一、江蘇省2001年腸出血性大腸埃希菌O157:H7監(jiān)測(cè)（論文文獻(xiàn)綜述）
金鑫,仲慧,郎睿,朱瑩瑩,吳銀華[1]（2021）在《2011—2019年?yáng)|臺(tái)市腸出血性大腸桿菌O157:H7宿主糞便檢測(cè)結(jié)果》文中提出目的了解東臺(tái)市動(dòng)物宿主、腹瀉病人糞便中腸出血性大腸桿菌O157:H7檢出情況,為制定預(yù)防措施提供科學(xué)依據(jù)。方法 2011—2019年,每年5月、7月、9月,采集腸道門診腹瀉病人糞便樣本,并于流行前期（5月）和流行后期（9月）采集牛、羊、雞、豬糞便樣本。采用EC肉湯加新生霉素增菌、免疫磁珠富集法濃縮、科馬嘉平板分離,經(jīng)生化反應(yīng)和血清學(xué)鑒定,使用多重引物PCR方法檢測(cè)毒力因子。結(jié)果 2011—2019年,共檢測(cè)宿主糞便樣本5 244份,檢出陽(yáng)性樣本74份,陽(yáng)性檢出率為1.42%。2012年陽(yáng)性檢出率最高,為6.11%（35/573）,不同年份檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=91.21,P<0.05）;5月陽(yáng)性檢出率（2.05%）高于9月（1.26%）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.05,P<0.05）;腹瀉病人糞便樣本中,陽(yáng)性檢出率為0.13%;動(dòng)物糞便樣本中,陽(yáng)性檢出率為2.43%,以牛最高（4.86%）,不同類型動(dòng)物檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=43.20,P<0.05）。圈養(yǎng)動(dòng)物陽(yáng)性檢出率（1.21%）低于散養(yǎng)（4.45%）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=30.23,P<0.05）。檢測(cè)菌株74株,stx1、stx2、eaeA、hly基因攜帶率分別為0、41.89%、97.30%、97.30%,未檢出變種基因。結(jié)論東臺(tái)市仍存在腸出血性大腸桿菌流行的潛在危險(xiǎn),應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物糞便管理及健康教育干預(yù)力度,保護(hù)公眾健康。
紀(jì)凱麗[2]（2020）在《7種血清型STEC多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用》文中研究表明產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌（Shigella toxin-producing Escherichia coli,STEC）是一類腸道病原體的總稱,可引起全球范圍內(nèi)的零散感染或廣泛爆發(fā)。牛是STEC最主要的宿主,STEC在其腸道內(nèi)生存、繁殖,隨糞便排出體外,污染食物、水源、土壤,經(jīng)糞口途徑傳播,對(duì)人類有高致病性,可引起人類的胃腸道疾病如出血性腸炎、溶血性尿毒癥,嚴(yán)重者還會(huì)導(dǎo)致死亡。O157血清型是STEC的主要致病血清型,但近年來,一些非O157血清型（如O26、O45、O103、O111、O121、O145）的流行也日益嚴(yán)重,在有的國(guó)家和地區(qū)甚至超過了 O157血清型。為快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)奶牛糞便中O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157等7種血清型的STEC,本文建立了一種富集增菌后進(jìn)行多重?zé)晒舛縋CR的檢測(cè)方法,可有效檢出奶牛糞便中的這7種STEC,并在驗(yàn)證了該方法的可行性后,將此方法應(yīng)用于江蘇省部分地區(qū)奶牛場(chǎng)的糞便樣品檢測(cè)。1.7種血清型STEC多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)、生化鑒定檢測(cè)方法過程復(fù)雜,檢測(cè)周期比較長(zhǎng),且容易造成漏檢。本文采用Taqman探針法,建立一種多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法,配合富集培養(yǎng),可快速、準(zhǔn)確地對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。本研究將7種血清型的產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌分為三組:①針對(duì)O157血清型,檢測(cè)其高特異性O(shè)抗原基因rfbE與stx1、stx2、eae四個(gè)基因;②針對(duì)O103、O111、O121血清型,檢測(cè)其wzxO103、wzxO111、wzxO121三個(gè)基因;③針對(duì)O26、O45、O145血清型,檢測(cè)其wzxO26、wbqE+FO45、wzxO145三個(gè)基因。針對(duì)這三組目標(biāo)血清型菌株的靶標(biāo)基因,同時(shí)進(jìn)行三個(gè)多重?zé)晒舛縋CR反應(yīng),即可完成對(duì)7種血清型菌株的檢測(cè)。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示,三組多重?zé)晒舛縋CR除陽(yáng)性對(duì)照組出現(xiàn)目的基因擴(kuò)增外,其余對(duì)照組均無擴(kuò)增曲線;靈敏性試驗(yàn)結(jié)果顯示,每個(gè)菌株的檢測(cè)限濃度均達(dá)到101 CFU/mL;重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示,各靶基因在模板濃度相同情況下,Ct值差值小于1。以上結(jié)果證明該多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)法的特異性好、靈敏度高和重復(fù)性好,該檢測(cè)方法具有可行性。檢測(cè)方法在實(shí)驗(yàn)室層面初步建立后,為進(jìn)一步驗(yàn)證方法在生產(chǎn)上的可行性,從奶牛場(chǎng)采集100份奶牛糞便樣品,于富集前、后分別用國(guó)際上廣泛使用的多重經(jīng)典PCR（cPCR）檢測(cè)方法與本研究建立的多重?zé)晒舛縋CR（mqPCR）進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示:O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157 等 7 種血清型,富集前 cPCR 檢測(cè)法陽(yáng)性率為2%、2%、3%、0%、1%、5%、1%;富集前mqPCR檢測(cè)法陽(yáng)性率為4%、5%、7%、1%、4%、17%、5%;富集后 cPCR 檢測(cè)法陽(yáng)性率為 5%、3%、6%、1%、4%、11%、2%;富集后 mqPCR 檢測(cè)法陽(yáng)性率為 8%、11%、10%、3%、7%、25%、7%。數(shù)據(jù)表明,多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)前將樣品進(jìn)行富集培養(yǎng),可有效提高樣品檢出率,較國(guó)際上廣泛使用的多重經(jīng)典PCR方法更加敏感準(zhǔn)確。2.江蘇省部分地區(qū)奶牛場(chǎng)糞便樣品臨床檢測(cè)從江蘇省部分地區(qū)的4個(gè)奶牛場(chǎng)分別采集100份奶牛糞便樣品,共400份。將樣品振蕩培養(yǎng)增菌,取增菌后培養(yǎng)物制取DNA模板,采用本研究構(gòu)建的富集增菌后多重?zé)晒舛縋CR進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示:O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157等7種血清型,在A奶牛場(chǎng)樣品中的陽(yáng)性率為6%、11%、7%、0%、4%、14%、5%;在B奶牛場(chǎng)樣品中的陽(yáng)性率為9%、4%、11%、2%、8%、18%、6%;在C奶牛場(chǎng)樣品中的陽(yáng)性率為3%、5%、4%、0%、3%、27%、0%;在D奶牛場(chǎng)樣品中的陽(yáng)性率為2%、3%、2%、0%、1%、16%、0%。數(shù)據(jù)表明,4個(gè)奶牛場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)血清型均為STEC O145,陽(yáng)性率分別 14%、18%、27%、16%。綜上所述,本文所建立的多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)法靈敏度高、特異性好;江蘇省不同牛場(chǎng)之間STEC流行情況不同。
趙金龍[3]（2019）在《DHEA對(duì)小鼠抵抗大腸桿菌O157:H7感染的影響及其機(jī)制研究》文中研究表明大腸桿菌O157:H7（E.coli O157:H7）在自然界廣泛存在。隨著畜禽集約化養(yǎng)殖模式的不斷發(fā)展,畜禽感染E.coli O157:H7非常普遍,這給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。大腸桿菌多宿主、多途徑傳播等一些特點(diǎn),導(dǎo)致E.coli O157:H7感染已成為一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生問題。脫氫表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEA）作為機(jī)體血液循環(huán)中含量最豐富的類固醇物質(zhì),因其獨(dú)特的生物學(xué)功能而被認(rèn)為是具有多向性的“激素緩沖劑”。目前,對(duì)DHEA生物學(xué)功能的研究主要集中于其對(duì)機(jī)體代謝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、氧化應(yīng)激等方面,有關(guān)DHEA對(duì)細(xì)菌感染的動(dòng)物免疫機(jī)能的影響及其相關(guān)機(jī)制方面的研究報(bào)道甚少。因而,本試驗(yàn)選用小鼠作為研究對(duì)象,在探討DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用之上,通過體外闡明DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染的原代腹腔巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的緩解效應(yīng)及其機(jī)制;研究旨在揭示DHEA對(duì)小鼠抵抗細(xì)菌感染、緩解炎癥的確切作用及相關(guān)通路間的“對(duì)話”關(guān)系。研究結(jié)果將為揭示DHEA對(duì)機(jī)體免疫功能的影響提供重要的理論依據(jù),同時(shí)對(duì)保障畜禽和人類健康具有一定的指導(dǎo)性意義。1 DHEA對(duì)小鼠抵抗E.coli O157:H7感染的研究本實(shí)驗(yàn)以ICR小鼠為研究對(duì)象,在建立E.coli O157:H7感染小鼠模型基礎(chǔ)之上,探討DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠存活情況、免疫指數(shù)、組織病理學(xué)變化等方面的影響,以期揭示DHEA對(duì)小鼠抗E.coli O157:H7感染能力的影響。小鼠腹腔注射E.coli O157:H7探討小鼠對(duì)E.coli O157:H7的耐受性,以便確定E.coli O157:H7對(duì)小鼠的半數(shù)致死量。小鼠灌胃3周不同濃度的DHEA后腹腔注射LD50的E.coli O157:H7,一周后采集血清、脾臟、小腸等組織,待測(cè)。利用稀釋涂布平板法測(cè)定小鼠腹腔液細(xì)菌濃度;HE染色觀察小鼠小腸組織病理學(xué)變化;試劑盒檢測(cè)乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶活性。結(jié)果表明,E.coli O157:H7對(duì)小鼠的LD50為2.3×108CFU。LD50的E.coli O157:H7感染導(dǎo)致小鼠小腸組織出現(xiàn)腸絨毛斷裂、脫落、出血等病理學(xué)變化,而DHEA處理能夠降低E.coli O157:H7感染所致的損傷、提高小鼠成活率,并呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。此外,2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理可顯著提高小鼠脾臟免疫指數(shù)、脾臟中乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶活性,并顯著降低小鼠腹腔液細(xì)菌濃度（P<0.05）。以上結(jié)果提示,DHEA處理可調(diào)節(jié)脾臟免疫功能、清除感染細(xì)菌,提高小鼠的成活率。2 DHEA對(duì)小鼠抵抗E.coli O157:H7感染作用的機(jī)制研究本試驗(yàn)以E.coli O157:H7感染的小鼠為研究對(duì)象,探討DHEA對(duì)炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響及其可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,旨在揭示DHEA抵抗E.coli O157:H7感染生物化學(xué)機(jī)制。小鼠灌胃DHEA并用LD50的E.coli O157:H7感染,試驗(yàn)結(jié)束后采樣、待測(cè)。試劑盒檢測(cè)脾臟和血清中iNOS活性和NO含量;Real-time PCR法檢測(cè)脾臟細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ、IL-4和IL-10 mRNA表達(dá)水平;酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定脾臟和血清中IFN-γ和IL-4含量;Western blot法檢測(cè)脾臟MAPK和NF-κB蛋白表達(dá)水平。結(jié)果表明,0.2 mg/kg DHEA處理可顯著降低血清中iNOS活性（P<0.05）,2 mg/kg DHEA處理可顯著降低血清中NO含量（P<0.05）。2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理均可顯著降低脾臟中iNOS活性（P<0.01）以及TNF-α、IL-1β和IFN-γmRNA表達(dá)水平（P<0.05）;4 mg/kg DHEA處理可顯著降低脾臟IL-6mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理可顯著升高脾臟IL-4 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）,4 mg/kg DHEA處理可顯著升高脾臟IL-10 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。2 mg/kg DHEA處理可極顯著降低脾臟IFN-γ含量（P<0.01）,而2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理可顯著升高血清IL-4含量（P<0.05）。此外,2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理均可顯著降低脾臟中p-p38 MAPK蛋白表達(dá)水平（P<0.05）,而對(duì)p-ERK1/2和p-JNK1/2蛋白水平?jīng)]有顯著性影響（P>0.05）;2 mg/kg和4 mg/kg DHEA處理均可極顯著降低p-IκB-α和細(xì)胞核內(nèi)NF-κB蛋白水平,升高胞質(zhì)中IκB-α和NF-κB蛋白水平（P<0.01）。以上結(jié)果提示,DHEA可降低炎性介質(zhì)和促炎因子的表達(dá)、促進(jìn)抗炎因子的表達(dá)而緩解E.coli O157:H7誘發(fā)的炎性反應(yīng),且這種效應(yīng)可能是通過抑制p38 MAPK和NF-κB的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。3 DHEA調(diào)節(jié)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞抗E.coli O157:H7感染的作用及其機(jī)制研究本試驗(yàn)以ICR小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象,探討DHEA對(duì)E.coli O157:H7引起的炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。試驗(yàn)首先分析E coli O157:H7對(duì)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞損傷的時(shí)間效應(yīng),以確定DHEA的處理濃度和E.coli O157:H7作用時(shí)間。稀釋涂布平板法檢測(cè)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力;酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中 TNF-α、IL-1β 和 IL-6 含量;Western blot 法分析 iNOS、COX-2、p38 MAPK和NF-κB蛋白表達(dá)水平。結(jié)果表明,100 μmol·L-1的DHEA顯著降低小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞活力（P<0.05）。E.coli O157:H7感染細(xì)胞3 h時(shí)產(chǎn)生顯著性損傷,且一定濃度的DHEA預(yù)處理可顯著緩解E.coli O157:H7誘發(fā)的損傷（P<0.05）;但當(dāng)E.coli O157:H7感染細(xì)胞4 h時(shí)產(chǎn)生DHEA處理無法緩解的嚴(yán)重?fù)p傷。不同濃度的DHEA處理對(duì)細(xì)胞的吞噬能力沒有顯著影響（P>0.05）。0.1μmol·L-1 DHEA處理極顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-1β的含量（P<0.01）,而0.1 μmol·L-1和1 μmol·L-1 DHEA均能顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6的含量（P<0.05）。0.1μmol·L-1和10 μmol·L-1 DHEA處理均能顯著降低細(xì)胞iNOS和COX-2蛋白水平（P<0.05）。0.1 μmol·L-1和10 μmol·L-1 DHEA具有與SB203580（p38 MAPK特異性抑制劑）相似的生物學(xué)作用,其均可顯著降低p-p38 MAPK蛋白水平、顯著升高IκB-α蛋白水平（P<0.05）;0.1μmol·L-1-10 μmol·L-1 DHEA均能顯著降低p-IκB-α和細(xì)胞核中NF-κB蛋白水平,并顯著抑制細(xì)胞質(zhì)中NF-κB的減少（P<0.05）。以上結(jié)果提示,DHEA通過下調(diào)p38 MAPK和NF-κB活化而降低E.coli O157:H7誘導(dǎo)的小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞炎性因子的過度產(chǎn)生,最終表現(xiàn)為緩解炎癥的發(fā)展。結(jié)果提示,DHEA可提高E.coli O157:H7感染小鼠脾指數(shù)、降低腹腔菌體濃度、減輕小腸組織的病理?yè)p傷,整體上表現(xiàn)為提高E.coli O157:H7感染小鼠的成活率。DHEA可降低iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性介質(zhì)的過度產(chǎn)生,同時(shí)促進(jìn)抗炎因子IL-4和IL-10的分泌,從而緩解E.coli O157:H7感染導(dǎo)致的炎癥損傷。DHEA通過抑制p38 MAPK蛋白活化而阻斷NF-κB的活化入核,進(jìn)而調(diào)節(jié)炎性因子的表達(dá)以緩解過度的炎癥反應(yīng),最終實(shí)現(xiàn)對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠的保護(hù)效應(yīng)。
龍夢(mèng)瑤[4]（2018）在《腸出血性大腸桿菌O157:H7的IMS-RT-PCR和鑭系熒光微球免疫層析檢測(cè)方法的建立》文中指出腸出血性大腸桿菌O157:H7（EHEC O157）是近年來發(fā)現(xiàn)的重要食源性病原菌之一。它可以通過肉制品傳染給人,能夠引起人感染性腹瀉。病情嚴(yán)重者會(huì)惡化為出血性結(jié)腸炎等病癥。該細(xì)菌引起的疾病死亡率較高,感染劑量非常低。有報(bào)道稱,人類攝入10～100個(gè)以上的活菌就可能致病,故建立一種快速、靈敏的檢測(cè)方法已經(jīng)變得迫在眉睫,也是預(yù)防肉制品引發(fā)疾病感染的關(guān)鍵。目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道關(guān)于EHEC O157:H7的檢測(cè)方法主要分為選擇性培養(yǎng)基分離鑒定、PCR檢測(cè)、ELISA、血清分型檢測(cè)、免疫磁珠分離法等,但隨著食品加工和運(yùn)輸?shù)难杆侔l(fā)展,沿用標(biāo)準(zhǔn)隔夜培養(yǎng)方法分離、富集微生物病原菌,存在一定的缺陷,如處理時(shí)間長(zhǎng)、雜菌的干擾、假陽(yáng)性的存在。因而,將樣品前處理與檢測(cè)方法的互相結(jié)合,已經(jīng)成為防范肉制品感染疾病的重要手段。本研究將自主研制的抗EHEC O157:H7 O-SP單克隆抗體用以制備特異性免疫磁珠,從而建立快速檢測(cè)EHEC O157:H7的IMS-RT-PCR技術(shù)以及制備鑭系熒光微球標(biāo)記的試紙條,最終建立多種快速的檢測(cè)EHEC O157:H7的方法。試驗(yàn)I 抗EHEC O157:H7單克隆抗體的制備及鑒定利用熱酚-水法提取EHEC O157:H7脂多糖（LPS）,將水相脂多糖和酚相脂多糖分離,應(yīng)用酸解法制備O-特異性多糖（O-spectific polysaccharides,O-SP）,采用苯酚-濃硫酸法測(cè)定O-SP濃度為40 μg/mL。將濃度為2×109 CFU/mL的EHEC O157:H7甲醛滅活后制備全菌免疫原,免疫8周齡雌性Balb/c小鼠。以EHEC O157:H7滅活菌體與O-SP分別作為包被原,用間接ELISA方法依次篩選分泌EHEC O157:H7 O-SP抗體的陽(yáng)性細(xì)胞克隆。然后用腹腔注射腹水法制備單抗,并采用間接ELISA方法測(cè)得腹水抗體效價(jià)>1:1×106,使用HiTrapTM Protein G純化柱純化單克隆抗體后,測(cè)得純化抗體的濃度為1.79 mg/mL。本研究制備的EHEC O157 O-SP單克隆抗體僅與EHEC O157:H7細(xì)菌有結(jié)合反應(yīng),與其它細(xì)菌（大腸桿菌種屬或者其它種屬細(xì)菌）均無交叉反應(yīng),具備高特異性?？梢?本研究制備的單克隆抗體具有良好的特性,為建立EHEC O157:H7快速檢測(cè)技術(shù)奠定了良好的基礎(chǔ)。試驗(yàn)Ⅱ 采用IMS-RT-PCR方法快速檢測(cè)肉制品中EHEC O157:H7將免疫磁珠分離法（IMS）與實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）技術(shù)相結(jié)合,建立一種快速檢測(cè)肉制品中EHEC O157:H7細(xì)菌的方法。將PM 3-50納米磁珠經(jīng)3-乙基碳二亞胺（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）活化后,與抗EHEC O157:H7 O-SP單克隆抗體結(jié)合,得到偶聯(lián)量為150 μg/mg的免疫磁珠。免疫磁珠的最高捕獲量為13748.33 CFU/0.2 mg,在肉制品中特異性捕獲的最低檢測(cè)限為2.2 CFU/mL。根據(jù)EHEC O157血清型的特異性基因rfbE（GenBank登錄號(hào):S83460）設(shè)計(jì)引物和熒光探針,將IMS與RT-PCR相結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)EHEC 0157。當(dāng)肉制品中EHEC 0157含量≥1 CFU/g（2.5 g樣本）,免疫磁珠也能捕獲,并通過EC肉湯培養(yǎng)基增殖3 h后,RT-PCR即可成功檢測(cè),全程只需6～7 h。IMS-RT-PCR相結(jié)合的檢測(cè)方法,在進(jìn)一步縮短了檢測(cè)時(shí)間的基礎(chǔ)上,再次降低了 EHEC O157:H7的檢測(cè)限,在防范肉制品源性致病性EHEC O157:H7傳染方面具有重要意義。試驗(yàn)Ⅲ 制備鑭系熒光微球免疫層析試紙條快速檢測(cè)EHEC O157:H7用鑭系熒光微球標(biāo)記單克隆抗體制備的免疫層析試紙條,可用于快速、便捷地檢測(cè)腸出血性大腸桿菌O157:H7。鑭系熒光微球經(jīng)3-乙基碳二亞胺（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）活化后與抗EHEC O157:H7 O-SP單克隆抗體結(jié)合,形成鑭系熒光微球標(biāo)記單抗。鑭系熒光微球標(biāo)記單抗作為示蹤抗體,試紙條NC膜（nitrocellulose membrane,NC membrane）的T線包被的抗EHEC O157:H7多抗為捕獲抗體,形成雙抗夾心法對(duì)EHEC O157:H7進(jìn)行檢測(cè)。在最優(yōu)條件下,通過紫外激發(fā)出熒光時(shí),本研究制備的試紙條肉眼可見的最低檢測(cè)限為104 CFU/mL;結(jié)合熒光強(qiáng)度讀取儀時(shí),該試紙條最低檢測(cè)限可提高為102 CFU/mL,該檢測(cè)限相比于膠體金試紙條、ELISA檢測(cè)方法降低了兩個(gè)數(shù)量級(jí)。該試紙條與實(shí)驗(yàn)室保存的其它11株菌株均無交叉反應(yīng),與從豬肉或豬排泄物中分離的5株EHEC O157分離株均產(chǎn)生良好反應(yīng)。鑭系熒光微球作為標(biāo)記物的免疫層析試紙條的檢測(cè)過程簡(jiǎn)單、快速、敏感性強(qiáng)、特異性強(qiáng)。該試紙條可定量檢測(cè)EHEC O157:H7的同時(shí),還可以大大縮短檢測(cè)時(shí)間,這將在防范致病性EHEC O157傳染方面具有重要意義。
張瑾瑜[5]（2018）在《新疆牛源STEC的分離鑒定、血清型與毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性分析》文中研究說明目的:研究新疆部分地區(qū)牛源STEC在牛糞便、胴體、飼料和飲水中的存在情況,揭示其在牛場(chǎng)各個(gè)環(huán)節(jié)中的分布規(guī)律,以及其流行病學(xué)特點(diǎn);方法:1、2015年9月至2017年1月期間,分別從新疆伊犁、博樂、五家渠、昌吉和烏魯木齊等地的9個(gè)牛場(chǎng)、1個(gè)活畜交易市場(chǎng)和1個(gè)牛屠宰加工廠采集牛肛拭子、糞便、胴體拭子、飼料和飲水樣本,經(jīng)EC肉湯增菌后,用常規(guī)方法結(jié)合PCR（16S r RNA）技術(shù)進(jìn)行大腸桿菌的分離鑒定,再用PCR檢測(cè)大腸桿菌分離株的Stx1、Stx2基因。2、對(duì)分離得到的牛源STEC菌株,用多重PCR法檢測(cè)“the Big Six”血清型的菌株的所占比例。3、對(duì)分離得到的牛源STEC菌株,用PCR檢測(cè)eae A和Hly毒力基因,采用K-B紙片法對(duì)17種獸醫(yī)臨床常用的抗革蘭氏陰性桿菌藥物進(jìn)行敏感性檢測(cè);結(jié)果:1、從9個(gè)牛場(chǎng)、1個(gè)活畜交易市場(chǎng)和1個(gè)屠宰加工廠中共采集到1453份樣本,其中STEC陽(yáng)性樣本為217份（14.9%,217/1453）;新疆伊犁、博樂、石河子、昌吉、五家渠及烏魯木齊的STEC樣本陽(yáng)性率分別為9.9%、19.9%、4.0%、26.2%、43.0%、7.5%;春季（3月-5月）、夏季（6月-8月）、秋季（9月-11月）和冬季（12月～次年2月）的STEC樣本陽(yáng)性率分別為27.3%（147/538）、0.8%（2/247）、13.0%（49/376）和6.5%（19/292）;肛拭子、胴體拭子、糞便、飼料和飲水樣本STEC陽(yáng)性率分別為19.4%（190/978）、8.3%（4/48）、6.7%（16/239）、1.1%（1/94）和6.4%（6/94）;共分離到468株STEC菌株,其中132株攜帶Stx1,122株攜帶Stx2,214株同時(shí)攜帶Stx1和Stx2。2、400株牛源STEC中O26、O45、O103、O111、O121、O145和O157血清型的菌株的檢出率分別為2.5%、0%、0%、1.0%、0%、1.0%和0.75%。3、7株分離自腹瀉犢牛的STEC菌株中eae A基因的攜帶率為14.3%（1/7）,Hly基因攜帶率為100%;7株分離自腹瀉犢牛的STEC菌株對(duì)麥迪霉素耐藥性最高,耐藥率達(dá)到了100%,而對(duì)頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢呋辛、頭孢吡肟、頭孢西叮、氨曲南、妥布霉素、氨芐西林、氧氟沙星、鏈霉素敏感性最高,均達(dá)到100%,其次是卡那霉素達(dá)到85.7%;結(jié)論:牛源STEC普遍存在于所檢測(cè)的牛場(chǎng)、活畜交易市場(chǎng)和屠宰加工廠,肛拭子樣本陽(yáng)性率最高,而牛胴體被污染的情況較嚴(yán)重,春季是STEC的排菌高峰期;分離到的牛源STEC菌株同時(shí)攜帶Stx1和Stx2的菌株最多;在制定防控牛源STEC的措施時(shí),要盡量避免牛糞便對(duì)胴體的污染,春季更要注意牛糞便的無害化處理。目前新疆部分地區(qū)存在國(guó)際較為流行的non-O157血清型的菌株,但檢出率不高,O157血清型菌株亦是如此。分離自腹瀉犢牛的7株目標(biāo)菌均攜帶Hly毒力基因,推測(cè)其對(duì)人類有較強(qiáng)的潛在致病性,7株菌對(duì)獸醫(yī)臨床常用抗生素有耐藥情況存在,但總體耐藥水平不高。
丁浩[6]（2017）在《新疆部分地區(qū)牛源E.coli O157:H7的分離鑒定、毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性試驗(yàn)》文中指出研究新疆部分地區(qū)健康牛群中E.coli O157:H7的分布情況,及分離菌株攜帶毒力基因的特點(diǎn)和對(duì)臨床常用抗菌藥的敏感性情況,并驗(yàn)證生產(chǎn)實(shí)踐中免疫磁珠富集法對(duì)于牛源E.coli O157:H7分離結(jié)果的影響。1、從新疆伊犁、博樂、五家渠、昌吉和烏魯木齊等地的10個(gè)牛場(chǎng)隨機(jī)采集健康牛的肛拭子樣本883份和胴體表面拭子48份,經(jīng)EC肉湯增菌后,用免疫磁珠法富集,再用SMAC平板和MUG液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選,最后用PCR和生化試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。2、對(duì)分離得到的牛源E.coli O157:H7菌株,用PCR法檢測(cè)Stx1、Stx2、eaeA、Hly和Tccp等毒力基因,分析分離株毒力基因攜帶特點(diǎn)。3、對(duì)分離得到的牛源E.coli O157:H7菌株,采用K-B紙片法對(duì)17種獸醫(yī)臨床常用的抗革蘭氏陰性桿菌藥物進(jìn)行敏感性檢測(cè)。4、對(duì)從新疆伊犁、昌吉和五家渠采集的243份牛場(chǎng)源肛拭子、糞便、飼草料、飲水和胴體拭子樣本,采用免疫磁珠法富集后和直接涂布SMAC平板的方法進(jìn)行初步篩選,再進(jìn)行后續(xù)E.coli O157:H7的分離鑒定,采用Fisher exact test statistic和McNemar’s Test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,評(píng)價(jià)生產(chǎn)實(shí)踐中免疫磁珠富集法在牛源E.coli O157:H7分離過程中的作用。結(jié)果顯示:1、從931份樣本中共分離得到16株E.coli O157:H7,檢出率1.72%,其中伊犁地區(qū)11株、烏魯木齊5株,檢出率分別為3.93%、1.48%,博樂、昌吉和五家渠的樣本中均未檢出;從883份肛拭子和48份胴體拭子樣本中分別檢出14株、2株E.coli O157:H7,檢出率分別為1.59%、4.17%。2、16株牛源E.coli O157:H7分離株志賀毒素基因的攜帶率為81.3%,其中stx1、stx2及stx1和stx2攜帶率分別為12.5%、25.0%和43.7%。eaeA、Hly、Tccp基因攜帶率分別為100%、87.5%、75.0%。3、16株E.coli O157:H7分離株對(duì)妥布霉素敏感性最高,達(dá)到100%,其次是頭孢西丁、頭孢吡肟、氧氟沙星、氨曲南、頭孢他啶達(dá)到93.8%;而對(duì)麥迪霉素耐藥性最高,耐藥率達(dá)到了100%;4、免疫磁珠法從243份樣品中分離到8株E.coli O157:H7,而普通方法只檢出了其中的4株,雖然統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著（P≧0.05）,但在本試驗(yàn)中免疫磁珠法確實(shí)提高了E.coli O157:H7檢出數(shù)。由以上結(jié)果可以得出結(jié)論:E.coli O157:H7存在于新疆部分地區(qū)健康牛群中,但分離率不高;牛胴體拭子中檢出了E.coli O157:H7,且多數(shù)分離株同時(shí)攜帶多種毒力基因,推測(cè)其對(duì)人類有較強(qiáng)的潛在致病性;分離的16株菌對(duì)獸醫(yī)臨床常用抗生素有耐藥情況存在,但總體耐藥水平不高;雖然本實(shí)驗(yàn)中,免疫磁珠法和常規(guī)法相比差異不顯著,但卻明顯增加了分離菌的數(shù)量,故依然推薦在開展E.coli O157:H7的病原檢測(cè)時(shí)使用免疫磁珠富集法。
楊振波[7]（2017）在《東莞屠宰豬及屠宰環(huán)境病原性大腸桿菌分離鑒定與致病性研究》文中認(rèn)為大腸桿菌病是一種常見的、由病原性大腸桿菌引起的人畜共患病,可導(dǎo)致動(dòng)物和人腹瀉、敗血癥、肺炎、心內(nèi)膜炎、尿道感染等癥狀。為了解東莞屠宰生豬病原性大腸桿菌病感染流行情況及其菌株致病性狀況,采集了來自東莞市32個(gè)鎮(zhèn)（街）屠宰場(chǎng)豬肝480份、屠場(chǎng)氣溶膠152份、污水90份、用具拭子93份,經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、分離、革蘭氏染色、鏡檢、生化鑒定、血清型鑒定,并選出其中6株病原性大腸桿菌進(jìn)行小白鼠致病性試驗(yàn)。本試驗(yàn)還對(duì)大腸桿菌O157:H7進(jìn)行了熒光PCR檢測(cè)和酶聯(lián)免疫熒光分析法檢測(cè),并與分離鑒定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析,各試驗(yàn)結(jié)果如下。從815份樣品中共分離到161株病原性大腸桿菌,陽(yáng)性率為19.75%,其中豬肝分離到119株,陽(yáng)性率為24.79%;環(huán)境樣本分離到42株,陽(yáng)性率為12.54%,環(huán)境樣品陽(yáng)性率由高到低依次為:污水16.67%,器具15.05%,空氣8.55%。在161株病原性大腸桿菌中,腸出血性大腸桿菌88株,腸道致病性大腸桿菌43株,腸產(chǎn)毒性大腸桿菌22株,腸侵襲性大腸桿菌8株,陽(yáng)性分離率分別為10.80%,5.28%,2.70%,0.98%。對(duì)分離到的豬病原性大腸桿菌O抗原血清型鑒定結(jié)果表明:O抗原血清型類型達(dá)15種之多,其中以O(shè)157、O9、O138、O8為主要流行血清型,分別占所鑒定分離菌株的54.66%、11.80%、8.07%、5.59%。在分離的161株豬病原性大腸桿菌選出6株進(jìn)行小白鼠致病性試驗(yàn),用1 mL注射器將配置好濃度為3×108 CFU/ml注入小白鼠腹腔,注射后小白鼠在8 h內(nèi)均出現(xiàn)典型癥狀和死亡,7 d內(nèi)死亡數(shù)2只（及2只以上）,有2、5號(hào)菌株,為強(qiáng)致病性大腸桿菌;7 d內(nèi)死亡數(shù)在1只的1、4、6號(hào)菌株,為中致病性大腸桿菌;有明顯癥狀,但沒有死亡數(shù)的3號(hào)菌株,為低致病性大腸桿菌;對(duì)照組小白鼠沒有明顯癥狀。用熒光PCR方法對(duì)大腸桿菌O157:H7進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,陽(yáng)性檢出數(shù)為126份,陽(yáng)性檢出率為15.46%,其中豬肝陽(yáng)性檢出數(shù)為102份,陽(yáng)性檢出率為21.25%;環(huán)境樣品檢出數(shù)為24份,陽(yáng)性檢出率為7.16%。用該方法在豬體內(nèi)或屠場(chǎng)環(huán)境中檢出的陽(yáng)性率均高于細(xì)菌分離鑒定。用酶聯(lián)免疫熒光法對(duì)采集樣品進(jìn)行大腸桿菌O157:H7檢測(cè),陽(yáng)性檢出數(shù)為118份,陽(yáng)性檢出率為14.48%,其中豬肝陽(yáng)性檢出數(shù)為97份,陽(yáng)性檢出率為20.21%;環(huán)境樣本陽(yáng)性檢出數(shù)為21份,陽(yáng)性檢出率為6.27%。陽(yáng)性檢出率高于分離鑒定結(jié)果,低于熒光PCR結(jié)果。結(jié)果表明,東莞屠宰豬群存在不同程度的豬病原性大腸桿菌的感染,且屠宰周圍環(huán)境如屠宰用具、空氣、污水等大腸桿菌污染普遍存在。分離的6株大腸桿菌均具致病性,且致病性強(qiáng)弱各有不同,其中2號(hào)菌株為腸出血性大腸桿菌O157:H7,具有很強(qiáng)的致病性,能否引起多種動(dòng)物發(fā)病,值得進(jìn)一步研究。熒光PCR、酶聯(lián)免疫熒光試驗(yàn)和普通分離鑒定檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的敏感性依次為:熒光PCR、酶聯(lián)免疫熒光法、普通分離鑒定。控制大腸桿菌在豬群發(fā)生和流行,需采取科學(xué)管理、定期監(jiān)測(cè)、加強(qiáng)屠宰檢疫、做好個(gè)人防護(hù)等綜合性措施。
李碧霞[8]（2014）在《LAMP實(shí)時(shí)濁度法快速檢測(cè)腸出血性大腸桿菌O157的研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理腸出血性大腸桿菌（EHEC） O157發(fā)病率越來越高，已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織列為新的病原菌。而大腸桿菌的傳統(tǒng)檢測(cè)方法消耗時(shí)間長(zhǎng)、步驟多而復(fù)雜，因此開發(fā)高效、快速、特異性高的鑒定方法，已經(jīng)成為當(dāng)務(wù)之急。在分子生物學(xué)水平上來研究EHEC O157的核酸結(jié)構(gòu)和分子特征，采用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）方法來進(jìn)行檢測(cè)EHEC O157，將可能取代PCR檢測(cè)成為大腸桿菌O157快速檢測(cè)的發(fā)展方向。LAMP實(shí)時(shí)濁度法是利用濁度儀全程監(jiān)控等溫?cái)U(kuò)增過程，主要通過LAMP擴(kuò)增反應(yīng)過程中會(huì)產(chǎn)生的一種白色沉淀副產(chǎn)物焦磷酸鎂，與反應(yīng)液中靶基因得到擴(kuò)增的量成正比，通過沉淀產(chǎn)生的起始時(shí)間判斷反應(yīng)的進(jìn)行的程度。本研究主要針對(duì)EHEC O157的抗原基因rfbE和產(chǎn)Vero毒素的毒力基因stx1和stx2，設(shè)計(jì)特異性的LAMP引物對(duì)。經(jīng)條件優(yōu)化后確定最適反應(yīng)體系為，內(nèi)引物（FIP和BIP）各1.6μM、外引物（F3和B3）各0.2μM、20mM Tris-HCl（PH8.8）、10mM KCl、8mMMgSO4、10mM（NH4）2SO4、0.1％Tween20、0.8M甜菜堿、8mM MgSO4、1.4mM dNTP、8U Bst DNA聚合酶和2μl DNA，63℃恒溫反應(yīng)60min以及在80℃下5min結(jié)束反應(yīng)。使用優(yōu)化后的系統(tǒng)進(jìn)行LAMP反應(yīng)以確定3種引物的特異性、穩(wěn)定性及靈敏度，研究結(jié)果顯示，該方法的最低檢出限為l03CFU/mL，比普通PCR法靈敏度提高100倍，可以檢測(cè)添加菌量為100CFU/25g（mL）的樣品。運(yùn)用此法對(duì)珠海地區(qū)的200份食品樣品進(jìn)行檢測(cè)，為食品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。LAMP實(shí)時(shí)濁度法解決了常規(guī)的LAMP法只能對(duì)反應(yīng)終點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的缺陷，它能對(duì)整個(gè)反應(yīng)過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，無需通過凝膠電泳分析反應(yīng)產(chǎn)物，使方法所得數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，效率高，同時(shí)具有操作簡(jiǎn)單、靈敏快速等優(yōu)勢(shì)，是食品中致病微生物快速篩檢的一種良好方法。
曾毅,林建燕,黃世美,閉志友,甘文燁,馮景強(qiáng),潘海西,湯洪洋[9]（2013）在《2008—2012年南寧市腸出血性大腸桿菌O157:H7監(jiān)測(cè)結(jié)果》文中研究表明目的了解南寧市腸出血性大腸桿菌O157:H7在人群及外環(huán)境中的感染情況,為防制工作提供依據(jù)。方法 2008—2012年采集南寧市現(xiàn)癥腹瀉患者、動(dòng)物宿主糞便標(biāo)本、市場(chǎng)生熟食品和蒼蠅標(biāo)本,經(jīng)mEC增菌后用SMAC分離,純化菌株經(jīng)生化鑒定、血清分型等方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果在2 139份腹瀉患者標(biāo)本中未檢出陽(yáng)性標(biāo)本;在3 088份外環(huán)境標(biāo)本中檢出陽(yáng)性標(biāo)本20份。南寧市腸出血性大腸桿菌O157:H7感染陽(yáng)性率呈現(xiàn)逐年下降趨勢(shì);不同動(dòng)物糞便腸出血性大腸桿菌O157:H7陽(yáng)性率不同,以牛糞檢出陽(yáng)性率最高。結(jié)論南寧市腸出血性大腸桿菌O157:H7仍有散在的動(dòng)物感染,應(yīng)加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物糞便的管理及腸出血性大腸桿菌O157:H7的監(jiān)測(cè)工作。
蘇靖[10]（2013）在《核殼量子點(diǎn)的制備及用于檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的研究》文中指出腸出血性大腸桿菌 O157:H7（Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7）是一種腸道致病菌,它主要是通過攝入被污染的食物或水,或與帶菌動(dòng)物接觸使人感染,嚴(yán)重可致死亡。大腸桿菌O157:H7感染已逐漸成為威脅人類健康的重要公共衛(wèi)生問題,建立快速、靈敏度高的檢測(cè)方法是防控大腸桿菌O157:H7感染的關(guān)鍵。量子點(diǎn)是一種新型的納米材料,具有優(yōu)良的熒光特性。與其它的免疫學(xué)分析法相比,基于量子點(diǎn)的免疫分析法在特異性、敏感性和準(zhǔn)確性方面具有巨大的優(yōu)勢(shì),在食品微生物檢測(cè)中有廣闊的應(yīng)用前景。本研究采用大腸桿菌O157:H7菌體作為免疫抗原,制備出抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體,并在此基礎(chǔ)上通過對(duì)水溶性核殼量子點(diǎn)、量子點(diǎn)-抗體偶聯(lián)物和免疫層析的研究,制備熒光免疫層析試紙條,為大腸桿菌O157:H7的快速檢測(cè)提供了一種新方法。本研究的研究?jī)?nèi)容包括:大腸桿菌O157:H7多克隆抗體的制備:大腸桿菌O157:H7熱滅活后制備成免疫抗原,對(duì)新西蘭大白兔皮內(nèi)多點(diǎn)注射免疫,成功制備抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體,經(jīng)過辛酸-硫酸銨法純化后,抗體效價(jià)為1:25600,純化后抗體蛋白質(zhì)濃度為4.07 mg/mL。采用SDS-PAGE凝膠電泳測(cè)得純化抗體雜帶較少,純化效果較好,分子量約為152kD。水溶性核殼量子點(diǎn)的制備及條件優(yōu)化:采用無機(jī)水相合成法,以巰基丙酸為穩(wěn)定劑在水溶液中合成CdTe/CdS核殼量子點(diǎn)。通過單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)CdTe/CdS量子點(diǎn)的制備條件進(jìn)行優(yōu)化,得到各影響因素的最優(yōu)水平為:Cd2+與Te2-的摩爾比為5:1,穩(wěn)定劑MPA與Cd2+的摩爾比為2.5:1,反應(yīng)體系pH為9,反應(yīng)溫度為95℃,CdTe核的回流時(shí)間為1 h;CdS殼的回流時(shí)間為1 h。在此條件下,合成QDs的熒光強(qiáng)度為726.41,較初始條件,熒光強(qiáng)度增大50.10%,量子點(diǎn)的粒徑約為3.0 nm,分散性好,相較CdTe量子點(diǎn),核殼結(jié)構(gòu)的CdTe/CdS量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度、穩(wěn)定性大大提高。量子點(diǎn)與抗體偶聯(lián):采用直接偶聯(lián)和共價(jià)偶聯(lián)兩種方法將量子點(diǎn)與抗體偶聯(lián)。通過瓊脂糖凝膠電泳和熒光圖譜驗(yàn)證量子點(diǎn)與抗體偶聯(lián)成功,共價(jià)偶聯(lián)法效果較好。對(duì)偶聯(lián)影響因素進(jìn)行優(yōu)化:pH為7.4,0.01 mol/LPBS緩沖體系中,37℃搖床避光反應(yīng)1.5 h,100 μL CdTe/CdS量子點(diǎn)與80 μL 1 mg/mL抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體反應(yīng),偶聯(lián)效果最好。熒光免疫層析試紙條的組裝與評(píng)測(cè):將量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體用于檢測(cè)大腸桿菌O157:H7,在硝酸纖維素膜上用大腸桿菌O157:H7多克隆抗體和羊抗兔IgG分別作檢測(cè)線和質(zhì)控線,應(yīng)用免疫層析技術(shù)制備熒光免疫層析檢測(cè)試紙條,根據(jù)是否出現(xiàn)熒光條帶判定樣品中是否含有大腸桿菌O157:H7。對(duì)試紙條的制備條件進(jìn)行優(yōu)化:控制線羊抗兔IgG的最適濃度為1 mg/mL,檢測(cè)線兔多抗的最適濃度為1 mg/mL。試紙條具有較好的屬外特異性,不與其它的菌發(fā)生反應(yīng);屬內(nèi)不與其它大腸桿菌反應(yīng),與大腸桿菌O157:H7的不同分離株反應(yīng)強(qiáng)烈。試紙條的檢測(cè)限為104-105 CFU/mL,在室溫避光保存35 d,試紙條可以正常使用。
二、江蘇省2001年腸出血性大腸埃希菌O157:H7監(jiān)測(cè)（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、江蘇省2001年腸出血性大腸埃希菌O157:H7監(jiān)測(cè)（論文提綱范文）
（1）2011—2019年?yáng)|臺(tái)市腸出血性大腸桿菌O157:H7宿主糞便檢測(cè)結(jié)果（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 樣本來源 |
| 1.2 檢測(cè)方法 |
| 1.3 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 基本情況 |
| 2.2 宿主糞便檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.3不同采樣時(shí)期檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.4 不同宿主糞便檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.5 不同飼養(yǎng)方式比較 |
| 2.6 毒力基因檢測(cè)結(jié)果 |
| 3 討論 |
（2）7種血清型STEC多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符號(hào)說明 |
| 第一章 產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌研究進(jìn)展 |
| 引言 |
| 1. STEC的流行特性 |
| 1.1 STEC病原學(xué) |
| 1.2 STEC流行病學(xué) |
| 2. STEC毒力基因 |
| 2.1 LEE毒力島和eae基因 |
| 2.2 志賀氏毒素(Stx) |
| 2.3 hly |
| 3. STEC檢測(cè)方法研究進(jìn)展 |
| 3.1 傳統(tǒng)檢測(cè)法 |
| 3.2 免疫磁珠富集法 |
| 3.3 免疫學(xué)檢測(cè)法 |
| 3.4 分子生物學(xué)檢測(cè)法 |
| 4. 本研究的目的與意義 |
| 第二章 7種血清型STEC多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立 |
| 1. 材料 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 主要培養(yǎng)基與試劑 |
| 1.3 主要儀器、探針和引物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 模板制備 |
| 2.2 PCR擴(kuò)增體系 |
| 2.3 7種STEC菌株血清型驗(yàn)證 |
| 2.4 靈敏度檢測(cè) |
| 2.5 特異性檢測(cè) |
| 2.6 重復(fù)性檢測(cè) |
| 2.7 方法驗(yàn)證 |
| 3. 結(jié)果 |
| 3.1 菌株血清型驗(yàn)證結(jié)果 |
| 3.2 多重cPCR結(jié)果 |
| 3.3 單重qPCR結(jié)果 |
| 3.4 多重mqPCR結(jié)果 |
| 3.5 多重mqPCR特異性分析結(jié)果 |
| 3.6 多重mqPCR靈敏性分析結(jié)果 |
| 3.7 多重mqPCR重復(fù)性分析結(jié)果 |
| 3.8 方法驗(yàn)證結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第三章 江蘇省部分地區(qū)奶牛場(chǎng)糞便樣品中7種血清型STEC菌株的檢測(cè) |
| 1. 材料 |
| 1.1 樣品采集 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 主要儀器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 DNA模板制備 |
| 2.2 多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè) |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 后續(xù)研究計(jì)劃 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 致謝 |
（3）DHEA對(duì)小鼠抵抗大腸桿菌O157:H7感染的影響及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 本文部分縮寫中英文對(duì)照 |
| 引言 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 腸出血性大腸桿菌研究進(jìn)展 |
| 1 EHEC O157:H7的起源與進(jìn)化 |
| 2 EHEC O157:H7病原學(xué) |
| 2.1 形態(tài)學(xué)與培養(yǎng)特性 |
| 2.2 生化特性 |
| 2.3 抗逆性 |
| 3 EHEC O157:H7流行病學(xué) |
| 3.1 傳染源 |
| 3.2 傳播途徑 |
| 3.3 易感人群 |
| 3.4 全球流行現(xiàn)狀 |
| 4 EHEC O157:H7的致病機(jī)理 |
| 4.1 志賀毒素 |
| 4.2 LEE致病島 |
| 4.3 質(zhì)粒pO157 |
| 5 EHEC O157:H7的防控 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 脫氫表雄酮生物學(xué)功能研究進(jìn)展 |
| 1 脫氫表雄酮的發(fā)現(xiàn) |
| 2 DHEA的合成、代謝與分布 |
| 2.1 腎上腺中DHEA的合成與代謝 |
| 2.2 腦部DHEA的合成與代謝 |
| 3 DHEA的生物學(xué)功能研究進(jìn)展 |
| 3.1 DHEA對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的影響 |
| 3.2 DHEA對(duì)機(jī)體免疫功能的影響 |
| 3.3 DHEA與抗衰老作用 |
| 3.4 DHEA對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響 |
| 3.5 DHEA對(duì)心血管系統(tǒng)的影響 |
| 3.6 DHEA對(duì)骨質(zhì)代謝的影響 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三章 NF-κB與MAPK信號(hào)通路及其與炎癥的關(guān)系 |
| 1 NF-κB信號(hào)通路及其與炎癥關(guān)系研究進(jìn)展 |
| 1.1 NF-κB信號(hào)通路 |
| 1.2 NF-κB信號(hào)通路的激活機(jī)制 |
| 1.3 NF-κB與免疫的關(guān)系 |
| 2 MAPK信號(hào)通路研究進(jìn)展及其與炎癥的關(guān)系 |
| 2.1 MAPK信號(hào)通路概述 |
| 2.2 MAPK通路的調(diào)節(jié) |
| 2.3 MAPK與炎癥反應(yīng)的關(guān)系 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二篇 試驗(yàn)研究 |
| 第一章 DHEA對(duì)小鼠抵抗E. coli O157:H7感染的研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)菌株 |
| 1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.3 主要試劑及儀器 |
| 1.4 E.coli O157:H7致病力測(cè)定 |
| 1.5 試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理 |
| 1.6 樣品采集 |
| 1.7 小腸的病理組織學(xué)觀察 |
| 1.8 脾臟指數(shù)的測(cè)定 |
| 1.9 乳酸脫氫酶(LDH)和酸性磷酸酶(ACP)活性測(cè)定 |
| 1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 E.coli O157:H7感染小鼠半數(shù)致死量(LD_(50)) |
| 2.2 DHEA灌胃對(duì)小鼠體增重和采食量的影響 |
| 2.3 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠死亡率的影響 |
| 2.4 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠體增重的影響 |
| 2.5 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠腹腔液細(xì)菌濃度的影響 |
| 2.6 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠小腸組織病理學(xué)變化的影響 |
| 2.7 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠脾臟免疫指數(shù)的影響 |
| 2.8 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠脾臟中LDH和ACP活性的影響 |
| 3. 討論與小結(jié) |
| 3.1 討論 |
| 3.2 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 DHEA對(duì)小鼠抵抗E.coli O157:H7感染作用的機(jī)制研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)菌株 |
| 1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及處理 |
| 1.3 主要試劑及儀器 |
| 1.4 脾臟iNOS活性的測(cè)定 |
| 1.5 血清NO含量和iNOS活性的測(cè)定 |
| 1.6 脾臟中細(xì)胞因子mRNA表達(dá)分析 |
| 1.6.1 總RNA提取 |
| 1.6.2 反轉(zhuǎn)錄 |
| 1.6.3 引物設(shè)計(jì)合成 |
| 1.6.4 Real-Time PCR |
| 1.7 脾臟和血清中細(xì)胞因子含量的測(cè)定 |
| 1.8 MAPK和NF-κB通路蛋白表達(dá)分析 |
| 1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠脾臟iNOS活性的影響 |
| 2.2 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠血清NO含量和iNOS活性的影響 |
| 2.3 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠脾臟細(xì)胞因子表達(dá)的影響 |
| 2.4 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠組織中IFN-γ和IL-4含量的影響 |
| 2.5 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠MAPK和NF-κB通路的影響 |
| 3 討論與小結(jié) |
| 3.1 討論 |
| 3.2 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三章 DHEA調(diào)節(jié)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞抗E.coli O157:H7感染的作用及其機(jī)制研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)菌株 |
| 1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.3 主要試劑及儀器 |
| 1.4 小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞的分離、培養(yǎng) |
| 1.5 DHEA對(duì)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞相對(duì)活力的影響 |
| 1.6 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染的小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞損傷的影響 |
| 1.7 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染的小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞噬菌作用的影響 |
| 1.8 小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子含量分析 |
| 1.9 小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞iNOS和COX-2蛋白表達(dá)分析 |
| 1.10 p38 MAPK和NF-κB通路蛋白表達(dá)分析 |
| 1.11 SB203580對(duì)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞相對(duì)活力的影響 |
| 1.12 SB203580對(duì)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子含量的影響 |
| 1.13 SB203580對(duì)小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞p38 MAPK和NF-κB通路蛋白表達(dá)影響分析 |
| 1.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 DHEA對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞相對(duì)活力的影響 |
| 2.2 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞損傷的保護(hù)效應(yīng) |
| 2.3 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞噬菌作用的影響 |
| 2.4 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染的腹腔巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響 |
| 2.5 DHEA對(duì)iNOS和COX-2表達(dá)的影響 |
| 2.6 DHEA對(duì)E.coli O157:H7感染腹腔巨噬細(xì)胞p38 MAPK和NF-κB通路的影響 |
| 2.7 SB203580對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞相對(duì)活力的影響 |
| 2.8 SB203580對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響 |
| 2.9 DHEA或SB203580對(duì)E.coli O157:H7感染的腹腔巨噬細(xì)胞p38 MAPK和NF-κB通路的影響 |
| 3 討論與小結(jié) |
| 3.1 討論 |
| 3.2 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文結(jié)論 |
| 致謝 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間論文發(fā)表情況 |
（4）腸出血性大腸桿菌O157:H7的IMS-RT-PCR和鑭系熒光微球免疫層析檢測(cè)方法的建立（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號(hào)與縮略語(yǔ) |
| 緒論 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 第一章 腸出血性大腸桿菌EHEC O157:H7的研究進(jìn)展 |
| 1 大腸桿菌簡(jiǎn)介 |
| 1.1 大腸桿菌的生物學(xué)特性 |
| 1.2 大腸桿菌的抗原分類 |
| 1.3 大腸桿菌的致病性 |
| 1.4 腸出血性大腸桿菌簡(jiǎn)介 |
| 1.5 腸出血性大腸桿菌O157:H7感染的傳播途徑與臨床表現(xiàn) |
| 1.6 腸出血性大腸桿菌O157:H7分離檢測(cè)的方法 |
| 2 本研究的目的及意義 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二篇 試驗(yàn)部分 |
| 第二章 抗EHEC O157:H7 O-SP單克隆抗體的制備 |
| 1 試驗(yàn)材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 試驗(yàn)菌株 |
| 1.3 試驗(yàn)試劑 |
| 1.4 試驗(yàn)儀器 |
| 1.5 EHEC O157:H7菌體抗原的制備 |
| 1.6 包被原EHEC O157:H7 O-特異性多糖(O-SP)的制備 |
| 1.7 動(dòng)物免疫程序及抗體效價(jià)測(cè)定 |
| 1.8 抗EHEC O157:H7單克隆的制備 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 EHEC O157:H7 O-SP的提取 |
| 2.2 免疫鼠多克隆抗體的效價(jià)測(cè)定 |
| 2.3 細(xì)胞融合后效果評(píng)估 |
| 2.4 分泌特異性抗體的陽(yáng)性克隆篩選 |
| 2.5 陽(yáng)性細(xì)胞株的亞克隆與凍存 |
| 2.6 單克隆抗體的特性分析 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三章 采用IMS-RT-PCR方法快速檢測(cè)肉制品中EHEC 0157:H7 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)試劑 |
| 1.2 試驗(yàn)菌株 |
| 1.3 主要儀器 |
| 1.4 試驗(yàn)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 納米磁珠標(biāo)記單克隆抗體時(shí)的條件優(yōu)化 |
| 2.2 免疫磁珠性能的測(cè)定 |
| 2.3 IMS-RT-PCR檢測(cè)方法的建立 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四章 制備鑭系熒光微球免疫層析試紙條快速檢測(cè)EHEC O157:H7 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)材料 |
| 1.2 試驗(yàn)儀器 |
| 1.3 試驗(yàn)相關(guān)溶液配制 |
| 1.4 試驗(yàn)原理 |
| 1.5 試驗(yàn)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 試紙條各個(gè)參數(shù)的優(yōu)化 |
| 2.2 試紙條的性能測(cè)定 |
| 3 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文結(jié)論 |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷、攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 |
（5）新疆牛源STEC的分離鑒定、血清型與毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 STEC的病原學(xué) |
| 1.2 STEC的流行病學(xué) |
| 1.3 STEC的宿主與傳播途徑 |
| 1.4 STEC的分布規(guī)律研究現(xiàn)狀 |
| 1.5 STEC的毒力基因及致病機(jī)制 |
| 1.6 STEC的耐藥現(xiàn)狀 |
| 1.7 研究的目的和意義 |
| 第2章 新疆部分地區(qū)牛源STEC分離鑒定 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第3章 新疆部分地區(qū)牛源STEC分離株血清型的多重PCR鑒定 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第4章 腹瀉犢牛STEC分離株毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性試驗(yàn) |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第5章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 謝辭 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（6）新疆部分地區(qū)牛源E.coli O157:H7的分離鑒定、毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性試驗(yàn)（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮寫詞表 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 E.coli O157:H7的概況 |
| 1.2 E.coli O157:H7毒力基因及致病機(jī)制 |
| 1.3 E.coli O157:H7耐藥現(xiàn)狀 |
| 1.4 E.coli O157:H7的檢測(cè)技術(shù) |
| 1.5 研究目的和意義 |
| 第2章 新疆部分地區(qū)牛源E.coli O157:H7分離鑒定 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第3章 牛源E.coli O157:H7分離株毒力基因攜帶特點(diǎn)分析 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第4章 牛源E.coli O157:H7分離株藥物敏感性試驗(yàn) |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第5章 免疫磁珠富集法對(duì)牛源E.coli O157:H7分離鑒定的影響 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.3 討論 |
| 5.4 小結(jié) |
| 第6章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 謝辭 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（7）東莞屠宰豬及屠宰環(huán)境病原性大腸桿菌分離鑒定與致病性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 1 前言 |
| 1.1 豬大腸桿菌病的流行病學(xué)與臨床癥狀 |
| 1.1.1 病原性 |
| 1.1.2 易感性 |
| 1.1.3 季節(jié)性 |
| 1.1.4 傳播途徑 |
| 1.1.5 臨床癥狀 |
| 1.1.6 病理變化 |
| 1.2 毒力因子研究 |
| 1.2.1 黏附素 |
| 1.2.2 內(nèi)毒素 |
| 1.2.3 腸毒素 |
| 1.3 大腸桿菌檢測(cè)技術(shù) |
| 1.3.1 臨床診斷 |
| 1.3.2 分離培養(yǎng)法 |
| 1.3.3 免疫血清學(xué)技術(shù) |
| 1.3.4 分子生物學(xué)技術(shù) |
| 1.4 大腸桿菌病的防治 |
| 1.4.1 加強(qiáng)生產(chǎn)管理 |
| 1.4.2 做好預(yù)防控制 |
| 1.4.3 及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療 |
| 1.5 豬大腸桿菌的流行及致病性情況 |
| 1.5.1 國(guó)外大腸桿菌病的流行情況 |
| 1.5.2 我國(guó)豬大腸桿菌病的流行情況 |
| 1.6 研究的目的與意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 樣品采集 |
| 2.1.2 采集方法 |
| 2.1.3 檢測(cè)試劑 |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及耗材 |
| 2.1.5 儀器設(shè)備 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 大腸桿菌分離與鑒定 |
| 2.2.2 細(xì)菌生化鑒定 |
| 2.2.3 大腸桿菌O抗原血清型鑒定 |
| 2.2.4 大腸桿菌O_(157):H_7熒光PCR檢測(cè) |
| 2.2.5 大腸桿菌O_(157)酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)檢測(cè) |
| 2.2.6 致病性試驗(yàn) |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 菌落形態(tài)及鏡檢特征 |
| 3.2 生化鑒定結(jié)果 |
| 3.3 病原性大腸桿菌分離與鑒定結(jié)果 |
| 3.4 血清型鑒定 |
| 3.5 熒光PCR檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.6 酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)檢測(cè) |
| 3.7 致病性試驗(yàn) |
| 4 討論與結(jié)論 |
| 4.1 討論 |
| 4.1.1 豬病原性大腸桿菌分離鑒定結(jié)果分析 |
| 4.1.2 豬大腸桿菌致病性分析 |
| 4.1.3 大腸桿菌O_(157):H_7檢測(cè)結(jié)果分析 |
| 4.2 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
（8）LAMP實(shí)時(shí)濁度法快速檢測(cè)腸出血性大腸桿菌O157的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 腸出血性大腸桿菌 O157 簡(jiǎn)介 |
| 1.1.1 腸出血性大腸桿菌 O157 的傳播途徑和流行現(xiàn)狀 |
| 1.1.2 腸出血性大腸桿菌 O157 生物學(xué)性狀 |
| 1.1.3 腸出血性大腸桿菌 O157 的抵抗力 |
| 1.1.4 腸出血性大腸桿菌 O157 的致病機(jī)理和主要毒力因子 |
| 1.2 腸出血性大腸桿菌 O157 的檢測(cè)鑒定方法 |
| 1.2.1 常規(guī)培養(yǎng)法 |
| 1.2.2 免疫學(xué)檢測(cè)方法 |
| 1.2.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法 |
| 1.3 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）方法 |
| 1.3.1 LAMP 方法的概述 |
| 1.3.2 LAMP 方法的特點(diǎn) |
| 1.3.3 LAMP 引物的設(shè)計(jì)和擴(kuò)增原理 |
| 1.3.4 LAMP 的反應(yīng)體系 |
| 1.3.5 LAMP 方法的應(yīng)用 |
| 1.4 立題意義 |
| 1.5 研究?jī)?nèi)容 |
| 第二章 LAMP 實(shí)時(shí)濁度法快速檢測(cè)腸出血性大腸桿菌 O157 方法的建立和優(yōu)化 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.2 儀器與設(shè)備 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 引物的設(shè)計(jì) |
| 2.3.2 LAMP 引物簡(jiǎn)介 |
| 2.3.3 LAMP 反應(yīng)各引物序列 |
| 2.3.4 PCR 擴(kuò)增采用的引物 |
| 2.3.5 濃度及純度的測(cè)定 |
| 2.3.6 LAMP 反應(yīng)體系的建立 |
| 2.3.7 LAMP 反應(yīng)條件的優(yōu)化 |
| 2.4 結(jié)果與討論 |
| 2.4.1 LAMP 反應(yīng)體系的建立 |
| 2.4.2 反應(yīng)條件的優(yōu)化 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 LAMP 引物的特異性鑒定和靈敏度評(píng)價(jià) |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 菌株 |
| 3.1.2 主要試劑 |
| 3.2 儀器與設(shè)備 |
| 3.3 研究方法 |
| 3.3.1 LAMP 特異性試驗(yàn) |
| 3.3.2 LAMP 靈敏度評(píng)價(jià) |
| 3.4 結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 LAMP 引物特異性鑒定 |
| 3.4.1.1 腸出血性大腸桿菌 O157 rfbE 引物的特異性鑒定 |
| 3.4.1.2 腸出血性大腸桿菌 O157 stx1 引物的特異性鑒定 |
| 3.4.1.3 腸出血性大腸桿菌 O157 stx2 引物的特異性鑒定 |
| 3.4.2 LAMP 與 PCR 檢測(cè)的靈敏度比較 |
| 3.4.2.1 腸出血性大腸桿菌 O157 rfbE 引物的靈敏度比較 |
| 3.4.2.2 腸出血性大腸桿菌 O157stx1 引物的靈敏度比較 |
| 3.4.2.3 腸出血性大腸桿菌 O157stx2 引物的靈敏度比較 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第四章 食品樣品添加試驗(yàn)及珠海地區(qū)食品中腸出血性大腸桿菌 O157 的 LAMP 檢測(cè) |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 菌株 |
| 4.1.2 主要試劑 |
| 4.2 儀器與設(shè)備 |
| 4.3 研究方法 |
| 4.3.1 食品樣品添加試驗(yàn) |
| 4.3.2 珠海地區(qū)食品中腸出血性大腸桿菌 O157 的 LAMP 法檢測(cè) |
| 4.4 結(jié)果與討論 |
| 4.4.1 食品樣品添加試驗(yàn) |
| 4.4.2 珠海地區(qū)食品中腸出血性大腸桿菌 O157 的 LAMP 法檢測(cè) |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 結(jié)論與展望 |
| 一、結(jié)論 |
| 二、本論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 三、展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士/碩士學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
| 附表 |
（10）核殼量子點(diǎn)的制備及用于檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略語(yǔ)表 |
| 拉丁文 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 大腸桿菌O157:H7的生物學(xué)特征和流行現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 大腸桿菌O157:H7的生物學(xué)特征 |
| 1.1.2 流行現(xiàn)狀 |
| 1.2 大腸桿菌O157:H7檢測(cè)方法研究現(xiàn)狀 |
| 1.2.1 常規(guī)的檢測(cè)方法 |
| 1.2.2 免疫學(xué)方法 |
| 1.2.3 分子生物學(xué)方法 |
| 1.2.4 其它檢測(cè)方法 |
| 1.3 量子點(diǎn)(Quantum dots,QDs) |
| 1.3.1 量子點(diǎn)簡(jiǎn)介 |
| 1.3.2 量子點(diǎn)的基本特性 |
| 1.3.3 量子點(diǎn)的光學(xué)特性 |
| 1.3.4 量子點(diǎn)的制備 |
| 1.3.5 量子點(diǎn)的生物應(yīng)用進(jìn)展 |
| 1.4 本研究的目的意義 |
| 第二章 抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體的制備與純化 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株來源 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 2.1.3 培養(yǎng)基 |
| 2.1.4 主要試劑 |
| 2.1.5 主要儀器 |
| 2.1.6 ELISA試劑的配制 |
| 2.1.8 SDS-PAGE緩沖液的配制 |
| 2.1.9 動(dòng)物飼養(yǎng)與處理 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 多克隆抗體的制備 |
| 2.2.2 多克隆抗體的純化與鑒定 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 大腸桿菌O157:H7的形態(tài) |
| 2.3.2 大腸桿菌O157:H7兔多克隆抗體的產(chǎn)生進(jìn)程 |
| 2.3.3 間接ELISA檢測(cè)大腸桿菌O157:H7兔多克隆抗體的效價(jià) |
| 2.3.4 兔多克隆抗體蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 |
| 2.3.5 多克隆抗體純度及分子量的測(cè)定 |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 免疫方案 |
| 2.4.2 抗體純化方法 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 水溶性CdTe/CdS核殼量子點(diǎn)的制備及其條件優(yōu)化 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要試劑 |
| 3.1.2 主要儀器 |
| 3.1.3 玻璃容器的準(zhǔn)備 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2.1 水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)的制備 |
| 3.2.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化 |
| 3.2.4 水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)與CdTe量子點(diǎn)穩(wěn)定性的對(duì)比 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 3.3.1 合成量子點(diǎn)的光譜圖 |
| 3.3.2 量子點(diǎn)的表征 |
| 3.3.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化 |
| 3.3.4 水溶性CdTe/CdS量子點(diǎn)與CdTe量子點(diǎn)穩(wěn)定性的對(duì)比 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 反應(yīng)物的配比對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.4.2 穩(wěn)定劑的量對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.4.3 體系pH值對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.4.4 反應(yīng)溫度對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.4.5 CdTe核的回流時(shí)間對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.4.6 CdS殼的回流時(shí)間對(duì)量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的影響 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 CdTe/CdS量子點(diǎn)與抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體偶聯(lián) |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要試劑 |
| 4.1.2 主要儀器 |
| 4.1.3 溶液的配置 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.2.1 CdTe/CdS量子點(diǎn)的純化 |
| 4.2.2 CdTe/CdS量子點(diǎn)與抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體偶聯(lián) |
| 4.2.3 量子點(diǎn)-抗體偶聯(lián)條件的優(yōu)化 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 4.3.1 CdTe/CdS量子點(diǎn)的純化前后的熒光光譜分析 |
| 4.3.2 CdTe/CdS量子點(diǎn)與抗大腸桿菌O157:H7多克隆抗體偶聯(lián)情況探討 |
| 4.3.3 量子點(diǎn)-抗體偶聯(lián)條件的優(yōu)化 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 量子點(diǎn)的純化 |
| 4.4.2 量子點(diǎn)-抗體偶聯(lián)物的性質(zhì) |
| 4.4.3 偶聯(lián)條件的優(yōu)化 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 大腸桿菌O157:H7熒光免疫層析試紙條的制備及研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 主要試劑和試紙條材料 |
| 5.1.2 免疫層析試劑的配制 |
| 5.1.3 主要儀器 |
| 5.1.4 主要菌株 |
| 5.1.5 容器的準(zhǔn)備 |
| 5.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.2.1 熒光免疫層析試紙條組成材料的前處理 |
| 5.2.2 熒光免疫層析試紙條的組裝 |
| 5.2.3 試紙條的判定標(biāo)準(zhǔn) |
| 5.2.4 控制線抗體濃度的選擇 |
| 5.2.5 檢測(cè)線抗體濃度的選擇 |
| 5.2.6 試紙條的檢測(cè)限 |
| 5.2.7 試紙條的特異性 |
| 5.2.8 試紙條的穩(wěn)定性 |
| 5.3 結(jié)果與分析 |
| 5.3.1 控制線最佳抗體濃度的確定 |
| 5.3.2 檢測(cè)線最佳抗體濃度的確定 |
| 5.3.3 試紙條檢測(cè)限的確定 |
| 5.3.4 試紙條的特異性 |
| 5.3.5 試紙條的穩(wěn)定性 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 試紙條材料的前處理 |
| 5.4.2 試紙條的檢測(cè)限 |
| 5.4.3 試紙條的穩(wěn)定性 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 結(jié)論 |
| 6.1 研究總結(jié) |
| 6.2 創(chuàng)新 |
| 6.3 研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 附錄 |
四、江蘇省2001年腸出血性大腸埃希菌O157:H7監(jiān)測(cè)（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]2011—2019年?yáng)|臺(tái)市腸出血性大腸桿菌O157:H7宿主糞便檢測(cè)結(jié)果[J]. 金鑫,仲慧,郎睿,朱瑩瑩,吳銀華. 江蘇預(yù)防醫(yī)學(xué), 2021(03)
- [2]7種血清型STEC多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用[D]. 紀(jì)凱麗. 揚(yáng)州大學(xué), 2020(01)
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