一、改良Kamada法大鼠原位肝移植模型的建立（論文文獻綜述）
張黎[1]（2019）在《CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注損傷作用的研究》文中研究表明第一部分大鼠CaMKⅡγ基因慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[目 的]構(gòu)建大鼠CaMKⅡγ基因的過表達及干擾慢病毒載體并鑒定,為下一步探討慢病毒介導(dǎo)CaMKⅡγ基因干擾調(diào)控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路及其在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注損傷的作用提供基礎(chǔ)。[方 法]根據(jù)大鼠CaMKⅡγ目的基因的mRNA序列,全基因合成CaMKⅡγ目的基因,構(gòu)建大鼠CaMKⅡγ過表達慢病毒載體及CaMKⅡγ過表達慢病毒空載體,根據(jù)本課題組前期實驗中已篩出的干擾效率最高的siRNA序列構(gòu)建大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒載體及CaMKⅡγyshRNA慢病毒空載體,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌TOP10感受態(tài)細胞并進行測序驗證,隨后轉(zhuǎn)染293T細胞進行慢病毒包裝并用絕對定量qPCR測定慢病毒滴度。應(yīng)用Western Blot檢測大鼠CaMKⅡγ過表達慢病毒載體的蛋白表達情況,確定大鼠CaMKⅡγ過表達的有效性。根據(jù)不同慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠肝細胞BRL-3A,將其分為生理鹽水空白對照組（CON組）,CaMKⅡγ過表達慢病毒空載體組（CON-mCaMKⅡγ組）,CaMKⅡγ過表達慢病毒載體組（mCaMKⅡγ組）,CaMKⅡγ干擾慢病毒空載體組（CON-shCaMKⅡγ組）,CaMKⅡγ干擾慢病毒載體組（shCaMKⅡγ組）,應(yīng)用Western Blot檢測各組CaMKⅡγ蛋白表達情況。[結(jié) 果]成功構(gòu)建了大鼠CaMKIIⅡγ過表達慢病毒載體及CaMKⅡγ過表達慢病毒空載體,Western Blot檢測大鼠CaMKⅡγ過表達慢病毒載體蛋白的表達。根據(jù)已知干擾效率最高的siRNA序列成功構(gòu)建大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒載體及CaMKⅡγshRNA慢病毒空載體。絕對定量qPCR測定大鼠CaMKⅡγ過表達慢病毒載體、大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒載體滴度均為2E+9TU/mL。不同慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠肝細胞BRL-3A 48h后,mCaMKⅡγ組的CaMKⅡγ蛋白表達最高,shCaMKⅡγ的CaMKⅡγ表達最低,mCaMKⅡγ組的CaMKⅡγ表達高于CON-mCaMKⅡγ組（P<0.01）,shCaMKⅡγ組的 CaMKⅡγ表達低于CON-shCaMKⅡγ組（P<0.01）。[結(jié) 論]大鼠CaMKⅡγ基因的過表達慢病毒在293T細胞中構(gòu)建成功并表達,大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒載體在293T細胞中構(gòu)建成功。大鼠CaMKⅡγ過表達慢病毒在大鼠肝細胞BRL-3A中蛋白表達顯著增加,而大鼠CaMKⅡγ干擾慢病毒在大鼠肝細胞BRL-3A中的蛋白表達量顯著下降,為后續(xù)研究CaMKⅡγ作為靶基因干擾調(diào)控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路及在大鼠DCD肝移植術(shù)缺血-再灌注損傷的作用提供基礎(chǔ)。第二部分建立SD大鼠DCD原位肝移植模型[目 的]建立穩(wěn)定的SD大鼠DCD原位肝移植模型并確定在本課題后續(xù)實驗中SD大鼠DCD原位肝移植模型的最佳熱缺血時間。[方 法]本實驗通過Kamada“二袖套”法,控制不同熱缺血時間（熱缺血Omin、熱缺血15min及熱缺血30min）建立SD大鼠DCD原位肝移植模型,并通過移植術(shù)后存活時間及肝臟變化確定本實驗最佳動物模型熱缺血時間。[結(jié) 果]供肝熱缺血Omin、15min及30min的SD大鼠DCD原位肝移植模型術(shù)后7d的生存率分別為90%、80%及60%,隨著熱缺血時間延長,肝臟損傷加重,肝功能ALT、AST及TBIL逐漸升高,肝臟病理切片結(jié)果顯示肝細胞從輕度水腫到點狀壞死,再從橋接樣壞死到大片狀壞死。[結(jié) 論]在SD大鼠DCD原位肝移植模型中,熱缺血時間的長短是直接影響供肝質(zhì)量的關(guān)鍵因素,隨著熱缺血時間延長,供肝肝功能損傷逐漸加重,與病理結(jié)果一致,術(shù)后受體存活率隨熱缺血時間延長而顯著下降。經(jīng)過對比,熱缺血15min是建立SD大鼠DCD原位肝移植模型并為后續(xù)進一步試驗的理想造模時間,既可保證移植術(shù)后受體有一定的存活率,又可觀察后續(xù)慢病毒干預(yù)對肝損傷是否有效。第三部分CaMKⅡγ在不同熱缺血時間與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系[目 的]探討CaMKⅡγ在不同熱缺血時間與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系。[方 法]用第二部分建立的供肝熱缺血Omin、15min及30min的SD大鼠DCD原位肝移植模型,三組分別于肝移植術(shù)后1d、3d及7d處死20只大鼠,取肝細胞行流式細胞術(shù)測Ca2+濃度水平、線粒體膜勢能,Tunel法測肝組織中肝細胞的凋亡,Western Blot測肝組織中CaM、CaMKⅡγ及肝細胞質(zhì)中AIF、CytC的蛋白水平表達,QRT-PCR測肝組織中CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA,免疫組化測肝組織中CaM、CaMKⅡγ蛋白表達,探討CaMKⅡγ在不同熱缺血時間與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系。[結(jié) 果]三組移植術(shù)后1dCa2+水平達到高峰,術(shù)后3d Ca2+下降,到術(shù)后7d Ca2+又逐漸升高,同一時點,熱缺血15min組及30min組Ca2+濃度水平高于熱缺血Omin組（P<0.01）。JC-10標記綠色熒光細胞比例隨時間延長逐漸升高,提示線粒體膜勢能下降比例逐漸升高,術(shù)后1d,三組無統(tǒng)計學差異,術(shù)后3d,熱缺血15min組及30min組綠色熒光細胞比例高于熱缺血Omin組（P<0.05）,術(shù)后7d,熱缺血15min組及30min組綠色熒光細胞比例高于熱缺血Omin組（P<0.01）。Tunel檢測肝細胞凋亡比例隨時間延長逐漸升高,術(shù)后1d,熱缺血30min組肝細胞凋亡比例高于熱缺血Omin組（P<0.05）,熱缺血15min組與熱缺血Omin組無統(tǒng)計學差異,術(shù)后3d,熱缺血15min組及30min組肝細胞凋亡比例高于熱缺血Omin組（P<0.05）,術(shù)后7d,熱缺血30min組肝細胞凋亡比例高于熱缺血Omin組（P<0.05）且熱缺血30min組肝細胞凋亡比例高于熱缺血15min組（P<0.05）。Western Blot測CaaM、CaMKⅡγ、AIF及Cyt C蛋白表達隨熱缺血時間延長而逐漸增加（P<0.05,P<0.01）,同一時點,熱缺血15min組及30min組的蛋白表達高于熱缺血Omin組,QRT-PCR及免疫組化測CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA及 CaM、CaMKⅡγ蛋白陽性率與 Western Blot 結(jié)果趨勢大致相同。[結(jié) 論]熱缺血時間是影響供肝質(zhì)量的關(guān)鍵因素,SD大鼠DCD原位肝移植術(shù)后,供肝熱缺血時間越長,供肝功能損傷越重,移植術(shù)后Ca2+濃度逐漸升高,從分子、蛋白及組織水平驗證了隨熱缺血時間的延長,CaM及CaMKⅡγ表達增加,CaMKⅡγ作用于線粒體膜,線粒體膜勢能下降細胞比例增加,AIF及CytC從線粒體內(nèi)釋放,線粒體凋亡增加,由線粒體凋亡引起的肝細胞凋亡隨之增加。第四部分慢病毒介導(dǎo)CaMKⅡγ與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系[目 的]探討慢病毒介導(dǎo)CaMKⅡγ與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系。[方 法]建立熱缺血15min SD大鼠DCD原位肝移植模型,每只大鼠術(shù)中通過門靜脈按1.0×108TU/mL注射CaMKⅡγ過表達及其對照慢病毒。（mCaMKⅡγ組、CON-mCaMKⅡγ組）、CaMKⅡγ干擾及其對照慢病毒（shCaMKⅡγ組及CON-shCaMKⅡγ組）、生理鹽水（CON組）轉(zhuǎn)染移植肝臟,于術(shù)后1d、3d、7d分別處死20只大鼠。取血清行肝功能檢測,取肝細胞行流式細胞術(shù)測Ca2+濃度水平、線粒體膜勢能,Tunel法測肝組織中肝細胞的凋亡,Western Blot測肝組織中CaM、CaMKⅡγ及肝細胞質(zhì)中AIF、Cyt C的蛋白水平表達,QRT-PCR測肝組織中CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA,免疫組化測肝組織中CaM、CaMKⅡγ的蛋白表達,電鏡檢測肝組織中肝細胞、線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化。[結(jié) 果]CaMKⅡγ過表達慢病毒組移植術(shù)后1d、3d及7d的生存率分別為83.3%、78.3%及70.0%,而CaMKⅡγ干擾慢病毒組移植術(shù)后1d、3d及7d的生存率分別為98.3%、93.3%及88.3%,提示干擾CaMKⅡγ的表達對大鼠DCD肝移植術(shù)后肝損傷是保護因素,可提高大鼠DCD肝移植術(shù)后生存率。肝功能結(jié)果示:血清 ALT、AST 術(shù)后各時點 mCaMKⅡγ組高于 CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組低于CON-shCaMKⅡγ組（P<0.01）,血清TBIL于術(shù)后1d各組無顯著差異,術(shù)后3d及7d結(jié)果同血清ALT、AST。移植術(shù)后Ca2+濃度于術(shù)后1d達到高峰,各組間無顯著差異,術(shù)后3d逐漸下降,術(shù)后7d再次升高,術(shù)后3d及7d,mCaMKⅡγ組高于 CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組低于 CON-shCaMKⅡγ組（P<0.01）。JC-10標記綠色熒光細胞比例在術(shù)后1d及3d,shCaMKⅡγ組綠色熒光細胞比例低于 CON-shCaMKⅡγ組（P<0.05,P<0.01）,術(shù)后 7d,mCaMKⅡγ組綠色熒光細胞比例高于 CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組低于 CON-shCaMKⅡγ組（P<0.01）。Tunel法測肝細胞凋亡結(jié)果示:術(shù)后1d、3d及7d,mCaMKⅡγ組肝細胞凋亡比例高于CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組肝細胞凋亡比例低于CON-shCaMKⅡγ組（p<0.01）。Western Blot 測 CaM、CaMKⅡγ、AIF 蛋白表達于術(shù)后 1d,mCaMKⅡγ組表達高于 CON-mCaMKⅡγ組（P<0.01,P<0.05）,術(shù)后 3d 及 7d,mCaMKⅡγ組表達高于CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組表達低于CON-shCaMKⅡγ組（P<0.01）,CytC蛋白表達于術(shù)后1d、3d及7d,mCaMKⅡγ組表達高于CON-mCaMKⅡγ組,shCaMKⅡγ組表達低于 CON-shCaMKⅡγ組（P<0.05,P<0.01）。QRT-PCR 測 CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA 的表達及免疫組化測 CaM、CaMKⅡγ蛋白陽性率與Western Blot結(jié)果趨勢相同。電鏡結(jié)果可見mCaMKⅡγ組出現(xiàn)超微結(jié)構(gòu)損傷,肝細胞腫脹及壞死、線粒體腫脹、嵴消失,而shCaMKⅡγ組受損形態(tài)明顯改善,肝細胞大致正常,線粒體或肝細胞輕微腫脹,CON組、CON-mCaMKⅡγ組、CON-shCaMKⅡγ組可見肝組織輕微的超微結(jié)構(gòu)損傷,隨時間推移,mCaMKⅡγ組損傷逐漸加重,shCaMKⅡγ組損傷逐漸減輕。[結(jié) 論]DCD供肝因缺血-再灌注損傷導(dǎo)致CaMKⅡγ異常表達,可通過激活Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路誘導(dǎo)線粒體損傷,上調(diào)CaMKⅡγ可使Ca2+水平升高,CaMKⅡγ作用于線粒體膜,使線粒體膜勢能下降,線粒體通透性增加進而導(dǎo)致線粒體腫脹、破裂及凋亡,線粒體中AIF及Cyt C釋放入細胞質(zhì)可啟動線粒體凋亡,進一步促進肝細胞凋亡;而下調(diào)CaMKⅡγ則可使Ca2+水平降低,減少線粒體膜勢能下降,線粒體中AIF及Cyt C釋放入細胞質(zhì)減少,進而減少線粒體凋亡及其誘導(dǎo)的肝細胞凋亡,對SD大鼠DCD原位肝移植術(shù)后的肝功能損傷有保護作用。CaMKⅡγ過表達在DCD供肝因缺血-再灌注損傷導(dǎo)致的線粒體凋亡中起主導(dǎo)作用,特異性干擾CaMKⅡγ表達可特異性調(diào)控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路,有效改善SD大鼠DCD原位肝移植術(shù)后肝損傷及提高術(shù)后移植大鼠存活率。
唐波[2]（2018）在《樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)中CXCL12/CXCR4作用的實驗研究》文中進行了進一步梳理第一部分樹鼩原位肝移植模型的建立[目的]首次嘗試用樹鼩建立同種異體原位肝移植動物模型,為肝移植的臨床及科學研究提供一種新型的,與人類基因型及免疫系統(tǒng)同源性更高,且更為經(jīng)濟實用的肝移植動物模型。[方法]在Kamada報道的“二袖套”法肝移植模型基礎(chǔ)上加以改進,通過對總共60只樹鼩進行隨機分組為供體組和受體組進行同種異體原位肝移植實驗,觀察手術(shù)成功率,術(shù)后樹鼩存活率,并行肝臟組織病理學檢查,建立穩(wěn)定的樹鼩原位肝移植模型。[結(jié)果]定型手術(shù)成功率為90.00%（27/30）,樹鼩24h存活率為76.67%（23/30）,3 天存活率為 60.00%（18/30）,1 周存活率為 30.00%（9/30）,最長存活時間為11天。3例手術(shù)失敗原因為:肝上下腔靜脈吻合口出血,麻醉過深,氣胸死亡各1例。24h內(nèi)死亡4例,其中1例因吻合口出血,1例吻合口血栓形成,2例死亡原因不明。術(shù)后存活超24h死亡23例,原因分別為急性排斥反應(yīng)15例,占65.22%,其它為:膽道梗阻1例,腹腔感染2例,肝葉壞死1例,不明原因4例。[結(jié)論]1樹鼩原位肝移植模型建立的難度及操作復(fù)雜性比大鼠肝移植更大,綜合影響因素更多。合理的圍手術(shù)期處理及嫻熟的顯微鏡操作是影響肝原位移植模型手術(shù)成功的關(guān)鍵。2樹鼩肝移植模型成功建立為本研究的創(chuàng)新點,目前未見報道,首次成功用樹鼩建立了同種異體原位肝移植模型,作為一種新型動物肝移植模型的建立——改良“二袖套”法在樹鼩原位肝移植模型的建立,模型穩(wěn)定可靠,為今后將樹鼩原位肝移植模型運用于肝移植的臨床及基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分樹鼩淋巴細胞CXCL12/CXCR4基因表達和遷移的體外實驗研究[目的]研究雷帕霉素對樹鼩外周血淋巴細胞趨化因子CXCL12（SDF-1）趨化功能及其受體CXCR4表達的影響,為移植排斥體內(nèi)研究提供實驗依據(jù)。[方法]實驗分組:Rapacymin藥物組、DMSO對照組和空白組。采用MTS細胞增殖實驗,觀察雷帕霉素對樹鼩淋巴細胞存活及狀態(tài)的影響;用細胞遷移運動實驗檢測雷帕霉素對人源性重組CXCL12所誘導(dǎo)樹鼩淋巴細胞遷移能力的影響:使用Real-time PCR法檢測雷帕霉素對樹鼩淋巴細胞CXCR4基因的表達情況。[結(jié)果]雷帕霉素對樹鼩淋巴細胞活力無顯著影響,但對樹鼩的淋巴細胞的遷移有抑制作用。同時雷帕霉素可下調(diào)樹鼩淋巴細胞的CXCR4基因表達。[結(jié)論]趨化因子CXCL12及其受體CXCR4表達水平可影響淋巴細胞遷移,為樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)體內(nèi)實驗研究提供依據(jù)。第三部分樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)中CXCL12/CXCR4表達的作用及機制研究[目的]在肝移植模型建立的基礎(chǔ)上加用免疫抑制劑及趨化因子受體阻止劑對趨化因子及其受體的作用進行實驗研究。通過表達的差異性,闡明肝移植急性排斥中趨化因子/趨化因子受體（CXCL12/CXCR4）軸調(diào)控淋巴細胞遷移發(fā)揮的作用和機理等系列問題。為肝移植急性排斥反應(yīng)發(fā)生機制提供重要依據(jù),同時為臨床有效的治療和控制急性排斥反應(yīng),促進移植物存活提供實驗數(shù)據(jù)和理論支持。[方法]1樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)模型建立,方法同第一部分。2實驗分組;（1）對照組,A組（n=25）:正常樹鼩作為對照;（2）排斥組,B組（n=25）:樹鼩同種異基因肝移植組;（3）AMD3100組,C組（n=25）:樹鼩同種異基因肝移植靜脈注射AMD3100,1mg/kg/day;（4）雷帕霉素（Rapacymin,RAPA）抑制組,D組（n=25）。術(shù)后1、3、5、7d隨機處死5只,收集血液、肝臟、脾臟標本。留下5只觀察生存期,繪制生存曲線。3 實驗室常規(guī)指標測定:收集各組肝移植術(shù)后1d,3d,5d,7d的血清,使用血液全自動生化分析儀測定TP,ALT,AST,TB水平。4流式細胞儀檢測淋巴細胞CXCR4:分別在肝移植術(shù)后1d,3d,5d,7d,收集脾臟淋巴細胞,進行分離、培養(yǎng),流式細胞檢測。5移植物組織形態(tài)及病理學檢測:免疫組織化學染色（IHC）檢測并分析CXCL12的表達情況。肝組織HE染色病理學檢查,根據(jù)Banff評分系統(tǒng)判斷排斥反應(yīng)程度。6酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血漿中CXCL12（SDF-1）蛋白量。7組織蛋白印跡（Western blot）分析與檢測各組移植肝的CXCR4蛋白表達情況。[結(jié)果]1 C、D組樹鼩移植后中位生存時間明顯長于B組,差異有顯著意義（P<0.05）,各組與 A 組比較,（P<0.05）。2樹鼩肝移植術(shù)后實驗室常規(guī)檢查指標:對比各組樹鼩肝移植術(shù)后1d,3d,5d,7d的相關(guān)指標。血清TP同時間點各組之間相比較,B、C、D組明顯低于A組,差異有顯著性（P<0.05）。而1d時,B、C、D,TP開始下降,但三組間比較,無顯著性差異（P>0.05）。B組呈持續(xù)性下降,而C、D組術(shù)后5d、7d隨著時間延長,開始恢復(fù),呈上升趨勢,C、D組5d,7d時點與B組比較,差異有顯著性（P<0.05）。D組3d后,TP上升略高于C組,但兩組統(tǒng)計無差異（P>0.05）。B組,C組,D組術(shù)后血清TB,ALT,AST,急劇上升,與A組在1d,3d,5d,7d同期比較,明顯高于A組,差異有顯著性（P<0.05）。B組持續(xù)性升高,而C、D組術(shù)后5d、7d隨著時間延長,肝功能開始恢復(fù),略有上升趨勢,但較平緩,C、D組5d,7d時點與B組比較,差異有顯著性（P<0.05）。而1d時,B、C、D三組間比較,無顯著性差異（P>0.05）。3外周脾淋巴細胞流式細胞檢測:術(shù)后1d、3d,B、C、D組間脾臟淋巴CXCR4表達無明顯差異（p>0.05）,與A組有顯著性差異（P<0.05）。術(shù)后5d、7d各時間點,C、D組明顯低于B組,差異有顯著性（P<0.05）。4移植肝臟形態(tài)學檢測:采用Banff分級對移植肝臟AR的程度進行分級,A組術(shù)后各時間點,移植肝臟組織結(jié)構(gòu)正常;B、C、D組1d肝小葉結(jié)構(gòu)基本完好,肝細胞基本無變性、壞死,匯管區(qū)僅有少許炎性細胞浸潤,未發(fā)生排斥;B組移植術(shù)后Id排斥不明確,在術(shù)后第3、5、7 d分別發(fā)生了輕度（Ⅰ級）、中度（Ⅱ級）、重度（Ⅲ級）排斥;C、D組術(shù)后3天到10天內(nèi),有少數(shù)發(fā)生了輕度AR。B組與C,D組同期比較排斥反應(yīng)更為嚴重（P<0.05）。B組,術(shù)后3d可有明確的急性排斥反應(yīng)發(fā)生。5免疫組化檢測肝臟CXCL12表達:術(shù)后第7d B組CXCL12在肝臟細胞表達最高,C組、D組肝細胞CXCL12表達少,C組、D組與B組比較有顯著性差異（P<0.05）。A組正常組織也有較少量的CXCL12表達,但與B組、C組、D組比較有顯著性差異（P<0.05）。6酶聯(lián)免疫吸附法檢測樹鼩外周血漿中CXCL12蛋白的表達:肝移植后`d,B組,C組,D組血清CXCL12表達相互比較均無明顯差異（P>0.05）,與A組相比有顯著差異（P<0.01）。移植術(shù)后3d,B組血清中CXCL12快速上升,與術(shù)前`d的表達水平相比較,有顯著差別（P<0.05）,并隨時間上調(diào)。C組、D組表達水平在術(shù)后5d,7d天上升緩慢,與B組同時間點比較表達水平低（P<0.05）。CXCL12蛋白的表達變化與RAI呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)（r）為0.880。7 Western蛋白印跡分析檢測:術(shù)后第1d各組樹鼩移植肝內(nèi)CXCR4蛋白表達無明顯差異（P>0.05）。而術(shù)后第3d、5d、7d各時段A組、C組、D組樹鼩淋巴細胞表達CXCR4蛋白明顯低于B組（P<0.05）。C組、D組術(shù)后CXCR4蛋白表達高于A組（P<0.05）,而C組、D組兩組之間第3d、5d、7d 比較CXCR4蛋白表達差異不明顯（P>0.05）。[結(jié)論]1樹鼩與人同源性較好,可用人的相關(guān)試劑應(yīng)用在樹鼩實驗研究上,本實驗研究結(jié)果的可靠性,進一步證實樹鼩肝移植模型可應(yīng)用于肝移植的系列實驗研究中,并具有物種的優(yōu)越性和價值。2樹鼩肝移植模型急性排斥反應(yīng)研究證實,正常肝組織有CXCL12表達,急性排斥時,可與CXCR4協(xié)同發(fā)生淋巴細胞、炎性細胞遷移至移植物,引起移植肝功能不全或受損。3趨化因子受體抑制劑AMD3100可阻斷CXCL12/CXCR4軸在肝移植排斥中的作用,抑制T淋巴細胞向移植物浸潤,減輕急性排斥反應(yīng)。4雷帕霉素可抑制CXCL12人重組蛋白誘導(dǎo)的樹鼩淋巴細胞遷移。其相關(guān)可能的機制為:雷帕霉素可下調(diào)CXCL12的激活與表達,并影響CXCR4受體的表達,以調(diào)控CXCL12/CXCR4信號通路所介導(dǎo)的淋巴細胞的運動能力,發(fā)揮其免疫抑制作用。5肝移植后CXCL12/CXCR4的表達水平與急性排斥反應(yīng)的程度密切相關(guān),表達水平與排斥反應(yīng)強度有關(guān),可評估免疫排斥反應(yīng)狀態(tài)。6 CXCL12血清中持續(xù)高表達可較敏感地預(yù)示肝移植急性排斥發(fā)生。檢測血清CXCL12表達可作為一種無創(chuàng)的、敏感的早期診斷肝移植急性排斥反應(yīng)的方法,為臨床監(jiān)測和診斷提供參考依據(jù)。并且可通過CXCL12的表達水平在一定程度上預(yù)測排斥反應(yīng)的嚴重程度和判斷抗排斥反應(yīng)的治療效果。
李善寶,李蕾,宋方彬,岑瑾,方旭,徐軍明[3]（2018）在《單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型的體會》文中研究說明目的:建立穩(wěn)定大鼠原位肝移植模型,縮短術(shù)中無肝期時間,提高手術(shù)成功率及受體存活率。方法:在Kamada"二袖套法"的基礎(chǔ)上改進,單人直視下建立大鼠原位肝移植模型,行60例SD大鼠原位肝移植手術(shù)。本研究簡化供受體麻醉方式,供肝采用經(jīng)門靜脈（必要時配合腹主動脈補救方式）進行冷灌注,縮短修肝時間,提前預(yù)置牽引線,固定進針位置,改進植入肝臟肝上下腔靜脈吻合、肝下下腔靜脈及門靜脈套管。觀察并記錄各組大鼠供體手術(shù)、修肝套管、無肝期、受體手術(shù)及肝移植手術(shù)總時間。術(shù)后檢測1,7,30天受體大鼠肝功能（血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）,天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）及總膽紅素（TB））并分析生存情況。結(jié)果:無肝期結(jié)束后,供體肝臟灌注良好,受體麻醉移除后較快蘇醒。供體手術(shù)、修肝套管、無肝期、受體手術(shù)及肝移植手術(shù)總時間分別為（32.5±1.58）、（7.3±1.43）、（15.6±2.62）、（53.2±3.74）、（108.5±2.34）min。大鼠術(shù)后24 h（手術(shù)成功率）為95%,1周生存率分別為90%,1月生存率分別為86.7%。大鼠術(shù)后短時間內(nèi)肝功能水平增高,24 h時ALT（228.5±54.5 IU/L）,AST（439.3±86.3 IU/L）,TB（6.2±0.7μM）,1周后逐漸恢復(fù)正常。結(jié)論:改良后的方法可以簡易麻醉流程,縮短無肝期,提高手術(shù)成功率及受體的生存率。
展希[4]（2018）在《HO-1對大鼠移植肝膽道缺血再灌注損傷的保護作用研究》文中認為[背景和目的]肝臟移植已成為終末期肝病的主要治療方式,但移植肝膽道缺血再灌注損傷引起的膽道并發(fā)癥是影響肝移植遠期療效的主要原因之一。因此,減輕移植肝膽道缺血再灌注損傷是目前改善移植受者預(yù)后和存活率的首要策略。HO-1是血紅素代謝的限速酶,有高度的可誘導(dǎo)性,具有抗氧化、抗炎、調(diào)節(jié)細胞周期和調(diào)節(jié)微循環(huán)的功能,但誘導(dǎo)HO-1的表達是否可以減輕移植肝膽道缺血再灌注損傷,且肝移植是將供體肝臟移植給受體,應(yīng)該先處理供體還是受體才能發(fā)揮更大的保護作用仍不清楚。本研究擬通過建立大鼠原位肝移植冷缺血再灌注損傷模型,構(gòu)建大鼠H0-1過表達腺病毒載體和借助RNAi技術(shù)構(gòu)建靶向HO-1-shRNA腺病毒載體,轉(zhuǎn)入大鼠活體內(nèi)誘導(dǎo)或沉默HO-1基因的表達,觀察HO-1對移植肝膽汁分泌、轉(zhuǎn)運能力的影響,同時分析HO-1與膽管上皮細胞損害、膽管炎發(fā)生及膽管上皮周圍纖維化進程的內(nèi)在關(guān)系,并通過改變供體和（或）受體HO-1表達來觀察其對膽道缺血再灌注損傷的影響,為臨床上改善肝移植術(shù)后缺血型膽道病變提供新的思路和方法。[方法]1.構(gòu)建大鼠Adv-HO-1和Adv-HO-1-siRNA,并分別轉(zhuǎn)入大鼠體內(nèi),24h后取出肝臟,利用Westem-blot檢測HO-1蛋白表達水平,觀察體內(nèi)轉(zhuǎn)染效果。2.大鼠原位肝移植模型的建立:根據(jù)Kamada的“二袖套法”,建立大鼠原位肝移植模型,觀察術(shù)中、術(shù)后并發(fā)癥及術(shù)畢24h后存活率,并取3只作為手術(shù)組與正常組大鼠比較光鏡下肝臟組織形態(tài)學變化,證實大鼠肝移植缺血再灌注模型建立成功。3.大鼠體內(nèi)實驗研究:將320只SD大鼠按供、受體隨機選取分為5組（每組供、受體各32只）,分別為A組（空白腺病毒）、B組（供體注射Adv-HO-1,受體注射空白腺病毒）、C組（供、受體均注射Adv-HO-1）、D組（供體注射Adv-HO-1-siRNA,受體注射空白腺病毒）和E組（供、受體均注射Adv-HO-1-siRNA）。各組于術(shù)前24h尾靜脈分別注射空白腺病毒、Adv-HO-1、Adv-HO-1-siRNA各lml,濃度均為3×108pfu/ml。肝移植后收集lh內(nèi)膽汁檢測其成分,分別于術(shù)后1d、3d、7d、14d處死受體,全自動生化分析儀檢測肝功酶學（ALT、AST、ALP、GGT、TBIL）,免疫組化檢測 CD3+、CD45R+T淋巴細胞的浸潤程度和ki67標記膽管上皮細胞增殖情況,光鏡和透射電鏡下觀察肝臟及膽管組織形態(tài)學變化,激光共聚焦雙重免疫熒光標記Laminine和CK-18,觀察大、小膽管基底膜的破壞程度和連續(xù)性,檢測膽汁成分并用Western-blot 分析 HO-1、Bsep、Mrp2、Ntcp 的蛋白含量。[結(jié)果]1.腺病毒轉(zhuǎn)染效果檢測:成功構(gòu)建Adv-HO-1和Adv-HO-1-siRNA,經(jīng)測序證明擴增序列正確,轉(zhuǎn)染大鼠體內(nèi)顯示:與空病毒組相比,誘導(dǎo)組HO—1的蛋白表達水平上調(diào),抑制組HO—1的蛋白表達水平下降,差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2.模型建立結(jié)果:一共行大鼠原位肝移植175例,肝移植術(shù)中各種原因死亡者及術(shù)后24h內(nèi)死亡者共計12例,以術(shù)后存活24h視為手術(shù)成功,手術(shù)成功163例。各組之間死亡例數(shù)無統(tǒng)計學差異（p>0.05）,24h后存活率約為93%（163/175）。光鏡下觀察手術(shù)組與正常組大鼠組織形態(tài)學變化,發(fā)現(xiàn)手術(shù)組組織形態(tài)學變化符合缺血再灌注損傷,證明模型建立成功。3.體內(nèi)實驗結(jié)果:①肝功酶學:再灌注后1d、3d、7d和14d,與A組比較,B、C 組 ALT、AST、GGT、ALP、TBIL 明顯下降,D、E組 ALT、AST、GGT、ALP、TBIL明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;②免疫組化檢測:再灌注后ld,E組CD3+、CD45R+T淋巴細胞等炎性細胞在匯管區(qū)浸潤較A組增多,C組的炎性細胞浸潤較A組減少;7d時E組ki67抗體標記膽管上皮細胞壞死、脫落、增殖較明顯,C組ki67抗體標記膽管上皮細胞壞死、增殖不明顯,膽管反應(yīng)輕;③光鏡下病理組織學變化:A組、B組和C組肝細胞變性、水腫,有炎性細胞浸潤;D組和E組肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂,肝細胞變性、壞死、增生,匯管區(qū)大量炎性細胞浸潤;④透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu):與A組相比,B組、C組膽管上皮細胞損傷較輕,線粒體不腫脹,微絨毛豐富,排列整齊,D組和E組可見膽管柱狀上皮細胞明顯腫脹變形,甚至導(dǎo)致膽管閉塞,膽管內(nèi)微絨毛消失,線粒體空泡化,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張;⑤激光共聚焦雙重免疫熒光檢測:B、C組膽管損傷較輕,而D、E組可見膽管基底膜部分脫落,膽管損傷較重,周圍肝細胞明顯變性;⑥Western-blot檢測:B組和C組HO—1、Mrp2、Bsep、Ntcp蛋白水平較A組、D組和E組升高更明顯,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。[結(jié)論]1.構(gòu)建了大鼠Adv-HO-1和Adv-HO-1-siRNA,并成功轉(zhuǎn)染至大鼠體內(nèi)。2.成功建立“二袖套”法大鼠原位肝移植模型,并采用“支架法”重建肝動脈,使其更符合臨床上肝移植的病理生理改變,保證了較高的移植大鼠術(shù)后存活率,證明我們所建立的大鼠原位肝移植模型是一種穩(wěn)定、便于操作的模型,值得推廣。3.在肝移植術(shù)前誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)HO-1高表達,能明顯減輕移植肝膽道缺血再灌注損傷,抑制HO-1的表達則會加重其損傷。4.優(yōu)先處理供體,誘導(dǎo)供體HO-1的高表達比誘導(dǎo)受體HO-1的高表達對減輕移植肝膽道缺血再灌注損傷的作用更明顯,為臨床上減輕和防治肝移植術(shù)后缺血型膽道病變提供新的思路和方法。
黃兆宇,武睿超,冉江華,劉均漢[5]（2018）在《大鼠DCD供肝原位肝移植術(shù)后早期死亡的原因分析》文中研究表明目的建立穩(wěn)定的大鼠心臟死亡器官捐獻（donation after cardiac death,DCD）供肝原位肝移植模型,分析移植后24 h內(nèi)大鼠死亡原因并探索相應(yīng)的改進措施。方法所有供肝獲取前經(jīng)歷供體心臟停跳10 min,采用改良Kamada的"二袖套"吻合法完成大鼠DCD供肝原位肝移植手術(shù),記錄各個手術(shù)階段所用時間及術(shù)后大鼠的死亡情況。結(jié)果在40 d內(nèi)完成大鼠DCD供肝原位肝移植手術(shù)100例,供體手術(shù)時間為（20±5）min,受體手術(shù)時間為（55±5）min,無肝期為（20±3）min。移植術(shù)后受體一般情況可。術(shù)中死亡9例,其中術(shù)中大出血4例、麻醉意外1例、無肝期過長1例、套管置入失敗1例、空氣栓塞2例;術(shù)后12 h內(nèi)死亡22例,其中術(shù)后腸道壞死6例、術(shù)后吻合口滲血6例、術(shù)后肺水腫3例、術(shù)中失血量過多4例、術(shù)后血管栓塞2例、不明原因死亡1例;1224 h死亡19例,其中術(shù)后腸道壞死9例、術(shù)后吻合口滲血3例、術(shù)后肺水腫2例、術(shù)中失血量過多1例、術(shù)后血管栓塞1例、不明原因死亡3例。結(jié)論導(dǎo)致大鼠DCD供肝原位肝移植術(shù)后早期死亡的原因很多,其中術(shù)后腸道壞死、術(shù)中及術(shù)后出血、術(shù)后肺水腫及術(shù)后血管栓塞是主要的致死因素。針對術(shù)后死亡原因采取相應(yīng)的預(yù)防及改進措施能大大提高大鼠術(shù)后存活率,從而建立穩(wěn)定的大鼠DCD供肝原位肝移植模型。
范林[6]（2017）在《低溫攜氧機械灌注對大鼠脂肪供肝的修復(fù)作用及其潛在機制》文中指出第一部分大鼠原位肝移植模型手術(shù)改進目的:建立大鼠原位肝移植（Rat orthotopic liver transplantation,ROLT）模型對供肝質(zhì)量的評價與研究至關(guān)重要。傳統(tǒng)的顯微縫合重建管道方法耗時較長,且對吻合技術(shù)要求過高,不利于推廣。Kamada二袖套法及其改良法的出現(xiàn)使該模型簡化并趨于穩(wěn)定。筆者基于此方法,針對手術(shù)中潛在危險因素和細節(jié)問題的處理進行了探討,并且對整個ROLT術(shù)中影響大鼠術(shù)后生存率的危險因素進行分析,對肝上下腔靜脈吻合（suprahepatic inferior vena cava,SHVC）技術(shù)進行改進,以期獲得穩(wěn)定的大鼠術(shù)后生存率。方法:雄性SPF級SD大鼠180只,體重250±20 g。實驗分為三組,第一組:ROLT模型學習階段（60只）;第二組:ROLT模型穩(wěn)定階段（60只）;第三組:ROLT模型改良階段（60只）。在受體手術(shù)過程中,記錄各個部分操作用時,包括:無肝期,肝上下腔靜脈、門靜脈、肝下下腔靜脈及膽管的重建時間等,同時記錄手術(shù)成功率。術(shù)后每天觀察受體的一般狀況,對術(shù)中及術(shù)后死亡的大鼠及時進行尸檢。統(tǒng)計并比較移植術(shù)后1天及7天生存率。結(jié)果:本研究共實施大鼠原位肝移植手術(shù)90例。三個階段無肝期相比較,第二階段比第一階段縮短40%,第三階段比第一階段縮短64%。三個階段肝移植術(shù)后24小時存活率分別為:20%（6/30）;86.7%（26/30）;100%（30/30）。三個階段大鼠肝移植術(shù)后一周存活率分別為 10%（3/30）,60%（18/30）及 93%（28/30）。結(jié)論:ROLT術(shù)后生存率的提升須注意對術(shù)中各細節(jié)的處理。無肝期過程中,需快速、熟練地完成SHVC的吻合。尤其是縮短無肝期可提高手術(shù)安全性,而縮短無肝期決定于手術(shù)熟練度,技術(shù)穩(wěn)定性,特別是針對大鼠無肝期內(nèi)環(huán)境和血液動力學改變采取有效的處理措施,可有效減少術(shù)中危險因素,提高圍手術(shù)期和術(shù)后生存率,并為進一步實驗奠定堅實的基礎(chǔ)。第二部分大鼠低溫攜氧機械灌注系統(tǒng)的建立及其參數(shù)探討目的:本研究通過比較并評估低溫攜氧機械灌注（Hypothermic oxygenated machine perfusion,HOPE）過程中不同壓力參數(shù)下肝臟質(zhì)量的變化,建立一種穩(wěn)定、安全、有效的HOPE系統(tǒng),實現(xiàn)對肝臟的精細化灌注,以達到修復(fù)和優(yōu)化肝臟質(zhì)量的目的,為臨床研究提供思路,從而達到擴大供肝來源的目的。方法:雄性SPF級SD大鼠（220±10g）30只,根據(jù)不同的門靜脈灌注壓力分隨機分為 5 組（n=6）,A 組:OmmHg,B 組:2mmHg,C 組:4mmHg,D 組:6mmHg及E組:8mmHg。肝臟獲取后經(jīng)離體冷保存（A組）或HOPE（B組、C組、D組及E組）干預(yù)3小時后,觀察并記錄各組肝臟濕重變化,檢測灌注液中ALT、AST及LDH的含量與肝組織中MDA、糖原、乳酸鹽含量以評估肝臟質(zhì)量。結(jié)果:隨著肝臟門靜脈灌注壓力的升高,各組肝臟濕重均有不同程度增加,D組及E組增加最為明顯,最高達40%。同時,灌注液中ALT、AST、LDH,肝臟組織中的MDA及乳酸鹽的含量隨著門靜脈灌注壓力的升高逐漸增加,而C組肝臟中糖原含量最低,E組含量最高。結(jié)論:嚴格調(diào)控HOPE期間的灌注參數(shù),將灌注壓力控制在4mmHg以內(nèi),能夠保證肝臟充分灌注的同時盡可能地降低灌注性損傷,從而達到修復(fù)和優(yōu)化肝臟質(zhì)量的目的,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。第三部分大鼠脂肪供肝模型的建立目的:本研究旨在建立一種穩(wěn)定的大鼠脂肪供肝模型,模擬人體發(fā)病機制,為優(yōu)化邊緣供肝的研究奠定基礎(chǔ)。方法:成年SPF級SD大鼠90只,雄性,體重220±10g。隨機選取10只大鼠經(jīng)過適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后取材,檢測指標作為正常對照。其余80只分為兩組,A組:高脂飲食組（High-fat diet,HFD）（n=40）,采取60%高脂飲食（60%脂肪,20.6%碳水化合物,19.4%蛋白。其中脂質(zhì)部分包含90%豬油及10%大豆油）飼養(yǎng);B組:普通飲食組（Standard chow diet,SCD）（n=40）,采用普通低脂飲食飼養(yǎng),飲食誘導(dǎo)持續(xù)8周。造模期間觀察大鼠生命體征及一般情況,每周檢測其組織學及血清學變化情況。結(jié)果:與SCD組相比,HFD組血清中ALT和AST水平均無統(tǒng)計學差異。HFD組血清TG水平在第1、2周上升較快,達到正常值的兩倍以上,在隨后的第3-8周內(nèi)逐漸降至正常值。HFD組血糖、胰島素及肝組織脂質(zhì)含量與SCD組比較有明顯統(tǒng)計學差異（P<0.05,P<0.05和P<0.01）。各組脂肪肝中MDA含量無明顯差異（P>0.05）。隨著造模時間延長,肝臟脂肪變性程度逐漸加重,第1-3周以小泡型脂肪變性為主,第4-8周則以大泡型脂肪變性為主。結(jié)論:選擇不同造模時間來誘導(dǎo)實驗所需程度的大鼠肝臟脂肪變性,本組脂肪供肝的模型驗證了該配方的有效性及穩(wěn)定性,并為進一步實驗提供可靠穩(wěn)定的大鼠脂肪供肝模型。第四部分低溫攜氧機械灌注對大鼠脂肪供肝的修復(fù)作用及其機制目的:器官供需嚴重失衡,脂肪供肝質(zhì)量的優(yōu)化可提高使用率,有益于擴大供體器官的來源。本研究擬分析靜態(tài)冷保存（Static Cold storage,SCS）與低溫攜氧機械灌注（Hypothemic oxygenated machine perfusion,HOPE）對脂肪肝的作用,進一步探討 HOPE對于脂肪供肝的質(zhì)量優(yōu)化作用及其潛在機制。方法:成年SPF級SD大鼠44只,雄性,體重220±10g,采用普通飼料（A組）或60%高脂飼料（B-D組）進行飼養(yǎng)。分為4組:A組（11只）:非脂肪變性肝臟獲取后,置于UW液（0-4℃）中保存45分鐘（修肝）后移植。B組（11只）:脂肪變性肝臟獲取后在0-4℃的保存液中4小時后移植。C組（11只）:脂肪變性肝臟獲取后經(jīng)歷3小時HOPE以及1小時CS后移植。D組（11只）:脂肪變性肝臟獲取后經(jīng)歷3小時HOPE+1小時CS（灌注液中增加脫脂藥）后移植。通過記錄肝臟灌注過程中的參數(shù),Western blot 檢測肝臟組織中 KLF-2、eNOS、ICAM-1、HMGB1、TLR4、PRDX6、Caspase-3、PP2A、PPY、GRP78、CHOP 與 ATF-6 蛋白表達水平,Tunel 檢測各組中肝細胞凋亡情況,試劑盒檢測肝臟組織中ATP與肝糖原含量,比較各組移植術(shù)后生存率,綜合評價肝臟質(zhì)量。結(jié)果:比較門靜脈開放1min后各組肝臟復(fù)灌情況,結(jié)果顯示A組脂肪供肝復(fù)灌效果最佳,B組效果最差;與B組相比,C組與D組微循環(huán)相關(guān)蛋白KLF2及eNOS表達明顯升高,同時D組表達最高,且差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,而ICAM-1蛋白水平明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;HMGB1與TLR4在C組與D組的表達水平明顯下降,B組中表達量最高,而PRDX6在B組中明顯降低,三者差別均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,表明經(jīng)HOPE與DF干預(yù)之后的脂肪供肝炎癥損傷明顯減輕,抗氧化損傷能力明顯增強;C組與D組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白PPY、GRP78、CHOP、ATF-6表達較B組呈下降趨勢,其中D組表達最低,反之C組與D組中PP2A表達升高,B組表達最低,三者差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,同時Tunel結(jié)果證實:與B組相比,C組與D組肝細胞凋亡得到明顯抑制。移植術(shù)后24小時肝臟組織中ATP與糖原含量結(jié)果顯示,B組中ATP含量較低,而C與D組中ATP含量明顯升高,反之,肝糖原含量在B組中較高,三者差異有統(tǒng)計學差異（P<0.05）;比較各組移植術(shù)后生存曲線發(fā)現(xiàn),C組與D組移植術(shù)后生存率較B組明顯升高。結(jié)論:低溫攜氧機械灌注通過改善脂肪供肝微循環(huán),抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,穩(wěn)定線粒體功能促進ATP合成,清除炎癥因子等減輕缺血再灌注損傷,從而提高移植術(shù)后受者生存率,為臨床應(yīng)用HOPE提供了理論依據(jù)。脫脂藥在低溫狀態(tài)下無法促進脂肪供肝的脂質(zhì)分解,但可以進一步改善微循環(huán)、抑制炎癥因子的釋放等,從而優(yōu)化肝臟質(zhì)量。為脂肪肝應(yīng)用于移植提供理論依據(jù)。
陳強星,李坤,孔偉浩,張劍[7]（2017）在《單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型》文中研究指明目的探討簡便、有效的大鼠原位肝移植模型建立方法。方法基于"二袖套法",采用單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型的方法對30對SD大鼠行不重建肝動脈的原位肝移植手術(shù)。對麻醉、供肝獲取、供肝灌注、修肝、受體肝臟切除、受體膽道重建等重要操作步驟進行改良,無肝期受體采用小劑量肝素化方案。觀察并記錄肝移植手術(shù)過程中供肝灌注前供體手術(shù)時間、供肝冷缺血時間、無肝期時間、受體手術(shù)時間和肝移植手術(shù)總時間。術(shù)后對30只受體按隨機數(shù)字表法隨機分為A、B兩組,其中A組10只,用于檢測肝功能;B組20只,用于觀察生存情況。生存分析采用KaplanMeier生存曲線。結(jié)果灌注后供肝良好,受體大鼠移植術(shù)后一般狀況良好,手術(shù)過程中供肝灌注前供體手術(shù)時間、供肝冷缺血時間、無肝期時間、受體手術(shù)時間、肝移植手術(shù)總時間分別為（18.5±1.6）、（75.1±3.8）、（20.5±1.8）、（58.3±3.1）、（118.0±4.2）min。A組大鼠肝移植術(shù)后2周肝功能逐漸好轉(zhuǎn),B組大鼠術(shù)后1周生存率為100%,2周為90%,1個月為75%。結(jié)論單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型是一種簡便、有效的方法。
李溫凱[8]（2016）在《CaM/CaMK Ⅱ?qū)Υ笫蟾我浦残g(shù)后肝細胞線粒體損傷、凋亡的影響》文中認為[目的]通過雙向調(diào)節(jié)CaMK Ⅱ水平,探討大鼠肝移植術(shù)后CaM/CaMK Ⅱ?qū)Ω渭毎€粒體損傷、凋亡的影響。[方法]將健康雄性SD大鼠隨機分為5組（A、B、C、D、E組）,每組10對,行kamada二套管法建立SD-SD大鼠原位肝移植,在供體肝臟取下后分別從從門靜脈輸注表達CaMK ⅡγshRNA（A組）、CaMK Ⅱγ（B組）的慢病毒載體及CaMK ⅡγshRNA慢病毒空白載體（C組）、CaMK Ⅱγ的慢病毒空白載體（D組）轉(zhuǎn)染供肝,對照組（E組）輸注生理鹽水,術(shù)后各1d、3d、7d、14d分別用Western bolt檢測CaM、CaMK Ⅱ、cytochrome C、ALF水平,QRT-PCR檢測CaM、CaMK ⅡγmRNA水平,流式細胞儀檢測細胞凋亡水平。[結(jié)果]1、成功建立kamada“二袖套法”大鼠原位肝移植模型。2、A組各時點肝CaM、CaMK Ⅱ、Cyt C、AIF、水平低,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。B組各時點肝CaM、CaMK Ⅱ、Cyt C、AIF、水平高,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。QRT-PCR檢測：A組各時點CaM mRNA水平低、CaMK ⅡmRNA水平低,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。B組各時點CaM mRNA水平低、CaMK ⅡmRNA水平高,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。C、D、E組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。流式細胞儀檢測細胞凋亡水平：A組最低,B組最高,C、D、E組無顯著差異。[結(jié)論]大鼠肝移植術(shù)后,對CaM/CaMK Ⅱ信號通路中CaMK Ⅱ的下調(diào)、可以有效減少肝細胞Cyt C、AIF蛋白的水平,降低肝臟線粒體損傷、細胞凋亡的程度。
劉駁強[9]（2016）在《CaMKⅡ表達調(diào)控對大鼠肝移植術(shù)后肝功能及細胞凋亡的變化研究》文中認為[目的]本研究分為三個部分,第一部分為大鼠原位肝移植模型的建立；第二部分為構(gòu)建CaMKⅡγshRNA和CaMKⅡγ的慢病毒表達體系;第三部分為探討Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路對大鼠肝移植術(shù)后細胞凋亡的影響。[方法]1、大鼠原位肝移植模型的建立。通過雙人操作訓練建立大鼠原位肝移植模型。2、探討Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路對大鼠肝移植術(shù)后細胞凋亡的影響,將健康雄性SD大鼠隨機分為5組（A、B、C、D、E組）,每組20只,行SD-SD大鼠原位肝移植,在供體肝臟取下置入保存液后從門靜脈輸注表達CaMKⅡγshRNA（A組）、表達CaMKⅡγ的慢病毒載體（B組）轉(zhuǎn)染大鼠供肝,與CaMKⅡγshRNA慢病毒空白載體（C組）、CaMKⅡγ的慢病毒空白載體（D組）及輸注生理鹽水的對照組（E組）進行對比,對比術(shù)后1d、3d、7d、14d各組Ca2+、ALT、AST水平以及肝細胞凋亡情況,探討Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路對大鼠肝移植術(shù)后細胞凋亡的影響。[結(jié)果]1、經(jīng)訓練成功建立SD-SD大鼠原位肝移植模型。2、通過對供肝離體局部灌注轉(zhuǎn)染成功,在對CaMKⅡ選擇性特異阻斷（A組）后,其細胞內(nèi)Ca2+水平,血清ALT, AST的水平低于其他組（B、C、D、E組）,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,在使CaMKⅡ選擇性表達上調(diào)時（B組）,其胞質(zhì)內(nèi)Ca2+水平,血清ALT, AST的水平高于其他組（A、C、D、E組）,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。且空載體組（C、D組）與對照組（E組）其胞質(zhì)內(nèi)C82+的水平,血清ALT, AST的水平無明顯差異（P>0.05）。[結(jié)論]1、糖皮質(zhì)激素可能提高大鼠原位肝移植存活率。2、Ca2+/CaM/CaMKⅡ信號通路的選擇性阻斷可以明顯降低移植后肝細胞內(nèi)的Ca2+水平從而有效減少缺血再灌注損傷及細胞凋亡的發(fā)生,為臨床治療移植后肝功能不全和防治缺血再灌注損傷提供新的研究方向。
吳莉[10]（2016）在《飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護作用及機制研究》文中提出目的:研究飽和氫氣生理鹽水對大鼠原位肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護作用,并進一步探討自噬參與其腎臟保護效應(yīng)的分子機制。方法:健康成年雄性SD大鼠56只,周齡810周,體重220250 g,采取隨機數(shù)字表法隨機分為4組（n=8）:假手術(shù)組、大鼠原位肝移植模型組（OLT組）、飽和氫氣生理鹽水處理組（HS組）及氯喹預(yù)處理組（CQ組）,其中假手術(shù)組8只,其它三組均為8對。假手術(shù)組行單純開關(guān)腹操作,并游離相應(yīng)血管和肝周韌帶;大鼠原位肝移植模型組建立大鼠原位肝移植模型,并于無肝期前5 min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射生理鹽水6 ml/kg;飽和氫氣生理鹽水處理組于無肝期前5 min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射飽和氫氣生理鹽水6 ml/kg,其它操作同大鼠原位肝移植模型組;氯喹預(yù)處理組于模型建立前1 h經(jīng)腹腔注射自噬特異性抑制劑氯喹60mg/kg,其它處理同飽和氫氣生理鹽水處理組。再灌注后6 h抽取靜脈血樣和腎組織檢測血清學和組織學指標,通過檢測血清尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）水平評價腎功能情況,測定腎組織丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性評價腎臟氧化應(yīng)激程度,通過伊紅-美藍（HE）染色于光學顯微鏡下觀察腎組織形態(tài)學改變,并行腎小管損傷評分;采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記（TUNEL）染色法定量檢測腎小管上皮細胞凋亡情況,計算凋亡指數(shù);采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測活化的caspase-3、細胞色素c（Cyt c）等凋亡相關(guān)m RNA的表達水平;通過蛋白免疫印跡法（western blot）檢測磷酸化p53（p-53）、微管相關(guān)蛋白輕鏈3Ⅱ（LC3Ⅱ）、Beclin-1、活化的caspase-3和細胞色素c（Cyt c）等自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達水平;并且通過透射電子顯微鏡觀察自噬小體和自噬溶酶體的形成情況以及腎小管上皮細胞超微結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果:與假手術(shù)組比較,OLT組腎功能顯著降低,腎小管上皮細胞出現(xiàn)空泡及管型,腎小管損傷評分增加,腎臟氧化應(yīng)激水平升高,細胞凋亡明顯增加,凋亡指數(shù)升高,活化的caspase-3和Cyt c的表達水平顯著上調(diào),p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達水平差異無統(tǒng)計學意義;與OLT組比較,HS組大鼠腎功能明顯改善,腎組織空泡樣改變減少,腎小管損傷評分降低,腎臟氧化應(yīng)激損傷減輕,細胞凋亡明顯減少,凋亡指數(shù)降低,并且活化的caspase-3和Cyt c的表達水平顯著降低,與此同時,p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表達明顯上調(diào),透射電鏡下可見自噬小體和自噬溶酶體的形成增加;與HS組比較,CQ組大鼠腎功能降低,腎組織病理學損傷嚴重,腎小管損傷評分和凋亡指數(shù)升高,腎臟氧化應(yīng)激水平升高,細胞凋亡增加,活化的caspase-3和Cyt c的表達水平上調(diào),LC3Ⅱ及Beclin-1的表達下調(diào),p53磷酸化的表達水平差異無統(tǒng)計學意義,應(yīng)用氯喹抑制自噬后部分抵消了飽和氫氣生理鹽水的腎臟保護效應(yīng)。結(jié)論:飽和氫氣生理鹽水可通過調(diào)控p53磷酸化的表達,誘導(dǎo)細胞自噬的激活,并且自噬激活通過抑制腎小管上皮細胞凋亡、減輕腎臟氧化應(yīng)激損傷等途徑緩解大鼠原位肝移植術(shù)后急性腎損傷。
二、改良Kamada法大鼠原位肝移植模型的建立（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、改良Kamada法大鼠原位肝移植模型的建立（論文提綱范文）
（1）CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注損傷作用的研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 參考文獻 |
| 第一部分 大鼠CaMKⅡγ基因慢病毒的構(gòu)建及鑒定 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 建立SD大鼠DCD原位肝移植模型 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第三部分 CaMKⅡγ在不同熱缺血時間與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第四部分 慢病毒介導(dǎo)CaMKⅡγ與大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注損傷的關(guān)系 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 全文總結(jié) |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果 |
| 致謝 |
（2）樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)中CXCL12/CXCR4作用的實驗研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 參考文獻 |
| 第一部分 樹鼩原位肝移植模型的建立 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 樹鼩淋巴細胞CXCL12/CXCR4基因遷移和表達的體外實驗研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第三部分 樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)中CXCL12/CXCR4表達的作用及機制研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述一 |
| 參考文獻 |
| 綜述二 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果 |
| 致謝 |
（3）單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型的體會（論文提綱范文）
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 動物 |
| 1.1.2 器械耗材 |
| 1.1.3 麻醉及其他試劑 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 術(shù)前準備 |
| 1.2.2 手術(shù)過程 |
| 1.2.3 主要觀測指標 |
| 1.3 統(tǒng)計學方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
（4）HO-1對大鼠移植肝膽道缺血再灌注損傷的保護作用研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 參考文獻 |
| 第一部分: 大鼠HO-1和HO-1-siRNA腺病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染效果檢測 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分: 大鼠肝移植缺血再灌注損傷模型的建立 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第三部分: 誘導(dǎo)和siRNA沉默供、受體大鼠HO-1的表達對大鼠移植肝膽道缺血再灌注損傷的保護作用研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 展望 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果 |
| 附錄 |
| 致謝 |
（5）大鼠DCD供肝原位肝移植術(shù)后早期死亡的原因分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 實驗動物 |
| 1.3 手術(shù)方法 |
| 1.3.1 術(shù)前準備 |
| 1.3.2 供體手術(shù) |
| 1.3.3 受體手術(shù) |
| 1.3.4 術(shù)后處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 3.1 術(shù)中大鼠死亡的主要原因及改進措施 |
| 3.1.1 術(shù)中出血 |
| 3.1.2 麻醉意外 |
| 3.1.3 縮短無肝期、減少套管失敗導(dǎo)致的出血及空氣栓塞 |
| 3.2 術(shù)后24 h內(nèi)主要死亡原因及改進措施 |
| 3.2.1 腸道壞死 |
| 3.2.2 肺水腫 |
| 3.2.3 血管栓塞 |
（6）低溫攜氧機械灌注對大鼠脂肪供肝的修復(fù)作用及其潛在機制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要英文縮略詞表 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠原位肝移植模型手術(shù)改進 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 5 附圖 |
| 第二部分 大鼠低溫攜氧機械灌注系統(tǒng)的建立及其參數(shù)探討 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 5 附圖 |
| 第三部分 大鼠脂肪供肝模型的建立 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 5 附圖 |
| 第四部分 低溫攜氧機械灌注對大鼠脂肪供肝的修復(fù)作用及其潛在機制 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 5 附圖 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 附錄 攻博期間發(fā)表的科研成果目錄 |
| 致謝 |
（7）單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型（論文提綱范文）
| 材料與方法 |
| 一、材料 |
| 二、手術(shù)方法 |
| (一)術(shù)前準備 |
| (二)手術(shù)模擬訓練及預(yù)實驗 |
| (三)手術(shù)過程 |
| (四)術(shù)后處理 |
| 三、觀察指標 |
| 四、統(tǒng)計學方法 |
| 結(jié)果 |
| 一、手術(shù)模擬訓練及預(yù)實驗情況 |
| 二、圍手術(shù)期情況 |
| 三、生存分析 |
| 討論 |
（8）CaM/CaMK Ⅱ?qū)Υ笫蟾我浦残g(shù)后肝細胞線粒體損傷、凋亡的影響（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分 CaM/CaMK Ⅱ水平對大鼠肝移植術(shù)后肝細胞線粒體損傷、凋亡的影響 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 文獻論著 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果 |
| 致謝 |
（9）CaMKⅡ表達調(diào)控對大鼠肝移植術(shù)后肝功能及細胞凋亡的變化研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表(以字母順序排列) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻 |
| 第二部分 表達CaMKⅡγ/CaMKlI γsbRNA的慢病毒表達體系對大鼠原位肝移植術(shù)后肝功能及細胞凋亡影響的研究 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 論著 |
| 攻讀學位期間獲得的學術(shù)成果 |
| 致謝 |
（10）飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護作用及機制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語/符號說明 |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 對象和方法 |
| 1.1 對象 |
| 1.1.1 實驗動物 |
| 1.1.2 主要試劑 |
| 1.1.3 主要儀器設(shè)備 |
| 1.1.4 飽和氫氣生理鹽水的制備 |
| 1.2 實驗動物分組和模型建立 |
| 1.2.1 實驗動物分組 |
| 1.2.2 大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 1.2.3 大鼠原位肝移植術(shù)中平均動脈血壓的監(jiān)測 |
| 1.3 標本采集 |
| 1.3.1 血液標本的采集 |
| 1.3.2 腎組織標本的采集 |
| 1.4 項目檢測與方法 |
| 1.4.1 血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的檢測 |
| 1.4.2 腎組織丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的檢測 |
| 1.4.3 腎組織病理學檢測 |
| 1.4.4 TUNEL檢測腎小管上皮細胞凋亡情況 |
| 1.4.5 凋亡相關(guān)mRNA的檢測 |
| 1.4.6 腎小管上皮細胞超微結(jié)構(gòu)的檢測 |
| 1.4.7 自噬及凋亡相關(guān)蛋白的檢測 |
| 1.5 統(tǒng)計學分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 大鼠肝移植術(shù)中平均動脈血壓的改變 |
| 2.2 各組大鼠腎功能和氧化應(yīng)激水平比較 |
| 2.3 各組大鼠腎組織病理學改變 |
| 2.4 各組大鼠凋亡情況比較 |
| 2.5 腎小管上皮細胞超微結(jié)構(gòu)改變 |
| 2.6 各組大鼠自噬相關(guān)蛋白的比較 |
| 3 討論 |
| 3.1 動物模型的建立 |
| 3.1.1 實驗動物的選擇 |
| 3.1.2 大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 3.2 肝移植術(shù)后急性腎損傷的機制 |
| 3.3 氫氣與急性腎損傷 |
| 3.4 自噬與急性腎損傷 |
| 3.4.1 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制自噬 |
| 3.4.2 急性腎損傷誘導(dǎo)自噬 |
| 3.4.3 自噬調(diào)控的分子機制 |
| 3.4.4 自噬參與腎損傷保護的機制 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說明 |
| 綜述 含氫液/氫氣用于器官功能保護的研究進展 |
| 綜述參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
四、改良Kamada法大鼠原位肝移植模型的建立（論文參考文獻）
- [1]CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注損傷作用的研究[D]. 張黎. 昆明醫(yī)科大學, 2019(05)
- [2]樹鼩肝移植急性排斥反應(yīng)中CXCL12/CXCR4作用的實驗研究[D]. 唐波. 昆明醫(yī)科大學, 2018(05)
- [3]單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型的體會[J]. 李善寶,李蕾,宋方彬,岑瑾,方旭,徐軍明. 現(xiàn)代生物醫(yī)學進展, 2018(14)
- [4]HO-1對大鼠移植肝膽道缺血再灌注損傷的保護作用研究[D]. 展希. 昆明醫(yī)科大學, 2018(01)
- [5]大鼠DCD供肝原位肝移植術(shù)后早期死亡的原因分析[J]. 黃兆宇,武睿超,冉江華,劉均漢. 中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志, 2018(03)
- [6]低溫攜氧機械灌注對大鼠脂肪供肝的修復(fù)作用及其潛在機制[D]. 范林. 武漢大學, 2017(06)
- [7]單人直視下改良建立大鼠原位肝移植模型[J]. 陳強星,李坤,孔偉浩,張劍. 中華肝臟外科手術(shù)學電子雜志, 2017(02)
- [8]CaM/CaMK Ⅱ?qū)Υ笫蟾我浦残g(shù)后肝細胞線粒體損傷、凋亡的影響[D]. 李溫凱. 昆明醫(yī)科大學, 2016(02)
- [9]CaMKⅡ表達調(diào)控對大鼠肝移植術(shù)后肝功能及細胞凋亡的變化研究[D]. 劉駁強. 昆明醫(yī)科大學, 2016(02)
- [10]飽和氫氣生理鹽水對大鼠肝移植術(shù)后急性腎損傷的保護作用及機制研究[D]. 吳莉. 天津醫(yī)科大學, 2016(03)