一、血小板源生長(zhǎng)因子在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制（論文文獻(xiàn)綜述）

李昕宇^[1]（2021）在《小鼠Kupffer細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化研究》文中提出研究背景及目的:KCs是肝臟長(zhǎng)期駐留的巨噬細(xì)胞,在慢性肝損傷期間KCs被激活并分泌促炎癥和促纖維化細(xì)胞因子,作用于HSCs轉(zhuǎn)分化形成肌成纖維細(xì)胞,最終產(chǎn)生膠原沉積,學(xué)術(shù)界廣泛認(rèn)可,HSCs是肝臟中膠原沉積的主要來(lái)源,也是肝纖維化病理過(guò)程的核心環(huán)節(jié),而KCs除了能輔助HSCs參與纖維化以外,是否有其他途徑產(chǎn)生膠原沉積尚未闡明。HSCs轉(zhuǎn)分化成為肌成纖維細(xì)胞是肝纖維化的關(guān)鍵步驟,除了HSCs轉(zhuǎn)分化以外,肝臟中還存在大量其他細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的現(xiàn)象,例如有實(shí)驗(yàn)研究證明了動(dòng)物模型中肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞相互轉(zhuǎn)化。在肝外組織中的巨噬細(xì)胞,例如皮膚、心肌、腎臟等組織中巨噬細(xì)胞可更進(jìn)一步轉(zhuǎn)分化為纖維細(xì)胞并分泌膠原蛋白,和傷口損傷愈合修復(fù)密切相關(guān)。通過(guò)上述類(lèi)比,提出KCs可以發(fā)生轉(zhuǎn)分化的猜想,KCs轉(zhuǎn)分化為類(lèi)成纖維細(xì)胞后可能產(chǎn)生膠原沉積,甚至有可能參與肝組織損傷修復(fù)乃至肝纖維化形成。KCs的轉(zhuǎn)分化理論提供了不同于傳統(tǒng)纖維化理論著眼于HSCs的不同視角,把肝硬化的過(guò)程視為河流,HSCs的轉(zhuǎn)分化可視作主干道,而KCs則可作為支流,提供了未來(lái)肝纖維化治療的新思路和新靶點(diǎn),同時(shí)給成纖維細(xì)胞提供了新的來(lái)源,完善了對(duì)肝纖維化的認(rèn)識(shí)。材料和方法:首先本研究在兩個(gè)不同的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭羞M(jìn)行平行實(shí)驗(yàn):體外肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)和精密肝切片培養(yǎng)。具體步驟如下:（1）構(gòu)建特異性追蹤KCs譜系的動(dòng)物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追蹤KCs譜系。（2）分離KCs后進(jìn)行體外培養(yǎng)。（3）使用精密肝切片培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行精密肝片培養(yǎng)。（4）使用免疫熒光成像分析培養(yǎng)后的KCs表達(dá)的蛋白。（5）利用多聚體免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。（6）實(shí)時(shí)定量PCR（Fludigm）。其次在小鼠肝切片中進(jìn)行膠原沉積研究,使用氯膦酸鹽脂質(zhì)體耗竭KCs,進(jìn)行精密肝切片培養(yǎng),對(duì)肝切片進(jìn)行Masson三色染色和RT-PCR基因表達(dá)分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培養(yǎng)技,實(shí)時(shí)定量PCR分析基因表達(dá),使用LDH檢測(cè)套盒定量分析肝片中細(xì)胞死亡情況。結(jié)果:（1）隨著體外培養(yǎng)時(shí)間的推移,體外非實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)和精密肝切片培養(yǎng)兩種模型中均發(fā)生:KCs的特征基因以及調(diào)控其表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)下調(diào)。（2）隨著體外培養(yǎng)時(shí)間的推移,體外非實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)和精密肝切片培養(yǎng)兩種模型中均發(fā)生:KCs中纖維化相關(guān)的基因以及調(diào)控其表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)上調(diào)。上述效應(yīng)在非實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)和肝組織切片培養(yǎng)之間是高度一致的。（3）清除KCs后肝切片中膠原沉積減少。（4）Il-1r敲除小鼠的肝片中細(xì)胞死亡相關(guān)基因表達(dá)與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。（5）Nlrp3敲除小鼠肝片中細(xì)胞死亡相關(guān)基因表達(dá)與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。結(jié)論:KCs轉(zhuǎn)分化在體外非實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)和精密肝切片培養(yǎng)兩種模型中均有發(fā)生。KCs的轉(zhuǎn)分化在體外培養(yǎng)中相對(duì)保守反應(yīng),轉(zhuǎn)分化為類(lèi)似成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞,可以分泌膠原沉積相關(guān)蛋白。

張強(qiáng)^[2]（2021）在《基于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微尺度生物力學(xué)性質(zhì)研究芪術(shù)顆?？垢卫w維化機(jī)制》文中研究指明肝纖維化（Hverfibrosis,LF）是肝膽系統(tǒng)疾病中的常見(jiàn)病,并且是大多數(shù)慢性肝病發(fā)展的必然階段。目前醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為早期肝纖維化能夠逆轉(zhuǎn),但如何進(jìn)行逆轉(zhuǎn),目前尚未形成普遍的共識(shí)。肝纖維化早期產(chǎn)生的諸多病理變化中,人們對(duì)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（sinusoidal endothelial cells,SECs）的病理變化給予的關(guān)注逐漸增多,其特征性的細(xì)胞學(xué)行為改變包括“窗口”尺寸與數(shù)量的變化以及連續(xù)性基底膜的形成,一旦SECs發(fā)生去窗口化后,則肝纖維化的進(jìn)程難以逆轉(zhuǎn),目前這已是不爭(zhēng)的事實(shí)。目前針對(duì)肝纖維化的治療,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)尚且只能給予病因治療,針對(duì)肝纖維化本身而言,目前還沒(méi)有療效肯定的藥物或治療手段問(wèn)世。中醫(yī)藥學(xué)在治療肝纖維化方面的經(jīng)驗(yàn)歷史較長(zhǎng),并對(duì)其發(fā)病機(jī)制形成了完整的認(rèn)識(shí),尤其是在治未病思想指導(dǎo)下,針對(duì)慢性肝病給予早期干預(yù),這在一定程度上能夠降低患者未來(lái)發(fā)生肝纖維化、肝硬化的風(fēng)險(xiǎn)。芪術(shù)顆粒是姚乃禮教授經(jīng)過(guò)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié),結(jié)合目前中醫(yī)藥學(xué)界對(duì)肝纖維化的普遍認(rèn)識(shí)基礎(chǔ)上創(chuàng)制的治療肝纖維化常用方,本課題在國(guó)家自然基金“基于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微尺度生物力學(xué)性質(zhì)研究芪術(shù)顆?？垢卫w維化機(jī)制”（NO:81774282）的資助下,結(jié)合課題組前期的研究成果探討益氣活血方芪術(shù)顆粒治療肝纖維化的機(jī)制。1.基于益氣活血法治療肝纖維化臨床療效的Meta分析目的:以Meta分析的方法評(píng)價(jià)益氣活血法治療肝纖維化的臨床療效。方法:1.以PubMed、中國(guó)知識(shí)基礎(chǔ)設(shè)施工程數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)知識(shí)服務(wù)平臺(tái)為檢索資料庫(kù),檢索時(shí)間跨度為自建庫(kù)到2020年12月31日;以檢索詞“l(fā)iver fibrosis”、“hepatic fibrosis”為檢索詞,然后以“effect”或者“efficacy”作為關(guān)鍵詞逐篇進(jìn)行排除;以“肝纖維化”作為檢索詞進(jìn)行檢索,然后以“臨床觀察”、“療效分析”作為關(guān)鍵詞逐篇進(jìn)行排除。以上數(shù)據(jù)庫(kù)沒(méi)有語(yǔ)言限制。2.納入隨機(jī)對(duì)照臨床研究類(lèi)文獻(xiàn),以肝纖維化四項(xiàng)、肝臟瞬時(shí)彈性成像、肝脾臟的形態(tài)、門(mén)脾靜脈的寬度、不良反應(yīng)、安全性等結(jié)局指標(biāo)作為考核指標(biāo)。結(jié)果:本次研究共納入合格文獻(xiàn)共93篇,其中有86篇文獻(xiàn)以肝纖維化四項(xiàng)作為臨床評(píng)價(jià)指標(biāo),兩組對(duì)比顯示中藥組的臨床療效比對(duì)照組更好,結(jié)果對(duì)比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[MD=51.15,95%CI（56.95,45.35）,P<0.00001]。15篇文獻(xiàn)以肝硬度值作為臨床考核指標(biāo),兩組對(duì)比顯示中藥組在改善肝硬度值方面具有更好的療效,比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[MD=3.52,95%CI（4.78,2.26）,P<0.00001]。33 篇文獻(xiàn)研究以門(mén)靜脈直徑作為臨床考核指標(biāo),兩組對(duì)比顯示中藥組在改善門(mén)靜脈直徑方面具有更好的療效,比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[MD=1.20,95%CI（2.14,0.26）,P=0.01]。31篇文獻(xiàn)研究以脾臟厚度作為臨床考核指標(biāo),兩組對(duì)比顯示中藥組在改善脾臟厚度方面具有更好的療效,比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[MD=6.83,95%CI（9.54,4.12）,P<0.00001]。13篇文獻(xiàn)研究以脾靜脈直徑作為臨床考核指標(biāo),兩組對(duì)比顯示中藥組在改善脾靜脈直徑方面具有更好的療效,比較結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[MD=1.77,95%CI（3.04,0.49）,P=0.007]。結(jié)論:以益氣活血為主要功效的中藥組方在治療肝纖維化方面相較于西藥而言具有更好的臨床療效。2.基于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微尺度生物力學(xué)性質(zhì)研究芪術(shù)顆粒抗肝纖維化機(jī)制目的:（1）研究芪術(shù)顆粒對(duì)肝纖維化大鼠肝臟炎癥因子、肝纖維化指標(biāo)以及病理組織學(xué)的調(diào)控作用。（2）通過(guò)qRT-PCR、Western blot、免疫熒光法明確芪術(shù)顆粒對(duì)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞eNOSmRNA、eNOS、NO表達(dá)的影響。（3）基于多相多級(jí)次多孔介質(zhì)理論,明確芪術(shù)顆粒干預(yù)下肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的力學(xué)特征。方法:（1）以四氯化碳作為肝纖維化的誘導(dǎo)劑,構(gòu)建肝纖維化大鼠模型,造模同時(shí)給予芪術(shù)顆粒進(jìn)行干預(yù),通過(guò)Elisa法、HE以及Masson染色研究芪術(shù)顆粒對(duì)肝纖維化大鼠的生化、病理組織學(xué)的影響。（2）原位膠原酶灌注+離體消化+梯度密度分離法分離提取肝竇內(nèi)皮細(xì)胞。（3）以10%肝纖維化大鼠血清+5%的胎牛血清作為外在損傷因素作用于體外培養(yǎng)狀態(tài)的肝竇內(nèi)皮細(xì)胞,模擬體內(nèi)生化環(huán)境,構(gòu)建肝竇內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。將細(xì)胞按照正常對(duì)照組、損傷組、正常大鼠血清損傷組、芪術(shù)顆粒含藥血清低、中、高濃度進(jìn)行分組。（4）采用 qRT-PCR、Western blot、免疫熒光法檢測(cè)胞內(nèi)eNOSmRNA、eNOS、NO的表達(dá)情況。（5）基于多相多級(jí)次多孔介質(zhì)理論,采用原子力顯微鏡表征芪術(shù)顆粒干預(yù)下肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的力學(xué)屬性。結(jié)果:（1）芪術(shù)顆粒能夠改善肝纖維化大鼠生化指標(biāo),改善肝臟病理組織形態(tài)。（2）經(jīng)過(guò)細(xì)胞形態(tài)以及免疫熒光鑒定可知,我們所提取的細(xì)胞為大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞,且純度較高。（3）經(jīng) qRT-PCR、Western blot、免疫熒光法檢測(cè)胞內(nèi) eNOSmRNA、eNOS、NO顯示芪術(shù)顆粒含藥血清能夠上調(diào)eNOSmRNA、eNOS、NO的表達(dá)。（4）經(jīng)過(guò)芪術(shù)顆粒含藥血清干預(yù)后,肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的骨架模量、粘度均有所提高,使肝竇內(nèi)皮細(xì)胞向正常力學(xué)狀態(tài)轉(zhuǎn)變,而其擴(kuò)散系數(shù)無(wú)明顯變化。結(jié)論:（1）芪術(shù)顆粒能夠抑制肝臟炎癥狀態(tài),恢復(fù)肝臟正常組織形態(tài)。（2）芪術(shù)顆粒能夠上調(diào)eNOSmRNA、eNOS、NO的表達(dá),從而改善肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的病理狀態(tài),這可能是其抗肝纖維化的重要機(jī)制之一。（3）芪術(shù)顆粒能夠改善肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的力學(xué)狀態(tài),促進(jìn)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞向正常力學(xué)狀態(tài)恢復(fù),這可能是其發(fā)揮抗肝纖維化的另一重要機(jī)制。

周怡馳^[3]（2021）在《柴芪益肝方治療肝纖維化的臨床和實(shí)驗(yàn)研究》文中研究表明中國(guó)是肝病大國(guó),多種肝病高發(fā),肝纖維化作為肝病研究和治療的重要領(lǐng)域,越來(lái)越受到重視。肝纖維化是肝臟修復(fù)肝損傷引起的異常結(jié)締組織增生和細(xì)胞外基質(zhì)過(guò)度沉積的病理改變。肝纖維化存在于大多數(shù)慢性肝病中,是慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段,甚至可持續(xù)進(jìn)展為肝硬化、肝癌,給患者生命健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅。研究肝纖維化的病因及發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn),對(duì)于阻止肝病的發(fā)展、維護(hù)患者的生命健康有很大的意義。近年來(lái),肝纖維化的病理分子生物學(xué)機(jī)制、臨床診療技術(shù)等取得了長(zhǎng)足發(fā)展。但目前西醫(yī)對(duì)于抗纖維化療效尚不確切,缺乏有效的治療手段。中醫(yī)藥治療肝纖維化具有確切的優(yōu)勢(shì),已有多種注冊(cè)適應(yīng)證為肝纖維化的中成藥上市。柴芪益肝方由導(dǎo)師胡世平教授所創(chuàng),是治療慢性乙型肝炎肝纖維化的經(jīng)驗(yàn)方,前期臨床和實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)對(duì)肝纖維化有較好療效,但其作用機(jī)制尚不清楚。胡教授現(xiàn)任北京中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院黨委書(shū)記,廣東省名中醫(yī),全國(guó)基層名老中醫(yī)師承項(xiàng)目指導(dǎo)老師,深圳市地方級(jí)領(lǐng)軍人才,獲評(píng)“南粵最美中醫(yī)”,從事中醫(yī)藥防治慢性肝病的臨床與科研工作30多年,擅長(zhǎng)中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合治療肝臟疾病,形成了獨(dú)特的學(xué)術(shù)思想體系。目的結(jié)合臨床回顧性研究、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討柴芪益肝方治療肝纖維化的療效與作用機(jī)制,為該方的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供依據(jù),并分析總結(jié)導(dǎo)師胡世平教授“推陳致新”的學(xué)術(shù)思想及其在柴芪益肝方組方思路中的應(yīng)用。方法1、臨床研究:通過(guò)回顧性研究方法,收集2018年1月1日至2021年2月3日期間在北京中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院肝病科門(mén)診及住院部診斷為慢性乙型肝炎患者的病例資料,并篩選出符合本研究標(biāo)準(zhǔn)的慢性乙型肝炎肝纖維化肝郁脾虛型患者。根據(jù)患者所服藥物分為常規(guī)治療組和CQYG組,收集所有患者治療12個(gè)月前后的指標(biāo),包括主要指標(biāo):肝臟硬度值（LSM）、纖維化-4指數(shù)（FIB-4）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和血小板比率指數(shù)（APRI）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量;次要指標(biāo):谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）,谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）,總膽紅素（TBiL）,谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶（GGT）,白蛋白（ALB）,將所有檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行治療前后的組內(nèi)與組間比較。2、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué):檢索 TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction、OMIM、Gene Cards等數(shù)據(jù)庫(kù),篩選CQYG治療肝纖維化的活性成分和潛在作用靶點(diǎn)。借助Cytoscape軟件和String數(shù)據(jù)庫(kù),分別構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)和蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò),并進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析,篩選關(guān)鍵藥效分子和核心靶點(diǎn)。運(yùn)用Autodock vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接,并基于R語(yǔ)言對(duì)作用靶點(diǎn)進(jìn)行GO和KEGG富集分析。3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):選取50只6周齡SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠,隨機(jī)抽取10只分別納入空白對(duì)照組（CTL）、肝纖維化模型組（Model）、柴芪益肝方低劑量組（CQYG-L）、柴芪益肝方高劑量組（CQYG-H）和水飛薊素治療組（Silymarin）,共5組。四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）腹腔注射建立小鼠肝纖維化模型:除空白對(duì)照組外,其余各組小鼠腹腔注射含15%CCl4的橄欖油5ml·kg-1,每周2次,連續(xù)注射8周。從造模第1天起,柴芪益肝方低、高劑量組小鼠分別灌胃給予0.37 g·kg-1·d-1、0.74 g·kg-1·d-1的柴芪益肝方,水飛薊素組給予100 mg·kg-1·d-1灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束,摘取所有小鼠肝臟、收集血清,對(duì)各組小鼠肝組織進(jìn)行HE、天狼星紅、Masson染色;用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清AST和ALT的含量;ELISA法檢測(cè)肝組織中MDA、SOD、GSH-Px和Hyp水平;免疫組化法檢測(cè)肝組織中α-SMA、Collagen I、Vimentin的表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)肝組織中Ki67+和Lgr5+細(xì)胞;提取各組肝組織RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot分別檢測(cè)肝纖維化小鼠肝組織中NF-κB、TGF-β/Smad、Wnt/β-Catenin信號(hào)通路相關(guān)靶標(biāo)mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果1、臨床研究:共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的患者203人,其中,常規(guī)治療組納入101人,年齡最大者76歲,最小22歲,平均年齡（41.34±0.90）歲;CQYG組納入102人,年齡最大者67歲,最小27歲,平均年齡（43.13±0.78）歲,兩組年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）,具有可比性。（1）無(wú)創(chuàng)肝纖維化指標(biāo)（LSM、FIB-4、APRI）在兩組患者自身治療前后比較,以及治療后的組間比較,均無(wú)顯著性差異（P>0.05）,但兩組治療后LSM均較治療前有降低趨勢(shì)。（2）兩組患者自身前后比較,乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量和乙肝病毒表面抗原（HBsAg）治療前和后均無(wú)顯著性差異（P>0.05）;CQYG組較常規(guī)治療組治療后HBsAg顯著性降低（P<0.05）,CQYG組治療后HBV-DNA定量和HBsAg較治療前均有下降趨勢(shì)。（3）兩組患者自身治療前后血清肝功能指標(biāo)（ALT、AST、GGT、TBiL、ALB）均在正常范圍內(nèi),治療后組間比較肝功能均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。2、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè):共獲得121種CQYG治療肝纖維化的潛在活性成分和257個(gè)對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn),并篩選出14種關(guān)鍵藥效分子及28個(gè)核心靶點(diǎn)。點(diǎn)度中心性值前10的核心靶點(diǎn)和關(guān)鍵藥效分子具有較好的結(jié)合活性。GO和KEGG結(jié)果主要涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、成纖維細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝活動(dòng)、血管生成、肝再生等生物學(xué)過(guò)程及TNF信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等。3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:與模型組相比,CQYG各組和水飛薊素組小鼠肝組織形態(tài)和膠原沉積較模型組改善,水飛薊素組和CQYG-H小鼠血清ALT、AST水平均顯著降低（P<0.01）;CQYG高劑量組肝組織MDA和Hyp的含量顯著低于模型組（P<0.05）,SOD和GSH-Px含量顯著高于模型組（P<0.05）;免疫組化結(jié)果顯示,CQYG組和水飛薊素組α-SMA、CollagenI、Vimentin陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域較模型組少;免疫熒光結(jié)果顯示,柴芪益肝方組Ki67陽(yáng)性細(xì)胞和Lgr5陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均較模型組有增多趨勢(shì);CQYG組肝組織中p-NF-κBp65、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表達(dá)水平較模型組顯著降低（P<0.05）;與模型組相比,CQYG-H 肝組織 CollagenI、TGF-β、TNF-α、IL-1βmRNA 的表達(dá)水平以及 Collagen I、α-SMA、TIMP-1、TGF-β、磷酸化 Smad2/3、Smad2/3、Smad4、Wnt3a、β-Catenin 蛋白表達(dá)均較模型組有不同程度降低,而MMP-9、Smad7蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。結(jié)論1、臨床研究:柴芪益肝方加減聯(lián)合常規(guī)治療有降低慢乙肝肝纖維化患者肝臟硬度值、HBV-DNA和HBsAg含量的趨勢(shì),且在降低HBsAg定量上優(yōu)于單純常規(guī)治療。2、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué):柴芪益肝方可能通過(guò)槲皮素、白藜蘆醇、山奈酚等活性成分作用于絲裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白Jun等靶點(diǎn),以及TNF信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、Rap1信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等,調(diào)節(jié)肝臟炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞增殖、肝再生等生物學(xué)過(guò)程發(fā)揮治療肝纖維化的作用。3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究:柴芪益肝方能顯著減輕四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化,其作用機(jī)制可能減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)、抑制NF-κB介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路,下調(diào)炎癥細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的釋放,減輕肝臟炎癥,并通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β/Smad、Wnt3a/β-catenin信號(hào)通路,抑制肝星狀細(xì)胞的活化,調(diào)節(jié)MMP-9和TIMP-1活性平衡,減少細(xì)胞外基質(zhì)α-SMA、Collagen I、Hyp的合成,促進(jìn)ECM降解相關(guān)。4、“推陳致新”學(xué)術(shù)思想:導(dǎo)師胡世平教授“推陳致新”的學(xué)術(shù)思想核心在于順應(yīng)人體本身的正氣祛邪之勢(shì)和氣血津液各自的新陳代謝過(guò)程,協(xié)助人體自然排邪,促進(jìn)疾病向愈。在肝纖維化治療上,通過(guò)“推陳致新”,加強(qiáng)氣化動(dòng)力、調(diào)節(jié)氣機(jī)升降,使病理產(chǎn)物消除的同時(shí),人體氣血津液正?；?/p>

劉皎皎^[4]（2021）在《“補(bǔ)腎生髓成肝”改善肝癌肝再生微環(huán)境治療晚期肝癌的臨床療效觀察及機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明目的:采用隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)（RCT）方法觀察“補(bǔ)腎生髓成肝”法治療晚期肝癌的臨床療效,并探究其改善肝癌肝再生微環(huán)境的療效機(jī)制,為臨床推廣應(yīng)用提供較高級(jí)別的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。方法:1.采用隨機(jī)分組法將2017年1月至2020年6月就診于陜西省中醫(yī)醫(yī)院肝病科的入選晚期肝癌患者共126例,基于隨機(jī)數(shù)字表法簡(jiǎn)單隨機(jī)分成3組,即西醫(yī)對(duì)照組42例（以下簡(jiǎn)稱(chēng)西醫(yī)組）,采用西醫(yī)綜合治療方案;補(bǔ)腎生髓成肝單獨(dú)治療組42例（以下簡(jiǎn)稱(chēng)中醫(yī)組）,采用地五養(yǎng)肝方、抗毒軟堅(jiān)方、左歸丸合方化裁,辨證加減治療方案;補(bǔ)腎生髓成肝綜合治療組42例（以下簡(jiǎn)稱(chēng)中西醫(yī)組）,采用西醫(yī)治療組方案基礎(chǔ)上加上地五養(yǎng)肝方、抗毒軟堅(jiān)方、左歸丸合方化裁,辨證加減。入選后有10例患者脫落（中醫(yī)組6例,3例因失訪脫落,3例因不能堅(jiān)持治療脫落;西醫(yī)組4例,2例因異地就醫(yī)不便退出,2例因不能堅(jiān)持治療脫落）,最終納入統(tǒng)計(jì)分析病例資料的共116例,西醫(yī)對(duì)照組（西醫(yī)組）38例、補(bǔ)腎生髓成肝綜合治療組（中西醫(yī)組）42組、補(bǔ)腎生髓成肝單獨(dú)治療組（中醫(yī)組）36例。該研究通過(guò)湖北省中醫(yī)院倫理審查,在中國(guó)臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心（世界衛(wèi)生組織國(guó)際臨床試驗(yàn)平臺(tái)一級(jí)注冊(cè)機(jī)構(gòu)）完成臨床試驗(yàn)注冊(cè),注冊(cè)號(hào):Chi CTR-IOR-17011439。參與研究的患者均自愿簽署了知情同意書(shū)。對(duì)比三組治療3個(gè)月及治療6個(gè)月的生存率及生存期,對(duì)比治療前、治療后3個(gè)月血常規(guī)、糞常規(guī)加潛血、肝功、血糖、血脂、腎功等指標(biāo),對(duì)比三組治療前后的中醫(yī)證候評(píng)分、生存質(zhì)量評(píng)分,并對(duì)患者生存期的獨(dú)立影響因素進(jìn)行分析。2.依據(jù)治療方案治療3個(gè)月后分別收集中醫(yī)組、西醫(yī)組、中西組每組20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃凍存于陜西省中醫(yī)醫(yī)院肝病實(shí)驗(yàn)室。通過(guò)懸液芯片系統(tǒng)檢測(cè)患者血清肝再生相關(guān)細(xì)胞因子粒細(xì)胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干擾素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生長(zhǎng)因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干細(xì)胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、腫瘤壞死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,觀察體現(xiàn)“補(bǔ)腎生髓成肝”的中藥對(duì)這些細(xì)胞因子的影響。結(jié)果:（1）三組患者治療前后生存率及生存期比較:治療3個(gè)月及6個(gè)月后,中西醫(yī)組、中醫(yī)組和西醫(yī)組生存率比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治療后中西醫(yī)組、中西組和西醫(yī)組患者生存期比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三組患者治療前后腫瘤大小比較:中西醫(yī)組、中醫(yī)組和西醫(yī)組組間比較及前后測(cè)量時(shí)間比較,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）三組患者治療前后肝功指標(biāo)比較:中西醫(yī)組患者治療后直接膽紅素水平、間接膽紅素水平、谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶水平較治療前顯著降低（P<0.05）,組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。中醫(yī)組治療后膽堿酯酶水平較治療前顯著升高,組間比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。三組患者治療前后白蛋白水平比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;兩兩比較,中西醫(yī)組及中醫(yī)組與西醫(yī)組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（4）三組患者治療前后其他生化指標(biāo)比較:三組患者治療后血常規(guī)指標(biāo)中白細(xì)胞水平、中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比值、血小板水平,中西醫(yī)組、中醫(yī)組與西醫(yī)組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者治療后肌酐水平比較,中西醫(yī)組、中醫(yī)組與西醫(yī)組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（5）三組患者治療前后中醫(yī)證候評(píng)分比較:三組患者治療前后中醫(yī)證候評(píng)分以時(shí)間因素為源的主體內(nèi)差異及以組別為源的主體間效應(yīng),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者治療后的中醫(yī)證候評(píng)分均顯著低于治療前,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療后中西醫(yī)組、中醫(yī)組顯著低于西醫(yī)組的中醫(yī)證候評(píng)分,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（6）三組患者治療前后生存量表積分比較:三組患者生理機(jī)能積分方面治療后積分均顯著高于治療前,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療后中西醫(yī)組、中醫(yī)組與西醫(yī)組的社會(huì)功能評(píng)分比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。三組患者在生理職能、軀體疼痛、一般健康狀況三個(gè)維度的積分組間比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,且兩兩組間比較后中西醫(yī)組與中醫(yī)組、西醫(yī)組的生理職能、軀體疼痛、一般健康狀況三個(gè)維度的積分組間比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（7）HGF表達(dá)水平比較:西醫(yī)組明顯高于中西醫(yī)組、中醫(yī)組及正常人群組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示單用“補(bǔ)腎生髓成肝”或配合西醫(yī)綜合治療可在一定程度上抑制HGF的過(guò)度表達(dá)。（8）IL-6表達(dá)水平比較:中醫(yī)組、中西醫(yī)組及西醫(yī)組均低于正常人群組,且組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西醫(yī)組、中醫(yī)組IL-6表達(dá)水平明顯低于正常人群組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示單用“補(bǔ)腎生髓成肝”或配合西醫(yī)綜合治療可在一定程度上抑制IL-6的過(guò)度表達(dá)。（9）IL-18表達(dá)水平比較:西醫(yī)組、中西醫(yī)組及中醫(yī)組,比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均較正常人群組升高（75.165）。提示單用“補(bǔ)腎生髓成肝”或配合西醫(yī)綜合治療同樣可以促進(jìn)IL-18的表達(dá)。（10）PDGF-BB表達(dá)水平比較:中醫(yī)組相對(duì)中西醫(yī)組、西醫(yī)組降低,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中醫(yī)組低于西醫(yī)組及中西醫(yī)組,且更接近正常人群組（4401.67）。提示單用“補(bǔ)腎生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的過(guò)度表達(dá)。（11）TNF-α表達(dá)水平比較:西醫(yī)組、中西醫(yī)組、中醫(yī)組及正常人群組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西醫(yī)組TNF-α表達(dá)水平明顯低于正常人群組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示單用“補(bǔ)腎生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的過(guò)度表達(dá)。結(jié)論:“補(bǔ)腎生髓成肝”治療晚期肝癌能夠顯著提高晚期肝癌患者3個(gè)月及6個(gè)月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者臨床癥狀同時(shí),改善患者各種生化指標(biāo)。明顯降低晚期肝癌患者的中醫(yī)證候評(píng)分,提高患者的生存質(zhì)量,為臨床推廣應(yīng)用提供了較高級(jí)別的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。“補(bǔ)腎生髓成肝”治療晚期肝癌患者的療效機(jī)制之一可能是通過(guò)抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的過(guò)度表達(dá),同時(shí)升高晚期肝癌患者IL-18的表達(dá),改善肝癌的肝再生微環(huán)境及其相關(guān)的炎癥微環(huán)境、免疫微環(huán)境、血管新生微環(huán)境等。

蔣云霞^[5]（2021）在《荔枝核總黃酮對(duì)HSC-T6的作用和差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究》文中認(rèn)為目的:以大鼠肝星狀細(xì)胞T6細(xì)胞株（HSC-T6）為受試對(duì)象,探討并完善荔枝核總黃酮（total flavonoids from Litchi Seed,TFL）拮抗肝纖維化的作用靶點(diǎn)與作用機(jī)制。方法:常規(guī)培養(yǎng)HSC-T6,分別觀察TFL在不同時(shí)間和不同濃度對(duì)HSC生長(zhǎng)增殖率的影響,從中選擇最佳的TFL藥物濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn);將HSC-T6分為細(xì)胞對(duì)照組和TFL實(shí)驗(yàn)組,細(xì)胞對(duì)照組的HSC-T6常規(guī)培養(yǎng),TFL實(shí)驗(yàn)組采用上述最佳的TFL藥物濃度干預(yù)HSC-T6,分別使用透射電子顯微鏡和ELISA方法檢測(cè)各組HSC-T6的超微結(jié)構(gòu)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）、Ⅰ型膠原（ColⅠ）、Ⅲ型膠原（ColⅢ）含量的變化。制備肝纖維化模型大鼠,在大鼠腹部皮下注射40%四氯化碳橄欖油混懸液0.3 ml/100 g,2次/周,共8周。造模完成后,行肝組織病理染色檢測(cè),證實(shí)造模成功。將肝纖維化造模完成的大鼠分為模型對(duì)照組和TFL實(shí)驗(yàn)組,模型對(duì)照組大鼠在肝纖維化造模完成后常規(guī)飼養(yǎng),TFL實(shí)驗(yàn)組大鼠予灌胃TFL 100 mg/（kg·d）,4周后收集模型對(duì)照組和TFL實(shí)驗(yàn)組的大鼠血清。檢測(cè)各組血清對(duì)HSC-T6的最大無(wú)毒濃度,以最大無(wú)毒濃度為最佳誘導(dǎo)劑量孵育HSC-T6,誘導(dǎo)分化14天后提取全蛋白,通過(guò)DDA/DIA技術(shù)篩選出模型對(duì)照組和TFL實(shí)驗(yàn)組血清干預(yù)后的差異表達(dá)蛋白,并對(duì)差異蛋白進(jìn)行GO、KOG、PPI、PATHWAY和亞細(xì)胞定位等生物信息學(xué)分析。結(jié)果:1.透射電鏡結(jié)果顯示TFL干預(yù)后HSC-T6的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,細(xì)胞間隙變大,胞膜四周纖毛脫落,多角偽足減少,膜表面不平整,細(xì)胞漿內(nèi)線粒體明顯變形,線粒體嵴斷裂或消失,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)扁池?cái)U(kuò)張,核糖體脫落,核內(nèi)染色質(zhì)濃縮或邊聚,核膜皺縮,可見(jiàn)凋亡小體形成。2.ELISA 結(jié)果顯示,TFL 干預(yù)后 HSC-T6 的 MMP-2、Col Ⅰ、Col Ⅲ含量下降。3.生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,模型對(duì)照組和TFL實(shí)驗(yàn)組的差異蛋白共177個(gè),其中上調(diào)蛋白84個(gè),下調(diào)蛋白93個(gè)。GO分析顯示,差異蛋白參與分子功能共10個(gè)條目,主要為分子結(jié)合和催化活性;細(xì)胞組分共18個(gè)條目,主要為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器;生物過(guò)程共24個(gè)條目,主要為細(xì)胞過(guò)程、代謝過(guò)程、生物調(diào)節(jié)等。4.KOG注釋分析顯示,差異蛋白比對(duì)到KOG數(shù)據(jù)庫(kù)共有23個(gè)子類(lèi)和192條蛋白注釋信息,其中細(xì)胞過(guò)程和信號(hào)傳遞是獲得注釋信息最多的分類(lèi),其次為信息存儲(chǔ)與處理、新陳代謝作用和缺乏注釋的蛋白等。5.PPI分析結(jié)果顯示,存在互作關(guān)系的上調(diào)蛋白28個(gè):SELENOH、C1QC、C1QB、APOE、ANGPTL4、NF1、GPX3、CLU、DMAP1、VTN、MYH14、SELENOM、HRG、PF4、HMOX1、IGH1A、IGG2A、IGHG、PGK2、PLIN2、KDM4C、ITIH4、BAZ2A、C9、ADH7、MGST1、GSTA1、ATP9B等。存在互作關(guān)系的下調(diào)蛋白42個(gè):RAD51、HELZ2、PBK/TOPK、HMGCS1、UBE2T、UBE2C、DLGAP5、LOC100911660、PTEN、BLM、CYP51A1、MDC1、LRRK1、MVD、NSDHL、IDI1、SPC24、CDCA8、KNSTRN、CCNB2、FAM83D、HMGXB4、STARD4、HLTF、LIPG、UHRF1、KAT8、PCSK9、UBE2S、AMMECR1L、WDR76、ZNRD2、DDX10、MAP3K3、PIMREG、SMAD1、MCL1、MPRIP、FIGNL1、RPAP1、STMN1、SPP1 等。6.PATHWAY富集分析結(jié)果顯示,KEGG代謝通路分為6個(gè)分支,共注釋38項(xiàng)條目,分支包括細(xì)胞過(guò)程、環(huán)境信息處理、遺傳信息處理、人類(lèi)疾病、代謝和有機(jī)系統(tǒng)等,其中差異蛋白占比前三的分支為人類(lèi)疾病、新陳代謝和有機(jī)系統(tǒng)。代謝通路主要包括原發(fā)性免疫缺陷、金黃色葡萄球菌感染、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、哮喘產(chǎn)生IgA的腸道免疫網(wǎng)絡(luò)、免疫系統(tǒng)、萜類(lèi)骨架的生物合成、自身免疫性甲狀腺疾病、同種異體移植排斥、范可尼貧血途徑、造血細(xì)胞譜系、非洲錐蟲(chóng)病、膽固醇代謝、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、礦物質(zhì)吸收、細(xì)胞色素P450對(duì)異生物的代謝、病毒性心肌炎、利什曼病、阿米巴病、癌癥中的轉(zhuǎn)錄失調(diào)、擴(kuò)張型心肌病、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、FcεRI信號(hào)通路、B細(xì)胞受體信號(hào)通路、磷脂酶D信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路、酮體的合成與降解、PI3K-Akt信號(hào)通路、肝細(xì)胞癌、藥物代謝-細(xì)胞色素P450等。7.亞細(xì)胞定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白主要位于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞外,其余則較平均散布于胞質(zhì)內(nèi)膜、線粒體、過(guò)氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、胞質(zhì)網(wǎng)絲以及細(xì)胞骨架上。結(jié)論:1.荔枝核總黃酮（TFL）可下調(diào)HSC-T6的MMP-2、ColⅠ和ColⅢ的表達(dá)水平,對(duì)HSC-T6的生長(zhǎng)增殖具有抑制作用。2.本實(shí)驗(yàn)基于DDA/DIA模式并通過(guò)GO、KOG、PPI、PATHWAY以及亞細(xì)胞定位等生物信息學(xué)技術(shù)分析后發(fā)現(xiàn)C1QC、C1QB、C9、SELENOH、SELENOM、GPX3、APOE、CLU、ANGPTL4、NF1、HRG、PF4、ITIH4、ADH7、RAD51、BLM、FIGNL1、MDC1、SPC24、KNSTRN、CDCA8、HELZ2、HMGCS1、MVD、IDI1、CYP51A1、NSDHL、LIPG、PBK/TOPK、FAM83D、DLGAP5、UBE2T、UBE2C、UBE2S、UHRF1、MAP3K3、LRRK1、SMAD、、MCL、等差異蛋白與肝纖維化疾病具有密切相關(guān)性;PI3K/Akt通路、NF-κB信號(hào)通路、膽固醇代謝、補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)、細(xì)胞色素P450可能是TFL抑制HSC-T6生長(zhǎng)增殖并誘導(dǎo)HSC-T6死亡的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。3.TFL可能通過(guò)調(diào)控多個(gè)蛋白和參與多種信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制ECM的形成和誘導(dǎo)HSC-T6死亡,發(fā)揮拮抗肝纖維化的生物學(xué)效應(yīng)。

畢意輝^[6]（2021）在《肝星狀細(xì)胞來(lái)源的旁分泌信號(hào)分子IL-11促進(jìn)肝細(xì)胞癌進(jìn)展的機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理大約90%的肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是由慢性肝臟纖維性病變發(fā)展而來(lái)。在肝纖維化發(fā)展為肝癌之前,肝內(nèi)微環(huán)境主要表現(xiàn)為炎癥和纖維化這兩個(gè)特點(diǎn),我們稱(chēng)之為癌前微環(huán)境（premalignant microenvironment,PME）。在PME中,炎癥主要由肝損傷導(dǎo)致的大量免疫細(xì)胞浸潤(rùn)引起,其中單核細(xì)胞分化為M1型巨噬細(xì)胞后通過(guò)分泌TGF-β,IL-1β,TNF-α,IL-6等促炎因子導(dǎo)致炎癥快速擴(kuò)大。肝內(nèi)炎癥的一個(gè)重要的效應(yīng)細(xì)胞為肝星狀細(xì)胞（Hepatic Stellate Cells,HSCs）,其受到TGF-β等細(xì)胞因子刺激后活化,進(jìn)而轉(zhuǎn)分化為肌成纖維母細(xì)胞樣細(xì)胞,這種細(xì)胞的特征是通過(guò)大量分泌多種膠原蛋白、非膠原糖蛋白,蛋白聚糖等重塑細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）,最終導(dǎo)致肝纖維化形成。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)在HCC中PME通常與腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment,TME）共存。PME中的ECM包含大量的多功能細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子與TME中的腫瘤細(xì)胞相關(guān)作用,促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移。活化的HSCs作為PME中ECM的主要來(lái)源細(xì)胞,被認(rèn)為是驅(qū)動(dòng)HCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素,然而具體調(diào)控機(jī)制仍不明確。因此本論文重點(diǎn)探究活化的HSCs是如何調(diào)控HCC進(jìn)展的。將肝癌細(xì)胞與活化的HSCs共同培養(yǎng)后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）,我們發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞內(nèi)大量基因的表達(dá)水平發(fā)生顯著變化。對(duì)其中發(fā)生表達(dá)上調(diào)的基因進(jìn)行基因功能富集分析（Gene Set Enrichment Analysis,GSEA）,結(jié)果表明這些基因主要與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal Transition,EMT）及細(xì)胞增殖（E2F target）等功能相關(guān)。進(jìn)一步將肝癌細(xì)胞與活化的HSCs混合（10:90）植入裸鼠皮下,結(jié)果發(fā)現(xiàn)皮下瘤增殖迅速且出現(xiàn)大量肝癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象,這與RNA-seq結(jié)果相一致?；罨腍SCs以大量分泌多種細(xì)胞因子和細(xì)胞外基質(zhì)成分為特點(diǎn),因此我們猜測(cè)上述現(xiàn)象是由肝星狀細(xì)胞通過(guò)旁分泌途徑所產(chǎn)生的。旁分泌途徑一般通過(guò)激活靶細(xì)胞內(nèi)磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)發(fā)揮功能,因此,我們將活化的HSCs來(lái)源的條件培養(yǎng)基（Condition Medium,CM）與肝癌細(xì)胞孵育10分鐘,隨后進(jìn)行高通量蛋白磷酸化質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CM刺激導(dǎo)致肝癌細(xì)胞內(nèi)促進(jìn)腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的JAKSTAT、MAPK和PI3K-Akt等信號(hào)通路被顯著激活,且Western Blotting實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)果,這提示活化的HSCs可以通過(guò)旁分泌途徑促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。為了進(jìn)一步探究HSCs的CM中發(fā)揮促腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移功能的關(guān)鍵旁分泌信號(hào)分子,并同時(shí)排除肝癌細(xì)胞自分泌的影響,我們利用RNA-seq分析了HSCs活化前后的轉(zhuǎn)錄水平變化,并分別對(duì)肝癌細(xì)胞和活化的HSCs來(lái)源的CM進(jìn)行分泌蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)白介素-11（IL-11）在活化后的肝星狀細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)且僅由肝星狀細(xì)胞特異性分泌而肝癌細(xì)胞幾乎不分泌,因此推測(cè)其可能是我們正在尋找的關(guān)鍵旁分泌信號(hào)分子。進(jìn)一步通過(guò)Western Blotting實(shí)驗(yàn)證實(shí)肝癌細(xì)胞在介紹接受IL-11刺激后,肝癌細(xì)胞內(nèi)的JAK-STAT、MAPK和PI3K-Akt信號(hào)通路顯著激活。利用RNA干擾技術(shù)敲低肝癌細(xì)胞表面的IL-11受體（IL-11RA）后,由CM刺激引起的肝癌細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路激活的現(xiàn)象被顯著抑制。因此,上述結(jié)果均提示肝星狀細(xì)胞可能通過(guò)旁分泌IL-11來(lái)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。為了進(jìn)一步在體內(nèi)研究IL-11對(duì)肝癌細(xì)胞的影響,通過(guò)慢病毒感染,我們賦予了肝癌細(xì)胞自分泌IL11的能力。將獲得分泌IL-11能力的肝癌細(xì)胞重新植入裸鼠皮下,觀察發(fā)現(xiàn)該組裸鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)異常迅速,且在腫瘤長(zhǎng)到一定體積后,裸鼠出現(xiàn)體重下降、腹部膨隆的惡病質(zhì)現(xiàn)象。不僅如此,該組裸鼠肝臟內(nèi)出現(xiàn)大量轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞,而不能分泌IL11的肝癌細(xì)胞并不能發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。在探究IL11促進(jìn)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究過(guò)程中我們發(fā)現(xiàn)IL-11不僅可以在活體內(nèi)誘導(dǎo)小鼠血管滲透性增加,其還是一種非經(jīng)典的中性粒細(xì)胞趨化因子,可以誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞強(qiáng)烈的釋放細(xì)胞外誘捕網(wǎng)（Neutrophils extracellular traps,NETs）。NETs中包含大量的蛋白酶,這些蛋白酶可以切割腫瘤外圍的基底膜,導(dǎo)致基底膜結(jié)構(gòu)被破壞,進(jìn)而幫助腫瘤細(xì)胞發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。同時(shí),在臨床肝癌病人的組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)癌巢周?chē)嬖诖罅康腎L-11,IL-11富集的區(qū)域中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,且伴隨著大量NETs的釋放。以上研究提示活化的肝星狀細(xì)胞可以通過(guò)特異性旁分泌IL-11促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖,同時(shí)誘導(dǎo)血管滲漏性增加并誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞在IL-11的作用下以釋放NETs的方式破壞基底膜結(jié)構(gòu),促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。IL-11的這些功能都將促進(jìn)肝癌的快速進(jìn)展以及肝癌病人的生存率極大降低。因此由肝星狀細(xì)胞特異性分泌的IL-11可能成為肝細(xì)胞癌精準(zhǔn)治療的新靶點(diǎn)。

辛鵬飛^[7]（2021）在《高脂微環(huán)境活化肝星狀細(xì)胞的作用及機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明背景和目的非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）可進(jìn)展為肝纖維化,最終導(dǎo)致肝硬化和肝癌。其進(jìn)展機(jī)制尚不明確,但已有證據(jù)表明肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell,HSCs）活化在肝纖維化中具有關(guān)鍵作用。在NAFLD時(shí)HSCs可能和正常肝細(xì)胞一樣暴露于來(lái)自循環(huán)脂質(zhì)的高濃度游離脂肪酸（free fatty acid,FFA）中。然而,高脂微環(huán)境在激活HSCs中的作用尚不清楚。研究表明,Rho/ROCK信號(hào)通路通在HSCs的活化增值、遷移等方面具有重要的調(diào)控作用。本研究旨在探討高脂微環(huán)境對(duì)HSCs的影響及對(duì)Rho/ROCK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。方法1.取成年雄性SD大鼠（體重300.0 g-400.0 g）,用Percoll密度梯度離心法分離大鼠原代HSCs,加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng);328nm紫外光及倒置相差顯微鏡觀察原代HSCs自發(fā)熒光和細(xì)胞形態(tài);使用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活力;油紅O染色觀察原代HSCs核周脂滴著色;免疫細(xì)胞化學(xué)染色（immunocytochemistry,ICC）檢測(cè)Desmin與α-SMA的表達(dá),最終鑒定原代HSCs。2.雄性SD大鼠（體重350.0 g-400.0 g）,禁食48 h（8:00 am-8:00 am）,再飼喂高脂飼料（high fat die,能量5.58 kcal/g）,于0 h、2 h、3 h、4h采集門(mén)靜脈血液,分離獲得饑餓再飼喂（re-feeding）大鼠門(mén)靜脈高脂血清;將棕櫚酸（palmitic acid,PA）粉末加入配制的10%牛血清白蛋白（BSA,bovine serum albumin）溶液中,于50°C攪拌24h使其充分溶解,配制成8m M的PA溶液。分別使用PA溶液和門(mén)靜脈高脂血清構(gòu)建體外高脂微環(huán)境模型,不同濃度的PA溶液（0、100、200、300、500、1000μmol/L）和不同濃度高脂血清（低、中、高濃度）分別培養(yǎng)大鼠原代HSCs和人肝星狀細(xì)胞系（LX-2）。流式細(xì)胞術(shù)和CCK法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Western Blotting和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real time PCR）檢測(cè)細(xì)胞中PDGF、TGF-β、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和mRNA表達(dá)水平;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HSCs的遷移能力變化。3.Real time PCR檢測(cè)Rho和ROCK mRNA表達(dá)水平,研究高脂微環(huán)境對(duì)HSCs增殖活化及遷移的作用機(jī)制。結(jié)果1.用Percoll密度梯度離心法分離大鼠原代HSCs,臺(tái)盼藍(lán)拒染率>95%,在328 nm紫外光下可觀察到自發(fā)熒光;倒置相差顯微鏡可以觀察到典型的肝星狀細(xì)胞形態(tài)變化:由透亮的小圓形細(xì)胞逐漸增大呈多邊形、小星芒狀,最后細(xì)胞融合成片,胞體寬大,胞漿軸突完全伸展,細(xì)胞骨架明顯;油紅O染色可見(jiàn)原代HSCs核周脂滴著色;ICC顯示靜止的原代HSCs中Desmin（+）、α-SMA（-）,活化的原代HSCs中Desmin（+）、α-SMA（+）。2.與正常對(duì)照大鼠門(mén)靜脈血清中TG（0.87±0.18 mmol/L）和FFA（0.77±0.05mmol/L）相比,饑餓再飼喂大鼠2h、3h、4h門(mén)靜脈血清中TG的含量分別為1.64±0.28、2.48±0.23、3.12±0.18 mmol/L（P<0.05）,FFA的含量分別為0.91±0.03、1.50±0.11、1.79±0.28 mmol/L（P<0.05）。將LX-2細(xì)胞暴露于不同濃度的PA和大鼠門(mén)靜脈高脂血清均顯著促進(jìn)細(xì)胞中脂質(zhì)的蓄積,且呈劑量依賴(lài)性（P<0.05）,表明成功建立了體外高脂微環(huán)境細(xì)胞學(xué)模型。3.PA與門(mén)靜脈高脂血清對(duì)HSCs產(chǎn)生不同的效應(yīng)。（1）使用不同濃度的PA和高脂血清分別處理LX-2細(xì)胞和原代HSCs,PA抑制LX-2細(xì)胞的增殖,而高脂血清卻促進(jìn)LX-2增殖,且呈時(shí)間、劑量反應(yīng)關(guān)系。（2）較高濃度的PA使LX-2細(xì)胞中α-SMA表達(dá)上調(diào),Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)降低,低濃度的PA（100μM）促進(jìn)Ⅲ型膠原的表達(dá);Real time PCR及Western Blotting結(jié)果顯示,高脂血清促進(jìn)LX-2細(xì)胞α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)。（3）各濃度的PA作用大鼠原代HSCs 12h后,細(xì)胞中的α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)水平均出現(xiàn)了不同程度的升高,而高脂血清處理后僅有高濃度高脂血清組促進(jìn)α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)升高;（4）劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)較高濃度的PA和高脂血清都能促進(jìn)LX-2細(xì)胞遷移。4.1000μM的PA促進(jìn)LX-2細(xì)胞中TGF-β和PDGF mRNA的表達(dá),高濃度高脂血清組促進(jìn)LX-2細(xì)胞中PDGF mRNA的表達(dá),但抑制TGF-βmRNA的表達(dá);所有濃度的PA和高濃度高脂血清組均促進(jìn)了原代HSCs中TGF-β和PDGF mRNA的表達(dá);1000μM的PA和高濃度高脂血清組促進(jìn)了LX-2細(xì)胞中Rho和ROCK mRNA的表達(dá),且與TGF-β和PDGF的表達(dá)基本一致。結(jié)論1.采用肝臟原位灌注、離體消化及Percoll密度梯度離心法成功分離大鼠原代HSCs,并鑒定了靜止與活化狀態(tài)的HSCs。2.成功建立了高脂微環(huán)境模型,模擬了不同高脂條件下細(xì)胞的培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)PA能夠?qū)е翷X-2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累,高脂微環(huán)境可促進(jìn)HSCs中α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的表達(dá),從而影響HSCs的活化、增殖及遷移。3.高脂微環(huán)境可能通過(guò)調(diào)節(jié)HSCs中TGF-β和PDGF的分泌來(lái)上調(diào)Rho/ROCK信號(hào)通路的表達(dá),促進(jìn)HSCs活化,導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)展。

張艷培,梁健,鄧鑫,梁明坤,張冰冰,徐粵娟^[8]（2021）在《淺析肝纖維化發(fā)生機(jī)制》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理肝纖維化是各種原因肝損傷后引起的肝臟復(fù)雜病理變化,國(guó)內(nèi)外近年來(lái)研究表明,如果積極干預(yù),尤其是在早期介入阻斷肝纖維化的進(jìn)展,甚至可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)肝纖維化,因此明確肝纖維化的誘發(fā)因素、發(fā)展機(jī)制及其可逆指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)治療慢性肝病肝纖維化即預(yù)防肝纖維化進(jìn)展為肝硬化有一定的意義。但是目前肝纖維化的發(fā)生進(jìn)展的機(jī)制仍未有較為明確的定論。文章通過(guò)研究近年來(lái)闡述肝纖維化發(fā)生、發(fā)展機(jī)制相關(guān)的文獻(xiàn),并對(duì)文獻(xiàn)中有證據(jù)支持的肝纖維化發(fā)展過(guò)程中的相關(guān)機(jī)制做總結(jié)歸納,為肝纖維化的治療及驗(yàn)證肝纖維化相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供思路及理論支持。

徐瑩^[9]（2019）在《蟲(chóng)草菌絲活性成分C02通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞影響肝星狀細(xì)胞活化的抗肝纖維化機(jī)制研究》文中研究表明1.背景及目的:在我國(guó),無(wú)論相對(duì)發(fā)病率還是絕對(duì)病例數(shù),肝纖維化患者均居世界首位,其主要病因?yàn)?病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病或藥物性肝病等,肝纖維化不僅是肝臟損傷的病理修復(fù)反應(yīng),還會(huì)進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化、肝癌、肝衰竭[1],是嚴(yán)重危害人民健康和消耗社會(huì)資源的難治性疾病。因此,抗肝纖維化是慢性肝病的重要治療環(huán)節(jié)。西醫(yī)學(xué)已有較多的臨床試驗(yàn)報(bào)道,對(duì)于慢性病毒性（乙型、丙型）肝炎抗病毒治療可有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化[2],但迄今臨床上仍缺乏直接針對(duì)纖維結(jié)締組織增生的有效治療肝纖維化的生物或化學(xué)藥物,而中藥及其復(fù)方具有多組分、多途徑與多環(huán)節(jié)的綜合作用特點(diǎn),近年來(lái)發(fā)現(xiàn)在抗肝纖維化治療方面有明顯優(yōu)勢(shì),已經(jīng)取得了較好的臨床療效,如扶正化瘀膠囊（片）、復(fù)方鱉甲軟肝片等[3-5]。蟲(chóng)草菌絲作為中醫(yī)藥抗肝纖維化藥物扶正化瘀膠囊/片中最重要的扶正藥物,課題組前期大量研究證實(shí)以蟲(chóng)草菌絲為主藥的扶正藥物在促進(jìn)肝纖維化逆轉(zhuǎn)中發(fā)揮主要作用,為了解析其發(fā)揮抗肝纖維化作用的主要活性成分,課題組前期開(kāi)展系列活性導(dǎo)向研究,并在近兩年取得了可喜的進(jìn)展,成功從蟲(chóng)草菌絲主要活性部位中分離并證實(shí)了一種脂溶性成分C02是蟲(chóng)草菌絲抗肝纖維化主要活性成分,課題組目前已經(jīng)申請(qǐng)國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利,但由于C02成分抗肝纖維化的作用機(jī)制仍不明確,制約了其進(jìn)一步的新藥開(kāi)發(fā)與應(yīng)用。因此本研究擬開(kāi)展C02體內(nèi)外抗肝纖維化研究,試圖解析其抗肝纖維化機(jī)制,為其新藥開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供參考。2.方法:（1）C02體內(nèi)抗肝纖維化作用與機(jī)制研究:建立CCl4小鼠肝纖維化模型及DMN大鼠肝纖維化模型,給予C02干預(yù)治療后,收集血清及肝組織。通過(guò)肝組織HE及天狼猩紅膠原染色、羥脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量、血清肝功能指標(biāo)、纖維化相關(guān)指標(biāo)因子的免疫組化及蛋白、基因水平變化等檢測(cè),探討蟲(chóng)草菌絲活性成分C02潛在抗纖維化的作用機(jī)制。（2）C02對(duì)肝星狀細(xì)胞（HSCs）與巨噬細(xì)胞活化、增殖的影響:體外采用不同濃度的C02對(duì)激活的JS-1（小鼠肝星狀細(xì)胞）進(jìn)行干預(yù),觀察HSCs活化、增殖相關(guān)基因及蛋白的變化;采用不同濃度的C02對(duì)LPS激活的巨噬細(xì)胞（RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞）進(jìn)行干預(yù),檢測(cè)巨噬細(xì)胞活化、增殖相關(guān)指標(biāo)基因及蛋白的變化。（3）C02通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞表型抑制HSCs活化的研究:體外采用LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞活化模型,給予C02及STAT1抑制劑干預(yù)24 h,去藥后與正常JS-1細(xì)胞共培養(yǎng)24 h,分別收取RAW264.7巨噬細(xì)胞及JS-1細(xì)胞,檢測(cè)巨噬細(xì)胞及肝星狀細(xì)胞活化、增殖相關(guān)指標(biāo)基因及蛋白的變化。觀察活化的巨噬細(xì)胞對(duì)肝星狀細(xì)胞活化的影響以及C02的干預(yù)作用;3.結(jié)果:（1）C02對(duì)CCl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠的干預(yù)作用:C02對(duì)CCl4誘導(dǎo)的纖維化小鼠肝功能有明顯的改善作用,C02中、高劑量組可有效降低血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）含量,且高劑量組藥效優(yōu)于低劑量組（P<0.05）;小鼠肝組織天狼猩紅染色、膠原半定量及肝組織HE染色結(jié)果顯示,C02高劑量組可有效減少膠原沉積及肝臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝組織羥脯氨酸結(jié)果與膠原半定量結(jié)果基本一致（P<0.05）;免疫組化結(jié)果顯示,C02用藥組α-SMA、COL-I表達(dá)較模型組顯著減少,且C02高劑量組藥效優(yōu)于低劑量組,熒光定量RT-PCR和Western-blot結(jié)果表達(dá)與免疫組化結(jié)果基本一致（P<0.01或P<0.05）。Western-blot蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,C02高劑量組p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平較模型組顯著下降（P<0.05）;較模型組相比,C02高劑量組M1型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)蛋白STAT1及IRF5表達(dá)下調(diào)（P<0.05）;免疫組化結(jié)果顯示,C02高劑量組小鼠M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD11b陽(yáng)性表達(dá)較模型組明顯減少,M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD206陽(yáng)性表達(dá)較模型組有所增加。（2）C02對(duì)DMN誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的干預(yù)作用:C02對(duì)DMN誘導(dǎo)的纖維化大鼠肝功能有改善作用,C02中、高劑量組可有效降低AST、ALT含量,且高劑量組藥效優(yōu)于低劑量組（P<0.05）;大鼠天狼猩紅染色、膠原半定量及肝組織HE染色結(jié)果顯示,C02高劑量組可有效減少膠原沉積及肝臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝組織羥脯氨酸結(jié)果與膠原半定量結(jié)果基本一致（P<0.05）;免疫組化結(jié)果顯示,C02用藥組α-SMA、COL-I表達(dá)較模型組顯著減少,且C02高劑量組藥效優(yōu)于低劑量組（P<0.05）,熒光定量PCR及Western-blot結(jié)果與免疫組化的結(jié)果表達(dá)基本一致。Western-blot結(jié)果顯示,C02高劑量組p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平較模型組顯著下降（P<0.05）;較模型組相比,C02高劑量組M1型巨噬細(xì)胞表型相關(guān)蛋白STAT1及IRF5表達(dá)下調(diào)（P<0.05）;免疫組化結(jié)果顯示,C02高劑量組大鼠M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD68陽(yáng)性表達(dá)較模型組明顯減少,M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD163陽(yáng)性表達(dá)較模型組有所增加。（3）C02對(duì)肝星狀細(xì)胞（HSCs）及巨噬細(xì)胞活化、增殖的影響:C02能夠呈劑量依賴(lài)性的抑制小鼠肝星狀細(xì)胞（JS-1）及原代肝星狀細(xì)胞的增殖（P<0.05）;JS-1細(xì)胞經(jīng)5 ng/m L TGF-β1處理激活造模,采取不同濃度C02干預(yù),較模型組相比,40μM C02可顯著降低JS-1細(xì)胞α-SMA和COL-I基因及蛋白的水平（P<0.05）;F-actin細(xì)胞染色結(jié)果顯示,C02在20μM、40μM濃度時(shí)可成不同程度降低JS-1細(xì)胞F-actin的表達(dá);原代小鼠肝星狀細(xì)胞的油紅染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,C02可顯著增加原代肝星狀細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)脂滴含量。RAW264.7巨噬細(xì)胞經(jīng)100 ng/m L LPS處理激活造模,采取不同濃度C02干預(yù),熒光定量PCR結(jié)果顯示,較模型做相比,C02在10μM濃度時(shí)TGF-β1、IL-1、PDGF等相關(guān)炎性因子較模型組m RNA表達(dá)下降（P<0.01或P<0.05）;Elisa結(jié)果顯示,5μM和10μM C02可在2 h-36 h內(nèi)持續(xù)降低巨噬細(xì)胞分泌PDGF-BB的含量（P<0.05）,2.5μM、5μM和10μM C02可在8 h-36 h內(nèi)持續(xù)降低巨噬細(xì)胞i NOS分泌量（P<0.05）;C02對(duì)巨噬細(xì)胞的起效濃度較對(duì)HSCs的起效濃度低2-16倍。（4）C02通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞表型抑制HSCs活化的研究:RAW264.7巨噬細(xì)胞與JS-1細(xì)胞共培養(yǎng):LPS激活的RAW264.7巨噬細(xì)胞給予C02及STAT1抑制劑干預(yù)24h,去藥后與JS-1細(xì)胞共培養(yǎng)24 h,模型組JS-1細(xì)胞α-SMA m RNA表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）,C02干預(yù)后,高劑量組α-SMA m RNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05）,細(xì)胞爬片免疫熒光α-SMA檢測(cè)也得到同樣的結(jié)果;Western-blot蛋白免疫印跡結(jié)果顯示,C02高劑量組可抑制JS-1細(xì)胞p-ERK/ERK的蛋白表達(dá)（P<0.01或P<0.05）。STAT1抑制劑組可抑制JS-1細(xì)胞α-SMA、COL-I m RNA的表達(dá)水平,STAT1抑制劑聯(lián)合C02高劑量組藥效優(yōu)于STAT1或C02高劑量組單用組（P<0.05）;STAT1抑制劑及C02可抑制M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD11b及PDGF m RNA表達(dá)水平,且STAT1抑制劑聯(lián)合C02高劑量組藥效優(yōu)于STAT1或C02高劑量組單用組（P<0.05）。4.結(jié)論:（1）體內(nèi)藥效學(xué)研究表明C02可有效改善CCl4小鼠肝纖維化模型及DMN大鼠肝纖維化模型的肝功能及纖維化程度,C02可以抑制M1型巨噬細(xì)胞及HSCs活化,同時(shí)發(fā)現(xiàn)C02在體內(nèi)的作用機(jī)制與PDGF/ERK信號(hào)通路有關(guān)。（2）體外實(shí)驗(yàn)研究表明C02可能通過(guò)抑制STAT1進(jìn)而抑制M1型巨噬細(xì)胞活化,從而減少PDGF-BB、TNF-α等因子釋放,進(jìn)而抑制HSCs的活化,其抑制HSCs活化的作用機(jī)制與PDGF/ERK信號(hào)通路有關(guān)。

韋淇元^[10]（2019）在《相思藤總黃酮對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及其機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:研究相思藤總黃酮（XIANGSITENG Flavonoid,XSTF）對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及作用機(jī)制。方法:雄性SD大鼠80只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組（0.2mg/kg）、相思藤總黃酮高、中、低劑量組（800、400、200mg/kg）,除正常對(duì)照組外,其余各組大鼠灌胃給予劑量為0.1ml/kg 50%-四氯化碳花生油混合液制造肝纖維化模型,每周兩次。確定大鼠形成肝纖維化后連續(xù)四周每日給予大鼠秋水仙堿和相思藤總黃酮相應(yīng)劑量藥物,正常對(duì)照組和模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水。在給藥期間,除正常對(duì)照組外,其余各組同時(shí)繼續(xù)造模處理。末次給藥24h后,收集血清及肝組織,稱(chēng)量肝臟、脾臟、胸腺重量,分別計(jì)算臟器指數(shù);檢測(cè)大鼠血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性、透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PC-Ⅲ）、層粘蛋白（LN）、Ⅳ型膠原（C-Ⅳ）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平;制備肝臟勻漿,檢測(cè)肝組織中羥脯氨酸（Hyp）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-px）含量;取大鼠肝組織固定于10%甲醛中用于蘇木素-伊紅（HE）染色,MASSON染色觀察病理變化及膠原堆積情況;免疫組化法檢測(cè)肝組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）,α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、PI3K、Akt蛋白表達(dá)水平;熒光定量PCR檢測(cè)肝組織fak、pi3k、akt m RNA表達(dá)情況。結(jié)果:與正常對(duì)照組大鼠相比,模型組大鼠肝脾指數(shù)顯著升高（P<0.01）;HE染色和Masson染色結(jié)果顯示肝組織損傷程度明顯,纖維大量增生;血清中ALT、AST、HA、PC-Ⅲ、LN、C-Ⅳ、TNF-α、IL-6含量顯著升高（P<0.01）;肝組織中Hyp與MDA含量升高,SOD、GSH-px的活性降低（P<0.01）;免疫組化結(jié)果顯示TGF-β1,α-SMA、PI3K、Akt蛋白表達(dá)水平明顯上升（P<0.01）;熒光定量PCR結(jié)果fak、pi3k、akt的m RNA表達(dá)水平提升（P<0.01）;與模型組大鼠相比,相思藤總黃酮高、中劑量能顯著降低大鼠肝脾指數(shù)（P<0.01或P<0.05）,胸腺指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;相思藤總黃酮各劑量均能顯著降低四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠血清ALT、AST水平（P<0.01）,改善肝臟的病理形態(tài)并減輕纖維增生情況;相思藤總黃酮高、中劑量可降低大鼠血清中HA、PC-Ⅲ、LN、C-Ⅳ與肝組織Hyp含量,同時(shí)減少TGF-β1,α-SMA的蛋白表達(dá)（P<0.01或P<0.05）。相思藤總黃酮干預(yù)后可明顯抑制四氯化碳誘導(dǎo)的肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng),與模型組相比,相思藤總黃酮高、中劑量組肝組織中SOD、GSH-px活性升高,MAD含量下降,血清中TNF-α、IL-6含量明顯降低（P<0.01或P<0.05）;相思藤總黃酮低劑量可升高SOD活性,降低血清TNF-α、IL-6含量水平（P<0.05）。與模型組比較,相思藤總黃酮高、中劑量均能下調(diào)FAK-PI3K-Akt信號(hào)通路中fak、pi3k、akt m RNA和PI3K、Akt蛋白的表達(dá)（P<0.01或P<0.05）;相思藤總黃酮低劑量組能下調(diào)fak m RNA及Akt蛋白的表達(dá)（P<0.05）。結(jié)論:相思藤總黃酮對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化具有明顯改善作用,可以明顯減小肝組織損傷,其保護(hù)機(jī)制可能與抑制致纖因子TGF-β1、α-SMA蛋白表達(dá),清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化與減輕炎癥反應(yīng),以及抑制FAK/PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)通路有關(guān)。

二、血小板源生長(zhǎng)因子在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制（論文開(kāi)題報(bào)告）

（1）論文研究背景及目的

此處內(nèi)容要求：

首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。

寫(xiě)法范例：

本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。

（2）本文研究方法

調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。

觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。

實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。

文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。

實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。

定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。

定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。

跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。

功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。

模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。

三、血小板源生長(zhǎng)因子在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制（論文提綱范文）

（1）小鼠Kupffer細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化研究（論文提綱范文）

（2）基于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微尺度生物力學(xué)性質(zhì)研究芪術(shù)顆?？垢卫w維化機(jī)制（論文提綱范文）

（3）柴芪益肝方治療肝纖維化的臨床和實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）

（4）“補(bǔ)腎生髓成肝”改善肝癌肝再生微環(huán)境治療晚期肝癌的臨床療效觀察及機(jī)制研究（論文提綱范文）

（5）荔枝核總黃酮對(duì)HSC-T6的作用和差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究（論文提綱范文）

（6）肝星狀細(xì)胞來(lái)源的旁分泌信號(hào)分子IL-11促進(jìn)肝細(xì)胞癌進(jìn)展的機(jī)制研究（論文提綱范文）

（7）高脂微環(huán)境活化肝星狀細(xì)胞的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）

（8）淺析肝纖維化發(fā)生機(jī)制（論文提綱范文）

（9）蟲(chóng)草菌絲活性成分C02通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞影響肝星狀細(xì)胞活化的抗肝纖維化機(jī)制研究（論文提綱范文）

（10）相思藤總黃酮對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及其機(jī)制研究（論文提綱范文）

四、血小板源生長(zhǎng)因子在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制（論文參考文獻(xiàn)）

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• [2]基于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞微尺度生物力學(xué)性質(zhì)研究芪術(shù)顆?？垢卫w維化機(jī)制[D]. 張強(qiáng). 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院, 2021(02)
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• [10]相思藤總黃酮對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D]. 韋淇元. 廣西中醫(yī)藥大學(xué), 2019(02)

標(biāo)簽：肝星狀細(xì)胞論文;  細(xì)胞生長(zhǎng)因子論文;  血清蛋白論文;  巨噬細(xì)胞論文;  肝纖維化論文;