一、基質(zhì)衍生因子1等基因多態(tài)性在人群中的分布（論文文獻(xiàn)綜述）
吳曉醒[1]（2021）在《MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與NAFLD及H.pylori感染在CEA、CA19-9、CA72-4水平中的交互作用和利用ciMICs衍生的類器官模擬消化道腫瘤的發(fā)生》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理消化道惡性腫瘤的全球發(fā)病率占成人惡性腫瘤發(fā)病率的50%以上。消化道惡性腫瘤因早期無(wú)特異性臨床表現(xiàn),導(dǎo)致患者因消化道癥狀就診時(shí)多處于進(jìn)展期或晚期,不但影響患者治療后的生存率,并對(duì)患者生活質(zhì)量造成巨大影響。因此,有必要對(duì)消化道惡性腫瘤進(jìn)行早期篩查,以達(dá)到早診斷、早治療的目的。消化道惡性腫瘤為遺傳-環(huán)境因素相互作用,多種因素共同調(diào)控的生活方式疾病,與幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,H.pylori）感染關(guān)系密切。非酒精性脂肪肝?。∟on-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）作為代謝綜合征的肝臟表現(xiàn),可以通過(guò)影響腸道菌群、加重胰島素抵抗和脂代謝紊亂等途徑增加消化道腫瘤的患病風(fēng)險(xiǎn)。亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）作為葉酸代謝中的關(guān)鍵酶,對(duì)于維持氧核糖核酸DNA結(jié)構(gòu)和功能發(fā)揮著重要作用。當(dāng)MTHFR rs1801133位點(diǎn)的胞嘧啶（Cytosine,C）被胸腺嘧啶（Thymine,T）替代后會(huì)導(dǎo)致MTHFR酶活性降低從而對(duì)DNA單鏈、雙鏈穩(wěn)定性及DNA的甲基化造成影響,誘導(dǎo)消化道惡性腫瘤的發(fā)生。目前,關(guān)于MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與NAFLD和H.pylori感染的易感性及相關(guān)性研究結(jié)果并不一致,同時(shí)鮮見(jiàn)關(guān)于H.pylori感染合并NAFLD與MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與消化道腫瘤標(biāo)志物（Gastrointestinal tumor markers,GTM）關(guān)系的研究。為進(jìn)一步探索MTHFR與消化道腫瘤發(fā)生的關(guān)系,選擇符合實(shí)驗(yàn)條件的細(xì)胞系是實(shí)驗(yàn)工作的基礎(chǔ)。選擇能夠在體外實(shí)驗(yàn)中模擬疾病特征并能夠在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行驗(yàn)證的細(xì)胞系就顯得尤為重要。腸道惡性腫瘤是腸上皮干細(xì)胞（intestinal stem cells,ISCs）通過(guò)致癌基因和抑癌基因多步驟的基因突變導(dǎo)致的。2009年,Sato等通過(guò)三維（Three-dimensional,3D）培養(yǎng),利用niche因子模擬出niche微環(huán)境,成功的在體外將隱窩ISCs培養(yǎng)成腸道類器官,又被稱為迷你腸道（Mini-guts）。此后,腸道類器官技術(shù)被廣泛用于描述ISCs生物學(xué)細(xì)胞信號(hào)。然而,體外培養(yǎng)的類器官由異質(zhì)細(xì)胞群組成,而要在3D培養(yǎng)的條件下把目的基因組導(dǎo)入類器官對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。因此,有必要建立一個(gè)二維（Two-dimensional,2D）的ISCs培養(yǎng)系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行有效的基因組操作。第一部分MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和非酒精性脂肪肝與消化道腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系及交互作用目的:（1）分析NAFLD的臨床特征;（2）了解NAFLD和MTHFR rs1801133基因多態(tài)性的關(guān)系;（3）統(tǒng)計(jì)分析MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和NAFLD與GTM:癌胚抗原（Carcinoma embryonic antigen,CEA）、糖類抗原19-9（Carbohydrate antigen 19-9,CA19-9）、糖類抗原72-4（Carbohydrate antigen 72-4,CA72-4）之間的關(guān)系和交互作用。方法:1023例研究對(duì)象為2016年1月至2020年10月重慶市主城區(qū)體檢者,其中NAFLD組425例,對(duì)照組598例。采用Sanger測(cè)序法篩查MTHFR rs1801133基因多態(tài)性,電化學(xué)發(fā)光法檢查受試者的GTM:CEA、CA19-9、CA72-4。通過(guò)Logistic回歸分析NAFLD的危險(xiǎn)因素;采用卡方擬合優(yōu)度檢驗(yàn)計(jì)算MTHFR rs1801133基因多態(tài)性Hardy-Weinberg均衡;向前Logistic回歸計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（Odds ratio,OR）和95%置信區(qū)間（Confidence interval,CI）來(lái)評(píng)估NAFLD與危險(xiǎn)因素的關(guān)系;多因子降維法（Multifactor dimensionality reduction,MDR）分析基因-環(huán)境交互作用;一般線性模型檢驗(yàn)NAFLD和MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與GTM（CEA、CA19-9和CA72-4）之間交互作用。P值<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:（1）男性的NAFLD患病率（50.7%）顯著高于女性（23.5%,P<0.001）。NAFLD組的身體質(zhì)量指數(shù)（Body mass index,BMI）26.42±2.88明顯高于對(duì)照組23.05±2.730（P<0.001）,且隨著B(niǎo)MI增加,NAFLD的患病率增加（BMI<18.5體重過(guò)輕（Underweight,UW）:5%;BMI18.523.9體重正常（Normal weright,NW）:17.4%;BMI24.027.9體重超重（Overweight,OW）:54.8%;BMI>28.0肥胖（Obesity,OB）:82.4%,P<0.001）。在NAFLD組中,高血壓:舒張壓（Diastolic blood pressure,DBP）和收縮壓（Systolic Blood Pressure,SBP）升高;肝功能損害:谷酰轉(zhuǎn)移酶（Gamma-glutamyltransferase,γ-GT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）升高;脂代謝障礙:血清總膽固醇（Serum Total cholesterol,s TC）、血清三酰甘油（Serum Triglyceride,s TG）、低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）升高,高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein cholesterol,HDL-C）降低和高嗜酸性細(xì)胞（Eosinophils,EO）血癥的患病率高于對(duì)照組（P<0.05）。NAFLD組白細(xì)胞總數(shù)（White blood cell,WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（Red blood cell,RBC）、血紅蛋白（Hemoglobin,Hb）和紅細(xì)胞比容（Hematocrit value,HCT）水平高于對(duì)照組（P<0.05）。NAFLD組CEA水平的中位數(shù)（P25,P75）1.90（1.20,2.90）ng/ml高于對(duì)照組的1.70（1.20,2.50）ng/ml（P=0.005）;但兩組間CA19-9和CA72-4水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）NAFLD組中的T等位基因頻率（47.9%）高于C等位基因（37.5%）;對(duì)照組中的C等位基因頻率（62.5%）高于T等位（52.1%,P<0.001）。NAFLD組MTHFR rs1801133基因多態(tài)性的OR值及95%CI按照TT基因型>CT基因型>CC基因型的順序依次遞減;MTHFR rs1801133基因隱性模型（TT vs.CC+CT基因型）的OR值及95%CI較MTHFR rs1801133基因顯性模型（CC vs.CT+TT基因型）更大,提示不同基因型對(duì)NAFLD的易感危險(xiǎn)度不同（P<0.05）。（3）Logistic多因素回歸分析結(jié)果為BMI、高SBP、高γ-GT、高ALT、高s TG、低HDL-C、高LDL-C、WBC、高EO及MTHFR rs1801133基因多態(tài)性是NAFLD的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。（4）通過(guò)MDR建模分析發(fā)現(xiàn)BMI和HDL-C與NAFLD患病可能存在環(huán)境-環(huán)境交互作用;MTHFR rs1801133多態(tài)性、BMI和HDL-C與NAFLD患病可能存在基因-環(huán)境交互作用。樹(shù)狀圖提示BMI和γ-GT,MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和HDL-C均對(duì)NAFLD的發(fā)病具有協(xié)同作用,其中BMI和γ-GT的協(xié)同作用更強(qiáng)。（5）MTHFR rs1801133 TT基因型的CEA水平高于MTHFR rs1801133 CT和CC基因型,TT基因型、CT基因型和CC基因型的CEA水平呈遞減趨勢(shì);NAFLD和對(duì)照組的三種基因型CEA均值水平連線不平行,提示NAFLD和MTHFR rs1801133多態(tài)性對(duì)CEA水平升高可能具有交互作用（P=0.010）。結(jié)論:（1）NAFLD的臨床特征中肥胖、高血壓、高血脂和肝功能異常為常見(jiàn)的危險(xiǎn)因素,提示慢性代謝性疾病是NAFLD的危險(xiǎn)因素。（2）在校正相關(guān)因素后,MTHFR rs1801133基因多態(tài)性為NAFLD的易感因素,T等位基因突變會(huì)增加NAFLD患病風(fēng)險(xiǎn)。OW/OB、高γ-GT、MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和低HDL-C均對(duì)NAFLD患病具有協(xié)同作用。（3）MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與NAFLD對(duì)CEA值的升高可能具有交互作用,MTHFR rs1801133 T等位基因突變與NAFLD的共同作用可能造成CEA水平的升高。第二部分MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和幽門螺桿菌感染與消化道腫瘤標(biāo)志物之間的關(guān)系及交互作用目的:（1）了解重慶地區(qū)漢族人群中H.pylori感染的臨床特征;（2）分析重慶地區(qū)漢族人群中H.pylori感染和MTHFR rs1801133基因多態(tài)性的關(guān)系;（3）統(tǒng)計(jì)分析H.pylori感染和MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與GTM（CEA、CA19-9和CA72-4）之間的關(guān)系和交互作用。方法:研究對(duì)象共152例,其中13C-UBT陽(yáng)性組58例,13C-UBT陰性組94例,均為重慶市主城區(qū)于2016年1月至2020年10月的漢族體檢者,所有研究對(duì)象均完成碳13尿素呼氣試驗(yàn)（Carbon 13 urea breath test,13C-UBT）、MTHFR rs1801133基因多態(tài)性篩查和GTM（CEA、CA19-9、CA72-4）檢測(cè)。按照13C-UBT結(jié)果對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行分組,DOB值≥4定義為13C-UBT陽(yáng)性,既H.pylori感染;DOB值<4定義為13C-UBT陰性,既非H.pylori感染。通過(guò)卡方檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料的差異,用c2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)分析計(jì)量資料的差異,分類變量的組間比較采用c2檢驗(yàn)。logistic回歸分析MTHFR rs1801133基因多態(tài)性的基因頻率。LR logistic回歸計(jì)算OR和95%CI來(lái)評(píng)估13C-UBT陽(yáng)性與危險(xiǎn)因素之間的關(guān)系。多因素方差分析方法分析MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與GTM、13C-UBT結(jié)果的交互作用。使用Bootstrap方法計(jì)算95%CI,同時(shí)采用Logistic回歸計(jì)算MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與13C-UBT陽(yáng)性危險(xiǎn)因素中的分類變量和連續(xù)變量之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)交互作用。結(jié)果:（1）在重慶漢族人群中,男性13C-UBT陽(yáng)性率（43.4%）高于女性（26.1%,P=0.044）;年齡>60歲組13C-UBT陽(yáng)性率（71.4%）顯著高于其他年齡組（年齡<40:36.4%;年齡4060:34.5%,P=0.027）;13C-UBT陽(yáng)性組的CEA 2.08±1.04ng/ml、CA72-4 3.70（1.60,5.93）U/ml和WBC6.00±1.34 10^9/L水平高于13C-UBT陰性組（CEA:1.69±0.74ng/ml,P=0.008;CA72-4:2.10（1.08,4.23）U/ml,P=0.004;WBC:5.54±1.42 10^9/L,P=0.045）;MTHFR rs1801133基因隱性模型（TT vs.CC+CT）中TT基因型（57.7%）的13C-UBT陽(yáng)性率高于CC+CT基因型（34.1%,P=0.028）。（2）Logistic回歸分析為CEA、CA72-4和MTHFR rs1801133隱性模型（TT vs.CC+CT基因型）是重慶漢族人群13C-UBT陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。（3）通過(guò)分析MTHFR rs1801133多態(tài)性與CEA對(duì)13C-UBT結(jié)果的相加交互作用,發(fā)現(xiàn)MTHFR rs1801133多態(tài)性與CEA水平存在負(fù)相相加交互作用（P=0.026）。交互作用相對(duì)超額危險(xiǎn)度（Relative excess risk of interaction,RERI）為-1.407（95%CI=-3.737-0.277）,協(xié)同指數(shù)（Synergy index,S）為0.468（95%CI=0.0720.910）,歸因比（Attributable proportion,AP）為63.1%（95%CI=-1.941-0.079）。（4）校正其他影響因素后,男性CEA水平（2.13±0.11 ng/ml）顯著高于女性（1.66±0.14 ng/ml,P=0.002）;年齡>60歲組CEA水平（2.41±0.22 ng/ml）顯著高于其他各組（年齡<40:1.51±0.18 ng/ml;年齡4060:1.78±0.09,P=0.009）。13C-UBT陽(yáng)性時(shí),T等位基因出現(xiàn)CEA水平下降;13C-UBT陰性時(shí),T等位基因出現(xiàn)CEA水平上升,MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與13C-UBT結(jié)果在CEA水平上存在交互作用（P=0.004）。女性CA19-9水平（15.63±2.30 U/ml）顯著高于男性（9.25±1.84U/ml,P=0.010）。13C-UBT陽(yáng)性組CA72-4水平（5.85±0.93U/ml）顯著高于陰性組（3.18±0.92 U/ml,P=0.020）。結(jié)論:（1）重慶地區(qū)漢族人群中H.pylori感染與性別和年齡有關(guān),男性比女性感染H.pylori的機(jī)會(huì)更大;隨著年齡的增加,H.pylori感染率增加。同時(shí),H.pylori感染會(huì)導(dǎo)致CEA、CA72-4和WBC水平升高。（2）MTHFR rs1801133基因多態(tài)性可能是重慶地區(qū)漢族人群H.pylori感染的易感因素。MTHFR rs1801133 TT基因型會(huì)增加重慶地區(qū)漢族人群的H.pylori感染風(fēng)險(xiǎn)。（3）MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與CEA水平在H.pylori感染時(shí)呈負(fù)相相加交互作用,提示不同基因型感染H.pylori會(huì)導(dǎo)致不同程度的CEA升高。MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與13C-UBT結(jié)果在CEA水平上存在統(tǒng)計(jì)學(xué)交互作用。第三部分MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和幽門螺桿菌感染合并非酒精性脂肪肝與消化道腫瘤標(biāo)志物之間的關(guān)系及交互作用目的:（1）了解H.pylori感染和H.pylori感染合并NAFLD的臨床特征;（2）分析H.pylori感染和H.pylori感染合并NAFLD與MTHFR rs1801133基因多態(tài)性之間的關(guān)系;（3）統(tǒng)計(jì)分析H.pylori感染和H.pylori感染合并NAFLD及MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與GTM（CEA、CA19-9和CA72-4）之間的關(guān)系和交互作用。MDR建模分析H.pylori感染人群中MTHFR rs1801133基因隱性模型（TT vs.CC+CT基因型）與NAFLD對(duì)于GTM水平異常的交互作用。方法:研究對(duì)象共130例,其中對(duì)照組（無(wú)H.pylori感染和NAFLD）72例、疾病1組（H.pylori感染組）30例和疾病2組（H.pylori感染+NAFLD組）28例。所有研究對(duì)象均完成13C-UBT、腹部彩超、CEA、CA19-9和CA72-4等檢查。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析;計(jì)數(shù)資料采用c2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行分析;采用方差分析對(duì)計(jì)量和計(jì)數(shù)資料的趨勢(shì)進(jìn)行分析。有序Loistic回歸分析三組間的MTHFR rs1801133基因多態(tài)性分布情況。單因素和多因素Logistic回歸分析人體學(xué)指標(biāo)、血生化檢查及MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與疾病相關(guān)性,其中多變量Logistic回歸采用逐步法篩選變量。三組間的差異和交互作用采用方差分析。MDR建模分析基因-環(huán)境交互作用。結(jié)果:（1）疾病1組和疾病2組與對(duì)照組相比BMI值、血壓（DBP和SBP）、CEA、CA72-4、γ-GT、ALT、s TG和WBC水平升高,HDL-C水平下降（P<0.05）。疾病2組中的BMI值、血壓（DBP和SBP）、CA72-4、γ-GT、ALT、s TG和WBC升高水平及HDL-C降低水平要顯著大于疾病1組（P<0.05）。（2）不同MTHFR rs1801133基因型對(duì)于H.pylori感染和NAFLD的易感危險(xiǎn)度不同,呈現(xiàn)TT基因型>CT基因型>CC基因型的趨勢(shì)。（3）通過(guò)Logistic單因素和多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)SBP、CEA、CA72-4、WBC水平和MTHFR rs1801133基因隱性模型（TT vs.CC+CT基因型）是H.pylori感染和H.pylori感染合并NAFLD的危險(xiǎn)因素（P<0.05）。（4）校正其他因素影響后,三組間的CEA、CA72-4水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同基因型的CA72-4水平也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,隨著MTHFR rs1801133 T等位基因的突變,CA72-4水平也相應(yīng)升高（P=0.003）。對(duì)照組、疾病1組和疾病2組與MTHFR rs1801133基因多態(tài)性在CEA（P=0.028）及CA72-4（P<0.001）水平上存在交互作用。疾病2組中MTHFR rs1801133 TT基因型的CEA和CA72-4水平顯著高于對(duì)照組和疾病1組的其他基因型組合。WBC水平隨著CA19-9、CA72-4水平的升高而呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（P<0.05）。（5）MDR分析顯示三維模型（MTHFR rs1801133基因隱性模型,NAFLD,WBC）為最佳模型。MTHFR rs1801133基因隱性模型（TT vs.CC+CT基因型）和二維模型（MTHFR rs1801133基因隱性模型,NAFLD）為高效模型。提示MTHFR rs1801133 TT基因型與MTHFR rs1801133CC+CT基因型對(duì)CA72-4水平升高具有基因交互作用;二維和三維模型中MTHFR rs1801133基因隱性模型與NAFLD、WBC具有基因-環(huán)境交互作用。樹(shù)狀圖提示MTHFR rs1801133基因隱性模型和NAFLD對(duì)CA72-4水平升高的協(xié)同作用更強(qiáng)。結(jié)論:（1）H.pylori感染可能會(huì)影響肝臟脂代謝能力;炎癥反應(yīng)與H.pylori感染關(guān)系密切,并可能對(duì)NAFLD的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。（2）MTHFR rs1801133 T等位基因突變是H.pylori感染和H.pylori感染合并NAFLD的易感因素,MTHFR rs1801133 TT基因型罹患兩種疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高。（3）不同疾病組與MTHFR rs1801133基因多態(tài)性在CEA及CA72-4水平上存在交互作用。MTHFR rs1801133 T等位基因的突變不但會(huì)增加H.pylori感染和NAFLD患病風(fēng)險(xiǎn),還可能在患病后對(duì)CEA和CA72-4水平的升高造成影響。（4）H.pylori感染人群中由于MTHFR rs1801133基因型的不同、是否合并NAFLD和炎癥反應(yīng)情況會(huì)對(duì)CA72-4水平升高造成不同的影響。其中,MTHFR rs1801133 TT基因型和合并NAFLD對(duì)于H.pylori感染人群CA72-4水平升高的協(xié)同作用最為明顯。第四部分利用條件永生化小鼠腸隱窩細(xì)胞（ci MICs）衍生的類器官模擬消化道腫瘤的發(fā)生目的:（1）建立條件永生化小鼠腸隱窩細(xì)胞（Conditionally immortalized mouse intestinal crypt cells,ci MICs）系;（2）驗(yàn)證ci MICs的生物學(xué)特征,及3D培養(yǎng)條件下能否繼續(xù)保持形成腸道類器官的能力;（3）將活化的致癌基因?qū)隿i MICs,完成消化道腫瘤建模,并在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證其致瘤性,病理學(xué)和組織學(xué)特征。方法:利用piggy Bac轉(zhuǎn)座子為基礎(chǔ)的SV40 T抗原表達(dá)系統(tǒng),建立ci MICs系。驗(yàn)證ci MICs生物學(xué)特征及增殖能力。將2D條件培養(yǎng)的ci MICs繼續(xù)在3D條件下進(jìn)行培養(yǎng),驗(yàn)證是否能形成腸上皮結(jié)構(gòu)的Mini-guts或隱窩類器官。通過(guò)在piggy Bac載體中構(gòu)建了一個(gè)缺失N端破壞結(jié)構(gòu)域的組成型激活突變?chǔ)?catenin和KRASG12D共同點(diǎn)突變。利用這些載體,我們構(gòu)建5個(gè)穩(wěn)定的ci MICs系。結(jié)果:（1）原代小鼠小腸隱窩（mouse intestinal crypts,MICs）經(jīng)過(guò)p MPH86載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞,并在Ad PBase高效感染細(xì)胞后用潮霉素（Hygromycin,Hyg）進(jìn)行篩選,獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)座子和可以傳代的永生化細(xì)胞。（2）ciMICs缺乏間質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞,可以在2D培養(yǎng)條件下保持長(zhǎng)期的增殖活性,并保留了腸上皮干細(xì)胞的生物學(xué)特性。（3）3D培養(yǎng)條件下ci MICs可以高效的衍生出腸道類器官,并且與APCmin+/-小鼠衍生的類器官有許多相似之處。（4）通過(guò)載體構(gòu)建了穩(wěn)定的細(xì)胞株,分別為:ci MIC-FGL（表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶、GFP和Lac Z）、ci MIC-紅色熒光蛋白（Red Fluorescent Proteins,RFP）（表達(dá)RFP）、ci MIC-mut BC（表達(dá)活性突變?chǔ)?catenin）、ci MIC-mut KRAS（表達(dá)突變KRAS）和ci MIC-mut BC/KRAS（同時(shí)表達(dá)突變?chǔ)?catenin和突變KRAS）。在3D培養(yǎng)條件下,ci MICs、ci MIC-mut BC、ci MIC-mut KRAS、ci MIC-mut BC/KRAS均形成了相似效率的腸道類器官結(jié)構(gòu)。（5）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,和PBS混合的ci MIC-FGL和ci MIC-mut BC注射部位均未形成質(zhì)量塊;ci MIC-FGL/PBS注射部位的生物發(fā)光信號(hào)持續(xù)2周,7周后未能檢測(cè)到生物發(fā)光信號(hào)。ci MIC-mut BC和ci MIC-mut KRAS與ENR培養(yǎng)基或者M(jìn)atrigel混合后在裸鼠皮下均可成瘤。從ci MIC-mut BC/ENR注射部位很容易獲得瘤體,而與Matrigel混合的ci MIC-FGL/Matrigel注射部位只能獲得小質(zhì)量瘤體。ci MIC-FGL/ENR培養(yǎng)基注射部位未檢測(cè)到瘤體。（6）模擬腸道腫瘤發(fā)生模型實(shí)驗(yàn)中,ci MIC-mut BC和ci MIC-mut KRAS注射組的瘤體表現(xiàn)出高增殖、腸腺瘤樣的病理和組織學(xué)特征。結(jié)論:（1）利用piggyBac轉(zhuǎn)座子為基礎(chǔ)的SV40 T抗原表達(dá)系統(tǒng),可以有效地建立ci MIC細(xì)胞系。但SV40 T抗原介導(dǎo)的原代MICs的永生化是有條件的,這些細(xì)胞的長(zhǎng)期維持仍然需要ENR培養(yǎng)基中存在小腸干細(xì)胞niche因子。（2）ciMICs保留腸上皮干細(xì)胞的生物學(xué)特性,并能在3D培養(yǎng)條件下形成腸道類器官（Mini-guts）。（3）ciMIC細(xì)胞系不具有致瘤性,但在導(dǎo)入過(guò)表達(dá)致癌基因后會(huì)表現(xiàn)出高增殖活性,并在體內(nèi)發(fā)展出腸腺瘤樣病理和組織學(xué)特征。
肖琪,普彥淞,都慶國(guó),段降龍,李曉帆,楊妮,薛飛[2]（2021）在《SDF-1α基因多態(tài)性與西北地區(qū)漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究》文中研究說(shuō)明目的探討SDF-1α基因3’非翻譯區(qū)801位點(diǎn)A等位基因（rs1801157,SDF-1α G801A）多態(tài)性與西北地區(qū)漢族人群胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是否存在顯著相關(guān)性。方法收集2016年6月至2018年7月陜西省人民醫(yī)院收治的胃癌患者131例和健康對(duì)照者76名,均為漢族。分析研究對(duì)象的臨床病理資料,通過(guò)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)技術(shù),利用MspⅠ限制酶酶切PCR擴(kuò)增SDF-1基因801位點(diǎn)附近DNA片段,分析檢測(cè)外周血SDF-1α G801A位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）。結(jié)果 SDF-1α G801A與胃癌的發(fā)病有明顯相關(guān)性,G/G基因型（P=0.002,OR=0.40,95% CI:0.22～0.71）與G/A（P=0.002,OR=2.52,95% CI:1.41～4.52）與胃癌的易感性顯著相關(guān)。進(jìn)一步分層分析發(fā)現(xiàn),SDF-1α G/A突變?nèi)巳涸诟腥居拈T螺桿菌情況下其胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加（P<0.05）。結(jié)論 SDF-1α G801A基因多態(tài)性與西北地區(qū)漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯相關(guān),特別是感染幽門螺桿菌的G/A基因型人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。
陳銀娟[3]（2021）在《基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2水平及基因多態(tài)性在急性腦梗死表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響》文中指出[目的]探討基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2（MMPs-1、2）水平及基因多態(tài)性及基因交互作用對(duì)急性腦梗死及預(yù)后的影響。[方法]連續(xù)收集了急性期腦梗死患者332例,同期體檢中心263例體檢者作為健康對(duì)照組;根據(jù)改良Rankin量表（m RS）評(píng)分,將腦梗死組患者分為90天預(yù)后良好組（m RS≤2分）和預(yù)后不良組（m RS>2分）兩組。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)入組病例的血漿MMPs-1、2水平,使用飛行質(zhì)譜法檢測(cè)入組病例的MMP-1:rs1799750、MMP-2:rs243865、rs2285053、rs2241145的4個(gè)單核苷酸基因位點(diǎn)。使用廣義多因子降維（GMDR）Beta V0.7軟件分析基因交互作用在腦梗死患者中作用。Logistic回歸分析腦梗死發(fā)生的危險(xiǎn)因素。[結(jié)果]1、吸煙、飲酒在腦梗死組和健康對(duì)照組間沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。但腦梗死組中男性發(fā)病率更高。腦梗死組的年齡、高血壓、糖尿病、總膽固醇、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸、MMP-1、MMP-2表達(dá)水平均高于對(duì)照組,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;腦梗死組的高密度脂蛋白低于對(duì)照組,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。甘油三酯和尿酸在兩組人群之間沒(méi)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。2、MMP-2:rs243865基因多態(tài)性在腦梗死組及對(duì)照組之間差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,而MMP-1:rs1799750、MMP-2:rs2285053、rs2241145三個(gè)基因位點(diǎn)多態(tài)性在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。3、經(jīng)Logistic回歸分析表明,年齡、高血壓、糖尿病和總膽固醇、低密度脂蛋白、MMP-1水平、MMP-2水平為腦梗死發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P<0.05）。MMP-2 rs243865 T位點(diǎn)的突變與疾病正相關(guān),與無(wú)突變的CC型相比,CT型腦梗死發(fā)生的增加,其OR（95%CI）為1.328（0.086-1.347）,但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與無(wú)突變的CC型相比,TT型腦梗死發(fā)生的增加,OR（95%CI）為5.162（1.113-23.951）,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。4、經(jīng)GMDR分析表明,腦梗死中rs243865與rs1799750基因交互模型為腦梗死易感性最佳組合,其交叉檢驗(yàn)一致性為10/10,樣本檢驗(yàn)精確度為54.34%,符合檢驗(yàn)值P=0.0107,且增加腦梗死的發(fā)生（OR:1.591,95%CI:1.351-1.994）。5、腦梗死90天隨訪預(yù)后不良組患者入院時(shí)血清MMP-1水平和血清MMP-2水平明顯高于預(yù)后良好組患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;經(jīng)Logistic回歸分析表明,腦梗死急性期MMP-1水平（OR:7.198,95%CI:2.541-20.391）、MMP-2水平（OR:13.335,95%CI:5.353-33.219）是腦梗死患者90天不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。[結(jié)論]腦梗死急性期血漿MMP-1、MMP-2表達(dá)水平升高,且與腦梗死90天預(yù)后相關(guān);MMP-2 rs243865 C→T位點(diǎn)的突變致腦梗死易感性增強(qiáng),與MMP-1rs1799750交互作用顯著增加腦梗死發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。
傅伯論[4]（2021）在《DPP4基因多態(tài)性與血脂及2型糖尿病合并冠心病的相關(guān)性研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理背景:近年來(lái),隨著全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS）的開(kāi)展,人們發(fā)現(xiàn)了一些基因單核苷酸多態(tài)性（SNPs）與人群中動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)生由環(huán)境因素和遺傳因素共同決定,且多呈復(fù)雜性遺傳模式。二肽基肽酶-4（DPP4）在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中扮演著重要參與者,目前研究表明冠心病的主要病理機(jī)制就是動(dòng)脈粥樣硬化,2型糖尿?。═2DM）是冠心?。–AD）的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,T2DM遠(yuǎn)期并發(fā)癥及死亡風(fēng)險(xiǎn)主要為心血管疾病,因此開(kāi)展DPP4基因多態(tài)性研究有助于進(jìn)一步了解DPP4在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用,對(duì)開(kāi)發(fā)DPP4抑制劑及其他相關(guān)藥物有重要指導(dǎo)意義。目的:探究DPP4基因中的3個(gè)位點(diǎn)的（rs3788979、rs4664443、rs13015258）S NPs對(duì)血脂水平的影響,以及DPP4基因多態(tài)性與T2DM合并CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。方法:收集2019年1月～2019年12月在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)總醫(yī)院心內(nèi)科274例患者,分為對(duì)照組（無(wú)T2DM和CAD）152例和病例組（T2DM合并CAD）122例。研究DPP4基因中的3個(gè)位點(diǎn)（rs3788979、rs4664443、rs13015258）的SNPs在兩組中的基因型及等位基因分布差異,通過(guò)校正年齡、性別、吸煙、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）等混雜因素采用logistic回歸分析DPP4基因多態(tài)性與T2DM合并CAD患病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。結(jié)果:1.病例組與對(duì)照組的血脂水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,病例組載脂蛋白B/載脂蛋白A1（ApoB/Apo A1）水平明顯高于對(duì)照組（P<0.001）,病例組載脂蛋白A1（Apo A1）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）比對(duì)照組有更低水平（P<0.001）。2.病例組與對(duì)照組DPP4基因中三個(gè)位點(diǎn)SNP分布均符合哈迪-溫伯格平衡平衡（rs3788989χ2=0.026,P=0.871;rs4664443χ2=0.026,P=0.871;rs13015258χ2=0.596,P=0.742）。病例組與對(duì)照組DPP4基因型以及等位基因頻率分布無(wú)差異（P>0.05）。在對(duì)照組中DPP4基因rs3788979位點(diǎn)A等位基因突變者的血清ApoB（P=0.038）和ApoB/A1（P=0.040）水平低于非A等位基因攜帶者,在男性中這種差異更加明顯。DPP4基因rs13015258位點(diǎn)基因型TT比基因型GT有更高ApoB（P=0.006）、ApoB/A1（P=0.023）水平,基因型GG比基因型GT有更高ApoB/A1（P=0.039）水平。3.DPP4基因三個(gè)位點(diǎn)SNP基因型未發(fā)現(xiàn)與T2DM合并CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（P>0.05）。結(jié)論:DPP4基因rs3788979位點(diǎn)A等位基因突變降低了ApoB、ApoB/A1水平,但在納入年齡、性別、吸煙、BMI等混雜因素采用logistic回歸對(duì)加性、顯性、隱性、過(guò)顯性遺傳模型分析時(shí),T2DM合并CAD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)并未降低。
王立立[5]（2021）在《中國(guó)高血壓患者醛固酮合成酶基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性研究》文中認(rèn)為全球每年因身患或由其他疾病而引發(fā)的由心血管疾病導(dǎo)致的死亡人數(shù)大約1800萬(wàn)人,占全球死亡人數(shù)死亡率的31%,這種現(xiàn)象在我國(guó)尤為突出,心血管疾病死亡可高達(dá)中國(guó)居民因所有疾病死亡率的40%以上,并且其患病率和病死率仍趨于逐年增加的趨勢(shì)。全世界每年約有940萬(wàn)人死于原發(fā)性高血壓（Essential Hypertension,EH）,這是造成全球疾病負(fù)擔(dān)的三大風(fēng)險(xiǎn)因素之一,EH顯然已成為我國(guó)心血管疾病發(fā)生及發(fā)展的重要危險(xiǎn)因素之一,包括缺血性心臟疾病和中風(fēng),更為嚴(yán)重的是其患病率正逐年呈顯出快速增長(zhǎng)的趨勢(shì),且患病人群逐漸趨于向年輕化發(fā)展。據(jù)《中國(guó)心血管病報(bào)告2017》統(tǒng)計(jì),我國(guó)已知的EH患者人數(shù)已達(dá)到2.7億人,全球EH患者人數(shù)超過(guò)11億,EH患病率約為20%,而且EH患者人數(shù)還有加快上升的趨勢(shì),并且高EH也越來(lái)越成為促使心血管疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素之一。血壓受個(gè)體活動(dòng)、姿勢(shì)、精神壓力及藥物等因素的影響,且是動(dòng)態(tài)變化的;因EH患者的基因特征呈現(xiàn)出相對(duì)穩(wěn)定性;因此人們推測(cè)可通過(guò)監(jiān)測(cè)EH患者基因型,探討其與心血管事件發(fā)生的相關(guān)性顯得更加重要。醛固酮作為人體內(nèi)一種重要的鹽皮質(zhì)激素,由腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞分泌,作用于鹽皮質(zhì)激素受體（MR）,其水平升高后將致使EH發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及EH相關(guān)的靶器官損害明顯增加。醛固酮合成酶（CYP11B2）是由醛固酮合成酶基因-細(xì)胞色素P（CYP）（CYP11B2）編碼,是體內(nèi)調(diào)節(jié)腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞合成醛固酮最后一步生化反應(yīng)的催化酶,在醛固酮生物合成中起著舉足輕重的作用。CYP11B2基因3個(gè)多態(tài)性變異與EH和心血管疾病密切相關(guān)。而備受關(guān)注的CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性位于啟動(dòng)子區(qū)域（rs1799998）,類固醇合成轉(zhuǎn)錄因子1（SF-1）結(jié)合位點(diǎn)胞嘧啶與胸腺嘧啶發(fā)生互換,影響該基因的轉(zhuǎn)錄活性,從而調(diào)節(jié)酶的生成。有關(guān)研究證實(shí)在普通人群中CYP11B2基因多態(tài)性能夠促使心血管疾病的發(fā)生,然而并不能夠解釋該多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性是否在EH患者中也存在;此外,在不同種族人群中,CYP11B2等位基因頻率分布和心血管疾病的發(fā)生存在差異,然而研究結(jié)果可能并不能直接應(yīng)用于中國(guó)人群。本研究以中國(guó)EH患者為研究對(duì)象,研究中國(guó)EH患者中CYP11B2基因各基因型以及等位基因的出現(xiàn)頻率,并比較與其他國(guó)家人群基因型及等位基因頻率的差異,同時(shí)探究CYP11B2基因多態(tài)性與中國(guó)EH患者發(fā)生心血管事件之間的關(guān)系,此外進(jìn)一步探討了CYP11B2基因多態(tài)性與老年EH患者左心室肥厚（Left Ventricular Hypertrophy,LVF）、心房纖顫（Atrial Fibrillation,AF）等相關(guān)常見(jiàn)心血管疾病發(fā)生的相關(guān)性,以及其對(duì)降EH藥物使用療效的影響,為中國(guó)EH患者臨床治療中減少心血管事件的發(fā)生提供理論依據(jù)及指導(dǎo)意義。第一部分醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C/T多態(tài)性與中國(guó)高血壓患者心腦血管事件的關(guān)系研究目的:CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性與EH患者心腦血管事件發(fā)生的相關(guān)性研究所得結(jié)論不一致。在健康個(gè)體中-344C/T等位基因頻率和心腦血管疾病發(fā)病率在不同種族間存在差異,因此這些研究結(jié)果可能不適用于中國(guó)人群。此外,研究大多數(shù)都是在健康人群中進(jìn)行的,至少在一定程度上無(wú)法證明EH患者的基因相關(guān)性。因此,對(duì)于-344C/T的等位基因是否影響EH患者心腦血管疾病的發(fā)病率,需要在基于EH患者的隊(duì)列研究中得到證實(shí)。因此-344C等位基因是否影響中國(guó)EH患者心腦血管疾病的發(fā)病率尚不清楚,需要進(jìn)行探究。方法:本研究通過(guò)對(duì)2004年6月至2006年5月在河北省人民醫(yī)院和首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院連續(xù)招募的820例在門診確診為EH的患者作為研究對(duì)象,進(jìn)行臨床調(diào)查:（1）應(yīng)用Taq Man real-time PCR的方法檢測(cè)所有患者CYP11B2基因分型;（2）對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行11年隨訪,記錄主要不良心血管事件（MACEs）,包括卒中、冠狀動(dòng)脈疾?。–oronary Artery Disease,CAD）和冠狀動(dòng)脈疾病死亡以及心血管事件發(fā)生情況;（3）采用已建立的心血管危險(xiǎn)因素調(diào)整多變量進(jìn)行Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析,數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.研究對(duì)象的一般臨床資料:本項(xiàng)研究共納入820例EH患者,其中65例EH患者因失訪而被排除。其余755例EH患者中,男性399例,女性356例,年齡60.52±12.61歲。2.研究對(duì)象CYP11B2基因型分型結(jié)果:T等位基因純合型（TT基因型）282例（37.4%）;雜合型（CT基因型）361例（47.8%）,C等位基因純合型（CC基因型）112例（14.8%）。各組間年齡和性別比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與CYP11B2基因型沒(méi)有進(jìn)一步的顯著相關(guān)性。3.心血管事件發(fā)生情況:在平均7.60±1.12年的隨訪期后,CYP11B2基因CC基因型患者的MACEs事件發(fā)生率明顯高于CT和TT基因型患者。4.危險(xiǎn)因素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估:CYP11B2基因CC變異是MACEs事件、CAD、卒中疾病發(fā)生的顯著且獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子。小結(jié):CYP11B2-344 CC基因型是EH患者發(fā)生CAD和腦卒中的危險(xiǎn)因素,獨(dú)立于中國(guó)EH患者已有的其他心血管危險(xiǎn)因素,可作為EH患者心血管事件的危險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子,但對(duì)該基因型變異的機(jī)制需進(jìn)一步研究。第二部分醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C/T多態(tài)性與老年原發(fā)性高血壓患者左心室肥厚的相關(guān)性研究目的:本部分研究通過(guò)對(duì)CYP11B2基因-344C/T位點(diǎn)與老年EH并發(fā)LVH患者進(jìn)行相關(guān)性分析,探討此位點(diǎn)變異基因型與LVH的關(guān)系,為中國(guó)EH并發(fā)LVH患者的診治提供理論依據(jù)。方法:選取2015年4月～2016年10月在河北省人民醫(yī)院心內(nèi)科及首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院心內(nèi)科門診確診的老年EH患者434例,所有入選患者詳細(xì)詢問(wèn)病史、體檢并完成各項(xiàng)相關(guān)檢查:血壓、身高和體質(zhì)量檢測(cè),計(jì)算體體重指數(shù)（BMI）、心電圖檢查、超聲心動(dòng)圖檢查、血常規(guī)、尿常規(guī)及生化檢查、CYP11B2基因多態(tài)性檢測(cè),采用多元逐步回歸分析基因與LVH的相關(guān)性。使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:1.研究對(duì)象的一般臨床資料:本研究共納入研究者434例,其中男性171例,女性263例,平均年齡65.32±4.32歲。2.研究對(duì)象CYP11B2基因型分型結(jié)果:進(jìn)行基因分型后,3種基因型患者的基因位點(diǎn)分布:TT、CT、CC 3種基因型分別為149例（34.3%）、232例（53.5%）、53例（12.2%）。T等位基因60.9%,C等位基因39.1%。3種基因型患者一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。3.多元逐步回歸分析:-344C/T位點(diǎn)CC基因型患者的LVPWT、LVM及LVMI顯著高于CT和TT基因型患者[（11.46±0.97）mm vs.（10.01±0.95）mm、（10.18±0.89）mm,P=0.000,（95.39±20.76）g/m2 vs.（84.73±12.68）g/m2、（79.81±14.53）g/m2,P=0.000,（174.69±31.27）g vs.（151.85±16.24）g、（146.08±19.08）g,P=0.007]。多元逐步回歸分析顯示,校正年齡、性別、服用降壓藥物種類、BMI、吸煙史、飲酒史、TG、TC、LDL-C、HDL-C、心率、血壓及空腹血糖后,-344C/T型與LVMI密切相關(guān)（P<0.001）。4.心血管事件發(fā)生及死亡隨訪情況比較:在3.60±1.12年的隨訪期后,CYP11B2基因CC基因型患者的MACEs發(fā)生率明顯高于CT和TT基因型患者。小結(jié):CYP11B2基因-344C/T存在基因多態(tài)性,C等位基因可能是EH患者LVH發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;中國(guó)老年EH攜帶CC基因型患者發(fā)生MACEs及死亡的風(fēng)險(xiǎn)較高,可能與EH患者CC基因型患者發(fā)生LVH有關(guān)聯(lián)性。第三部分醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C/T多態(tài)性與中國(guó)高血壓患者房顫關(guān)系研究目的:目前CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性與AF的相關(guān)性報(bào)道尤其是其在EH患者中的相關(guān)性研究報(bào)道較少,且研究結(jié)果不一致,并且這些基因型頻率也明顯受到種族、性別、環(huán)境等外界因素的影響而導(dǎo)致其出現(xiàn)差異性,在本部分研究中,我們將探索評(píng)估中國(guó)人群EH患者中AF與CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性是否存在相關(guān)性,從而為AF及EH個(gè)體的遺傳易感性和藥物反應(yīng)性差異提供分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)。方法:連續(xù)招募河北省人民醫(yī)院及首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院2017年5月至2020年11月心內(nèi)科門診和病房收治的310例有AF記錄的EH和相匹配的無(wú)AF病史的EH患者310例（對(duì)于每個(gè)病例患者,在同一時(shí)期內(nèi)選擇一個(gè)匹配的沒(méi)有AF的EH患者作為對(duì)照）。兩組患者是獨(dú)立的,性別和年齡相匹配,年齡差異均不超過(guò)5歲。本研究對(duì)所有受試者詳細(xì)詢問(wèn)病史、進(jìn)行體格檢查并完成各項(xiàng)相關(guān)檢查:血壓、身高和體體重指數(shù)檢測(cè),計(jì)算體重指數(shù)（BMI）;行M型超聲心動(dòng)圖和二維經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖測(cè)量左房和左室尺寸,采用Simpson法評(píng)定左心室射血分?jǐn)?shù)（Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF）,并根據(jù)超聲心動(dòng)圖參數(shù)和Devereux公式計(jì)算LVMI;采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)CYP11B2基因多態(tài)性確定基因分型,采用多元逐步回歸分析基因型與LVH的相關(guān)性;Logistic回歸分析AF危險(xiǎn)因素;使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:1.研究對(duì)象的一般臨床資料:本研究實(shí)驗(yàn)組（EH合并AF）患者310例,其中男性158例,女性152例,平均年齡61.9±9.8歲;對(duì)照組（EH非AF）患者310例,其中男性158例,女性152例,平均年齡61.5±9.6歲。兩組患者在年齡、血壓、性別分布、糖尿病發(fā)生率、吸煙飲酒生活習(xí)慣等方面差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。AF患者的LAD明顯大于對(duì)照組（P<0.001）。同樣,AF患者IVS、LVEDD大小和LVMI也顯著高于對(duì)照組（P<0.001）。兩組LVPW、LVEF差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2.研究對(duì)象CYP11B2基因型分型結(jié)果:進(jìn)行基因分型后3種基因型（TT、TC和CC）在實(shí)驗(yàn)組患者中的分布分別為:41.9%、50.6%和7.4%;在對(duì)照組患者中的分布分別為48.4%、44.5%和7.1%（χ2=2.675,P=0.263）。CYP11B2基因的C等位基因頻率在實(shí)驗(yàn)組患者（32.3%）與對(duì)照組患者（29.4%）之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.661,P=0.197）。3.多元逐步回歸分析:Logistic回歸分析顯示LAD和LVEDD是中國(guó)EH患者AF的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子（均P<0.001）。C等位基因攜帶者AF的RR=1.30,95%CI:0.95～1.78,P=0.107;調(diào)整LAD和LVEDD后為RR=1.13,95%CI:0.72～1.78,P=0.601。這些結(jié)果表明,在該人群中,沒(méi)有發(fā)現(xiàn)AF和CYP11B2基因的-344C/T多態(tài)性之間的關(guān)聯(lián)性。4.不同基因型的超聲心動(dòng)圖參數(shù):針對(duì)少數(shù)CC基因型,我們將TC和CC基因型作為一組C等位基因攜帶者。C等位基因攜帶者的LAD顯著大于非C等位基因攜帶者（P=0.009）,而兩組患者的LVPW、IVS、LVEDD、LVM無(wú)顯著性差異（P>0.05）。小結(jié):CYP11B2基因的-344C/T多態(tài)性與中國(guó)EH人群非家族性AF之間缺乏關(guān)聯(lián),但這種多態(tài)性可能與中國(guó)EH人群的心房重構(gòu)有關(guān)。為了證實(shí)醛固酮合成酶在非家族性AF中的作用,以及醛固酮合成酶基因的遺傳變異在AF中的作用,可能需要進(jìn)行更大規(guī)模的臨床研究或?qū)嶒?yàn)研究。第四部分醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C/T多態(tài)性與血管緊張素受體拮抗劑對(duì)中國(guó)高血壓患者的治療影響研究目的:研究中國(guó)EH患者CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性對(duì)血管緊張素II型受體拮抗劑替米沙坦對(duì)EH患者治療的療效影響評(píng)價(jià),旨在獲得中國(guó)EH患者人群CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性對(duì)降EH藥物治療有效性的影響,為臨床進(jìn)行以基因?yàn)閷?dǎo)向性的個(gè)體化治療提供依據(jù)。方法:本研究以2016年6月至2019年5月在河北省人民醫(yī)院及首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院心內(nèi)科門診和病房連續(xù)招募的164例被確診為EH的患者為研究對(duì)象,進(jìn)行臨床調(diào)查、基因分型和對(duì)使用替米沙坦藥物治療EH的臨床療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。收集研究對(duì)象的一般臨床資料包括:年齡、性別、體重、身高、血壓、心率（HR）、研究變量包括血清ALT、肌酐、葡萄糖、尿酸、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇、鈉、鉀和血管緊張素II等基線資料。所有患者在停止所有降壓藥物治療后均給予安慰劑。在安慰劑期結(jié)束時(shí),給予每天口服一次替米沙坦,80mg/每次,為期8周。臨床試驗(yàn)中,在給予替米沙坦藥物治療前后進(jìn)行兩次抽血和血壓測(cè)量。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)CYP11B2基因多態(tài)性確定基因分型。采用線性回歸模型確定BP反應(yīng)與基因型的相關(guān)性,并對(duì)BP、年齡、性別、BMI、血糖、TC、TG、HDL-C和LDL-C進(jìn)行預(yù)處理歸一化。應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.研究對(duì)象的一般臨床資料:本研究共納入148例患者的資料,所有患者均被確診患有輕度至中度EH。替米沙坦治療8周后,SBP和DBP均出現(xiàn)顯著性降低（P<0.001）。治療8周結(jié)束時(shí)血清血管緊張素II水平明顯升高（P<0.001）。其他參數(shù)無(wú)顯著性差異。2.CYP11B2-344C/T基因多態(tài)性分型對(duì)替米沙坦的降EH反應(yīng):本研究人群中各多態(tài)性的基因型和等位基因頻率均處于Hardy-Weinberg狀態(tài)（P>0.005）。3.CYP11B2-344C/T基因多態(tài)性與降EH治療療效:對(duì)攜帶有純合子CYP11B2-344C等位基因的受試者,進(jìn)行線性回歸分析表明,CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性與DBP對(duì)替米沙坦的反應(yīng)有關(guān)。經(jīng)協(xié)變量校正后,包括預(yù)處理DBP、年齡、性別、BMI、血糖、TC、TG、HDL和LDL（P=0.005）,CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性在替米沙坦的DBP反應(yīng)中占個(gè)體間變異的18.1%。攜帶CYP11B2-344C等位基因（CC+CT）的患者顯示DBP比攜帶TT基因型的患者降低更多。小結(jié):CYP11B2基因-344C/T多態(tài)性可能是影響中國(guó)EH患者對(duì)降血壓治療藥物替米沙坦治療療效的一種基因因素,通過(guò)檢測(cè)特定基因型可能預(yù)測(cè)對(duì)特定降壓藥物治療的療效,為臨床制定用藥方案、提高治療療效、減少M(fèi)ACEs的發(fā)生提供重要的臨床指導(dǎo)意義。
李偉[6]（2021）在《整合素α2基因多態(tài)性及微小RNA作用于川崎病冠狀動(dòng)脈病變機(jī)制研究》文中提出研究背景川崎?。↘awasaki Disease,KD）是一種原因未明的全身性中、小血管炎反應(yīng)綜合征,其主要臨床特點(diǎn)包括發(fā)熱、皮膚粘膜損害、頸部淋巴結(jié)腫大等,本病是日本的兒科醫(yī)生川崎富作在1967年首次報(bào)道,其主要損害是冠狀動(dòng)脈病變,早期表現(xiàn)為冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張、冠狀動(dòng)脈動(dòng)脈瘤,恢復(fù)期可形成冠狀動(dòng)脈狹窄、血栓形成以及心肌梗死等,嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡。未經(jīng)治療的患兒約20%～25%可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈病變。此病多發(fā)于5歲以下兒童,發(fā)病人群主要為亞裔人群。2012年日本流行病學(xué)報(bào)告小于5歲的兒童KD發(fā)病率為264.8/10萬(wàn),國(guó)內(nèi)流行病學(xué)資料表明,北京市2000年至2004年5歲以下兒童發(fā)病率為（40.9～55.1）/10萬(wàn),上海市2013至2017年5歲以下兒童發(fā)病率68.8～107.3/10萬(wàn),呈逐年升高趨勢(shì),而且近些年來(lái)發(fā)病率越來(lái)越高,當(dāng)前KD已是兒童最常見(jiàn)后天性心臟病主要病因之一。KD的發(fā)病病因及機(jī)制尚不明確。當(dāng)前的研究認(rèn)為KD在遺傳易感性基礎(chǔ)上,由外源性抗原觸發(fā),引起機(jī)體免疫機(jī)制紊亂所致全身中小血管炎。流行病學(xué)研究顯示KD的發(fā)病率存在明顯的種族之間差異,以亞裔的人群發(fā)病率較高以及同胞之間發(fā)病率高,提示KD的發(fā)病機(jī)制有一定的遺傳易感性因素參與。整合素α2（Integrinα2,ITGA2）是重要的膠原蛋白受體,在上皮細(xì)胞和血小板中表達(dá)較高,在血小板以及纖維膠原的粘附過(guò)程中具有非常重要的作用,粘附過(guò)程會(huì)導(dǎo)致血小板的激活和血栓的形成,在冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中、腫瘤及免疫性炎癥反應(yīng)等中發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms,SNP）指基因組內(nèi)DNA中某一特定核苷酸位置上存在轉(zhuǎn)換、顛換、插入、缺失等不同類型且其中發(fā)生率大于1%的變異。然而ITGA2基因SNP與KD冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)的關(guān)系,查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn),我國(guó)漢族人群中尚無(wú)該基因多態(tài)性與KD相關(guān)報(bào)道,本研究探討ITGA2在我國(guó)漢族人群中的KD分布情況以及研究ITGA2的基因單核苷酸多態(tài)性與KD冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)性,為進(jìn)一步改善KD患兒預(yù)后提供理論依據(jù)。微小RNA（microRNAs,miRNA）是一組約20個(gè)左右核苷酸高度保守的非編碼RNA,廣泛存在于自然界中。研究發(fā)現(xiàn)miRNA在心血管疾病、免疫性疾病及腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展中,通過(guò)與靶基因的3’端（非翻譯區(qū)）區(qū)域部分序列相結(jié)合,互補(bǔ)后降解已轉(zhuǎn)錄的靶基因mRNA,或者抑制靶基因編碼蛋白進(jìn)而對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展起到作用。血漿miRNA作為生物標(biāo)志物以及用于診治疾病是目前研究的熱點(diǎn)。因miRNA在組織和血液的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定,不容易被核酸酶消化,且miRNA的表達(dá)在不同種類疾病、組織和細(xì)胞中具有特異性。所以導(dǎo)致血漿miRNA在各種疾病早期診斷以及藥物開(kāi)發(fā)等臨床基礎(chǔ)方面的研究全面開(kāi)展。對(duì)于血漿miRNA在KD作用機(jī)制尚未完全清楚,因此,本研究以篩選出KD的明顯差異表達(dá)血漿miRNA的差異表達(dá)為切入點(diǎn),通過(guò)莖-環(huán)的RT-PCR方法檢測(cè)和驗(yàn)證明顯差異表達(dá)miRNA,分析其生物學(xué)功能,為進(jìn)一步研究發(fā)病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)新的生物學(xué)標(biāo)志物是KD早期診斷、治療重要內(nèi)容,最終為KD合并冠狀動(dòng)脈損傷的患兒早期診斷和基因靶向的治療并改善預(yù)后提供理論依據(jù)。KD的診斷主要是依靠臨床的表現(xiàn),尚未特異性診斷指標(biāo),能否早期診斷及治療KD是影響KD冠狀動(dòng)脈病變預(yù)后的關(guān)鍵。KD治療方案主要為靜脈輸注丙種球蛋白（Intravenous Immune Globulin,IVIG）及口服阿司匹林治療,經(jīng)規(guī)范治療后KD冠狀動(dòng)脈病變發(fā)生率可下降至5%左右。阿司匹林具有抗炎作用,可縮短發(fā)熱時(shí)間和抗血小板作用,因此是最初治療KD的療法之一。meta分析表明,阿司匹林治療不影響冠狀動(dòng)脈瘤形成。自從KD患兒應(yīng)用IVIG治療在1983年首次報(bào)道,之后的研究證實(shí)IVIG能夠降低KD合并冠狀動(dòng)脈病變發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),在KD病程第7～10天內(nèi)治療可得到最好效果。但第10天后仍存在持續(xù)發(fā)熱、炎癥指標(biāo)升高和/或冠狀動(dòng)脈病變的患兒也應(yīng)給予大劑量IVIG治療。也有日本研究顯示病程4天內(nèi)時(shí)早期開(kāi)始治療者更容易出現(xiàn)IVIG無(wú)反應(yīng)。2017年AHA發(fā)布的《川崎病診斷、治療與長(zhǎng)期管理的新科學(xué)聲明》建議診斷者明確盡早使用IVIG,診斷時(shí)間最早可提前到發(fā)病第3天。雖然IVIG作用的機(jī)制仍不明確,但I(xiàn)VIG具有全身性抗炎作用,能夠減輕發(fā)熱并減少急性反應(yīng)物,其可能機(jī)制包括:調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的水平和生成、增加T細(xì)胞抑制因子活性、下調(diào)抗體合成、對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的作用、以及提供抗獨(dú)特型抗體。雖然使用大劑量IVIG可預(yù)防KD冠狀動(dòng)脈病變,但I(xiàn)VIG的時(shí)機(jī)和有效性對(duì)中期KD冠狀動(dòng)脈結(jié)局影響仍需進(jìn)一步確定。目的1.探討我國(guó)漢族兒童整合素α2的基因單核苷酸多態(tài)性與KD冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)關(guān)系。2.探討miRNAs與KD冠狀動(dòng)脈病變發(fā)病機(jī)制相關(guān)關(guān)系。3.分析大劑量IVIG治療時(shí)機(jī)對(duì)KD冠狀動(dòng)脈病變結(jié)局的影響及影響KD冠狀動(dòng)脈病變的高危因素。方法1.應(yīng)用病例-對(duì)照研究的方法,我們選擇對(duì)ITGA2基因位點(diǎn),利用NCBI dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)和SNP info信息,篩選符合以下標(biāo)準(zhǔn)的研究SNPs:（1）在HapMap數(shù)據(jù)中報(bào)道的中國(guó)漢族后代中等位基因頻率≥5%并且不包含于已有的KD全基因組范圍關(guān)聯(lián)研究中;（2）位于基因調(diào)控區(qū)或影響轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)活性或啟動(dòng)子中的微小RNA結(jié)合位點(diǎn)活性或改變外顯子中的氨基酸。采用卡方檢驗(yàn)比較一般資料以及SNP基因型在KD研究組及對(duì)照組中的分布差異。采用單因素及多因素logistic回歸分析來(lái)計(jì)算比值比（OR）、校正OR及95%置信區(qū)間（CI）用來(lái)評(píng)估關(guān)聯(lián)的程度。2.通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)KD患兒在IVIG治療前、后及正常健康兒童血漿中的miRNA差異表達(dá)的建立。篩選出選擇明顯差異表達(dá)的miRNA在更大的樣本臨床資料中進(jìn)一步驗(yàn)證。關(guān)鍵miRNA在KD冠狀動(dòng)脈病變的作用機(jī)制研究。3.本研究回顧性分析在2015年1月至2017年12月期間診斷為KD患兒,隨訪終點(diǎn)2018年12月。該項(xiàng)研究已在中國(guó)臨床試驗(yàn)注冊(cè)中心登記。本研究主要指標(biāo)是入院時(shí)超聲診斷冠狀動(dòng)脈病變及12月內(nèi)隨訪心臟超聲結(jié)果。次要指標(biāo)是IVIG治療前后炎癥指標(biāo)。以ROC曲線下面積、敏感性和特異性為指標(biāo)篩選出評(píng)價(jià)IVIG治療KD的預(yù)防冠狀動(dòng)脈病變（coronary artery lesions,CALs）最佳時(shí)機(jī),采用t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)比較各組別人口學(xué)特征、炎癥指標(biāo)以及冠狀動(dòng)脈病變構(gòu)成比,應(yīng)用單因素及多因素logistic回歸分析KD冠狀動(dòng)脈病變因素。結(jié)果1.ITGA2基因SNP與KD冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性。本研究隨機(jī)選擇KD組818例,選擇同時(shí)期的年齡、性別想匹配1401例健康兒童作為對(duì)照組,符合標(biāo)準(zhǔn)所選擇血小板活化通路核心基因ITGA2基因C807T（rs1126643）。該基因型在KD組及對(duì)照組中性別、年齡存在著差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。818例KD根據(jù)有無(wú)并發(fā)冠狀動(dòng)脈瘤（coronary artery aneurysms,CAAs）,分為兩個(gè)亞組,其中CAAs組116例（14.18%）,702例（85.82%）患兒為無(wú)CAAs組。研究人群中ITGA2基因型的HWE=0.9626>0.05,說(shuō)明本次研究對(duì)整個(gè)群體具有一定的代表性。多因素logistic回歸分析ITGA2基因C807T（rs1126643）在KD組及對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與健康對(duì)照組相比,相對(duì)于我們發(fā)現(xiàn)ITGA2基因C807T（rs1126643）T等位基因低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。OR值<1為保護(hù)因子。相對(duì)于rs1126643野生型CC基因型,經(jīng)過(guò)年齡、性別校正后,TT基因型攜帶者患兒患病的風(fēng)險(xiǎn)降低了 38%（校正 OR=0.62,95%CI=0.43-0.88,p=0.0078）,TTvsCT+CC（校正 OR=0.63,95%CI=0.44-0.889,p=0.0093）。我們發(fā)現(xiàn) ITGA2 基因C807T（rs1126643）TT基因型對(duì)KD具有保護(hù)作用。進(jìn)一步分層分析表明,當(dāng)ITGA2基因C807T（rs1126643）CC/CT作為對(duì)照基因型,TT基因型者在年齡≤60月齡,女性患兒及KD無(wú)CAAs更具顯著保護(hù)作用。2.miRNA與KD冠狀動(dòng)脈病變的相關(guān)性研究,選擇5例KD合并冠狀動(dòng)脈病變?cè)贗VIG治療前、后患兒血漿的具有明顯的差異miRNA,芯片結(jié)果顯示miR-126在KD患兒治療前明顯降低,IVIG治療升高（大于2倍以上）。選擇進(jìn)一步擴(kuò)大樣本到10例KD合并冠狀動(dòng)脈病變接受大劑量IVIG治療治療前、后患兒及5例健康兒童作為對(duì)照組采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究方法進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證差異表達(dá)miR-126。定量PCR顯示差異表達(dá)miRNAs在KD治療前患兒中明顯低表達(dá)但在健康兒童、接受IVIG治療的KD合并冠狀動(dòng)脈病變患兒檢測(cè)到表達(dá)的候選miRNAs,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,在所驗(yàn)證的差異miRNA分子中,miR-126在KD IVIG治療中明顯差異表達(dá),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）,說(shuō)明篩選結(jié)果可靠。前期研究結(jié)果顯示治療過(guò)后的KD患兒血漿miR-126表達(dá)量增高,上述資料表明miR-126是對(duì)于血管內(nèi)皮有積極作用的。使用較為權(quán)威的數(shù)據(jù)庫(kù)Target Scan在線軟件對(duì)的miRNA-126的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)miR-126,雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)明確miR-126與靶基因SPRED1相結(jié)合（p<0.05）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明miR-126能通過(guò)結(jié)合SPRED1基因3’UTR影響其熒光活性改變。用Western-Blot實(shí)驗(yàn)方法,驗(yàn)證與SPRED1因子相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路蛋白,miR-126 mimics 其靶基因 SPRED1 表達(dá)量下調(diào),增強(qiáng)了 VEGF,FGF-1,Ras-p21,MAPK-p38蛋白水平依次增加為1.67倍,1.93倍,1.76倍和1.86倍,加入miR-126 Inhibitor后,miR-126 inhibitor組的SPRED1蛋白水平是Cell組的1.51倍,同時(shí)受到負(fù)調(diào)控因子的SPRED1的調(diào)控,VEGF,FGF-1,Ras-p21及MAPK-p38的蛋白水平依次減少為0.54,0.64,0.59和0.63,實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-126有利于促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)。將miR-126 mimic及inhibitor的小分子轉(zhuǎn)染HCAEC,結(jié)果表明,miR-126 mimic導(dǎo)致HCAEC細(xì)胞活力上調(diào),細(xì)胞周期發(fā)生變化,處在G2期的細(xì)胞比例顯著增高,而處在S期的細(xì)胞比例顯著降低（p<0.05）。而轉(zhuǎn)染miR-126 inhibitor后HCAEC的反應(yīng)則相反。其細(xì)胞活力顯著下降,G2期細(xì)胞比例顯著降低,而S期細(xì)胞比例無(wú)變化（p<0.05）。表明KD患兒miR-126的確能夠?qū)CAEC起積極作用,通過(guò)治療后KD患兒血液內(nèi)miR-126表達(dá)量上升,病情好轉(zhuǎn)。本研究結(jié)果證實(shí)miR-126在KD合并冠狀動(dòng)脈病變的通過(guò)關(guān)鍵靶基因SPRED1的調(diào)控血管生成因子VEGF,FGF-1作用的分子機(jī)制。3.IVIG治療時(shí)間對(duì)KD冠狀動(dòng)脈病變結(jié)局的影響。研究3年時(shí)間符合入選標(biāo)準(zhǔn)并隨訪12月1281例KD患兒。ROC曲線顯示IVIG治療時(shí)間預(yù)測(cè)KD冠狀動(dòng)脈病變的最佳天數(shù)為7.5天,ROC曲線下面積為0.80（95%CI=0.76-0.84,p<0.001）。本研究中816例（56.9%）為男性,465例為女性患兒（43.1%）?；純褐形荒挲g為12個(gè)月（11-36個(gè)月）,141例（11%）為IVIG無(wú)反應(yīng)KD患者?；純航邮躀VIG治療的中位數(shù)時(shí)間為6天,診斷時(shí)339例（26.5%）有CALs,94 例（7.3%）有 CAAs。隨訪 12 個(gè)月,39 例（3.0%）仍存在 CALs,23 例（1.8%）持續(xù)存在CAAs。根據(jù)IVIG治療時(shí)間將所有病人分為4組:第1組為發(fā)病第4天內(nèi)接受IVIG治療,第2組為發(fā)病第5-7天內(nèi)接受IVIG治療,第3組為發(fā)病第8-10天內(nèi)接受IVIG治療,第4組為發(fā)病后10天以后接受IVIG治療。第1組77例、第2組817例、第3組249例和第4組138例。第4組IVIG無(wú)反應(yīng)率高于其他3組,差異有顯著性（p=0.001）。入院診斷KD時(shí),心臟彩超CALs在第1至4組分別 14.1%,19.5%,35.3%和 58.7%;CAAs 在第 1 至 4 組分別 2.6%,3.5%,8.4%和30.4%。隨訪12個(gè)月,第3、4組CALs和CAAs發(fā)生率均高于第1、2組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001）。CALs和CAAs在第1、2組構(gòu)成比不同,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第2組與第3組相比,兩組之間比較存在差異并統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）,1 月時(shí) KD 患 CALs 及 CAAs 相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分別為 OR 2.1（95%CI 1.4-3.0）,OR 3.9（95%CI 1.9-8.2）,12個(gè)月時(shí)KD患CALs及CAAs相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分別為OR 5.3（95%CI 2.0-13.9）,OR 13.5（95%CI 2.9-14.1）。根據(jù)12月隨訪結(jié)果影響KD合并CALs多因素logistic回歸分析,將患兒的年齡、性別、發(fā)熱持續(xù)天數(shù)、IVIG使用病程天數(shù)、IVIG無(wú)反應(yīng)、白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞百分比以及C-反應(yīng)蛋白8個(gè)因素做單因素分析,篩選有意義自變量進(jìn)行多因素logistic回歸分析,結(jié)果顯示IVIG使用病程天數(shù)、丙球無(wú)反應(yīng)與是KD合并CALs獨(dú)立危險(xiǎn)因素（p<0.001）。結(jié)論1.血小板活化通路核心基因位點(diǎn)ITGA2 C807T（rs1126643）基因多態(tài)性改變可能與中國(guó)人群的KD發(fā)病以及KD合并冠狀動(dòng)脈病變遺傳易感性有關(guān),此結(jié)果尚需要更大規(guī)模前瞻性研究進(jìn)一步驗(yàn)證。2.差異表達(dá)的miR-126在KD治療前表達(dá)明顯下降,IVIG治療后明顯升高,通過(guò)直接下調(diào)控靶基因SPRED1,導(dǎo)致VEGF,FGF-1,Ras-p21及MAPK-p38的表達(dá)量增加,從而促進(jìn)血管生成的活化。提示miR-126及其靶基因SPRED1可能與KD冠狀動(dòng)脈病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程有關(guān),可能成為KD合并冠狀動(dòng)脈病變潛在的早期診斷標(biāo)志物和治療新靶點(diǎn)。3.本研究表明IVIG治療在KD病程7天內(nèi)可更好有效預(yù)防冠狀動(dòng)脈病變。IVIG治療在病程4天內(nèi)并不會(huì)增加冠狀動(dòng)脈病變發(fā)生率和IVIG無(wú)反應(yīng)的發(fā)生率。IVIG使用天數(shù)、IVIG無(wú)反應(yīng)是KD合并CALs高危因素,因此建議大劑量IVIG對(duì)急性期KD治療越早越好。
賈林·阿布扎力汗[7]（2021）在《APLP2基因變異體參與膽固醇代謝的分子機(jī)制及功能研究》文中指出目的:本研究旨在尋找淀粉樣肽前體樣蛋白2（APLP2）調(diào)控相關(guān)基因及新的變異位點(diǎn),從基因/蛋白/環(huán)境多層次水平上研究其參與調(diào)控膽固醇代謝的機(jī)制與功能,為以他汀類藥物為基礎(chǔ)的高脂血癥的治療、降低心腦血管疾病的患病率和死亡率提供理論依據(jù)及新的治療策略。1)采用極端表型策略結(jié)合二代測(cè)序技術(shù)在新疆地區(qū)人群中檢測(cè)APLP2基因非同義突變位點(diǎn),使用Methyltarget高通量測(cè)序法檢測(cè)APLP2基因甲基化水平。2)探討淀粉樣肽前體樣蛋白2（APLP2）新的變異體參與膽固醇代謝過(guò)程中的分子機(jī)制。3)探討APLP2基因單核苷酸多態(tài)性（SNP）與新疆人群中血脂異常發(fā)生率間的關(guān)聯(lián)性。方法:1)采用極端表型策略,選取新疆地區(qū)維吾爾族和哈薩克族共60例研究對(duì)象,分析APLP2基因與血脂譜的關(guān)聯(lián)性。采用病例對(duì)照的研究方法,分析APLP2基因在冠心病組和對(duì)照組中的甲基化水平。2)在細(xì)胞水平上,構(gòu)建APLP2基因新變異體的真核過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,采用蛋白質(zhì)免疫印跡、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫沉淀、免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)手段研究APLP2蛋白表達(dá)、穩(wěn)定性、降解等本身特點(diǎn)及對(duì)靶蛋白Apo E/LRP1、PCSK9/LDLR的影響,探究APLP2參與調(diào)控膽固醇代謝的機(jī)制和功能。3)選擇新疆地區(qū)漢族、維吾爾族及哈薩克族年齡≥35歲的人群1738例,利用Taqman技術(shù)對(duì)APLP2基因標(biāo)簽SNPs進(jìn)行擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證,闡述與血脂代謝的相關(guān)性。結(jié)果:1)本研究中入選的60例血脂極高和極低人群進(jìn)行APLP2基因全外顯子組測(cè)序,共發(fā)現(xiàn)11個(gè)新的未曾報(bào)道的非同義變異體（Q194E、G42E、G295S、M323I、D329N、S447N、R468C、H534Q、V535M、D573Y及P601A）,其中Q194E、G42E、M323I、S447N、R468C、及P601A非同義變異體出現(xiàn)在LDL-C極高組人群中,其余的均出現(xiàn)在LDL-C極低組人群中。冠心病患者中APLP2基因甲基化水平明顯高于健康對(duì)照組研究對(duì)象。2)在細(xì)胞水平上進(jìn)行機(jī)制研究結(jié)果顯示:與野生型APLP2相比,APLP2 G42E變異體的蛋白表達(dá)水平明顯減少,APLP2 Q194E變異體的蛋白表達(dá)水平明顯增加,然而在mRNA水平上的表達(dá)與野生型無(wú)明顯差異。APLP2 G42E突變體的半衰期相對(duì)較短,降解速度較快,APLP2 Q194E突變體的半衰期相對(duì)較長(zhǎng),降解相對(duì)緩慢。野生型APLP2能夠與ApoE相互作用,與野生型相比,APLP2 G42E和APLP2 Q194E與ApoE的結(jié)合沒(méi)有顯著區(qū)別。APLP2野生型與LDLR有相互作用,并且是劑量依賴性增加。與野生型相比,APLP2 G42E和APLP2Q194E與PCSK9介導(dǎo)LDLR的降解實(shí)驗(yàn)無(wú)明顯結(jié)果差異。3)APLP2基因rs2054247多態(tài)性位點(diǎn)與血清總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平相關(guān)（P<0.05）。APLP2基因rs2054247位點(diǎn)多態(tài)性與血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）相關(guān)（P<0.05）。然而,rs2054247位多態(tài)性與血清甘油三酯（TG）水平無(wú)關(guān)（P>0.05）。APLP2基因rs3740881多態(tài)性位點(diǎn)與血清TC、LDL-C、HDL-C和TG水平均無(wú)關(guān)（P>0.05）。APLP2 rs747180多態(tài)性位點(diǎn)只與TC、LDL-C水平相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論:1)本研中在新疆地區(qū)哈薩克族和維吾爾族人群中共篩選出APLP2基因11個(gè)非同義突變位點(diǎn),新疆地區(qū)人群冠心病患者中APLP2基因甲基化水平較健康對(duì)照組高。2)對(duì)APLP2基因新變異體G42E和Q194E在細(xì)胞水平上進(jìn)行機(jī)制研究后發(fā)現(xiàn)G42E和Q194E變異體不影響膽固醇水平。同時(shí),該兩個(gè)變異體不影響與ApoE/LRP1結(jié)合,也不影響PCSK9介導(dǎo)LDLR的降解。3)APLP2基因rs2054247和rs747180位點(diǎn)多態(tài)性在新疆人群中可能與高TC和高LDL-C水平相關(guān)。ApoE基因rs429358多態(tài)性位點(diǎn)在新疆維吾爾族人群中可能與冠心病的發(fā)病相關(guān)。
胡乃文[8]（2020）在《TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究》文中認(rèn)為第一部分中國(guó)漢族人群TNF和GRN基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究研究背景脊柱關(guān)節(jié)炎（spondyloarthritis,SpA）是一組具有共同臨床特點(diǎn)和遺傳學(xué)特征的慢性炎癥性疾病。強(qiáng)直性脊柱炎（Ankylosingspondylitis,AS）是SpA最常見(jiàn)的表現(xiàn)形式。家族聚集性是AS的重要特征。人類白細(xì)胞抗原（humanleukocyte antigen,HLA）-B27是迄今為止所發(fā)現(xiàn)與AS關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)的基因。但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因在AS發(fā)病中亦具有重要作用。因此,為進(jìn)一步明確AS的病因及發(fā)病機(jī)制,有必要探討非HLA-B27基因在AS發(fā)病中的作用。單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymophisms,SNP）,是指單個(gè)核苷酸在基因組水平上發(fā)生變異所導(dǎo)致的DNA序列多態(tài)性。由于SNP廣泛存在于各人群的基因組中,且易于分型,目前業(yè)已成為現(xiàn)代遺傳變異與復(fù)雜性狀研究中的最重要研究對(duì)象。腫瘤壞死因子（tumornecrosis factor,TNF）基因,位于6p21.33,是一種非HLA的MHC基因。該基因編碼一種屬于腫瘤壞死因子超家族的、主要由巨噬細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子。它可以與TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR受體結(jié)合,從而發(fā)揮作用。TNF與包括自身免疫病在內(nèi)的多種疾病有關(guān)。近來(lái)的研究表明TNF在AS發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。關(guān)于TNF是脊柱關(guān)節(jié)炎的關(guān)鍵細(xì)胞因子的最有力證據(jù)是,在臨床中使用TNF抑制劑可以有效改善脊柱關(guān)節(jié)炎（包括強(qiáng)直性脊柱炎）患者的癥狀和體征。從組織水平上,TNF抑制劑可以引起一系列的組織學(xué)改善,包括減少中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的炎性浸潤(rùn)、減少新骨形成等。既往已有諸多關(guān)于TNF基因的SNP與AS相關(guān)性的研究,但是存在爭(zhēng)議。因此,有必要進(jìn)一步研究TNF的SNP與AS的關(guān)系。GRN基因即顆粒蛋白前體（granulin precursor,PGRN）基因,位于17q21.31,其功能為編碼顆粒蛋白（granulin,GRN）前體。這種信號(hào)肽切割后產(chǎn)生成熟的顆粒蛋白,可以進(jìn)一步裂解成6kDa的各種活性肽。這些肽和完整的顆粒蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)。然而,顆粒蛋白家族的不同成員可以作為抑制劑、激動(dòng)劑或?qū)?xì)胞生長(zhǎng)具有雙向調(diào)節(jié)作用。近年來(lái),顆粒蛋白被認(rèn)為與許多自身免疫性疾病有關(guān)。有研究提示顆粒蛋白前體是炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,其抗炎作用可能是通過(guò)阻斷TNF與其受體的結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)。還有研究發(fā)現(xiàn)PGRN抗體陽(yáng)性的銀屑病關(guān)節(jié)炎（PsA）患者,發(fā)生肌腱附著點(diǎn)炎和指（趾）炎的幾率較高。AS和PsA均屬于血清陰性脊柱炎（SpA）,因此同時(shí)研究TNF和GRN基因多態(tài)性是否與AS相關(guān)具有重要意義?；谝陨嫌^點(diǎn),為探討TNF和GRN基因在AS發(fā)病機(jī)制中的潛在作用,我們選擇了 TNF和GRN基因的多個(gè)SNP位點(diǎn),為AS的易感基因評(píng)估提供依據(jù)。研究目的探討TNF、GRN基因單核苷酸多態(tài)性與我國(guó)山東地區(qū)漢族人群強(qiáng)直性脊柱炎（AS）的關(guān)聯(lián)性。研究方法1.研究對(duì)象病例組選取861例AS患者,均屬于中國(guó)山東地區(qū)漢族人群,為2014年1月至2015年12月在山東大學(xué)附屬山東省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診或病房的符合1984年修訂的紐約AS分類標(biāo)準(zhǔn)的患者。記錄患者的癥狀、體征、受累關(guān)節(jié)、家族史;采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定HLA-B27;所有患者均完成骶髂關(guān)節(jié)X線檢查,由影像科專業(yè)醫(yī)師按骶髂關(guān)節(jié)的國(guó)際統(tǒng)一分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。所有患者均需排除其他自身免疫性疾病。正常對(duì)照組864例均來(lái)自于本研究中心體檢中心健康中國(guó)山東漢族人群,已排除腫瘤、其他結(jié)締組織病、傳染病等疾病,年齡、性別均與AS組匹配。所有入選者均在知情同意后入組。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1 標(biāo)本收集用EDTA抗凝管采集AS患者和對(duì)照組人群空腹外周靜脈血2ml,放置冰箱中在-80℃條件下保存,備檢。2.2 基因組DNA提取使用基因組DNA提取試劑盒,按照說(shuō)明書操作步驟提取病例組和對(duì)照組DNA。2.3 DNA濃度和純度測(cè)定向DNA樣本2ul中加入三蒸水48ul,將濃度稀釋至1/25,用紫外分光光度儀測(cè)量OD260/OD280比值以及DNA濃度,并分析DNA純度。2.4 多態(tài)性位點(diǎn)的選擇根據(jù)dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)獲取TNF、GRN基因的SNPs資料,各個(gè)SNP位點(diǎn)的分布頻率由HaploView軟件來(lái)確定,同時(shí)應(yīng)用Tagger功能篩選TagSNP。初步篩選需滿足次要等位基因頻率>5%及連鎖不平衡系數(shù)r2>0.8。根據(jù)篩選結(jié)果,最終確定 TNF 基因的 rs361525、rs1799964、rs1800629、rs1800630、rs769178和GRN基因的 rs850713、rs3785817、rs3760365、rs4792939、rs25646、rs5848作為研究位點(diǎn)。2.5 基因分型使用Taqman探針Real-time PCR方法按照步驟進(jìn)行基因分型。2.6 檢測(cè)結(jié)果分析應(yīng)用SDS軟件（Applied Biosystem,2.0 version）進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和處理TaqMan-PCR擴(kuò)增后的FAM和VIC熒光信號(hào)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析3.1 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)使用 SHEsis 軟件進(jìn)行 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)。3.2病例組與對(duì)照組基因型和等位基因頻率的統(tǒng)計(jì)分析 用SPSS24.0軟件通過(guò)卡方檢驗(yàn)對(duì)各個(gè)等位基因、基因型和單倍型進(jìn)行分析。使用SHEsis程序計(jì)算單倍型頻率、優(yōu)勢(shì)比及95%可信區(qū)間。3.3患者臨床表現(xiàn)/實(shí)驗(yàn)室結(jié)果與基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析將收集的相關(guān)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS24.0軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.4連鎖不平衡及單倍體型分析各個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)之間的連鎖不平衡及單倍體型的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析分別由HaploView2.0及SHEsis軟件來(lái)完成。4.SNP位點(diǎn)的生物信息學(xué)功能分析使用GTEx,Haploreg和Regulome DB數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì) TNF 基因的 rs1799964,rs1800629,rs1800630,rs769178 功能進(jìn)行注釋。研究結(jié)果1.基本信息共對(duì)861例AS病人及864例正常健康對(duì)照進(jìn)行了基因分型。AS病人中,男性患者634例,女性患者227例,年齡15-71歲,平均年齡30.56±10.98歲。正常對(duì)照組,男性619例,女性245例,年齡14-73歲,平均年齡31.97±11.23歲。所有研究對(duì)象均屬山東漢族人群。病例組與對(duì)照組在年齡、性別上無(wú)顯著性差異（p>0.05）。2.Hardy-We i nberg 平衡檢驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)所有SNPs的p值>0.05,均符合Hardy-Weinberg平衡定律,提示所有研究的SNP位點(diǎn)基因型和吻合基因的觀察值和期望值吻合良好。3.TNF基因型頻率和等位基因頻率在AS及正常人的分布3.1有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的位點(diǎn)對(duì)于rs1799964位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001;OR=0.60,95%CI=0.50-0.71）,提示 C 等位基因是 AS 的保護(hù)性基因。對(duì)于rs1800629位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.0004）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p=0.0001;OR=0.60,95%CI=0.39-0.74）,提示A等位基因是AS的保護(hù)性基因。對(duì)于rs1800630位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001,95%CI=0.48-0.72）,提示A等位基因是AS的保護(hù)性基因。對(duì)于rs769178位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.0001,95%CI=2.18-3.09）,提示T等位基因是AS的危險(xiǎn)性基因。3.2無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的位點(diǎn)對(duì)于rs361525位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型和等位基因頻率無(wú)顯著性差異。4.GRN基因型頻率和等位基因頻率在AS及正常人的分布對(duì)于 rs850713、rs3785817、rs3760365、rs4792939、rs25646、rs5848 位點(diǎn),AS組與對(duì)照組基因型和等位基因頻率均無(wú)顯著性差異。提示GRN基因多態(tài)性與AS易感性無(wú)關(guān)。5.對(duì)TNF等位基因頻率分布具有顯著性差異位點(diǎn)的基因型遺傳模式分析對(duì)于rs1799964位點(diǎn),在顯性遺傳模式下,CC基因型和CT基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模式下,CC基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于rs1800629位點(diǎn),在顯性遺傳模式,AA基因型和AG基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模式下,AA基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于rs1800630位點(diǎn),在顯性遺傳模式下,AA基因型和AC基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模式下,AA基因型可降低AS的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于rs769178位點(diǎn),在顯性遺傳模式下,TT基因型和GT基因型可增加AS的風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模式下,TT基因型可增加AS的風(fēng)險(xiǎn)。6.TNF基因多態(tài)性與AS患者臨床/實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析rs1799964、rs1800629、rs1800630、rs769178 在顯性和隱性遺傳模式下的基因型與AS患者的性別、年齡、病程、家族史、HLA-B27陽(yáng)性、外周關(guān)節(jié)受累、葡萄膜炎均無(wú)明顯關(guān)聯(lián)性。7.連鎖不平衡及單倍型分析統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示,TNF及GRN基因的各研究位點(diǎn)之間存在弱的連鎖不平衡。TNF基因5個(gè)研究位點(diǎn)的CGAGG、CGCAG、TACGG、TGCGG、TGCGT單倍型以及GRN基因6個(gè)研究位點(diǎn)的CTGACA單倍型在AS組與正常對(duì)照組之間比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8.TNF基因生物信息學(xué)分析在 GTEx 數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì) TNF 基因的 rs1800629、rs1800630、rs769178 和rs1799964位點(diǎn)進(jìn)行eQTL分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)上述SNPs可影響多個(gè)基因的表達(dá)量,且在GSE25101數(shù)據(jù)集中顯示,上述部分基因在AS患者中亦具有差異表達(dá),提示rs1800629、rs1800630、rs769178 和 rs1799964 的 SNPs 可能通過(guò)調(diào)控其他基因的表達(dá)量從而在強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮生物學(xué)功能。結(jié)論1.我們?cè)趪?guó)內(nèi)外首次確認(rèn)了 TNF基因位點(diǎn)rs769178多態(tài)性與AS易感性相關(guān);驗(yàn)證了 rs1800629、rs1800630、rs769178 和 rs1799964 在 AS 組與對(duì)照組等位基因頻率及基因型差異顯著,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TNF基因多態(tài)性與山東地區(qū)漢族人群AS易感性相關(guān),eQTL分析顯示其可能通過(guò)影響某些基因的表達(dá)量影響AS的易感性。目前未發(fā)現(xiàn)其與AS的臨床表現(xiàn)具有顯著相關(guān)性。2.GRN基因多態(tài)性與山東地區(qū)漢族人群的AS易感性無(wú)關(guān),但是SNP基因型頻率在不同種族、不同地區(qū)的分布存在明顯差異,故需要更收集不同地區(qū)、不同人群的更多資料,來(lái)進(jìn)一步研究GRN基因與AS是否存在關(guān)聯(lián)性。第二部分ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎易感性關(guān)系的Meta分析研究背景強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）是一種以累及中軸和外周關(guān)節(jié)、韌帶和肌腱附著點(diǎn)為主要特征的慢性、全身性、炎癥性疾病。AS具有高度遺傳性,人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-B27基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的和AS關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)的基因。但近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因在AS發(fā)病中也具有重要作用,研究其在AS發(fā)病中所起作用對(duì)進(jìn)一步明晰AS的病因及發(fā)病機(jī)制具有重要意義。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶（endoplasmic reticulum aminopeptidase,ERAP）1基因在AS風(fēng)險(xiǎn)中也起重要作用。許多病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)ERAP1的基因多態(tài)性與AS相關(guān),但研究結(jié)果不盡一致。結(jié)果不一致的原因之一可能與人群差異有關(guān)。Meta分析是一種總結(jié)許多研究結(jié)果的有效的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。既往已有多篇相關(guān)的Meta分析,但是既往研究所選擇的數(shù)據(jù)庫(kù)、研究人群不盡一致,且近2年多來(lái)又有多篇新的關(guān)于ERAP1基因多態(tài)性與AS關(guān)系的文章數(shù)據(jù)。故在本研究中,我們結(jié)合全基因組關(guān)聯(lián)研究（genomewide association studies,GWAS）和病例對(duì)照研究進(jìn)行 Meta 分析,以探討ERAP1是否與總體人群和不同種族亞群的AS易感性相關(guān)。研究目的通過(guò)Meta分析,確定ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性是否與總體人群和不同種族亞群AS易感性之間的關(guān)系。研究方法1.一般資料主題詞采用“ankylosing spondylitis”、“ERAP1”和“polymorphism”,檢索Pubmed、Embase和Cochrane數(shù)據(jù)庫(kù),同時(shí)檢索相關(guān)自由詞。語(yǔ)種設(shè)置為英語(yǔ)。2.篩選方法按照提前制定好的文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)與剔除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)。每項(xiàng)研究均摘錄以下信息:第一作者,發(fā)表年份,研究人群的國(guó)家和種族,病例組和對(duì)照組的數(shù)量,ERAP1多態(tài)性的等位基因數(shù)量。采用Newcastle-Ottawascale（NOS）文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)量表評(píng)價(jià)納入的研究的質(zhì)量。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用Review Manager 5.3進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用OR值及其95%可信區(qū)間來(lái)作為效應(yīng)指標(biāo),進(jìn)行總體人群和按照種族劃分的人群亞組分析。使用I2來(lái)對(duì)異質(zhì)性進(jìn)行定量分析。對(duì)于存在明顯異質(zhì)性的數(shù)據(jù),再進(jìn)行敏感性分析。采用漏斗圖來(lái)分析發(fā)表偏倚。研究結(jié)果1.文獻(xiàn)檢索結(jié)果初步文獻(xiàn)檢索Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)92篇,Embase數(shù)據(jù)庫(kù)21篇,Cochrane數(shù)據(jù)庫(kù)2篇,總計(jì)105篇。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過(guò)仔細(xì)閱讀文獻(xiàn)題目、摘要和全文,最終納入文獻(xiàn)31篇?？偣舶?6291名AS患者和45779名健康人對(duì)照。2.Meta分析結(jié)果對(duì) rs27044,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27980,rs27037,rs27434,rs26653,rs1065407,rs27529,rs27582,rs469876,rs7711564,rs27038,rs3734016,rs11209032,rs26618,rs27895,rs17481856,rs13167972等共21個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行Meta分析,并按照地域和人種進(jìn)行亞組分析。結(jié)果顯示,rs27434的A等位基因在總體人群和高加索人群、中東人群、東亞人群中均為AS的危險(xiǎn)因素;rs27980、rs27582、rs469876、rs27038、rs11209032、rs26618、rs27895、rs17481856 SNP在總體人群中和各亞組人群中均與AS無(wú)明顯相關(guān)性;其余12個(gè)位點(diǎn)在總體人群和各亞組人群中與AS的相關(guān)性各有不同。在總體人群中,rs27434,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27037,rs26653,rs7711564和rs13167972 SNP與AS的易感性相關(guān)。在高加索人群中,rs27044,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27037,rs27434,rs26653,rs1065407,rs13167972 SNP與AS的易感性相關(guān)。在中東人群中,rs27044,rs27434,rs26653 SNP 與 AS 相關(guān)。在東亞人群中,rs30187,rs27037,rs27434,rs27529,rs7711564 SNP 與 AS 易感性相關(guān)。結(jié)論對(duì)目前已發(fā)表的有關(guān)ERAP1基因SNP與AS易感性關(guān)系的研究進(jìn)行Meta分析表明,ERAP1基因的單核苷酸多態(tài)性與總體人群、高加索人群、中東人群和東亞人群的AS易感性有關(guān),具體每個(gè)位點(diǎn)對(duì)AS易感性的影響大小在不同種族之間存在差異。對(duì)rs27434的功能注釋提示,其可能通過(guò)影響ERAP1的表達(dá)以及間接影響TNF的作用從而對(duì)AS易感性產(chǎn)生影響,但尚需進(jìn)一步研究以明確。下一步還需進(jìn)一步的種族特異性關(guān)聯(lián)研究來(lái)確定不同人群ERAP1的SNP與AS易感性的遺傳關(guān)系。
涂國(guó)勝[9]（2020）在《內(nèi)皮素-1基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/delA位點(diǎn)的多態(tài)性與江西部分漢族人群早發(fā)冠心病患者相關(guān)性研究及機(jī)制探討》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理第一部分內(nèi)皮素-1基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/del A多態(tài)性與江西部分漢族人群早發(fā)冠心病的相關(guān)性研究研究背景:人類內(nèi)皮素-1（ET-1）基因多態(tài)性與冠心?。–AD）密切相關(guān)。本研究旨在探討江西漢族人群中ET-1基因的兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)（+138 I/D和Lys198Asn）與早發(fā)冠心病（EOCAD）的關(guān)系,為地區(qū)人群CAD的早期診斷和預(yù)防提供一些新的思路。方法:通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及基因測(cè)序法對(duì)88例EOCAD患者（男性≤55歲;女性≤60歲）和52例對(duì)照組的兩個(gè)SNPs位點(diǎn)（+138 I/D和Lys198Asn）進(jìn)行基因分型。同時(shí)行空腹抽血后檢測(cè)血脂、血糖及肝腎功能,收集受試對(duì)象血壓、身高、體重、吸煙等資料。用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:（1）兩組患者中,除性別及年齡無(wú)差別外,EOCAD組患者的血脂、空腹血糖、血壓、體重指數(shù)及吸煙人群等均明顯高于對(duì)照組,兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;（2）ET-1基因+138I/D和Lys198Asn的多態(tài)性檢測(cè)符合Hardy-Weinberg平衡（p>0.05）,表明所選取的受試對(duì)象來(lái)自一個(gè)較大的、處于隨機(jī)分配平衡狀態(tài)的群體,具有一定代表性;（3）EOCAD患者中,Lys198Asn位點(diǎn)的純合子G/G、T/T及雜合子G/T的基因型頻率分別為76.1%、2.3%及21.6%,T等位基因頻率為12.1%,對(duì)照組分別為92.3%、0%、7.7%及3.9%;（4）Fisher精確檢驗(yàn)表明,ET-1基因Lys198Asn的T等位基因（OR=3.38,P=0.02）和GT/TT基因型（OR=3.76,P=0.02）與EOCAD風(fēng)險(xiǎn)增加有明確的相關(guān)性,而+138I/D位點(diǎn)無(wú)論在基因型頻率還是等位基因頻率在兩組之間均為無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;（5）在EOCAD組內(nèi),多數(shù)CAD的高危因素與ET-1基因+138I/D和Lys198Asn的多態(tài)性關(guān)系不明顯;但吸煙患者中,攜帶有T等位基因的基因型的比例明顯高于攜帶G/G純合子,多元logistic回歸分析表明,吸煙是與EOCAD相關(guān)的唯一獨(dú)立變量（P<0.05）結(jié)論:Lys198Asn位點(diǎn)中Asn等位基因頻率與江西漢族人群中EOCAD的發(fā)病顯著相關(guān);吸煙能顯著增加攜帶Asn等位基因的江西漢族人群發(fā)生EOCAD的風(fēng)險(xiǎn);+138 I/D位點(diǎn)中的不同等位基因頻率與江西漢族人群EOCAD的發(fā)病無(wú)顯著相關(guān)性。第二部分Lys198Asn位點(diǎn)的Asn等位基因顯著增加江西漢族人群早發(fā)冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的機(jī)制探討研究背景:Lys198Asn位點(diǎn)中的Asn等位基因頻率與江西漢族人群EOCAD發(fā)病有關(guān);為探討其可能機(jī)制,我們通過(guò)構(gòu)建體外表達(dá)載體分別過(guò)表達(dá)不同等位基因,明確Lys198Asn多態(tài)性對(duì)ET-1蛋白表達(dá)的影響。方法:根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分別提取含Lys和Asn等位基因的DNA片段,再通過(guò)分子克隆技術(shù)與含有Flag標(biāo)簽的p GL3.0-Basic質(zhì)粒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒;以脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞24小時(shí),同時(shí)以空載質(zhì)粒作為對(duì)照;加用不同濃度的TNF-α、IL-6和LPS與轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后的HEK293T細(xì)胞共同孵育24小時(shí);應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞中ET-1蛋白含量;用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞后無(wú)外源ET-1蛋白表達(dá),而重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后則有較高的外源ET-1蛋白表達(dá);無(wú)外源刺激時(shí),Lys198和Asn198質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組中的ET-1蛋白含量無(wú)明顯差異;在兩種濃度（10ng/m L和20ng/m L）的TNF-α或IL-6刺激下,Asn198質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組中的蛋白含量明顯高于Lys198質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;在兩種濃度的LPS刺激下,兩組蛋白含量均升高,但兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:ET-1基因中的rs5370位點(diǎn)的Asn等位基因較Lys等位基因能顯著促進(jìn)TNF-α和IL-6刺激下的ET-1蛋白表達(dá);ET-1基因中的rs5370位點(diǎn)的多態(tài)性不會(huì)影響LPS刺激下的ET-1蛋白表達(dá)含量;ET-1基因中的rs5370位點(diǎn)不同等位基因可能通過(guò)影響特定炎癥因子刺激誘導(dǎo)下ET-1蛋白表達(dá)量的不同,從而導(dǎo)致江西漢族人群早發(fā)CAD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在明顯差異。
梁立婷[10]（2020）在《IL-22基因多態(tài)性及其血清水平與廣西黑衣壯兒童哮喘的相關(guān)性研究》文中認(rèn)為目的:探討廣西黑衣壯人群IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性分布情況,并與不同民族、種族人群比較基因型頻率和等位基因頻率分布差異。方法:臨床收集115例廣西黑衣壯健康兒童作為研究對(duì)象,運(yùn)用SNa Pshot法對(duì)IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513四個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型,通過(guò)Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)研究樣本的群體代表性,最后采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),計(jì)數(shù)資料用頻率和構(gòu)成比表示,采用卡方檢驗(yàn)或fisher確切概率法比較廣西黑衣壯健康兒童不同性別單核苷酸多態(tài)性分布差異及與其他民族、種族人群比較基因型和等位基因頻率分布差異。結(jié)果:（1）廣西黑衣壯健康兒童IL-22基因rs1179251位點(diǎn)檢測(cè)到CC、CG、GG基因型,分布頻率分別為:46.1%、46.1%、7.8%。rs1179251基因型和等位基因與千人基因組計(jì)劃（1000 Genomes）數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的非洲尼日利亞人群和歐洲人群比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但與北京漢族人群、日本人群相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）rs2227485位點(diǎn)檢測(cè)到AA、AG、GG基因型,分布頻率分別為:24.3%、57.4%、18.3%。rs2227485位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率與1000 Genomes數(shù)據(jù)庫(kù)中的日本人群比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但與北京漢族人群、非洲尼日利亞人群及歐洲人群比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）rs2227484位點(diǎn)檢測(cè)到AA、AG、GG基因型,分布頻率分別為:0.9%、18.3%、80.8%。rs2227484位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率與非洲尼日利亞人群和歐洲人群比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但與北京漢族人群、日本人群相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（4）rs2227513位點(diǎn)檢測(cè)到CT和TT兩種基因型,分布頻率分別為:7.8%、92.2%。rs2227513位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率與非洲尼日利亞人群和歐洲人群比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與北京漢族人群比較,基因型分布頻率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,但等位基因分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與日本人群比較,基因型及等位基因分布頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（5）廣西黑衣壯兒童IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性在男女性別分布間比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論:廣西黑衣壯兒童IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性與其他民族、種族人群比較存在不同程度的差異。目的:研究廣西黑衣壯兒童IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性與支氣管哮喘的相關(guān)性,探討IL-22血清水平與支氣管哮喘的關(guān)系。方法:臨床收集121例廣西黑衣壯兒童支氣管哮喘患者和115例對(duì)照者作為本次研究的對(duì)象,運(yùn)用單堿基延伸（SNa Pshot）法對(duì)IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行基因分型,使用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律測(cè)試群體代表性,利用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料用頻率和構(gòu)成比表示,通過(guò)logistic回歸分析基因多態(tài)性與哮喘遺傳易感性關(guān)聯(lián)程度。血清IL-22的表達(dá)水平用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的方法（enzyme-linked immunosorben assay,ELISA）檢測(cè),計(jì)量資料用均值和標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示,均值間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P<0.05則認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:（1）rs1179251位點(diǎn)基因型、等位基因、顯性模型（CG+GG vs CC）在哮喘組和健康組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR:0.493,95%CI:0.285-0.853,P=0.011;OR:0.659,95%CI:0.437-0.993,P=0.046,OR=0.524,95%CI:0.321-0.881,P=0.015）,校正年齡和性別后,差異均仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）rs2227485位點(diǎn)基因型、顯性模型在哮喘組和健康對(duì)照組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR:0.451,95%CI:0.249-0.815,P=0.008;AG+GG vs AA:OR=0.489,95%CI:0.279-0.857,P=0.012）,經(jīng)性別和年齡校正后,差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（3）rs2227513位點(diǎn)的基因型和等位基因分布頻率在哮喘組和健康對(duì)照組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=0.198,95%CI:0.042-0.937,P=0.041;OR=0.205,95%CI:0.044-0.957,P=0.044）,經(jīng)年齡和性別校正后,差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（4）IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513四個(gè)位點(diǎn)存在連鎖不平衡。（5）單倍型分析結(jié)果顯示:G-G-G-T單倍型在哮喘組和對(duì)照組間分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR:0.648,95%CI:0.426-0.985,P=0.041）。（6）哮喘組血清IL-22平均水平明顯高于健康組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。而哮喘組中rs1179251位點(diǎn)CC基因型患兒血清的IL-22平均水平與CG/GG基因型患兒比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.674）。結(jié)論:（1）IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227513位點(diǎn)多態(tài)性可能與廣西黑衣壯兒童哮喘易感性相關(guān),rs1179251位點(diǎn)（CG基因型、G等位基因和顯性模型）、rs2227485位點(diǎn)（AG基因型和顯性模型）和rs2227513位點(diǎn)（CT基因型和C等位基因）均可能具有降低哮喘的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。（2）IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513四個(gè)位點(diǎn)存在連鎖不平衡,G-G-G-T單倍型可能具有降低哮喘的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。（3）血清IL-22的表達(dá)水平升高可能與廣西黑衣壯兒童哮喘發(fā)病相關(guān)。
二、基質(zhì)衍生因子1等基因多態(tài)性在人群中的分布（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、基質(zhì)衍生因子1等基因多態(tài)性在人群中的分布（論文提綱范文）
（1）MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與NAFLD及H.pylori感染在CEA、CA19-9、CA72-4水平中的交互作用和利用ciMICs衍生的類器官模擬消化道腫瘤的發(fā)生（論文提綱范文）
| 英漢縮略詞語(yǔ)對(duì)照 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一部分 MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和非酒精性脂肪肝與消化道腫瘤標(biāo)志物的關(guān)系及交互作用 |
| 1 研究對(duì)象與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和幽門螺桿菌感染與消化道腫瘤標(biāo)志物之間的關(guān)系及交互作用 |
| 1 研究對(duì)象與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 MTHFR rs1801133基因多態(tài)性和幽門螺桿菌感染合并非酒精性脂肪肝與消化道腫瘤標(biāo)志物之間的關(guān)系及交互作用 |
| 1 研究對(duì)象與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四部分 利用條件永生化小鼠腸隱窩細(xì)胞(ciMICs)衍生的類器官模擬消化道腫瘤的發(fā)生 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 展望 |
| 文獻(xiàn)綜述 MTHFR基因多態(tài)性與常見(jiàn)消化道惡性腫瘤的關(guān)系 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（2）SDF-1α基因多態(tài)性與西北地區(qū)漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 資料與方法 |
| 一、一般資料 |
| 二、基因多態(tài)性檢測(cè) |
| 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 結(jié) 果 |
| 一、一般資料分析 |
| 二、SDF-1α G801A基因多態(tài)性與胃癌易感性 |
| 三、SDF-1α G801A與Hp感染 |
| 討 論 |
（3）基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2水平及基因多態(tài)性在急性腦梗死表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響（論文提綱范文）
| 附錄 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.1.1 TOAST分型 |
| 1.1.2 急性腦梗死組 |
| 1.1.3 對(duì)照組 |
| 1.1.4 知情同意書 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 一般資料的收集 |
| 1.2.2 危險(xiǎn)因素的定義 |
| 1.2.3 嚴(yán)重的心、腎、肺、肝臟定義 |
| 1.2.4 頸椎動(dòng)脈彩超檢查 |
| 1.2.5 頭頸部CTA檢查 |
| 1.2.6 頭頸部血管斑塊性質(zhì)判定 |
| 1.2.7 試驗(yàn)對(duì)象抽血 |
| 1.2.8 隨訪方案 |
| 1.2.9 儀器設(shè)備與試劑 |
| 1.2.10 血清MMP-1、MMP-2 的測(cè)定 |
| 1.2.11 基因多態(tài)性 |
| 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 2.1 哈迪-溫伯格平衡檢驗(yàn) |
| 2.2 腦梗死患者與對(duì)照組一般資料比較 |
| 2.3 腦梗死組和對(duì)照組患者4 個(gè)SNP的分布 |
| 2.4 腦梗死危險(xiǎn)因素logistic分析 |
| 2.5 入組病例基因交互作用GMDR模型 |
| 2.6、MMP-2 rs243865 與MMP-1 rs1799750 基因交互模型圖(圖 1) |
| 2.7、MMP-2 rs243865 與MMP-1 rs1799750 組合基因交互效應(yīng)Logistic回歸分析 |
| 2.8、腦梗死預(yù)后良好組與預(yù)后不良組在入院時(shí) NIHSS 評(píng)分及 mRS 評(píng)分比較 |
| 2.9 腦梗死90 天隨訪預(yù)后良好組和預(yù)后不良組患者入院時(shí)血清MMP-1和MMP-2 水平比較 |
| 2.10、 急性腦梗死患者血清 MMP-1 和 MMP-2 水平與治療 90 天后 mRS 得分的關(guān)系 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 金屬基質(zhì)蛋白酶 1、2 血清水平及其基因多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性研究 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（4）DPP4基因多態(tài)性與血脂及2型糖尿病合并冠心病的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文縮略詞表 |
| 一、引言 |
| 二、材料與方法 |
| 1.研究對(duì)象 |
| 1.1 入選及排除標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)分組 |
| 2.實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 3.研究方法 |
| 3.1 一般資料收集及生化指標(biāo)測(cè)定 |
| 3.2 外周血DNA提取 |
| 3.3 標(biāo)簽SNP選擇 |
| 3.4 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增目的片段 |
| 3.5 PCR產(chǎn)物檢驗(yàn) |
| 3.6 PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果 |
| 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 三、結(jié)果 |
| 1.兩組患者一般資料及生化指標(biāo)比較 |
| 2.DPP4 基因SNPs不同基因型及等位基因頻率分布 |
| 3.對(duì)照組DPP4 基因SNPS基因型與血脂水平關(guān)系 |
| 3.1 rs3788979 |
| 3.2 rs4664443 |
| 3.3 rs13015258 |
| 4.DPP4 基因SNPs與T2DM合并CAD易感性的關(guān)聯(lián)分析 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 六、參考文獻(xiàn) |
| 七、文獻(xiàn)綜述 DPP4基因組學(xué)與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 八、致謝 |
（5）中國(guó)高血壓患者醛固酮合成酶基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮寫 |
| 引言 |
| 第一部分 醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344C/T多態(tài)性與中國(guó)高血壓患者心腦血管事件的關(guān)系研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 醛固酮合成酶基因多態(tài)性與中國(guó)老年原發(fā)性高血壓患者左心室肥厚的相關(guān)性及與心血管事件和死亡關(guān)系的研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344C/T多態(tài)性與中國(guó)高血壓患者房顫關(guān)系研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四部分 醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344C/T多態(tài)性對(duì)中國(guó)高血壓患者使用血管緊張素受體拮抗劑影響的研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 結(jié)論 |
| 綜述 醛固酮合成酶（CYP11B2）基因多態(tài)性與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（6）整合素α2基因多態(tài)性及微小RNA作用于川崎病冠狀動(dòng)脈病變機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 整合素α2基因多態(tài)性與川崎病的相關(guān)性 |
| 一、引言 |
| 二、實(shí)驗(yàn)材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 |
| 2. 主要儀器 |
| 3. 主要試劑 |
| 4. 引物 |
| 5. 基因分型 |
| 6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 三、結(jié)果 |
| 1. 研究人群的一般資料 |
| 2. ITGA2基因多態(tài)性與川崎病的相關(guān)關(guān)系 |
| 3. ITGA2 C807T與川崎病冠狀動(dòng)脈病變的分層分析 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 第二章 Micro RNAs與川崎病冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)性 |
| 一、引言 |
| 二、研究對(duì)象、材料與方法 |
| 1. 研究對(duì)象 |
| 2. 研究主要儀器 |
| 3. 引物設(shè)計(jì) |
| 4. miRNAs檢測(cè) |
| 5. 細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn) |
| 6. Western-Blot實(shí)驗(yàn) |
| 7. miRNA預(yù)測(cè)靶基因 |
| 8. 構(gòu)建psi-CHECK2載體 |
| 9. 熒光素酶活性檢測(cè) |
| 10. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析 |
| 三、結(jié)果 |
| 1、篩選明顯差異表達(dá)的miRNA |
| 2、miR-126生物學(xué)功能 |
| 3. 差異miRNA的體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證 |
| 4、miR-126的靶向調(diào)節(jié)基因SPRED1功能鑒定 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 第三章 大劑量IVIG治療時(shí)機(jī)對(duì)川崎病預(yù)后的影響 |
| 一、引言 |
| 二、研究對(duì)象與方法 |
| 1. 研究對(duì)象 |
| 2. 研究方法 |
| 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 三、結(jié)果 |
| 1. 一般資料 |
| 2. IVIG治療時(shí)間對(duì)KD冠狀動(dòng)脈病變的影響 |
| 3. 影響KD合并冠狀動(dòng)脈病變危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析 |
| 四、討論 |
| 五、結(jié)論 |
| 全文總結(jié)及研究展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述: 川崎病與整合素基因多態(tài)性研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 主要縮略詞簡(jiǎn)表 |
| 成果 |
| 致謝 |
（7）APLP2基因變異體參與膽固醇代謝的分子機(jī)制及功能研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對(duì)照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 新疆地區(qū)人群膽固醇代謝相關(guān)基因APLP2 新突變位點(diǎn)的篩查及甲基化水平檢測(cè) |
| 1 研究?jī)?nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 試劑、耗材和儀器設(shè)備 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4 質(zhì)量控制 |
| 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 1.6 技術(shù)路線圖 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 APLP2 基因新變異體參與膽固醇代謝的分子機(jī)制及功能研究 |
| 1 研究?jī)?nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 試劑耗材及儀器設(shè)備 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4 技術(shù)路線圖 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 膽固醇代謝相關(guān)基因APLP2 與血脂異常的關(guān)聯(lián)性研究 |
| 1 研究?jī)?nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.3 質(zhì)量控制 |
| 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 1.5 技術(shù)路線圖 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 APLP2在膽固醇代謝中的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
| 新疆醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評(píng)閱表 |
（8）TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| English Abstract |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 第一部分 中國(guó)漢族人群TNF和GRN基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎易感性關(guān)系的Meta分析 |
| 前言 |
| 研究方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
| 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表 |
| 外文論文Ⅰ (已發(fā)表) |
| 外文論文Ⅱ |
（9）內(nèi)皮素-1基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/delA位點(diǎn)的多態(tài)性與江西部分漢族人群早發(fā)冠心病患者相關(guān)性研究及機(jī)制探討（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分:內(nèi)皮素-1 基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/delA多態(tài)性與江西漢族人群早發(fā)冠心病的相關(guān)性研究 |
| 前言 |
| 第1章 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.3 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 第2章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 第3章 討論 |
| 第4章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分:Lys198Asn位點(diǎn)的Asn等位基因顯著增加江西漢族人群早發(fā)冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的機(jī)制探討 |
| 前言 |
| 第1章 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.3 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 第2章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 第3章 討論 |
| 第4章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
（10）IL-22基因多態(tài)性及其血清水平與廣西黑衣壯兒童哮喘的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 第一部分 :IL-22單核苷酸多態(tài)性在廣西黑衣壯人群中的分布特點(diǎn) |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英漢縮略詞對(duì)照表 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4.1 血液標(biāo)本的采集 |
| 1.4.2 裂解紅細(xì)胞 |
| 1.4.3 提取DNA |
| 1.4.4 基因分型 |
| 1.5 基因位點(diǎn)的選擇 |
| 1.6 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn) |
| 2.2 IL-22基因位點(diǎn)SNP分型結(jié)果 |
| 2.3 IL-22基因SNPs位點(diǎn)在廣西黑衣壯人群中的分布 |
| 2.4 廣西黑衣壯與不同地區(qū)、民族人群的IL-22基因多態(tài)性比較 |
| 3 討論 |
| 第二部分 :IL-22基因多態(tài)性及其血清水平與廣西黑衣壯兒童哮喘的相關(guān)性研究 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英漢縮略詞對(duì)照表 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 標(biāo)本的采集和處理 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 1.5 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.5.1 裂解紅細(xì)胞 |
| 1.5.2 提取DNA |
| 1.5.3 基因分型 |
| 1.6 ELISA檢測(cè)IL-22血清的表達(dá)水平 |
| 1.6.1 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 |
| 1.6.2 實(shí)驗(yàn)步驟 |
| 1.6.3 IL-22的ELISA實(shí)驗(yàn)步驟 |
| 1.7 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 兩組研究對(duì)象一般臨床資料特征分析 |
| 2.2 IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)基因型及等位基因頻率在哮喘組和健康組中的分布情況 |
| 2.3 基因位點(diǎn)連鎖情況 |
| 2.4 IL-22基因rs1179251、rs2227485、rs2227484和rs2227513位點(diǎn)組成的單倍型頻率在哮喘組和健康組中的分布情況 |
| 2.5 血清IL-22表達(dá)水平在哮喘組和健康對(duì)照組間的比較 |
| 2.6 哮喘組中血清IL-22表達(dá)水平在rs1179251位點(diǎn)不同基因型間比較 |
| 3 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 IL-22與呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及獲得的科研成果 |
四、基質(zhì)衍生因子1等基因多態(tài)性在人群中的分布（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]MTHFR rs1801133基因多態(tài)性與NAFLD及H.pylori感染在CEA、CA19-9、CA72-4水平中的交互作用和利用ciMICs衍生的類器官模擬消化道腫瘤的發(fā)生[D]. 吳曉醒. 重慶醫(yī)科大學(xué), 2021
- [2]SDF-1α基因多態(tài)性與西北地區(qū)漢族人群胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究[J]. 肖琪,普彥淞,都慶國(guó),段降龍,李曉帆,楊妮,薛飛. 中華普通外科學(xué)文獻(xiàn)(電子版), 2021(04)
- [3]基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2水平及基因多態(tài)性在急性腦梗死表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響[D]. 陳銀娟. 福建醫(yī)科大學(xué), 2021(02)
- [4]DPP4基因多態(tài)性與血脂及2型糖尿病合并冠心病的相關(guān)性研究[D]. 傅伯論. 湖北醫(yī)藥學(xué)院, 2021(02)
- [5]中國(guó)高血壓患者醛固酮合成酶基因多態(tài)性與心血管疾病的相關(guān)性研究[D]. 王立立. 河北醫(yī)科大學(xué), 2021(02)
- [6]整合素α2基因多態(tài)性及微小RNA作用于川崎病冠狀動(dòng)脈病變機(jī)制研究[D]. 李偉. 南方醫(yī)科大學(xué), 2021(02)
- [7]APLP2基因變異體參與膽固醇代謝的分子機(jī)制及功能研究[D]. 賈林·阿布扎力汗. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2021(08)
- [8]TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究[D]. 胡乃文. 山東大學(xué), 2020(04)
- [9]內(nèi)皮素-1基因Lys198Asn和+138/ex1 ins/delA位點(diǎn)的多態(tài)性與江西部分漢族人群早發(fā)冠心病患者相關(guān)性研究及機(jī)制探討[D]. 涂國(guó)勝. 南昌大學(xué), 2020(08)
- [10]IL-22基因多態(tài)性及其血清水平與廣西黑衣壯兒童哮喘的相關(guān)性研究[D]. 梁立婷. 右江民族醫(yī)學(xué)院, 2020(04)
標(biāo)簽：基因型論文; 等位基因論文; 基因多態(tài)性論文; 基因合成論文; 單核苷酸多態(tài)性論文;