紅)染色 |
| 1.5.2 Eli Vision法免疫組化染色檢測 |
| 1.5.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定 |
| 1.5.4 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 實驗結(jié)果 |
| 2.1 PRMT2 蛋白和PRMT2β蛋白在乳腺癌組織及非癌組織中的表達(dá) |
| 2.2 乳腺癌組織中PRMT2β蛋白和PRMT2 蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三章 PRMT2 剪接體PRMT2β抑制乳腺癌MCF7 細(xì)胞生長及自噬 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 質(zhì)粒、載體、細(xì)菌和細(xì)胞株 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要試劑的配制 |
| 1.1.4 主要儀器和設(shè)備 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.2.1 細(xì)胞基本培養(yǎng)及處理 |
| 1.2.2 Western Blot |
| 1.2.3 病毒滴度測定(Real time- PCR) |
| 1.2.4 慢病毒感染 |
| 1.2.5 單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株的建立與鑒定 |
| 1.2.6 MTT實驗 |
| 1.2.7 克隆形成實驗 |
| 1.2.8 數(shù)據(jù)分析雙熒光素酶報告基因?qū)嶒?/td> |
| 1.2.9 數(shù)據(jù)分析 |
| 2 實驗結(jié)果 |
| 2.1 PRMT2β慢病毒表達(dá)載體病毒滴度測定 |
| 2.2 成功構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)PRMT2β的MCF7 細(xì)胞系 |
| 2.3 PRMT2β抑制乳腺癌MCF7 細(xì)胞的增殖和集落形成 |
| 2.4 PRMT2β誘導(dǎo)MCF7 細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯和凋亡 |
| 2.5 PRMT2β拮抗PRMT2對CCND1 啟動子的轉(zhuǎn)錄抑制活性 |
| 2.6 PRMT2β通過抑制Akt/GSK-3β信號傳導(dǎo)通路抑制乳腺癌細(xì)胞中CCND1 表達(dá) |
| 2.7 PRMT2β抑制乳腺癌MCF-7 細(xì)胞自噬 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 自噬與乳腺癌 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果 |
| 課題資助 |
| 致謝 |
（5）組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶介導(dǎo)乳腺癌腫瘤耐藥機(jī)制的實驗研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文縮寫詞 |
| 前言 |
| 第一部分: tTG評估乳腺癌新輔助化療療效的臨床意義 |
| 一 實驗材料 |
| 二 實驗方法 |
| 三 結(jié)果 |
| 四 討論 |
| 五 附圖表 |
| 第二部分: tTG介導(dǎo)耐阿霉素乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADR耐藥機(jī)制的研究 |
| 一 實驗材料 |
| 二 實驗方法 |
| 三 結(jié)果 |
| 四 討論 |
| 五 附圖表 |
| 第三部分: 基因沉默TGM2抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADR裸鼠移植瘤生長的研究 |
| 一 實驗材料 |
| 二 實驗方法 |
| 三 結(jié)果 |
| 四 討論 |
| 五 附圖表 |
| 第四部分: MCF-7/ADR外泌體傳遞tTG參與MCF-7對阿霉素耐藥的研究 |
| 一 實驗材料 |
| 二 實驗方法 |
| 三 結(jié)果 |
| 四 討論 |
| 五 附圖表 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第五部分：綜述組織型轉(zhuǎn)谷氨釀胺酶與乳腺癌腫瘤耐藥的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 |
| 學(xué)位論文評閱及答辯情況表 |
| English Article 1 |
| English Article 2 |
（6）Micro RNA-204調(diào)控PI3K/AKT通路影響乳腺癌增殖和轉(zhuǎn)移等行為的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 Micro RNA-204 表達(dá)與乳腺癌臨床資料的關(guān)系研究 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 組織標(biāo)本 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.1.3 主要儀器和設(shè)備 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 組織miRNA-204 表達(dá)檢測 |
| 2.2.2 統(tǒng)計學(xué)處理 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 miR-204 在乳腺癌組織中表達(dá)情況 |
| 2.3.2 miR-204 表達(dá)與乳腺癌臨床資料的關(guān)系 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第3章 Micro RNA-204 對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡的影響 |
| 3.1 實驗材料與方法 |
| 3.1.1 實驗材料 |
| 3.1.2 實驗方法 |
| 3.1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 乳腺癌細(xì)胞株中miR-204表達(dá)情況 |
| 3.2.2 過表達(dá)miR-204對MCF7 細(xì)胞增殖的影響 |
| 3.2.3 過表達(dá)miR-204對MCF7 細(xì)胞凋亡的影響 |
| 3.2.4 過表達(dá)miR-204對MCF7 細(xì)胞周期的影響 |
| 3.2.5 過表達(dá)miR-204對MCF7 細(xì)胞遷移能力的影響 |
| 3.2.6 過表達(dá)miR-204對MCF7 細(xì)胞侵襲能力的影響 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 Micro RNA204 對乳腺癌細(xì)胞PI3K/AKT信號通路的影響 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實驗材料 |
| 4.1.2 實驗方法 |
| 4.1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 4.2 實驗結(jié)果 |
| 4.2.1 PTEN在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá) |
| 4.2.2 miR-204與PTEN序列中的存在互補(bǔ)位點 |
| 4.2.3 過表達(dá)miR-204對PTEN mRNA水平的影響 |
| 4.2.4 過表達(dá)miR-204對PTEN蛋白表達(dá)的影響 |
| 4.2.5 過表達(dá)miR-204對PI3K/AKT信號通路的影響 |
| 4.3 .討論 |
| 4.4 .本章小結(jié) |
| 第5章 全文總結(jié) |
| 5.1 總結(jié) |
| 5.2 結(jié)論 |
| 5.3 研究不足之處與計劃 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
（7）LncRNA AFAP1-AS1通過調(diào)控miR-21/PTEN軸影響乳腺癌增殖和遷移的機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 生物信息學(xué)法尋找乳腺癌特異性分子標(biāo)志物及其驗證 |
| 材料與方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 主要儀器 |
| 3. 溶液配方 |
| 4. 實驗方法 |
| 結(jié)果 |
| 1. LncRNAAFAP1-AS1與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān) |
| 2. AFAP1-AS1對miR-21具有潛在的靶向調(diào)節(jié)作用,PTEN是二者的潛在靶基因 |
| 3. AFAP1-AS1、miR-21、PTEN在人體乳腺癌組織中的表達(dá) |
| 4. AFAP1-AS1、miR-21的表達(dá)水平與臨床病理因素的相關(guān)性 |
| 5. AFAP1-AS1、miR-21、PTEN在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá) |
| 小結(jié) |
| 第二章 AFAP1-AS1通過靶向調(diào)節(jié)miR-21影響乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移 |
| 材料與方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 主要儀器 |
| 3. 溶液配方 |
| 4. 實驗方法 |
| 結(jié)果 |
| 1. 確定AFAP1-AS1和miR-21的瞬時轉(zhuǎn)染條件 |
| 2. 沉默AFAP1-AS1抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖 |
| 3. 沉默AFAP1-AS1抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移 |
| 4. miR-21水平影響乳腺癌細(xì)胞的增殖 |
| 5. miR-21水平影響乳腺癌細(xì)胞的遷移 |
| 6. AFAP1-AS1調(diào)控miR-21的表達(dá),與miR-21存在結(jié)合 |
| 7. AFAP1-AS1通過miR-21影響乳腺癌細(xì)胞的增殖 |
| 8. AFAP1-AS1通過miR-21影響乳腺癌細(xì)胞的遷移 |
| 小結(jié) |
| 第三章 AFAP1-AS1通過miR-21/PTEN軸調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移 |
| 材料與方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 主要儀器 |
| 3. 溶液配方 |
| 4. 實驗方法 |
| 結(jié)果 |
| 1. miR-21靶向調(diào)控PTEN |
| 2. PTEN過表達(dá)質(zhì)?？赡孓D(zhuǎn)miR-21 mimic對乳腺癌細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用 |
| 3. PTEN過表達(dá)質(zhì)?？赡孓D(zhuǎn)miR-21 mimic對乳腺癌細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用 |
| 4. PTEN siRNA可逆轉(zhuǎn)miR-21 inhibitor對乳腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用 |
| 5. PTEN siRNA可逆轉(zhuǎn)miR-21 inhibitor對乳腺癌細(xì)胞遷移的抑制作用 |
| 6. AFAP1-AS1對PTEN具有負(fù)調(diào)控作用 |
| 7. AFAP1-AS1通過miR-21調(diào)控PTEN |
| 小結(jié) |
| 第四章 體內(nèi)驗證沉默AFAP1-AS1對乳腺癌細(xì)胞的作用 |
| 材料與方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 主要儀器 |
| 3. 溶液配方 |
| 4. 實驗方法 |
| 結(jié)果 |
| 1. AFAP1-AS1穩(wěn)定敲低慢病毒感染 |
| 2. AFAP1-AS1穩(wěn)定敲低對乳腺癌細(xì)胞體內(nèi)生長的影響 |
| 小結(jié) |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 中英文縮略詞對照表 |
| 碩士期間的工作成果 |
| 致謝 |
（8）miR-1225-5p在乳腺癌中的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語/符號說明 |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、Micro RNA的篩選分析 |
| 1.1 材料與方法 |
| 1.1.1 實驗材料 |
| 1.1.2 實驗方法及步驟 |
| 1.2 結(jié)果 |
| 1.2.1 microRNA差的差異表達(dá)篩選分析 |
| 1.2.2 miR-1225-5p在乳腺癌組織中的表達(dá) |
| 1.2.3 miR-1225-5p差異表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 |
| 1.3 討論 |
| 1.4 小結(jié) |
| 二、miR-1225-5p在乳腺癌中的作用 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實驗材料 |
| 2.1.2 實驗方法及步驟 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 實驗研究的細(xì)胞模型篩選 |
| 2.2.2 過表達(dá)miR-1225-5p對 MDA-MB-231 細(xì)胞增殖(MTT)的影響 |
| 2.2.3 過表達(dá)miR-1225-5p對 MDA-MB-231 細(xì)胞增殖(Ed U)的影響 |
| 2.2.4 過表達(dá)miR-1225-5p對 MDA-MB-231 細(xì)胞克隆形成的影響 |
| 2.2.5 過表達(dá)miR-1225-5p對 Soft agar中 MDA-MB-231 細(xì)胞生長的影響 |
| 2.2.6 降表達(dá)miR-1225-5p對 MCF-7 細(xì)胞增殖(MTT)的影響 |
| 2.2.7 降表達(dá)miR-1225-5p對 MCF-7 細(xì)胞增殖(Ed U)的影響 |
| 2.2.8 降表達(dá)miR-1225-5p對 MCF-7 細(xì)胞克隆形成的影響 |
| 2.2.9 降表達(dá)miR-1225-5p對 Soft agar中 MCF-7 細(xì)胞生長的影響 |
| 2.2.10 降表達(dá)miR-1225-5p對 MCF-7 細(xì)胞凋亡的影響 |
| 2.2.11 miR-1225-5p靶基因的篩選 |
| 2.2.12 恢復(fù)ZNF37A表達(dá)對MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系增殖(MTT)的影響 |
| 2.2.13 恢復(fù)ZNF37A表達(dá)對MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系增殖(Ed U)的影響 |
| 2.2.14 恢復(fù)ZNF37A表達(dá)對MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系克隆形成的影響 |
| 2.2.15 體內(nèi)動物學(xué)實驗,MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系成瘤能力的變化 |
| 2.2.16 小鼠腫瘤組織靶基因ZNF37A及增殖指標(biāo)Ki67 表達(dá)分析 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 三、miR-1225-5p在乳腺癌中的細(xì)胞周期機(jī)制 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 實驗材料 |
| 3.1.2 實驗方法及步驟 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 信號通路的富集與篩選 |
| 3.2.2 Smad4 的表達(dá)及與ZNF37A的關(guān)系 |
| 3.2.3 ZNF37A調(diào)控Smad4對MDA-MB-231/miR-1225-5p穩(wěn)系細(xì)胞周期的影響 |
| 3.2.4 腫瘤組織中Smad4及細(xì)胞周期指標(biāo)的表達(dá)分析 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 全文結(jié)論 |
| 論文創(chuàng)新點 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 MicroRNAs在乳腺癌診療中的作用機(jī)制研究進(jìn)展及面臨的挑戰(zhàn) |
| 綜述參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（9）LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2信號軸調(diào)控乳腺癌進(jìn)程的機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 基于生物信息學(xué)方法探索乳腺癌進(jìn)程關(guān)鍵基因的篩選 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究人群 |
| 1.2 篩選差異表達(dá)基因 |
| 1.3 構(gòu)建乳腺癌相關(guān)ceRNA網(wǎng)絡(luò) |
| 1.4 篩選乳腺癌中異常表達(dá)的前10個lncRNA |
| 1.5 用GEPIA數(shù)據(jù)庫分析lncRNA |
| 1.6 cBioPortal分析 |
| 1.7 生存分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 長鏈非編碼RNALINC00536 在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床病理特征分析 |
| 1 研究內(nèi)容和方法 |
| 1.1 研究內(nèi)容 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 LINC00536 在乳腺癌中的異常表達(dá)及其對乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究內(nèi)容 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第四部分 LINC00536 的下游分子miR-204-5p和 TGFBR2 在乳腺癌細(xì)胞中三者之間的靶向作用驗證 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究內(nèi)容 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得學(xué)術(shù)成果 |
| 個人簡歷 |
| 導(dǎo)師評閱表 |
（10）NEMP1在乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的作用以及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 英文縮略表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 NEMP1 在乳腺癌中的表達(dá)水平研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 實驗方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 MCF7/TAMR細(xì)胞對他莫昔芬具有耐藥性 |
| 3.2 NEMP1 在他莫昔芬耐藥性乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平上調(diào) |
| 3.3 NEMP1 在乳腺癌患者的腫瘤組織中高表達(dá) |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 NEMP1 在乳腺癌耐藥細(xì)胞中的功能研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 實驗方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 NEMP1 敲低穩(wěn)定細(xì)胞系的建立 |
| 3.2 NEMP1 敲低抑制了MCF7/TAMR細(xì)胞的他莫昔芬耐藥性 |
| 3.3 NEMP1 過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞系的建立 |
| 3.4 NEMP1 過表達(dá)增強(qiáng)了MCF7 細(xì)胞的他莫昔芬產(chǎn)生耐藥性 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 NEMP1 影響乳腺癌細(xì)胞耐藥性產(chǎn)生的分子機(jī)制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 實驗方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 3.1 NEMP1 敲低抑制了NCOA1的m RNA水平 |
| 3.2 NEMP1 敲低抑制了NCOA1 的蛋白水平 |
| 4 討論 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
| 本文結(jié)論 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
四、PTEN在乳腺癌研究中的進(jìn)展（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]FBI-1蛋白在乳腺癌腫瘤干細(xì)胞和化療抗性中的作用及其機(jī)制研究[D]. 劉瓊晴. 宜春學(xué)院, 2021(08)
- [2]基于條件重編程細(xì)胞培養(yǎng)的三陰性乳腺癌敏感藥物篩選的研究[D]. 趙彬. 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2021(02)
- [3]miR-4521和FAM129A異常表達(dá)影響乳腺癌進(jìn)展及作用機(jī)制研究[D]. 張美清. 大連醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [4]PRMT2及PRMT2β介導(dǎo)的自噬在乳腺癌發(fā)生中的作用及機(jī)制[D]. 陳亞軍. 南華大學(xué), 2020
- [5]組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶介導(dǎo)乳腺癌腫瘤耐藥機(jī)制的實驗研究[D]. 程凱. 山東大學(xué), 2020(04)
- [6]Micro RNA-204調(diào)控PI3K/AKT通路影響乳腺癌增殖和轉(zhuǎn)移等行為的作用及機(jī)制研究[D]. 范小慶. 南昌大學(xué), 2020(08)
- [7]LncRNA AFAP1-AS1通過調(diào)控miR-21/PTEN軸影響乳腺癌增殖和遷移的機(jī)制研究[D]. 全東令. 南方醫(yī)科大學(xué), 2020(01)
- [8]miR-1225-5p在乳腺癌中的作用及機(jī)制研究[D]. 張矯. 天津醫(yī)科大學(xué), 2020(06)
- [9]LINC00536/miR-204-5p/TGFβ-2信號軸調(diào)控乳腺癌進(jìn)程的機(jī)制研究[D]. 塔依爾·吐爾松. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2020(07)
- [10]NEMP1在乳腺癌細(xì)胞他莫昔芬耐藥中的作用以及機(jī)制研究[D]. 劉巖巖. 安徽醫(yī)科大學(xué), 2019(07)
標(biāo)簽：乳腺癌論文; 他莫昔芬論文; 新輔助化療論文; 化療藥物論文; 腫瘤異質(zhì)性論文;