一、常用的中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物體內(nèi)分析方法（論文文獻(xiàn)綜述）
弓燁弘[1]（2021）在《色氨酸及代謝物抑制β-淀粉樣蛋白聚集的分子動(dòng)力學(xué)研究 ——對(duì)運(yùn)動(dòng)延緩阿爾茨海默病的機(jī)理初探》文中提出研究目的:阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD）,是眾多神經(jīng)退行性疾病中影響人數(shù)最多的一種,腦內(nèi)β-淀粉樣蛋白（β-Amyloid,Aβ）聚集引發(fā)的神經(jīng)毒性被證實(shí)是導(dǎo)致AD的關(guān)鍵因素。雖然研究者們長(zhǎng)期致力于Aβ聚集及其抑制的研究,但至今仍未開(kāi)發(fā)出有效的治療藥物,目前迫切需要尋找無(wú)毒副作用且不受限于血腦屏障的治療手段和方法。運(yùn)動(dòng)能夠促進(jìn)脂肪動(dòng)員,誘導(dǎo)人體必需氨基酸色氨酸（Tryptophan,Trp）高效跨過(guò)血腦屏障,在增強(qiáng)腦內(nèi)色氨酸水平的同時(shí)也增強(qiáng)了其代謝物——人體的重要神經(jīng)遞質(zhì)血清素（Serotonin,Ser）及激素褪黑素（Melatonin,Mel）的合成。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),色氨酸能夠?qū)β的聚集過(guò)程產(chǎn)生抑制,破壞成熟的Aβ纖維,降低Aβ纖維的神經(jīng)毒性,并且血清素和褪黑素同樣也被證明能夠抑制Aβ的纖維化過(guò)程,但目前這些分子發(fā)揮抑制作用的具體機(jī)理仍不清晰。本研究采用分子動(dòng)力學(xué)模擬、副本交換分子動(dòng)力學(xué)模擬等方法探究色氨酸及其代謝物（血清素和褪黑素）抑制/破壞Aβ低聚體和Aβ原纖維的分子機(jī)理,能夠?qū)\(yùn)動(dòng)影響Aβ纖維化過(guò)程提供解釋的視角,為闡明運(yùn)動(dòng)影響AD病理進(jìn)程提供一定的理論支持,并為運(yùn)動(dòng)干預(yù)等藥物替代療法和藥物設(shè)計(jì)提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和理論借鑒。研究方法:為研究色氨酸及代謝物（血清素和褪黑素）影響Aβ聚集過(guò)程的微觀(guān)機(jī)理,本研究采用全原子副本交換分子動(dòng)力學(xué)模擬,研究了色氨酸、血清素和褪黑素對(duì)Aβ低聚體聚集的抑制機(jī)理,并采用全原子常規(guī)分子動(dòng)力學(xué)模擬研究了這些小分子解離Aβ原纖維的機(jī)理。本研究中的所有全原子分子動(dòng)力學(xué)模擬均使用GROMACS軟件進(jìn)行,使用GAFF力場(chǎng)處理色氨酸、血清素和褪黑素的相關(guān)參數(shù),正式的分子動(dòng)力學(xué)模擬采用AMBER99SB-ILDN力場(chǎng)。此外,本研究所涉及的數(shù)據(jù)處理與分析同樣使用GROMACS進(jìn)行,與此同時(shí),使用自編腳本與程序和一些第三方程序作為數(shù)據(jù)分析的補(bǔ)充工具。研究結(jié)果:闡明色氨酸及代謝物影響Aβ聚集過(guò)程的分子機(jī)理,有助于為運(yùn)動(dòng)延緩AD病理進(jìn)程提供解釋。本研究綜合使用分子動(dòng)力學(xué)和副本交換分子動(dòng)力學(xué)模擬方法,對(duì)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)難以表征的色氨酸及代謝物抑制Aβ聚集的細(xì)節(jié)機(jī)理進(jìn)行探究。研究的主要結(jié)果如下:（1）色氨酸（Trp）有效抑制了二級(jí)結(jié)構(gòu)中β-sheet結(jié)構(gòu)的生成,尤其是在N-端區(qū)域2AEF4、中心疏水區(qū)域17LVF19和C-端區(qū)域34LMVGGVV40,同時(shí)Trp也促進(jìn)了對(duì)應(yīng)區(qū)域coil和helix結(jié)構(gòu)的生成。Trp削弱了Aβ42二聚體中氨基酸對(duì)之間的相互作用,對(duì)鏈間相互作用的削弱更顯著,從溶液可及性表面積、鏈間接觸面積、鏈間接觸數(shù)量和鏈間結(jié)合自由能的計(jì)算也得到了證實(shí)。本研究識(shí)別出Aβ42二聚體中Trp的主要結(jié)合位點(diǎn),包括F4、Y10、F19、F20、I31、I32和34LMVGGV39。針對(duì)Trp與Aβ42原纖維相互作用的研究結(jié)果顯示,Trp的加入顯著降低了Aβ42原纖維N-端的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,并破壞了Aβ42原纖維N-端的β-sheet結(jié)構(gòu),RMSF計(jì)算結(jié)果則顯示Trp增強(qiáng)了N-端區(qū)域的蛋白柔性。Trp能夠破壞肽鏈間的穩(wěn)定性,減少主鏈氫鍵,破壞局部疏水核心HC1的疏水相互作用,并削弱K28和A42形成鏈內(nèi)和鏈間鹽橋的穩(wěn)定性。Trp與Aβ42原纖維的主要結(jié)合位點(diǎn)包括F4、H6、Y10、H13、H14和L34。（2）血清素（Ser）能夠影響Aβ42二聚體的二級(jí)結(jié)構(gòu),在26SNKGAII32區(qū)域抑制beta結(jié)構(gòu)的生成。通過(guò)分析氨基酸-氨基酸相互作用、溶液可及性表面積、鏈間接觸面積、接觸數(shù)量和結(jié)合自由能的結(jié)果可知,Ser的加入明顯影響了Aβ42二聚體整體和局部的鏈間相互作用。本研究識(shí)別出Ser與Aβ42二聚體結(jié)合于4FRH6、Y10、13HHQKLVFF20、K28、I31、I32和34LMV36。在Ser與Aβ42原纖維相互作用的分析中發(fā)現(xiàn)Ser能夠削弱Aβ42原纖維的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,并且對(duì)N-端和C-端區(qū)域產(chǎn)生的影響更為明顯。此外,Ser的加入還在很大程度上破壞了K28-A42之間的鏈內(nèi)和鏈間鹽橋。從綜合接觸數(shù)量、氫鍵數(shù)量和π-π堆積形式的計(jì)算結(jié)果可知,Ser能夠減弱HC1中的疏水相互作用,破壞N-端的β-sheet結(jié)構(gòu),削弱了原纖維的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。（3）Aβ42原纖維的Cα-RMSD結(jié)果顯示,血清素（Ser）對(duì)Cα-RMSD的提高強(qiáng)于質(zhì)子化血清素（Protonated serotonin,Serpro）。而回旋半徑的計(jì)算結(jié)果則顯示質(zhì)子化后的Serpro能在一定程度上增大原纖維的回旋半徑。針對(duì)Ser/Serpro影響鏈間接觸數(shù)量和結(jié)合能的研究結(jié)果顯示,Ser和Serpro均能減少接觸數(shù)量并削弱鏈間結(jié)合能,且Serpro的效果相對(duì)較強(qiáng)。有關(guān)氨基酸相互作用的分析結(jié)果顯示,盡管Ser/Serpro均能通過(guò)破壞HC1中氨基酸間的疏水相互作用和K28-A42鹽橋相互作用,但Ser的破壞效果強(qiáng)于Serpro。本研究識(shí)別出芳香相互作用主要驅(qū)動(dòng)了Ser與結(jié)合位點(diǎn)F4、H6、Y10、H13、Q15和L34之間的結(jié)合,而芳香相互作用、疏水相互作用和靜電相互作用共同驅(qū)動(dòng)了Serpro與結(jié)合位點(diǎn)D1、F4、R5、H6、D7、Y10、H13、Q15、F20、E22、D23和L34的結(jié)合。但盡管Serpro的結(jié)合位點(diǎn)更加廣泛并與更多芳香氨基酸形成了π-π堆積,但Ser與結(jié)合位點(diǎn)之間的結(jié)合強(qiáng)度更強(qiáng)且與原纖維N-端形成的π-π堆積形式更加豐富,這使Ser能夠在更大程度上破壞Aβ42原纖維的穩(wěn)定結(jié)構(gòu),解聚已形成的Aβ42纖維。（4）褪黑素（Mel）在Aβ42二聚體上的結(jié)合位點(diǎn)幾乎遍布整個(gè)序列。Mel削弱了N-端區(qū)域和中心疏水區(qū)域形成beta結(jié)構(gòu)的幾率,抑制Aβ42低聚體進(jìn)一步纖維化。Mel能夠減少Aβ42二聚體中鏈間氨基酸對(duì)和鏈內(nèi)氨基酸對(duì)的相互接觸,尤其對(duì)鏈間相互作用的影響更加顯著。針對(duì)二聚體溶液可及性表面積、兩條肽鏈間的接觸面積和數(shù)量以及結(jié)合自由能的計(jì)算結(jié)果也顯示,Mel能夠削弱相鄰肽鏈的鏈間相互作用。針對(duì)Mel和Aβ42原纖維相互作用的研究結(jié)果顯示,Mel能夠提高Aβ42原纖維的Cα-RMSD,降低原纖維的β-sheet結(jié)構(gòu)含量,削弱Aβ42原纖維的鏈間穩(wěn)定性。并同時(shí)減少疏水核心中的氨基酸相互接觸,破壞K28和A42之間的鏈間和鏈內(nèi)鹽橋。此外,本研究還識(shí)別出Mel能夠廣泛結(jié)合于Aβ42原纖維的外表面和內(nèi)表面。（5）色氨酸（Trp）與色氨酸混合血清素（Trp＿Ser）均提高了Aβ42原纖維的Cα-RMSD,但盡管Trp＿Ser在N-端和C-端共同提高了Aβ42原纖維結(jié)構(gòu)的Cα-RMSD,但Trp仍能通過(guò)僅對(duì)N-端結(jié)構(gòu)Cα-RMSD的影響,在更大程度上破壞Aβ42原纖維的整體穩(wěn)定性。RMSF、主鏈氫鍵和Rg的結(jié)果同樣顯示,Trp在更大程度上使整體蛋白構(gòu)型由緊湊轉(zhuǎn)為松散。同時(shí),Trp＿Ser對(duì)鏈間相互作用的削弱則強(qiáng)于Trp。對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析顯示Trp和Trp＿Ser都能夠明顯降低原纖維N-端形成β-sheet的幾率。疏水核心穩(wěn)定性的分析結(jié)果表明,Trp和Trp＿Ser分別更加明顯地破壞了原纖維N-端和C-端的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)并且Trp＿Ser在更大程度上破壞了K28-A42鹽橋。本研究還識(shí)別出Aβ42＿protofibril+Trp和Aβ42＿protofibril+Trp＿Ser體系中,Trp和Trp＿Ser的結(jié)合位點(diǎn)十分相似,幾乎都位于原纖維的N-端。研究結(jié)論:（1）Trp能夠抑制Aβ42二聚體β-sheet等有序結(jié)構(gòu)的生成,從而使蛋白構(gòu)象在Trp的抑制效果下,保持更加無(wú)序的二級(jí)結(jié)構(gòu)。Trp通過(guò)削弱二聚體鏈間相互作用,破壞Aβ42纖維化的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),以此抑制Aβ42異常纖維化的過(guò)程。Trp與Aβ42二聚體N-端的結(jié)合主要通過(guò)π-π堆積作用和氫鍵作用,而與C-端的結(jié)合則主要通過(guò)疏水相互作用。同時(shí),Trp的加入顯著降低了Aβ42原纖維的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,且最顯著的影響發(fā)生在Aβ42的N-端區(qū)域,Trp與N-端形成了較多的氫鍵和豐富的π-π堆積,說(shuō)明Trp可在Aβ42的N-端對(duì)Aβ42原纖維產(chǎn)生破壞,進(jìn)而解聚已形成的纖維并抑制纖維進(jìn)一步聚集。（2）Ser在26SNKGAII32區(qū)域有效抑制了Aβ42二聚體的二級(jí)結(jié)構(gòu)中beta結(jié)構(gòu)的生成。并且,Ser在很大程度上削弱了由鏈間相互作用形成的穩(wěn)定結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻止形成穩(wěn)定的聚集體。靜電相互作用、疏水相互作用及苯環(huán)相互作用共同驅(qū)動(dòng),且與N-端帶電氨基酸形成的氫鍵是使Ser更多與N-端結(jié)合的主要?jiǎng)恿?。此?Ser能夠削弱Aβ42原纖維N-端和C-端區(qū)域的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,破壞N-端的β-sheet結(jié)構(gòu)。研究發(fā)現(xiàn)Ser可以依靠氫鍵和π-π堆積與Aβ42原纖維的N-端結(jié)合,使N-端成為解聚已形成的Aβ42纖維的關(guān)鍵區(qū)域。（3）Ser能夠削弱Aβ42原纖維的穩(wěn)定性,促進(jìn)解聚已形成的穩(wěn)定纖維,而質(zhì)子化后的Serpro盡管能在一定程度上使蛋白結(jié)構(gòu)變得松散,但對(duì)蛋白整體結(jié)構(gòu)的影響不及Ser。Serpro對(duì)原纖維的鏈間穩(wěn)定性的削弱效果相對(duì)強(qiáng)于Ser,表明Serpro主要通過(guò)削弱鏈間穩(wěn)定性對(duì)已形成的Aβ42纖維進(jìn)行解聚。而Ser在削弱鏈間作用的基礎(chǔ)上,還能通過(guò)降低N-端的β-sheet形成幾率,破壞Aβ42原纖維N-端的β-sheet結(jié)構(gòu),進(jìn)而解聚Aβ42原纖維。此外,Ser與結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合主要依靠芳香相互作用,而Serpro與結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合主要依靠芳香相互作用、疏水相互作用和靜電相互作用共同驅(qū)動(dòng),這促使相比于Serpro,Ser能夠在更大程度解聚已形成的Aβ42纖維。（4）Mel通過(guò)削弱N-端區(qū)域和中心疏水區(qū)域的beta結(jié)構(gòu)形成幾率,并削弱肽鏈間的相互作用,達(dá)到對(duì)Aβ42低聚體進(jìn)一步纖維化的抑制。Mel能夠通過(guò)π-π堆積與疏水相互作用和Aβ42二聚體的幾乎整個(gè)序列產(chǎn)生結(jié)合,其中疏水相互作用是驅(qū)動(dòng)Mel與C-端結(jié)合的重要?jiǎng)恿?。同時(shí),Mel能夠大幅降低Aβ42原纖維N-端區(qū)域和C-端區(qū)域的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性,關(guān)于結(jié)合模式的分析顯示,驅(qū)動(dòng)Mel與N-端和C-端結(jié)合的主要?jiǎng)恿Ψ謩e是π-π堆積作用和疏水相互作用,并且在這些作用的共同影響下,Mel能夠在很大程度上破壞原纖維N-端和C-端的β-sheet結(jié)構(gòu)。（5）Trp和Trp＿Ser分別通過(guò)削弱Aβ42原纖維的整體穩(wěn)定性和鏈間相互作用破壞原纖維穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。Trp和Trp＿Ser都能夠明顯破壞原纖維N-端穩(wěn)定的β-sheet結(jié)構(gòu),以此解聚Aβ42纖維,且Trp＿Ser的解聚效果更強(qiáng)。由于對(duì)疏水相互作用和鹽橋相互作用的影響,Trp和Trp＿Ser分別對(duì)原纖維N-端和C-端的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)產(chǎn)生更加明顯的破壞。Trp和Trp＿Ser的結(jié)合位點(diǎn)幾乎同樣都位于原纖維的N-端。其中,與N-端帶電氨基酸和N-端芳香氨基酸形成的氫鍵相互作用和豐富的π-π堆積,共同驅(qū)動(dòng)了兩個(gè)體系中小分子與原纖維之間的結(jié)合。
汪戎錦[2]（2021）在《基于代謝組學(xué)的刺五加葉治療缺血性腦卒中作用機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理缺血性腦卒中作為全球性的公共健康問(wèn)題,危害著全世界人類(lèi)的健康,并以其高發(fā)病率和高死亡率,引起了科學(xué)家們的廣泛關(guān)注。缺血性腦卒中發(fā)生的主要原因?yàn)槟Y(jié)的血栓或栓子阻塞在腦動(dòng)脈中使大腦供血受限從而引起氧氣和營(yíng)養(yǎng)的供應(yīng)不足。刺五加葉作為一種可再生資源,因其化學(xué)成分以及藥效作用與刺五加根相似,被廣泛用于腦血管疾病、缺血性心臟病等疾病的治療。本實(shí)驗(yàn)室在前期的研究工作中篩選并制備了刺五加葉的主要活性組分,并采用藥效學(xué)研究證明了刺五加葉具有抗氧化、抑制細(xì)胞損傷以及缺血性腦卒中的保護(hù)作用。然而,刺五加葉的化學(xué)成分復(fù)雜,在體內(nèi)作用于多個(gè)靶點(diǎn),致使其治療缺血性腦卒中的整體作用機(jī)制研究尚不夠深入,目前缺乏系統(tǒng)研究,在一定程度上限制了刺五加葉的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用。代謝組學(xué)作為一種系統(tǒng)生物學(xué)研究方法,能夠?qū)?nèi)源性小分子的整體變化進(jìn)行系統(tǒng)分析,逐漸成為揭示病機(jī)復(fù)雜疾病的發(fā)病機(jī)理,和多成分、多靶點(diǎn)藥物作用機(jī)制的一種強(qiáng)有力工具。因此,本研究圍繞脂質(zhì)異常、神經(jīng)損傷以及菌群失調(diào)等缺血性腦卒中的關(guān)鍵病理環(huán)節(jié),采用基于質(zhì)譜技術(shù)的多樣本（血清、糞便、尿液、腦組織）代謝組學(xué)的研究方法,對(duì)刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制進(jìn)行了深入研究,并闡明其科學(xué)內(nèi)涵。主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾個(gè)方面:1.刺五加葉治療缺血性腦卒中的血清脂質(zhì)組學(xué)及其神經(jīng)保護(hù)作用研究首先對(duì)刺五加葉的主要活性組分進(jìn)行基于UPLC方法的成分分析。結(jié)果表明,刺五加葉的主要活性組分含有有機(jī)酸類(lèi)化合物、黃酮類(lèi)化合物和糖苷。其次,建立大鼠缺血性腦卒中疾病模型,并給予刺五加葉治療四周。由于脂質(zhì)異常、神經(jīng)損傷、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是缺血性腦卒中發(fā)作的四個(gè)主要方面,本文圍繞以上四個(gè)方面展開(kāi)了研究。首先,采用基于UPLC-Q-TOF/MS的脂質(zhì)組學(xué)方法,研究缺血性腦卒中發(fā)生后大鼠血清脂質(zhì)的代謝紊亂,以及刺五加葉的調(diào)節(jié)作用。利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加葉給藥四周后缺血性腦卒中大鼠血清樣本的脂質(zhì)代謝輪廓,結(jié)合Progenesis QI軟件進(jìn)行包括多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、潛在脂質(zhì)標(biāo)記物鑒定以及通路分析在內(nèi)的數(shù)據(jù)處理。共鑒定出27種脂質(zhì)組學(xué)生物標(biāo)記物,包括PC,PE,SM和TG類(lèi)脂質(zhì),分布在各種脂質(zhì)代謝途徑中,包括甘油磷脂、亞油酸、α-亞麻酸、甘油脂、鞘脂和花生四烯酸代謝途徑。結(jié)果表明,刺五加葉能夠調(diào)節(jié)缺血性腦卒中發(fā)生發(fā)展過(guò)程中出現(xiàn)的脂質(zhì)代謝紊亂。其次,針對(duì)缺血性腦卒中發(fā)生時(shí)的神經(jīng)損傷過(guò)程,采用UPLC-TQ/MS對(duì)大鼠腦組織及血清中10種神經(jīng)遞質(zhì)進(jìn)行了定量研究。結(jié)果表明,缺血性腦卒中能夠?qū)е鹿劝彼幔℅lu）,天冬氨酸（Asp）等興奮性氨基酸的過(guò)度釋放,產(chǎn)生神經(jīng)毒性,還能夠增加γ-氨基丁酸（GABA）、五羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NE）、腎上腺素（E）、多巴胺（DA）以及?；撬幔═au）的含量,并降低抑制性神經(jīng)遞質(zhì)甘氨酸（Gly）以及神經(jīng)炎癥調(diào)節(jié)劑乙酰膽堿（Ach）的含量。而給予刺五加葉治療后,能夠使以上神經(jīng)遞質(zhì)在腦組織和血清中的水平均向正常水平調(diào)節(jié),說(shuō)明其能夠通過(guò)調(diào)節(jié)缺血性腦卒中大鼠的神經(jīng)遞質(zhì)含量發(fā)揮保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。最后,通過(guò)MDA和SOD的定量分析,檢測(cè)缺血性腦卒中后氧化應(yīng)激程度,通過(guò)TNF-α,IL-6和IL-10的定量分析,檢測(cè)炎癥反應(yīng)程度。結(jié)果表明,刺五加葉可以在一定程度上減輕機(jī)體的氧化應(yīng)激和炎癥損傷,從而減輕缺血性腦卒中對(duì)機(jī)體的損傷。從調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂、神經(jīng)損傷、氧化應(yīng)激反應(yīng)以及炎癥反應(yīng)等方面揭示了刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制。2.刺五加葉治療缺血性腦卒中糞便代謝組學(xué)研究及其對(duì)微生物-腸-腦軸的影響微生物-腸-腦軸雙向通訊系統(tǒng)與缺血性腦卒中的發(fā)生及預(yù)后相互關(guān)聯(lián),這種關(guān)聯(lián)作用近年來(lái)逐漸引起科學(xué)家的廣泛關(guān)注。本文采用基于UPLC-Q-TOF/MS的糞便非靶向代謝組學(xué)方法,結(jié)合基于UPLC-TQ/MS的糞便膽汁酸靶向代謝組學(xué)方法,以及16S r RNA糞便菌群測(cè)序,研究了刺五加葉對(duì)缺血性腦卒中模型大鼠微生物-腸-腦軸的平衡作用。首先,利用UPLC-Q-TOF/MS采集刺五加葉治療四周后缺血性腦卒中大鼠糞便樣本的代謝輪廓,結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)學(xué)分析篩選具有顯著差異的潛在生物標(biāo)記物,并進(jìn)行通路分析,共鑒定出40個(gè)潛在的差異性生物標(biāo)記物,主要涉及花生四烯酸代謝通路、不飽和脂肪酸的生物合成途徑、膽汁酸的生物合成途徑、鞘脂代謝通路等。以上生物標(biāo)記物的含量在缺血性腦卒中發(fā)生后具有顯著的變化,而刺五加葉可以調(diào)節(jié)其含量以恢復(fù)正常狀態(tài)。其次,基于UPLC-TQ/MS的靶向代謝組學(xué)方法對(duì)13種膽汁酸進(jìn)行了定量分析。結(jié)果顯示,缺血性腦卒中發(fā)生時(shí),大鼠糞便膽汁酸發(fā)生代謝紊亂,刺五加葉能夠調(diào)節(jié)多種膽汁酸的含量,使其更加趨近于正常水平。最后,16S r RNA菌群測(cè)序結(jié)果表明,缺血性腦卒中可導(dǎo)致大鼠腸道內(nèi)病原體富集,益生菌水平大幅降低,而刺五加葉能夠使缺血性腦卒中大鼠體內(nèi)病原體含量降低,同時(shí)增加益生菌水平。上述結(jié)果揭示了刺五加葉具有對(duì)缺血性腦卒中大鼠微生物-腸-腦軸的調(diào)節(jié)作用,為闡明刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。3.刺五加葉通過(guò)對(duì)益生菌的調(diào)節(jié)作用治療缺血性腦卒中的機(jī)制驗(yàn)證選擇能夠被刺五加葉調(diào)節(jié)的益生菌給藥缺血性腦卒中大鼠,驗(yàn)證給藥刺五加葉后,益生菌水平的升高是發(fā)揮其治療效果的重要因素之一。首先,培養(yǎng)羅伊氏乳酸桿菌以及丁酸梭菌并制備菌液,分別給予缺血性腦卒中大鼠以上兩種菌液。經(jīng)四周給藥后,檢測(cè)大鼠糞便的菌群組成。結(jié)果表明,與模型組比較,益生菌給藥后的缺血性腦卒中大鼠糞便中菌群組成與含量產(chǎn)生較大變化,并與對(duì)照組大鼠糞便菌群組成更為相似。其次,采用基于UPLC-TQ/MS的定量方法檢測(cè)缺血性腦卒中大鼠經(jīng)益生菌給藥后,腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化。結(jié)果表明,給予兩種益生菌后,具有神經(jīng)毒性的神經(jīng)遞質(zhì)含量降低,而具有神經(jīng)調(diào)節(jié)作用的神經(jīng)遞質(zhì)含量顯著升高,更加趨近于健康大鼠。最后,通過(guò)ELISA法檢測(cè)大鼠血清和腦組織中多種炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的含量和腦組織中MDA、SOD、COX-2、MAO的含量。結(jié)果表明,當(dāng)缺血性腦卒中發(fā)生時(shí),大鼠體內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、COX-2和MAO含量顯著升高,而IL-10和SOD含量顯著降低。給予兩種益生菌后,缺血性腦卒中大鼠體內(nèi)以上指標(biāo)的含量均能夠被調(diào)節(jié)至正常水平,推測(cè)兩種益生菌均能夠通過(guò)減輕炎癥及氧化應(yīng)激損傷,對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定的保護(hù)作用。本研究驗(yàn)證了刺五加葉能夠通過(guò)影響微生物-腸-腦軸的代謝,增加體內(nèi)益生菌豐度,調(diào)節(jié)卒中引起的神經(jīng)損傷、炎癥反應(yīng)以及氧化應(yīng)激損傷,從而起到對(duì)機(jī)體的保護(hù)作用。4.刺五加葉治療缺血性腦卒中的尿液代謝組學(xué)研究尿液樣本能夠準(zhǔn)確、靈敏地反映機(jī)體的代謝變化,為代謝組學(xué)研究中最重要的生物樣本。采用基于UPLC-Q-TOF/MS的非靶向尿液代謝組學(xué)方法對(duì)刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制進(jìn)行研究并驗(yàn)證。采用UPLC-Q-TOF/MS采集大鼠尿液樣本的代謝輪廓,結(jié)合Progenesis QI軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,篩選并鑒定潛在生物標(biāo)記物,構(gòu)建基因-酶-生物標(biāo)記物代謝網(wǎng)絡(luò)。本研究共篩選出42種在缺血性腦卒中疾病進(jìn)程中具有顯著變化的潛在生物標(biāo)記物,經(jīng)刺五加葉治療后,38種生物標(biāo)記物的含量變化能夠被顯著調(diào)節(jié),涉及體內(nèi)牛磺酸和次?；撬岽x通路、花生四烯酸代謝通路、半胱氨酸和蛋氨酸代謝通路、類(lèi)固醇激素生物合成途徑、色氨酸代謝通路、酪氨酸代謝通路和嘧啶代謝途徑等多種代謝途徑的調(diào)節(jié)作用。最后,選擇3種與以上通路相關(guān)的關(guān)鍵酶COX-2,NOS和MAO作為刺五加葉治療的靶點(diǎn)酶,進(jìn)行定量驗(yàn)證。結(jié)果表明,模型大鼠經(jīng)刺五加葉治療后血清和腦組織中三種酶的含量與假手術(shù)組大鼠相似,證明了刺五加葉可以通過(guò)調(diào)節(jié)以上三種酶的含量發(fā)揮刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果有助于進(jìn)一步了解缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制,并為刺五加葉的潛在治療機(jī)制研究提供科學(xué)依據(jù)。5.基于高效同位素標(biāo)記衍生化的刺五加葉治療缺血性腦卒中尿液代謝組學(xué)研究高效化學(xué)同位素標(biāo)記（CIL）衍生化結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）的代謝組學(xué)方法是使用靶向特定官能團(tuán)的試劑標(biāo)記生物樣本,使所有具有相同官能團(tuán)的代謝物生成相應(yīng)的衍生代謝物,在提高總體代謝組學(xué)覆蓋率的同時(shí),將同位素引入標(biāo)記代謝物中,使重同位素試劑衍生的代謝產(chǎn)物作為輕同位素試劑衍生代謝物產(chǎn)物的內(nèi)標(biāo),從而提高代謝產(chǎn)物的定性及定量精度。本研究采用基于CIL LC-MS的刺五加葉治療大鼠缺血性腦卒中的尿液代謝組學(xué)方法,分別對(duì)胺/酚類(lèi)亞代謝組和羧酸類(lèi)亞代謝組進(jìn)行分析研究。結(jié)果表明,刺五加葉能夠通過(guò)體內(nèi)多種通路調(diào)節(jié)缺血性腦卒中發(fā)生后的代謝紊亂,與傳統(tǒng)尿液代謝組學(xué)研究結(jié)果相比,CIL LC-MS法篩選出了更多潛在生物標(biāo)記物,并覆蓋更多體內(nèi)代謝通路,得到了覆蓋率更廣、定量更精準(zhǔn)的代謝組學(xué)結(jié)果。同時(shí),在每條通路中匹配到更多的具有顯著差異的代謝產(chǎn)物,明確通路中上游化合物及下游產(chǎn)物的顯著變化及機(jī)制,使針對(duì)各通路的研究更加全面。最終,從神經(jīng)保護(hù)、調(diào)節(jié)能量代謝、抑制炎癥損傷、拮抗氧化應(yīng)激的角度對(duì)刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制進(jìn)行系統(tǒng)闡述。進(jìn)而為刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制提供更加全面的科學(xué)依據(jù)。綜上所述,本論文采用基于大鼠血清、糞便、尿液以及腦組織多種生物樣本的代謝組學(xué)方法,進(jìn)行刺五加葉治療大鼠缺血性腦卒中作用機(jī)制的系統(tǒng)研究。將尿液和糞便的非靶向代謝組學(xué)研究,與血清脂質(zhì)、腦組織神經(jīng)遞質(zhì)以及糞便膽汁酸的靶向代謝組學(xué)研究相結(jié)合,明確刺五加葉對(duì)缺血性腦卒中大鼠體內(nèi)多種代謝通路的調(diào)節(jié)作用,對(duì)脂質(zhì)紊亂的調(diào)節(jié)作用,以及對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用。其次,通過(guò)對(duì)大鼠糞便的菌群分析和驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),闡述刺五加葉可能通過(guò)調(diào)節(jié)微生物-腸-腦軸雙向通訊系統(tǒng)發(fā)揮缺血性腦卒中的治療作用,推測(cè)刺五加葉增加腸道益生菌含量是其發(fā)揮缺血性腦卒中治療作用的關(guān)鍵因素之一。并采用基于高效同位素標(biāo)記結(jié)合LC-MS的代謝組學(xué)方法,對(duì)體內(nèi)胺/酚類(lèi)亞代謝組及羧酸類(lèi)亞代謝組進(jìn)行全面分析,從神經(jīng)保護(hù)、調(diào)節(jié)能量代謝、抑制炎癥損傷、拮抗氧化應(yīng)激的角度系統(tǒng)闡述刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制。本研究結(jié)合先進(jìn)的分析技術(shù)手段,探討中藥的作用機(jī)制,為闡明刺五加葉治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制提供理論依據(jù),同時(shí)也為中藥作用機(jī)制的系統(tǒng)研究提供了新的方法路線(xiàn)。
尤荻[3]（2021）在《電刺激聯(lián)合Cs-Au/GelMA水凝膠對(duì)臂叢神經(jīng)損傷后神經(jīng)病理性疼痛的療效及機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明研究背景:臂叢神經(jīng)損傷（brachial plexus injuries,BPI）后可能會(huì)遺留不同程度的運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能障礙,其中神經(jīng)節(jié)前頸根撕脫傷后會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的神經(jīng)病理性疼痛。由于同時(shí)累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng),涉及多種復(fù)雜的病理生理變化,如神經(jīng)炎癥、膠質(zhì)細(xì)胞活化等,常規(guī)的鎮(zhèn)痛藥物治療很難獲得令人滿(mǎn)意的臨床療效。目前臨床用于治療神經(jīng)病理性疼痛的藥物包括非甾體類(lèi)抗炎藥、抗癲癇藥、抗抑郁藥和類(lèi)阿片藥物,盡管有多種藥物可以選擇,甚至是聯(lián)合應(yīng)用,但臨床滿(mǎn)意率仍不足一半,而且還要受到不同程度副作用的影響。近年,很多研究人員致力于組織工程學(xué)的研究,希望獲得更為滿(mǎn)意的療效。水凝膠是由一種可通過(guò)非侵入性的方式注入受損部位的組織工程材料,具有良好的生物相容性、生物降解性、可塑性,并通過(guò)搭載藥物、細(xì)胞、納米粒子等進(jìn)行局部釋放,強(qiáng)化治療作用,在神經(jīng)損傷后的功能恢復(fù)和神經(jīng)再生領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景?？梢?jiàn)光交聯(lián)的可注射性甲基丙稀酸明膠（methylacrylic acid gelatin,Gel MA）水凝膠,含有精氨酸-甘氨酸-天門(mén)冬氨酸序列,對(duì)細(xì)胞粘附、分化、增殖均具有積極的促進(jìn)作用,已廣泛用于心臟、皮膚、骨骼等多領(lǐng)域的研究中,也被證明可以在脊髓損傷的研究中發(fā)揮重要的生理功能。為此,我們擬構(gòu)建一種基于Gel MA水凝膠的生物支架體系,通過(guò)加入殼聚糖（chitosan,Cs）改性的金納米粒子（Cs-Au NPs）,利用金納米獨(dú)特生物學(xué)性能,抑制膠質(zhì)細(xì)胞的增殖與分化,抑制促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥的水平減輕臂叢神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛,而且金納米粒子具有良好的導(dǎo)電性。神經(jīng)損傷后主要是神經(jīng)電傳導(dǎo)的破壞,而電刺激（electrical stimulation,ES）治療被報(bào)告可以有效改善神經(jīng)損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù),可以干預(yù)神經(jīng)傳導(dǎo)的“閘門(mén)變化”,抑制膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和活化。綜合考慮神經(jīng)炎癥在神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和發(fā)展中的重要作用,我們擬構(gòu)建一種含有Cs-Au NPs的Gel MA水凝膠,并聯(lián)合電刺激共同治療臂叢神經(jīng)損傷后的神經(jīng)病理性疼痛。本研究將在4章構(gòu)建Cs-Au/Gel MA水凝膠,并對(duì)其表征進(jìn)行檢測(cè),在第5章通過(guò)動(dòng)物模型檢測(cè)Cs-Au/Gel MA水凝膠和電刺激對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的治療作用。研究目的:研究BPI后,神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律,以及這一過(guò)程中膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)炎癥水平的變化規(guī)律。應(yīng)用組織工程學(xué)手段結(jié)合物理治療——電刺激,治療BPI后的神經(jīng)病理性疼痛,構(gòu)建一種具有潛在導(dǎo)電性能、生物學(xué)安全性良好、具有可降解性、親水性的Cs-Au/Gel MA,選取合適的電刺激頻率。分析神經(jīng)電刺激、Cs-Au/Gel MA水凝膠及其聯(lián)合應(yīng)用,對(duì)大鼠BPI引起的神經(jīng)病理性疼痛模型行為學(xué)變化、生化改變、細(xì)胞學(xué)變化的影響,評(píng)價(jià)其在神經(jīng)病理性疼痛治療中的作用及機(jī)制,推斷其減輕神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制,可能與抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖、活化,降低促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,抑制神經(jīng)炎癥有關(guān)。研究方法:1.選定初始機(jī)械性刺激縮足閾值（mechanical withdrawal threshold,MWT）為4g的成年雌性SD大鼠,建立神經(jīng)節(jié)前頸根撕脫傷（preganglionic cervical root avulsion,PCRA）模型（鈍性撕脫C6-C8頸神經(jīng)后根）,研究大鼠臂叢神經(jīng)損傷后的行為學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生化指標(biāo)變化。2.通過(guò)與假手術(shù)組進(jìn)行對(duì)比,在損傷后的第1、2、3、5和7天分別測(cè)量?jī)山M大鼠的MWT和熱縮足反射潛伏期（thermal withdrawal latency,TWL）,每次進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)后,將大鼠處死切取大鼠脊髓組織進(jìn)行免疫印跡檢查,檢查指標(biāo)包括離子鈣結(jié)合受體分子-1（Ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba-1）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNFα）。3.制備Cs-Au/Gel MA水凝膠并進(jìn)行表征檢測(cè),先合成Cs包裹的Cs-Au NPs,再通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)篩選最適的濃度用于合成Cs-Au/Gel MA水凝膠。4.使用明膠為原材料合成Gel MA水凝膠,并檢測(cè)其固液轉(zhuǎn)化性能,合成Cs-Au/Gel MA水凝膠檢測(cè)其親水性、降解性。5.通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)篩選最適合的電刺激頻率后,應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。6.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為PCRA組（不給予治療）、ES組（200 Hz電刺激治療）、Cs-Au/Gel MA水凝膠組（損傷局部注射Cs-Au/Gel MA水凝膠）、聯(lián)合治療組（電刺激治療+水凝膠局部注射）;治療3日后,處死大鼠后取脊髓組織進(jìn)行免疫熒光染色,檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞含量,免疫印跡法檢測(cè)Iba-1、GFAP、IL-1β、IL-6和TNFα含量;免疫熒光染色檢測(cè)受累節(jié)段脊髓組織內(nèi)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）含量和超氧化物歧化酶-1（Superoxide dismutase-1,SOD1）、超氧化物歧化酶-2（Superoxide dismutase-2,SOD2）、氮氧化物-2（nitrous oxides-2,NOX2）、氮氧化物-4（nitrous oxides-4,NOX4）等氧化損傷指標(biāo);7.連續(xù)監(jiān)測(cè)PCRA組、ES組、Cs-Au/Gel MA水凝膠組、聯(lián)合治療組大鼠造模后3周的行為學(xué)變化——MWT和TWL。研究結(jié)果:1.與假手術(shù)組比,PCRA模型大鼠術(shù)后的MWT和TWL明顯降低,過(guò)程中可見(jiàn)假手術(shù)組雖然術(shù)后早期也會(huì)出現(xiàn)疼痛敏感,但很快可以自行恢復(fù);而PCRA組術(shù)后早期疼痛敏感水平略有改善,但之后一直維持在一個(gè)疼痛敏感狀態(tài)。2.與假手術(shù)組相比,PCRA模型鼠的脊髓組織中Iba-1和GFAP的表達(dá)均增加,即膠質(zhì)細(xì)胞含量增加;IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平也均有升高,即促炎癥細(xì)胞因子含量增加,并會(huì)在損傷后的第2、3日達(dá)到高峰,所以后續(xù)研究中我們選取術(shù)后前3日作為干預(yù)治療的時(shí)間窗。3.Cs-Au NPs形態(tài)均勻,呈分散分布,濃度為0.05 mg/ml時(shí)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖情況最佳,并按此濃度制備Cs-Au/Gel MA水凝膠。4.0.05 mg/ml的Cs-Au/Gel MA水凝膠接觸角約為81.2°,具有良好的親水性;在大鼠皮下植入Cs-Au/Gel MA水凝膠后,術(shù)后1-5周進(jìn)行取樣發(fā)現(xiàn)均無(wú)明顯的炎癥反應(yīng)、且水凝膠體積逐漸減小,表明其具有良好的生物安全性和可降解性。5.電刺激和Cs-Au/Gel MA水凝膠均可以一定程度上抑制膠質(zhì)細(xì)胞的增生和促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生,但電刺激的作用更為明顯,療效更為顯著。損傷后3日,相較于PCRA組,Cs-Au/Gel MA組、ES組、聯(lián)合治療組Iba-1表達(dá)量均明顯減少（P<0.01）;相較于PCRA組,ES組、聯(lián)合治療組GFAP表達(dá)量均明顯減少（P<0.01）;6.相較于PCRA組,三個(gè)治療組中的IL-1β、IL-6和TNF-α均明顯下降,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。7.電刺激還可以有效抑制BDNF的產(chǎn)生,而Cs-Au/Gel MA水凝膠對(duì)氧化損傷抑制作用更為明顯。二者的聯(lián)合治療,較單獨(dú)任何一種都更為有效。研究結(jié)論:1.PCRA后會(huì)出現(xiàn)明顯的神經(jīng)病理性疼痛,且在早期不會(huì)自行好轉(zhuǎn)。2.PCRA后大鼠脊髓內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)發(fā)生增殖與活化,其中小膠質(zhì)細(xì)胞在疼痛維持的過(guò)程中可能更為重要。3.PCRA后大鼠脊髓內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎細(xì)胞因子會(huì)增加,其峰值出現(xiàn)在損傷后的48-72 h。4.Cs-Au納米粒子具有良好的生物相容性,但過(guò)高濃度反而可能抑制細(xì)胞的增殖。5.Cs-Au/Gel MA水凝膠是一種良好的組織工程支架,具有良好的塑性性、生物相容性、可降解性。6.ES和Cs-Au/Gel MA水凝膠均可抑制PCRA后的膠質(zhì)細(xì)胞增殖與活化、減少促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生、抑制神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生和發(fā)展,且二者聯(lián)合應(yīng)用療效可獲得進(jìn)一步的提高。
羅文琪[4]（2021）在《基于含硒納米材料的構(gòu)建及其治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究》文中指出研究背景:脊髓損傷（Spinal cord injury,SCI）是暴力因素（墜落,車(chē)禍等）直接或間接損傷脊髓組織,導(dǎo)致患者感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)、大小便、性功能障礙等一種嚴(yán)重疾病。SCI不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,也給家庭、社會(huì)和醫(yī)療保健系統(tǒng)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。目前臨床上常用的治療方法是手術(shù)減壓解除脊髓壓迫,穩(wěn)定脊柱生物力學(xué)力線(xiàn)。但是,手術(shù)減壓的治療效果與損傷程度、患者就診時(shí)間、身體耐受程度等多種因素密切相關(guān)。另外,在脊髓損傷的急性期,脊柱外科醫(yī)師常給予大劑量甲基強(qiáng)的松龍的沖擊治療,但是,眾多研究表明大劑量甲基強(qiáng)的松龍沖擊療法的治療效果并不確切,并且常伴隨感染、消化道大出血、肺栓塞等并發(fā)癥。因此,大劑量甲基強(qiáng)的松龍沖擊療法治療SCI仍有很大局限性。所以,臨床上迫切需要新的治療SCI方法。SCI治療效果不理想可能與其復(fù)雜的級(jí)聯(lián)動(dòng)態(tài)病理過(guò)程有關(guān)。這種復(fù)雜的病理過(guò)程主要包括以下四個(gè)方面,第一,外傷導(dǎo)致的脊髓內(nèi)出血、缺血、缺氧、血栓形成;第二,血-脊髓屏障破壞后,循環(huán)系統(tǒng)中的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)至脊髓,并分泌大量促炎因子如IL-1β,TNF-α等;第三,炎癥細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）產(chǎn)生大量活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）,過(guò)量ROS打破了脊髓自身的氧化還原平衡,損傷核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等誘導(dǎo)神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡;第四,凋亡細(xì)胞產(chǎn)生的大量細(xì)胞碎片募集炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)并分泌促炎因子,加重炎癥反應(yīng)使微環(huán)境進(jìn)一步惡化。目前,脊髓損傷的治療包含神經(jīng)再生和神經(jīng)保護(hù)兩個(gè)方向。神經(jīng)再生包括移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞等或刺激自體有潛能的干細(xì)胞再生,但SCI后惡劣的微環(huán)境不利于移植的干細(xì)胞存活或難以向神經(jīng)元分化限制了以上療法的治療效果及臨床應(yīng)用。神經(jīng)保護(hù)則通過(guò)抑制或中止SCI后復(fù)雜的級(jí)聯(lián)動(dòng)態(tài)病理過(guò)程,改善損傷微環(huán)境提高神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)損傷因素的耐受程度,促進(jìn)細(xì)胞在惡劣的微環(huán)境存活、重塑,進(jìn)而恢復(fù)神經(jīng)功能。研究目的:隨著納米材料與臨床醫(yī)學(xué)的深度融合及相關(guān)領(lǐng)域的快速發(fā)展,納米材料在神經(jīng)保護(hù)方面的應(yīng)用也得到了重視。納米材料既有良好的生物相容性又能夠有效清除ROS、抑制炎癥反應(yīng),因此,利用納米材料治療SCI是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。為此,本文擬合成制備了具有清除ROS功能的硒雜化碳量子點(diǎn)（Selenium-Doped Carbon Quantum Dots,Se-CQDs）,旨在探討Se-CQDs的生物相容性、抗氧化性、抑制炎癥性和神經(jīng)保護(hù)性。并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化,設(shè)計(jì)并制備了既能清除ROS同時(shí)具有靶向性的透明質(zhì)酸-硒（Hyaluronic acid-Selenium,HA-Se）納米粒子。旨在探討HA-Se納米粒子在體內(nèi)外的靶向性及其對(duì)SCI的治療效果。研究方法:（1）通過(guò)水浴加熱L-硒代胱氨酸的方法制備了Se-CQDs。采用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）,透射電鏡（TEM）,馬爾文粒度儀對(duì)Se-CQDs大小、形態(tài)、電位進(jìn)行表征。采用核磁共振氫譜（1H NMR）和碳譜(13C NMR),傅里葉變換紅外線(xiàn)（FTIR）,x射線(xiàn)表面光電子能（XPS）,紫外吸收光譜,熒光光譜對(duì)Se-CQDs結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,明確合成物質(zhì)結(jié)構(gòu)及組成成分。同時(shí),通過(guò)DPPH檢測(cè)Se-CQDs清除自由基的效率。體外實(shí)驗(yàn),首先通過(guò)MTT法驗(yàn)證了不同濃度Se-CQDs（6.25,12.5,25,50,100,200μg/m L）對(duì)細(xì)胞（N2a細(xì)胞、PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞）生物相容性的影響。同時(shí),用MTT法檢驗(yàn)了上述濃度Se-CQDs在250μM H2O2模擬的氧化應(yīng)激環(huán)境對(duì)N2a細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用。另外,通過(guò)Elisa法探究了Se-CQDs對(duì)LPS刺激后BV2細(xì)胞炎癥因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）表達(dá)的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),采用標(biāo)準(zhǔn)的脊髓打擊器制造大鼠脊髓挫傷模型。造模成功后脊髓損傷局部通過(guò)微量注射器原位給予鹽水或不同濃度的Se-CQDs（250μg/m L,1000μg/m L）各10μL,分組情況如下:saline組,Se-CQDs（250μg/m L）組及Se-CQDs（1000μg/m L）組。于術(shù)后24h取材提取脊髓損傷處的全蛋白,進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn),評(píng)估Se-CQDs在體內(nèi)水平對(duì)Caspase-9,Cleaved caspase-3,Bcl-2,Bax凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響。術(shù)后5d,心臟灌注取材通過(guò)免疫熒光染色（CD68,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞）評(píng)估Se-CQDs在體內(nèi)水平抑制炎癥的作用。剩余SD大鼠于造模后1d,1w,2w,3w,4w,5w,6w,7w和8w通過(guò)BBB評(píng)分連續(xù)評(píng)估下肢運(yùn)動(dòng)功能,同時(shí)記錄大鼠恢復(fù)自主排尿的時(shí)間。于造模后8周心臟灌注取材,通過(guò)膀胱H&E和Masson染色,脊髓外像、脊髓H&E和LFB染色及脊髓免疫熒光染色（CS56&GFAP,Neu N&NF200）等系統(tǒng)評(píng)價(jià)Se-CQDs對(duì)急性SCI及相關(guān)膀胱改變的治療效果。（2）透明質(zhì)酸（Hyaluronic Acid,HA）在水溶液中作為穩(wěn)定劑通過(guò)氧化還原體系制備HA-Se納米粒子。采用動(dòng)態(tài)光散射（DLS）,馬爾文粒度儀,透射電鏡（TEM）,掃描電鏡（SEM）對(duì)HA-Se納米粒子的大小、電位、形貌進(jìn)行表征,采用傅里葉變換紅外線(xiàn)（FTIR）,x射線(xiàn)表面光電子能（XPS）對(duì)HA-Se納米粒子的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。同時(shí),通過(guò)DPPH檢測(cè)HA-Se納米粒子清除自由基的效率。體外實(shí)驗(yàn),首先通過(guò)MTT法驗(yàn)證了不同濃度HA-Se納米粒子（3.125,6.25,12.5,25,50,100μg/m L）對(duì)PC12細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞生物相容性的影響。同時(shí),用MTT法檢驗(yàn)了50和100μg/m L HA-Se納米粒子在100μM H2O2模擬的氧化應(yīng)激環(huán)境下對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)作用。另外,通過(guò)Elisa法檢測(cè)了HA-Se納米粒子對(duì)LPS刺激BV2細(xì)胞后炎癥因子（IL-1β,IL-6,TNF-α）表達(dá)量的影響。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),采用標(biāo)準(zhǔn)的脊髓打擊器制造大鼠脊髓挫傷模型。為了探究SCI后CD44表達(dá)情況,通過(guò)Western Blot法檢測(cè)脊髓損傷各組間CD44表達(dá)量,同時(shí),術(shù)后5d取材通過(guò)免疫熒光染色共定位法探究了CD44具體為何種細(xì)胞表達(dá)。進(jìn)一步,為了評(píng)估HA-Se納米粒子在脊髓的靶向性,采用尾靜脈注射N(xiāo)H2-CY5熒光標(biāo)記的HA-Se納米粒子進(jìn)行示蹤,并于動(dòng)物成像系統(tǒng)拍照記錄組織分布。為了探究HA-Se納米粒子對(duì)凋亡的影響,術(shù)后24h取材,檢測(cè)假手術(shù)組,saline組和HA-Se納米粒子組促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表達(dá)差異。另外,為了評(píng)估HA-Se納米粒子抑制炎癥的作用,術(shù)后5天心臟灌注后取材通過(guò)免疫熒光染色（CD68&Iba-1）評(píng)估不同濃度HA-Se納米粒子（1mg/kg,5mg/kg,10mg/kg）在體內(nèi)抑制炎癥的作用。為了評(píng)估HA-Se納米粒子治療效果,于損傷后1d,1w,2w,3w,4w,5w,6w,7w,8w,9w,10w,11w和12w通過(guò)BBB評(píng)分連續(xù)評(píng)估下肢運(yùn)動(dòng)功能,通過(guò)脊髓外像、脊髓H&E和LFB染色及脊髓免疫熒光染色（Neu N&NF200）等評(píng)價(jià)HA-Se納米粒子對(duì)急性SCI的治療效果。研究結(jié)果:（1）制備了溶解性良好,大小均勻,半徑為34.5±3.3 nm的Se-CQDs。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Se-CQDs在200μg/m L濃度下對(duì)N2a細(xì)胞、PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用,并且62.5μg/m L、125μg/m L、250μg/m L、500μg/m L Se-CQDs清除DPPH效率分別為56.4%、72.1%、91%、98%。在250μM H2O2模擬氧化應(yīng)激環(huán)境下,Se-CQDs有效提高了N2a細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、PC12細(xì)胞的存活率,并且能夠抑制LPS刺激BV2產(chǎn)生炎癥因子IL-1β和IL-6。此外,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,相比saline組,Se-CQDs治療組脊髓挫傷模型中脊髓空洞明顯減小、神經(jīng)脫髓鞘受到抑制、神經(jīng)元得到保護(hù)、膀胱內(nèi)膜增厚及膀胱纖維化均明顯減輕。同時(shí),促凋亡蛋白（Bax、Cleaved Caspase-3、Caspase-9）表達(dá)減少,抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增加且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,BBB評(píng)分及自主排尿恢復(fù)時(shí)間表明,相比saline組,Se-CQDs治療組下肢運(yùn)動(dòng)功能及膀胱排尿功能得到明顯改善。（2）制備了溶解性好,核殼結(jié)構(gòu),大小均勻,直徑為95±2.3 nm的HA-Se納米粒子。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明HA-Se納米粒子在100μg/m L濃度下對(duì)PC12細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性作用,并且250μg/m L HA-Se納米粒子在30min、60min、90min、150 min清除DPPH效率分別為0.8%、5.9%、9.7%、14.5%,1000μg/m L HA-Se納米粒子在30 min、60 min、90 min、150 min清除DPPH效率分別為14.6%、19.5%、25.7%、31.8%。HA-Se納米粒子有效促進(jìn)了星形膠質(zhì)細(xì)胞在H2O2模擬氧化應(yīng)激環(huán)境下的存活,并且能夠抑制LPS刺激BV2產(chǎn)生炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α。此外,本研究發(fā)現(xiàn)SCI后大鼠脊髓損傷局部星形膠質(zhì)細(xì)胞及部分小膠質(zhì)細(xì)胞CD44表達(dá)增加,且體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)LPS刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞24 h后能夠誘導(dǎo)其表達(dá)CD44。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí),HA-Se納米粒子能夠特異性的與CD44結(jié)合,相比saline組,HA-Se治療組的脊髓空洞減小、神經(jīng)脫髓鞘減輕、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)受到抑制,促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3表達(dá)減少,HA-Se治療組下肢運(yùn)動(dòng)功能明顯改善。研究結(jié)論:（1）Se-CQDs具有良好的生物相容性及高效的ROS清除能力,顯著減輕了SCI氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎癥細(xì)胞募集浸潤(rùn),明顯改善了SCI后的神經(jīng)功能,為治療SCI提供了新的選擇。（2）SCI后星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CD44增加,HA-Se納米粒子通過(guò)結(jié)合星形膠質(zhì)細(xì)胞表面高表達(dá)的CD44而具有良好的靶向性作用。同時(shí),HA-Se納米粒子本身還具備抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、減小脊髓空洞、保護(hù)神經(jīng)元促進(jìn)其存活的作用,明顯改善了神經(jīng)功能。這為制備靶向性納米藥物治療SCI提供了新思路。
盧治國(guó)[5]（2021）在《納米芳香藥物治療神經(jīng)精神類(lèi)疾病的研究》文中研究表明精神神經(jīng)類(lèi)疾病一般是由外在的重大應(yīng)激事件和內(nèi)在遺傳因素共同導(dǎo)致的。神經(jīng)精神類(lèi)疾病最初只是情緒障礙。若不加以干預(yù),情緒障礙會(huì)逐漸造成腦生理活動(dòng)改變,并最終發(fā)展成神經(jīng)精神類(lèi)疾病疾病,從而給個(gè)人和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。精神障礙在情緒障礙階段,需要舒適且溫和的干預(yù)手段緩解患者的情緒,尤其是緩解患者外在的應(yīng)激。芳香療法作為一種輔助療法,具有顯著的緩解應(yīng)激效果。然而,傳統(tǒng)芳香療法不夠便利。并且,芳香藥物分子揮發(fā)過(guò)快,會(huì)產(chǎn)生過(guò)濃的藥氣,影響治療效果。基于此,本論文制備了一系列適用于日用品加香的納米芳香藥物。首先,針對(duì)壁紙白天使用而夜晚不使用的特點(diǎn),本論文分別制備了基于無(wú)機(jī)介孔二氧化硅納米顆粒（MSNs）和基于有機(jī)高分子膠束的光敏納米芳香藥物。另外,針對(duì)絲綢貼身使用且表面帶負(fù)電荷的特點(diǎn),本論文分別制備了基于陽(yáng)離子膠束的pH響應(yīng)納米芳香藥物和基于陽(yáng)離子脂質(zhì)體的溫敏納米芳香藥物。為了更好地探究納米芳香藥物的神經(jīng)調(diào)節(jié)作用,本論文分別從行為學(xué)水平,組織水平,細(xì)胞水平和分子水平探究了納米芳香藥物的作用。在行為學(xué)水平,本論文通過(guò)曠場(chǎng)測(cè)試和高架十字迷宮測(cè)試評(píng)價(jià)了納米芳香藥物減壓和抗焦慮效果。在組織水平,本論文通過(guò)檢測(cè)特定腦區(qū)的生理電位,探究了納米芳香藥物在神經(jīng)活性方面的作用。在細(xì)胞水平,本論文通過(guò)免疫熒光切片探究了納米芳香藥物在神經(jīng)再生方面的作用。在分子水平,本論文通過(guò)液相-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)了納米芳香藥物在神經(jīng)遞質(zhì)分泌方面的作用。最終,本論文發(fā)現(xiàn)了納米芳香藥物具有更好的神經(jīng)調(diào)節(jié)作用,并且這種神經(jīng)調(diào)節(jié)作用具有長(zhǎng)效性。應(yīng)激在抑郁癥的發(fā)病過(guò)程中產(chǎn)生重要作用。納米芳香藥物具有較好的緩解應(yīng)激效果,因此具有預(yù)防抑郁癥的潛力。在納米芳香藥物的設(shè)計(jì)和制備方面,本課題受壁紙易發(fā)霉啟發(fā),提出了仿生納米芳香藥物的思路。首先,根據(jù)微生物多為棒狀,本論文制備了基于棒狀MSNs的形貌仿生納米芳香藥物。隨后,鑒于多糖類(lèi)菌外分泌物在粘附方面的作用,本論文在形貌仿生納米芳香藥物表面修飾殼聚糖分子,制備了功能仿生納米芳香藥物。通過(guò)分子動(dòng)力學(xué)模擬本論文發(fā)現(xiàn),功能仿生納米芳香藥物可以與壁紙上的纖維素產(chǎn)生大量氫鍵,并改變纖維素的空間結(jié)構(gòu),從而顯著提高納米芳香藥物的粘附力。最后,本論文為功能仿生納米芳香藥物賦予化學(xué)反應(yīng)能力,使納米芳香藥物可以與壁紙形成共價(jià)鍵。本論文命名為仿生plus納米芳香藥物。通過(guò)納米芳香藥物粘附和脫附實(shí)驗(yàn)本論文發(fā)現(xiàn),仿生plus納米芳香藥物具有最好的粘附效果。本論文通過(guò)給小鼠注射皮質(zhì)酮誘導(dǎo)構(gòu)建抑郁癥模型小鼠。在抑郁癥模型小鼠構(gòu)建的應(yīng)激環(huán)境中,本論文將芳香藥物處理的壁紙粘附在鼠籠壁上。并展現(xiàn)了顯著的預(yù)防抑郁癥效果。當(dāng)精神障礙發(fā)展到腦生理活動(dòng)改變的程度,則需要從內(nèi)在的遺傳因素和外在的應(yīng)激因素協(xié)同治療疾病。在本課題中,本論文以抑郁癥為例,設(shè)計(jì)并制備了適用于鼻腔給藥的基因-芳香藥物遞送體系。本論文引入Cysteine-odorranalectin促進(jìn)遞送體系經(jīng)鼻入腦。另外,本論文引入舍曲林,促進(jìn)遞送體系靶向至病灶細(xì)胞。在以?xún)?nèi)涵體途徑進(jìn)入細(xì)胞后,遞送體系優(yōu)異的質(zhì)子緩沖效應(yīng)漲破內(nèi)涵體,實(shí)現(xiàn)內(nèi)涵體逃逸,并釋放藥物?；蛩幬飐iRNA可以下調(diào)血清素轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá),從而抑制血清素再攝取,提高血清素在病灶的含量,進(jìn)一步從內(nèi)在遺傳因素治療抑郁癥。芳香藥物檸檬醛則可下調(diào)應(yīng)激水平,從外在的應(yīng)激因素治療抑郁癥。結(jié)果表明,基因-芳香藥物遞送體系具有優(yōu)異的抑郁癥協(xié)同治療效果。特殊應(yīng)激環(huán)境,如航天員所處的微重力和孤獨(dú)環(huán)境,會(huì)造成嚴(yán)重的焦慮情緒和認(rèn)知記憶衰退。通過(guò)納米芳香藥物緩解應(yīng)激預(yù)期具有較好的效果。然而,航天環(huán)境對(duì)清潔度要求較高。也就是說(shuō),納米芳香藥物應(yīng)不易脫附。在本課題中,本論文對(duì)納米芳香藥物進(jìn)行活性修飾,制備了反應(yīng)性納米芳香藥物。反應(yīng)性納米芳香藥物能夠與壁紙形成共價(jià)鍵,從而牢固地粘附在壁紙上。通過(guò)后肢去負(fù)荷和將鼠籠壁換成毛玻璃,本論文模擬了航天微重力和孤獨(dú)環(huán)境。結(jié)果表明,納米芳香藥物在模擬的航天特因環(huán)境下具有顯著的抗焦慮和提高認(rèn)知記憶效果。綜上,本課題提供了芳香藥物納米化和緩控釋平臺(tái),并初步探究了納米芳香藥物神經(jīng)調(diào)節(jié)作用和機(jī)制,為納米芳香藥物應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療奠定了基礎(chǔ)。另外,本課題提出了仿生納米芳香藥物思路,顯著提高了納米芳香藥物在壁紙上的粘附,并應(yīng)用于抑郁癥的預(yù)防。對(duì)于抑郁癥的治療,本課題提出了基因-芳香藥物聯(lián)合治療策略,并設(shè)計(jì)和制備了相應(yīng)的基因-芳香藥物鼻腔藥物遞送體系。最后,本課題還驗(yàn)證了納米芳香藥物在航天特因環(huán)境下抗焦慮和提高認(rèn)知記憶效果。
張雷[6]（2021）在《血腦屏障體外微球模型的構(gòu)建及其在中藥神經(jīng)毒性篩選中的應(yīng)用》文中研究指明目的:血腦屏障（Blood-Brain Barrier,BBB）是大腦和血液循環(huán)之間的一種高度選擇性和動(dòng)態(tài)的親脂屏障,它能有效地避免外源性和內(nèi)源性毒性進(jìn)入大腦,維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)（Central Nervous System,CNS）穩(wěn)態(tài)。血腦屏障主要由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（BMVECs）、周細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元組成。BMVECs是高度極化的細(xì)胞,其主要功能包括表達(dá)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、產(chǎn)生炎癥介質(zhì)、向腦組織運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及阻止藥物和毒素進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。有毒物質(zhì)想要到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng),其中一條途徑則是造成BBB功能障礙。近年來(lái),因服用中藥而中毒的事件屢發(fā),引起了人們對(duì)其肝、腎等毒性研究的重視,神經(jīng)毒性卻鮮有報(bào)道。本課題欲建立體外血腦屏障模型,并從具有明確其他器官毒性的中藥單體庫(kù)中初步篩選具有神經(jīng)毒性的中藥單體;利用已建立的BBB模型對(duì)中藥神經(jīng)毒性單體進(jìn)行BBB障礙機(jī)制研究,以期為中藥神經(jīng)毒性評(píng)價(jià)提供新方法。方法:1、利用細(xì)胞在低吸附培養(yǎng)下會(huì)自發(fā)形成微球的特性,將HBMEC、HBVP、HA三種原代人源細(xì)胞進(jìn)行三細(xì)胞共培養(yǎng),以期形成與人體內(nèi)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的血腦屏障微球類(lèi)器官:首先通過(guò)對(duì)培養(yǎng)3、7、14天的BBB微球進(jìn)行活/死細(xì)胞染色,驗(yàn)證BBB微球是否可以長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)。其次,運(yùn)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)組成BBB微球的三種細(xì)胞成分的標(biāo)志性蛋白及其分布的相對(duì)空間分布,并對(duì)BBB完整性的特征蛋白進(jìn)行表征。另外,使用BBB微球進(jìn)行右旋糖苷滲透性實(shí)驗(yàn)、Rh123外排實(shí)驗(yàn),對(duì)BBB微球的生理功能進(jìn)行驗(yàn)證。最后,我們使用BBB微球進(jìn)行氧糖剝奪/復(fù)氧復(fù)糖（OGD/R）造模,通過(guò)評(píng)估ZO-1的表達(dá)和低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α轉(zhuǎn)錄水平,驗(yàn)證BBB微球是否可以模擬疾病模型。2、通過(guò)探究具其他器官毒性的中藥單體對(duì)神經(jīng)細(xì)胞和BBB微球的影響,結(jié)合Discovery Studio軟件研究中藥單體是否有神經(jīng)毒性。首先,通過(guò)Discovery Studio軟件的ADMET模塊獲取44種單體的BBB透過(guò)性性質(zhì)。然后通過(guò)作用于PC12細(xì)胞、HT-22細(xì)胞,運(yùn)用Hoechst染色法分析神經(jīng)細(xì)胞的活力,對(duì)44種有毒中藥單體進(jìn)行神經(jīng)毒性初篩,得到目標(biāo)藥物斑蝥素（CTD）;然后將篩選出的藥物作用于BBB微球,運(yùn)用高內(nèi)涵成像及RT-PCR技術(shù)檢查其對(duì)BBB微球的細(xì)胞活力、BBB特征蛋白及基因水平的影響;運(yùn)用高內(nèi)涵成像及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CTD對(duì)BBB微球的氧化應(yīng)激、炎癥相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。使用H&E染色、尼式染色檢測(cè)CTD致ICR小鼠神經(jīng)損傷的影響。結(jié)果:1、通過(guò)將HBMEC、HBVP、HA三種原代人源細(xì)胞在低吸附條件下進(jìn)行共培養(yǎng),成功誘導(dǎo)形成微球,且可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期培養(yǎng)（最長(zhǎng)14天）,并保持較高細(xì)胞活力。通過(guò)對(duì)BBB微球的組成細(xì)胞成分的標(biāo)志性蛋白表征,證明了BBB微球內(nèi)三種細(xì)胞可以共存,并且從熒光分布可以得知三種細(xì)胞（HBMEC、HBVP、HA）按由外而內(nèi)的順序依次排列,具備了模擬體內(nèi)血腦屏障的結(jié)構(gòu)分布（這種球體的結(jié)構(gòu)與人體內(nèi)血腦屏障極為相似--內(nèi)皮層包裹在球體最外層,球體的外部環(huán)境即為腦部微血管的管腔內(nèi)部,球體的內(nèi)部環(huán)境即為腦部微血管的管腔外部,由內(nèi)皮細(xì)胞形成血液系統(tǒng)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)阻隔的界面）。隨后在對(duì)BBB完整性的特征性蛋白進(jìn)行表征的實(shí)驗(yàn)中,BBB微球高表達(dá)了緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、claudin-5、Occludin,以及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Laminin、外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白P-gp、LRP-1,證明了BBB微球具有屏障功能的關(guān)鍵蛋白結(jié)構(gòu)。對(duì)BBB微球生理功能進(jìn)行驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)在組胺破壞血腦屏障后,右旋糖苷內(nèi)流顯著內(nèi)流;在使用P-gp活性抑制劑維拉帕米后,P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)底物Rh123顯著內(nèi)流,證明BBB微球具有體內(nèi)相似的生理功能。最后,通過(guò)對(duì)BBB微球進(jìn)行OGD/R造模,運(yùn)用免疫熒光及RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證OGD/R造模后可以降低緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1的表達(dá),激活HIF-1α的轉(zhuǎn)錄,證明BBB微球具有模擬疾病模型的能力。2、通過(guò)Discovery Studio軟件對(duì)44種化合物進(jìn)行計(jì)算機(jī)模擬,預(yù)測(cè)出各化合物的BBB透過(guò)性質(zhì)。隨后使用Neuron Outgrowth Assay方法評(píng)價(jià)44種有毒中藥單體的神經(jīng)毒性,篩查出五個(gè)候選藥物。隨后結(jié)合文獻(xiàn)及HT-22海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞對(duì)CTD進(jìn)行神經(jīng)毒性驗(yàn)證,結(jié)果證明CTD可以顯著降低HT-22細(xì)胞的細(xì)胞活力,并且可以在顯微鏡下觀(guān)察到對(duì)BBB微球的損傷作用。將CTD作用于BBB微球上,通過(guò)對(duì)細(xì)胞活力、緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1的定量分析,證明CTD可以破壞血腦屏障結(jié)構(gòu),且不會(huì)影響B(tài)BB特征蛋白ZO-1、Caudin-5、Occludin、P-gp、BCRP1、GLUT1的基因轉(zhuǎn)錄水平。隨后使用高內(nèi)涵成像及RT-PCR檢測(cè)CTD對(duì)BBB微球中活性氧蓄積、炎癥因子轉(zhuǎn)錄水平、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,結(jié)果證明CTD可以顯著增加BBB微球的細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積,顯著升高了IL-6、IL-8、VEGF的基因轉(zhuǎn)錄水平,且顯著增加促凋亡蛋白caspase-3、bax表達(dá),同時(shí)降低抗凋亡蛋白bcl-2的表達(dá)。H&E染色、尼式染色顯示CTD可以造成ICR小鼠大腦海馬區(qū)神經(jīng)元丟失、尼式小體溶解、顆粒層細(xì)胞基底部水腫。結(jié)論:我們將HBMEC、HBVP、HA三種原代人源細(xì)胞進(jìn)行低吸附條件下共培養(yǎng)以自發(fā)形成微球,并通過(guò)對(duì)BBB特征性蛋白的表征、生理功能驗(yàn)證、疾病模型模擬,證明了微球自組裝成為具有類(lèi)似體內(nèi)血腦屏障結(jié)構(gòu)功能的模塊化類(lèi)器官。隨后我們使用神經(jīng)元細(xì)胞毒性測(cè)試結(jié)合BBB微球毒性測(cè)試的綜合策略,從44種有毒中藥單體中篩查出具有神經(jīng)毒性的CTD,并認(rèn)為CTD可能通過(guò)增加細(xì)胞內(nèi)活性氧蓄積及激活炎癥因子表達(dá)、調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白破壞血腦屏障。最后,我們使用ICR小鼠染毒后,發(fā)現(xiàn)CTD可以造成小鼠神經(jīng)損傷,從動(dòng)物水平上驗(yàn)證了CTD的神經(jīng)毒性作用。
吳佳靜[7]（2021）在《針對(duì)狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒藥物篩選及驗(yàn)證》文中研究說(shuō)明狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的致死性疾病,全世界每年約有6萬(wàn)人死于狂犬病,其中40%為15歲以下的兒童,主要流行地區(qū)為亞洲和非洲[1,2]。狂犬病是死亡率最高的疾病之一,致死率近100%,鮮有治療成功的病例報(bào)道[3]。尋找到一種有效的抗狂犬病病毒藥物和治療手段,降低狂犬病的發(fā)病率和病死率,從而消除人們的“恐狂犬病癥”,成為全世界藥物研究人員所面臨的重要挑戰(zhàn)之一。早在1979年,人們已經(jīng)戰(zhàn)勝了古老的病毒—天花病毒[4]。目前,天花病毒的毒種僅被保存在WHO指定的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室中:一個(gè)是美國(guó)亞特蘭大的疾病控制和預(yù)防中心（美國(guó)CDC）,另一個(gè)是俄羅斯科爾佐沃的國(guó)家病毒學(xué)和生物技術(shù)媒介研究中心（VECTOR）[5]。然而,2014年美國(guó)曾發(fā)現(xiàn)了天花病毒零星感染病例[6]。作為基因組最大的雙鏈DNA病毒,天花病毒在環(huán)境中極其穩(wěn)定,一旦被用作生物武器,后果不堪設(shè)想。此外,疫苗接種的間斷也為病毒的傳播提供了有力條件。因此,篩選和評(píng)價(jià)抗天花病毒的藥物是必要的。開(kāi)發(fā)新藥通常需要很多年的時(shí)間,而且有多種生產(chǎn)要求,而將現(xiàn)有藥物重新利用是一種有吸引力的替代方法[7]。這些已獲批準(zhǔn)的藥物具有優(yōu)勢(shì),因?yàn)樗鼈兊乃幚砗投拘蕴卣魇且阎?在人體中的安全性數(shù)據(jù)已經(jīng)建立,生產(chǎn)和配方的可行性已經(jīng)得到論證[8,9]。在本研究中,我們建立了基于狂犬病病毒假病毒和復(fù)制型痘苗病毒天壇株的高通量篩選方法,篩選已批準(zhǔn)上市的藥物,在體外和體內(nèi)確定有效的抗病毒候選藥物。本研究第一部分首先對(duì)767份來(lái)自中國(guó)食品藥品檢定研究院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)化研究所的化合物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了高通量篩選,尋找抗狂犬病病毒的化合物。經(jīng)過(guò)三輪體外篩選,最終得到11個(gè)陽(yáng)性化合物。在這11個(gè)化合物中,氯法齊明排名第一。同時(shí)應(yīng)用狂犬病病毒活病毒CVS株進(jìn)行RFFIT實(shí)驗(yàn),確認(rèn)了氯法齊明的抑制活性。其在體外對(duì)CVS株的半數(shù)有效濃度EC50=2.28μM,半數(shù)細(xì)胞毒性濃度CC50>2200μM,治療指數(shù)SI>967（專(zhuān)利號(hào):CN112279815A）。同時(shí),通過(guò)Time-of-addition分析、Biacore分子互作即分析對(duì)接等實(shí)驗(yàn)確定了氯法齊明主要作為膜融合抑制劑來(lái)發(fā)揮抗病毒作用。此外,仿照人類(lèi)被狗咬傷的方式,采取肌肉注射的方式攻毒,建立了BALB/c小鼠狂犬病病毒CVS株感染模型。體內(nèi)暴露后預(yù)防結(jié)果顯示,氯法齊明可以延長(zhǎng)小鼠的發(fā)病時(shí)間和死亡時(shí)間,并且提高了10%的生存率。氯法齊明作為臨床治療瘤型麻風(fēng)病的一線(xiàn)用藥,其藥代和安全性等成藥性特征已得到了普遍證實(shí),但存在著皮膚色素沉著的副作用。為了提高氯法齊明的溶解度,減少其在脂肪組織中的蓄積,本研究基于氯法齊明的母核,合成了一系列氯法齊明鹽類(lèi)化合物。通過(guò)體外、內(nèi)活性評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)氯法齊明水楊酸鹽是更理想的抗狂犬病病毒候選物。為了進(jìn)一步闡明氯法齊明抗狂犬病病毒的構(gòu)效關(guān)系,通過(guò)化學(xué)修飾的手段引入極性基團(tuán),合成一系列全新的氯法齊明類(lèi)似物,其體內(nèi)活性還需進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究的第二部分利用痘苗病毒天壇株對(duì)767份藥物進(jìn)行抗病毒活性篩選,找到了具有潛在治療天花病毒效力的藥物嗎替麥考酚酯與曲尼司特,并在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行了抗病毒效力驗(yàn)證。結(jié)果表明,通過(guò)5次給藥治療,嗎替麥考酚酯對(duì)痘苗病毒在小鼠體內(nèi)復(fù)制的抑制率為99%（10 mg/kg,P<0.01）,曲尼司特為59%（45 mg/kg,P=0.01）。Time-of-addition分析顯示,兩個(gè)藥物都是在病毒復(fù)制的過(guò)程中發(fā)揮主要作用。綜上所述,本研究基于“藥物再定位”進(jìn)行的抗狂犬病病毒和痘苗病毒的藥物篩選與驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)狂犬病病毒抑制劑—氯法齊明,以及兩個(gè)痘苗病毒抑制劑嗎替麥考酚酯與曲尼司特,這些藥物的活性也在動(dòng)物水平上得到了驗(yàn)證。完成了基于氯法齊明母核苯吩嗪類(lèi)的衍生物的抗狂犬病病毒活性的活性、作用機(jī)制以及化學(xué)基礎(chǔ)的整體框架研究,以指導(dǎo)氯法齊明抗狂犬病病毒藥用新功能再定位并為狂犬病病毒新藥研發(fā)提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)與科學(xué)依據(jù)。
許夢(mèng)白[8]（2021）在《產(chǎn)后抑郁癥中醫(yī)證候特點(diǎn)分析及逍遙散的干預(yù)作用機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:1.臨床流行病學(xué)研究通過(guò)臨床橫斷面流行病學(xué)調(diào)查,探索引起產(chǎn)后抑郁癥（Postpartum depression,PPD）患者抑郁程度加重的影響因素,利用因子及聚類(lèi)分析等方法探索PPD的中醫(yī)證候特點(diǎn),進(jìn)一步歸納PPD的中醫(yī)病機(jī)和治則,以期為PPD臨床個(gè)體化精準(zhǔn)辨證提供理論支持。2.中醫(yī)文獻(xiàn)方藥研究檢索中藥內(nèi)服方劑治療PPD臨床研究的相關(guān)文獻(xiàn),探討治療PPD內(nèi)服方藥的藥物組成規(guī)律及遣方用藥思路,為臨床治療PPD的選方用藥提供參考,并為進(jìn)一步探索中藥治療PPD的機(jī)制研究提供理論依據(jù)。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)機(jī)制研究結(jié)合PPD臨床流行病學(xué)研究及中醫(yī)文獻(xiàn)方藥研究,開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn),建立PPD大鼠模型并進(jìn)行評(píng)價(jià),造模成功后給予逍遙散干預(yù)。通過(guò)觀(guān)察大鼠下丘腦病理組織形態(tài)、檢測(cè)下丘腦-垂體-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonadal,HPG）軸激素水平、下丘腦雌激素受體（ERα、ERβ、GPER）介導(dǎo)的PKA/CREB/BDNF信號(hào)通路表達(dá)水平等,探討逍遙散治療PPD的療效及分子作用機(jī)制,為逍遙散治療PPD提供具有科學(xué)內(nèi)涵的客觀(guān)依據(jù),同時(shí)“以方測(cè)證”,揭示PPD的中醫(yī)證候特點(diǎn)及病機(jī)本質(zhì)。方法:1.臨床流行病學(xué)研究建立《產(chǎn)后抑郁癥調(diào)查問(wèn)卷》,收集PPD患者的一般情況、抑郁量表積分、中醫(yī)癥狀及體征信息。采用Pearson卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法對(duì)患者一般情況進(jìn)行單因素分析,采用有序多分類(lèi)Logistic回歸對(duì)單因素分析結(jié)果中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)因素進(jìn)行多因素分析,探索導(dǎo)致PPD患者抑郁程度加重的影響因素。采用頻數(shù)分析、因子分析及聚類(lèi)分析方法,對(duì)患者的中醫(yī)臨床癥狀及體征進(jìn)行研究,歸納PPD患者的中醫(yī)證候特點(diǎn),進(jìn)一步探尋PPD的中醫(yī)病機(jī)和治則。2.中醫(yī)文獻(xiàn)方藥研究檢索中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)等國(guó)內(nèi)中文數(shù)據(jù)庫(kù)2000年-2019年發(fā)表的關(guān)于中藥治療PPD臨床研究的相關(guān)文獻(xiàn),按照篩選標(biāo)準(zhǔn)收集研究所需中藥方劑。建立數(shù)據(jù)庫(kù),采用SPSS 24.0、Weka 3.8等軟件對(duì)中藥進(jìn)行頻數(shù)分析、聚類(lèi)分析及關(guān)聯(lián)規(guī)則分析,探索中藥治療PPD的遣方用藥規(guī)律,探析臨床治療PPD的用藥思路。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)機(jī)制研究以妊娠后期慢性極輕度應(yīng)激（Chronic ultramild stress,CUMS）方法建立PPD大鼠模型,綜合大鼠的一般情況、體重、產(chǎn)仔及活仔量、行為學(xué)變化對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià),造模成功后采用HE染色觀(guān)察大鼠下丘腦病理組織形態(tài),ELISA法檢測(cè)血清E2、P、PRL含量;采用RT-qPCR及Western blot分別檢測(cè)下丘腦組織勻漿中ERα、ERβ、GPER及PKA、CREB、BDNF的基因與蛋白表達(dá)水平,并采用免疫組化法對(duì)其分子蛋白表達(dá)進(jìn)行定位分析,在基于HPG軸探索PPD的發(fā)病及逍遙散干預(yù)作用機(jī)制的同時(shí),“以方測(cè)證”,以逍遙散為反證,揭示PPD肝郁脾虛證的證候生物學(xué)基礎(chǔ)。結(jié)果:1.臨床流行病學(xué)研究（1）206例PPD患者平均年齡為30.28±5.07歲;輕度抑郁患者94例,占比45.63%;中度抑郁患者72例,占比34.95%;重度抑郁患者40例,占比19.42%。在影響PPD患者抑郁程度加重的心理社會(huì)因素中,產(chǎn)前教育是影響PPD患者抑郁程度的保護(hù)因素,新生兒疾病、經(jīng)前煩躁情況、孕期焦慮抑郁、孕產(chǎn)期負(fù)面事件、睡眠時(shí)間不足、患者受關(guān)心和支持度低是導(dǎo)致PPD患者抑郁程度加重的危險(xiǎn)因素。（2）206例PPD患者的高頻癥狀及體征有情緒抑郁、失眠多夢(mèng)、神疲乏力、食少納呆、煩躁易怒、善太息、乳房脹痛、悲傷欲哭、精神萎靡、健忘、腹脹,舌淡紅、舌邊有齒痕、舌黯及舌有瘀斑瘀點(diǎn),苔白、苔薄、苔膩,脈細(xì)、脈弦、脈沉。將中醫(yī)癥狀因子分析得出的9個(gè)公因子進(jìn)行聚類(lèi)分析,共出現(xiàn)5個(gè)聚類(lèi)結(jié)果:①肝郁脾虛證,其癥狀包括善太息、腹脹、脅肋脹滿(mǎn)甚則疼痛、乳房脹痛、食少納呆;②陰血虧虛證,其癥狀包括面色淡白、爪甲色淡、肢體麻木、潮熱盜汗、五心煩熱、頭暈、耳鳴;③肝火熾盛證,其癥狀包括口苦、目赤、口干咽燥、便秘、煩躁易怒、頭痛;④脾腎陽(yáng)虛兼痰濕證,其癥狀包括脘痞、惡心、胸悶、驚恐易醒、畏寒肢冷、腰膝酸軟、浮腫、小便清長(zhǎng)或（和）夜尿增多;⑤心脾兩虛兼血瘀證,其癥狀包括心悸、神疲乏力、氣短懶言、精神萎靡、面色萎黃、健忘、失眠多夢(mèng)、悲傷欲哭、面色晦暗、自汗、下腹刺痛、惡露色紫暗有塊。2.中醫(yī)文獻(xiàn)方藥研究（1）本研究共篩選處方112例,涉及中藥116味,使用頻次為1216次。治療PPD的高頻藥物有柴胡、甘草、當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)等17味。所有藥物中,歸經(jīng)以脾經(jīng)、肝經(jīng)為主,溫性和甘味藥出現(xiàn)頻率最高,藥物功效以補(bǔ)益、理氣、安神、活血化瘀等為主。（2）17味高頻藥物共聚為4類(lèi):①聚類(lèi)1包括柴胡、白芍、當(dāng)歸、甘草;②聚類(lèi)2包括白術(shù)、茯苓;③聚類(lèi)3包括香附、陳皮、川芎、郁金;④聚類(lèi)4包括茯神、黃芪、大棗、地黃、合歡皮、酸棗仁、遠(yuǎn)志。（3）17味高頻藥物關(guān)聯(lián)分析共得出50條關(guān)聯(lián)藥物組合,符合二階關(guān)聯(lián)規(guī)則的有6組,符合三階關(guān)聯(lián)規(guī)則的有18組,符合四階關(guān)聯(lián)規(guī)則的有17組。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)機(jī)制研究（1）實(shí)驗(yàn)一:4組大鼠產(chǎn)仔及活仔量無(wú)明顯差異,大鼠造模后出現(xiàn)倦怠嗜臥、活動(dòng)量減少、糞便質(zhì)軟、體重降低等宏觀(guān)表現(xiàn),行為學(xué)結(jié)果中糖水消耗率及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯減少,曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中穿格、站立及修飾次數(shù)出現(xiàn)降低趨勢(shì)性變化;氟西汀組及逍遙散組大鼠宏觀(guān)表現(xiàn)及行為學(xué)結(jié)果均有明顯改善,表明模型組大鼠產(chǎn)后出現(xiàn)抑郁樣改變,PPD大鼠模型成功建立,“以方測(cè)證”,以逍遙散反證本研究建立的PPD大鼠模型是PPD肝郁脾虛證的病證結(jié)合模型。（2）實(shí)驗(yàn)二:在HPG軸中,HE染色發(fā)現(xiàn)模型組大鼠下丘腦神經(jīng)元數(shù)目減少、排列疏松紊亂,大量神經(jīng)元出現(xiàn)核固縮、深染及胞體萎縮、空泡樣變性、周?chē)撍枨矢淖兊葒?yán)重病理學(xué)變化,而逍遙散組大鼠下丘腦組織病理學(xué)變化出現(xiàn)不同程度改善;ELISA檢測(cè)顯示模型組大鼠血清E2、P、PRL水平均明顯降低;逍遙散組大鼠血清E2、P、PRL水平與模型組比較均明顯升高。（3）實(shí)驗(yàn)三:RT-qPCR結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組大鼠下丘腦ERα、GPER、PKA基因表達(dá)水平明顯降低,ERβ、CREB、BDNF基因表達(dá)水平有降低趨勢(shì);與模型組比較,逍遙散組大鼠下丘腦中ERα、CREB、BDNF基因表達(dá)水平明顯升高,ERβ、GPER、PKA基因表達(dá)水平有升高趨勢(shì)。Western blot結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組大鼠下丘腦中ERα、CREB、BDNF蛋白表達(dá)水平明顯降低,ERβ、GPER、PKA蛋白表達(dá)水平有降低趨勢(shì);與模型組比較,逍遙散組大鼠下丘腦中PKA、BDNF蛋白表達(dá)水平明顯升高,ERα、ERβ、GPER、CREB蛋白表達(dá)水平有升高趨勢(shì)。免疫組化對(duì)上述指標(biāo)進(jìn)行定位分析,結(jié)果顯示其免疫陽(yáng)性神經(jīng)元在下丘腦ARC及VMH中廣泛分布,其中,模型組大鼠下丘腦ARC中ERα、PKA、CREB、BDNF的MOD值明顯降低,VMH中的ERα、ERβ、GPER、CREB、BDNF的MOD值明顯降低,逍遙散則可逆轉(zhuǎn)這一改變,明顯升高PPD模型大鼠下丘腦ARC及VMH中已降低的相關(guān)指標(biāo)。結(jié)論:1.心理社會(huì)等多種因素相互影響,可作為應(yīng)激源導(dǎo)致PPD的發(fā)生、發(fā)展。肝郁脾虛證、陰血虧虛證、肝火熾盛證、脾腎陽(yáng)虛兼痰濕證、心脾兩虛兼血瘀證及其癥狀表現(xiàn)是PPD患者具有臨床意義的中醫(yī)證候特點(diǎn)。2.女子產(chǎn)后多虛多瘀,氣血失調(diào),神魂失養(yǎng),存在于PPD發(fā)病的始終?；诟纹⑴c情志、氣血的密切相關(guān)性,臨床治療PPD患者可從肝脾論治,調(diào)理氣血,臨床可靈活運(yùn)用疏肝解郁、理氣健脾、益氣養(yǎng)血、養(yǎng)心安神等治法。逍遙散用藥組合氣血兼顧,肝脾同調(diào),是治療PPD的常用方劑。3.以妊娠后期CUMS方法可建立病證結(jié)合的PPD肝郁脾虛證大鼠模型。采用逍遙散對(duì)PPD模型大鼠進(jìn)行干預(yù),可通過(guò)HPG軸上調(diào)性改變下丘腦內(nèi)雌激素受體ERα、ERβ、GPER介導(dǎo)的PKA/CREB/BDNF信號(hào)通路,調(diào)節(jié)抑郁樣行為。4.基于“以方測(cè)證”及“微觀(guān)辨證”等中醫(yī)理論基礎(chǔ),肝郁脾虛證是PPD的重要證候特點(diǎn),以逍遙散為反證的PPD肝郁脾虛證的證候生物學(xué)基礎(chǔ)涉及到神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng),可能與下丘腦組織病理學(xué)改變、HPG軸功能異常、性激素分泌減少、下丘腦雌激素受體介導(dǎo)的PKA/CREB/BDNF信號(hào)通路的下調(diào)性改變抑制神經(jīng)發(fā)生有關(guān)。
高強(qiáng)[9]（2021）在《星蔞承氣湯治療急性缺血性卒中痰熱腑實(shí)證機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明急性缺血性腦卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性腦梗死,中醫(yī)稱(chēng)缺血性中風(fēng),是腦組織因局部的血流循環(huán)障礙缺血、缺氧而發(fā)生的軟化、壞死。目前溶栓是治療缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于適應(yīng)證嚴(yán)格、時(shí)間窗短、出血和再灌注損傷風(fēng)險(xiǎn)高,其臨床效果受到限制?；A(chǔ)與臨床研究證實(shí),中醫(yī)藥治療中風(fēng)獨(dú)具優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為痰熱腑實(shí)證是缺血性中風(fēng)急性期最為常見(jiàn)的證型,而化痰通腑法代表方星蔞承氣湯是治療中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證的代表性方劑。星蔞承氣湯“腦病治腸”、“上病治下”的中醫(yī)理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提出的“菌-腸-腦軸”具有異曲同工之妙。諸多臨床試驗(yàn)及系統(tǒng)性綜述已證實(shí)星蔞承氣湯治療缺血性卒中的確切臨床療效與神經(jīng)保護(hù)作用,但是其效應(yīng)機(jī)制研究尚且不足。因此本文基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及腸道微生態(tài)理論,深入探討缺血性中風(fēng)的腸道微生態(tài)機(jī)制及化痰通腑法代表方星蔞承氣湯治療中風(fēng)痰熱腑實(shí)證的效應(yīng)機(jī)理。目的:基于中醫(yī)“上病治下”理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“菌-腸-腦軸”理論,（1）通過(guò)中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)全面探討星蔞承氣湯治療缺血性卒中的多組分、多靶點(diǎn)、多通路機(jī)制;（2）明確具有“化痰通腑”作用的星蔞承氣湯對(duì)急性缺血性中風(fēng)痰熱腑實(shí)證小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用,并驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究的關(guān)鍵靶點(diǎn)與通路;（3）探討星蔞承氣湯對(duì)急性缺血性中風(fēng)痰熱腑實(shí)證小鼠模型腸道菌群的影響,探討其治療中風(fēng)痰熱腑實(shí)證“通腑”與“通便”差異的腸道微生態(tài)機(jī)制;（4）觀(guān)察星蔞承氣湯對(duì)偽無(wú)菌小鼠急性缺血性中風(fēng)模型菌-腸-腦軸的影響,驗(yàn)證星蔞承氣湯通過(guò)直接影響腸道菌群而改善腦卒中預(yù)后的假說(shuō)。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等數(shù)據(jù)庫(kù)收集星蔞承氣湯活性成分及作用靶點(diǎn),并應(yīng)用STITCH等對(duì)未找到靶點(diǎn)的化合物進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。通過(guò)6個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)挖掘缺血性卒中的靶點(diǎn)。通過(guò)GO和KEGG富集對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行高級(jí)功能分析,并用cytoscape3.6.0構(gòu)建PPI、化合物-靶點(diǎn)及藥物-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。最后進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。（2）雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為:假手術(shù)（Sham）組、模型（MCAO）組、星蔞承氣湯（XCD）組、尼莫地平（Nim）組及舒泰清（PGE）組,通過(guò)制備高脂低纖維飲食復(fù)合線(xiàn)栓法的小鼠急性缺血性中風(fēng)痰熱腑實(shí)證模型,采用神經(jīng)功能評(píng)分、除膠實(shí)驗(yàn)、TTC和TUNNEL染色,綜合評(píng)價(jià)星蔞承氣湯的神經(jīng)保護(hù)作用,并運(yùn)用ELISA、W estern blot等技術(shù)驗(yàn)證網(wǎng)藥關(guān)鍵靶點(diǎn)與通路;（3）雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為:Sham組、MCAO組、XCD組、Nim組與PG E組,通過(guò)制備高脂低纖維飲食復(fù)合線(xiàn)栓法的小鼠急性缺血性中風(fēng)痰熱腑實(shí)證模型,采用高通量16srDNA基因測(cè)序、代謝組學(xué)技術(shù)、免疫組化、免疫熒光、ELISA及流式多因子技術(shù)分別對(duì)腸道菌群、短鏈脂肪酸（SCFAs）及其受體GPR43、神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫途徑相關(guān)指標(biāo)（NE及TH、血清MTL、腦IBA-1及GFAP、血清炎癥因子）進(jìn)行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在術(shù)前14天服用多種抗生素剔除腸道菌群后,隨機(jī)分為:偽無(wú)菌假手術(shù)（ABX-Sham）組、偽無(wú)菌模型（ABX-MCAO）組以及偽無(wú)菌中藥（ABX-XCD）組,通過(guò)神經(jīng)功能評(píng)分、除膠實(shí)驗(yàn)、TTC染色以及高通量16srDNA基因測(cè)序、代謝組學(xué)技術(shù)、免疫組化、免疫熒光、ELISA及流式多因子技術(shù),觀(guān)察中藥對(duì)偽無(wú)菌小鼠菌-腸-腦軸相關(guān)指標(biāo)的影響。結(jié)果:（1）網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接結(jié)果表明,星蔞承氣湯包含51個(gè)活性成分及44個(gè)治療缺血性卒中的交集靶點(diǎn)。高級(jí)功能分析顯示星蔞承氣湯抗缺血性卒中的機(jī)制與脂多糖介導(dǎo)的信號(hào)通路、凋亡過(guò)程的調(diào)控、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮屏障的建立以及對(duì)脂肪酸的反應(yīng)有關(guān)。星蔞承氣湯發(fā)揮作用的有10條關(guān)鍵KEGG信號(hào)通路。PPI網(wǎng)絡(luò)分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等關(guān)鍵靶點(diǎn)。分子對(duì)接驗(yàn)證了星蔞承氣湯活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)具有良好的對(duì)接能力。（2）星蔞承氣湯神經(jīng)保護(hù)作用及對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)關(guān)鍵靶點(diǎn)及通路的影響:①神經(jīng)功能評(píng)分:與MCAO組相比,XCD組及Nim組術(shù)后48h及72h Longa評(píng)分降低（P<0.05）,PGE組未見(jiàn)變化（P>0.05）。②除膠實(shí)驗(yàn):XCD組和Nim組術(shù)后48和72h的接觸和去除膠帶時(shí)間縮短（P<0.05）,PGE組未見(jiàn)變化（P>0.05）。③TTC染色:XCD組梗死面積下降（P<0.05）,Nim組及PGE組未見(jiàn)變化。④TUNNEL:MCAO組梗死區(qū)細(xì)胞凋亡明顯增加,XCD組和Nim組TUNEL陽(yáng)性染色減少（P<0.05）。⑤網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)驗(yàn)證:XCD組及Nim組TNF-α含量具有下降趨勢(shì)（P>0.05）;XCD組p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表達(dá)具有升高趨勢(shì)。AKT蛋白表達(dá)組間未見(jiàn)明顯變化（P>0.05）。（3）星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證小鼠菌-腸-腦軸影響:①腸道菌群:與MCAO組相比,XCD組α多樣性有升高趨勢(shì),Nim組及PGE組無(wú)顯著變化。β多樣性顯示MCAO組與Sham組PCoA曲線(xiàn)有顯著差異（P<0.05）。MCAO組擬桿與變形桿菌門(mén)顯著增加,厚壁菌門(mén)顯著減少;XCD組擬桿菌比例顯著降低,疣微菌門(mén)顯著增加,Nim組變形菌門(mén)顯著增加,厚壁菌門(mén)進(jìn)一步降低,PGE組菌群組成與MCAO相似,變形桿菌略降低。此外,XCD組Akkermansia比率增加,Nim組Klebsiella增加最為顯著,而 PGE 組 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加較為顯著。②SCFAs 及GPR43:MCAO組的SCFAs含量顯著降低（P<0.05）,XCD組丁酸含量增加（P<0.05）。XCD組及Nim組GPR43表達(dá)顯著降低（P<0.05）。③自主神經(jīng)途徑:XCD組NE有下降趨勢(shì),PGE組NE有上升趨勢(shì)（P>0.05）。MCAO組及PGE組TH蛋白表達(dá)上升（P<0.05）,XCD組及Nim組TH表達(dá)未見(jiàn)顯著變化趨勢(shì)（P>0.05）。④神經(jīng)內(nèi)分泌途徑:MCAO組MTL顯著升高（P<0.05）,PGE組有升高趨勢(shì)（P>0.05）,XCD組及Nim組MTL顯著下降（P<0.05）。⑤免疫途徑:MCAO組星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、肥大,顯著活化,小膠質(zhì)細(xì)胞迅速?gòu)摹办o息態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)椤凹せ顟B(tài)”,從梗死周邊區(qū)域向病變部位募集,而XCD組星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞活化較MCAO組降低。MCAO 組 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 組的 IL-10顯著升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證偽無(wú)菌小鼠菌-腸-腦軸影響:①神經(jīng)保護(hù)作用:與ABX-MCAO組相比,ABX-XCD組在Longa評(píng)分、除膠實(shí)驗(yàn)及TTC染色等方面未見(jiàn)顯著變化（P>0.05）。②腸道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD組的α多樣性低于ABX-Sham,PCoA分析顯示ABX-XCD組腸道菌群的β多樣性和組成與AB X-MCAO組相似。相對(duì)豐度結(jié)果顯示,在ABX組中,小鼠的微生物區(qū)系均以變形桿菌為特征,這與正常小鼠有顯著差異。LEfSe分析顯示MCAO組富集了更多的病原體或機(jī)會(huì)性病原體,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella與Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。條件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD組富集顯著增多。PGE組富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸顯著下降（P<0.05）。ABX-MCAO 組 GPR43 表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.05）,ABX-XCD 組 G PR43表達(dá)顯著降低（P<0.05）。④自主神經(jīng)途徑:ABX-XCD組NE含量未見(jiàn)顯著變化（P>0.05）,TH蛋白表達(dá)未見(jiàn)顯著變化（P>0.05）。⑤神經(jīng)內(nèi)分泌途徑:ABX-MCAO組MTL升高趨勢(shì)（P>0.05）,ABX-XCD組MTL未見(jiàn)顯著變化（P>0.05）。⑥免疫途徑:ABX-XCD組IL-22顯著升高（P<0.05）,IL-17A有降低趨勢(shì)（P>0.05）,余未見(jiàn)顯著變化趨勢(shì)（P>0.05）。ABX-MCAO組星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)顯著升高,小膠質(zhì)細(xì)胞顯著活化,ABX-XCD組星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞活化較ABX-MCAO組有降低趨勢(shì)。結(jié)論:星蔞承氣湯對(duì)急性缺血性中風(fēng)痰熱腑實(shí)證小鼠具有一定神經(jīng)保護(hù)作用,其效應(yīng)機(jī)制具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路特點(diǎn)。其對(duì)偽無(wú)菌小鼠中風(fēng)模型則未發(fā)現(xiàn)確切的腦保護(hù)效應(yīng),說(shuō)明其腦保護(hù)的部分機(jī)制是通過(guò)改善腸道微生態(tài)實(shí)現(xiàn)的。其具體機(jī)制包括提高腸道短鏈脂肪酸,尤其是丁酸含量,增強(qiáng)腸道短鏈脂肪酸受體GPR43表達(dá),增加血液IL10、減少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最終減少梗死區(qū)域膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而達(dá)到中風(fēng)腦保護(hù)的作用。本研究成果對(duì)中風(fēng)病的臨床治療具有重要的指導(dǎo)意義——對(duì)于中風(fēng)后便秘患者,僅僅“通便”治療是不夠的,需要結(jié)合患者的證候特點(diǎn)進(jìn)行中醫(yī)藥“化痰通腑”治療,才能取得好的臨床效果。
沈海亮[10]（2021）在《多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)理研究》文中認(rèn)為多穗柯以甜味著稱(chēng),是中國(guó)長(zhǎng)江以南地區(qū)特別是江西、廣西、湖南、四川、云南等省以及東南亞的印度、泰國(guó)、老撾等地的一種甜茶。自2017年起,多穗柯因其食用和藥用功能,被批準(zhǔn)為新型食品原料。同時(shí),多穗柯提取物的具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗癌、保護(hù)肝臟和心臟、抗肥胖、保護(hù)神經(jīng)和抗過(guò)敏等生理功能。根皮苷和三葉苷是多穗柯主要的生物活性成分,且三葉苷含量大于根皮苷。研究表明,多穗柯提取物和根皮苷都能顯著降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠體重、空腹血糖和胰島素抵抗。但在動(dòng)物模型中,關(guān)于多穗柯中主要黃酮類(lèi)化合物—三葉苷,目前尚沒(méi)有發(fā)現(xiàn)其減肥作用的研究。多穗柯甜茶作為一種飲用歷史悠久,不僅具有高甜度、低熱量、安全無(wú)毒,而且兼具藥、糖、茶等綜合作用的藥食同源且資源豐富的常用飲品,加大其營(yíng)養(yǎng)健康價(jià)值的基礎(chǔ)理論研究,對(duì)其產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的多元化及產(chǎn)業(yè)價(jià)值的提升具有重大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義?；诖?本研究中以多穗柯三葉苷為研究對(duì)象,以SD肥胖大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,通過(guò)設(shè)置高、中、低劑量的三葉苷灌胃干預(yù),探討三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠的減肥作用,并從脂肪代謝基因、激活棕色脂肪組織活性及腸道微生物等3個(gè)方面探討三葉苷可能的減肥機(jī)理機(jī)制,最后研究了三葉苷減肥過(guò)程中對(duì)機(jī)體氧化應(yīng)激的影響探討三葉苷對(duì)預(yù)防和治療肥胖積極作用,以期為多穗柯及三葉苷保健產(chǎn)品和臨床藥物的開(kāi)發(fā)提供其營(yíng)養(yǎng)健康價(jià)值的理論依據(jù)。主要研究結(jié)論如下:（1）多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)理研究。以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,通過(guò)高脂飼料誘導(dǎo)建立肥胖大鼠模型,再通過(guò)陽(yáng)性藥物和三葉苷高、中、低劑量灌胃干預(yù),考察三葉苷的減肥作用。同時(shí)檢測(cè)血脂水平（TG、TC、HDL-C、LDL-C）、肝臟功能（AST和ALT）、肝臟和白色脂肪組織形態(tài)的變化。在激素和基因水平探討了三葉苷減肥作用的機(jī)理。結(jié)果表明,在不影響攝食量的前提下,三葉苷顯著降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖SD大鼠體重增加（p<0.05）,具有明顯的減肥作用。其中,中、高劑量三葉苷明顯降低肥胖大鼠的脂肪率（p<0.05）。血脂指標(biāo)和肝功指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明,三葉苷顯著降低血清TG、TC、LDL-C含量（p<0.05）和且效果好于陽(yáng)性對(duì)照藥;同時(shí),ALT和AST的活性也顯著降低（p<0.05）,而且高劑量三葉苷效果好于奧利司他。組織形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果表明,三葉苷能明顯減少肝臟組織中空泡面積和炎癥細(xì)胞數(shù)量,減少脂質(zhì)沉積,逆轉(zhuǎn)脂肪沉積導(dǎo)致的肝臟組織病變;同時(shí),白色脂肪組織中肥大細(xì)胞明顯恢復(fù)正常。機(jī)理研究結(jié)果表明,（a）中、高劑量三葉苷和奧利司他均能顯著降低血清胰島素、廋素和神經(jīng)肽Y的含量（p<0.05）,明顯改善廋素抵抗和胰島素抵抗,減少NPY的分泌,抑制食欲減少食物攝入,有助于控制肥胖的發(fā)展。（b）三葉苷顯著下調(diào)PPARγ、ACC、FAS基因的表達(dá),從而抑制前脂肪細(xì)胞的分化和增殖和脂肪酸的生成,減少體質(zhì)脂質(zhì)的沉積。而高劑量三葉苷和奧利司他顯著上調(diào)了肝臟和白色脂肪中PPARα基因的表達(dá)（p<0.05）,從而加速脂肪氧化,增加肝臟和白色脂肪組織中脂肪分解,減少脂肪細(xì)胞脂滴的積累,進(jìn)而改善肝臟細(xì)胞脂肪變性。此外,三葉苷顯著上調(diào)HSL和CPT1基因的表達(dá)（p<0.05）,促進(jìn)脂肪分解和脂肪酸β-氧化,減少機(jī)體脂肪含量。因此,三葉苷可能具有PPARα、HSL和CPT1激動(dòng)劑的作用,刺激了三種基因的表達(dá),從而加快機(jī)體脂肪分解,減少脂肪含量和脂肪在內(nèi)臟組織中的積累。另外,高劑量三葉苷顯著上調(diào)了白色脂肪組織中UCP1基因的表達(dá)（p<0.05）,表明三葉苷誘導(dǎo)了白色脂肪組織褐色化,這預(yù)示著更多的能量將以熱能釋放而不是用于脂肪的合成。以上結(jié)果說(shuō)明,三葉苷能明顯降低高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠體重增加、改善血脂異常、修復(fù)肝臟組織病變,而這些可能是通過(guò)改善廋素、胰島素敏感性和控制飲食以及上調(diào)脂肪分解基因的表達(dá)和下調(diào)脂肪合成基因的表達(dá)作用的結(jié)果。（2）多穗柯三葉苷對(duì)Tyk2/STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)的棕色脂肪組織功能活性的影響。采用蛋白免疫印跡法考察了棕色脂肪組織中Tyk2/STAT3信號(hào)通路中Tyk2和STAT3蛋白表達(dá)量,以及下游脂代謝相關(guān)的PPARγ、PRDM16、C/EBPβ、PPARα和UCP1蛋白的表達(dá)變化,從激活棕色脂肪功能活性的角度探討了三葉苷對(duì)肥胖大鼠減肥的機(jī)制。結(jié)果表明,三葉苷顯著增加肥胖大鼠棕色脂肪組織中Tyk2蛋白和STAT3蛋白表達(dá),抵消高脂飲食對(duì)Tyk2/STAT3信號(hào)通路活性造成的抑制,恢復(fù)棕色脂肪組織的正常發(fā)育和下游蛋白的正常表達(dá)。三葉苷還顯著上調(diào)PPARγ,PRDM16和C/EBPβ蛋白的表達(dá),使棕色脂肪細(xì)胞正常分化,改善了棕色脂肪組織形態(tài)。三葉苷還顯著增加PPARα和UCP1蛋白表達(dá),提高棕色脂肪組織代謝活性的增加和產(chǎn)熱能力。以上結(jié)果表明,三葉苷可以通過(guò)激活Tyk2/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)途徑活性,維持棕色脂肪細(xì)胞的增殖和分化,增加棕色脂肪質(zhì)量,最終上調(diào)產(chǎn)熱因子UCP1蛋白的表達(dá)消耗更多的能量轉(zhuǎn)換為熱量釋放,這可能是三葉苷減肥的另一個(gè)實(shí)現(xiàn)途徑。（3）多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠腸道菌群的影響。采用氣相色譜法對(duì)盲腸中6種短鏈脂肪酸（SCFAs）含量進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)采用Mi Seq高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)大鼠腸道菌群16Sr DNA的V3區(qū)域進(jìn)行測(cè)序,基于Illumina平臺(tái)測(cè)定腸道菌群組成及豐度。采用Chao指數(shù)、Simpson指數(shù)、Shannon指數(shù)和Goods coverage對(duì)腸道微生物菌群的alpha多樣性進(jìn)行分析,Beta多樣性采用主坐標(biāo)分析（PCo A）在進(jìn)行分析。SCFAs檢測(cè)結(jié)果表明,三葉苷可以顯著增加腸道中短鏈脂肪酸的含量,尤其丁酸的含量。高通量測(cè)序結(jié)果表明,相比高脂對(duì)照組,三葉苷的干預(yù)顯著增加了乳酸桿菌（Lactobacillus）和顫螺旋菌屬（Oscillospira）的相對(duì)豐度（p<0.05）,降低了Blautia,Allobaculum,考拉桿菌屬（Phascolarctobacterium）和糞球菌屬（Coprococcus）的相對(duì)豐度（p<0.05）,從而引起厚壁菌門(mén)（Firmicutes）和擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）的比值增加。這說(shuō)明在門(mén)和屬的水平上,三葉苷調(diào)節(jié)了肥胖大鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)和多樣性,而腸道菌群的這種改變能促進(jìn)肥胖大鼠的血脂代謝。PICRUSt分析預(yù)測(cè)KEGG代謝途徑的結(jié)果表明,三葉苷處理組肥胖大鼠和高脂模型對(duì)照組大鼠之間,PICRUSt預(yù)測(cè)的KEGG通路存在顯著不同,主要參與脂質(zhì)代謝（類(lèi)固醇生物合成,類(lèi)固醇激素生物合成）,氨基酸代謝（D-精氨酸和D-鳥(niǎo)氨酸代謝）,其他次生代謝產(chǎn)物（類(lèi)黃酮生物合成）,萜類(lèi)和聚酮化合物（類(lèi)胡蘿卜素生物合成）以及輔因子和維生素（視黃醇代謝）,說(shuō)明三葉苷可能通過(guò)腸道菌群的影響參與機(jī)體脂質(zhì)合成和能量代謝,進(jìn)而對(duì)機(jī)體肥胖發(fā)揮積極作用。以上結(jié)果,揭示了腸道菌群對(duì)LPR中三葉苷減肥作用的貢獻(xiàn),并預(yù)測(cè)高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖的潛在調(diào)控機(jī)制。（4）多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激的影響。實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)肥胖大鼠血清和組織（肝臟、白色脂肪組織和棕色脂肪組織）中丙二醛（PC）、羰基化蛋白（PC）、超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）的變化,考察了三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響,并在基因水平上對(duì)三葉苷抗氧化的機(jī)制進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明,肥胖大鼠血清和組織中,MDA和PC含量均有顯著增加（p<0.05）,其體內(nèi)發(fā)生了嚴(yán)重的氧化應(yīng)激。三葉苷和陽(yáng)性藥物奧利司他明顯降低血清和組織中MDA和PC的含量,其中TR-H組中MDA和PC含量下降顯著（p<0.05）;同時(shí),三葉苷組SOD活性、CAT活性和GSH含量均有所增加,其中高劑量三葉苷的作用效果最為顯著（p<0.05）。核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）被認(rèn)為是機(jī)體抵抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵調(diào)控因子。三葉苷明顯上調(diào)肥胖大鼠肝臟、白色脂肪和棕色脂肪中Nrf2的表達(dá),并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性,特別是三葉苷高劑量組分別上調(diào)2.48倍、1.20倍和1.23倍。結(jié)合前文中SOD、CAT和GSH在大鼠中組織和血清中的各組的變化,我們推測(cè),三葉苷可能是通過(guò)增加Nrf2的表達(dá),促進(jìn)SOD、CAT和GSH等抗氧化酶的表達(dá),進(jìn)而減輕機(jī)體氧化應(yīng)激。以上結(jié)果表明,三葉苷明顯降低肥胖大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平,其作用機(jī)理可能是通過(guò)上調(diào)Nrf2基因的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。肥胖大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的降低,對(duì)肥胖的控制和治療有積極作用。結(jié)論:本研究系統(tǒng)研究了多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠的減肥作用,證實(shí)了多穗柯三葉苷具有較強(qiáng)的減肥作用,同時(shí)還有降血糖、降血脂及保肝護(hù)肝作用。揭示了三葉苷通過(guò)上調(diào)肥胖大鼠肝臟和白色脂肪組織中脂肪分解基因的表達(dá)和下調(diào)脂肪合成基因的表達(dá),加速脂肪分解和脂肪酸氧化,同時(shí)減少機(jī)體脂肪合成和沉積發(fā)揮減肥作用;證實(shí)了三葉苷通過(guò)促進(jìn)白色脂肪組織褐色化,增加非戰(zhàn)栗產(chǎn)熱的機(jī)體能量消耗;進(jìn)一步研究證實(shí)了,三葉苷激活并增強(qiáng)了Tyk2/STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)的棕色脂肪功能活性,使機(jī)體更多的能量通過(guò)非戰(zhàn)栗產(chǎn)熱以熱能釋放,增加脂肪分解和脂肪酸氧化速率而發(fā)揮減肥作用;揭示了腸道菌群對(duì)LPR中三葉苷減肥作用的貢獻(xiàn),并預(yù)測(cè)高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖的潛在調(diào)控機(jī)制;證實(shí)了三葉苷通過(guò)上調(diào)Nrf2基因的表達(dá),增加機(jī)體抗氧化酶的活性或含量,緩解機(jī)體氧化應(yīng)激水平,減少肥胖大鼠炎癥反應(yīng),有助于肥胖的治療。
二、常用的中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物體內(nèi)分析方法（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀(guān)點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀(guān)察法：用自己的感官和輔助工具直接觀(guān)察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、常用的中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物體內(nèi)分析方法（論文提綱范文）
（1）色氨酸及代謝物抑制β-淀粉樣蛋白聚集的分子動(dòng)力學(xué)研究 ——對(duì)運(yùn)動(dòng)延緩阿爾茨海默病的機(jī)理初探（論文提綱范文）
| 主要英文縮略詞表 (Abbreviations) |
| 摘要 |
| abstract |
| 1 緒論 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 研究意義 |
| 2 文獻(xiàn)綜述 |
| 2.1 阿爾茨海默病與β-淀粉樣蛋白聚集的相關(guān)研究 |
| 2.1.1 阿爾茨海默病概述 |
| 2.1.2 β-淀粉樣蛋白聚集概述 |
| 2.2 運(yùn)動(dòng)對(duì)阿爾茨海默病的延緩及其機(jī)制研究 |
| 2.2.1 運(yùn)動(dòng)延緩阿爾茨海默病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.2 運(yùn)動(dòng)延緩阿爾茨海默病的人體實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.3 運(yùn)動(dòng)影響β-淀粉樣蛋白致病的機(jī)制探討 |
| 2.3 運(yùn)動(dòng)影響色氨酸及代謝物的研究 |
| 2.3.1 運(yùn)動(dòng)影響色氨酸和血清素的人體實(shí)驗(yàn) |
| 2.3.2 運(yùn)動(dòng)影響色氨酸和血清素的動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 2.3.3 運(yùn)動(dòng)時(shí)段對(duì)褪黑素的影響 |
| 2.4 抑制劑與β-淀粉樣蛋白相互作用的相關(guān)研究 |
| 2.4.1 天然小分子抑制β-淀粉樣蛋白聚集的相關(guān)研究 |
| 2.4.2 內(nèi)源性小分子抑制β-淀粉樣蛋白聚集的相關(guān)研究 |
| 2.4.3 色氨酸及代謝物抑制β-淀粉樣蛋白聚集的相關(guān)研究 |
| 3 研究方案 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 文獻(xiàn)分析法 |
| 4.2 分子動(dòng)力學(xué)方法 |
| 4.2.1 常規(guī)分子動(dòng)力學(xué)模擬 |
| 4.2.2 副本交換分子動(dòng)力學(xué)模擬 |
| 4.2.3 常用軟件 |
| 4.2.4 分子力場(chǎng) |
| 4.2.5 分子力場(chǎng)的相互作用項(xiàng) |
| 4.2.6 小分子力場(chǎng)構(gòu)建與結(jié)構(gòu)處理 |
| 4.2.7 模擬細(xì)節(jié) |
| 4.2.8 分析方法 |
| 5 研究?jī)?nèi)容 |
| 5.1 色氨酸抑制阿爾茨海默病β-淀粉樣蛋白聚集、破壞β-淀粉樣蛋白原纖維的分子機(jī)理研究 |
| 5.1.1 前言 |
| 5.1.2 材料與方法 |
| 5.1.3 結(jié)果與討論 |
| 5.1.4 結(jié)論 |
| 5.2 血清素抑制阿爾茨海默病β-淀粉樣蛋白聚集、破壞β-淀粉樣蛋白原纖維的分子機(jī)理研究 |
| 5.2.1 前言 |
| 5.2.2 材料與方法 |
| 5.2.3 結(jié)果與討論 |
| 5.2.4 結(jié)論 |
| 5.3 血清素/質(zhì)子化血清素破壞β-淀粉樣蛋白原纖維的分子機(jī)理研究 |
| 5.3.1 前言 |
| 5.3.2 材料與方法 |
| 5.3.3 結(jié)果與討論 |
| 5.3.4 結(jié)論 |
| 5.4 褪黑素抑制阿爾茨海默病β-淀粉樣蛋白聚集、破壞β-淀粉樣蛋白原纖維的分子機(jī)理研究 |
| 5.4.1 前言 |
| 5.4.2 材料與方法 |
| 5.4.3 結(jié)果與討論 |
| 5.4.4 結(jié)論 |
| 5.5 色氨酸/色氨酸+血清素破壞β-淀粉樣蛋白原纖維的分子機(jī)理研究 |
| 5.5.1 前言 |
| 5.5.2 材料與方法 |
| 5.5.3 結(jié)果與討論 |
| 5.5.4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 6 總結(jié)與展望 |
| 6.1 總結(jié) |
| 6.2 展望 |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)介 |
| 攻讀學(xué)位期間的科研工作 |
（2）基于代謝組學(xué)的刺五加葉治療缺血性腦卒中作用機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 缺血性腦卒中 |
| 1.1.1 缺血性腦卒中概述 |
| 1.1.2 缺血性腦卒中發(fā)病機(jī)制及主要病理環(huán)節(jié) |
| 1.1.3 缺血性腦卒中與腸道菌群的關(guān)系 |
| 1.1.4 缺血性腦卒中常用藥物 |
| 1.2 刺五加葉主要化學(xué)成分及藥理作用 |
| 1.2.1 刺五加葉概述 |
| 1.2.2 刺五加葉主要化學(xué)成分 |
| 1.2.3 刺五加葉主要藥理作用 |
| 1.3 代謝組學(xué) |
| 1.3.1 代謝組學(xué)概述 |
| 1.3.2 代謝組學(xué)研究方法 |
| 1.3.3 脂質(zhì)組學(xué)研究方法 |
| 1.3.4 代謝組學(xué)在缺血性腦卒中研究中的應(yīng)用 |
| 1.3.5 基于高效同位素標(biāo)記衍生化的代謝組學(xué)研究 |
| 1.4 本論文的研究思路、研究目的及意義 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 研究目的及意義 |
| 第2章 刺五加葉治療缺血性腦卒中的血清脂質(zhì)組學(xué)及其神經(jīng)保護(hù)作用研究 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 2.1.1 藥品、試劑及儀器 |
| 2.1.2 刺五加葉主要活性組分的制備及成分分析 |
| 2.1.3 缺血性腦卒中大鼠模型建立 |
| 2.1.4 樣品采集及處理 |
| 2.1.5 組織病理學(xué)檢查 |
| 2.1.6 血清脂質(zhì)代謝輪廓采集 |
| 2.1.7 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.1.8 基于UPLC-TQ/MS的神經(jīng)遞質(zhì)定量分析 |
| 2.1.9 基于UPLC-TQ/MS的神經(jīng)遞質(zhì)定量分析方法學(xué)考察 |
| 2.2 結(jié)果與討論 |
| 2.2.1 刺五加葉主要活性組分成分分析 |
| 2.2.2 組織病理學(xué)檢查 |
| 2.2.3 血清脂質(zhì)組學(xué)代謝輪廓分析 |
| 2.2.4 血清脂質(zhì)組學(xué)潛在的生物標(biāo)記物鑒定 |
| 2.2.5 血清脂質(zhì)組學(xué)通路分析 |
| 2.2.6 神經(jīng)遞質(zhì)定量研究 |
| 2.2.7 炎癥因子和氧化應(yīng)激水平研究 |
| 2.3 小結(jié) |
| 第3 章 刺五加葉治療缺血性腦卒中糞便代謝組學(xué)研究及其對(duì)微生物-腸-腦軸的影響 |
| 3.1 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 3.1.1 藥品、試劑及儀器 |
| 3.1.2 缺血性腦卒中大鼠模型建立 |
| 3.1.3 樣品采集及處理 |
| 3.1.4 糞便代謝輪廓采集 |
| 3.1.5 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.1.6 基于UPLC-TQ/MS的大鼠糞便膽汁酸定量分析 |
| 3.1.7 糞便菌群的16S r RNA測(cè)序 |
| 3.2 結(jié)果與討論 |
| 3.2.1 糞便非靶向代謝組學(xué)代謝輪廓分析 |
| 3.2.2 糞便非靶向代謝組學(xué)潛在的生物標(biāo)記物鑒定 |
| 3.2.3 糞便非靶向代謝組學(xué)通路分析 |
| 3.2.4 基于靶向代謝組學(xué)的大鼠糞便膽汁酸的定量研究 |
| 3.2.5 刺五加葉對(duì)大鼠糞便菌群組成的影響 |
| 3.3 小結(jié) |
| 第4章 刺五加葉通過(guò)對(duì)益生菌的調(diào)節(jié)作用治療缺血性腦卒中的機(jī)制驗(yàn)證 |
| 4.1 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 4.1.1 藥品、試劑及儀器 |
| 4.1.2 菌群培養(yǎng)及菌液制備 |
| 4.1.3 缺血性腦卒中大鼠模型建立 |
| 4.1.4 樣品采集及處理 |
| 4.1.5 糞便菌群的16S r RNA測(cè)序 |
| 4.1.6 大鼠腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)的含量測(cè)定 |
| 4.1.7 炎癥因子及氧化應(yīng)激等生化指標(biāo)檢測(cè) |
| 4.2 結(jié)果與討論 |
| 4.2.1 益生菌對(duì)缺血性腦卒中大鼠糞便菌群組成的影響 |
| 4.2.2 益生菌對(duì)缺血性腦卒中大鼠腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響 |
| 4.2.3 益生菌對(duì)缺血性腦卒中大鼠腦組織及血清炎癥因子和氧化應(yīng)激水平的影響 |
| 4.3 小結(jié) |
| 第5章 刺五加葉治療缺血性腦卒中的尿液代謝組學(xué)研究 |
| 5.1 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 5.1.1 藥品、試劑及儀器 |
| 5.1.2 缺血性腦卒中大鼠模型建立 |
| 5.1.3 樣品采集及處理 |
| 5.1.4 尿液代謝輪廓采集 |
| 5.1.5 數(shù)據(jù)分析 |
| 5.1.6 ELISA法對(duì)通路分析進(jìn)行驗(yàn)證 |
| 5.2 結(jié)果與討論 |
| 5.2.1 尿液非靶向代謝組學(xué)代謝輪廓分析 |
| 5.2.2 尿液非靶向代謝組學(xué)潛在的生物標(biāo)記物鑒定 |
| 5.2.3 尿液非靶向代謝組學(xué)通路分析 |
| 5.2.4 刺五加葉治療缺血性腦卒中對(duì)體內(nèi)代謝通路的影響驗(yàn)證 |
| 5.3 小結(jié) |
| 第6章 基于高效同位素標(biāo)記衍生化的刺五加葉治療缺血性腦卒中尿液代謝組學(xué)研究 |
| 6.1 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 6.1.1 藥品、試劑及儀器 |
| 6.1.2 缺血性腦卒中大鼠模型建立 |
| 6.1.3 樣品采集及處理 |
| 6.1.4 尿液樣本同位素標(biāo)記衍生化 |
| 6.1.5 尿液代謝輪廓采集 |
| 6.1.6 數(shù)據(jù)分析 |
| 6.2 結(jié)果與討論 |
| 6.2.1 尿液高效同位素標(biāo)記衍生化代謝組學(xué)代謝輪廓分析 |
| 6.2.2 尿液高效同位素標(biāo)記衍生化代謝組學(xué)潛在的生物標(biāo)記物鑒定 |
| 6.2.3 尿液高效同位素標(biāo)記衍生化代謝組學(xué)結(jié)果的科學(xué)解釋 |
| 6.3 小結(jié) |
| 第7章 結(jié)論 |
| 本論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（3）電刺激聯(lián)合Cs-Au/GelMA水凝膠對(duì)臂叢神經(jīng)損傷后神經(jīng)病理性疼痛的療效及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞對(duì)照表 |
| 第1章 緒論 |
| 第2章 綜述 |
| 2.1 神經(jīng)病理性疼痛的概述 |
| 2.2 神經(jīng)病理性疼痛的調(diào)節(jié)機(jī)制 |
| 2.2.1 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)病理性疼痛中的調(diào)節(jié)機(jī)制 |
| 2.2.2 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在神經(jīng)病理性疼痛中的調(diào)節(jié)機(jī)制 |
| 2.2.3 促炎癥細(xì)胞因子在神經(jīng)病理性疼痛中的調(diào)節(jié)機(jī)制 |
| 2.2.4 趨化因子在神經(jīng)病理性疼痛中的調(diào)節(jié)機(jī)制 |
| 2.3 神經(jīng)病理性疼痛的治療 |
| 2.4 神經(jīng)病理性疼痛的動(dòng)物模型 |
| 2.4.1 脊神經(jīng)選擇性結(jié)扎模型 |
| 2.4.2 脊神經(jīng)根切斷模型 |
| 2.4.3 坐骨神經(jīng)軸索切斷模型 |
| 2.4.4 坐骨神經(jīng)慢性壓縮性損傷 |
| 2.4.5 坐骨神經(jīng)半結(jié)扎模型 |
| 2.4.6 坐骨神經(jīng)分支損傷模型 |
| 2.4.7 臂叢神經(jīng)損傷模型 |
| 2.5 總結(jié) |
| 第3章 臂叢神經(jīng)損傷后病理性神經(jīng)痛產(chǎn)生的病理生理基礎(chǔ) |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.1 儀器耗材 |
| 3.2.2 藥品試劑 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 3.3.2 手術(shù)造模 |
| 3.3.3 機(jī)械性刺激縮足閾值(MWT)檢測(cè) |
| 3.3.4 熱縮足反射潛伏期(TWL)檢測(cè) |
| 3.3.5 免疫印跡實(shí)驗(yàn) |
| 3.3.6 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.4 研究結(jié)果 |
| 3.4.1 機(jī)械性刺激縮足閾值(MWT)行為學(xué)改變 |
| 3.4.2 熱縮足反射潛伏期(TWL)行為學(xué)改變 |
| 3.4.3 PCRA術(shù)后大鼠脊髓組織中小膠質(zhì)細(xì)胞的變化 |
| 3.4.4 PCRA術(shù)后大鼠脊髓組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化 |
| 3.4.5 PCRA術(shù)后大鼠小脊髓組織中促炎癥細(xì)胞因子的變化 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 小結(jié) |
| 第4章 CS-Au/GelMA水凝膠的制備與表征 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 4.2.2 儀器耗材 |
| 4.2.3 藥品試劑 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 神經(jīng)干細(xì)胞的提取和培養(yǎng) |
| 4.3.2 神經(jīng)干細(xì)胞滴片培養(yǎng) |
| 4.3.3 免疫熒光染色法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞 |
| 4.3.4 Gel MA水凝膠的合成 |
| 4.3.5 Cs-Au納米粒子的制備 |
| 4.3.6 Cs-Au納米粒子的表征 |
| 4.3.7 Cs-Au納米粒子生物安全性的檢測(cè) |
| 4.3.8 Cs-Au/Gel MA水凝膠的制備與表征 |
| 4.3.9 Cs-Au/Gel MA水凝膠的體內(nèi)降解 |
| 4.4 研究結(jié)果 |
| 4.4.1 神經(jīng)干細(xì)胞的提取與鑒定 |
| 4.4.2 Gel MA水凝膠的制備 |
| 4.4.3 Cs-Au納米粒子的表征 |
| 4.4.4 Cs-Au納米粒子生物安全性的檢測(cè) |
| 4.4.5 Cs-Au/Gel MA水凝膠的親水性和機(jī)械性能 |
| 4.4.6 Cs-Au/Gel MA水凝膠的體內(nèi)降解 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 小結(jié) |
| 第5章 CS-Au/GelMA水凝膠聯(lián)合電刺激治療在PCRA后神經(jīng)病理性疼痛中的作用及機(jī)制 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 5.2.2 儀器耗材 |
| 5.2.3 藥品試劑 |
| 5.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.3.1 神經(jīng)干細(xì)胞的提取和培養(yǎng) |
| 5.3.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)篩選電刺激頻率 |
| 5.3.3 手術(shù)造模及分組治療 |
| 5.3.4 免疫印跡實(shí)驗(yàn) |
| 5.3.5 免疫熒光實(shí)驗(yàn) |
| 5.3.6 機(jī)械性刺激縮足閾值(MWT)檢測(cè) |
| 5.3.7 熱縮足反射潛伏期(TWL)檢測(cè) |
| 5.3.8 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 5.4 研究結(jié)果 |
| 5.4.1 電刺激對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞 |
| 5.4.2 PCRA術(shù)后大鼠脊髓組織中小膠質(zhì)細(xì)胞的變化 |
| 5.4.3 PCRA術(shù)后大鼠脊髓組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化 |
| 5.4.4 PCRA術(shù)后大鼠小脊髓組織中促炎癥細(xì)胞因子的變化 |
| 5.4.5 機(jī)械性刺激縮足閾值(MWT)行為學(xué)改變 |
| 5.4.6 熱縮足反射潛伏期(TWL)行為學(xué)改變 |
| 5.4.7 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子變化 |
| 5.4.8 氧化損傷標(biāo)志物變化 |
| 5.5 討論 |
| 5.6 小結(jié) |
| 第6章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（4）基于含硒納米材料的構(gòu)建及其治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞對(duì)照表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 SCI治療的研究進(jìn)展 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 SCI的病理生理特征 |
| 2.3 SCI的治療策略 |
| 2.3.1 藥物治療 |
| 2.3.2 手術(shù)治療 |
| 2.3.3 生物材料治療 |
| 2.3.4 電刺激治療 |
| 2.3.5 細(xì)胞移植治療 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 硒-碳量子點(diǎn)(Se-CQDs)構(gòu)建及其治療SCI的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.2 主要儀器設(shè)備 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和動(dòng)物 |
| 3.3.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng) |
| 3.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.4.1 Se-CQDs的制備 |
| 3.4.2 Se-CQDs表征 |
| 3.4.3 Se-CQDs清除氧自由基 |
| 3.4.4 Se-CQDs的生物相容性 |
| 3.4.5 體外H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性及其對(duì)氧化應(yīng)激的保護(hù)作用.. |
| 3.4.6 Se-CQDs抑制炎癥的體外實(shí)驗(yàn) |
| 3.4.7 SCI挫傷動(dòng)物模型制備 |
| 3.4.8 行為學(xué)分析 |
| 3.4.9 SCI H&E、LFB和免疫熒光染色的脊髓組織獲取 |
| 3.4.10 H&E染色實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.4.11 Luxol fast blue(LFB)染色實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.4.12 脊髓髓鞘微觀(guān)結(jié)構(gòu) |
| 3.4.13 脊髓組織免疫熒光染色 |
| 3.4.14 Se-CQDs對(duì)體內(nèi)繼發(fā)性損傷的抗凋亡作用 |
| 3.4.15 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3.5 結(jié)果 |
| 3.5.1 Se-CQDs制備與表征 |
| 3.5.2 Se-CQDs的生物相容性 |
| 3.5.3 Se-CQDs在H_2O_2模擬的氧化應(yīng)激環(huán)境下對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用 |
| 3.5.4 Se-CQDs對(duì)LPS誘導(dǎo)BV2細(xì)胞表達(dá)促炎因子的影響 |
| 3.5.5 Se-CQDs對(duì)SCI大鼠模型的治療作用 |
| 3.5.6 不同治療組對(duì)脊髓組織形態(tài)學(xué)的影響 |
| 3.5.7 不同治療組脊髓組織神經(jīng)元及軸突的保護(hù)性作用 |
| 3.5.8 Se-CQDs在體內(nèi)的抗炎作用及減少膠質(zhì)瘢痕能力。 |
| 3.5.9 Se-CQDs在體內(nèi)的抗細(xì)胞凋亡能力。 |
| 3.6 討論 |
| 3.6.1 生物材料通過(guò)清除ROS治療SCI |
| 3.6.2 清除ROS有助于促進(jìn)SCI功能恢復(fù) |
| 3.7 本章小結(jié) |
| 第四章 透明質(zhì)酸-硒(Hyaluronic Acid-Selenium,HA-Se)納米粒子構(gòu)建及其治療SCI的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.2 主要儀器設(shè)備 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞和動(dòng)物 |
| 4.3.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng) |
| 4.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.4.1 HA-Se納米粒子的制備 |
| 4.4.2 HA-Se納米粒子表征 |
| 4.4.3 HA-Se納米粒子清除氧自由基 |
| 4.4.4 HA-Se納米粒子的生物相容性 |
| 4.4.5 體外H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性及其對(duì)氧化應(yīng)激的保護(hù)作用.. |
| 4.4.6 HA-Se納米粒子抑制炎癥的體外實(shí)驗(yàn) |
| 4.4.7 創(chuàng)傷性SCI挫傷動(dòng)物模型制備 |
| 4.4.8 行為學(xué)分析 |
| 4.4.9 SCI后H&E、LFB和免疫熒光染色的脊髓組織獲取 |
| 4.4.10 H&E染色實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.4.11 Luxol fast blue(LFB)染色實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.4.12 脊髓髓鞘微觀(guān)結(jié)構(gòu) |
| 4.4.13 脊髓組織免疫熒光染色 |
| 4.4.14 HA-Se納米粒子對(duì)體內(nèi)繼發(fā)性損傷的抗凋亡作用 |
| 4.4.15 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 4.5 結(jié)果 |
| 4.5.1 HA-Se納米粒子制備與表征 |
| 4.5.2 HA-Se納米粒子的生物相容性 |
| 4.5.3 HA-Se納米粒子在H_2O_2模擬的氧化應(yīng)激環(huán)境下對(duì)細(xì)胞的保護(hù) |
| 4.5.4 HA-Se納米粒子抑制炎癥的作用 |
| 4.5.6 SCI后CD44 表達(dá) |
| 4.5.7 星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)HA-Se納米粒子的內(nèi)吞 |
| 4.5.8 HA-Se納米粒子體內(nèi)分布 |
| 4.5.9 HA-Se納米粒子療效分析 |
| 4.5.10 HA-Se納米粒子體內(nèi)抑制炎癥的作用 |
| 4.5.11 HA-Se納米粒子體內(nèi)抗凋亡的作用 |
| 4.5.12 HA-Se納米粒子體內(nèi)安全性評(píng)價(jià) |
| 4.6 討論 |
| 4.6.1 靶向性納米粒子治療脊髓損傷 |
| 4.6.2 納米粒子減輕繼發(fā)性SCI促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù) |
| 4.7 小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論和展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡(jiǎn)介及在讀期間所取得的科研成果 |
| 致謝 |
（5）納米芳香藥物治療神經(jīng)精神類(lèi)疾病的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 芳香療法 |
| 1.1.1 芳香療法應(yīng)用于睡眠障礙 |
| 1.1.2 芳香療法應(yīng)用于阿爾茲海默癥 |
| 1.1.3 芳香療法應(yīng)用于高血壓 |
| 1.1.4 芳香療法應(yīng)用于精神心理疾病 |
| 1.2 基因治療 |
| 1.2.1 RNA干擾藥物 |
| 1.2.2 mRNA治療 |
| 1.2.3 DNA治療 |
| 1.2.4 基因編輯 |
| 1.3 應(yīng)用于藥物緩控釋的納米材料 |
| 1.3.1 納米材料負(fù)載藥物 |
| 1.3.2 納米材料靶向輸遞藥物 |
| 1.3.3 納米材料緩控釋藥物 |
| 1.4 精神神經(jīng)病征 |
| 1.4.1 抑郁癥 |
| 1.4.2 躁狂癥 |
| 1.4.3 焦慮癥 |
| 1.4.4 其他精神神經(jīng)疾病 |
| 1.5 立題依據(jù)和研究目標(biāo) |
| 1.5.1 論文立題依據(jù) |
| 1.5.2 論文研究目標(biāo)及策略 |
| 第2章 緩控釋納米芳香藥物的制備 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與樣品 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.1.3 介孔二氧化硅納米棒的制備 |
| 2.1.4 MSNRs的表征 |
| 2.1.5 空心介孔二氧化硅納米棒的制備 |
| 2.1.6 HMSNRs的表征 |
| 2.1.7 納米顆粒的芳香藥物包封 |
| 2.1.8 芳香藥物丁香酚的釋放檢測(cè) |
| 2.1.9 反應(yīng)性介孔二氧化硅納米顆粒的制備 |
| 2.1.10 rMSNs的表征 |
| 2.1.11 rMSNs包封芳香藥物 |
| 2.1.12 混合精油的釋放檢測(cè) |
| 2.1.13 BLEO@rMSNs在壁紙上的粘附 |
| 2.1.14 BLEO@rMSNs從壁紙上的脫附 |
| 2.1.15 含偶氮苯結(jié)構(gòu)的硅烷偶聯(lián)劑的合成與表征 |
| 2.1.16 介孔二氧化硅納米顆粒的制備 |
| 2.1.17 光敏MSNs的制備方法 |
| 2.1.18 光敏MSNs的表征 |
| 2.1.19 S803@MSNs的制備及表征 |
| 2.1.20 S803@MSNs在壁紙上的粘附 |
| 2.1.21 S803@MSNs中芳香藥物的釋放 |
| 2.1.22 PEG大分子引發(fā)劑(CTA-PEG2000)的合成與表征 |
| 2.1.23 含1-芘甲基的丙烯酸酯單體的合成與表征 |
| 2.1.24 光敏兩親嵌段共聚物的合成與表征 |
| 2.1.25 聚合物的臨界膠束濃度檢測(cè) |
| 2.1.26 S803@PPMM-PEG的制備 |
| 2.1.27 S803@PPMM-PEG的熱性能分析 |
| 2.1.28 S803@PPMM-PEG在壁紙上的粘附 |
| 2.1.29 S803@PPMM-PEG中芳香藥物的釋放 |
| 2.1.30 pH敏感陽(yáng)離子兩親嵌段共聚物的合成與表征 |
| 2.1.31 pH敏感陽(yáng)離子納米芳香藥物的制備 |
| 2.1.32 pH敏感陽(yáng)離子納米芳香藥物的表征 |
| 2.1.33 pH敏感陽(yáng)離子納米芳香藥物在絲綢的粘附 |
| 2.1.34 芳香藥物從linalool@PHMA-PCB-Arg的釋放檢測(cè) |
| 2.1.35 陽(yáng)離子溫敏聚合物的合成和表征 |
| 2.1.36 溫敏納米芳香藥物的制備和表征 |
| 2.1.37 芳香藥物從EG@LC-PNDB的釋放 |
| 2.1.38 EG@LC-PNDB在絲綢上的粘附 |
| 2.1.39 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.2 結(jié)果與討論 |
| 2.2.1 基于空心介孔二氧化硅納米棒的納米芳香藥物研究 |
| 2.2.2 基于反應(yīng)性介孔二氧化硅納米棒的納米芳香藥物研究 |
| 2.2.3 基于MSNs的光敏納米芳香藥物研究 |
| 2.2.4 基于膠束的光敏納米芳香藥物研究 |
| 2.2.5 pH敏感納米芳香藥物的研究 |
| 2.2.6 溫敏納米芳香藥物的研究 |
| 2.3 小結(jié) |
| 第3章 納米芳香藥物的神經(jīng)調(diào)節(jié)作用 |
| 3.1 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與樣品 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 3.1.3 含偶氮苯結(jié)構(gòu)的硅烷偶聯(lián)劑的合成與表征 |
| 3.1.4 MS-R的制備方法 |
| 3.1.5 光敏MS-R的制備方法 |
| 3.1.6 光敏MS-R的表征 |
| 3.1.7 S803@MS-R的制備及表征 |
| 3.1.8 納米芳香藥物應(yīng)用于壁紙 |
| 3.1.9 壁紙形貌分析 |
| 3.1.10 芳香藥物釋放分析 |
| 3.1.11 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 3.1.12 行為學(xué)評(píng)價(jià) |
| 3.1.13 電生理學(xué)測(cè)試 |
| 3.1.14 免疫熒光切片 |
| 3.1.15 神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá) |
| 3.1.16 數(shù)據(jù)分析 |
| 3.2 結(jié)果與討論 |
| 3.2.1 S803@MS-R的表征 |
| 3.2.2 S803@MS-R-W對(duì)小鼠行為學(xué)的影響 |
| 3.2.3 S803@MS-R-W對(duì)小鼠腦生理電位的影響 |
| 3.2.4 S803@MS-R-W對(duì)神經(jīng)再生的影響 |
| 3.2.5 S803@MS-R-W對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響 |
| 3.3 小結(jié) |
| 第4章 仿生納米芳香藥物用于抑郁癥的預(yù)防 |
| 4.1 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與樣品 |
| 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 4.1.3 棒狀MSNs的制備 |
| 4.1.4 形貌仿生納米芳香藥物的制備 |
| 4.1.5 反應(yīng)性殼聚糖的制備 |
| 4.1.6 功能仿生納米芳香藥物的制備 |
| 4.1.7 仿生plus納米芳香藥物的制備 |
| 4.1.8 納米芳香藥物在壁紙上的粘附 |
| 4.1.9 納米芳香藥物在壁紙上的脫附 |
| 4.1.10 分子動(dòng)力學(xué)模擬 |
| 4.1.11 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 4.1.12 懸尾測(cè)試 |
| 4.1.13 強(qiáng)迫游泳測(cè)試 |
| 4.1.14 新環(huán)境進(jìn)食抑制測(cè)試 |
| 4.1.15 曠場(chǎng)測(cè)試 |
| 4.1.16 免疫組化切片 |
| 4.1.17 尼氏染色切片 |
| 4.1.18 數(shù)據(jù)分析 |
| 4.2 結(jié)果與討論 |
| 4.2.1 仿生納米芳香藥物的制備 |
| 4.2.2 仿生納米芳香藥物與壁紙之間的動(dòng)力學(xué)模擬 |
| 4.2.3 納米芳香藥物在抑郁癥預(yù)防中的作用 |
| 4.3 小結(jié) |
| 第5章 基因-芳香藥物遞送體系用于抑郁癥協(xié)同治療 |
| 5.1 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與樣品 |
| 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 5.1.3 H-Lys(Z)-OH羧基-環(huán)內(nèi)酸酐鹽酸鹽的合成方法 |
| 5.1.4 C18-p(H-Lys(Z)-OH)的合成 |
| 5.1.5 C18-PLys的合成 |
| 5.1.6 C18-PLys-Mal的合成 |
| 5.1.7 C18-PLys-sertraline的合成 |
| 5.1.8 SPIONs的合成 |
| 5.1.9 基因-芳香藥物NDDSs的制備 |
| 5.1.10 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 5.1.11 內(nèi)涵體逃逸 |
| 5.1.12 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 5.1.13 抑郁癥模型小鼠的治療 |
| 5.1.14 強(qiáng)迫游泳測(cè)試 |
| 5.1.15 新環(huán)境進(jìn)食抑制測(cè)試 |
| 5.1.16 糖水偏好測(cè)試 |
| 5.1.17 三箱社交測(cè)試 |
| 5.1.18 免疫組化切片 |
| 5.1.19 尼氏染色切片 |
| 5.1.20 抗BrdU染色 |
| 5.1.21 抗BDNF染色 |
| 5.1.22 IF/FISH雙染 |
| 5.1.23 Western blot檢測(cè) |
| 5.1.24 數(shù)據(jù)分析 |
| 5.2 結(jié)果與討論 |
| 5.2.1 基因-芳香藥物遞送體系的制備與表征 |
| 5.2.2 基因-芳香藥物遞送體系細(xì)胞水平表征 |
| 5.2.3 基因-芳香藥物遞送體系的病灶富集和安全性評(píng)價(jià) |
| 5.2.4 基因-芳香藥物遞送體系的抗抑郁效果評(píng)價(jià) |
| 5.2.5 基因-芳香藥物遞送體系的抗抑郁機(jī)制探究 |
| 5.3 小結(jié) |
| 第6章 反應(yīng)性納米芳香藥物用于改善航天特因環(huán)境下身心健康 |
| 6.1 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與樣品 |
| 6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 6.1.3 MSNs-CYC的制備 |
| 6.1.4 LE@MSNs-CYC的制備 |
| 6.1.5 LE@MSNs-CYC應(yīng)用于壁紙附藥 |
| 6.1.6 檸檬烯釋放的檢測(cè) |
| 6.1.7 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 6.1.8 航天特因環(huán)境模擬 |
| 6.1.9 高架十字迷宮測(cè)試 |
| 6.1.10 明暗箱測(cè)試 |
| 6.1.11 新物體識(shí)別測(cè)試 |
| 6.1.12 水迷宮測(cè)試 |
| 6.1.13 神經(jīng)遞質(zhì)及皮質(zhì)酮和皮質(zhì)醇的檢測(cè) |
| 6.1.14 促腎上腺皮質(zhì)激素,IL-6和IL-β的檢測(cè) |
| 6.1.15 神經(jīng)相關(guān)蛋白含量檢測(cè) |
| 6.1.16 數(shù)據(jù)分析 |
| 6.2 結(jié)果與討論 |
| 6.2.1 LE@MSNs-CYC處理壁紙的制備與表征 |
| 6.2.2 LE@MSNs-CYC在航天特因環(huán)境下的抗焦慮作用 |
| 6.2.3 LE@MSNs-CYC在航天特因環(huán)境下的緩解身體損傷作用 |
| 6.2.4 LE@MSNs-CYC在航天特因環(huán)境下的提高認(rèn)知記憶的作用 |
| 6.3 小結(jié) |
| 第7章 結(jié)論與展望 |
| 7.1 結(jié)論 |
| 7.1.1 建立了芳香藥物納米化與緩控釋平臺(tái) |
| 7.1.2 建立了釋藥-嗅藥-神經(jīng)響應(yīng)評(píng)價(jià)平臺(tái) |
| 7.1.3 仿生納米芳香藥物具有優(yōu)異的抑郁癥預(yù)防效果 |
| 7.1.4 芳香-基因藥物遞送體系具有優(yōu)異的抑郁癥治療效果 |
| 7.1.5 反應(yīng)性納米芳香藥物航天特因條件下提高身心健康 |
| 7.2 今后工作建議 |
| 7.2.1 芳香藥物納米化和緩控釋平臺(tái)的拓展 |
| 7.2.2 基因藥物負(fù)載方式的改進(jìn) |
| 7.2.3 基因-芳香治療所應(yīng)用疾病的拓展 |
| 7.2.4 基因治療方法的改進(jìn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果 |
（6）血腦屏障體外微球模型的構(gòu)建及其在中藥神經(jīng)毒性篩選中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 研究?jī)?nèi)容一 體外血腦屏障微球模型的構(gòu)建及功能驗(yàn)證 |
| 實(shí)驗(yàn)一 體外血腦屏障微球模型建立 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)二 體外血腦屏障微球模型的細(xì)胞組成鑒定 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)三 體外血腦屏障微球模型的屏障完整性的結(jié)構(gòu)驗(yàn)證 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)四 體外血腦屏障微球模型的生理功能驗(yàn)證 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)五 體外血腦屏障微球疾病模型的建立 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 小結(jié) |
| 研究?jī)?nèi)容二 有毒中藥單體的神經(jīng)毒性篩選及機(jī)制研究 |
| 實(shí)驗(yàn)一 計(jì)算機(jī)模擬評(píng)估45 種有毒中藥單體的BBB滲透性 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)二 使用神經(jīng)元細(xì)胞對(duì)中藥有毒單體進(jìn)行神經(jīng)毒性篩選 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)三 候選毒性藥物的神經(jīng)毒性驗(yàn)證 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)四 CTD對(duì) BBB微球細(xì)胞活力的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)五 CTD對(duì)BBB完整性蛋白及基因表達(dá)的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)六 CTD對(duì)BBB微球活性氧蓄積的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)七 CTD對(duì)BBB微球炎癥相關(guān)基因及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 實(shí)驗(yàn)八 CTD神經(jīng)毒性的動(dòng)物水平驗(yàn)證 |
| 1 材料與方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 結(jié)論 |
| 小結(jié) |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 3D生物打印組織模型的研究進(jìn)展及在中藥研究中的可期應(yīng)用 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（7）針對(duì)狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒藥物篩選及驗(yàn)證（論文提綱范文）
| 英文縮略詞表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 狂犬病的流行概況 |
| 1.2 狂犬病病毒的病原學(xué)和分子生物學(xué) |
| 1.3 狂犬病病毒感染與復(fù)制 |
| 1.4 狂犬病病毒G蛋白的免疫原性與糖基化 |
| 1.5 狂犬病病毒中和抗體檢測(cè) |
| 1.6 狂犬病病毒疫苗的發(fā)展 |
| 1.7 痘苗病毒的病原學(xué)與分子生物學(xué) |
| 1.8 痘苗病毒的感染與復(fù)制 |
| 1.9 痘苗病毒的應(yīng)用 |
| 1.10 本文的研究目的、內(nèi)容和意義 |
| 1.11 技術(shù)路線(xiàn) |
| 第二章 氯法齊明對(duì)狂犬病病毒的抑制作用 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 MMF及 TRA對(duì)痘苗病毒的抑制作用 |
| 3.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第四章 討論 |
| 4.1 新發(fā)、突發(fā)病毒性傳染病的流行情況 |
| 4.2 藥物再定位 |
| 4.3 狂犬病的暴露后預(yù)防 |
| 4.4 CFZ的抗病毒機(jī)制及開(kāi)發(fā)前景 |
| 4.5 天花病毒替代—痘苗病毒 |
| 4.6 嗎替麥考酚酯與曲尼司特 |
| 第五章 總結(jié)與展望 |
| 5.1 總結(jié) |
| 5.2 展望 |
| 5.3 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述:應(yīng)對(duì)新、突發(fā)病毒傳染病的新對(duì)策——廣譜抗病毒抑制劑和新型藥物篩選手段的儲(chǔ)備 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 博士期間論文發(fā)表及主要研究成果專(zhuān)利申報(bào)情況 |
| 致謝 |
（8）產(chǎn)后抑郁癥中醫(yī)證候特點(diǎn)分析及逍遙散的干預(yù)作用機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 綜述一 產(chǎn)后抑郁癥中西醫(yī)研究進(jìn)展 |
| 1 產(chǎn)后抑郁癥的西醫(yī)研究進(jìn)展 |
| 2 產(chǎn)后抑郁癥的中醫(yī)研究進(jìn)展 |
| 3 逍遙散治療產(chǎn)后抑郁癥的病機(jī)及治則分析探討 |
| 4 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述二 雌激素受體與產(chǎn)后抑郁癥相關(guān)性研究進(jìn)展 |
| 1 雌激素受體 |
| 2 雌激素受體介導(dǎo)的PKA/CREB/BDNF信號(hào)通路 |
| 3 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 前言 |
| 第一章 產(chǎn)后抑郁癥影響因素及中醫(yī)證候特點(diǎn)的臨床研究 |
| 1 研究對(duì)象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 第二章 中醫(yī)治療產(chǎn)后抑郁癥用藥規(guī)律的現(xiàn)代文獻(xiàn)研究 |
| 1 研究對(duì)象 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 第三章 逍遙散治療產(chǎn)后抑郁癥作用機(jī)制的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 |
| 實(shí)驗(yàn)一 產(chǎn)后抑郁癥大鼠模型的建立與評(píng)價(jià) |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)二 基于HPG軸探討產(chǎn)后抑郁癥發(fā)病機(jī)制及逍遙散干預(yù)作用機(jī)制研究 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)三 產(chǎn)后抑郁癥大鼠下丘腦中雌激素受體介導(dǎo)的PKA/CREB/BDNF信號(hào)通路變化及逍遙散的干預(yù)作用機(jī)制研究 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 結(jié)語(yǔ) |
| 1 研究總結(jié) |
| 2 創(chuàng)新性 |
| 3 不足之處與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 在學(xué)期間主要研究成果 |
（9）星蔞承氣湯治療急性缺血性卒中痰熱腑實(shí)證機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 第一部分 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 星蔞承氣湯藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及對(duì)缺血性卒中神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1 大黃 |
| 1.1 中醫(yī)認(rèn)識(shí) |
| 1.2 化學(xué)成分及神經(jīng)保護(hù)作用 |
| 2 膽南星 |
| 2.1 中醫(yī)認(rèn)識(shí) |
| 2.2 化學(xué)成分及神經(jīng)保護(hù)作用 |
| 3 瓜蔞 |
| 3.1 中醫(yī)認(rèn)識(shí) |
| 3.2 化學(xué)成分及神經(jīng)保護(hù)作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中醫(yī)認(rèn)識(shí) |
| 4.2 化學(xué)成分及神經(jīng)保護(hù)作用 |
| 5 芒硝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 基于腸道微生態(tài)理論的缺血性卒中病因與發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1 腸道微生態(tài)與腸道微生態(tài)失調(diào) |
| 2 菌-腸-腦軸 |
| 3 從腸到腦的上行通路 |
| 4 從腦到腸的下行通路 |
| 5 腦卒中相關(guān)危險(xiǎn)因素與腸道菌群 |
| 6 卒中并發(fā)癥的腸道微生態(tài)機(jī)制 |
| 7 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 前言 |
| 第二部分 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的星蔞承氣湯治療缺血性卒中的機(jī)制研究 |
| 1 研究資料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蔞承氣湯化學(xué)活性成分的檢索與篩選 |
| 2.2 星蔞承氣湯化學(xué)成分及缺血性卒中靶點(diǎn)篩選 |
| 2.3 交集基因蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)分析 |
| 2.4 基因本體論(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因與基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 |
| 2.6 分子對(duì)接 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 3.1 星蔞承氣湯潛在化學(xué)活性成分的檢索與篩選結(jié)果 |
| 3.2 星蔞承氣湯活性成分靶點(diǎn)及缺血性卒中靶點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代謝通路富集分析結(jié)果 |
| 3.4 可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 |
| 3.5 分子對(duì)接 |
| 4 討論 |
| 4.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中的應(yīng)用 |
| 4.2 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討星蔞承氣湯活性成分 |
| 4.3 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討星蔞承氣湯效應(yīng)機(jī)制 |
| 5 小結(jié) |
| 第三部分 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 實(shí)驗(yàn)一 星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證小鼠神經(jīng)保護(hù)作用及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)關(guān)鍵靶點(diǎn)及通路實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與耗材 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)藥物的配置 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 分組與給藥 |
| 2.2 模型制備 |
| 2.3 神經(jīng)功能評(píng)分 |
| 2.4 除膠實(shí)驗(yàn) |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及處理 |
| 2.7 TUNEL法檢測(cè)皮層梗死周?chē)?xì)胞凋亡情況 |
| 2.8 腦組織ELISA |
| 2.9 腦組織Western blot |
| 2.10 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 研究結(jié)果 |
| 3.1 神經(jīng)功能評(píng)分 |
| 3.2 除膠實(shí)驗(yàn) |
| 3.3 腦梗死體積評(píng)價(jià) |
| 3.4 對(duì)缺血側(cè)腦組織細(xì)胞凋亡的影響 |
| 3.5 星蔞承氣湯對(duì)缺血側(cè)腦組織TNF-α的影響 |
| 3.6 星蔞承氣湯對(duì)缺血側(cè)腦組織AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表達(dá)的影響 |
| 4 討論 |
| 4.1 星萎承氣湯是治療中風(fēng)病急性期痰熱腑實(shí)證的具有確切臨床療效的代表方劑 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蔞承氣湯腦保護(hù)作用及中醫(yī)理論探討 |
| 4.3 卒中模型神經(jīng)功能評(píng)分探討 |
| 4.4 卒中模型行為學(xué)選擇 |
| 4.5 星蔞承氣湯與細(xì)胞凋亡 |
| 4.6 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)關(guān)鍵靼點(diǎn)及通路實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)二 星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證小鼠菌-腸-腦軸影響 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與耗材 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)藥物的配置 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 分組與給藥 |
| 2.2 模型制備 |
| 2.3 取材及處理 |
| 2.4 免疫組化 |
| 2.5 免疫熒光 |
| 2.6 ELISA檢測(cè) |
| 2.8 腸道菌群分析 |
| 2.9 盲腸內(nèi)容物短鏈脂肪酸(SCFAs)檢測(cè) |
| 2.10 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)痰熱腑實(shí)證小鼠腸道菌群的影響 |
| 3.2 星蔞承氣湯對(duì)中風(fēng)痰熱腑實(shí)證小鼠腸道菌群代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸及短鏈脂肪酸受體的影響 |
| 3.3 星蔞承氣對(duì)菌-腸-腦軸神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫途徑相關(guān)指標(biāo)影響 |
| 4 討論 |
| 4.1 基于腦腸互動(dòng)理論探討化痰通腑法治療中風(fēng)病的理論基礎(chǔ) |
| 4.2 星蔞承氣湯對(duì)短鏈脂肪酸影響 |
| 4.3 星萎承氣湯對(duì)菌-腸-腦軸自主神經(jīng)途徑影響 |
| 4.4 星蔞承氣湯對(duì)菌-腸-腦軸神經(jīng)內(nèi)分泌途徑影響 |
| 4.5 星萎承氣湯對(duì)菌-腸-腦軸免疫途徑影響 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)三 星萎承氣湯對(duì)中風(fēng)急性期痰熱腑實(shí)證偽無(wú)菌小鼠菌-腸-腦軸影響 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備與耗材 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)藥物的配置 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 分組與給藥 |
| 2.2 模型制備 |
| 2.3 神經(jīng)功能評(píng)分 |
| 2.4 除膠實(shí)驗(yàn) |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及處理 |
| 2.7 免疫組化、免疫熒光 |
| 2.8 ELISA檢測(cè) |
| 2.9 腸道菌群分析 |
| 2.10 盲腸內(nèi)容物SCFAs分析 |
| 2.11 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 神經(jīng)功能評(píng)分 |
| 3.2 除膠實(shí)驗(yàn) |
| 3.3 腦梗死體積評(píng)價(jià) |
| 3.4 腸道菌群 |
| 3.5 短鏈脂肪酸 |
| 3.6 星蔞承氣湯對(duì)偽無(wú)菌小鼠菌-腸-腦軸神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫途徑相關(guān)指標(biāo)影響 |
| 4 討論 |
| 4.1 偽無(wú)菌模型建立及評(píng)價(jià) |
| 4.2 腸道菌群是星蔞承氣湯發(fā)揮作用的重要靶點(diǎn) |
| 4.3 星蔞承氣湯治療急性期缺血性卒中機(jī)制的初步探討 |
| 5 小結(jié) |
| 結(jié)語(yǔ) |
| 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間主要研究成果 |
（10）多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)理研究（論文提綱范文）
| 縮寫(xiě)詞索引 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 多穗柯的研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 多穗柯概況 |
| 1.1.2 多穗柯的化學(xué)成分 |
| 1.1.3 多穗柯的藥理作用 |
| 1.1.4 多穗柯安全性評(píng)價(jià) |
| 1.2 三葉苷的研究進(jìn)展 |
| 1.2.1 三葉苷概況 |
| 1.2.2 多穗柯三葉苷的提純及鑒定方法 |
| 1.2.3 多穗柯三葉苷的藥理作用 |
| 1.3 肥胖的研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 肥胖的定義與發(fā)展現(xiàn)狀 |
| 1.3.2 治療方式與效果 |
| 1.3.3 減肥機(jī)理的研究進(jìn)展 |
| 1.3.4 植物源黃酮類(lèi)化合物的減肥作用研究進(jìn)展 |
| 1.4 棕色脂肪組織與肥胖 |
| 1.4.1 棕色脂肪概況 |
| 1.4.2 棕色脂肪組織在減肥中的研究進(jìn)展 |
| 1.5 .腸道微生物與肥胖 |
| 1.5.1 腸道微生物研究概況 |
| 1.5.2 腸道微生物與肥胖的研究進(jìn)展 |
| 1.6 氧化應(yīng)激與肥胖 |
| 1.6.1 氧化應(yīng)激研究概況 |
| 1.6.2 氧化應(yīng)激與肥胖的研究進(jìn)展 |
| 1.7 立題背景和意義 |
| 1.8 研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線(xiàn) |
| 1.8.1 研究?jī)?nèi)容 |
| 1.8.2 技術(shù)路線(xiàn) |
| 第2章 多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)理研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器 |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2 分析方法 |
| 2.2.1 口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT) |
| 2.2.2 血清生化分析 |
| 2.2.3 廋素、胰島素和神經(jīng)肽Y的測(cè)定 |
| 2.2.4 組織學(xué)檢查和分析 |
| 2.2.5 RNA提取 |
| 2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量(q RT-PCR)分析 |
| 2.3 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 2.4 結(jié)果與分析 |
| 2.4.1 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體重、攝食量的影響 |
| 2.4.2 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠脂肪率和肝臟系數(shù)的影響 |
| 2.4.3 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠血脂水平和動(dòng)脈硬化指數(shù)的影響 |
| 2.4.4 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠葡萄糖耐量的影響 |
| 2.4.5 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響 |
| 2.4.6 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠肝臟組織形態(tài)病理分析的影響 |
| 2.4.7 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠白色脂肪組織形態(tài)的影響 |
| 2.4.8 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠脂代謝相關(guān)血清激素的影響 |
| 2.4.9 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響 |
| 2.4.10 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠脂肪分解相關(guān)基因表的影響 |
| 2.4.11 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠白色脂肪組織褐變的影響 |
| 2.5 討論 |
| 2.6 本章小結(jié) |
| 第3章 多穗柯三葉苷對(duì)Tyk2/STAT3信號(hào)通路介導(dǎo)的棕色脂肪組織功能活性的影響 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材和試劑 |
| 3.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器 |
| 3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2 分析方法 |
| 3.3 數(shù)據(jù)處理 |
| 3.4 結(jié)果與分析 |
| 3.4.1 多穗柯三葉苷對(duì)棕色脂肪中Tyk2/STST3蛋白表達(dá)的影響 |
| 3.4.2 多穗柯三葉苷對(duì)棕色脂肪細(xì)胞分化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 |
| 3.4.3 多穗柯三葉苷對(duì)棕色脂肪組織形態(tài)的影響 |
| 3.4.4 多穗柯三葉苷對(duì)棕色脂肪組織功能活性相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 第4章 多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠腸道菌群的影響 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 4.1.2 儀器與設(shè)備 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件 |
| 4.2.2 肥胖SD大鼠模型的建立 |
| 4.2.3 減肥干預(yù)實(shí)驗(yàn) |
| 4.2.4 大鼠血清和組織的采集和處理 |
| 4.2.5 短鏈脂肪酸分析 |
| 4.2.6 腸道微生物菌群分析 |
| 4.2.7 宏基因組預(yù)測(cè)分析 |
| 4.2.8 數(shù)據(jù)分析 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠的攝食量、體重、肝重和脂肪重量的影響 |
| 4.3.2 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠短鏈脂肪酸含量的影響 |
| 4.3.3 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠腸道菌群多樣性和結(jié)構(gòu)的影響 |
| 4.3.4 KEGG功能預(yù)測(cè)分析 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第5章 多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備 |
| 5.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.2 分析方法 |
| 5.2.1 大鼠中丙二醛(MDA)含量的測(cè)定 |
| 5.2.2 大鼠中羰基化蛋白(PC)含量的測(cè)定 |
| 5.2.3 大鼠中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定 |
| 5.2.4 大鼠中過(guò)氧化氫酶(CAT)活性的測(cè)定 |
| 5.2.5 大鼠中谷胱甘肽(GSH)含量的測(cè)定 |
| 5.2.6 RNA的提取和實(shí)時(shí)熒光定量分析 |
| 5.3 數(shù)據(jù)處理 |
| 5.4 結(jié)果與分析 |
| 5.4.1 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)MDA含量的影響 |
| 5.4.2 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)蛋白質(zhì)羰基(PC)含量的影響 |
| 5.4.3 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)SOD活性的影響 |
| 5.4.4 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)CAT活性的影響 |
| 5.4.5 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠體內(nèi)GSH含量的影響 |
| 5.4.6 多穗柯三葉苷對(duì)肥胖大鼠組織內(nèi)Nrf2轉(zhuǎn)錄因子基因表達(dá)的影響 |
| 5.5 討論 |
| 5.6 本章小結(jié) |
| 第6章 結(jié)論與展望 |
| 6.1 結(jié)論 |
| 6.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 6.3 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果 |
四、常用的中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物體內(nèi)分析方法（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]色氨酸及代謝物抑制β-淀粉樣蛋白聚集的分子動(dòng)力學(xué)研究 ——對(duì)運(yùn)動(dòng)延緩阿爾茨海默病的機(jī)理初探[D]. 弓燁弘. 上海體育學(xué)院, 2021(09)
- [2]基于代謝組學(xué)的刺五加葉治療缺血性腦卒中作用機(jī)制研究[D]. 汪戎錦. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [3]電刺激聯(lián)合Cs-Au/GelMA水凝膠對(duì)臂叢神經(jīng)損傷后神經(jīng)病理性疼痛的療效及機(jī)制研究[D]. 尤荻. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [4]基于含硒納米材料的構(gòu)建及其治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 羅文琪. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [5]納米芳香藥物治療神經(jīng)精神類(lèi)疾病的研究[D]. 盧治國(guó). 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所), 2021
- [6]血腦屏障體外微球模型的構(gòu)建及其在中藥神經(jīng)毒性篩選中的應(yīng)用[D]. 張雷. 天津中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [7]針對(duì)狂犬病病毒及痘苗病毒的抗病毒藥物篩選及驗(yàn)證[D]. 吳佳靜. 武漢生物制品研究所, 2021(01)
- [8]產(chǎn)后抑郁癥中醫(yī)證候特點(diǎn)分析及逍遙散的干預(yù)作用機(jī)制研究[D]. 許夢(mèng)白. 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [9]星蔞承氣湯治療急性缺血性卒中痰熱腑實(shí)證機(jī)制研究[D]. 高強(qiáng). 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [10]多穗柯三葉苷對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)理研究[D]. 沈海亮. 西南大學(xué), 2021(01)
標(biāo)簽：刺五加論文; 中樞神經(jīng)系統(tǒng)論文; 藥物代謝論文; 藥物相互作用論文; 腦卒中論文;