一、三種氟喹諾酮藥物的血清膽汁殺菌效價比較（論文文獻綜述）
周永林[1]（2021）在《齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細菌性溶血素活性作用及其機制研究》文中研究表明近年來抗菌藥物在畜牧養(yǎng)殖過程中的廣泛應(yīng)用與細菌耐藥性形成已成惡性循環(huán),同時誘導(dǎo)和加速多種耐藥菌如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的出現(xiàn)和流行,導(dǎo)致抗生素治療日趨無效。金黃色葡萄球菌是獸醫(yī)臨床上重要的病原菌,可導(dǎo)致乳房炎和肺炎等多種疾病,嚴重威脅畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。金黃色葡萄球菌可通過分泌β-內(nèi)酰胺酶對β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生抗性,舒巴坦等競爭性酶抑制劑對B類金屬β-內(nèi)酰胺酶抑制作用差,而MRSA如USA300攜帶多種金屬β-內(nèi)酰胺酶,這使得耐藥金黃色葡萄球菌感染的防控難度加大。此外,在NDM-1耐藥酶未報道之前,碳青霉烯類抗生素一直被用于治療臨床上嚴重耐藥腸桿菌的感染。然而,隨著NDMs和KPCs等碳青霉烯酶的出現(xiàn)和廣泛傳播,導(dǎo)致所有β-內(nèi)酰胺類抗生素在碳青霉烯酶陽性菌感染后治療無效。而且臨床上已經(jīng)出現(xiàn)同時攜帶ndm和mcr基因的大腸桿菌等革蘭氏陰性菌。因此,臨床上迫切需要研發(fā)廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑協(xié)同抗菌藥物以控制攜帶β-內(nèi)酰胺酶耐藥菌尤其耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染。細菌性溶血素是細菌在致病過程中所分泌的一類重要毒力蛋白,常見的細菌性溶血素包括金黃色葡萄球菌溶血素Hla,李斯特菌溶血素LLO、肺炎鏈球菌溶血素PLY和豬鏈球菌溶血素SLY等。細菌性溶血素可裂解組織細胞和協(xié)助細菌逃避機體免疫攻擊和獲取營養(yǎng),在細菌感染建立過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。如金黃色葡萄球菌溶血素敲除菌株在細菌性肺炎、乳房炎和腎炎等模型中毒力顯著減弱,甚至缺失。因此,以細菌性溶血素為藥物靶點進行抑制劑篩選是抑制細菌致病性的一種有效策略。綜上,篩選獲得一種可同時抑制耐藥酶和毒力因子的天然化合物,這將可能極大的提高耐藥致病菌感染的治療效果,同時減少開發(fā)藥物的成本。本研究最初的目標是通過酶活性抑制試驗從天然化合物中篩選出一種可抑制金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶活性的抑制劑。經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn),齊墩果酸可顯著抑制金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶的水解活性,同時對主要碳青霉烯酶如NDM-1、KPC-2和VIM-1也有顯著的抑制作用,而對頭孢菌素酶Amp C和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的抑制作用不顯著。此外,加入不同金屬離子進行酶活性抑制試驗發(fā)現(xiàn),齊墩果酸僅在鋅離子存在的緩沖液中對NDM-1的抑制作用受到影響,在其它金屬離子存在的緩沖液中無顯著影響,提示齊墩果酸并非特異性金屬離子螯合劑。本研究進一步通過棋盤法最小抑菌濃度試驗、生長曲線試驗、時間-殺菌曲線試驗和細菌染色試驗等驗證了齊墩果酸及其類似物可顯著增強β-內(nèi)酰胺類抗生素對β-內(nèi)酰胺酶陽性金黃色葡萄球菌和碳青霉烯酶陽性腸桿菌的抗菌作用（FIC≤0.33±0.07）,而舒巴坦僅對金黃色葡萄球菌與β-內(nèi)酰胺類抗生素具有顯著的協(xié)同效果,而與美羅培南聯(lián)合對NDM-1陽性大腸桿菌無顯著的協(xié)同效果。齊墩果酸在遠大于32μg/m L濃度條件下對受試菌株的生長無顯著影響。此外,本研究結(jié)果顯示,齊墩果酸單獨使用不會誘導(dǎo)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌USA300和NDM-1陽性大腸桿菌ZJ487對β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生耐藥性,而耐甲氧西林金黃色葡萄球菌USA300在β-內(nèi)酰胺類抗生素壓力下可產(chǎn)生嚴重的耐藥性。為確定齊墩果酸聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同效果,本研究建立了小鼠耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染肺炎模型,通過小鼠存活率、肺組織菌落定殖、肺組織β-內(nèi)酰胺酶活性檢測、靶器官病理變化和炎癥反應(yīng)等指標評價齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同效果。與單獨青霉素G鈉治療相比,齊墩果酸聯(lián)合青霉素G鈉治療后金黃色葡萄球菌感染小鼠的存活率提高50.0%,而舒巴坦聯(lián)合青霉素G鈉治療后的存活率提高37.5%,略差于齊墩果酸聯(lián)合組。此外,單獨齊墩果酸對金黃色葡萄球菌感染小鼠具有一定的治療效果,這提示齊墩果酸在針對金黃色葡萄球菌感染過程還具有其它藥理學(xué)作用,我們推測其可能抑制了金黃色葡萄球菌致病相關(guān)毒力因子。為驗證上述推測,本研究通過溶血試驗和細胞保護試驗等進行了驗證,結(jié)果顯示齊墩果酸及其類似物在4μg/m L濃度條件下可顯著抑制多種不同的細菌性溶血素的溶紅細胞活性,齊墩果酸可顯著降低MH-S細胞和A549細胞由金黃色葡萄球菌溶血素Hla介導(dǎo)的損傷。這一結(jié)果進一步證實了齊墩果酸單獨使用可降低耐藥金黃色葡萄球菌的致病性從而發(fā)揮保護作用。本研究通過酶活性抑制試驗、溶血試驗、熒光定量PCR試驗、蛋白免疫印跡試驗、分子動力學(xué)模擬、氨基酸定點突變和熒光淬滅等試驗確定了齊墩果酸不影響金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶和金屬β-內(nèi)酰胺酶以及金黃色葡萄球菌溶血素Hla蛋白的分泌和表達,而是與NDM-1蛋白和Hla蛋白通過范德華力直接結(jié)合發(fā)揮抑制作用。進一步通過對突變子蛋白進行酶活性抑制試驗、溶血試驗和突變子菌株最小抑菌濃度檢測試驗確證了分子動力學(xué)模擬結(jié)果的可靠性。綜上所述,作為β-內(nèi)酰胺酶和細菌性溶血素雙靶標抑制劑,齊墩果酸可顯著降低由細菌性溶血素對機體造成的損傷和顯著恢復(fù)β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)外抗菌活性。為基于抑制細菌致病性和耐藥性的雙靶標抗耐藥致病菌感染新藥研發(fā)奠定了良好的前期試驗基礎(chǔ)和提供了先導(dǎo)化合物。
袁美芳[2]（2020）在《達氟沙星單克隆抗體的制備及PELISA方法的建立》文中指出達氟沙星（Danofloxacin,DAN）是20世紀80年代開發(fā)的一種氟喹諾酮藥物,屬于第三代喹諾酮類抗菌藥。其抗菌譜廣,可以有效抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、衣原體、支原體、螺旋體及某些厭氧菌。DAN的作用機制是通過抑制細菌DNA螺旋酶和拓撲異構(gòu)酶Ⅳ的活性,阻礙細菌DNA的合成而致其死亡。DAN因其抑菌的廣譜性和有效性,常作為飼料添加劑、疫病預(yù)防與治療藥物得到廣泛應(yīng)用。然而,DAN的濫用會帶來一系列的副作用,如導(dǎo)致細菌耐藥性增加和藥物殘留等,嚴重威脅人類健康和動物源食品安全。目前各國政府都對其制定了限量標準,以保證動物性食品安全和人類健康。本研究自主設(shè)計方案合成了 DAN的免疫原以免疫小鼠,并將陽性小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合。融合后的雜交瘤細胞經(jīng)“篩選-克隆-篩選-克隆-篩選-克隆-篩選”過程,共獲得了 6株細胞株。將該細胞株擴充培養(yǎng)后進行保種并制備腹水,腹水經(jīng)純化后共獲得6種高質(zhì)量的抗DAN的單克隆抗體。這6種抗DAN單克隆抗體分別為3A10-A1-C6-H1、3A10-A1-C6-G9、3A10-A1-C6-H9、3A10-A1-F1-D12、3A10-B4-D2-C9 和3A10-E8-F7-H8。這些抗體的靈敏度、特異性分別通過酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）進行了評價。評價結(jié)果表明,3A10-A1-C6-H1的靈敏度為0.2ng/mL,3A10-A1-F1-D12 的靈敏度為 0.325 ng/mL,3A10-B4-D2-C9 的靈敏度為0.251 ng/mL,3A10-E8-F7-H8 的靈敏度為0.589 ng/mL,3A10-A1-C6-H9的靈敏度為0.27 ng/mL,3A10-A1-C6-G9的靈敏度為 0.129 ng/mL。3A10-A1-C6-H1、3A10-A1-C6-G9、3A10-A1-C6-H9、3A10-A1-F1-D12、3A10-B4-D2-C9 和 3A10-E8-F7-H8 與環(huán)丙沙星、恩諾沙星、莫西沙星、沙拉沙星及氧氟沙星均有一定的交叉反應(yīng)能力。此外,基于制備的抗DAN單克隆抗體在本研究中我們開發(fā)了一種基于三角銀納米粒子（Triangle silver nanoprisms,AgNPRs）的新型等離子酶聯(lián)免疫吸附法（plasmonic enzyme-linked immunosorbent assay,pELISA）檢測牛奶中的DAN。近年來,pELISA已經(jīng)廣泛用于快速檢測領(lǐng)域,該方法是將局部表面等離子共振（LSPR）與常規(guī)ELISA技術(shù)結(jié)合在一起。貴金屬納米粒子,尤其是金和銀納米粒子的消光系數(shù)（>08-109 M-1 cm-1）比傳統(tǒng)ELISA底物的消光系數(shù)（例如TMB,5.9×104 M-1 cm-1）更高,因此可作為出色的信號輸出載體。與其它銀納米顆粒相比,AgNPRs由于其較高的長寬比和尖銳的邊緣而能產(chǎn)生更強的等離子體共振。因此,本章開發(fā)了基于AgNPRs作為信號輸出載體的新型pELISA定性定量地檢測牛奶中的DAN。該方法在0.01 M磷酸鹽緩沖溶液中檢測DAN的定量靈敏度為0.24 ng/mL,定性靈敏度為0.32 ng/mL,相比TMB信號輸出系統(tǒng),其定量定性靈敏度分別提高了 3和32倍。該方法在牛奶中檢測DAN的定量靈敏度為0.96 ng/mL,定性靈敏度為1.25 ng/mL。回收率為103%-121%,與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）相比較具有較好的一致性。綜上所述,本研究制備的抗DAN單克隆抗體在免疫學(xué)檢測領(lǐng)域還有更大的應(yīng)用空間,可為食品基質(zhì)中DAN殘留的快速現(xiàn)場檢測提供堅實的基礎(chǔ);且本文建立的pELISA方法可進一步應(yīng)用于食品安全領(lǐng)域中其他有毒有害物質(zhì)的檢測,為其現(xiàn)場檢測提供有效的快速篩查方法。
胡松[3]（2020）在《基于新型標記物及異源競爭系統(tǒng)提高免疫學(xué)分析方法靈敏度的研究》文中認為免疫學(xué)分析方法因其獨特的優(yōu)勢在檢測領(lǐng)域備受關(guān)注。側(cè)向流動免疫層析法（Lateral flow immunochromatography,LFI）和酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）作為免疫學(xué)分析中最常用且發(fā)展最為成熟的兩大篩查平臺,因其簡便、快速、特異性強且成本低等優(yōu)勢被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)控以及食品安全檢測等領(lǐng)域。然而,這兩種免疫學(xué)分析方法的最大局限在于其檢測靈敏度偏低,無法對微量及痕量目標物進行準確的定性及定量分析,難以滿足某些實際應(yīng)用的需求。如何提高這兩種免疫學(xué)分析方法的靈敏度已成為當前亟待解決的主要問題。既往研究表明尋找新型標記物以及優(yōu)化抗原（Antigen,Ag）與單克隆抗體（Monoclonal antibody,mAb）親和力是提高LFI和ELISA靈敏度的有效途徑,本研究探討了新型標記物及異源競爭系統(tǒng)提高檢測靈敏度的可行性,從而拓寬了其在超靈敏檢測中的應(yīng)用范圍。第一章緒論對包括LFI和ELISA在內(nèi)的免疫學(xué)分析方法系統(tǒng)地進行了介紹;對本研究中所涉及到的喹諾酮類（FQs）及磺胺類（SAs）藥物進行了分述,其中包括兩者的危害、限量標準及現(xiàn)有的檢測方法等。第二章建立了基于時間分辨熒光微球的LFI用于檢測生牛乳中磺胺二甲基嘧啶（Sulfamethazine,SMZ）殘留。本章創(chuàng)新性地將一種時間分辨熒光微球Eu（Ⅲ）-doped polystyrenenanoparticles（EuNP）與新設(shè)計的全抗原同時應(yīng)用于LFI系統(tǒng)。動態(tài)光散射表征結(jié)果表明EuNP-mAb復(fù)合物體系具有良好的分散系數(shù),生物膜層干涉結(jié)果顯示新設(shè)計的Ag與mAb之間的親和力（3.214×10-5 M）遠低于傳統(tǒng)Ag與mAb之間的親和力（3.875×10-9 M）。在最優(yōu)工作條件下,EuNP-LFI用于檢測生牛乳中SMZ殘留時的最低定量檢測限、線性范圍及回收率分別為4.5 pg/mL、0.05-10 ng/mL 及 96.1%-108.2%。第三章建立了一種能夠同時定性及定量檢測生牛乳中SMZ殘留的LFI。本章利用了金磁納米粒子（gold-magenetic nanobeads,AuMB）的富集作用、顯色作用以及淬滅作用。簡言之,AuMB與mAb偶聯(lián)后,能夠?qū)颖局杏坞x的目標物進行富集,AuMB-mAb復(fù)合物與試紙條測試線（Test line,Tline）上噴涂的全抗原結(jié)合后能夠在T線上顯色（起到肉眼判讀作用）,AuMB-mAb復(fù)合物能夠淬滅T線上噴涂的熒光物質(zhì)所發(fā)出的熒光信號（起到熒光定量作用）。在最優(yōu)工藝條件下,本方法的肉眼定性判讀閾值為5 ng/mL,最低定量檢測限及線性范圍分別為 0.39 及 0.5-200 ng/mL。第四章建立了基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光（Aggregation-Induced Emission,AIE）材料的LFI用于檢測九種食品基質(zhì)中諾氟沙星（Norfloxacin,NOR）的殘留。本章利用微乳液法合成了一種全新的AIE熒光微球（Aggregation-Induced Emission Fluorescent Microbeads,AIEFM）,熒光光譜表征結(jié)果表明,AIEFM的熒光強度及Stoke’s shift比商業(yè)化的FITC熒光微球大,動態(tài)光散射表征結(jié)果表明,AIEFM-mAb復(fù)合物體系具有良好的分散系數(shù),上述特性均有利用LFI靈敏度的提高。本方法在對蜂蜜、雞蛋、雞肉、生牛乳、牛肉、羊肉、魚肉、豬肝以及豬肉中的NOR檢測時,其最低定量檢測限分別為0.03、0.03、0.02、0.04、0.14、0.30、0.15、0.04 和 0.22ng/mL,相應(yīng)的線性范圍分別為 0.05-20、0.05-10、0.05-10、0.05-20、0.5-100、1-200、0.5-100、0.05-10 和 0.5-200ng/mL。利用建立好的 AIEFM-LFI對135個食品樣本（基于上述九種食品基質(zhì)）中的NOR進行了檢測,并與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的檢測結(jié)果進行了比較,結(jié)果表明AIEFM-LFI能夠準確地篩查出陽性樣本。第五章利用半抗原的分子描述符,同時結(jié)合機器學(xué)習(xí)方法,成功篩選到了目標異源競爭抗原（Heterologous competitive antigen,HCA）從而顯著提高了 ELISA靈敏度。本章首先成功制備了抗恩諾沙星（Enrofloxacin,ENR）的mAb。利用Molelular Operating Enviroment操作軟件計算了不同F(xiàn)Qs的分子描述符。隨后利用機器學(xué)習(xí)的方法對分子描述符以及相應(yīng)全抗原存在下的ELISA靈敏度進行了分類學(xué)習(xí),結(jié)果表明分類學(xué)習(xí)能夠很好地輔助篩選到目標HCA?；诤Y選到的競爭抗原（sarafloxacin-BSA）的ELISA的靈敏度比傳統(tǒng)ELISA的靈敏度提高了10倍。本章提出的策略能夠在制備出普通抗體（不對免疫原進行額外修飾的情況下）的基礎(chǔ)上,有效地篩選合適的HCA以提高ELISA的靈敏度。第六章探討了利用半抗原之間的交叉反應(yīng)率篩選目標HCA用于提高ELISA靈敏度的可行性。本章首先研究了同源包被原與mAb配對情況下,15種FQs之間的交叉反應(yīng)率。隨后將上述15種FQs與牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin,BSA）偶聯(lián)形成包被原,并測定這15種包被原與mAb配對情況下的ELISA靈敏度。結(jié)果表明,交叉反應(yīng)率為0.77%至49.92%的FQs所對應(yīng)的HCA存在下的ELISA靈敏度高于同源包被原存在下的ELISA靈敏度。隨后測定了其他四種FQs的交叉反應(yīng)率及相應(yīng)全抗原存在下的ELISA靈敏度,并利用聚類分析、邏輯回歸等算法對上述結(jié)果進行了統(tǒng)計學(xué)分析,結(jié)果均驗證了上述交叉反應(yīng)率范圍的合理性。在此基礎(chǔ)上,生物膜層干涉及分子模擬結(jié)果也揭示了可通過交叉反應(yīng)率找到潛在的HCA,從而提高ELISA或其他免疫學(xué)分析方法的靈敏度。第七章對全文工作進行了總結(jié),展望了未來提高免疫學(xué)分析方法靈敏度的方向與思路。
劉衛(wèi)華[4]（2019）在《動物源食品中氟甲喹快速免疫檢測技術(shù)的研究》文中提出氟甲喹（flumequine,FLU）是一種動物專用的喹諾酮類抗生素,用于預(yù)防和治療畜禽及水產(chǎn)類動物的疾病。但是,濫用或者超標使用的情況時有發(fā)生,造成動物性食品中的氟甲喹殘留問題,對人類的健康造成極大的危害。世界各國都規(guī)定了動物性食品中氟甲喹殘留的最大限量,作為食品安全監(jiān)管的標準和依據(jù),而建立簡單、快速、高通量的檢測方法也很有必要。本研究采用活潑酯法合成氟甲喹完全抗原,通過免疫動物制備了多克隆抗體,建立了氟甲喹間接競爭酶聯(lián)免疫分析方法（icELISA）;建立了氟甲喹固相膜免疫分析方法;制備了氟甲喹分子印跡膜,并將其作為人工抗體,建立了直接競爭仿生酶聯(lián)免疫分析方法（BELISA）。建立的icELISA法和BELISA法適于大量樣品的快速定量篩查,預(yù)處理簡單,操作方便快速,檢測限低;固相膜免疫分析方法適于快速定性篩查,準確可靠,簡便易操作。氟甲喹完全抗原的合成及多克隆抗體的制備。采用活潑酯法將FLU半抗原與載體蛋白牛血清蛋白（BSA）及卵清蛋白（OVA）偶聯(lián),制備出FLU-BSA（免疫原）和FLU-OVA（包被原）。通過紫外光譜掃描和SDS-PAGE凝膠電泳兩種方法確定人工抗原成功地合成。用免疫原FLU-BSA免疫兩只新西蘭大耳白兔,獲得抗血清（FLU-1和FLU-2）;采用間接競爭ELISA方法測定抗血清效價和親和性,FLU-1與FLU-2效價相當（均為1:12800）,經(jīng)純化后,FLU-1抗體（IC50為0.06 ng/mL）親和性明顯高于FLU-2（IC50為0.21 ng/mL）,故選擇FLU-1抗體進行后續(xù)免疫檢測試驗。氟甲喹殘留的ELISA檢測方法的建立。采用間接競爭ELISA法優(yōu)化FLU的檢測條件,最優(yōu)條件為:包被量10 μg/mL,抗血清稀釋度1:3200,封閉液為1%明膠,酶標二抗稀釋度1:2500,pH值7.5,反應(yīng)緩沖液是1×PBS,乙腈含量是0%～20%。在最優(yōu)條件下建立間接競爭ELISA方法,該方法的IC50為2.03 ng/mL,最低檢出限達1.21×10-4 ng/mL,具有比較高的準確性和靈敏度。將FLU與其結(jié)構(gòu)類似物左氧氟沙星（LVX）、加替沙星（GAT）和氧氟沙星（OFX）進行交叉反應(yīng)試驗,交叉反應(yīng)率都很低,抗體特異性好。選擇牛肉、豬肉、蝦肉、牛奶、熟豬肝和生豬肝作為試樣,研究基質(zhì)影響的消除方法。牛肉、豬肉和牛奶經(jīng)過超聲提取后以PBS稀釋10倍,蝦肉需稀釋20倍,豬肝等內(nèi)臟類需要稀釋40倍,就可以有效地消除基質(zhì)的影響。在加標回收試驗中,在三個加標水平上的回收率在72.80%～97.30%之間。用HPLC法對建立的間接競爭ELISA法進行驗證,其檢測結(jié)果之間的擬合程度很高,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.96,這可以說明所建立的ELISA方法準確、可靠、簡便、快速,可用于動物性食品中氟甲喹殘留的快速定量分析。氟甲喹殘留的固相膜免疫檢測方法的建立。采用檸檬酸三鈉還原法制備出來膠體金,以膠體金標記FLU抗體制備出來免疫金。以硝酸纖維素（NC）膜作為固相載體,分別包被上FLU-OVA、酶標二抗作為T線、C線,對測定條件進行的優(yōu)化結(jié)果是:封閉液為5%脫脂乳、酶標二抗最佳稀釋倍數(shù)為40倍、包被量1.0 μg、免疫金稀釋度為1:5（v/v）、金標抗體與待測溶液的混合比例為1:5（v/v）在最優(yōu)條件下,制成FLU膠體金標記免疫層析固相膜,最低檢出限為40 μg/L。對牛肉、豬肉、蝦肉、牛奶、熟豬肝、生豬肝進行基質(zhì)影響的消除試驗,牛肉、豬肉、蝦肉基質(zhì)的提取液需用1×PBS緩沖液稀釋20倍,牛奶、熟豬肝、生豬肝稀釋40倍,可以消除基質(zhì)的影響。加標回收試驗的結(jié)果用肉眼觀察即可看到有明顯的梯度,說明方法有效。建立的膠體金標記固相膜免疫檢測方法是一種定性檢測方法,在實際的檢測工作中無需儀器,目測結(jié)果即可,時間較短,適用于大批量樣品的現(xiàn)場快速定性篩選。氟甲喹殘留的BELISA檢測方法的建立。通過分子動力學(xué)模擬,確定氟甲喹與甲基丙烯酸（MAA）結(jié)合的最佳摩爾比為1:2。以FLU為模板,以MAA作為功能單體,二甲基丙烯酸乙二醇酯（EGDMA）作為交聯(lián)劑,偶氮二異丁腈（AIBN）作為引發(fā)劑,以96孔酶標板作為固相載體,制備出了分子印跡膜（MIPs）。通過靜態(tài)吸附試驗和吸附動力學(xué)試驗對其進行表征,結(jié)果表明分子印跡膜已經(jīng)成功合成。采用活潑酯法制備酶標抗原,對BELISA反應(yīng)體系的條件進行優(yōu)化,確定的最優(yōu)條件是:酶標抗原的稀釋倍數(shù)為8000倍,pH為7.1,甲醇含量為5%的PBST緩沖液。在此條件下建立直接競爭BELISA法,該方法檢測線性范圍是1～100000 ng/mL,靈敏度IC50為140.62 ng/mL,檢測限為1.09ng/mL。與結(jié)構(gòu)類似物左氧氟沙星（LVX）、氧氟沙星（OFX）和依諾沙星（ENX）的交叉反應(yīng)率分別為17.8%、17.5%和11.0%,表明該方法的特異性較高。采用直接稀釋法進行基質(zhì)消除,蝦肉樣品提取液經(jīng)過20倍稀釋、牛肉樣品提取液經(jīng)過40倍稀釋后即可消除基質(zhì)的干擾。三個加標水平下的回收率在80.7%～92.3%之間,這即可表明此樣品前處理方法可行。通過HPLC法驗證該方法的準確性,結(jié)果表明,HPLC與BELISA呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2在0.98以上,這說明建立的BELISA方法準確、可靠,可以用于動物性食品中氟甲喹殘留的快速檢測。
鄭茗予[5]（2019）在《鴨疫里默氏菌對喹諾酮類抗生素耐藥機制的研究》文中研究表明鴨疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一種可感染鴨、鵝、火雞及其他禽類,對養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失的細菌性病原。喹諾酮藥物是目前臨床大量使用的藥物之一。而近年來,鴨疫里默氏菌對喹諾酮藥物的耐藥情況愈發(fā)嚴重。本研究在對RA分離株進行耐藥表型檢測的基礎(chǔ)上,探究了RA對喹諾酮類藥物的耐藥機制,主要結(jié)果如下:1.鴨疫里默氏菌對喹諾酮類藥物的耐藥表型檢測本文首先測定162株鴨疫里默氏菌對第一代喹諾酮藥物萘啶酸及第三代喹諾酮藥物環(huán)丙沙星、恩諾沙星和氧氟沙星四種抗生素的MIC值。相比1979年前的分離株,1979年后的分離株大多對三種氟喹諾酮類藥物的抗性明顯提升。我們選擇了分離自20132018年、來自48個養(yǎng)殖場的137株鴨疫里默氏菌進行了喹諾酮耐藥情況分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),137株鴨疫里默氏菌臨床分離株對上述四種喹諾酮藥物的耐藥比率分別100%（137/137）、97.8%（134/137）、99.3%（136/137）及97.8%（134/137）。2.鴨疫里默氏菌DNA促旋酶和Ⅳ型拓撲異構(gòu)酶耐藥突變作用對37株全基因組測序菌株進行序列比對,匯總各菌株gyr A、gyrB、par C、parE基因上的突變位點。并利用PCR擴增剩余125株菌株上述基因片段,比對分析各菌株的基因突變及氨基酸替換情況。結(jié)果顯示,高頻突變位點主要有GyrA中第83位氨基酸,包括兩種突變類型S83R和S83I,總突變頻率為93.2%,第465位氨基酸C465R,突變頻率為42.6%;在ParC中第586位氨基酸,包括兩種突變類型:V586T和V586A,總突變頻率為41.4%,第799（V799A）位氨基酸,突變頻率為72.2%,第811位氨基酸I811V,突變頻率為67.3%;在ParE中第357（V357I）、358（H358Y）、541（R541K）、564（D564K）位氨基酸突變頻率分別為80.9%、80.9%、82.1%、44.4%。利用體外誘導(dǎo)突變技術(shù)獲得喹諾酮耐藥突變株,并利用定點突變和自然轉(zhuǎn)化技術(shù)分別構(gòu)建鴨疫里默氏菌高頻位點定點突變株與過表達菌株,結(jié)果顯示,誘導(dǎo)突變僅分離得S83R突變株,其對萘啶酸MIC上升了8倍,對三種氟喹諾酮藥物MIC上升512-1024倍;定點突變株只有ATCC 11845 gyrA（S83I）和ATCC 11845 gyrA（S83I）+parE（V357I+H358Y+R541K）兩株對三種氟喹諾酮類抗生素的MIC有48倍上升,但對萘啶酸MIC無明顯變化,其余定點突變株對四種喹諾酮藥物的MIC無明顯變化;過表達菌株與親本菌株相比,其MIC無顯著改變。3.鴨疫里默氏菌對喹諾酮類藥物外排作用研究利用羰基氰化物間氯苯腙（CCCP）和維拉帕米（VP）兩種外排泵抑制劑對鴨疫里默氏菌全基因組測序菌株中的24株菌株進行外排泵抑制試驗,與未加入外排泵抑制劑的MIC結(jié)果相比,RA RCAD0131、RCAD0181以及RCAD0377株對三種氟喹諾酮藥物敏感性明顯下降,表明喹諾酮耐藥相關(guān)外排泵參與了鴨疫里默氏菌對喹諾酮類藥物的抗性機制。綜上,本研究檢測了RA對喹諾酮類藥物的耐藥情況,并證明靶位點突變及喹諾酮相關(guān)外排泵共同介導(dǎo)鴨疫里默氏菌對喹諾酮類藥物的抗性。
楊玲[6]（2019）在《沙門菌多藥外排蛋白AcrB突變體的耐藥性和耐藥機制研究》文中認為氟喹諾酮類藥物是治療侵襲性沙門氏菌感染的重要藥物。在沙門菌中,氟喹諾酮類耐藥性的發(fā)展往往是多種耐藥機制的累積和協(xié)同作用的結(jié)果。AcrB是一個重要的多重耐藥蛋白,已有研究表明其與細菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥性有關(guān)。為了了解臨床耐藥沙門菌中外排蛋白AcrB在細菌對氟喹諾酮耐藥發(fā)展過程中的作用和作用機制,本研究開展了以下實驗。選取了實驗室保存的108株于2009年至2014年分離自動物臨床的具有不同環(huán)丙沙星耐藥水平的沙門菌,對菌株的acr B基因進行了突變位點的檢測。研究發(fā)現(xiàn),所有環(huán)丙沙星高水平耐藥菌株均攜帶AcrB突變。其中,12株（54.5%,12/22）攜帶AcrBP319L突變,10株（45.5%,10/22）攜帶AcrBM78I/P319L雙突變。藥物敏感性檢測結(jié)果顯示,所有攜帶AcrB突變的菌株均為多重耐藥菌。對攜帶AcrB突變的菌株進行了喹諾酮耐藥機制和廣譜頭孢菌素耐藥機制的檢測,包括QRDR突變、PMQR基因和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）基因的檢測。結(jié)果顯示,所有攜帶AcrB突變的菌株均檢測到gyr A雙突變和par C單突變。PMQR基因的檢測結(jié)果顯示,aac（6’）-Ib-cr的檢出率最高（77.3%）,其次是oqx AB（50%）。在攜帶AcrBM78I/P319L雙突變的菌株中,oqx AB的檢出率較高（90%）。當PAβN存在時,菌株對氟喹諾酮類藥物的MIC值降低2～64倍,表明外排泵對沙門菌高水平氟喹諾酮耐藥性的產(chǎn)生具有重要的作用。此外,所有的攜帶AcrBM78I/P319L雙突變菌株均對廣譜頭孢菌素耐藥,而且耐藥性的產(chǎn)生主要是由于攜帶了含有blaCTX-M-27的類P1噬菌體。研究構(gòu)建了AcrBWT、M78I、P319L和M78I/P319L蛋白的表達載體。檢測了不同AcrB突變體的生長曲線和對0.1%、1%膽鹽的耐受能力;檢測了構(gòu)建菌株對不同AcrB底物的敏感性。研究結(jié)果顯示,攜帶AcrBP319L和AcrBM78I/319L突變的菌株對高濃度膽鹽更耐受。AcrB突變體的藥物敏感性結(jié)果顯示,AcrBM78I和P319L突變均可增強細菌對氟喹諾酮類藥物、紅霉素、新生霉素和膽鹽的耐藥性。使用圓二色譜檢測了不同AcrB蛋白在195～250nm波長范圍內(nèi)的圓二色光譜曲線和在4℃～98℃溫度范圍內(nèi)的穩(wěn)定性;采用BN-PAGE實驗檢測了AcrB三聚體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。圓二色光譜結(jié)果表明,沙門菌的AcrB蛋白與大腸桿菌的AcrB蛋白的二級結(jié)構(gòu)的組成是有差異的。AcrBM78I和AcrBP319L對AcrB的圓二色光譜的影響較小。AcrBM78I/P319L雙突變與AcrBWT的差異相對較大。根據(jù)θ222nm/θ208nm的比值,我們猜測AcrBM78I/P319L雙突變體蛋白的某些局部結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,其無規(guī)卷曲的比例相比于AcrBWT有所增加。熱穩(wěn)定性研究結(jié)果表明,盡管大腸桿菌AcrBWT與沙門菌AcrBWT的氨基酸序列相似性很高（95%）,但是大腸桿菌AcrBWT的熱穩(wěn)定性比沙門菌的AcrBWT低,它們的熔解溫度分別為60.2℃和63.9℃。沙門菌AcrBP319L（63.0℃）突變體的熔解溫度比AcrBWT的降低了近1℃,而AcrBM78I/319L（63.4℃）雙突變的熔解溫度又有所恢復(fù),這在一定程度上說明突變引起了蛋白某些局部結(jié)構(gòu)的變化。BN-PAGE結(jié)果表明,大腸桿菌AcrB蛋白的三聚體穩(wěn)定性要遠遠高于沙門菌AcrB三聚體的穩(wěn)定性。AcrBM78I和P319L突變沒有改變AcrB三聚體的穩(wěn)定性。通過同源建模獲得了沙門菌AcrB和Acr AB蛋白的模擬結(jié)構(gòu)。通過定點突變對AcrBM78I的耐藥機制進了研究;采用BODIPY-FL-馬來酰胺熒光底物標記的方法研究了AcrBM78I突變對底物轉(zhuǎn)運通路中重要的底物結(jié)合位點與底物結(jié)合能力的影響。研究表明,AcrBM78I突變體的耐藥性增強是由于78位的氨基酸疏水性增強引起的。熒光標記實驗結(jié)果顯示,AcrB的78位氨基酸不參與和底物的直接結(jié)合。AcrBM78I的突變使得底物與外排通路中的某些氨基酸位點結(jié)合增強（如位點Q89、E673和F617）,而對另一些氨基酸的結(jié)合減弱（如S134和N274）。通過對Acr A中367位和368位氨基酸進行定點突變,并分析其藥物敏感性和AcrB的319位P和L分別與它們的結(jié)構(gòu)關(guān)系發(fā)現(xiàn),AcrBP319L的突變導(dǎo)致細菌的耐藥性增加,是因為氨基酸L比P具有更長和更靈活的側(cè)鏈,這使得AcrB與Acr A的相互作用更靈敏,使AcrB的功能性蠕動更加靈活,從而具有更高效的底物外排能力。綜上所述,本研究表明AcrBM78I和P319L的突變對臨床沙門菌的高水平氟喹諾酮類藥物耐藥性和多重耐藥性具有重要的作用。AcrBM78I和P319L突變的產(chǎn)生具有一定的流行性。更多的研究需要致力于對臨床菌株中AcrB的突變情況進行檢測。
李圩田[7]（2019）在《氟代喹諾酮的結(jié)構(gòu)修飾與抗菌活性評價》文中指出喹諾酮藥物抗菌譜廣、活性好,備受臨床醫(yī)生和科研工作者青睞。但隨著抗生素的廣泛使用,細菌的耐藥性不斷出現(xiàn),找到更好的抗菌藥物已迫在眉睫。本論文圍繞喹諾酮的結(jié)構(gòu)修飾及抗菌藥理活性評價,進行了如下研究:一、DOTA修飾喹諾酮的合成、表征及抗菌活性評價磷壁酸是革蘭氏陽性細菌的細胞壁的主要成分之一,其表面攜帶大量的負電荷,可以富集細胞周圍的金屬離子。Mg2+通過影響細菌合成酶的活性進而影響細菌的分裂能力。DOTA作為金屬離子螯合劑,具有良好的水溶性和生物相容性,基于DOTA修飾的藥物分子,不僅水溶性發(fā)生改變,同時可以通過分子間的氫鍵作用、絡(luò)合配位作用進一步增加細菌周圍藥物濃度從而影響細菌的活力?；谠摲N考慮,我們設(shè)計合成了 21個喹諾酮化合物,其中14個全新結(jié)構(gòu),水溶性DOTA修飾的化合物7個。活性數(shù)據(jù)表明:化合物 4c（MRSA,MIC:1.56μg/mL;MBC:6.25μg/mL）具有良好的抗菌活性,沒有細胞毒性,動物實驗表明,4c體內(nèi)活性優(yōu)于上市藥物美羅培南。二、小分子結(jié)構(gòu)修飾巴洛沙星的合成、表征及抗菌活性評價我們基于藥物代謝途徑（乙?；?甲基化,氨基酸化等）及雜環(huán)小分子（三氮唑、呋喃、噻吩等）基團,合成了 22個結(jié)構(gòu)全新的小分子喹諾酮化合物,并通過HRMS,1HNMR,13CNMR結(jié)構(gòu)表征?？咕钚越Y(jié)果表明:2-e,3-e,4-e三個化合物對MRSA抗菌活性優(yōu)于巴洛沙星,尤其是化合物2-e（MRSA,MIC:0.0195 μg/mL，MBC:0.039 μg/mL,P.aeruginnosa,MIC:0.039 μg/mL,MBC:0.078 μg/mL）對（MRSA,P.aeruginosa）的活性均優(yōu)于母體化合物巴洛沙星,且沒有明顯的細胞毒性,對紅細胞沒有溶血作用,形貌學(xué)研究也表明:2-e是一個很好的抗菌苗頭化合物,因此值得進一步研究。三、唾諾酮藥物光動力抗菌的初步探索喹諾酮化合物在臨床上具有光敏化毒、副作用,我們通過對比不同光照條件下司帕沙星（SPFX）,加替沙星（GFLX）對MRSA、P.aeruginosa、Ecoli光動力研究,結(jié)果得出光動力手段的引入并不會損傷細胞,同時可以一定程度上增加GFLX和SPFX的抗菌活性,但提升能力有限,因而GFLX和SPFX藥物在臨床上具有很弱的光毒性,相對安全。
姚凱[8]（2016）在《免疫親和攪拌棒的制備及其在喹諾酮殘留檢測中的應(yīng)用》文中研究指明喹諾酮類藥物（Quinolones,QNs）具有良好的抗菌作用,被廣泛用于治療人和動物的感染類疾病。其在動物源性食品中的藥物殘留,對消費者健康造成巨大的威脅,急需建立一種特異性的、靈敏的和高效的方法檢測牛奶中的QNs。本研究將免疫親和色譜（Immunoaffinity chromatography,IAC）與固相微萃?。⊿olid phase microextraction,SPME）聯(lián)用,把單克隆抗體固定在玻璃棒上,得到免疫親和攪拌棒。該攪拌棒使用更加方便、特異性強,可直接用于牛奶中QNs的提取和凈化。本研究使用簇特異性QNs單克隆抗體,制備了可以提取和凈化11種QNs（麻保沙星、單諾沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、奧比沙星、恩諾沙星、洛美沙星、氧氟沙星、氟羅沙星和氟甲喹）的免疫親和攪拌棒。制備過程如下:將玻璃棒的下半部分浸入到70 m L 98%的濃硫酸和30 m L 30%的雙氧水混合溶液中,待混合液冷卻至室溫,80℃水浴鍋加熱1 h后,水、純乙醇和水依次沖洗玻璃棒,此過程要特別注意防止污染。將玻璃棒的清洗部分用APTES乙醇溶液（5 m L APTES、5 m L水和90 m L純乙醇）在室溫下硅烷化24 h,之后用水和純乙醇沖洗。將玻璃棒放入70℃真空干燥箱中氮吹過夜或15 h,用2.5%戊二醛溶液進行活化7 h,用水沖洗。沖洗過后,玻璃棒置入10 m L抗體PBS溶液（0.5 mg/m L）中2.5 cm,4℃下用磁力攪拌器攪拌24 h。萃取和洗脫過程中萃取時間、攪拌速率、洗脫液組成、洗脫時間和洗脫液體積等多項參數(shù)進行優(yōu)化。QNs的柱容量為0.35～2.15 pmol/cm2。免疫親和攪拌棒在使用15次后,柱容量仍可以保持初始柱容量的29.3%～40.2%。建立了牛奶中11種QNs殘留檢測的免疫親和攪拌棒吸附微萃取-高效液相色譜-熒光法（SBSME-HPLC-FLD）。將攪拌棒放入牛奶中,30 r/min搖床攪拌30 min,用超純水沖洗玻璃棒,最后放入900μL甲醇和PBS（8:2,v/v）的混合液中洗脫20 min,HPLC-FLD檢測。添加濃度為1 ng/g時,11種QNs的平均回收率為11.8%～40%。建立的方法對QNs的檢測限為0.05～0.1 ng/g,日內(nèi)變異系數(shù)和日間變異系數(shù)分別為3.2%～11.9%和5.2%～12.5%。
徐田麗[9]（2016）在《諾氟沙星單克隆抗體的制備和膠體金試紙條的研制》文中研究表明諾氟沙星（NOR）是喹諾酮類的一種,廣泛的用于動物各種感染性疾病的治療,然而NOR在禽畜產(chǎn)品的殘留嚴重危害人們的健康。免疫學(xué)分析方法是基于抗原抗體的反應(yīng),具有操作簡單、特異性強、靈敏度高的特點,并且可快速的檢測多種樣品。因此,本實驗將通過制備抗NOR單克隆抗體的免疫學(xué)分析方法,檢測樣品中的NOR的含量。將小分子抗原諾氟沙星NOR通過碳二亞胺法與載體蛋白BSA、OVA進行偶聯(lián)。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA對3只雌性小鼠進行免疫后,利用細胞融合技術(shù)制備雜交瘤細胞,用間接ELISA法和間接競爭ELISA法篩選陽性細胞進行克隆,得到3株穩(wěn)定分泌抗體的單克隆細胞株,分別命名為7C4,8G3,11G7。檢測細胞的上清液和純化后的腹水效價,分別為1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。對三株細胞的亞型鑒定為IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的標準競爭曲線計算得IC50值為31.225 ng,其檢測線性范圍為5.011-630.95 ng/mL,最低檢出量為2.75 ng。親和力常數(shù)Kaff為4.6×108。諾氟沙星單克隆抗體與環(huán)丙沙星（27.22%）、恩諾沙星（11.29%）、奧比沙星（11.03%）、氧氟沙星（9.73%）、達氟沙星（7.38%）、沙拉沙星（2.57%）、二氟沙星（0.61%）幾種抗菌藥有較低的交叉反應(yīng)率。將其中一株單抗7C4制備膠體金試紙條。本實驗選擇用1.8 mL1%檸檬酸三鈉還原100 mL 0.01%氯金酸制備膠體金,經(jīng)紫外可見光譜520 nm處掃描得知膠體金的粒徑為18.41 nm。通過對影響膠體金標記的最佳pH、最佳標記蛋白量進行研究,結(jié)果為最佳pH為每毫升膠體金加入5μl的2 mol/L K2CO3,最佳抗體加入量每毫升膠體金中加入6μg濃度為1μg/μl的抗體。當金標抗體稀釋3倍時,有最佳顯色現(xiàn)象。組裝膠體金試紙條的NC膜使用Sarturius CN 95,檢測線上用濃度為0.4 mg/mL的諾氟沙星單克隆抗體包被,質(zhì)控線用0.6 mg/mL的羊抗鼠二抗劃線。所制得的膠體金試紙條的靈敏度為30 ng/mL。在牛奶和魚肉的實際樣品檢測中,當樣品中含有的NOR濃度大于50 ng/mL時可被檢出。
劉儒彪[10]（2014）在《動物源食品中沙拉沙星ELISA快速檢測方法的建立》文中進行了進一步梳理沙拉沙星（Sarafloxacin，SARA）是新型的動物專用藥，于1995年在美國上市，是美國第一個被批準用于動物性食品的氟喹諾酮類藥物，該藥是廣譜抗菌藥。由于其具有良好的殺菌效果、且價格低廉而被廣泛使用。雖然SARA被批準用于對大腸桿菌等病菌的治療，但是若氟喹諾酮類藥在動物源食品中殘留而被人食用，可能會加速人類病原體對抗生素耐藥性。國內(nèi)規(guī)定SARA的最高殘留量為80μg/Kg。目前，氟喹諾酮類藥物的檢測的常規(guī)方法包括紫外分光光度測定、高效液相色譜、時間分辨化學(xué)發(fā)光法等。以上檢測方法的精確度和靈敏度都很高，這些檢測方法需要的設(shè)備比較昂貴，且樣品前期處理較為繁瑣，只能限于實驗室內(nèi)檢測，不能滿足現(xiàn)場快速監(jiān)測食品中殘留的需要，故需建立一種能快速準確檢測SARA殘留且成本較低的檢測方法。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是一種具有簡便易操作、檢測快，靈敏度和準確度高，能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測等特點的檢測方法，且成本較低，能夠彌補大型儀器所帶來的不足。近年來隨著ELISA的不斷發(fā)展，ELISA在農(nóng)藥和獸藥快速檢測方面已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。建立SARA的ELISA檢測方法需要制備SARA的單克隆抗體，由于SARA是小分子物質(zhì)，屬于半抗原，自身有反應(yīng)原性卻無免疫原性，所以SARA需要與大分子物質(zhì)相結(jié)合，通過人工的方法合成免疫原，SARA才能獲得免疫原性，然后通過免疫小鼠獲得小鼠多抗血清，進而制備SARA單克隆抗體和建立ELISA檢測方法。本研究根據(jù)ELISA在檢測方面的特點和優(yōu)點，通過人工合成免疫原SARA-BSA，免疫小鼠而獲得高親和特異性多抗血清，為制備SARA單克隆抗體和建立SARA ELISA檢測方法奠定基礎(chǔ)。1．人工抗原的合成與鑒定采用碳二亞胺法（EDC法），分別將沙拉沙星（SARA）與牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)，制備了免疫原SARA-BSA和包被原SARA-OVA。通過使用紫外掃描法（UV）、SDS-PAGE凝膠電泳對免疫原SARA-BSA和包被原SARA-OVA進行了初步鑒定。根據(jù)鑒定結(jié)果，初步證明SARA人工抗原制備成功。2．單克隆抗體的制備與鑒定選擇多克隆抗體效價高、特異性好的小鼠進行融合，利用單克隆抗體技術(shù)，結(jié)合ELISA篩選體系，最終成功篩選出可以穩(wěn)定產(chǎn)生親和力好、特異性強的抗SARA單克隆抗體的雜交瘤細胞株2株，其編號分別為1G3、3H3，用體內(nèi)誘生腹水法制備腹水，經(jīng)純化后鑒定，抗體的效價為1：5.12×105，IC50=6.34ng/mL，親和常數(shù)分別為8.55×108L/mol，SARA抗體與諾氟沙星的交叉反應(yīng)率為1.06%，與同類藥物及其他類藥物的競爭交叉反應(yīng)率均小于0.5%。3．SARA間接競爭ELISA快速檢測試劑盒的組裝利用制備的SARA單克隆抗體和間接競爭ELISA檢測原理，組裝了SARA間接競爭ELISA試劑盒。試劑盒的標準曲線呈典型S型，相關(guān)線性回歸方程為y=-0.3848x+0.7363，R2為0.9901，根據(jù)回歸方程計算出IC50=4.11ng/mL。試劑盒的特異性很好，與其他藥物交叉反應(yīng)率低于1%，檢測限為2.06ng/mL，對雞肝和雞肉進行2ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL等4個梯度的標準品添加試驗，添加試驗的平均回收率分別為85.3%和88.7%，批內(nèi)和批間平均變異系數(shù)均小于15%，在4℃下保存180d無顯著變化。研制的試劑盒具有很好的特異性、重復(fù)性、靈敏度、精密度、準確性及穩(wěn)定性?？梢詫崿F(xiàn)對SARA殘留快速檢測的需要。
二、三種氟喹諾酮藥物的血清膽汁殺菌效價比較（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、三種氟喹諾酮藥物的血清膽汁殺菌效價比較（論文提綱范文）
（1）齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細菌性溶血素活性作用及其機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一篇 文獻綜述 |
| 第1章 革蘭氏陰性菌耐藥性研究進展 |
| 1.1 腸桿菌科細菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 1.2 銅綠假單胞菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 1.3 不動桿菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 第2章 金黃色葡萄球菌耐藥性研究進展 |
| 2.1 金黃色葡萄球菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性研究 |
| 2.2 金黃色葡萄球菌對萬古霉素耐藥性研究 |
| 2.3 金黃色葡萄球菌對氨基糖苷類抗生素耐藥性研究 |
| 2.4 金黃色葡萄球菌對四環(huán)素類抗生素耐藥性研究 |
| 2.5 金黃色葡萄球菌對磷霉素耐藥性研究 |
| 2.6 金黃色葡萄球菌對氯霉素耐藥性研究 |
| 2.7 金黃色葡萄球菌對氟喹諾酮類抗生素耐藥性研究 |
| 2.8 金黃色葡萄球菌對磺胺類抗生素耐藥性研究 |
| 2.9 金黃色葡萄球菌對其它抗生素耐藥性研究 |
| 第3章 細菌性溶血素研究進展 |
| 3.1 金黃色葡萄球菌溶血素在其致病過程中的作用研究 |
| 3.2 單增李斯特菌溶血素(LLO) |
| 3.3 肺炎球菌溶血素(PLY) |
| 3.4 豬鏈球菌溶血素(SLY) |
| 3.5 產(chǎn)氣莢膜梭菌溶血素(PFO) |
| 3.6 大腸桿菌溶血素 |
| 第4章 主要五環(huán)三萜類化合物的藥理學(xué)作用研究進展 |
| 4.1 齊墩果酸 |
| 4.2 熊果酸 |
| 4.3 山楂酸 |
| 4.4 科羅索酸 |
| 4.5 其它五環(huán)三萜化合物 |
| 第5章 新型抗耐藥菌感染藥物研究進展 |
| 5.1 現(xiàn)有抗生素的改造和聯(lián)合使用研究 |
| 5.2 新型抗菌藥物的研究 |
| 5.3 天然化合物在抗耐藥菌感染中的替代策略研究 |
| 第二篇 研究內(nèi)容 |
| 第1章 廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的篩選 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 小結(jié) |
| 第2章 齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體外協(xié)同作用研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第3章 齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同作用研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第4章 齊墩果酸抑制細菌性溶血素活性作用的發(fā)現(xiàn) |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第5章 齊墩果酸抑制Β-內(nèi)酰胺酶和細菌性溶血素活性作用機制的確證 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 本碩博連讀期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文 |
| 導(dǎo)師簡介 |
| 作者簡介 |
| 致謝 |
（2）達氟沙星單克隆抗體的制備及PELISA方法的建立（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語索引 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 達氟沙星的理化性質(zhì) |
| 1.3 達氟沙星的作用機制 |
| 1.4 達氟沙星的限量標準 |
| 1.5 達氟沙星的應(yīng)用現(xiàn)狀 |
| 1.6 達氟沙星檢測技術(shù)的研究進展 |
| 1.6.1 高效液相色譜法 |
| 1.6.2 液相-質(zhì)譜聯(lián)用法 |
| 1.6.3 毛細管電泳法 |
| 1.6.4 熒光分光光度法 |
| 1.6.5 旋光法 |
| 1.6.6 免疫層析檢測技術(shù) |
| 1.6.7 酶聯(lián)免疫吸附法 |
| 1.7 研究內(nèi)容及意義 |
| 第2章 抗達氟沙星單克隆抗體的制備及評價 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 實驗材料 |
| 2.2.1 實驗儀器設(shè)備 |
| 2.2.2 實驗材料試劑 |
| 2.2.3 實驗試劑的配制 |
| 2.3 實驗方法 |
| 2.3.1 達氟沙星免疫原與包被原的制備 |
| 2.3.2 小鼠免疫及血清評價方案 |
| 2.3.3 細胞融合 |
| 2.3.4 腹水制備 |
| 2.3.5 單克隆抗體純化 |
| 2.3.6 抗體評價 |
| 2.4 結(jié)果與分析 |
| 2.4.1 免疫原表征 |
| 2.4.2 小鼠免疫應(yīng)答 |
| 2.4.3 陽性雜交瘤細胞株的篩選 |
| 2.4.4 抗體濃度測定 |
| 2.4.5 抗體評價工作點的優(yōu)化 |
| 2.4.6 抗體標準曲線的建立 |
| 2.4.7 抗體特異性的評價 |
| 2.5 小結(jié)及展望 |
| 第3章 基于三角銀納米片的PELISA靈敏檢測氟喹諾酮類藥物* |
| 3.1 前言 |
| 3.2 實驗材料 |
| 3.2.1 實驗材料試劑 |
| 3.2.2 實驗儀器設(shè)備 |
| 3.2.3 實驗試劑的配制 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 三角銀納米片(AgNPRs)的合成 |
| 3.3.2 生物素化單克隆抗體的制備 |
| 3.3.3 生物素化葡萄糖氧化酶的制備 |
| 3.3.4 基于AgNPRs的pELISA |
| 3.3.5 基于TMB的ELISA |
| 3.3.6 pELISA的特異性分析 |
| 3.3.7 回收率分析 |
| 3.4 結(jié)果與分析 |
| 3.4.1 檢測原理 |
| 3.4.2 GOx催化刻蝕AgNPRs的表征 |
| 3.4.3 Biotin-mAb、Biotin-GOx的表征 |
| 3.4.4 關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)化 |
| 3.4.5 基于AgNPRs刻蝕的pELISA的性能分析 |
| 3.4.6 基于AgNPRs刻蝕的pELISA在牛奶基質(zhì)中的性能分析 |
| 3.5 結(jié)論 |
| 第4章 結(jié)論與展望 |
| 4.1 結(jié)論 |
| 4.1.1 抗DAN單克隆抗體的制備及評價 |
| 4.1.2 基于AgNPRs的pELISA靈敏檢測DAN |
| 4.2 展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄1 儀器設(shè)備 |
| 附錄2 實驗試劑 |
| 個人簡介 |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
（3）基于新型標記物及異源競爭系統(tǒng)提高免疫學(xué)分析方法靈敏度的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語索引 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 方法學(xué)概述 |
| 1.1.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) |
| 1.1.2 免疫層析法(LFI) |
| 1.1.3 ELISA及LFI在食品安全檢測中的應(yīng)用 |
| 1.2 氟喹諾酮類藥物及其檢測方法研究進展 |
| 1.2.1 理化性質(zhì)及藥理作用 |
| 1.2.2 FQs殘留的毒性 |
| 1.2.3 限量標準 |
| 1.2.4 喹諾酮類藥物檢測技術(shù)的研究 |
| 1.3 磺胺類藥物及其檢測方法研究進展 |
| 1.3.1 理化性質(zhì)及藥理作用 |
| 1.3.2 SAs殘留的毒性 |
| 1.3.3 限量標準 |
| 1.3.4 磺胺類藥物檢測技術(shù)的研究 |
| 1.4 新型信號輸出納米材料研究進展 |
| 1.5 異源競爭模式研究進展 |
| 1.6 主要的研究內(nèi)容及意義 |
| 1.6.1 研究內(nèi)容 |
| 1.6.2 研究意義 |
| 第2章 時間分辨熒光免疫層析法超靈敏檢測生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留 |
| 2.1 主要試劑材料與儀器設(shè)備 |
| 2.1.1 試劑材料 |
| 2.1.2 儀器設(shè)備 |
| 2.1.3 緩沖溶液及其配制 |
| 2.2 實驗方法與步驟 |
| 2.2.1 檢測抗原的制備與表征 |
| 2.2.2 EuNP的表征 |
| 2.2.3 EuNP-mAb探針的制備與表征 |
| 2.2.4 抗原抗體親和力的測定 |
| 2.2.5 EuNP-LFI的研制 |
| 2.2.6 加標生牛乳樣本的前處理 |
| 2.2.7 試紙條檢測性能的評估 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 兩種檢測抗原的成功制備 |
| 2.3.2 EuNP及EuNP-mAb的表征 |
| 2.3.3 抗體與兩種檢測抗原的親和力 |
| 2.3.4 抗體偶聯(lián)量的優(yōu)化 |
| 2.3.5 PBS中標準曲線的建立 |
| 2.3.6 特異性實驗 |
| 2.3.7 生牛乳中標準曲線的建立 |
| 2.3.8 準確度及精密度評價 |
| 2.4 本章小節(jié) |
| 第3章 雙信號模式同時定性及定量檢測生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留 |
| 3.1 主要實際材料與儀器設(shè)備 |
| 3.1.1 試劑材料 |
| 3.1.2 儀器設(shè)備 |
| 3.1.3 緩沖溶液及其配制 |
| 3.2 實驗方法與步驟 |
| 3.2.1 檢測抗原的制備與表征 |
| 3.2.2 FM-BSA的制備 |
| 3.2.3 AuMB的表征 |
| 3.2.4 AuMB-mAb探針的制備與表征 |
| 3.2.5 AuMB-LFI的研制 |
| 3.2.6 試紙條關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)化 |
| 3.2.7 免疫學(xué)動力學(xué)曲線的建立 |
| 3.2.8 特異性分析 |
| 3.2.9 生牛乳中SMZ的檢測 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 檢測抗原的成功制備 |
| 3.3.2 AuMB及AuMB-mAb的表征 |
| 3.3.3 AuMB-LFI關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)化結(jié)果 |
| 3.3.4 免疫動力學(xué)優(yōu)化結(jié)果 |
| 3.3.5 AuMB-LFI的特異性評估結(jié)果 |
| 3.3.6 生牛乳樣本中SMZ的檢測結(jié)果 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第4章 基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光材料的免疫層析法定量檢測九種動物源性食品中的諾氟沙星殘留 |
| 4.1 主要實際材料與儀器設(shè)備 |
| 4.1.1 試劑材料 |
| 4.1.2 儀器設(shè)備 |
| 4.1.3 緩沖溶液及其配制 |
| 4.2 實驗方法與步驟 |
| 4.2.1 檢測抗原的制備與表征 |
| 4.2.2 AIE熒光微球的制備 |
| 4.2.3 AIEFM-mAb探針的制備與表征 |
| 4.2.4 AIEFM-LFI的研制 |
| 4.2.5 試紙條體系免疫動力學(xué)曲線的建立 |
| 4.2.6 試紙條檢測靈敏度的確定 |
| 4.2.7 九種樣本的前處理方法 |
| 4.2.8 AIEFM-LFI實現(xiàn)對九種樣本中NOR的檢測 |
| 4.3 結(jié)果與討論 |
| 4.3.1 檢測抗原的成功制備 |
| 4.3.2 AIEFM及AIEFM-mAb的表征 |
| 4.3.3 AIEFM-LFI關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化結(jié)果 |
| 4.3.4 免疫動力學(xué)分析結(jié)果 |
| 4.3.5 AIEFM-LFI在PBS中檢測靈敏度的確定 |
| 4.3.6 AIEFM-LFI在九種食品樣本中標準曲線的建立 |
| 4.3.7 回收率實驗 |
| 4.3.8 儀器法確證 |
| 4.4 本章小節(jié) |
| 第5章 半抗原的分子描述符輔助篩選異源競爭抗原以提高ELISA靈敏度 |
| 5.1 儀器與化學(xué)試劑 |
| 5.1.1 材料與試劑 |
| 5.1.2 實驗儀器 |
| 5.1.3 緩沖溶液及其配制 |
| 5.2 實驗方法 |
| 5.2.1 完全抗原的合成與紫外鑒定 |
| 5.2.2 小鼠免疫 |
| 5.2.3 細胞融合 |
| 5.2.4 細胞的培養(yǎng)與篩選 |
| 5.2.5 雜交瘤細胞的亞克隆 |
| 5.2.6 雜交瘤細胞的凍存 |
| 5.2.7 體內(nèi)誘生腹水瘤法制備單克隆抗體 |
| 5.2.8 單克隆抗體的鑒定 |
| 5.2.9 對訓(xùn)練樣本的分子描述符及其相應(yīng)的CR進行機器學(xué)習(xí) |
| 5.2.10 利用測試樣本對分類學(xué)習(xí)結(jié)果進行評價 |
| 5.2.11 分析單克隆抗體與異源競爭抗原的識別能力 |
| 5.2.12 以合適異源競爭抗原作為包被原檢測原料乳中的ENR |
| 5.3 實驗結(jié)果與討論 |
| 5.3.1 全抗原的成功合成 |
| 5.3.2 小鼠抗血清效價鑒定結(jié)果 |
| 5.3.3 單克隆抗體的效價鑒定結(jié)果 |
| 5.3.4 酶聯(lián)免疫吸附法的標準曲線 |
| 5.3.5 抗體與喹諾酮類物質(zhì)的交叉反應(yīng)率 |
| 5.3.6 分子描述符與交叉反應(yīng)率的機器學(xué)習(xí)結(jié)果 |
| 5.3.7 異源競爭抗原存在下的ELISA靈敏度 |
| 5.3.8 抗體與異源競爭抗原的識別能力分析 |
| 5.3.9 異源競爭抗原存在下的實際樣本檢測效果 |
| 5.3.10 SAR-BSA作為包被原時ELISA體系的回收率 |
| 5.3.11 方法學(xué)驗證結(jié)果 |
| 5.4 本章小節(jié) |
| 第6章 交叉反應(yīng)率篩選異源競爭抗原以提高ELISA靈敏度 |
| 6.1 儀器與化學(xué)試劑 |
| 6.1.1 材料與試劑 |
| 6.1.2 實驗儀器 |
| 6.1.3 緩沖溶液及其配制 |
| 6.2 實驗方法與步驟 |
| 6.2.1 完全抗原的合成與紫外鑒定 |
| 6.2.2 ELISA靈敏度的評價 |
| 6.2.3 小分子交叉反應(yīng)率的計算 |
| 6.2.4 不同包被原存在下ELISA靈敏度的測定 |
| 6.2.5 抗體與不同包被抗原之間親和力的測定 |
| 6.2.6 半抗原與賴氨酸的分子對接 |
| 6.2.7 以異源競爭抗原作為包被原實現(xiàn)對生牛乳中NOR的檢測 |
| 6.3 實驗結(jié)果與討論 |
| 6.3.1 全抗原的成功合成 |
| 6.3.2 同源競爭抗原存在下的ELISA靈敏度 |
| 6.3.3 目標異源競爭抗原提高ELISA靈敏度 |
| 6.3.4 抗體與異源競爭抗原之間的親和力對ELISA靈敏度的影響 |
| 6.3.5 抗原決定簇電荷分布對抗原抗體識別的影響 |
| 6.3.6 異源競爭抗原存在下的實際樣本檢測效果 |
| 6.4 本章小節(jié) |
| 第7章 結(jié)論與展望 |
| 7.1 結(jié)論 |
| 7.1.1 時間分辨熒光免疫層析法超靈敏檢測生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留 |
| 7.1.2 雙信號模式同時定性及定量檢測生牛乳中磺胺二甲基嘧啶殘留 |
| 7.1.3 基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光材料的免疫層析法定量檢測九種動物源性食品中諾氟沙星殘留 |
| 7.1.4 半抗原的分子描述符輔助篩選異源競爭抗原以提高ELISA靈敏度 |
| 7.1.5 交叉反應(yīng)率篩選異源競爭抗原以提高ELISA靈敏度 |
| 7.2 展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄A 試劑材料 |
| 附錄B 儀器設(shè)備 |
| 附錄C 緩沖液配方 |
| 攻讀學(xué)位期間研究成果 |
（4）動物源食品中氟甲喹快速免疫檢測技術(shù)的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 研究目的與意義 |
| 1.1.1 動物性食品安全與獸藥殘留 |
| 1.1.2 氟甲喹概述 |
| 1.1.3 研究意義 |
| 1.2 喹諾酮類及氟甲喹檢測方法的研究進展 |
| 1.2.1 喹諾酮類檢測方法的研究進展 |
| 1.2.2 氟甲喹檢測方法的研究進展 |
| 1.3 存在的主要問題 |
| 1.4 主要研究內(nèi)容和方法 |
| 第二章 氟甲喹完全抗原合成及多克隆抗體制備 |
| 2.1 材料與試劑 |
| 2.1.1 藥品及試劑 |
| 2.1.2 緩沖溶液體系 |
| 2.1.3 儀器及設(shè)備 |
| 2.1.4 試驗動物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 完全抗原的合成與鑒定 |
| 2.2.2 氟甲喹多克隆抗體的制備與純化 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 完全抗原的合成與鑒定 |
| 2.3.2 氟甲喹多克隆抗體的制備及純化 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 氟甲喹殘留的ELISA檢測方法研究 |
| 3.1 材料與試劑 |
| 3.1.1 藥品及試劑 |
| 3.1.2 緩沖溶液體系 |
| 3.1.3 儀器設(shè)備 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 包被原最適濃度和抗血清最適稀釋度的確定 |
| 3.2.2 間接競爭ELISA反應(yīng)體系條件的優(yōu)化 |
| 3.2.3 間接競爭ELISA標準曲線的建立 |
| 3.2.4 ELISA方法的穩(wěn)定性 |
| 3.2.5 抗體的特異性 |
| 3.2.6 樣品的測定 |
| 3.2.7 ELISA方法的驗證——高效液相色譜法 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 包被原最適濃度和抗血清最適稀釋度的確定 |
| 3.3.2 間接競爭ELISA反應(yīng)體系條件的優(yōu)化 |
| 3.3.3 間接競爭ELISA法標準曲線的建立 |
| 3.3.4 ELISA方法的穩(wěn)定性 |
| 3.3.5 抗體的特異性 |
| 3.3.6 樣品的測定 |
| 3.3.7 ELISA方法的驗證——高效液相色譜法 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第四章 氟甲喹殘留的固相膜免疫檢測方法研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 藥品及試劑 |
| 4.1.2 儀器及設(shè)備 |
| 4.1.3 試驗樣品 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 膠體金及金標抗體的制備 |
| 4.2.2 膠體金標記固相膜的制備 |
| 4.2.3 膠體金標記固相膜檢測條件的優(yōu)化 |
| 4.2.4 最低檢出限的確定 |
| 4.2.5 樣品的基質(zhì)消除 |
| 4.2.6 樣品的加標回收測定 |
| 4.3 結(jié)果及分析 |
| 4.3.1 膠體金的制備及質(zhì)量鑒定 |
| 4.3.2 膠體金與FLU抗體結(jié)合最適pH值的確定 |
| 4.3.3 膠體金標記最佳抗體加入量的確定 |
| 4.3.4 膠體金標記固相膜檢測條件的優(yōu)化 |
| 4.3.5 最低檢出限的確定 |
| 4.3.6 樣品基質(zhì)的消除 |
| 4.3.7 樣品的加標回收測定結(jié)果 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 第五章 氟甲喹殘留的仿生酶聯(lián)免疫檢測方法研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 藥品及試劑 |
| 5.1.2 儀器及設(shè)備 |
| 5.1.3 實驗樣品 |
| 5.1.4 溶液體系的配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 氟甲喹分子印跡膜(MIPs)的制備及表征 |
| 5.2.2 酶標抗原的制備 |
| 5.2.3 仿生酶聯(lián)免疫分析方法的操作過程 |
| 5.2.4 BELISA反應(yīng)體系條件的優(yōu)化及方法的建立 |
| 5.2.5 樣品檢測 |
| 5.2.6 BELISA方法的驗證 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 氟甲喹分子印跡膜的制備及表征 |
| 5.3.2 仿生酶聯(lián)免疫分析方法的條件優(yōu)化及建立 |
| 5.3.3 方法的特異性 |
| 5.3.4 樣品測定 |
| 5.3.5 BELISA方法的驗證——高效液相色譜法 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 第六章 結(jié)論 |
| 6.1 全文總結(jié) |
| 6.1.1 氟甲喹完全抗原的合成及多克隆抗體的制備 |
| 6.1.2 氟甲喹間接競爭ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用 |
| 6.1.3 氟甲喹固相膜免疫檢測方法的建立與應(yīng)用 |
| 6.1.4 基于分子印跡技術(shù)的氟甲喹仿生酶聯(lián)免疫檢測方法的建立與應(yīng)用 |
| 6.2 本研究的創(chuàng)新點 |
| 6.3 本研究的不足之處 |
| 6.4 展望 |
| 參考文獻 |
| 在讀期間發(fā)表的論文 |
| 附件 |
| 作者簡介 |
| 致謝 |
（5）鴨疫里默氏菌對喹諾酮類抗生素耐藥機制的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 鴨疫里默氏菌概述 |
| 1.1.1 鴨疫里默氏菌病原學(xué) |
| 1.1.2 鴨疫里默氏菌血清型 |
| 1.1.3 鴨疫里默氏菌全基因組測序 |
| 1.1.4 鴨疫里默氏菌耐藥相關(guān)研究 |
| 1.2 細菌對喹諾酮耐藥的研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 喹諾酮類藥物 |
| 1.2.2 喹諾酮類藥物殺菌機制 |
| 1.2.3 喹諾酮類藥物耐藥機制 |
| 1.3 存在的問題及難題 |
| 1.4 研究目的和意義 |
| 第二章 鴨疫里默氏菌對喹諾酮類藥物的耐藥表型檢測 |
| 2.1 試驗材料 |
| 2.1.1 菌株及培養(yǎng)條件 |
| 2.1.2 抗菌藥物及配制 |
| 2.1.3 主要生化試劑 |
| 2.1.4 主要設(shè)備儀器 |
| 2.2 試驗方法 |
| 2.3 試驗結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 鴨疫里默氏菌DNA促旋酶和Ⅳ型拓撲異構(gòu)酶耐藥突變研究 |
| 3.1 試驗材料 |
| 3.1.1 菌株及質(zhì)粒 |
| 3.1.2 抗菌藥物及配制 |
| 3.1.3 主要生化試劑 |
| 3.1.4 主要設(shè)備儀器 |
| 3.1.5 主要生物信息學(xué)軟件 |
| 3.1.6 PCR引物設(shè)計 |
| 3.2 試驗方法 |
| 3.2.1 PCR擴增區(qū)域的確定 |
| 3.2.2 PCR擴增gyrA、parC、parE基因片段并統(tǒng)計突變位點 |
| 3.2.3 鴨疫里默氏菌定點突變株的構(gòu)建 |
| 3.2.4 鴨疫里默氏菌過表達菌株的構(gòu)建 |
| 3.2.5 鴨疫里默氏菌自發(fā)突變試驗 |
| 3.2.6 體外誘導(dǎo)突變試驗 |
| 3.2.7 定點突變株、過表達突變株及誘導(dǎo)突變株MIC值的測定 |
| 3.2.8 定點突變株、過表達突變株及誘導(dǎo)突變株生長曲線的測定 |
| 3.2.9 外排泵抑制試驗 |
| 3.3 試驗結(jié)果 |
| 3.3.1 37 株全基因測序RA的 GyrA、GyrB、ParC、ParE氨基酸序列比對結(jié)果 |
| 3.3.2 突變位點匯總及比對 |
| 3.3.3 鴨疫里默氏菌定點突變株的構(gòu)建 |
| 3.3.4 鴨疫里默氏菌過表達菌株的構(gòu)建 |
| 3.3.5 自發(fā)突變 |
| 3.3.6 體外誘導(dǎo)突變試驗 |
| 3.3.7 外排泵對鴨疫里默氏菌生長抑制試驗結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 總結(jié)與展望 |
| 1 總結(jié) |
| 2 展望 |
| 創(chuàng)新點 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 附錄 |
| 作者簡歷 |
（6）沙門菌多藥外排蛋白AcrB突變體的耐藥性和耐藥機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 沙門氏菌喹諾酮耐藥機制 |
| 1.1.2 Acr AB-Tol C外排泵研究進展 |
| 1.2 研究目的及意義 |
| 1.3 研究技術(shù)路線 |
| 第二章 食品動物源沙門菌耐藥性和耐藥機制檢測 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 AcrB突變檢測結(jié)果和突變菌株的特性 |
| 2.3.2 攜帶Acr B突變菌株的QRDR突變和PMQR基因檢測 |
| 2.3.3 攜帶AcrB突變菌株對其他藥物的耐藥性 |
| 2.3.4 外排泵抑制劑PAβN對藥物MIC的影響 |
| 2.3.5 攜帶AcrB突變菌株對第三代頭孢菌素耐藥的機制 |
| 2.3.6 攜帶AcrB突變菌株的遺傳背景分析 |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 攜帶AcrB突變沙門菌株的特征 |
| 2.4.2 攜帶AcrB突變菌株的喹諾酮耐藥機制 |
| 2.4.3 攜帶AcrB突變菌株對其他類藥物的耐藥性 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 AcrB突變體的耐藥性和適應(yīng)性研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 AcrB突變位點同源性分析 |
| 3.3.2 Acr BWT和 Acr B突變體的構(gòu)建 |
| 3.3.3 AcrB突變體的生長能力 |
| 3.3.4 AcrB突變體對膽鹽的耐受 |
| 3.3.5 AcrB突變對耐藥性的影響 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 AcrB突變對細菌適應(yīng)性的影響 |
| 3.4.2 AcrB突變對藥物敏感性的影響 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 AcrB突變體蛋白的結(jié)構(gòu)和蛋白熱穩(wěn)定性檢測 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 圓二色譜檢測AcrB突變體蛋白的二級結(jié)構(gòu) |
| 4.3.2 AcrB突變體的熱穩(wěn)定性檢測 |
| 4.3.3 AcrB三聚體穩(wěn)定性 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 AcrB突變對蛋白結(jié)構(gòu)和熱穩(wěn)定性的影響 |
| 4.4.2 AcrB突變對蛋白三聚體穩(wěn)定性的影響 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 Acr BM78I和 P319L突變耐藥機制的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料與方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 M78和P319L在 Acr B結(jié)構(gòu)中的位置 |
| 5.3.2 78位的不同氨基酸替代對耐藥性的影響 |
| 5.3.3 熒光底物檢測Acr BM78I突變對底物外排的影響 |
| 5.3.4 Acr BP319L與 Acr A的結(jié)構(gòu)分析 |
| 5.3.5 AcrA位點的保守性分析 |
| 5.3.6 AcrA突變體的構(gòu)建和敏感性檢測 |
| 5.3.7 突變氨基酸位點的結(jié)構(gòu)分析 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 Acr BM78I耐藥突變的機制 |
| 5.4.2 Acr BP319L突變耐藥機制 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 全文討論和結(jié)論 |
| 6.1 全文討論 |
| 6.2 全文結(jié)論 |
| 6.3 本研究的創(chuàng)新點 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 附錄A:發(fā)表文章及參加的相關(guān)學(xué)術(shù)會議 |
| 發(fā)表文章 |
| 參加的相關(guān)學(xué)術(shù)會議 |
| 附錄B:攻讀博士期間所獲獎項 |
（7）氟代喹諾酮的結(jié)構(gòu)修飾與抗菌活性評價（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1 喹諾酮抗菌藥物綜述 |
| 1.1 喹諾酮抗菌藥物發(fā)展概述 |
| 1.2 喹諾酮抗菌藥物作用機制 |
| 1.3 喹諾酮的不良反應(yīng)及耐藥原因 |
| 1.4 喹諾酮結(jié)構(gòu)修飾與活性 |
| 2 課題的提出 |
| 第二章 DOTA修飾喹諾酮的合成、表征及抗菌活性評價 |
| 1 DOTA修飾喹諾酮的設(shè)計思路 |
| 2. 實驗試劑與儀器 |
| 2.1 實驗試劑 |
| 2.2 實驗儀器 |
| 3 實驗部分 |
| 3.1 化學(xué)合成與表征 |
| 3.2 生物活性評價 |
| 4 結(jié)果與討論 |
| 4.1 抗菌活性評價研究 |
| 4.2 化合物含量測定研究 |
| 4.3 化合物水溶性性質(zhì)研究 |
| 4.4 ADMET的預(yù)測研究 |
| 4.5 分子對接研究 |
| 4.6 細胞毒性研究 |
| 4.7 形貌學(xué)研究 |
| 4.8 化合物4c體內(nèi)活性研究 |
| 5 本章小結(jié) |
| 第三章 小分子修飾喹諾酮的合成、表征及抗菌活性評價 |
| 1 小分子修飾喹諾酮的設(shè)計思路 |
| 2. 實驗試劑與儀器 |
| 2.1 實驗試劑 |
| 2.2 實驗儀器 |
| 3 實驗部分 |
| 3.1 化學(xué)合成及表征 |
| 3.2 生物活性評價 |
| 4 結(jié)果與討論 |
| 4.1 抗菌活性評價研究 |
| 4.2 化合物含量測定研究 |
| 4.3 時間依賴性殺菌效果研究 |
| 4.4 溶血性研究 |
| 4.5 細胞毒性研究 |
| 4.6 分子對接研究 |
| 4.7 形貌學(xué)研究 |
| 5 本章小結(jié) |
| 第四章 喹諾酮藥物光動力抗菌的初步探索 |
| 1. 前言 |
| 2 實驗試劑與儀器 |
| 2.1 實驗試劑 |
| 2.2 實驗儀器 |
| 3. 實驗部分 |
| 3.1 實驗菌株 |
| 3.2 液體培養(yǎng)基的配置 |
| 3.3 固體培養(yǎng)基的配置 |
| 3.4 喹諾酮類化合物的紫外吸光譜研究 |
| 3.5 照射光波長的影響 |
| 3.6 光照功率的影響 |
| 3.7 GFLX、SPFX對3T3細胞毒性 |
| 4 結(jié)果與討論 |
| 4.1 GFLX、SPFX的紫外吸光譜研究 |
| 4.2 GFLX、SPFX在不同波長的光照射下的抗菌MIC、MBC值 |
| 4.3 GFLX抗菌MIC、MBC的值的能量依賴性 |
| 4.4 GFLX在MIC值處不同光能量密度對MRSA的PACT作用結(jié)果 |
| 4.5 SPFX、GFLX對3T3細胞毒性 |
| 5 本章小結(jié) |
| 第五章 全文總結(jié) |
| 1 化學(xué)合成及活性評價 |
| 2 展望 |
| 參考文獻 |
| 附錄一 縮略詞 |
| 附錄二 化合物圖譜 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（8）免疫親和攪拌棒的制備及其在喹諾酮殘留檢測中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 研究背景及意義 |
| 2 國內(nèi)外現(xiàn)狀及研究進展 |
| 2.1 QNs研究進展 |
| 2.2 QNs殘留檢測方法的研究進展 |
| 3 研究內(nèi)容和創(chuàng)新之處 |
| 3.1 研究內(nèi)容 |
| 3.2 創(chuàng)新之處 |
| 第二章 凈化喹諾酮類藥物的免疫親和攪拌棒的制備 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試劑材料 |
| 1.2 試驗方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 抗體的制備與鑒定 |
| 2.2 掃描電鏡圖 |
| 2.3 試驗條件的優(yōu)化 |
| 2.4 柱容量的測定 |
| 2.5 免疫親和攪拌棒的回收率 |
| 2.6 重復(fù)使用對柱容量的影響 |
| 2.7 保存對柱容量的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 免疫親和攪拌棒的制備 |
| 3.2 免疫親和攪拌棒的性能 |
| 3.3 免疫親和攪拌棒的優(yōu)化 |
| 4 小結(jié) |
| 第三章 牛奶中喹諾酮類藥物殘留檢測的Immunoaffinity SBSME-HPLC-FLD方法研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料 |
| 1.2 試驗方法 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 標準曲線 |
| 2.2 檢測限與定量限 |
| 2.3 添加回收率和精密度 |
| 3 討論 |
| 3.1 色譜條件的優(yōu)化 |
| 3.2 牛奶樣品的凈化 |
| 3.3 回收率和變異系數(shù) |
| 3.4 檢測限和定量限 |
| 3.5 實際樣品的檢測 |
| 4 小結(jié) |
| 第四章 結(jié)論 |
| 1 成功制備了可以凈化 11 種 QNs 的 Immunoaffinity stir bar |
| 2 建立了可以檢測牛奶中11種QNs的 Immunoaffinity SBSME-HPLC-FLD方法 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 附錄一 主要英文縮略語索引 |
| 附錄二 喹諾酮類藥物色譜圖 |
| 作者簡介 |
（9）諾氟沙星單克隆抗體的制備和膠體金試紙條的研制（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符號表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 喹諾酮類的簡述 |
| 1.1.1 喹諾酮類物質(zhì)的發(fā)展 |
| 1.1.2 幾種重要的喹諾酮類藥物理化性質(zhì) |
| 1.1.3 喹諾酮類藥物殘留問題 |
| 1.1.4 喹諾酮類藥物不良反應(yīng)表現(xiàn) |
| 1.1.5 喹諾酮類最大限量規(guī)定 |
| 1.1.6 喹諾酮藥物的抗菌機制 |
| 1.2 喹諾酮類藥物殘留檢測方法 |
| 1.2.1 微生物檢測法 |
| 1.2.2 理化檢測法 |
| 1.2.3 免疫分析法 |
| 1.2.4 生物傳感器法 |
| 1.3 膠體金技術(shù)簡介 |
| 1.3.1 膠體金 |
| 1.3.2 免疫快速診斷膠體金 |
| 1.3.3 膠體金免疫層析法在檢測中的應(yīng)用 |
| 1.3.4 膠體金技術(shù)的優(yōu)缺點 |
| 1.4 研究內(nèi)容 |
| 1.4.1 諾氟沙星單克隆抗體的制備 |
| 1.4.2 諾氟沙星膠體金檢測試紙條的研制 |
| 1.5 研究意義、創(chuàng)新點和技術(shù)路線 |
| 1.5.1 研究意義 |
| 1.5.2 創(chuàng)新點 |
| 1.5.3 技術(shù)路線 |
| 第2章 NOR人工抗原的制備與鑒定 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要儀器 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.2 諾氟沙星人工抗原的制備與鑒定 |
| 2.2.1 透析袋的處理 |
| 2.2.2 諾氟沙星免疫抗原與包被抗原的制備 |
| 2.2.3 紫外光譜掃描鑒定 |
| 2.2.4 瓊脂糖凝膠電泳鑒定 |
| 2.2.5 紅外光譜掃描鑒定 |
| 2.2.6 人工抗原蛋白濃度的測定 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 完全抗原電泳檢測的結(jié)果 |
| 2.3.2 完全抗原紫外檢測的結(jié)果 |
| 2.3.3 完全抗原紅外檢測的結(jié)果 |
| 2.3.4 測定完全抗原的濃度 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第3章 諾氟沙星單克隆抗體的制備 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要試劑 |
| 3.1.2 主要設(shè)備 |
| 3.1.3 實驗動物 |
| 3.1.4 ELISA所需緩沖液的配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 動物免疫 |
| 3.2.2 間接ELISA法測定小鼠的效價 |
| 3.2.3 ELISA檢測方法的優(yōu)化 |
| 3.3 分泌抗NOR單克隆抗體的雜交瘤細胞株的建立 |
| 3.3.1 細胞融合的有關(guān)細胞的準備 |
| 3.3.2 細胞融合及培養(yǎng) |
| 3.3.3 雜交瘤細胞的篩選 |
| 3.3.4 雜交瘤細胞的克隆 |
| 3.3.5 腹水制備 |
| 3.3.6 抗血清的純化 |
| 3.3.7 抗諾氟沙星單克隆抗體特性的鑒定 |
| 3.3.8 標準競爭曲線的繪制 |
| 3.3.9 NOR單抗與結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)性 |
| 3.4 實驗結(jié)果 |
| 3.4.1 血清效價的測定 |
| 3.4.2 最佳羊抗鼠二抗?jié)舛鹊拇_定 |
| 3.4.3 最佳檢測抗原稀釋度 |
| 3.4.4 抗諾氟沙星單克隆抗體的制備 |
| 3.4.5 陽性雜交瘤細胞的篩選 |
| 3.4.6 腹水制備 |
| 3.4.7 SDS-PAGE鑒定純化后的抗體 |
| 3.4.8 單克隆抗體性質(zhì)的測定 |
| 3.4.9 單克隆抗體親和力的測定 |
| 3.4.10 標準曲線的繪制 |
| 3.4.11 單克隆抗體特異性測定 |
| 3.5 討論 |
| 3.5.1 免疫動物選擇 |
| 3.5.2 骨髓瘤細胞株的選擇 |
| 3.5.3 細胞凍存 |
| 3.5.4 單克隆細胞克隆化 |
| 3.5.5 標準曲線的建立 |
| 3.5.6 交叉反應(yīng)性 |
| 3.6 小結(jié) |
| 第4章 諾氟沙星膠體金試紙條的制備 |
| 4.1 實驗試劑與材料 |
| 4.2 實驗儀器與設(shè)備 |
| 4.3 溶液的配置 |
| 4.4 試驗方法 |
| 4.4.1 膠體金的制備 |
| 4.4.2 膠體金質(zhì)量的判定 |
| 4.4.3 膠體金標記蛋白抗體 |
| 4.4.4 金標抗體稀釋度的選擇 |
| 4.4.5 金標復(fù)溶液的選擇 |
| 4.4.6 檢測線T線、質(zhì)控線C線濃度的確定 |
| 4.4.7 試紙條組裝材料的選擇 |
| 4.4.8 試紙條的組裝 |
| 4.4.9 試紙條的檢測方法和結(jié)果判斷 |
| 4.4.10 試紙條靈敏度確定 |
| 4.4.11 交叉反應(yīng)試驗 |
| 4.4.12 穩(wěn)定性試驗 |
| 4.4.13 樣品加標試驗 |
| 4.5 結(jié)果與分析 |
| 4.5.1 膠體金的制備 |
| 4.5.2 膠體金的質(zhì)量評價 |
| 4.5.3 膠體金標記抗體蛋白 |
| 4.5.4 金邊探針活性鑒定 |
| 4.5.5 金標復(fù)溶液選擇 |
| 4.5.6 金標抗體稀釋度的確定 |
| 4.5.7 質(zhì)控線、檢測線的濃度確定 |
| 4.5.8 試紙條組裝材料的選擇 |
| 4.5.9 試紙條性能測試 |
| 4.5.10 樣品添加實驗 |
| 4.6 討論 |
| 4.6.1 膠體金的制備 |
| 4.6.2 關(guān)于檢測限 |
| 4.7 小結(jié) |
| 第5章 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
（10）動物源食品中沙拉沙星ELISA快速檢測方法的建立（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 沙拉沙星的概述 |
| 1.2 沙拉沙星的理化性質(zhì) |
| 1.3 沙拉沙星的作用機制及代謝 |
| 1.4 沙拉沙星的作用與用途 |
| 1.5 沙拉沙星的危害 |
| 1.5.1 臟器毒性 |
| 1.5.2 免疫毒性 |
| 1.5.3 其他毒性 |
| 1.6 沙拉沙星的檢測方法 |
| 1.6.1 固相萃取-高效液相色譜法 |
| 1.6.2 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS) |
| 1.6.3 分子印跡固相萃取-高效液相色譜法 |
| 1.6.4 毛細管電泳法 |
| 1.6.5 熒光偏振免疫分析法 |
| 1.6.6 時間分辨化學(xué)發(fā)光法測定 |
| 1.6.7 紫外分光光度法 |
| 1.6.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA) |
| 1.7 本研究的目的及意義 |
| 1.8 研究的方法和技術(shù)路線 |
| 1.8.1 人工抗原的合成與鼠源多抗血清的制備 |
| 1.8.2 SARA 單克隆抗體的制備及其免疫學(xué)特性的鑒定 |
| 1.8.3 SARA-ELISA 試劑盒的研制 |
| 第二章 沙拉沙星人工抗原的合成及多抗血清的制備 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 試劑 |
| 2.1.2 溶液 |
| 2.1.3 儀器 |
| 2.2 實驗動物 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 免疫原的合成 |
| 2.3.2 人工抗原的鑒定方法 |
| 2.3.3 人工抗原的免疫學(xué)鑒定 |
| 2.4 結(jié)果與分析 |
| 2.4.1 人工抗原的鑒定結(jié)果 |
| 2.4.2 多抗血清的免疫學(xué)鑒定 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 2.5.1 人工抗原的合成與鑒定 |
| 2.5.2 免疫劑量的選擇 |
| 2.5.3 未來研究方向 |
| 2.6 本章小結(jié) |
| 第三章 沙拉沙星單克隆抗體的制備及其免疫學(xué)特性的鑒定 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試劑 |
| 3.1.2 溶液 |
| 3.1.3 儀器 |
| 3.2 細胞 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 雜交瘤細胞株的建立 |
| 3.3.2 單克隆抗體的大量制備 |
| 3.3.3 SARA 單克隆抗體免疫學(xué)特性的鑒定 |
| 3.4 結(jié)果與分析 |
| 3.4.1 雜交瘤細胞的建立 |
| 3.4.2 SARA 單克隆抗體效價測定結(jié)果 |
| 3.4.3 單克隆抗體敏感性測定結(jié)果 |
| 3.4.4 單克隆抗體特異性測定結(jié)果 |
| 3.4.5 單克隆抗體親和力測定結(jié)果 |
| 3.4.6 單克隆抗體亞型測定 |
| 3.5 討論 |
| 3.5.1 關(guān)于細胞融合 |
| 3.5.2 關(guān)于雜交瘤細胞株的篩選 |
| 3.5.3 關(guān)于超免方法和劑量的選擇 |
| 3.5.4 關(guān)于 SARA 單克隆抗體的免疫學(xué)鑒定 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 第四章 沙拉沙星間接競爭 ELISA 試劑盒的研制 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 SARA-ELISA 試劑盒最佳工藝 |
| 4.2.2 樣品預(yù)處理 |
| 4.2.3 SARA-ELISA 試劑盒性能的鑒定 |
| 4.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 SARA-ELISA 試劑盒最佳工藝 |
| 4.3.2 SARA-ELISA 試劑盒性能的鑒定 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 關(guān)于 ELISA 試劑盒最佳工藝的優(yōu)化 |
| 4.4.2 關(guān)于最佳工作時間 |
| 4.4.3 關(guān)于 ELISA 試劑盒檢測性能的評估 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 詞匯縮略表 |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果目錄 |
四、三種氟喹諾酮藥物的血清膽汁殺菌效價比較（論文參考文獻）
- [1]齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細菌性溶血素活性作用及其機制研究[D]. 周永林. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [2]達氟沙星單克隆抗體的制備及PELISA方法的建立[D]. 袁美芳. 南昌大學(xué), 2020(01)
- [3]基于新型標記物及異源競爭系統(tǒng)提高免疫學(xué)分析方法靈敏度的研究[D]. 胡松. 南昌大學(xué), 2020(01)
- [4]動物源食品中氟甲喹快速免疫檢測技術(shù)的研究[D]. 劉衛(wèi)華. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(01)
- [5]鴨疫里默氏菌對喹諾酮類抗生素耐藥機制的研究[D]. 鄭茗予. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(01)
- [6]沙門菌多藥外排蛋白AcrB突變體的耐藥性和耐藥機制研究[D]. 楊玲. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2019(02)
- [7]氟代喹諾酮的結(jié)構(gòu)修飾與抗菌活性評價[D]. 李圩田. 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2019(02)
- [8]免疫親和攪拌棒的制備及其在喹諾酮殘留檢測中的應(yīng)用[D]. 姚凱. 天津農(nóng)學(xué)院, 2016
- [9]諾氟沙星單克隆抗體的制備和膠體金試紙條的研制[D]. 徐田麗. 集美大學(xué), 2016(05)
- [10]動物源食品中沙拉沙星ELISA快速檢測方法的建立[D]. 劉儒彪. 河南科技學(xué)院, 2014(03)
標簽：elisa論文; 細菌耐藥性論文; 單克隆抗體技術(shù)論文; 抗原抗體反應(yīng)論文; 氟喹諾酮論文;