一、AB_4亞型伴血清中含有非特異凝集素1例（論文文獻(xiàn)綜述）
曹翠巖[1]（2020）在《N-糖鏈/糖肽純化與免疫球蛋白G Fc糖基化定量分析研究》文中認(rèn)為蛋白質(zhì)N-糖基化是糖鏈在糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶作用下與特定的天冬酰胺側(cè)鏈共價(jià)結(jié)合的過(guò)程,是一種重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。糖鏈一方面通過(guò)調(diào)節(jié)所連接蛋白質(zhì)自身性質(zhì)（如構(gòu)象）發(fā)揮間接功能,另一方面可與受體蛋白結(jié)合發(fā)揮直接識(shí)別功能,包括細(xì)胞黏附、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和免疫反應(yīng)等。目前,N-糖基化研究集中于糖鏈結(jié)構(gòu)表征、功能研究以及疾病相關(guān)異常糖基化分析,而構(gòu)建結(jié)構(gòu)明確且種類(lèi)豐富的糖鏈和糖肽標(biāo)準(zhǔn)品庫(kù)分別是結(jié)構(gòu)功能糖組學(xué)研究和異常糖基化準(zhǔn)確定量分析的基礎(chǔ)。本論文基于課題組自主研發(fā)親水色譜固定相,發(fā)展了 N-糖鏈/糖肽二維色譜分離純化方法,結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜分析,實(shí)現(xiàn)天然N-糖鏈/糖肽標(biāo)準(zhǔn)品的純化制備與結(jié)構(gòu)表征。在結(jié)構(gòu)明確的糖鏈/糖肽標(biāo)準(zhǔn)品基礎(chǔ)上,開(kāi)展糖鏈的芯片制備與基于質(zhì)譜的人血清和單抗藥物中糖肽的準(zhǔn)確定量分析研究。首先,發(fā)展了非衍生化天然中性N-糖鏈的二維色譜分離純化方法,結(jié)合串聯(lián)多級(jí)質(zhì)譜分析,實(shí)現(xiàn)了雞卵清蛋白中31個(gè)中性N-糖鏈（質(zhì)量范圍1.3-254.3 μg）的純化制備與結(jié)構(gòu)表征。其中,包括7對(duì)糖鏈異構(gòu)體,5種未報(bào)道N-糖鏈結(jié)構(gòu)。最終,通過(guò)擬糖脂技術(shù),將純化制備N(xiāo)-糖鏈固定至糖芯片上。平分型N-乙酰葡萄糖胺修飾的混合型糖鏈與小麥胚芽凝集素間具較高親和力,表明純化制備N(xiāo)-糖鏈在結(jié)構(gòu)功能糖組學(xué)中應(yīng)用潛力。其次,發(fā)展了人免疫球蛋白G（IgG）Fc-糖肽的二維親水色譜分離純化方法,結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜分析,實(shí)現(xiàn)了 1 1個(gè)IgG-1和9個(gè)IgG-2 Fc-糖肽的純化制備與結(jié)構(gòu)表征。并根據(jù)糖肽摩爾濃度與其去糖基化肽段摩爾濃度相等的原則,利用內(nèi)標(biāo)曲線法測(cè)定去糖基化肽段摩爾量,從而實(shí)現(xiàn)了微量糖肽含量的測(cè)定,質(zhì)量范圍為1.07-335.69 μg?；诩兓苽涞腎gG-1 Fc-糖肽標(biāo)準(zhǔn)品,發(fā)展了人血清中11個(gè)高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)定量分析方法,實(shí)現(xiàn)了小樣本急性心肌梗死患者與健康人血清中1 1個(gè)高豐度IgG-1 Fc-糖肽的含量測(cè)定。與直接采用峰面積歸一化的相對(duì)定量方法相比,引入糖肽校正標(biāo)準(zhǔn)品的方法克服了不同糖型糖肽質(zhì)譜響應(yīng)差異的影響,定量結(jié)果更準(zhǔn)確。為了進(jìn)一步豐富Fc-糖肽標(biāo)準(zhǔn)品庫(kù),發(fā)展了單抗特異性Fc-糖肽的二維親水分離純化方法,結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜,實(shí)現(xiàn)了 IgG1融合蛋白中15個(gè)Fc-糖肽的純化制備與結(jié)構(gòu)表征。基于26個(gè)Fc-糖肽校正標(biāo)準(zhǔn)品,系統(tǒng)比較了引入Fc-糖肽標(biāo)準(zhǔn)品前后不同質(zhì)譜策略在曲妥珠單抗Fc-糖肽含量測(cè)定中的差異。并采用糖肽校正標(biāo)準(zhǔn)品的HILIC-MRM方法,實(shí)現(xiàn)了 6種IgG1型單抗藥物每種糖型Fc-糖肽含量、糖基化水平以及糖基化位點(diǎn)覆蓋率的準(zhǔn)確測(cè)定。與此同時(shí),也實(shí)現(xiàn)了該法在不同平臺(tái)不同儀器間的轉(zhuǎn)移。
邱麗[2]（2017）在《濱海新區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者ABO亞型血清學(xué)特性及等位基因突變位點(diǎn)的分析》文中研究表明目的:通過(guò)對(duì)濱海新區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群ABO血型的血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè),掌握ABO亞型的血清學(xué)表現(xiàn),并對(duì)ABO亞型等位基因突變位點(diǎn)進(jìn)行分析。方法:使用ABO血型常規(guī)檢測(cè)法對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行ABO血型初篩,發(fā)現(xiàn)正反定型不符的疑難血型;使用經(jīng)典鹽水試管法對(duì)正反定型不符標(biāo)本進(jìn)行ABO亞型鑒定;將血清學(xué)鑒定為ABO亞型的標(biāo)本送往生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序;對(duì)測(cè)序結(jié)果顯示存在錯(cuò)義突變者進(jìn)行蛋白質(zhì)功能分析并使用PyMOL建立糖基轉(zhuǎn)移酶空間模型。結(jié)果:45880名無(wú)償獻(xiàn)血者中初篩檢測(cè)出正反定型不符標(biāo)本,經(jīng)進(jìn)一步鑒定有20例符合ABO亞型血清學(xué)特征,分別為A2（1）、AX（2）、Bx（3）、Bm（1）、B3（1）、A2B（2）、AXB（4）、ABx（3）、B（A）（2）,cisAB（1）。20例標(biāo)本經(jīng)過(guò)測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)10個(gè)ABO等位基因錯(cuò)義突變,分別為1009A>G、905 A>G、940A>G、503G>T、28G>A、588C>G、550G>A、700C>G、640A>G、803G>C,并造成10個(gè)氨基酸置換,分別為R337G、D302G、K314E、R168L、G10R、C196W、V184M、P234A、M214V、G268A,對(duì)應(yīng)的10個(gè)亞型等位基因分別為A205、AX18、AX13、Bw22、B310、Bx04、Bx08、B（A）02、B（A）04、cisAB01。錯(cuò)義突變導(dǎo)致的氨基酸置換在進(jìn)化中為保守氨基酸,通過(guò)空間模型分析顯示氨基酸置換前后其側(cè)鏈的空間構(gòu)象發(fā)生較大改變。結(jié)論:（1）ABO亞型在血清學(xué)檢測(cè)中常出現(xiàn)異常減少和（或）增加的抗原和（或）抗體,造成血型檢測(cè)正反定型不符,需掌握ABO亞型血清學(xué)特性以做出快速而準(zhǔn)確的血型鑒定。（2）ABO等位基因由于發(fā)生錯(cuò)義突變而導(dǎo)致A或B糖基轉(zhuǎn)移酶發(fā)生氨基酸置換,氨基酸置換后由于物理化學(xué)性質(zhì)、帶電性質(zhì)和疏水性質(zhì)以及氨基酸側(cè)鏈間分子間作用力的改變而影響A或B糖基轉(zhuǎn)移酶的催化活性和特異性,從而形成ABO亞型表型。
董曉慶[3]（2015）在《抗菌肽對(duì)建鯉生長(zhǎng)性能及免疫功能影響的研究》文中研究說(shuō)明抗菌肽是免疫增強(qiáng)劑的一種,具有廣譜抗菌作用。在畜牧業(yè)上已經(jīng)開(kāi)始應(yīng)用,大量研究表明抗菌肽能夠促進(jìn)仔豬和家禽的生長(zhǎng),并對(duì)免疫功能有增強(qiáng)作用。然而,抗菌肽在水產(chǎn)動(dòng)物上的研究較少,缺乏對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)性能、肌肉品質(zhì)及免疫功能的系統(tǒng)研究,尤其抗菌肽對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)與免疫之間相關(guān)性的研究未見(jiàn)報(bào)道。因此,本研究以建鯉魚(yú)種為對(duì)象,從表觀性狀、生物化學(xué)、分子生物學(xué)角度系統(tǒng)地闡述抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種的生長(zhǎng)、肌肉品質(zhì)及免疫功能的影響。試驗(yàn)選取體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊的建鯉魚(yú)種300尾,隨機(jī)分成5組,每組設(shè)三個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20尾,放養(yǎng)在15個(gè)水族箱中。在控溫單循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行,試驗(yàn)期間飽飼投喂。分別在基礎(chǔ)飼料中加入0、100、200、400和600 mg/kg抗菌肽,試驗(yàn)期為60 d。試驗(yàn)結(jié)束后,分別對(duì)每組魚(yú)進(jìn)行體重與體長(zhǎng)的測(cè)量。選取稱(chēng)重后的魚(yú)進(jìn)行尾靜脈采血制備血清,取背部肌肉和肝臟組織備用。通過(guò)五個(gè)試驗(yàn),研究了抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種生長(zhǎng)性能、肌肉成分、血液生化指標(biāo)、抗氧化酶和免疫相關(guān)酶活性、細(xì)胞因子含量及相關(guān)基因表達(dá)量的影響,初步闡明抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種生長(zhǎng)和免疫的調(diào)控途經(jīng),為抗菌肽在建鯉魚(yú)種養(yǎng)殖中的合理利用提供依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下:1、基礎(chǔ)飼料中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種末均重和特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照（P<0.05）,飼料系數(shù)顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。添加400mg/kg抗菌肽增重率顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。添加200和400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種腸道蛋白酶活力顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。肥滿(mǎn)度各組之間差異不顯著（P>0.05）。添加400和600 mg/kg抗菌肽腎臟體指數(shù)顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示,末均重與增重率和特定生長(zhǎng)率呈顯著的正相關(guān)（P<0.01）。增重率與特定生長(zhǎng)率呈顯著的正相關(guān)（P<0.01）。飼料系數(shù)與末均重、增重率和特定生長(zhǎng)率呈顯著的負(fù)相關(guān)（P<0.01）。蛋白酶活力與末均重、增重率和特定生長(zhǎng)率呈顯著的正相關(guān)（P<0.01）。2、基礎(chǔ)飼料中添加400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種肌肉中粗蛋白和鈣含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。添加100、200和400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種肌肉中磷含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。肌肉中水分、粗脂肪和灰分含量各組間差異不顯著（P>0.05）。飼料中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽可顯著提高肌肉中脯氨酸和半胱氨酸的含量（P<0.05）。添加600 mg/kg抗菌肽肌肉中總氨基酸含量和必需氨基酸含量降低。飼料中添加100和200 mg/kg抗菌肽肌肉中EPA和DHA的含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,添加100 mg/kg抗菌肽DPA的含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。飼料中添加600 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種血清中總蛋白、白蛋白、總膽固醇含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。添加200、400和600 mg/kg抗菌肽血清中甘油三酯含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。3、基礎(chǔ)飼料中添加100 mg/kg抗菌肽血清中超氧化物歧化酶活性顯著高于對(duì)照組和600 mg/kg組（P<0.05）。添加100、200和400 mg/kg抗菌肽血清中過(guò)氧化氫酶活性顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。超氧化物歧化酶與過(guò)氧化氫酶之間呈現(xiàn)極顯著的正相關(guān)（P<0.01）。飼料中添加600 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種血清堿性磷酸酶活性顯著低于對(duì)照組和其它試驗(yàn)組（P<0.05）。飼料中添加100 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種血清酸性磷酸酶活性顯著高于對(duì)照組和其它試驗(yàn)組（P<0.05）。添加100、200和400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種血清溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組和600 mg/kg添加組（P<0.05）。飼料中添加100 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種血清IgM和IL-1β含量顯著高于對(duì)照組和其它各組（P<0.05）,IL-1α含量顯著高于對(duì)照組、400和600 mg/kg添加組（P﹤0.05）。相關(guān)性分析表明,IgM與IL-1α、IL-1β均存在顯著正相關(guān)（P<0.05）。IL-1α、IL-1β和溶菌酶、堿性磷酸酶呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。MHC與堿性磷酸酶呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）。4、基礎(chǔ)飼料中添加200和400 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種肝臟組織IGF-I mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組和600 mg/kg添加組（P<0.05）。飼料中添加100和200 mg/kg抗菌肽建鯉魚(yú)種肝臟組織IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。相關(guān)性分析表明,特定生長(zhǎng)率與IGF-ImRNA和IL-1βmRNA的相對(duì)表達(dá)量呈顯著正相關(guān)（P<0.05）,與IgM和IL-1β在血清中的分泌量呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。飼料系數(shù)與IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。IGF-ImRNA相對(duì)表達(dá)量與酸性磷酸酶和溶菌酶活性呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）。IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量與血清中IgM的分泌量呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）。血清中IgM和IL-1β呈顯著正相關(guān)（P<0.05）。綜上所述,抗菌肽能夠提高建鯉魚(yú)種的生長(zhǎng)性能;降低血液中甘油三酯及總膽固醇的含量;提高肌肉中不飽和脂肪酸EPA和DHA含量,進(jìn)而改善肌肉品質(zhì);提高機(jī)體抗氧化功能,促進(jìn)了建鯉血清中細(xì)胞因子IL-1α、IL-1β和IgM的分泌,增強(qiáng)免疫功能;上調(diào)了建鯉魚(yú)種肝臟組織IGF-I和IL-1β的相對(duì)表達(dá)量。本研究首次探討了抗菌肽對(duì)魚(yú)類(lèi)免疫細(xì)胞因子分泌量和IGF-I基因、IL-1β基因表達(dá)量的影響。系統(tǒng)研究了在抗菌肽的干預(yù)下,魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)與免疫之間的相關(guān)性,揭示了IGF-I基因與魚(yú)類(lèi)免疫密切相關(guān),IL-1β基因與魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)密切相關(guān)。為抗菌肽在魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖上的合理應(yīng)用提供參考,也為抗菌肽對(duì)魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)和免疫功能調(diào)控機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。
李艷芝[4]（2011）在《構(gòu)樹(shù)葉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響》文中指出本試驗(yàn)旨在通過(guò)在蛋雞日糧中添加構(gòu)樹(shù)葉,研究其對(duì)蛋雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響,并對(duì)其機(jī)理進(jìn)行初步的探討,為其在養(yǎng)禽實(shí)踐中的應(yīng)用提供理論和實(shí)踐依據(jù)。試驗(yàn)一將45周齡體況一致的健康海蘭灰蛋雞400只,隨機(jī)分為5個(gè)組,每組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧,1-4組為試驗(yàn)組,分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.5%、1%、1.5%、2%的構(gòu)樹(shù)葉,定期采樣測(cè)定各組雞的生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血液生化指標(biāo)。結(jié)果表明,在產(chǎn)蛋中期蛋雞日糧中添加不同水平的構(gòu)樹(shù)葉均可增加蛋重,以2%添加組效果最佳（P<0.05）,各試驗(yàn)組對(duì)產(chǎn)蛋率均有一定的改善,而對(duì)采食量和料蛋比無(wú)顯著性影響（P>0.05）; 1.5%添加組的蛋黃顏色、蛋殼相對(duì)重、蛋殼厚度均顯著優(yōu)于對(duì)照組（P<0.05）,在蛋形指數(shù)、蛋黃系數(shù)、蛋黃相對(duì)重、哈夫單位等指標(biāo)上1.5%添加組和對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）;各試驗(yàn)組均能顯著提高蛋清蛋白含量（P<0.01）和蛋黃蛋白含量（P<0.05）;1.5%添加組的血清總膽固醇、血清高密度脂蛋白、血清低密度脂蛋白含量較對(duì)照組相比均有顯著改善（P<0.05）;此外,1.5%、2%添加組均能顯著降低血液中甘油三酯水平（P<0.05）。提示日糧中添加1.5%-2%的構(gòu)樹(shù)葉即可顯著提高產(chǎn)蛋中期蛋雞的生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)。試驗(yàn)二選取65周齡體況一致的健康海蘭灰蛋雞400只,其分組及飼養(yǎng)管理情況同試驗(yàn)一,定期采樣測(cè)定各組雞的生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)指數(shù)。結(jié)果表明,0.5%,1%,1.5%構(gòu)樹(shù)葉添加組均可極顯著的增加產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋重（P<0.01）,而對(duì)采食量和料蛋比無(wú)顯著性影響（P>0.05）; 2%添加組蛋殼相對(duì)重比對(duì)照組有顯著性提高（P<0.05）,蛋殼厚度與對(duì)照組相比差異極顯著（P<0.01）;各試驗(yàn)組哈夫單位和蛋黃顏色均較對(duì)照組有顯著改善（P<0.05或P<0.01）;1.5%,2%添加組的蛋黃相對(duì)重與對(duì)照組均有顯著差異（P<0.05）;1%和1.5%添加組的蛋黃蛋白含量比對(duì)照組有顯著提高（P<0.05）;而各試驗(yàn)組對(duì)蛋形指數(shù)、蛋黃系數(shù)、蛋清含水量、蛋黃含水量、脂肪含量均無(wú)顯著性影響（P>0.05）。綜合考慮,1.5%添加組的整體效果最佳。試驗(yàn)三將7日齡健康蛋公雛135只隨機(jī)分為3組,每組45只。2個(gè)試驗(yàn)組分別向基礎(chǔ)日糧中添加1.5%,2%的構(gòu)樹(shù)葉,對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧。各組分別于14、21、28、49日齡隨機(jī)選取8只雞心臟采血（采血后剖殺,用于免疫器官指數(shù)的測(cè)定）,剩余雞只分別于35、42、56、63日齡采血分離血清,采用紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)檢測(cè)雞ND和AI抗體效價(jià)。各組于21、49、63日齡剖殺雞的過(guò)程中隨機(jī)選取5只無(wú)菌取脾臟,用半定量RT-PCR方法檢測(cè)脾臟中IL- 2的mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果表明,在雛雞日糧中添加1.5%和2%的構(gòu)樹(shù)葉可以顯著提高雛雞ND、AIH5-4和AIH5-5的抗體水平（P<0.05或P<0.01）,也能顯著提高雛雞免疫器官指數(shù)（P<0.05）,其中以1.5%構(gòu)樹(shù)葉添加組效果明顯;構(gòu)樹(shù)葉在整個(gè)試驗(yàn)期間均能顯著促進(jìn)雛雞脾臟中IL-2 mRNA表達(dá),可見(jiàn)構(gòu)樹(shù)葉能有效促進(jìn)機(jī)體的Th1免疫反應(yīng)。
劉春蓉[5]（2011）在《人TSHβ新剪接變體生物學(xué)特性探討》文中研究指明目的促甲狀腺激素（thyroid-stimulating hormone, TSH）是調(diào)控甲狀腺功能的關(guān)鍵蛋白,TSH由α亞基和p亞基通過(guò)非共價(jià)鍵連接組成,p亞基具有激素特異性。2009年Vincent等報(bào)道了第一個(gè)功能性TSHβ剪接變體,TSHβ新剪接變體在免疫—神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)中可能具有不同于天然型TSHβ的調(diào)控作用。由于該TSHβ剪接變體是新近才被發(fā)現(xiàn)的,所以目前對(duì)其基本生物學(xué)特性、表達(dá)調(diào)控機(jī)制及與甲狀腺相關(guān)疾病相關(guān)性等均不清楚。本研究擬從上述幾個(gè)方面對(duì)這個(gè)TSHβ新剪接變體進(jìn)行逐步深入的探討。方法1. TSHβ剪接變體在正常人外周血中的研究：對(duì)血清樣品進(jìn)行鹽析、透析和濃縮預(yù)處理后采用免疫沉淀法鑒定人血清中是否存在TSHβ剪接變體蛋白；運(yùn)用RT-PCR和Western Blot方法分別從轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)水平檢測(cè)人外周血白細(xì)胞（peripheral blood leukocyte, PBL）中TSHβ剪接變體表達(dá)情況；制作人PBL涂片,運(yùn)用免疫熒光染色檢測(cè)人PBL中TSHβ剪接變體的表達(dá)。2.人TSHα與TSHβ剪接變體體外結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：構(gòu)建pSELECT-GFPzeo-TSHβ剪接變體和pcDN A3.1D/V5-His-TOPO-TSHα兩個(gè)重組表達(dá)載體,分別轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞系,建立能穩(wěn)定表達(dá)TSHβ剪接變體和TSHα的CHO細(xì)胞系,將上述兩種CHO細(xì)胞系混合培養(yǎng)后,取培養(yǎng)上清,利用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證人TSHα是否能與TSHβ剪接變體形成二聚體。3.不同病理生理?xiàng)l件對(duì)TSHβ剪接變體表達(dá)影響：定量PCR檢測(cè)GD和HT患者PBL中TSHβ剪接變體的表達(dá)差異；分離培養(yǎng)人PBL,分別給予致炎因子LPS （10mg/L）、抗炎因子地塞米松（10-6,10-7and10-8M）、TRH （100nM）和T3（100nM）直接刺激,定量PCR技術(shù)檢測(cè)人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)差異。4.人TSHβ新剪接變體蛋白的原核表達(dá)及純化：采用PET高效大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對(duì)人TSHβ剪接變體進(jìn)行表達(dá)并利用免疫親和層析技術(shù)純化獲得重組人TSHβ剪接變體蛋白。結(jié)果1.鑒定出人血清中存在TSHβ剪接變體蛋白,正常人PBL僅表達(dá)TSHβ剪接變體而不表達(dá)天然型TSHβ,免疫熒光染色顯示人PBL中有TSHβ剪接變體陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。2.成功構(gòu)建pSELECT-GFPzeo-TSHβ剪接變體和pcDNA3.1D/V5-His-TOPO-TSHα兩個(gè)重組表達(dá)載體；建立能穩(wěn)定表達(dá)TSHβ剪接變體和TSHα的CHO細(xì)胞系；免疫共沉淀技術(shù)證實(shí)人TSHα能與TSHβ剪接變體形成二聚體。3. TSHβ剪接變體在GD和HT患者PBL中的表達(dá)差異：與正常人相比,HT初發(fā)患者（未經(jīng)任何藥物治療）PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量上調(diào)123.33%（n=10,P<0.0001）、發(fā)病初期曾使用強(qiáng)的松治療3個(gè)月但病程≥18個(gè)月的HT患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量上調(diào)76.67%（n=5,P=0.023）而發(fā)病初期曾使用強(qiáng)的松治療3個(gè)月,病程≤9個(gè)月的HT患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量下調(diào)40%（n=8, P<0.0001）。GD初發(fā)患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.0001）。人PBL中TSHp剪接變體mRNA表達(dá)水平與血清FT3水平負(fù)相關(guān)（r=-0.635, P<0.001）、KFT4水平負(fù)相關(guān)（r=-0.760, P<0.0001）、TSH水平正相關(guān)（r=0.975,P<0.0001）。4.單次給予致炎因子LPS刺激后,人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)變化趨勢(shì)是先增高后下降最后恢復(fù)至正常。與正常對(duì)照組相比,LPS處理6h組TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量增高（P=0.003）, LPS處理12h組TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量下降（P=0.008）,LPS處理24h、48h組TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量與正常對(duì)照24h、48h組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。抗炎因子地塞米松抑制TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)并呈時(shí)間濃度依賴(lài)性。5.TRH作用人PBL6h時(shí),TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量增高（P<0.0001）,隨后逐漸恢復(fù)正常表達(dá)水平。T3作用人PBL12h時(shí),TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)量下降至最低（P=0.043）,12h后逐漸恢復(fù)正常表達(dá)水平。6.成功構(gòu)建PET-28a-TSHp剪接變體重組表達(dá)載體,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),免疫親和純化,最后獲得了7.4mgTSH(3剪接變體蛋白,純度大于90%。結(jié)論（1） TSHβ剪接變體既可以存在于外周血循環(huán)中,以遠(yuǎn)距分泌（telecrine）方式發(fā)揮生物學(xué)作用,也可以表達(dá)于免疫細(xì)胞,以旁分泌（paracrine）的方式發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。（2）人TSHα能與TSHβ剪接變體形成二聚體,該研究結(jié)果對(duì)于證明它的穩(wěn)定性和是否具有高度生物活性至關(guān)重要。（3） TSHβ剪接變體可能參與了HT患者的甲狀腺病理?yè)p傷。機(jī)體在不同狀態(tài)下,TSHβ剪接變體可能受HPT軸和/或免疫系統(tǒng)調(diào)控。（4）純化獲得的TSHβ剪接變體蛋白將為T(mén)SHβ剪接變體功能及調(diào)控機(jī)制的深入研究提供重要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
周怡[6]（2011）在《Fortilin和TAT融合蛋白在畢赤酵母的表達(dá)及對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫功能的影響》文中研究表明對(duì)蝦病害在世界范圍的廣泛傳播,給水產(chǎn)養(yǎng)殖造成了重大損失。深入開(kāi)展對(duì)蝦免疫機(jī)制研究并在此基礎(chǔ)上尋找對(duì)蝦疾病防治的有效方法已成為當(dāng)務(wù)之急。Fortilin蛋白,一種多功能蛋白,具有參與細(xì)胞周期,鈣結(jié)合活性以及抗凋亡等多種活性。并且,對(duì)蝦fortilin蛋白參與抗病毒反應(yīng),對(duì)蝦注射重組fortilin后,進(jìn)行WSSV感染,存活率達(dá)80-100%,但是,口服重組fortilin組對(duì)蝦攻毒后存活率僅為10%。藥物注射費(fèi)時(shí)費(fèi)力,顯然不適用于大規(guī)模對(duì)蝦養(yǎng)殖,那么如何提高口服效用,以方便的飼用方式應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)是亟待解決的問(wèn)題。本研究從提高fortilin蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)效率入手,選用細(xì)胞穿膜肽引導(dǎo),試圖為其應(yīng)用尋找一種可行的方法。實(shí)驗(yàn)采用PCR方法構(gòu)建了fortilin和穿膜肽TAT的融合基因,在畢赤酵母中進(jìn)行融合蛋白的重組表達(dá),并在體外和體內(nèi)研究了融合蛋白對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫功能的影響。研究主要分為以下三個(gè)部分:1.首先,參照Genbank中基因序列設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增得到凡納濱對(duì)蝦fortilin目的基因片段。并且,直接在引物末端融合33個(gè)堿基對(duì)的TAT序列,通過(guò)PCR擴(kuò)增將TAT序列引入到基因的末端。同時(shí),以pTracer-CMV2質(zhì)粒為模板擴(kuò)增得到GFP基因片段。采用重疊延伸PCR的方法構(gòu)建融合基因,Fortilin-GFP,GFP-Fortilin,TAT-Fortilin-GFP以及GFP-Fortilin-TAT用于后續(xù)穿膜研究;而Fortilin,TAT-Fortilin和Fortilin-TAT用于后續(xù)免疫活性研究。為了進(jìn)一步構(gòu)建重組質(zhì)粒,在PCR擴(kuò)增時(shí)引入限制內(nèi)切酶EcoR I、Xba I識(shí)別位點(diǎn),基因片段經(jīng)雙酶切插入表達(dá)載體pGAPZαA,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,經(jīng)Zeocin抗性篩選及測(cè)序分析,獲得重組表達(dá)載體,并確認(rèn)所得到的融合基因與設(shè)計(jì)的基因序列完全一致,讀碼框正確。重組質(zhì)粒經(jīng)Avr II線性化后電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母X-33,Zeocin抗性篩選及酵母基因組PCR檢測(cè)挑選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子,酵母轉(zhuǎn)化子發(fā)酵后表達(dá)產(chǎn)物的上清液經(jīng)SDS-PAGE電泳和質(zhì)譜分析,均檢測(cè)到目的蛋白,表明在酵母中成功表達(dá)目的融合蛋白。2.為方便細(xì)胞定位觀察,本研究選擇綠色熒光蛋白（GFP）作為分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)利用GFP的自發(fā)熒光檢測(cè)融合蛋白的穿膜效果。實(shí)驗(yàn)中將融合蛋白與血細(xì)胞共培養(yǎng),結(jié)果顯示,培養(yǎng)30min,就可以檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)綠色熒光,并且持續(xù)至24h,表明TAT有效攜帶fortilin穿透血細(xì)胞膜。并且,進(jìn)一步的離體翻轉(zhuǎn)腸囊實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),TAT-Fortilin-GFP、GRP-Fortilin-TAT可以穿透對(duì)蝦離體腸壁。同時(shí),TAT多肽融合于fortilin蛋白的C端和N端,均能促進(jìn)其穿透生物膜,穿膜效率未見(jiàn)明顯差異。TAT能夠促進(jìn)fortilin蛋白穿膜轉(zhuǎn)運(yùn),那么又會(huì)對(duì)細(xì)胞活性產(chǎn)生怎樣的影響呢?本實(shí)驗(yàn)選取了四種免疫相關(guān)酶指標(biāo),以體外原代培養(yǎng)的凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞來(lái)研究Fortilin,TAT-Fortilin和Fortilin-TAT重組蛋白的活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Fortilin,TAT-Fortilin和Fortilin-TAT顯著增強(qiáng)了血細(xì)胞酚氧化酶（PO）活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性（P<0.05）,200、500μg/ml Fortilin,TAT-Fortilin和Fortilin-TAT處理組血細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性顯著升高（P<0.05）,TAT-Fortilin和Fortilin-TAT融合蛋白顯著提高了血細(xì)胞一氧化氮合酶（NOS）活性,僅500μg/ml Fortilin處理組NOS活力顯著高于對(duì)照（P<0.05）。200μg/ml Fortilin-TAT處理組呼吸爆發(fā)和SOD活性顯著高于同濃度Fortilin處理組（P<0.05）;100、200μg/ml TAT-Fortilin和Fortilin-TAT處理組PO、NOS活性顯著高于同濃度Fortilin處理組（P<0.05）。WSSV病毒刺激后,200μg/ml TAT-Fortilin和Fortilin-TAT處理組血細(xì)胞SOD活性,500μg/ml TAT-Fortilin處理組血細(xì)胞PO活性,500μg/ml Fortilin-TAT處理組血細(xì)胞NOS活性顯著高于相同濃度TAT-Fortilin處理組血細(xì)胞相應(yīng)酶活（P<0.05）。上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,Fortilin能夠提高對(duì)蝦血細(xì)胞免疫活性,并且TAT通過(guò)提高fortilin蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)而促進(jìn)其作用的發(fā)揮。3.以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象,探討在基礎(chǔ)飼料中分別以酵母表達(dá)上清和酵母培養(yǎng)物兩種形式添加融合蛋白對(duì)對(duì)蝦生免疫及抗病力的影響。重組蛋白Fortilin酵母表達(dá)上清添加組對(duì)蝦呼吸爆發(fā)、PO、NOS活性顯著升高（P<0.05）,同時(shí),Fortilin-TAT酵母表達(dá)上清添加組四種酶活均顯著增強(qiáng),且顯著高于Fortilin酵母表達(dá)上清添加組,結(jié)合前面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)Fortilin蛋白能夠增強(qiáng)對(duì)蝦免疫力,TAT通過(guò)有效轉(zhuǎn)運(yùn)Fortilin蛋白從而加強(qiáng)這種免疫增強(qiáng)作用。除呼吸爆發(fā)活性外,TAT-Fortilin酵母表達(dá)上清添加組酶活顯著高于Fortilin酵母表達(dá)上清添加組,但其SOD、NOS酶活顯著低于Fortilin-TAT酵母表達(dá)上清添加組,這個(gè)結(jié)果表明TAT融合于蛋白C端更利于其作用的發(fā)揮。另外,酵母表達(dá)上清及相對(duì)應(yīng)的酵母培養(yǎng)物添加組之間酶活性基本無(wú)顯著差異,說(shuō)明以酵母表達(dá)上清或者酵母培養(yǎng)物任一形式添加均可以實(shí)現(xiàn)重組蛋白作用的發(fā)揮。病毒感染實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)基本與免疫酶活結(jié)果一致,飼料中添加重組蛋白Fortilin、TAT-Fortilin和Fortilin-TAT增強(qiáng)了對(duì)蝦的免疫力,從而提高了WSSV感染后凡納濱對(duì)蝦存活率。Fortilin-TAT酵母表達(dá)上清添加組攻毒后存活率最高,TAT-Fortilin酵母表達(dá)上清添加組存活率次之,Fortilin酵母表達(dá)上清添加組存活率低于前兩組,但各組之間存活率沒(méi)有顯著差異（P>0.05）?？召|(zhì)粒酵母添加同樣提高了對(duì)蝦病毒感染后的存活率,但差異不顯著（P>0.05）。基于本文以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),可以得出以下結(jié)論:TAT可以有效引導(dǎo)fortilin蛋白穿透生物膜,從而促進(jìn)其轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收,進(jìn)而加強(qiáng)fortilin作用的發(fā)揮,提高凡納濱對(duì)蝦非特異性免疫力,并保護(hù)對(duì)蝦抵御WSSV病毒。以酵母為表達(dá)運(yùn)載工具,融合TAT多肽以引導(dǎo)穿膜的這個(gè)系統(tǒng),為活性蛋白在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用開(kāi)辟了一條新的途徑。
劉安文[7]（2009）在《MAP4K4在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義》文中指出原發(fā)性肝癌（Primary hepatic carcinoma,PHC）絕大多數(shù)是肝細(xì)胞癌（HCC）,素有“癌中之王”之稱(chēng),現(xiàn)有的治療手段效果均不佳,因此越來(lái)越多的學(xué)者致力于肝細(xì)胞癌基因靶向治療的研究。肝細(xì)胞癌的發(fā)生是多因素、多途徑、多步驟長(zhǎng)期作用的結(jié)果,包括外環(huán)境致癌因素（病毒、寄生蟲(chóng)、細(xì)菌的感染、黃曲霉毒素的攝入、水源污染以及吸煙、飲酒）和自身遺傳因素（癌基因的激活和抑癌基因的失活）。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與人類(lèi)肝細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)的基因有:N-ras、c- fos、p53、C- myc、IGF-Ⅱ、IGF-ⅡR、p16、p21、DCC、nm- 23、c- erB-b- 2、TGF-α、CSF- IR、raf等。癌基因和抑癌基因的突變是肝細(xì)胞癌發(fā)生的分子基礎(chǔ),肝細(xì)胞的癌變是一個(gè)多基因參與多階段的過(guò)程。絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4（MAP4K4）系絲/蘇氨酸激酶亞家族STE20中的一員,位于染色體2q11.2,含有33個(gè)外顯子,編碼區(qū)包括九個(gè)可供選擇的剪接位點(diǎn)。人MAP4K4最早克隆于巨噬細(xì)胞cDNA庫(kù),不同來(lái)源的組織可分離出不同的由cDNA編碼的MAP4K4亞型。MAP4K4屬于絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號(hào)傳導(dǎo)通路的一個(gè)上游激活因子,MAPK是一組可以被多種細(xì)胞外信號(hào)（包括生長(zhǎng)因子,激素,紫外線輻射,DNA損傷劑,炎性細(xì)胞因子和環(huán)境應(yīng)激等）激活的絲/蘇氨酸激酶。MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路非常保守,自膜受體到MAPK激酶激酶（MAPKKK）再到MAPK激酶（MAPKK）然后到MAPK,在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中MAPK處于細(xì)胞質(zhì)部分的終末位置,活化后可以轉(zhuǎn)到核內(nèi)作用靶點(diǎn),調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。這種激活模型存在于酵母至哺乳類(lèi)動(dòng)物。它參與細(xì)胞的多種生物學(xué)行為,包括細(xì)胞凋亡,分化和增殖、細(xì)胞周期調(diào)控,細(xì)胞生存的維持以及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化等。STE20家族是MAPKKK的上游激酶,哺乳類(lèi)動(dòng)物STE20/絲裂原蛋白激酶激酶激酶激酶（MAP4K）家族由其催化區(qū)相關(guān)的28種絲氨酸/蘇氨酸激酶組成。這些激酶可分為兩種結(jié)構(gòu)類(lèi)別,P21活性蛋白激酶（PAKs）和生發(fā)中心激酶（GCKs）。GCK激酶缺乏PAKs激酶中調(diào)節(jié)Cdc42/Rac的作用區(qū),而代之以N-末端激酶區(qū)和不同長(zhǎng)度的C-末端延伸。C-末端是一個(gè)枸椽同源區(qū)（CNH）,稱(chēng)為枸椽rho相互作用激酶（CRIK）,該區(qū)域?qū)τ诩っ富钚缘恼{(diào)節(jié)起著重要作用。GCK激酶在激酶區(qū)域外顯示出低度同源性,并分為九個(gè)亞家族。MAP4K4是GCK IV組中的一個(gè)成員,它對(duì)細(xì)胞的作用包括調(diào)節(jié)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性,細(xì)胞骨架重排以及細(xì)胞增殖等。研究發(fā)現(xiàn)MAP4K4在多種腫瘤中有高表達(dá)并證明了它在加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化,促進(jìn)細(xì)胞侵襲,降低細(xì)胞黏附性方面起著一定的作用。近期又有研究提出MAP4K4與卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和惡性黑色素瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系,通過(guò)siRNA敲減這些細(xì)胞系的MAP4K4基因可抑制它們的侵襲和轉(zhuǎn)移。最新研究報(bào)道MAP4K4在胰腺癌中也有高表達(dá),并與其不良預(yù)后有關(guān)。以上提示MAP4K4信號(hào)通路很可能與腫瘤的發(fā)生,發(fā)展有著密切的關(guān)系。而目前對(duì)于MAP4K4在肝細(xì)胞癌中的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。我國(guó)為肝細(xì)胞癌高發(fā)國(guó)家,大多數(shù)肝細(xì)胞癌的發(fā)生與乙肝病毒感染密切相關(guān),HBV是我國(guó)肝細(xì)胞癌發(fā)生的最直接危險(xiǎn)因素。本實(shí)驗(yàn)首先應(yīng)用cDNA芯片對(duì)1例HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)MAP4K4基因在肝細(xì)胞癌組織較癌旁組織顯著高表達(dá),受此啟發(fā),本課題擬探討MAP4K4在肝細(xì)胞癌的生物學(xué)活性中是否也發(fā)揮一定的作用。據(jù)此,本課題的研究思路為:首先,繼續(xù)采用cDNA芯片技術(shù)對(duì)5例HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌基因表達(dá)譜進(jìn)行初步研究,對(duì)比癌和癌旁組織的差異基因表達(dá),明確MAP4K4基因在肝細(xì)胞癌組織中確實(shí)較癌旁組織顯著高表達(dá)。然后,采用分子生物學(xué)方法和組織芯片技術(shù)進(jìn)一步從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測(cè)肝癌細(xì)胞株及肝細(xì)胞癌組織中MAP4K4的表達(dá)情況,驗(yàn)證基因芯片的結(jié)果,并分析不同臨床病理參數(shù)中MAP4K4蛋白表達(dá)水平的差異,以初步證實(shí)MAP4K4在肝細(xì)胞癌發(fā)展中的臨床意義。最后,再通過(guò)RNAi技術(shù)研究MAP4K4基因敲減對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性的影響,并通過(guò)基因芯片技術(shù)初步探討其生物學(xué)作用產(chǎn)生的可能機(jī)制。第一部分肝細(xì)胞癌基因表達(dá)譜的初步研究目的:應(yīng)用含20228個(gè)基因的人cDNA芯片研究5例HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌及配對(duì)癌旁肝組織的基因表達(dá)差異。方法:隨機(jī)選擇HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌及其癌旁肝組織樣本5例分別抽提標(biāo)本的總RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA與芯片進(jìn)行雜交,對(duì)比差異表達(dá)的基因。結(jié)果:HBV相關(guān)肝細(xì)胞癌組織相對(duì)于癌旁組織明顯上調(diào)表達(dá)基因有52個(gè)（>3倍）,其中上調(diào)大于5倍的基因?yàn)锳SPH,FACL4,LAPTM4B,PEX11B,MAP4K4,SQSTM1,CCT3,CPD,CKS1B,HMGA1,ENO1;明顯下調(diào)表達(dá)的基因有37個(gè),下調(diào)大于10倍的基因?yàn)镃YP2E1,MT2A,MT1X,CPS1,EXTL1,FCN3,CYP2A7,NOLA2,CYP3A4,CYP2B6,CYP4A11,HSD11B1。結(jié)論:通過(guò)cDNA芯片技術(shù),發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌廣泛存在的異常表達(dá)基因,其中MAP4K4基因明顯上調(diào),綜合考慮它作為MAPK信號(hào)途徑的一個(gè)上游因子可能參與了細(xì)胞分化、增殖、凋亡及惡性轉(zhuǎn)化等生物學(xué)功能,因此進(jìn)一步對(duì)MAP4K4基因進(jìn)行分析將可能有助于了解它在肝細(xì)胞癌中的生物學(xué)作用,為肝細(xì)胞癌的基因靶向治療開(kāi)辟一條新途徑。第二部分MAP4K4在肝癌細(xì)胞株及肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)目的:從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平檢測(cè)肝癌細(xì)胞株及肝細(xì)胞癌組織中MAP4K4的表達(dá)情況,以驗(yàn)證基因芯片結(jié)果,并分析不同臨床病理參數(shù)中MAP4K4蛋白表達(dá)水平的差異,初步證實(shí)MAP4K4在肝細(xì)胞癌發(fā)展中的臨床意義。方法:選取20例新鮮肝細(xì)胞癌組織和配對(duì)癌旁肝組織標(biāo)本及四種肝癌細(xì)胞（Hep3B,HepG2,SMMC7721,Huh-7）進(jìn)行RT-PCR,qRT-PCR和Western-blot分別檢測(cè)MAP4K4 mRNA和蛋白水平的表達(dá);對(duì)400例肝細(xì)胞癌蠟塊標(biāo)本構(gòu)建肝細(xì)胞癌組織芯片,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)MAP4K4蛋白在含400例配對(duì)肝細(xì)胞癌及癌旁組織的表達(dá)活性,分析不同臨床病理參數(shù)中MAP4K4蛋白表達(dá)水平的差異。結(jié)果:1.肝細(xì)胞癌組織中MAP4K4 mRNA的表達(dá)在癌旁肝組織,MAP4K4 mRNA表達(dá)為0.001339～0.018747（平均0.007900）,而大部分癌組織表達(dá)高水平MAP4K4 mRNA,0.007367～0.080935（平均0.029500）;與配對(duì)癌旁肝組織相比,肝細(xì)胞癌組織MAP4K4 mRNA上調(diào)1.062～28.520倍（平均6.852倍）。配對(duì)t-檢驗(yàn)證實(shí)肝細(xì)胞癌組織和癌旁肝組織差異有顯著性（P < 0.001）。2.肝癌細(xì)胞株中MAP4K4 mRNA的表達(dá)經(jīng)RT-PCR檢測(cè),MAP4K4 mRNA在各細(xì)胞株的表達(dá)為:HepG2> Hep3B> Huh-7 > SMMC7721;qRT-PCR檢測(cè)MAP4K4 mRNA在HepG2、Hep3B、Huh-7、SMMC7721四種肝癌細(xì)胞株中相對(duì)表達(dá)量依次為（0.016008±0.002358）、（0.015629±0.001389）、（0.011674±0.001456）、（0.004895±0.000947）,結(jié)果得到qRT-PCR檢測(cè)證實(shí)。3.肝癌細(xì)胞株MAP4K4蛋白表達(dá)經(jīng)Western-blot檢測(cè),MAP4K4蛋白在四種肝癌細(xì)胞株中均有表達(dá),在HepG2細(xì)胞中表達(dá)最高,其次是Hep3B細(xì)胞,而在SMMC7721中表達(dá)最低。4.MAP4K4在肝細(xì)胞癌組織中的定位和表達(dá)在正常肝、肝炎和肝硬化組織的肝細(xì)胞MAP4K4呈一致陰性或弱陽(yáng)性表達(dá),周?chē)Y(jié)締組織、血管和膽管無(wú)MAP4K4陽(yáng)性著色,Kuffer細(xì)胞和淋巴細(xì)胞生發(fā)中心可見(jiàn)陽(yáng)性染色,與相應(yīng)的癌旁肝組織相比,異型增生結(jié)節(jié)的肝細(xì)胞MAP4K4的表達(dá)明顯強(qiáng)于正常肝、肝炎和肝硬化組織的肝細(xì)胞。肝細(xì)胞癌組織MAP4K4表達(dá)顯著增強(qiáng)。肝細(xì)胞癌組織MAP4K4呈異質(zhì)性表達(dá),其中過(guò)度表達(dá)194例（48.5%）,灶性陽(yáng)性或陰性206例（51.5 %）。HBsAg陽(yáng)性患者M(jìn)AP4K4陽(yáng)性率51.5%（157/305）顯著高于陰性的38.8% （37/95）（P = 0.033）;腫瘤直徑≤2cm的MAP4K4陽(yáng)性率31.6%（18/57）顯著低于腫瘤直徑> 2cm的51.3%（176/343） （P = 0.006）;MAP4K4在不同組織學(xué)分級(jí)中的陽(yáng)性率差異有顯著性（P<0.001）;肝內(nèi)轉(zhuǎn)移病例的MAP4K4陽(yáng)性率55.5%（152/274）顯著高于未轉(zhuǎn)移者的33.3%（42/126）（P = 0.002）。MAP4K4表達(dá)在患者年齡、血清甲胎蛋白濃度、肝硬化、包膜浸潤(rùn)方面差異無(wú)顯著性。結(jié)論:MAP4K4在肝細(xì)胞癌中普遍高表達(dá),并且其表達(dá)水平與HBV感染狀態(tài),腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)及轉(zhuǎn)移情況可能有一定關(guān)系。第三部分MAP4K4對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響目的:檢測(cè)MAP4K4基因敲減后肝癌細(xì)胞生物學(xué)活性（細(xì)胞增殖、細(xì)胞克隆形成、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡）的改變并初步探討其作用機(jī)制。方法:檢測(cè)HepG2、Hep3B、Huh7、SMMC-7721肝癌細(xì)胞株中MAP4K4蛋白表達(dá),選擇表達(dá)活性最強(qiáng)者進(jìn)行siRNA實(shí)驗(yàn)。設(shè)計(jì)一個(gè)空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組及三對(duì)靶向MAP4K4的特異性siRNA核苷酸序列質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（0—HepG2-pGCSil-U6,1—pSilMAP4K4-1,2—pSilMAP4K4-2,3—pSilMAP4K4-3）,用Lipofectamine 2000法分別轉(zhuǎn)染到選取的肝癌細(xì)胞,qRT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)干擾效率,并對(duì)轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞進(jìn)行WST-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),平板克隆形成實(shí)驗(yàn),PI染色法細(xì)胞周期檢測(cè),Annexin V法細(xì)胞凋亡檢測(cè),然后,選擇TOLL樣受體信號(hào)途徑相關(guān)芯片對(duì)干擾效果最好轉(zhuǎn)染組及空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞進(jìn)行基因檢測(cè),以進(jìn)一步探究MAP4K4基因在肝癌細(xì)胞中可能的作用機(jī)制。結(jié)果:依據(jù)Western-blot檢測(cè)四種肝癌細(xì)胞株中MAP4K4蛋白表達(dá)情況,我們選擇其中表達(dá)該蛋白最高的HepG2肝癌細(xì)胞株作為MAP4K4-siRNA的研究靶標(biāo)。1.qRT-PCR和Western-blot檢測(cè)干擾效率轉(zhuǎn)染干擾片段1,2,3后與對(duì)照組相比,MAP4K4 mRNA抑制率分別為68.7%,25.9%和53.7%;MAP4K4蛋白的抑制率分別為:61.4%,27.8%和45.8%。2.細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)改變MAP4K4 RNA干擾后,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)染組細(xì)胞數(shù)目減少,體積變大,貼壁性增強(qiáng),較對(duì)照組比較,圓形M期細(xì)胞比例減少。3. WST-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果pSilMAP4K4-1、pSilMAP4K4-3組,細(xì)胞增殖速度明顯減慢（ p<0.01）,而轉(zhuǎn)染pSilMAP4K4-2組與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性（p>0.05）。4.平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞克隆形成能力的檢測(cè)結(jié)果:HepG2-pGCSil-U6 （56.83±8.51%）、pSilMAP4K4-1組（13.75±4.26%）、pSilMAP4K4-2組（50.71±7.47%）、pSilMAP4K4-3組（28.11±6.36%）。pSilMAP4K4-1和pSilMAP4K4-3組細(xì)胞的平板克隆形成率明顯低于對(duì)照組（p<0.01）,而pSilMAP4K4-2組與對(duì)照組間的差異無(wú)顯著性（p>0.05）。5.細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果與對(duì)照組比較, pSilMAP4K4-1和pSilMAP4K4-3組均出現(xiàn)S期阻滯（p<0.01）,M/G1期細(xì)胞比例減少（p<0.01）,S、G2期細(xì)胞比例增多（P<0.05）。而pSilMAP4K4-2組與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性（p>0.05）。6.細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果經(jīng)無(wú)血清誘導(dǎo),與對(duì)照組比較,pSilMAP4K4-1、pSilMAP4K4-3組的HepG2細(xì)胞凋亡比例增多（p<0.05）,而pSilMAP4K4-2組與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性（p>0.05）。7.基因芯片檢測(cè)結(jié)果干擾前后肝癌細(xì)胞樣本的基因芯片檢測(cè)結(jié)果顯示MAP4K4基因敲減后,有一定數(shù)目與其相關(guān)的基因的表達(dá)有明顯改變（上調(diào)2倍以上或下調(diào)1/2以上）,參照TOLL樣信號(hào)傳導(dǎo)途徑通路圖進(jìn)行分析,我們發(fā)現(xiàn)MAP4K4基因在肝細(xì)胞癌中可能是通過(guò)NF-kB及JNK信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮作用的。結(jié)論:MAP4K4基因敲減可以阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)程,抑制肝癌細(xì)胞的惡性增殖,其機(jī)制可能是通過(guò)NF-kB信號(hào)傳導(dǎo)途徑、JNK信號(hào)傳導(dǎo)途徑發(fā)揮作用。
楊瑩珠[8]（2009）在《趨化因子配體18基因與卵巢腫瘤的關(guān)系研究》文中研究說(shuō)明卵巢惡性腫瘤以其發(fā)病隱匿、癥狀不明顯、進(jìn)展迅速、早期發(fā)現(xiàn)率低以及生物學(xué)特性錯(cuò)綜復(fù)雜,加之術(shù)后易復(fù)發(fā),5年生存率徘徊在25%至30%,而成為目前女性生殖器惡性腫瘤中威脅最大的疾病。目前CA125在臨床上得到廣泛應(yīng)用,但臨床實(shí)踐表明單一指標(biāo)對(duì)于早期卵巢癌的診斷特異性、敏感性?xún)H能達(dá)到25～30%,各種新的腫瘤標(biāo)志物仍然無(wú)法替代CA125的診斷效果。而各種影像學(xué)檢查和外科手術(shù)存在費(fèi)用高、創(chuàng)傷大等缺點(diǎn),對(duì)于早期卵巢惡性腫瘤婦女診斷率低。故尋找一種更加可信的腫瘤標(biāo)志物,以提高臨床早期診斷率,改善患者預(yù)后已成為急需。趨化因子配體18是一種炎性趨化性小分子分泌蛋白,但新近的研究表明,CCL18可以起著局部抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)因子的作用,從而影響腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為及患者的預(yù)后。本研究是在課題組先期使用表面增強(qiáng)激光解吸離子化-飛行時(shí)間質(zhì)譜（SELDI-TOF-MS）結(jié)合IMAC-Cu和WCX-2蛋白質(zhì)芯片分析卵巢惡性腫瘤患者與卵巢良性病變患者和健康人血清差異蛋白表達(dá)譜,篩選出31個(gè)潛在血清標(biāo)志物蛋白,其中被鑒定為CCL18的標(biāo)志蛋白對(duì)卵巢惡性腫瘤臨床判斷具有重要意義的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討趨化因子配體18在卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)及其在卵巢惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用。本研究通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)CCL18與人卵巢癌的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系進(jìn)行了研究,取得以下學(xué)術(shù)進(jìn)展:1、通過(guò)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)31例卵巢惡性腫瘤組織、14例良性卵巢腫瘤組織及14例正常卵巢組織中CCL18的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)CCL18在卵巢惡性腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率和表達(dá)量明顯高于良性和正常卵巢組織（p＜0.05）;分析CCL18的表達(dá)量與卵巢惡性腫瘤的臨床病理及預(yù)后聯(lián)系,結(jié)果均無(wú)明顯相關(guān)。2、通過(guò)基因工程技術(shù),構(gòu)建PET SUMO-CCL18原核表達(dá)質(zhì)粒,并表達(dá)、純化獲得趨化因子配體18的重組成熟肽段。進(jìn)一步將此肽段作為標(biāo)準(zhǔn)品,使用LCM聯(lián)合免疫磁珠及MALDI-TOF檢測(cè)不同卵巢上皮細(xì)胞中CCL18蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)卵巢惡性腫瘤上皮細(xì)胞確實(shí)表達(dá)CCL18蛋白,且表達(dá)陽(yáng)性率高（9/10）,良性卵巢上皮細(xì)胞中CCL18表達(dá)率50%,正常卵巢上皮細(xì)胞無(wú)明顯CCL18蛋白表達(dá)。3、檢測(cè)各種體外培養(yǎng)的卵巢上皮癌細(xì)胞株發(fā)現(xiàn)有CCL18基因的表達(dá)。構(gòu)建CCL18真核表達(dá)載體,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)了解CCL18過(guò)表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示SKOV3-CCL18組處于增殖狀態(tài)（S+G2+M）的細(xì)胞為32.8%,較對(duì)照組明顯增加（p＜0.05）;CCL18組和對(duì)照組的生長(zhǎng)曲線無(wú)明顯區(qū)別;SKOV3細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前后的侵襲能力、粘附能力及遷移能力均有明顯增加（p＜0.05）。4、構(gòu)建CCL18的RNAi真核載體,轉(zhuǎn)染卵巢上皮癌細(xì)胞株SKOV3后測(cè)定細(xì)胞功能,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示干擾組細(xì)胞倍增時(shí)間無(wú)明顯變化;干擾組細(xì)胞周期中處于增殖狀態(tài)（S+G2+M）的細(xì)胞明顯減少;侵襲、遷移、粘附實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)干擾組細(xì)胞有明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）?？傊?本研究在體外培養(yǎng)的卵巢上皮癌細(xì)胞及冰凍切片的卵巢上皮癌細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)有CCL18表達(dá),且其在卵巢惡性腫瘤中的表達(dá)明顯高于卵巢良性腫瘤及正常卵巢,體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)表明CCL18對(duì)卵巢上皮癌細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移也有明顯相關(guān)。表明CCL18有潛力成為卵巢上皮癌的早期診斷標(biāo)志物和分子靶點(diǎn)。
陳少渠[9]（2006）在《AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對(duì)AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究》文中研究指明禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）的非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1）可作為一種區(qū)分野毒感染和滅活疫苗免疫雞群的鑒別診斷標(biāo)記，但不能區(qū)分AIV亞型，具有A型流感特異性。本文利用本河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含有H9N2亞型AIV NS1蛋白基因的重組表達(dá)載體陽(yáng)性菌，在37℃條件下，用終濃度1mmol／L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)5h，經(jīng)15％的SDS-PAGE分析，表明NS1基因在大腸桿菌中得到高效表達(dá)。用HisTrap HP Kit進(jìn)行復(fù)性和純化，獲得了純度較高、生物活性較好的NS1蛋白。以此NS1蛋白作為抗原免疫Balb／c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，通過(guò)ELISA篩選，建立了2株抗H9N2亞型AIV NS1單克隆抗體（Monoclonal Antibody，McAb，簡(jiǎn)稱(chēng)單抗）雜交瘤細(xì)胞株689和6C2，其分泌單抗抗能力穩(wěn)定。將2株雜交瘤細(xì)胞株分別注射小鼠收獲的腹水單抗效價(jià)分別為100×212和100×210。制備的單抗有良好的熱穩(wěn)定性和較高的特異性，只與AIVNS1蛋白反應(yīng)，而與H5N2亞型AIV、H9N2亞型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76V均不發(fā)生反應(yīng)。NS1蛋白單抗的成功研制為利用該單抗開(kāi)發(fā)一種快速、特異、敏感的鑒別野毒感染禽群和疫苗免疫禽群的方法及進(jìn)一步研制診斷試紙條或組裝成試劑盒奠定了基礎(chǔ)，也為深入研究NS1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能奠定了良好的基礎(chǔ)，對(duì)AI的早期診斷、適時(shí)監(jiān)控和凈化具有重要現(xiàn)實(shí)意義。 目前H9亞型AI仍是我國(guó)的流行主型，由于AIV抗原性和致病力的易變異性及不同血清型毒株間缺乏交叉保護(hù)性，加大了AI防制的難度。本試驗(yàn)將本實(shí)驗(yàn)室已建立的4株抗H9N2亞型AIV血凝素（HA）單克隆抗體與保存的1998-2005年間的25株H9N2亞型AIV毒株進(jìn)行交叉ELISA試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同H9N2亞型AIV毒株血凝素（HA）抗原表位及毒力有明顯差異，可將25株H9N2型AIV毒株分為4類(lèi)，進(jìn)一步證實(shí)了不同H9N2型AIV毒株HA抗原表位和毒力的變異性和多態(tài)性。其中2株毒株（A3和A18）比較特殊，與4株H9N2亞型AIV HA單抗均不發(fā)生反應(yīng)，缺少4株單抗所識(shí)別的HA抗原表位，但其毒力很強(qiáng)。對(duì)25株H9N2亞型AIV毒株進(jìn)行深入研究將對(duì)H9N2型AIV的防制在理論和實(shí)踐上均具有一定的指導(dǎo)意義。
任可[10]（2006）在《三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下長(zhǎng)骨干骨折愈合的生物學(xué)特征與相關(guān)成骨信號(hào)機(jī)制的研究》文中研究表明目的:明確SMC產(chǎn)生的特殊三維記憶應(yīng)力環(huán)境下長(zhǎng)骨干骨折愈合的生物學(xué)特征,并探索這種特殊應(yīng)力通過(guò)何種途徑啟動(dòng)了骨折愈合所需的一系列生物學(xué)效應(yīng)。方法:建立新西蘭兔肱骨干骨折內(nèi)固定模型,分別用SMC和DCP固定,部分SMC固定的動(dòng)物以Celecoxib抑制COX-2活性。術(shù)后通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)標(biāo)本中COX-1和COX-2基因mRNA在不同時(shí)期的表達(dá)量;通過(guò)放射免疫測(cè)定法檢測(cè)了骨折局部PGE2和cAMP的含量變化;通過(guò)紫外分光光度計(jì)方法測(cè)定骨痂礦物質(zhì)代謝指標(biāo);通過(guò)組織形態(tài)學(xué)方法對(duì)各組的骨折愈合過(guò)程進(jìn)行了動(dòng)態(tài)觀察;并用RT-PCR反應(yīng)測(cè)定了若干細(xì)胞外基質(zhì)蛋白基因的表達(dá)趨勢(shì)。結(jié)果:術(shù)后3—4周時(shí)SMC固定的動(dòng)物骨折間隙處骨痂標(biāo)本的COX-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量和PGE2、cAMP含量明顯高于DCP固定者。相應(yīng)的,此時(shí)SMC固定者骨折間隙處骨痂標(biāo)本中鈣磷含量、Ⅰ型膠原和骨鈣素基因表達(dá)量以及血清中骨特異性堿性磷酸酶活性也均明顯升高;軟骨內(nèi)成骨和編織骨骨痂的形成較早。抑制SMC應(yīng)力環(huán)境下COX-2的活性及PGE2和cAMP的合成之后,礦物質(zhì)代謝、軟骨內(nèi)骨化和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白基因的表達(dá)也均受到抑制。結(jié)論:SMC的特殊三維記憶應(yīng)力環(huán)境可以促進(jìn)骨痂細(xì)胞外基質(zhì)的礦化和軟骨內(nèi)成骨,從而加速骨折愈合,而且該效應(yīng)與COX-2、PGE2、cAMP這一信號(hào)途徑密切相關(guān)。
二、AB_4亞型伴血清中含有非特異凝集素1例（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、AB_4亞型伴血清中含有非特異凝集素1例（論文提綱范文）
（1）N-糖鏈/糖肽純化與免疫球蛋白G Fc糖基化定量分析研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符號(hào)表 |
| 1 緒論 |
| 1.1 蛋白質(zhì)的糖基化 |
| 1.1.1 蛋白質(zhì)糖基化類(lèi)型 |
| 1.1.2 蛋白質(zhì)糖基化的修飾過(guò)程 |
| 1.1.3 蛋白質(zhì)N-糖基化的生物學(xué)功能 |
| 1.1.4 蛋白質(zhì)N-糖基化與疾病 |
| 1.2 蛋白質(zhì)N-糖基化定性分析技術(shù) |
| 1.2.1 N-糖鏈/糖肽的釋放 |
| 1.2.2 N-糖鏈/糖肽的富集 |
| 1.2.3 N-糖鏈的衍生化 |
| 1.2.4 N-糖鏈/糖肽的結(jié)構(gòu)表征 |
| 1.2.5 糖芯片的制備 |
| 1.3 蛋白質(zhì)N-糖基化定量分析 |
| 1.3.1 糖鏈水平的定量分析 |
| 1.3.2 糖肽水平的定量分析 |
| 1.4 免疫球蛋白質(zhì)G的N-糖基化定量分析 |
| 1.4.1 免疫球蛋白質(zhì)G結(jié)構(gòu)與功能 |
| 1.4.2 免疫球蛋白質(zhì)G糖基化與疾病 |
| 1.4.3 血清/單抗中免疫球蛋白質(zhì)G Fc-糖基化的定量分析 |
| 1.5 本論文的選題思想和研究?jī)?nèi)容 |
| 2 雞卵清蛋白N-糖鏈的純化制備、結(jié)構(gòu)表征與糖芯片分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 2.2.1 材料和試劑 |
| 2.2.2 雞卵清蛋白N-糖鏈的釋放 |
| 2.2.3 雞卵清蛋白N-糖鏈的富集 |
| 2.2.4 雞卵清蛋白N-糖鏈的二維分離純化 |
| 2.2.5 雞卵清蛋白N-糖鏈的純度分析與結(jié)構(gòu)表征 |
| 2.2.6 雞卵清蛋白N-糖鏈的芯片制備與驗(yàn)證分析 |
| 2.2.7 糖鏈的命名 |
| 2.3 結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 雞卵清蛋白N-糖鏈的二維HILIC×PGC純化 |
| 2.3.2 雞卵清蛋白N-糖鏈的純度分析與結(jié)構(gòu)表征 |
| 2.3.3 雞卵清蛋白N-糖鏈的芯片制備以及與凝集素結(jié)合分析 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 3 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的純化制備與結(jié)構(gòu)表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 3.2.1 材料和試劑 |
| 3.2.2 人免疫球蛋白G的酶解 |
| 3.2.3 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的反相分段富集 |
| 3.2.4 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的二維親水純化制備 |
| 3.2.5 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的純度分析與結(jié)構(gòu)表征 |
| 3.2.6 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的去糖基化分析 |
| 3.2.7 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的含量測(cè)定 |
| 3.3 結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的反相分段 |
| 3.3.2 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的二維HILIC×HILIC純化制備 |
| 3.3.3 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的純度分析與結(jié)構(gòu)表征 |
| 3.3.4 人免疫球蛋白G Fc-糖肽的含量測(cè)定 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 4 人血清中高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)定量分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 4.2.1 材料和試劑 |
| 4.2.2 人血清的胰蛋白酶酶解 |
| 4.2.3 人血清中IgG-1 Fc-糖肽的反相分段富集 |
| 4.2.4 人血清中1 1種高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)定量分析 |
| 4.2.5 人血清中IgG-1 Fc-糖基化位點(diǎn)覆蓋率的測(cè)定 |
| 4.2.6 數(shù)據(jù)分析 |
| 4.3 結(jié)果與討論 |
| 4.3.1 人血清中11種高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)定量分析方法的建立 |
| 4.3.2 人血清中11種高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)和相對(duì)定量分析比較 |
| 4.3.3 急性心肌梗死患者血清中11種高豐度IgG-1 Fc-糖肽的絕對(duì)定量分析 |
| 4.4 本章小結(jié) |
| 5 單克隆抗體藥物Fc糖基化的絕對(duì)定量分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 5.2.1 材料和試劑 |
| 5.2.2 融合蛋白中IgG-1 Fc-糖肽的釋放 |
| 5.2.3 融合蛋白中IgG-1 Fc -糖肽的反相分段 |
| 5.2.4 融合蛋白中低豐度IgG-1 Fc-糖肽的二維純化制備與表征 |
| 5.2.5 純化制備IgG-1 Fc-糖肽的含量測(cè)定 |
| 5.2.6 單克隆抗體藥物中Fc-糖肽的定量分析 |
| 5.2.7 單克隆抗體位點(diǎn)覆蓋率的測(cè)定 |
| 5.2.8 單克隆抗體Fc-糖鏈的HILIC-FD相對(duì)定量分析 |
| 5.2.9 單克隆抗體Fc-糖肽的MALDI-MS定量分析 |
| 5.2.10 數(shù)據(jù)分析 |
| 5.3 結(jié)果與討論 |
| 5.3.1 IgG1 Fc融合蛋白中低豐度IgG-1 Fc-糖肽的二維純化制備與表征 |
| 5.3.2 曲妥珠單抗中Fc-糖基化定量分析 |
| 5.3.3 采用校正標(biāo)準(zhǔn)品的HILIC-MRM策略在其他IgG1型單克隆抗體藥物Fc-糖基化定量分析中的應(yīng)用 |
| 5.4 本章小結(jié) |
| 6 結(jié)論與展望 |
| 6.1 結(jié)論 |
| 6.2 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 6.3 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄A 純化制備糖鏈負(fù)離子Nano-ESI-MS質(zhì)譜圖 |
| 附錄B 純化制備糖鏈負(fù)離子ESI-MS/MS質(zhì)譜圖 |
| 附錄C 純化制備糖鏈D系列離子負(fù)離子MS~3質(zhì)譜圖 |
| 附錄D 高豐度IgG-1 Fc-糖肽負(fù)離子ESI-MSMS質(zhì)譜圖 |
| 附錄E 高豐度IgG-1 Fc-糖肽正離子ESI-MSMS質(zhì)譜圖 |
| 附錄F 高豐度IgG-2 Fc-糖肽負(fù)離子ESI-MSMS質(zhì)譜圖 |
| 附錄G 低豐度IgG-1 Fc-糖肽負(fù)離子ESI-MSMS質(zhì)譜圖 |
| 攻讀博士學(xué)位期間科研項(xiàng)目及科研成果 |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（2）濱海新區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者ABO亞型血清學(xué)特性及等位基因突變位點(diǎn)的分析（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語(yǔ) |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀 |
| 研究目的 |
| 研究方法 |
| 對(duì)象和方法 |
| 1.1 研究對(duì)象 |
| 1.2 試驗(yàn)材料 |
| 1.2.1 主要儀器 |
| 1.2.2 主要耗材 |
| 1.2.3 主要試劑 |
| 1.3 試驗(yàn)方法 |
| 1.3.1 ABO血型檢測(cè) |
| 1.3.2 ABO亞型鑒定 |
| 1.4 數(shù)據(jù)分析 |
| 結(jié)果 |
| 2.1 ABO亞型血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.2 ABO亞型基因測(cè)序結(jié)果 |
| 2.3 進(jìn)化保守性分析結(jié)果 |
| 2.4 PyMOL軟件建立糖基轉(zhuǎn)移酶空間模型 |
| 討論 |
| 3.1 ABO亞型血清學(xué)特性研究 |
| 3.2 ABO亞型測(cè)序結(jié)果分析 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明 |
| 綜述 ABO亞型檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展 |
| 綜述參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（3）抗菌肽對(duì)建鯉生長(zhǎng)性能及免疫功能影響的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 抗菌肽的分類(lèi)、生物學(xué)功能及作用機(jī)制 |
| 1.2 抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究進(jìn)展 |
| 1.3 魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)組成 |
| 1.4 魚(yú)類(lèi)細(xì)胞因子 |
| 本研究的目的意義 |
| 技術(shù)路線 |
| 第二篇 研究?jī)?nèi)容 |
| 第一章 抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種生長(zhǎng)、消化酶活性及臟體指數(shù)的影響 |
| 1.1 材料與方法 |
| 1.2 結(jié)果與分析 |
| 1.3 討論 |
| 1.4 小結(jié) |
| 第二章 抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種肌肉成分及氨基酸、脂肪酸含量的影響 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.2 結(jié)果與分析 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種血清生化指標(biāo)及抗氧化酶活性的影響 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 抗菌肽對(duì)建鯉魚(yú)種免疫相關(guān)酶活性及細(xì)胞因子含量的影響 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 抗菌肽對(duì)建鯉肝臟組織IGF-ImRNA和IL-1βmRNA表達(dá)量的影響 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.2 結(jié)果與分析 |
| 5.3 討論 |
| 5.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點(diǎn) |
| 存在的不足與建議 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 英文縮寫(xiě) |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 致謝 |
（4）構(gòu)樹(shù)葉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1. 中藥免疫增強(qiáng)劑對(duì)機(jī)體免疫功能的研究現(xiàn)狀 |
| 1.1 中藥對(duì)非特異性免疫的影響 |
| 1.2 中藥對(duì)體液免疫的影響 |
| 1.3 中藥對(duì)細(xì)胞免疫的的影響 |
| 2. 構(gòu)樹(shù)的地理分布及生物學(xué)特性 |
| 3. 構(gòu)樹(shù)的藥用價(jià)值 |
| 3.1 葉的藥用 |
| 3.2 果實(shí)的藥用 |
| 3.3 根的藥用 |
| 3.4 乳汁的藥用 |
| 4. 構(gòu)樹(shù)葉中的營(yíng)養(yǎng)成分及抗?fàn)I養(yǎng)因子 |
| 4.1 構(gòu)樹(shù)葉的特殊結(jié)構(gòu)和營(yíng)養(yǎng)成分 |
| 4.2 構(gòu)樹(shù)葉中的抗?fàn)I養(yǎng)因子 |
| 4.2.1 單寧的分類(lèi) |
| 4.2.2 單寧的毒性 |
| 4.3 單寧對(duì)動(dòng)物的影響 |
| 4.3.1 單寧對(duì)動(dòng)物繁殖的影響 |
| 4.3.2 單寧對(duì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)的影響 |
| 4.3.3 單寧對(duì)動(dòng)物致病微生物的影響 |
| 4.3.4 單寧對(duì)動(dòng)物免疫的影響 |
| 4.4 單寧的處理措施 |
| 5. 構(gòu)樹(shù)葉在畜牧業(yè)中的應(yīng)用現(xiàn)狀 |
| 6. 構(gòu)樹(shù)葉開(kāi)發(fā)利用中應(yīng)該注意的問(wèn)題 |
| 7. 本試驗(yàn)研究的內(nèi)容、目的和意義 |
| 第二章 試驗(yàn)研究 |
| 試驗(yàn)一構(gòu)樹(shù)葉對(duì)產(chǎn)蛋中期蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)及血液生化指標(biāo)的影響 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 試驗(yàn)材料 |
| 1.1.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑 |
| 1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.1.3 試驗(yàn)試劑及儀器 |
| 1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成 |
| 1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 1.2.2 日糧組成 |
| 1.3 飼養(yǎng)管理 |
| 1.4 樣本的采集與處理 |
| 1.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法 |
| 1.5.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) |
| 1.5.2 雞蛋品質(zhì)指標(biāo) |
| 1.5.3 血液生化指標(biāo)的測(cè)定 |
| 1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 |
| 2.1.1 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響 |
| 2.1.2 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)蛋重、采食量、料蛋比的影響 |
| 2.2 構(gòu)樹(shù)葉飼料添加劑對(duì)蛋品質(zhì)的影響 |
| 2.2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼相對(duì)重、哈夫單位的影響 |
| 2.2.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃顏色、蛋黃系數(shù)、蛋黃相對(duì)重、蛋黃含水量、蛋清含水量的影響 |
| 2.2.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋清(黃)中蛋白質(zhì)、蛋黃中脂肪/鮮蛋重、蛋黃中膽固醇含量的影響 |
| 2.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞血液生化指標(biāo)相關(guān)指標(biāo)的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 |
| 3.1.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響 |
| 3.1.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋重、產(chǎn)蛋率、采食量、料蛋比的影響 |
| 3.2 構(gòu)樹(shù)葉飼料添加劑對(duì)蛋品質(zhì)的影響 |
| 3.2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼相對(duì)重、哈夫單位的影響 |
| 3.2.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃顏色、蛋黃系數(shù)、蛋黃相對(duì)重、蛋黃含水量、蛋清含水量的影響 |
| 3.2.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋清(黃)中蛋白質(zhì)、蛋黃中脂肪/鮮蛋重的影響 |
| 3.2.4 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃中膽固醇的影響 |
| 3.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞血液指標(biāo)相關(guān)指標(biāo)的影響 |
| 試驗(yàn)二構(gòu)樹(shù)葉對(duì)產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 試驗(yàn)材料 |
| 1.1.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑 |
| 1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.1.3 試驗(yàn)試劑及儀器 |
| 1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及日糧組成 |
| 1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) |
| 1.2.2 日糧組成 |
| 1.3 飼養(yǎng)管理 |
| 1.4 樣本的采集與處理 |
| 1.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法 |
| 1.5.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) |
| 1.5.2 雞蛋品質(zhì)指標(biāo) |
| 1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 |
| 2.1.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響 |
| 2.1.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋重、采食量、料蛋比的影響 |
| 2.2 構(gòu)樹(shù)葉飼料添加劑對(duì)蛋品質(zhì)的影響 |
| 2.2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼相對(duì)重、哈夫單位的影響 |
| 2.2.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃顏色、蛋黃系數(shù)、蛋黃相對(duì)重、蛋黃含水量、蛋清含水量的影響 |
| 2.2.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋清(黃)中蛋白質(zhì)、蛋黃中脂肪/鮮蛋重、蛋黃中膽固醇含量的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 |
| 3.1.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率的影響 |
| 3.1.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋重、產(chǎn)蛋量、采食量、料蛋比的影響 |
| 3.2 構(gòu)樹(shù)葉飼料添加劑對(duì)蛋品質(zhì)的影響 |
| 3.2.1 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼相對(duì)重、哈夫單位的影響 |
| 3.2.2 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃顏色、蛋黃系數(shù)、蛋黃相對(duì)重、蛋黃含水量、蛋清含水量的影響 |
| 3.2.3 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋清(黃)中蛋白質(zhì)、蛋黃中脂肪/鮮蛋重的影響 |
| 3.2.4 構(gòu)樹(shù)葉添加劑對(duì)蛋黃中膽固醇的影響 |
| 試驗(yàn)三構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞免疫功能的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 |
| 1.2 試驗(yàn)儀器 |
| 1.3 試驗(yàn)藥品與試劑 |
| 1.4 構(gòu)樹(shù)葉來(lái)源及處理 |
| 1.5 飼養(yǎng)管理 |
| 1.6 測(cè)定指標(biāo)與方法 |
| 1.6.1 體液免疫的測(cè)定（ND、AI 抗體水平測(cè)定） |
| 1.6.2 非特異性免疫的測(cè)定(免疫器官指數(shù)的測(cè)定) |
| 1.6.3 細(xì)胞免疫的測(cè)定 |
| 1.7 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞體液免疫的影響（ND、AI 抗體水平的影響） |
| 2.2 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞免疫器官指數(shù)的影響 |
| 2.3 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞細(xì)胞免疫的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞體液免疫的影響 |
| 3.2 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞非特異性免疫的影響 |
| 3.3 構(gòu)樹(shù)葉對(duì)雛雞細(xì)胞免疫的影響 |
| 第三章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在讀期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文 |
| 作者簡(jiǎn)歷 |
| 致謝 |
（5）人TSHβ新剪接變體生物學(xué)特性探討（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語(yǔ) |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TSHβ剪接變體在正常人外周血中的研究 |
| 1.1 對(duì)象與方法 |
| 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1.2 TSHβ剪接變體蛋白在血清中的檢測(cè) |
| 1.1.3 RT-PCR方法鑒定人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 1.1.4 Western Blot方法鑒定人PBL中TSH剪接變體蛋白表達(dá) |
| 1.1.5 免疫熒光標(biāo)記人PBL中TSHβ剪接變體表達(dá) |
| 1.2 結(jié)果 |
| 1.2.1 在正常人血清中存在TSH剪接變體 |
| 1.2.2 正常人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 1.2.3 正常人胎盤(pán)中TSH剪接變體mRNA表達(dá) |
| 1.2.4 正常人PBL中TSHβ剪接變體蛋白表達(dá) |
| 1.2.5 免疫熒光標(biāo)記人PBL中TSHβ剪接變體表達(dá) |
| 1.3 討論 |
| 1.3.1 血漿蛋白質(zhì)組成及特性 |
| 1.3.2 血清樣品前處理 |
| 1.3.3 血清中存在TSHβ剪接變體蛋白 |
| 1.3.4 人PBL表達(dá)TSHβ剪接變體蛋白 |
| 1.4 小結(jié) |
| 二、人TSHα與TSHβ剪接變體體外結(jié)合驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) |
| 2.1 對(duì)象與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 人TSHα基因的克隆與表達(dá) |
| 2.1.3 人TSHβ剪接變體的克隆與表達(dá) |
| 2.1.4 Co-IP鑒定TSHα是否和TSHβ剪接變體形成二聚體 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 人TSHα基因的成功克隆與表達(dá) |
| 2.2.2 人TSHβ剪接變體的成功克隆與表達(dá) |
| 2.2.3 TSHα能與TSHβ剪接變體形成二聚體 |
| 2.3 討論 |
| 2.3.1 建立穩(wěn)定表達(dá)TSHα的CHO細(xì)胞系 |
| 2.3.2 建立穩(wěn)定表達(dá)TSHβ剪接變體的CHO細(xì)胞系 |
| 2.3.3 TSHβ剪接變體能與TSHα形成二聚體 |
| 2.3.4 TSHβ剪接變體能與TSHα形成二聚體的生物學(xué)意義 |
| 2.4 小結(jié) |
| 三、不同病理生理?xiàng)l件對(duì)TSHβ剪接變體表達(dá)影響 |
| 3.1 對(duì)象與方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 GD和HT患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)差異 |
| 3.1.3 LPS影響人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 3.1.4 地塞米松影響人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 3.1.5 TRH和T_3影響人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 3.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 HT患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)差異 |
| 3.2.2 GD患者PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)差異 |
| 3.2.3 PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)與血FT_3、FT_4、TSH及BMI相關(guān)性 |
| 3.2.4 LPS刺激人PBL后TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)變化 |
| 3.2.5 地塞米松刺激人PBL后TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)變化 |
| 3.2.6 TRH刺激人PBL后TSHβ剪接變體mRNA表達(dá)變化 |
| 3.2.7 T_3刺激人PBL后TSHp剪接變體mRNA表達(dá)變化 |
| 3.3 討論 |
| 3.3.1 定量PCR數(shù)據(jù)處理方法的選擇 |
| 3.3.2 TSHβ剪接變體在HT和GD患者PBL中的差異表達(dá) |
| 3.3.3 TSHβ剪接變體在LPS致炎過(guò)程中的表達(dá)變化 |
| 3.3.4 地塞米松抑制人PBL中TSHβ剪接變體mRNA表達(dá) |
| 3.3.5 TRH和T_3影響人PBL中TSHβ剪接變體表達(dá) |
| 3.3.6 TSHβ剪接變體可能的免疫調(diào)控作用 |
| 3.4 小結(jié) |
| 四、人TSH剪接變體蛋白的原核表達(dá)與純化 |
| 4.1 對(duì)象與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.1.2 人TSHβ剪接變體全編碼區(qū)序列的獲取 |
| 4.1.3 構(gòu)建PET-28a-TSHβ剪接變體原核表達(dá)載體 |
| 4.1.4 IPTG誘導(dǎo)表達(dá) |
| 4.1.5 免疫親合層析純化目的蛋白 |
| 4.1.6 誘導(dǎo)表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE電泳鑒定 |
| 4.1.7 BCA法蛋白定量 |
| 4.1.8 Western Blot鑒定融合蛋白的抗原性 |
| 4.2 結(jié)果 |
| 4.2.1 獲取人TSHβ剪接變體全編碼區(qū)序列 |
| 4.2.2 鑒定PET-28a-TSHβ剪接變體重組表達(dá)質(zhì)粒 |
| 4.2.3 免疫親和層析純化TSH剪接變體重組蛋白 |
| 4.2.4 蛋白定量 |
| 4.2.5 Western Blot鑒定TSHβ剪接變體融合蛋白的抗原性 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 全文結(jié)論 |
| 論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明 |
| 附錄 |
| 綜述 |
| 促甲狀腺激素與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展 |
| 綜述參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（6）Fortilin和TAT融合蛋白在畢赤酵母的表達(dá)及對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫功能的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 綜述 |
| 第一節(jié) 對(duì)蝦抗病毒病感染功能分子的研究進(jìn)展 |
| 1 Toll 受體 |
| 2 C-型凝集素 |
| 3 抗脂多糖因子 |
| 4 酚氧化酶原活化系統(tǒng) |
| 5 其他相關(guān)分子 |
| 6 總結(jié)與展望 |
| 第二節(jié) Fortilin 蛋白研究進(jìn)展 |
| 1 Fortilin 的結(jié)構(gòu)特性 |
| 2 Fortilin 的生物活性 |
| 2.1 分子間相互作用 |
| 2.2 細(xì)胞內(nèi)重要性 |
| 2.3 細(xì)胞外活性 |
| 3 對(duì)蝦中Fortilin 的研究概況 |
| 第三節(jié) 穿膜肽TAT 及其應(yīng)用研究進(jìn)展 |
| 1 TAT 的結(jié)構(gòu) |
| 2 TAT 的穿膜機(jī)制 |
| 3 TAT 應(yīng)用 |
| 第二章 Fortilin 和 TAT 融合蛋白在畢赤酵母的表達(dá) |
| 第一節(jié) 融合基因的克隆 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 凡納濱對(duì)蝦Fortilin 基因的擴(kuò)增 |
| 2.2 GFP 基因的擴(kuò)增 |
| 2.3 融合基因的獲得 |
| 2.4 TAT-Fortilin 和Fortilin-TAT 基因的獲得 |
| 3 小結(jié) |
| 第二節(jié) 融合基因的亞克隆 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 重組質(zhì)粒PCR 鑒定 |
| 2.2 重組質(zhì)粒的NDA 序列測(cè)定 |
| 3 小結(jié) |
| 第三節(jié) 融合基因在畢赤酵母的分泌表達(dá) |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 重組質(zhì)粒的大量提取 |
| 2.2 重組畢赤酵母的PCR 鑒定 |
| 2.3 重組酵母發(fā)酵上清的SDS-PAGE 檢測(cè) |
| 2.4 重組表達(dá)蛋白的質(zhì)譜檢測(cè) |
| 3 小結(jié) |
| 4 分析與討論 |
| 4.1 重疊延伸PCR |
| 4.2 高保真聚合酶的使用 |
| 4.3 畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng) |
| 4.4 目的蛋白的表達(dá) |
| 第三章 重組蛋白體外活性研究 |
| 第一節(jié) 重組融合蛋白體外穿膜遞送研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞原代培養(yǎng) |
| 2.2 融合蛋白體外培養(yǎng)血細(xì)胞穿膜效果 |
| 2.3 融合蛋白離體腸道穿膜觀察 |
| 3 小結(jié) |
| 第二節(jié) 重組融合蛋白體外免疫活性研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 對(duì)蝦白斑病毒的制備 |
| 2.2 WSSV 病毒體外感染濃度確定 |
| 2.3 重組蛋白對(duì)血細(xì)胞免疫酶活的影響 |
| 3 分析與討論 |
| 3.1 凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞原代培養(yǎng) |
| 3.2 TAT 引導(dǎo)的Fortilin 體外穿膜作用 |
| 3.3 重組蛋白的免疫活性 |
| 第四章 飼料中添加重組蛋白對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 重組蛋白凍干粉的制備 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)飼料的制作 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.4 飼養(yǎng)管理 |
| 1.5 對(duì)蝦樣品的采集、分析 |
| 1.6 攻毒實(shí)驗(yàn) |
| 1.7 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.1 血細(xì)胞計(jì)數(shù) |
| 2.2 呼吸爆發(fā)活性 |
| 2.3 酚氧化酶活性 |
| 2.4 超氧化物歧化酶活性 |
| 2.5 一氧化氮合酶活性 |
| 2.6 攻毒結(jié)果 |
| 3 分析與討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 附錄 |
（7）MAP4K4在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 第2章 肝細(xì)胞癌基因表達(dá)譜的初步研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.3 討論 |
| 第3章 MAP4K4 在肝癌細(xì)胞株及肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá) |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 第4章 MAP4K4 對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 第5章 全文總結(jié) |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
（8）趨化因子配體18基因與卵巢腫瘤的關(guān)系研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文略寫(xiě)縮語(yǔ)列表 |
| 第一章 卵巢腫瘤血清診斷標(biāo)志物篩選及臨床驗(yàn)證研究近況(文獻(xiàn)綜述) |
| 1 卵巢惡性腫瘤概述 |
| 1.1 卵巢惡性腫瘤的發(fā)病率及可能的致病因素 |
| 1.2 卵巢惡性腫瘤的主要診斷與鑒別診斷模式及存在的問(wèn)題 |
| 2、卵巢腫瘤血清診斷標(biāo)志物研究近況 |
| 2.1 血清抗原抗體類(lèi)診斷標(biāo)記物 |
| 2.2 激素類(lèi)標(biāo)志物 |
| 2.3 酶類(lèi)標(biāo)志物 |
| 2.4 肽類(lèi)標(biāo)志物 |
| 2.5 多指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的應(yīng)用價(jià)值 |
| 3、卵巢惡性腫瘤的分子診斷及判斷預(yù)后的研究現(xiàn)況 |
| 3.1 癌基因檢測(cè)做為卵巢惡性腫瘤診斷及判斷預(yù)后的臨床價(jià)值 |
| 3.2 抑癌基因檢測(cè)做為卵巢惡性腫瘤診斷及判斷預(yù)后的臨床價(jià)值 |
| 3.3 生長(zhǎng)因子檢測(cè)做為卵巢惡性腫瘤診斷及判斷預(yù)后的臨床價(jià)值 |
| 3.4 細(xì)胞DNA及RNA含量檢測(cè)的臨床價(jià)值 |
| 3.5 多分子指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的臨床價(jià)值 |
| 4、卵巢腫瘤血清潛在診斷標(biāo)志物篩選及臨床驗(yàn)證研究近況 |
| 4.1 血清潛在診斷標(biāo)志物篩選的主要方法及原理 |
| 4.2 卵巢腫瘤血清潛在診斷標(biāo)志物篩選現(xiàn)況 |
| 4.3 已篩選出的卵巢腫瘤血清潛在診斷標(biāo)志物臨床驗(yàn)證現(xiàn)況 |
| 5、趨化因子配體18基因與卵巢腫瘤的關(guān)系研究 |
| 5.1 CCL18基因概述 |
| 5.2 CCL18基因與惡性腫瘤的關(guān)系研究 |
| 5.3 CCL18基因與卵巢惡性腫瘤的關(guān)系研究 |
| 5.4 CCL18基因在卵巢惡性腫瘤診斷、鑒別診斷中的可能價(jià)值 |
| 6、本研究的目地和意義 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二章 趨化因子配體18基因在卵巢惡性腫瘤組織中的表達(dá)及臨床意義 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 臨床資料 |
| 1.2 主要試劑及配制 |
| 1.3 引物設(shè)計(jì)與合成 |
| 1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 卵巢腫瘤組織中CCL18基因mRNA表達(dá)的RT-PCR條件建立 |
| 2.2 趨化因子配體18的熒光定量PCR條件建立 |
| 2.3 各類(lèi)卵巢組織中的CCL18基因mRNA比較 |
| 2.4 卵巢癌組織中CCL18基因mRNA表達(dá)與其臨床病理的關(guān)系 |
| 2.5 利用壽命表法進(jìn)行生存分析 |
| 2.6 卵巢癌組織中CCL18基因mRNA表達(dá)與其預(yù)后的關(guān)系 |
| 3 討論 |
| 第三章 趨化因子配體18重組成熟肽段的表達(dá) |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 引物設(shè)計(jì)與合成 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 CCL18成熟蛋白表達(dá)序列的克隆 |
| 2.2 重組質(zhì)粒PET SUMO-CCL18的構(gòu)建 |
| 2.3 重組融合蛋白的表達(dá) |
| 2.4 MALDI-TOF-MS驗(yàn)證重組融合蛋白表達(dá) |
| 2.5 重組CCL18成熟肽段的表達(dá) |
| 3 討論 |
| 第四章 趨化因子配體18基因在卵巢腫瘤細(xì)胞中的定位及定量研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 臨床病例資料 |
| 1.2 主要試劑及配制 |
| 1.3 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 LCM捕獲各類(lèi)細(xì)胞的條件建立及捕獲效果 |
| 2.2 免疫磁珠聯(lián)合MALDI-TOF檢測(cè)各種細(xì)胞中CCL18的表達(dá)情況 |
| 2.3 不同卵巢上皮細(xì)胞中CCL18蛋白的定位 |
| 2.4 不同卵巢上皮細(xì)胞中CCL18蛋白的初步定量 |
| 3 討論 |
| 第五章 CCL18過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的卵巢上皮癌細(xì)胞系浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移體外實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 卵巢上皮癌組織中CCL18 cDNA全長(zhǎng)PCR擴(kuò)增結(jié)果 |
| 2.2 重組真核表達(dá)質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果 |
| 2.3 重組真核表達(dá)質(zhì)粒PCR結(jié)果 |
| 2.4 重組真核表達(dá)質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果 |
| 2.5 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后卵巢癌細(xì)胞SKOV3 CCL18表達(dá)測(cè)定結(jié)果 |
| 2.6 CCL18過(guò)表達(dá)對(duì)體外細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響 |
| 2.7 CCL18過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞周期的影響 |
| 2.8 CCL18過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞體外侵襲,遷移和粘附能力的影響 |
| 3 討論 |
| 第六章 RNA干擾卵巢上皮癌細(xì)胞系CCL18表達(dá)的體外實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 CCL18 SiRNA有效片斷篩選結(jié)果 |
| 2.2 CCL18 RNA干擾載體雙酶切和測(cè)序鑒定結(jié)果 |
| 2.3 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18 RNA干擾前后其mRNA表達(dá)測(cè)定 |
| 2.4 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18介導(dǎo)的生長(zhǎng)曲線比較 |
| 2.5 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18 RNA干擾前后生長(zhǎng)周期比較 |
| 2.6 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18 RNA干擾前后其外侵襲能力測(cè)定 |
| 2.7 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18 RNA干擾前后其外遷移能力測(cè)定 |
| 2.8 卵巢上皮癌細(xì)胞CCL18 RNA干擾前后其外粘附能力測(cè)定 |
| 3 討論 |
| 全文小節(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 |
（9）AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對(duì)AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 摘要 |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 試驗(yàn)一 H9N2 亞型禽流感病毒NS1蛋白單克隆抗體的研制 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果與分析 |
| 結(jié)論與討論 |
| 試驗(yàn)二 單抗介導(dǎo)的ELISA 對(duì)H9N2亞型禽流感病毒HA抗原表位變異的研究 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果與分析 |
| 結(jié)論與討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 英文摘要 |
| 附錄 |
（10）三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下長(zhǎng)骨干骨折愈合的生物學(xué)特征與相關(guān)成骨信號(hào)機(jī)制的研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下長(zhǎng)骨干骨折愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒑铜h(huán)氧化酶mRNA表達(dá)的研究 |
| 第二部分 三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下長(zhǎng)骨干骨折愈合時(shí)前列腺素 E2和 cAMP的含量變化 |
| 第三部分 三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下骨折愈合時(shí)骨痂鈣、磷含量和血中骨特異性堿性磷酸酶活性的變化 |
| 第四部分 三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下骨折愈合過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及部分機(jī)制探討 |
| 第五部分 三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下骨折愈合時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白mRNA的表達(dá)變化 |
| 結(jié)論 |
| 綜述 |
| 在讀期間發(fā)表文章 |
| 致謝 |
四、AB_4亞型伴血清中含有非特異凝集素1例（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]N-糖鏈/糖肽純化與免疫球蛋白G Fc糖基化定量分析研究[D]. 曹翠巖. 大連理工大學(xué), 2020
- [2]濱海新區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者ABO亞型血清學(xué)特性及等位基因突變位點(diǎn)的分析[D]. 邱麗. 天津醫(yī)科大學(xué), 2017(03)
- [3]抗菌肽對(duì)建鯉生長(zhǎng)性能及免疫功能影響的研究[D]. 董曉慶. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015(02)
- [4]構(gòu)樹(shù)葉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血液生化指標(biāo)及免疫功能的影響[D]. 李艷芝. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011(07)
- [5]人TSHβ新剪接變體生物學(xué)特性探討[D]. 劉春蓉. 天津醫(yī)科大學(xué), 2011(01)
- [6]Fortilin和TAT融合蛋白在畢赤酵母的表達(dá)及對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫功能的影響[D]. 周怡. 中國(guó)海洋大學(xué), 2011(02)
- [7]MAP4K4在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義[D]. 劉安文. 南昌大學(xué), 2009(03)
- [8]趨化因子配體18基因與卵巢腫瘤的關(guān)系研究[D]. 楊瑩珠. 廣西醫(yī)科大學(xué), 2009(10)
- [9]AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對(duì)AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究[D]. 陳少渠. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2006(04)
- [10]三維記憶應(yīng)力場(chǎng)下長(zhǎng)骨干骨折愈合的生物學(xué)特征與相關(guān)成骨信號(hào)機(jī)制的研究[D]. 任可. 第二軍醫(yī)大學(xué), 2006(09)
標(biāo)簽：抗菌肽論文; 肝細(xì)胞論文; 血清蛋白論文; 建鯉論文; 細(xì)胞免疫論文;