一、不同跟腱修復(fù)材料特性的臨床意義（論文文獻(xiàn)綜述）
魏旭[1]（2021）在《膠原/磷酸鈣仿生礦化材料的制備與優(yōu)化》文中研究指明骨修復(fù)材料是當(dāng)前臨床應(yīng)用最廣泛、實(shí)際需求量最大的生物醫(yī)用材料之一。研制理想的骨修復(fù)和骨替代材料已成為臨床醫(yī)學(xué)和生物材料領(lǐng)域的重要課題方向。與合成材料相比,由膠原和羥基磷灰石為主要基質(zhì)的仿生骨修復(fù)材料具有生物相容性好、能誘導(dǎo)骨質(zhì)再生等顯著優(yōu)勢(shì),是當(dāng)前骨修復(fù)材料研發(fā)最重要的方向之一。聚合物誘導(dǎo)液相前體理論（PILP）仿生礦化是膠原/磷酸鈣仿生骨修復(fù)材料制備的主流模式,但依然存在制備工藝流程長(zhǎng),產(chǎn)物礦化度不高,礦化產(chǎn)物構(gòu)造與天然骨差異性較大等顯著缺陷。為此,本文嘗試在PILP仿生礦化策略基礎(chǔ)上,采用全新的滴加礦化工藝,在膠原纖維重組凝膠上原位礦化,探索制備骨修復(fù)材料的新手段,進(jìn)一步改進(jìn)材料性能、提升產(chǎn)品仿生礦化程度。主要研究?jī)?nèi)容如下:（1）礦化工藝的選擇與優(yōu)化以牛跟腱膠原為原料制備膠原纖維重組凝膠,以聚丙烯酸（PAA）作為誘導(dǎo)劑,通過(guò)滴加高濃度的鈣離子、磷酸根離子溶液,在膠原纖維重組凝膠上進(jìn)行原位礦化,并對(duì)PAA的加入方式、加入量、氯化鈣溶液與磷酸氫二鉀溶液加入速度和加入量等主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。透射電鏡分析結(jié)果表明,在膠原纖維重組凝膠上原位滴加鈣、磷酸根離子溶液,可以實(shí)現(xiàn)膠原纖維的纖維內(nèi)礦化;XRD和紅外分析結(jié)果表明,采用該方法制備的礦化產(chǎn)物,其無(wú)機(jī)相基本以無(wú)定形的形式存在;熱重分析結(jié)果表明,仿生礦化產(chǎn)物具有較高的礦化率。工藝參數(shù)優(yōu)化結(jié)果表明直接添加10 mg PAA,控制氯化鈣、磷酸氫二鉀加入速率為0.0315 mmol/h,氯化鈣、磷酸氫二鉀加入量為0.675 mmol時(shí),具有最佳的礦化效果。（2）靜壓力對(duì)仿生礦化行為和效果的影響研究在礦化工藝和條件參數(shù)優(yōu)化研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步引入靜壓力作為礦化行為的調(diào)控手段,探究靜壓力場(chǎng)對(duì)膠原/磷酸鈣仿生礦化行為和產(chǎn)物構(gòu)造性能的影響。透射電鏡和掃描電鏡分析結(jié)果表明,在壓力環(huán)境下,游離的鈣離子、磷酸根離子更容易聚集,進(jìn)而形成團(tuán)簇狀的磷酸鈣,并且隨著施壓時(shí)間的延長(zhǎng),生成磷酸鈣的結(jié)晶程度逐步提高。礦化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)性能分析結(jié)果表明,壓力的加入會(huì)形成結(jié)晶態(tài)的無(wú)機(jī)相,且隨著施壓時(shí)間的延長(zhǎng),礦化產(chǎn)物中無(wú)機(jī)相的含量和結(jié)晶度會(huì)逐漸提高,進(jìn)而使其熱穩(wěn)定性同步提升,但其溶脹比和抗壓縮能力有一定程度的降低。（3）交聯(lián)對(duì)礦化行為和產(chǎn)物性能的影響在上述研究基礎(chǔ)上,進(jìn)一步在礦化過(guò)程中引入不同交聯(lián)劑作為調(diào)控手段,探討交聯(lián)對(duì)膠原/磷酸鈣仿生礦化產(chǎn)物性能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同交聯(lián)劑的引入不會(huì)顯著改變仿生礦化產(chǎn)物的微觀構(gòu)造,但礦化產(chǎn)物的孔隙結(jié)構(gòu)、吸水性能、力學(xué)性能、礦化程度和熱穩(wěn)定性等各項(xiàng)性能有差異化轉(zhuǎn)變。其中,交聯(lián)后礦化產(chǎn)物的礦化程度和承壓能力會(huì)明顯降低,但是礦化產(chǎn)物的溶脹比和熱穩(wěn)定性有所提高。進(jìn)一步對(duì)交聯(lián)礦化產(chǎn)物的細(xì)胞相容性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià),結(jié)果表明,不同交聯(lián)方法均會(huì)導(dǎo)致礦化產(chǎn)物細(xì)胞相容性的降低;與戊二醛交聯(lián)相比,EDC-NHS50%和京尼平100%交聯(lián)的樣品更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。
王斌[2]（2021）在《自體闊筋膜移植治療陳舊性閉合跟腱斷裂的療效分析》文中研究說(shuō)明目的:觀察自體闊筋膜移植編織纏繞包裹縫合治療陳舊性閉合性跟腱斷裂的療效,探究其臨床效果,并與（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位進(jìn)行比較,為陳舊性閉合性跟腱斷裂的治療提供一種可選擇的手術(shù)方法。方法:選取2014年01月至2019年12月就診于我院的跟腱斷裂患者。納入病例的標(biāo)準(zhǔn):（1）閉合的陳舊的跟腱斷裂,病程大于4周;（2）接受自體闊筋膜移植或（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位手術(shù)治療。排除病例的標(biāo)準(zhǔn):（1）雙側(cè)跟腱同時(shí)斷裂等影響術(shù)后足踝功能評(píng)定患者;（2）止點(diǎn)處斷裂,需行止點(diǎn)重建患者;（3）合并撕脫骨折、多發(fā)傷、軟組織缺損等其他并發(fā)癥患者;（4）伴有嚴(yán)重的全身性疾病患者;（5）止點(diǎn)性跟腱炎、長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、喹諾酮類(lèi)藥物等致跟腱嚴(yán)重變性患者。入組共28例28足,其中闊筋膜移植組17例,16例為男性,1例為女性,11例為左側(cè),6例為右側(cè),年齡40.82±11.58歲,身高172.29±6.23厘米,體重77.29±12.41千克,受傷至手術(shù)時(shí)長(zhǎng)80.24±44.03天。（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位組11例,均為男性,6例為左側(cè),5例為右側(cè),年齡47.45±11.84歲,身高172.73±3.47厘米,體重78.18±9.79千克,受傷至手術(shù)時(shí)長(zhǎng)106.36±33.84天。隨訪觀察并記錄患者恢復(fù)情況及并發(fā)癥情況,采用AOFAS踝-后足評(píng)分、Arner-Lindholm分級(jí)、ATRS評(píng)分、VISA-A評(píng)分對(duì)手術(shù)之前、手術(shù)后的半年、術(shù)后的一年的踝關(guān)節(jié)恢復(fù)進(jìn)行評(píng)價(jià)（詳見(jiàn)附錄）,并進(jìn)行組內(nèi)和組間比較。結(jié)果:闊筋膜移植組手術(shù)時(shí)長(zhǎng)114.12±23.93分鐘,術(shù)中出血21.18±17.28毫升,切除斷端變性失活組織后斷端缺損5.12±1.11厘米,所有患者一年內(nèi)均獲得隨訪,隨訪時(shí)長(zhǎng)15.35±2.98月。（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位組手術(shù)時(shí)長(zhǎng)124.55±19.16分鐘,術(shù)中出血24.55±14.40毫升,切除斷端變性失活組織后斷端缺損5.73±1.27厘米,所有患者一年內(nèi)均獲得隨訪,隨訪時(shí)長(zhǎng)17.45±3.24月。末次隨訪時(shí),所有患者均可行單足提踵站立,均對(duì)手術(shù)效果滿意,均未發(fā)現(xiàn)再斷裂、切口延遲愈合、切口不愈合、感染、深靜脈血栓、感覺(jué)減退、跟腱痛、跟腱攣縮、跟腱松弛、肌疝等并發(fā)癥。闊筋膜移植組手術(shù)后的一年,AOFAS評(píng)分 95.94±4.45,ATRS 評(píng)分 92.71±4.30,VISA 評(píng)分 90.00±9.75,AOFAS 與 Arner-Lindholm分級(jí)優(yōu)良率均達(dá)到100%。（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位組手術(shù)后的一年,AOFAS評(píng)分80.09±4.59,ATRS 評(píng)分 81.27±4.61,VISA 評(píng)分 78.45±8.70,AOFAS 分級(jí)優(yōu)良率 90.91%,Arner-Lindholm分級(jí)優(yōu)良率100%。隨著時(shí)間的變化,闊筋膜移植組AOFAS（?）-后足評(píng)分、Arner-Lindholm分級(jí)、ATRS評(píng)分、VISA-A評(píng)分均有明顯的改善,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)于AOFAS評(píng)分、ATRS評(píng)分、VISA-A評(píng)分的改善,闊筋膜移植的效果優(yōu)于（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位的效果。對(duì)于Arner-Lindholm分級(jí)的改善,闊筋膜移植與（?）長(zhǎng)屈肌腱轉(zhuǎn)位的效果相同。結(jié)論:自體闊筋膜移植編織纏繞包裹縫合治療陳舊性閉合性跟腱斷裂,預(yù)后良好,可以成為一種可能的臨床治療方式。
譚春鳳[3]（2021）在《不同濃度PRP對(duì)兔跟腱病動(dòng)物模型中Ⅰ型與Ⅲ型膠原、TGF-β1及α-SMA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究》文中指出目的:通過(guò)PGE2跟腱局部注射誘導(dǎo)建立兔跟腱病動(dòng)物模型,觀察不同濃度PRP對(duì)兔跟腱病動(dòng)物模型中Ⅰ型Ⅲ型膠原基因與TGF-β1及α-SMA蛋白表達(dá)水平的影響,探討PRP修復(fù)跟腱病的機(jī)制及量效關(guān)系,作為在臨床應(yīng)用中的一個(gè)理論依據(jù)。方法:選擇48只來(lái)自新西蘭的大白兔作為實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象,兔子的體重（2.4±0.13）kg,經(jīng)過(guò)一周適應(yīng)性喂養(yǎng)后,將以上48只兔子隨機(jī)分為7組,依次為對(duì)照組:K組（空白對(duì)照組）、M組（模型對(duì)照組）、NS組（生理鹽水對(duì)照組）;治療組:A組（2倍濃度PRP組）、B組（4倍濃度PRP組）、C組（6倍濃度PRP組）、D組（8倍濃度PRP組）,每組各6只。余下6只用于采血制備不同濃度PRP。采用PGE2跟腱局部注射法來(lái)導(dǎo)致跟腱病,建立兔跟腱病動(dòng)物模型。在造模成功以后,對(duì)A、B、C、D組分別注射0.2ml 2倍、4倍、6倍、8倍濃度的PRP,NS組予以注射等量的生理鹽水進(jìn)行干預(yù),以上各組只進(jìn)行一次干預(yù)。于干預(yù)后的第14天采取標(biāo)本,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè),比較各組實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的差異。依次采用光鏡觀察與q RT-PCR及Western Blot檢測(cè)方法,觀察跟腱組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)、跟腱組織中Ⅰ型Ⅲ型膠原基因和跟腱組織中TGF-β1及α-SMA蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1)超聲檢查結(jié)果:干預(yù)第14天血流信號(hào)情況較第7天明顯改善,與M組相比較,B、C、D組跟腱邊界清晰,異常的血流信號(hào)減少,C組表現(xiàn)最佳,A、NS組無(wú)顯著差異。2)跟腱組織標(biāo)本大體觀察結(jié)果:K組跟腱光澤、堅(jiān)韌,無(wú)水腫、無(wú)粘連、無(wú)血管化;M組跟腱明顯水腫、重度粘連、血管化明顯。與M組相比較,B、C、D組跟腱的水腫、粘連、血管化情況均有明顯改善,C組跟腱修復(fù)效果最佳。3)在光鏡下觀察損傷跟腱組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)結(jié)果:K組的跟腱纖維排列均勻,緊湊,有序,整齊,散在分布梭形腱細(xì)胞,均為正常跟腱組織形態(tài)學(xué)的表現(xiàn)。M組腱細(xì)胞分布散亂,周?chē)‰炖w維細(xì)胞核呈橢圓形,肌腱纖維局部斷裂、不連續(xù),未見(jiàn)炎性細(xì)胞及異常新增血管。NS組與A組細(xì)胞分布散亂,肌腱纖維局部輕微斷裂,斷裂處松散,呈波浪形,細(xì)胞核未見(jiàn)變形;B組與D組細(xì)胞分布集中,肌腱纖維輕度波浪樣改變,肌腱細(xì)胞核未見(jiàn)明顯變形;C組跟腱組織中細(xì)胞分布均勻,肌腱纖維排列連續(xù)、整齊,無(wú)異常血管增生、細(xì)胞核無(wú)變形,隨著PRP濃度的增加,肌腱纖維排列更加緊湊。4)Ⅰ型膠原基因表達(dá):與K組相比較,除C組無(wú)顯著差異,其余各組跟腱組織中Ⅰ型膠原m RNA表達(dá)均下調(diào)（P<0.05）。與M組相比較,NS、A組無(wú)顯著差異,B、C、D組均明顯上調(diào)（P<0.05）。與NS組相比較,A組無(wú)明顯差異,B、C、D組均明顯上調(diào)（P<0.05）。組間兩兩比較,B、D組無(wú)差異,A、C組有明顯差異（P<0.05）。5)Ⅲ型膠原基因表達(dá):與K組相比較,各組跟腱組織中ⅠⅠⅠ型膠原m RNA表達(dá)均增加（P<0.05）。與M組相比較,除NS、A組無(wú)顯著差異,B、C、D組差異明顯,Ⅲ型膠原m RNA表達(dá)均上調(diào)（P<0.05）。與NS組相比較,A、B、C、D組中,除A組無(wú)明顯差異,B、C、D組Ⅲ型膠原m RNA的表達(dá)均明顯上調(diào)（P<0.05）,C組上調(diào)最為顯著。組間兩兩比較,B、D組無(wú)顯著差異,A、C組有明顯差異（P<0.05）。6)TGF-β1蛋白表達(dá):M組與K組進(jìn)行比較,TGF-β1蛋白表達(dá)顯著減少,兩組間有明顯差異（P<0.05）。與M組比較,A、B、C、D組TGF-β1蛋白表達(dá)均有上升,表現(xiàn)出與PRP濃度呈正相關(guān),D組上升更顯著,組間比較有差異（P<0.05）。7)α-SMA蛋白表達(dá):與K組相比較,A、B、M、NS組表達(dá)均下降（P<0.05）,C組無(wú)明顯變化,D組表達(dá)上升。與M組相比較,α-SMA蛋白表達(dá)除與NS組無(wú)明顯變化,在A、B、C、D組均升高,且與PRP濃度呈劑量依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。組間兩兩比較,A、B組無(wú)顯著差異（P>0.05）,C、D組有顯著差異（P<0.05）。結(jié)論:（1）PRP可促進(jìn)動(dòng)物跟腱病模型Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維合成。（2）PRP可通過(guò)釋放TGF-β1調(diào)節(jié)α-SMA蛋白量的表達(dá)從而促進(jìn)跟腱病的修復(fù)。（3）PRP促進(jìn)跟腱病修復(fù)與濃度密切相關(guān),以6倍左右濃度修復(fù)效果較佳。
桑新雨[4]（2021）在《可用于肩袖與跟腱修復(fù)的聚乳酸基纖維膜的制備及體外研究》文中研究指明肌腱的修復(fù)與再生通常需要經(jīng)歷三個(gè)階段,即炎癥階段、增生或修復(fù)階段、重塑階段。但因解剖部位或局部環(huán)境的不同,肌腱的急性撕裂或退變性肌腱損傷機(jī)制及愈合潛力有所差異?；?nèi)的肩袖肌腱損傷不易自發(fā)愈合,主要原因其常發(fā)生于腱-骨界面,腱-骨界面不易重建。目前補(bǔ)片修復(fù)是有效方法,但補(bǔ)片材料仍缺乏對(duì)細(xì)胞定向生長(zhǎng)、遷移的引導(dǎo)及誘導(dǎo)分化作用,力學(xué)性能不足等。而跟腱的損傷是滑膜外的,易形成纖維組織造成粘連,阻礙跟腱的修復(fù)。采用物理屏障的方法防止粘連是目前的熱點(diǎn),但也存在著膜的親水性較差,易移位并伴有炎癥并發(fā)癥等缺點(diǎn)。由此,本論文制備了取向性的不同聚乳酸（PLLA）/羥基磷灰石（HA）質(zhì)量比的纖維補(bǔ)片及多層成分梯度化防粘連膜,并對(duì)其性能進(jìn)行了探究。主要研究?jī)?nèi)容如下:（1）利用溶液靜電紡絲制備具有取向性的不同PLLA/HA含量的肩袖補(bǔ)片,并對(duì)各組肩袖補(bǔ)片的理化性能進(jìn)行表征。分離培養(yǎng)大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）并與各組肩袖補(bǔ)片共培養(yǎng),評(píng)估各組補(bǔ)片的細(xì)胞相容性及成骨誘導(dǎo)能力。結(jié)果表明HA的加入使纖維孔隙率及親水性有所增加。但由于HA存在部分團(tuán)聚現(xiàn)象,更高HA含量的纖維補(bǔ)片其力學(xué)性能越差。CCK-8及死/活細(xì)胞染色結(jié)果顯示大鼠BMSCs細(xì)胞在各組肩袖補(bǔ)片上均能夠良好的增殖且生長(zhǎng)具備一定的取向性。除此之外HA的加入還可以提高BMSCs細(xì)胞中ALP的表達(dá)。所制備的PLLA/HA混合組分纖維補(bǔ)片細(xì)胞相容性好,纖維的取向一定程度上引導(dǎo)了細(xì)胞的定向生長(zhǎng),同時(shí)還可以增強(qiáng)對(duì)BMSCs細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)能力。綜合分析各補(bǔ)片性能,PLLA與HA質(zhì)量比為3:1時(shí)性能更好,有望成為肩袖修復(fù)中理想的補(bǔ)片材料。（2）利用溶液靜電紡絲制備多層成分梯度化跟腱防粘連膜并對(duì)纖維膜各層進(jìn)行表征分析,探索由外到內(nèi)膜層理化性質(zhì)的變化。分離培養(yǎng)兔成纖維細(xì)胞并將其接種到跟腱防粘連膜上,通過(guò)CCK-8檢測(cè)纖維膜對(duì)兔成纖維細(xì)胞增殖與粘附的影響。結(jié)果顯示纖維膜由外到內(nèi)直徑逐漸減小,孔隙相對(duì)增多且親水性逐漸增強(qiáng)。CCK-8結(jié)果顯示防粘連膜生物相容性良好,最外層PLLA纖維層可有效抑制肌腱周?chē)衫w維細(xì)胞的粘附與增殖。內(nèi)層親水性逐漸增強(qiáng),與受損部位粘合更加緊密,無(wú)需手術(shù)縫合固定,降低了操作的復(fù)雜性,在預(yù)防腱周粘連方面具有巨大的潛力。
余洋[5]（2021）在《LncRNA KCNQ1OT1通過(guò)miR-138調(diào)控肌腱干細(xì)胞成脂及成骨分化的機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明研究背景：隨著全民運(yùn)動(dòng)的興起,肌腱損傷已成為一種非常普遍的運(yùn)動(dòng)損傷。目前臨床上針對(duì)肌腱損傷的治療方式存在恢復(fù)周期長(zhǎng)、復(fù)發(fā)率高和無(wú)法恢復(fù)原有的生物力學(xué)特性等局限性。近年來(lái)越來(lái)越多的證據(jù)表明肌腱干細(xì)胞（tendon stem cells,TSCs）具有自我更新和多向分化的潛能從而修復(fù)受損肌腱組織的能力,目前已有研究指出TSCs的異常分化是肌腱損傷的發(fā)病基礎(chǔ)。因此闡明抑制TSCs的異常分化是否可以改善肌腱損傷成為關(guān)鍵。長(zhǎng)鏈非編碼 RNA（1 ongcon-codingRNA,IncRNA）和微?。╩icroRNA,miRNA）之間可以多位點(diǎn),多靶標(biāo)的相互調(diào)控,共同參與細(xì)胞的分化、增殖和多種疾病的發(fā)生發(fā)展.miRNA在間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化中的作用成為目前關(guān)注的熱點(diǎn)。研究表明,miR-138可以通過(guò)調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARy）和RUNX家族轉(zhuǎn)錄因子2（RUNX2）的表達(dá)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化及成骨分化;LncRNA KCNQ1 Opposite Strand/Antisense Transcript 1（KCNQlOT1）可發(fā)揮成骨分化的作用參與骨溶解癥調(diào)控。且文獻(xiàn)報(bào)道LncRNA KCNQ1OT1可發(fā)揮內(nèi)源性miR海綿的功能,然而,LncRNA KCNQ1OT1是否能夠通過(guò)miR-138在TSCs的成骨分化和成脂分化中起調(diào)控作用尚不清楚。因此,本研究將探討LncRNA KCNQ1OT1和miR-138在TSCs成脂分化和成骨分化過(guò)程中的作用,從而為臨床治療肌腱損傷提供新思路和分子理論基礎(chǔ)。目的：1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究TSCs注射對(duì)損傷肌腱組織的修復(fù)作用以及對(duì)LncRNA KCNQ1OT1和miR-138的表達(dá)水平的影響。2.體外實(shí)驗(yàn)探索LncRNA KCNQ1OT1和miR-138在TSCs成脂分化和成骨分化過(guò)程中的變化規(guī)律。3.體外實(shí)驗(yàn)探索LncRNA KCNQ1OT1能否與miR-138結(jié)合。4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究LncRNA KCNQ1OT1對(duì)TSCs成脂分化和成骨分化的影響以及對(duì)肌腱修復(fù)的抑制作用。方法：1.建立小鼠肌腱損傷模型,通過(guò)生物力學(xué)測(cè)試小鼠跟腱組織的最大負(fù)荷和剛度,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)肌腱組織中LncRNA KCNQ1OT1和miR-138的表達(dá)水平,使用Western blot檢測(cè)肌腱組織中RUNX2和PPARγ的蛋白水平。2.體外培養(yǎng)TSCs,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TSCs表面標(biāo)志物,然后分別成脂和成骨分化,油紅O染色和茜素紅染色觀察證實(shí)TSCs的多向分化潛能,Western blot檢測(cè)RUNX2和PPARy的水平、qRT-PCR檢測(cè)成脂分化和成骨分化誘導(dǎo)的TSCs中LncRNA KCNQ1OT1和miR-138的表達(dá)水平;再通過(guò)干擾TSCs中的LncRNA KCNQ1OT1 后,qRT-PCR檢測(cè)相對(duì)脂聯(lián)素水平,Western blot檢測(cè) PPARγ、RUNX2和Osterix的蛋白水平.試劑盒檢測(cè)堿性磷酸酶（ALP）活性.3.通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)網(wǎng)站（DIANA和RNAInter數(shù)據(jù)庫(kù)）進(jìn)行預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)LncRNA KCNQ1OT1和miR-138之間存在結(jié)合位點(diǎn)。體外通過(guò)RNA免疫沉淀（RIP）和 RNA pull-down 實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確 LncRNA KCNQ1OT1 和 miR-138 之間的相互作用。4.體外轉(zhuǎn)染si-KCNQ1OT1后qRT-PCR檢測(cè)TSCs中miR-138表達(dá)水平變化;然后將 si-control,si-KCNQ1OT1,si-KCNQ1OT1+NC 和 si-KCNQ1OT1+miR-138 inhibitor分別轉(zhuǎn)染于成脂分化及成骨分化誘導(dǎo)的TSCs中,qRT-PCR檢測(cè) miR-138 的表達(dá),Western blot 檢測(cè) PPARγ、RUNX2 和 Osterix 的蛋白水平。5.建立小鼠肌腱損傷模型,將轉(zhuǎn)染pcDNA-KCNQ1OT1的TSCs和轉(zhuǎn)染空載體（pcDNA）的TSCs注射至肌腱損傷部位,通過(guò)生物力學(xué)評(píng)估小鼠肌腱組織的最大負(fù)荷和剛度,qRT-PCR檢測(cè)miR-138在小鼠肌腱組織中的表達(dá);Western blot檢測(cè)RUNX2和PPARγ蛋白在小鼠肌腱組織中的表達(dá)。結(jié)果：1.生物力學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示注射TSCs后損傷肌腱組織最大負(fù)荷和剛度升高（P<0.05）。qRT-PCR結(jié)果顯示損傷肌腱注射TSCs后可以下調(diào)LncRNA KCNQ1OT1的表達(dá)、上調(diào)miR-138的表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示損傷肌腱注射TSCs后可以下調(diào)RUNX2和PPARγ的蛋白的表達(dá)水平。說(shuō)明注射TSCs對(duì)損傷肌腱組織具有保護(hù)作用.2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)證實(shí)分離得到是TSCs。油紅O染色以及茜素紅染色觀察證實(shí)TSCs具有成脂及成骨分化的潛能。TSCs在成脂和成骨分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)后,Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示成脂和成骨相關(guān)的蛋白表達(dá)上調(diào);qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示LncRNA KCNQ1OT1的表達(dá)顯著增加,而miR-138的表達(dá)顯著降低（P<0.05）.在干擾了 TSCs中LncRNA KCNQ1OT1的表達(dá)后,上述的表達(dá)水平全部逆轉(zhuǎn)。說(shuō)明LncRNA KCNQ1OT1和miR-138的表達(dá)水平和TSCs的成脂和成骨分化具有相關(guān)性。3.RIP 實(shí)驗(yàn)顯示與 Input 組相比,miR-138 和 LncRNA KCNQ1OT1 在 AGO2抗體免疫沉淀復(fù)合物中富集;RNA pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LncRNA KCNQ1OT1的下拉復(fù)合物中存在miR-138的富集.均揭示了 LncRNA KCNQ1OT1和miR-138之間存在相互作用.4.TSCs中干擾KCNQ1OT1后qRT-PCR檢測(cè)顯示miR-138的表達(dá)水平上調(diào),Western blot檢測(cè)顯示PPARγ、RUNX2和Osterix的蛋白水平下降（P<0.05）;且上述變化均可被miR-138 inhibitor逆轉(zhuǎn)。說(shuō)明LncRNA KCNQ1OT1與miR-138的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。5.生物力學(xué)測(cè)試結(jié)果顯示注射了過(guò)表達(dá)LncRNA KCNQ1OT1（Injured+pcDNA-KCNQ1OT1-TSCs）的小鼠肌腱組織的最大負(fù)荷和剛度下降（P<0.05）.qRT-PCR檢測(cè)顯示Injured+pcDNA-KCNQ1OT1-TSCs組小鼠肌腱組織中miR-138的表達(dá)水平顯著下調(diào)（P<0.05）。Western blot檢測(cè)顯示Injured+pcDNA-KCNQ1OT1-TSCs組小鼠肌腱組織中RUNX2和PPARγ的蛋白水平上調(diào)。揭示了 LncRNA KCNQ1OT1影響TSCs的成脂分化和成骨分化,是抑制肌腱的愈合的不利因素。結(jié)論：1、在損傷肌腱組織中LncRNA KCNQ1OT1呈高表達(dá),但注射TSCs后可顯著降低LncRNA KCNQ1OT1的表達(dá)、提高損傷肌腱組織的生物力學(xué)特性。2、LncRNA KCNQ1OT1參與調(diào)控TSCs的成脂和成骨分化過(guò)程,干擾了LncRNA KCNQ1OT1的表達(dá)可減弱TSCs成骨和成脂分化能力。3、體外證實(shí)LncRNA KCNQ1OT1可以與miR-138之間相互結(jié)合,且LncRNA KCNQ1OT1 對(duì) miR-138 有負(fù)調(diào)控作用。4、LncRNA KCNQ1OT1可通過(guò)miR-138促進(jìn)TSCs的成脂分化和成骨分化從而抑制肌腱愈合。
陸康[6]（2021）在《微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的仿生制備及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用》文中研究表明隨著運(yùn)動(dòng)健身的普及,越來(lái)越多的人開(kāi)始進(jìn)行體育鍛煉,但由于人口老齡化及不正確的運(yùn)動(dòng)姿勢(shì),肌腱損傷發(fā)病率也逐年增加。常見(jiàn)的肌腱損傷包括肌腱病、肌腱撕裂/斷裂傷等。肌腱損傷的治療方式主要包括非手術(shù)治療和手術(shù)治療,非手術(shù)治療一般適用于輕度損傷且效果有限,手術(shù)治療包括殘端清理縫合、自體或異體腱移植替代等,取得了廣泛的療效。由于肌腱的特殊生物學(xué)性能及愈合機(jī)制,損傷肌腱的愈合結(jié)果通常為瘢痕組織形成。不同于肌腱的原生基質(zhì)結(jié)構(gòu),瘢痕組織基質(zhì)內(nèi)的膠原纖維呈無(wú)序排列,生物學(xué)功能較差且易發(fā)生二次損傷。組織工程是新興的組織修復(fù)方法,其目的是通過(guò)生物材料促進(jìn)組織原生結(jié)構(gòu)的有效修復(fù),研究?jī)?nèi)容包括種子細(xì)胞、支架材料及支架-細(xì)胞復(fù)合體構(gòu)建三個(gè)方面。肌腱修復(fù)中,來(lái)自內(nèi)源性修復(fù)細(xì)胞的肌腱干/祖細(xì)胞（TSPCs）,在肌腱修復(fù)中起到關(guān)鍵作用,是肌腱組織工程中常用的種子細(xì)胞。支架材料的制備是組織工程需著重考慮的因素。多種生物材料被用于肌腱修復(fù)研究,主要可分為天然材料及人工材料,天然材料生物毒性較小但其力學(xué)強(qiáng)度低,可加工性較差;人工材料雖易于制備且具有較好的力學(xué)性能,但其生物相容性較差,在體內(nèi)存在潛在毒性。近年研究發(fā)現(xiàn),絲素蛋白薄膜生物支架具有較好的生物相容性、可塑性及可控的力學(xué)強(qiáng)度,被應(yīng)用于角膜、神經(jīng)等組織修復(fù)并取得較好的效果,是軟組織修復(fù)中優(yōu)良的組織工程材料,在肌腱修復(fù)中具有較高的潛在價(jià)值,但還未得到深入研究。將絲素蛋白薄膜用于肌腱修復(fù),需要使絲素蛋白薄膜具有與原生肌腱相似的微環(huán)境,才可有效提升其生物學(xué)功能最終促進(jìn)肌腱修復(fù)。早期研究多以生物支架交聯(lián)大分子活性基團(tuán)（如生長(zhǎng)因子）作為主要方法,但存在易失活、不穩(wěn)定的缺點(diǎn)。近年組織工程研究指出,當(dāng)生物支架具有與組織相似的物理性質(zhì)（力學(xué)、硬度等）和微結(jié)構(gòu)時(shí),可有效促進(jìn)組織修復(fù)。在絲素蛋白薄膜支架表面制備仿生物理微結(jié)構(gòu),是提升其生物學(xué)性能的有效方法且具有高穩(wěn)定性和精準(zhǔn)性的優(yōu)點(diǎn)。以原生肌腱物理性質(zhì)及微結(jié)構(gòu)為參考,仿生制備具有生物功能的微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜,對(duì)肌腱修復(fù)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究首先分析了肌腱的微觀結(jié)構(gòu)及力學(xué)特點(diǎn)作為絲素蛋白薄膜生物支架的參考依據(jù);然后仿生制備微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜并觀察其在體內(nèi)對(duì)損傷肌腱的修復(fù)作用;最后在體外實(shí)驗(yàn)中探究微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜對(duì)TSPCs的生物學(xué)調(diào)控作用及相關(guān)分子通路,綜合評(píng)估微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用價(jià)值,為肌腱修復(fù)提供新的思路。1.肌腱顯微結(jié)構(gòu)與力學(xué)性能分析1.1方法1.1.1通過(guò)掃描電鏡和蘇木精-伊紅染色觀察肌腱組織微結(jié)構(gòu),并對(duì)膠原纖維寬度進(jìn)行分析對(duì)比。1.1.2測(cè)試肌腱的生物力學(xué)特點(diǎn)。1.2結(jié)果1.2.1肌腱外觀呈亮白色,觸之質(zhì)地緊實(shí),韌性強(qiáng),靜息狀態(tài)下呈蜷屈狀,受到力后會(huì)隨之伸展拉長(zhǎng),外觀相對(duì)靜息時(shí)更為細(xì)長(zhǎng)且去除拉伸力后可恢復(fù)原有形態(tài)。1.2.2通過(guò)SEM觀察肌腱,低倍放大時(shí)（50X）可見(jiàn)肌腱表面的結(jié)構(gòu)致密,膠原纖維束在肌腱表面呈現(xiàn)褶皺樣形態(tài);放大100-500倍可見(jiàn)膠原纖維平行排列的膠原纖維束;放大倍數(shù)2000X-10000X可見(jiàn)膠原纖維由納米級(jí)纖維絲構(gòu)成。1.2.3 HE染色可見(jiàn)膠原纖維呈均為長(zhǎng)條索狀,粗細(xì)不一的膠原纖維在肌腱中呈平行排列;肌腱固有細(xì)胞具有相似的形態(tài)及排列特點(diǎn)。1.2.4膠原纖維的寬度主要分布在5-10μm,部分膠原纖維寬度小于5μm或大于15μm。1.2.5隨著拉伸應(yīng)力不斷增加,肌腱中纖維絲、膠原纖維及纖維束被拉伸到極限載荷;隨著進(jìn)一步被動(dòng)拉伸肌腱組織會(huì)分離斷裂,應(yīng)力數(shù)值歸于初始值。1.3結(jié)論1.3.1肌腱由納米級(jí)纖維絲排列形成的膠原纖維束,狹長(zhǎng)的固有細(xì)胞夾雜在其中,纖維束直徑主要分布于5-20μm之間且5-10μm區(qū)間占比最多。1.3.2肌腱樣本的力學(xué)性能與其形變呈正相關(guān)。1.3.3肌腱纖維的形態(tài)及力學(xué)數(shù)據(jù),作為微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜材料制備的參考依據(jù)。2.仿生絲素蛋白薄膜支架的制備、改性與表征2.1方法2.1.1提取再生絲素蛋白溶液,參考1.3.3小節(jié)結(jié)果仿生制備具有不同微結(jié)構(gòu)的絲素蛋白薄膜,水退火處理對(duì)材料進(jìn)行改性處理。2.1.2傅立葉紅外光譜儀（FTIR）檢測(cè)絲素蛋白薄膜材料內(nèi)的蛋白構(gòu)象變化。2.1.3原子力顯微鏡（AFM）檢測(cè)絲素溶液及絲素蛋白薄膜的物理特性。2.1.4掃描電鏡（SEM）觀察絲素蛋白薄膜表面微結(jié)構(gòu)形態(tài)。2.1.5拉伸測(cè)試檢測(cè)改性后不同微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的力學(xué)特性。2.2結(jié)果2.2.1絲素蛋白溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.53±3.4%,AFM顯示絲素蛋白溶液內(nèi)絲素纖維絲平行致密排列。2.2.2制備了不同表面結(jié)構(gòu)的絲素蛋白薄膜,結(jié)構(gòu)完整無(wú)皺縮及氣泡,改性后薄膜材料的物理性質(zhì)發(fā)生顯著改變。2.2.3水退火處理后絲素蛋白薄膜內(nèi)部β片層蛋白構(gòu)象顯著升高。2.2.4 AFM發(fā)現(xiàn)絲素蛋白薄膜支架經(jīng)水退火改性后表面會(huì)出現(xiàn)納米級(jí)粗糙結(jié)構(gòu)。2.2.5 SEM觀察到絲素蛋白薄膜表面微結(jié)構(gòu)形態(tài)清晰且符合仿生設(shè)計(jì)尺寸。2.2.6無(wú)微結(jié)構(gòu)與5μm微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的力學(xué)性能較低,10、15和20μm微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的最大抗拉強(qiáng)度與原生肌腱相似,但在拉伸過(guò)程中會(huì)提前達(dá)到最大載荷。2.3小結(jié)2.3.1再生絲素蛋白溶液性質(zhì)穩(wěn)定,以之為原料制備的絲素蛋白薄膜形態(tài)完整,水退火改性后支架的物理性質(zhì)顯著提升。2.3.2改性后絲素蛋白薄膜內(nèi)部β-片層蛋白構(gòu)象顯著增加,材料表面會(huì)出現(xiàn)納米級(jí)粗糙結(jié)構(gòu)。2.3.3微結(jié)構(gòu)為10、15、20μm的絲素蛋白薄膜具有較好的力學(xué)性能。3.微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜在體內(nèi)對(duì)損傷肌腱的修復(fù)作用3.1實(shí)驗(yàn)方法3.1.1建立大鼠跟腱損傷模型:正常組（N）、缺損組（D）、異體腱替代組（R）、無(wú)微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜組（S）、微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜組（G）。3.1.2應(yīng)用MRI、蘇木精-伊紅及免疫組化染色分析微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜在體內(nèi)對(duì)損傷肌腱的修復(fù)作用。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.2.1 D組跟腱組織的寬度及厚度明顯高于其它組,S組與R組樣本寬度及厚度低于D組,G組樣本的寬度及厚度最低。3.2.2 MRI脂肪抑制像示:術(shù)后第4周R組、D組和S組均以炎性高信號(hào)為主,R組中可見(jiàn)異體腱低信號(hào),G組可見(jiàn)少量不連續(xù)低信號(hào);8周后D組仍以炎性高信號(hào)為主,R組異體腱兩端呈炎性高信號(hào),S組和G組均可見(jiàn)連續(xù)低信號(hào),但S組信號(hào)連續(xù)性低于G組。3.2.3組織學(xué)染色示:D組纖維形態(tài)紊亂且再生相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)量較低;R組移植腱的纖維結(jié)構(gòu)與原生纖維不連續(xù),肌腱分化標(biāo)志物表達(dá)量較低;S組膠原纖維形態(tài)相比D組中相對(duì)有序,修復(fù)區(qū)兩端兩端纖維與原生纖維少量連續(xù),肌腱蛋白C（TNC）和腱調(diào)蛋白（TNMD）表達(dá)輕度升高,但與R組無(wú)明顯差別;G組膠原纖維排列最為有序且肌腱修復(fù)標(biāo)志物TNC、TNMD和一型膠原蛋白（COLIA1）顯著高于其它組。3.2.4組織學(xué)綜合評(píng)分:G組顯著高于其它組,S組與R組無(wú)明顯差別,D組評(píng)分最低。3.3小結(jié)3.3.1微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜可以減輕肌腱修復(fù)中的瘢痕增生,促進(jìn)膠原纖維的有序形成及肌腱標(biāo)志物的表達(dá)。4.微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜對(duì)TSPCs生物學(xué)行為的調(diào)控及分子機(jī)制4.1微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜對(duì)TSPCs生物學(xué)行為的調(diào)控4.1.1實(shí)驗(yàn)方法4.1.1.1提取原代TSPCs,通過(guò)免疫熒光及誘導(dǎo)分化染色鑒定其干/祖細(xì)胞特性。4.1.1.2將TSPCs與支架材料共培養(yǎng)后,活死細(xì)胞熒光共染觀察絲素蛋白薄膜的細(xì)胞相容性,CCK-8監(jiān)測(cè)細(xì)胞的增殖活性。4.1.1.3細(xì)胞骨架及細(xì)胞核雙熒光染色觀察TSPCs的細(xì)胞形態(tài)及空間排列。4.1.1.4聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）分析TSPCs在不同材料組中肌腱分化標(biāo)志物表達(dá)量差異。4.1.2結(jié)果4.1.2.1 TSPCs表面標(biāo)志物CD3及CD34陰性,CD44和CD90呈陽(yáng)性;經(jīng)過(guò)分化誘導(dǎo)培養(yǎng)后,TSPCs分別向脂肪系、骨系和軟骨系分化。4.1.2.2微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜表面的TSPCs生存能力良好,不同組間內(nèi)TSPCs的增殖能力無(wú)顯著差異。4.1.2.3 5μm及10μm微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜表面TSPCs呈現(xiàn)與原生肌腱中相似的細(xì)窄形態(tài)及空間排列,肌腱標(biāo)志物基因表達(dá)也顯著升高,當(dāng)微結(jié)構(gòu)為10μm時(shí)更為顯著。4.1.3小結(jié)4.1.3.1絲素蛋白薄膜具有良好的生物相容性,微結(jié)構(gòu)的加入不會(huì)影響TSPCs的細(xì)胞活性。4.1.3.2 10μm微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜可顯著改變TSPCs細(xì)胞形態(tài)和空間排列,并通過(guò)磷酸化黏著斑激酶（FAK）促進(jìn)TSPCs朝向肌腱系分化。4.2微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜調(diào)控TSPCs的內(nèi)在分子機(jī)制4.2.1實(shí)驗(yàn)方法4.2.1.1 m RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白組學(xué)高通量測(cè)序,分析TSPCs內(nèi)差異基因和蛋白的表達(dá)情況。4.2.1.2 WB對(duì)比分析關(guān)鍵通路分子的蛋白表達(dá)量。4.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.2.2.1聚類(lèi)分析提示差異表達(dá)的基因和蛋白在功能及定位上具有協(xié)同性。4.2.2.2 GO分析提示差異基因及蛋白本體功能差異性主要包括:（1）細(xì)胞生理功能（Biological Process,BP）:遷移、粘附及表面蛋白定位;（2）基因分子功能（Molecular Function,MF）:結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲和肌動(dòng)蛋白;（3）細(xì)胞成分（Cellular Component,CC）:肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架、肌動(dòng)蛋白絲、應(yīng)力纖維絲。4.2.2.3 KEEG富集分析提示差異變化集中在FAK-Actin信號(hào)通路和PI3K-AKT信號(hào)通路。4.2.2.4微結(jié)構(gòu)10μm的絲素蛋白薄膜支架可促進(jìn)TSPCs肌腱標(biāo)志物SCX、TNC、TNMD及COLIA1的表達(dá),黏著斑激酶（FAK）的磷酸化激活具有關(guān)鍵作用;TSPCs中整合素分子α2β1蛋白表達(dá)量顯著升高;磷酸化PI3K和AKT（308/473）與肌腱標(biāo)志物TNC和TNMD顯著升高;在加入PI3K-AKT通路抑制劑后,TNC和TNMD的表達(dá)會(huì)同時(shí)被抑制。4.2.3小結(jié)4.2.3.1整合素α2β1作為T(mén)SPCs的膜下微環(huán)境感受器,負(fù)責(zé)感知微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜支架中的物理信號(hào)并傳遞到細(xì)胞內(nèi)。4.2.3.2微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜通過(guò)FAK-Actin及FAK-PI3K-AKT分子途徑協(xié)同調(diào)控TSPCs細(xì)胞骨架蛋白的重塑。4.2.3.3微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜通過(guò)FAK-PI3K-AKT分子信號(hào)通路誘導(dǎo)TSPCs成肌腱分化。
張航[7]（2020）在《電流體3D打印組織工程支架修復(fù)大鼠跟腱缺損的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究說(shuō)明[目的]跟腱缺損的修復(fù)一直是臨床診療中的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一,組織工程跟腱已成為替代傳統(tǒng)移植修復(fù)方式的新方向。利用電流體3D打印技術(shù)（Electrohydrodynamic 3D printing）能構(gòu)建具備可控纖維與良好孔隙支架的優(yōu)勢(shì),本研究針對(duì)聚乙內(nèi)酯（PCL）生物相容性差、降解較慢的特點(diǎn),混合親水共聚物Pluronic-F127改進(jìn)打印墨水,構(gòu)造出具備良好纖維孔隙及生物相容性的支架并結(jié)合細(xì)胞修復(fù)跟腱缺損,為未來(lái)臨床組織工程跟腱的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。[方法]使用質(zhì)量體積比1%、3%、5%的Pluronic-F127與PCL共混,制備打印墨水,通過(guò)電流體3D打印技術(shù)制備支架,利用拉壓力試驗(yàn)機(jī)測(cè)試其機(jī)械性能,計(jì)算楊氏模量,根據(jù)材料的水接觸角評(píng)估其潤(rùn)濕性能,分別在體外酶降解前后進(jìn)行電鏡掃描對(duì)其表征,以判斷該支架的納微米級(jí)表面形態(tài),并根據(jù)體外酶降解質(zhì)量丟失占比計(jì)算對(duì)比各組支架的降解速率。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,將小鼠胚胎成纖維細(xì)胞C3H10T1/2種植于支架上,分別在第1、3、7天內(nèi)進(jìn)行CaAM/PI染色評(píng)估細(xì)胞活死,Edu染色評(píng)估細(xì)胞在支架上的數(shù)量及增殖率,F-actin染色評(píng)估細(xì)胞在不同支架上的運(yùn)動(dòng)遷移能力。制備免疫抑制的大鼠跟腱缺損模型,將完成細(xì)胞種植的支架移植于跟腱缺損處,分別于術(shù)后第2、4周處死大鼠后取樣,從跟腱力學(xué)強(qiáng)度及組織HE染色評(píng)估該組織工程支架治療跟腱缺損的療效。[結(jié)果]將Pluronic-F127與PCL共混作為打印墨水,通過(guò)電流體3D打印技術(shù)可以完成可控纖維及孔徑支架的制備,隨著F127的含量增加,PCL的潤(rùn)濕性能提高,且降解速率加快,電鏡下可以觀察到有利于細(xì)胞黏附的海綿狀孔隙結(jié)構(gòu),雖然其機(jī)械性能下降明顯,但5%F127/PCL支架表現(xiàn)出較出色的潤(rùn)濕性能和降解速率,并且滿足跟腱支架的基本力學(xué)需求。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,PCL和5%F127/PCL支架上細(xì)胞CaAM/PI染色結(jié)構(gòu)顯示細(xì)胞良好的存活率,Edu染色中顯示加入F127使得黏附在支架上的細(xì)胞明顯增多,相較于單純PCL支架組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明F127使支架的細(xì)胞黏附性能獲得顯著改進(jìn);且F-actin染色提示5%F127/PCL支架組F-actin（+）面積占比明顯增加,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在大鼠的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,PCL與5%F127/PCL支架修復(fù)跟腱缺損在力學(xué)強(qiáng)度方面明顯優(yōu)于無(wú)支架方案;在HE染色結(jié)果中,組織工程支架使早期膠原纖維的排列較為有序,利于細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。外源成纖維細(xì)胞的加入為后期跟腱修復(fù)提供更為有利的條件。F127的加入使材料獲得更優(yōu)良的細(xì)胞黏附性能,2周時(shí)在細(xì)胞密度上就顯現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)。[結(jié)論]電流體3D打印能構(gòu)建具備可控纖維及良好孔隙的組織工程支架。使用F127能改善PCL的親水性能,提高其體外降解速率,雖然機(jī)械性能下降,但獲得了較優(yōu)異的微米級(jí)結(jié)構(gòu)和納米孔隙的組織工程支架。將胚胎成纖維細(xì)胞C3H10T1/2種植于支架上,5%F127占比的PCL支架有利于細(xì)胞的黏附和生長(zhǎng),且具備良好孔隙結(jié)構(gòu),表明該支架具備優(yōu)良的生物相容性。將細(xì)胞和支架移植到跟腱缺損大鼠體內(nèi),該組織工程支架使跟腱膠原纖維排列更為有序,加入5%F127的PCL支架有利于膠原纖維積聚及排列。
楊爽[8]（2019）在《基于反向旋轉(zhuǎn)擠出技術(shù)構(gòu)建的取向性膠原纖維及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用》文中認(rèn)為因疾病、交通事故或不當(dāng)?shù)捏w育運(yùn)動(dòng)造成的肌腱損傷是常見(jiàn)的臨床問(wèn)題。肌腱組織因具有少細(xì)胞、寡供血以及低代謝的結(jié)構(gòu)特征,使受損肌腱,包括受損腱體和肌腱止點(diǎn)損傷的腱-骨區(qū)域,難以自愈。將干細(xì)胞與仿生支架復(fù)合的組織工程策略為有效修復(fù)損傷肌腱帶來(lái)了希望。從全面仿生天然肌腱胞外基質(zhì)（ECM）的組成、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和力學(xué)性質(zhì)的策略出發(fā),我們認(rèn)為,高取向性膠原纖維支架是肌腱腱體修復(fù)的理想支架,而分級(jí)取向的膠原纖維支架是腱-骨連接處修復(fù)的理想支架。由于難溶性膠原纖維（ICFs）擁有更多天然分子交聯(lián)和分子排列,其自組裝程度和力學(xué)性能更接近天然肌腱ECM,因此,我們進(jìn)一步認(rèn)為,ICFs比可溶性膠原更適合于肌腱修復(fù)支架的加工。但遺憾的是,目前以ICFs為原料的取向性纖維的加工技術(shù)較為缺乏。反向旋轉(zhuǎn)擠出（CRE）技術(shù)適用于ICFs支架的加工,具有纖維取向性可調(diào)、加工速度快、可控性好等優(yōu)點(diǎn),但迄今為止卻鮮有將其應(yīng)用于肌腱修復(fù)支架的加工。據(jù)此,本文在探索了ICFs的提取條件和理化性能的基礎(chǔ)上,以ICFs為原料,創(chuàng)新性地采用CRE技術(shù)制備出了不同取向的膠原纖維支架,并從理化性能、體外生物學(xué)性能和體內(nèi)修復(fù)效果等方面系統(tǒng)地評(píng)估了各膠原纖維支架用于肌腱腱體/腱-骨缺損修復(fù)的可行性并分析了相關(guān)機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下:（1）基于CRE技術(shù)構(gòu)建不同取向性的膠原纖維膜（CMs）以牛皮為原料分離提取并純化得到ICFs,以酶溶性膠原（PSC）為對(duì)照,通過(guò)凱氏定氮、高效液相色譜（HPLC）、十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、傅里葉紅外光譜（FTIR）和圓二色光譜（CD）對(duì)膠原蛋白的組成和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。結(jié)果表明:提取的ICFs和PSC為典型的I型膠原蛋白,具有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu),其純度和羥脯氨酸滿足我國(guó)膠原蛋白海綿的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YY/T1511–2017）。理化性能測(cè)試發(fā)現(xiàn):ICFs比PSC具有更高的交聯(lián)度、熱穩(wěn)定性、酶解穩(wěn)定性以及拉伸力學(xué)強(qiáng)度,更適合于膠原纖維支架的制備。進(jìn)一步,以ICFs為原料,通過(guò)調(diào)節(jié)同軸內(nèi)外旋轉(zhuǎn)錐體的旋轉(zhuǎn)速率調(diào)控ICFs取向,成功制得三種不同取向的CMs,即高取向性（CMa,取向分布為0°-15°）、中度取向性（CMm,取向分布為-15°–30°）和隨機(jī)取向性（CMr,取向分布為-60°-60°）。熱收縮率縱橫比（S縱/S橫）和熱收縮力縱橫比（F縱/F橫）檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了各CMs的取向程度。力學(xué)拉伸測(cè)試表明:三種CMs均具有優(yōu)良的縱向拉伸性能,呈現(xiàn)CMa（18.45±0.91 MPa）>CMm（16.35±0.75 MPa）>CMr（13.81±0.39MPa）。以上結(jié)果提示,CRE技術(shù)加工的不同取向性CMs可以有效地仿生肌腱的化學(xué)組成、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和力學(xué)性能。（2）取向性CMs對(duì)rBMSCs形態(tài)及分化行為的影響為了探究CMs纖維取向?qū)Ω杉?xì)胞行為的影響,以rBMSCs為模型細(xì)胞,采用SEM和免疫熒光染色技術(shù)觀察了rBMSCs在CMs上的早期細(xì)胞形態(tài),并進(jìn)一步通過(guò)熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡法（WB）系統(tǒng)地探究了在正常和誘導(dǎo)培養(yǎng)基條件下各CMs對(duì)rBMSCs向肌腱系、成骨系和軟骨系分化的影響。結(jié)果顯示:高取向性CMa可以誘導(dǎo)rBMSCs呈紡錘狀的伸長(zhǎng)形態(tài),促進(jìn)rBMSCs向肌腱系分化并抑制其向成骨和軟骨系分化,甚至具有一定的抵抗成骨/軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的能力,提示CMa適合作為肌腱腱體的修復(fù)支架;相反,隨著CMa、CMm和CMr取向程度依次降低,它們誘導(dǎo)rBMSCs向肌腱系分化的能力減弱而向成骨/軟骨系分化能力增強(qiáng),提示它們組合的分級(jí)取向結(jié)構(gòu)有望作為腱-骨修復(fù)支架。（3）高取向性CMa-BMSCs支架對(duì)損傷跟腱腱體的原位修復(fù)為了考察CMa作為缺損腱體修復(fù)支架的可行性,我們將CMa作為支架材料,與種子細(xì)胞rBMSCs復(fù)合培養(yǎng)制得組織工程肌腱（CMa-BMSCs）。將CM-BMSCs植入裸鼠皮下2周后發(fā)現(xiàn)rBMSCs仍然存活,且CMa可以誘導(dǎo)細(xì)胞和沉積膠原纖維的取向。進(jìn)一步,采用大鼠跟腱缺損模型,以自體肌腱縫合作為陽(yáng)性對(duì)照,空缺作為陰性對(duì)照,CMr-BMSCs為實(shí)驗(yàn)對(duì)照,檢測(cè)了CMa-BMSCs對(duì)損傷腱體的原位修復(fù)效果。宏觀評(píng)分、跟腱功能指數(shù)（AFI）測(cè)定、核磁共振成像（MRI）、常規(guī)病理分析、生物力學(xué)評(píng)價(jià)、以及肌腱相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)情況表明,CMa-BMSCs可以促進(jìn)體內(nèi)肌腱系分化,對(duì)缺損腱體的修復(fù)質(zhì)量明顯優(yōu)于CMr-BMSCs,與自體肌腱修復(fù)質(zhì)量基本相當(dāng),證明CRE構(gòu)建的基于ICFs的高取性CMa是修復(fù)損傷肌腱腱體的良好支架。（4）分級(jí)取向CMar-BMSCs支架對(duì)腱-骨連接處原位修復(fù)的初探將CMa和CMr復(fù)合制得分級(jí)取向支架(CMar),以考察CMar對(duì)腱-骨區(qū)域的修復(fù)效果。力學(xué)拉伸測(cè)試、免疫熒光染色和ALP染色結(jié)果表明,CMar具有良好的力學(xué)穩(wěn)定性且能夠誘導(dǎo)rBMSCs呈現(xiàn)分級(jí)的細(xì)胞形態(tài)和分化傾向。在此基礎(chǔ)之上,進(jìn)一步采用大鼠跟腱-跟骨缺損模型初步評(píng)估了CMar-BMSCs對(duì)腱-骨缺損的原位修復(fù)能力。X光檢測(cè)和micro-CT結(jié)果顯示:在跟骨區(qū)域,CMar-BMSCs與CMr-BMSCs的新骨生成量相當(dāng),而在肌腱腱體區(qū)域,CMar-BMSCs沒(méi)有出現(xiàn)CMr-BMSCs所呈現(xiàn)的明顯鈣化影。HE和MT結(jié)果顯示:在肌腱腱體區(qū)域,CMar-BMSCs與CMa-BMSCs膠原纖維均組裝成熟且趨于有序化,而在腱-骨界面區(qū)域,只有CMar-BMSCs出現(xiàn)了纖維軟骨移行帶而CMa-BMSCs沒(méi)有。以上結(jié)果表明:CMar-BMSCs在腱端具有與CMa-BMSCs相似的促肌腱修復(fù)并抑制異位成骨的能力,在骨端具有與CMr-BMSCs相似的促骨修復(fù)能力,以及良好的促腱-骨界面修復(fù)能力,證明CRE構(gòu)建的基于ICFs的分級(jí)取向CMar是修復(fù)損傷腱-骨區(qū)域的良好支架。綜上所述,本論文運(yùn)用CRE技術(shù)成功構(gòu)建了三種不同取向（CMa、CMm、CMr）的難溶性膠原纖維支架,并證實(shí)高取向性CMa和分級(jí)取向CMar通過(guò)仿生化學(xué)組成、拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)和力學(xué)性能而可以實(shí)現(xiàn)肌腱腱體和腱-骨缺損的有效修復(fù)。相關(guān)研究結(jié)果為肌腱腱體/腱-骨組織工程理想支架的制備提供了一條新的途徑,對(duì)于推進(jìn)肌腱組織工程的應(yīng)用進(jìn)程有重要意義。
宮鳳艷[9]（2019）在《維拉帕米通過(guò)TGF-β1/smad3/P38/ERK1/2信號(hào)通路緩解大鼠跟腱損傷修復(fù)后的纖維化粘連》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理背景:跟腱是人體最強(qiáng)壯、最粗的肌腱,也是最容易斷裂的,所以跟腱斷裂是臨床上常見(jiàn)的一種肌腱損傷。肌腱損傷后愈合的過(guò)程發(fā)生在三個(gè)不同的階段:炎癥、增殖和重塑。在愈合期,跟腱的成纖維細(xì)胞大量增殖,細(xì)胞外基質(zhì)的成分（主要是III型膠原蛋白）隨之合成而增加,并沉積在損傷部位。在重塑期,細(xì)胞結(jié)構(gòu)變小,合成速度變慢。肌腱損傷后的愈合過(guò)程包括內(nèi)在愈合和外在愈合。外在愈合的特征在于明顯的炎癥反應(yīng),然后是特化的成纖維細(xì)胞募集和增殖。急性跟腱斷裂的修復(fù)通常效果良好,但肌腱纖維化粘連卻是肌腱損傷術(shù)后最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一。因此,抑制肌腱粘連的形成將有助于改善肌腱修復(fù)的愈合質(zhì)量。目前,已有多項(xiàng)研究證實(shí)受損腱旁組織內(nèi)的成纖維細(xì)胞增殖在粘連形成中起重要作用,抑制炎癥反應(yīng)和成纖維細(xì)胞增殖可明顯抑制損傷部位周?chē)尺B形成。眾所周知,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1）是各種損傷后組織發(fā)生病理性纖維化的因素之一,而TGF-β1/Smad信號(hào)是創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中的重要信號(hào)通路。肌腱損傷時(shí),TGF-β1/Smad信號(hào)可刺激腱細(xì)胞DNA合成,促使成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集,并通過(guò)參與血管生成、刺激膠原產(chǎn)生從而促進(jìn)腱細(xì)胞增殖和肌腱的修復(fù)。TGF-β1還能調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá),通過(guò)促進(jìn)二者裂解膠原碎片或明膠進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）和膠原的合成、降解。還有研究表明,TGF-β1既可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的Smad2/3轉(zhuǎn)錄因子通路,又可以通過(guò)非標(biāo)準(zhǔn)的p38 MAPK信號(hào)通路來(lái)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞中的膠原蛋白表達(dá)。近年來(lái),鈣離子通道阻滯劑的抗炎、抗纖維化作用逐漸受到關(guān)注。鈣通道阻滯劑維拉帕米可以抑制炎性細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1和IL-6的生產(chǎn),增加血漿IL-10等炎性細(xì)胞因子的水平,通過(guò)抑制成纖維細(xì)胞粘附和增殖來(lái)減少瘢痕形成,參與細(xì)胞外基質(zhì)降解和減少疤痕形成。已有研究表明,外用維拉帕米可減少損傷部位坐骨神經(jīng)I型和III型膠原的形成,減少周?chē)窠?jīng)修復(fù)后瘢痕組織的形成,促進(jìn)軸突的生長(zhǎng),但是關(guān)于維拉帕米是否對(duì)跟腱損傷也有治療效果目前尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,闡明維拉帕米是否可應(yīng)用于跟腱損傷后治療,并明確其可能的作用機(jī)制將對(duì)我們改進(jìn)或開(kāi)發(fā)更有效的跟腱損傷修復(fù)方案提供理論基礎(chǔ)。目的:本研究在建立大鼠跟腱橫行貫通切斷的急性損傷模型的基礎(chǔ)上,考察外用維拉帕米的療效,旨在評(píng)估維拉帕米對(duì)跟腱損傷的修復(fù)效果及其在預(yù)防粘連方面的作用效果,并探討其潛在的作用機(jī)制是否與TGF-β1/smad3及ERK1/2/p38 MAPK信號(hào)通路相關(guān),這為我們更有效的治療跟腱損傷并恢復(fù)跟腱功能提供新的方向。方法:建立大鼠跟腱橫行貫通切斷的急性損傷模型,跟腱橫斷后,采用改良的“Kessler”法,使用5-0無(wú)損傷縫合線將跟腱斷端縫合,模型對(duì)照組的用蘸有100ul生理鹽水的明膠海綿（面積0.5cm×0.5cm）包裹損傷跟腱斷端周?chē)?縫合皮膚;干預(yù)組用蘸有維拉帕米藥物（濃度2.5mg/ml）100ul的明膠海綿包裹損傷跟腱斷端周?chē)?間斷縫合皮膚,假手術(shù)組劃開(kāi)大鼠跟腱表面皮膚,游離跟腱周邊軟組織,而后間斷縫合皮膚傷口。通過(guò)組織形態(tài)學(xué)觀察（HE、Masson染色）進(jìn)行粘連評(píng)分和炎癥分級(jí),通過(guò)生物力學(xué)測(cè)定和步態(tài)分析評(píng)估鈣通道阻滯劑維拉帕米對(duì)跟腱粘連形成的影響。采用免疫組化方法考察維拉帕米干預(yù)對(duì)損傷縫合后跟腱組織中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2、MMP-9）蛋白水平表達(dá)的影響,免疫熒光考察肌動(dòng)蛋白（α-SMA）和波形蛋白（Vimnentin）分布,利用Western blot考察維拉帕米對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白col I和col III的表達(dá)及相關(guān)通路TGF-β1/smad3的影響及其對(duì)纖維化粘連有關(guān)的ERK1/2和p38MAPK信號(hào)通路的影響。結(jié)果:建立大鼠跟腱急性損傷模型,設(shè)置假手術(shù)組（A-sham）、模型對(duì)照組（B-control）、藥物干預(yù)組（C-VP）,于術(shù)后1周、2周、4周進(jìn)行跟腱損傷修復(fù)后炎癥指標(biāo)、纖維化指標(biāo)及跟腱功能的測(cè)定:（1）與對(duì)照組相比,VP干預(yù)組肌腱更飽滿,更平滑,凹陷和腱束分離程度低于對(duì)照組,愈合優(yōu)于對(duì)照組,最大拉斷力多于對(duì)照組,并且VP干預(yù)組粘連分級(jí)低于對(duì)照組。（2）對(duì)照組和干預(yù)組炎癥分級(jí)具有明顯的組間差異（P<0.05）,并且干預(yù)組與對(duì)照組比較跟腱功能（AFI）明顯提高。（3）干預(yù)組與對(duì)照組比較,術(shù)后第1周、第2周MMP-2和MMP-9表達(dá)明顯下降（P<0.05）,第1周、2周、4周Vimentin和α-SMA的表達(dá)水平均明顯下降（P<0.05）。（4）與對(duì)照組相比,VP干預(yù)能夠顯著抑制col I和col III的表達(dá),并且TGF-β1、p-smad3、p-p38和p-ERK1/2蛋白表達(dá)水平表達(dá)量均明顯降低（P<0.05）。結(jié)論:（1）維拉帕米具有抗肌腱損傷術(shù)后粘連的作用,它可減少肌腱周?chē)M織內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的沉積,有效平衡膠原蛋白的合成與降解,減少炎癥細(xì)胞的分布;（2）維拉帕米可能通過(guò)抑制smad3磷酸化阻止TGF-β1信號(hào)激活,進(jìn)而抑制MMP-2、MMP-9合成,減少膠原蛋白col I和col III的表達(dá),減緩纖維細(xì)胞過(guò)度增殖,抑制纖維化進(jìn)程;（3）維拉帕米通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度進(jìn)而抑制p38和ERK1/2通路激活,抑制纖維細(xì)胞過(guò)度增殖。
王云蛟[10]（2019）在《阿司匹林對(duì)肌腱干細(xì)胞和肌腱病損傷修復(fù)的作用和機(jī)制研究》文中研究說(shuō)明肌腱病（tendinopathy）在體育訓(xùn)練及日常生活中十分常見(jiàn),它是骨科和運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)當(dāng)中最常見(jiàn)的一類(lèi)運(yùn)動(dòng)損傷性疾病,包括跟腱病、網(wǎng)球肘、肩袖損傷、岡上肌腱炎等30多種。肌腱因其寡細(xì)胞、寡血供和寡神經(jīng)支配的特點(diǎn)使得其在損傷后往往不能恢復(fù)正常組織結(jié)構(gòu),而是由瘢痕組織修復(fù)來(lái)代替,損傷肌腱瘢痕修復(fù)后不具備正常肌腱的生物力學(xué)性能,且損傷部位常常出現(xiàn)脂肪浸潤(rùn)、異位鈣化及疼痛等并發(fā)癥,再損傷甚至再斷裂發(fā)生率較高。近年來(lái),肌腱病的發(fā)病率逐年提高,其占到所有運(yùn)動(dòng)損傷性疾病的50%以上,其中14%的專(zhuān)業(yè)運(yùn)動(dòng)員飽受肌腱病的困擾,除了在長(zhǎng)期反復(fù)應(yīng)用肌腱的運(yùn)動(dòng)人群中常見(jiàn)外,遺傳因素和基因突變等往往使得一些個(gè)體更容易出現(xiàn)肌腱相關(guān)疾病。由于治療策略及療效有限,一線保守治療后往往需要3-6個(gè)月的康復(fù)時(shí)間,有大約2445.5%的患者會(huì)發(fā)展為難治性肌腱病,這極大的影響了專(zhuān)業(yè)運(yùn)動(dòng)員的成績(jī)和病人的日常生活質(zhì)量,也為家庭和整個(gè)社會(huì)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),因此針對(duì)肌腱病治療開(kāi)展深入研究也就勢(shì)在必行。肌腱干細(xì)胞（tendon stem cells,TSCs）于2007年在小鼠和人肌腱中被首次發(fā)現(xiàn),作為肌腱細(xì)胞的前體細(xì)胞,其具有與間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）相似的生物學(xué)功能但又區(qū)別于MSCs具有自己獨(dú)特的標(biāo)志物,其具有多向分化潛能且分化能力強(qiáng),可向成肌腱、成脂肪、成骨和成軟骨等多方向分化,目前已有很多學(xué)者報(bào)道了其可直接參與肌腱損傷的再生與修復(fù)過(guò)程。促進(jìn)TSCs向成肌腱方向分化和抑制病理狀態(tài)下TSCs的非成肌腱方向（成脂肪、成骨和成軟骨分化）分化是目前治療肌腱病損傷修復(fù)的有效策略?；谏鲜鰡?wèn)題和現(xiàn)狀,我們可以明確TSCs的增殖、凋亡、分化及其所處微環(huán)境的變化對(duì)肌腱病發(fā)生、發(fā)展及愈合過(guò)程有著重要的意義,任何影響其上述生物學(xué)功能的因素都勢(shì)必會(huì)影響病腱損傷修復(fù)的預(yù)后。目前針對(duì)肌腱病的治療包括減少運(yùn)動(dòng)量和改變不恰當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)方式、口服非甾體類(lèi)抗炎藥（non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs）、局部激素注射、體外沖擊波治療、細(xì)胞學(xué)（富含血小板血漿注射、干細(xì)胞注射）和組織工程學(xué)治療（支架材料+干細(xì)胞移植）等,其中NSAIDs因其具有抗炎和鎮(zhèn)痛的作用,是臨床中保守治療肌腱病最常用以及病人依從性最好的一種保守治療措施。然而,除了其抗炎和鎮(zhèn)痛的作用,NSAIDs對(duì)TSCs生物學(xué)行為以及對(duì)肌腱病損傷修復(fù)的作用和相關(guān)機(jī)制目前尚不明確,針對(duì)上述問(wèn)題的闡述有助于為臨床提供更加可靠的NSAIDs治療肌腱病的用藥依據(jù),也可為臨床合理應(yīng)用NSAIDs提供初步參考。阿司匹林（aspirin,ASA）作為NSAIDs的最經(jīng)典代表藥物已被廣泛用于抗腫瘤、抗凝等多個(gè)領(lǐng)域,其對(duì)多種類(lèi)型干細(xì)胞分化的作用影響也有報(bào)道,那么其是否對(duì)肌腱病損傷修復(fù)和TSCs多向分化有調(diào)節(jié)作用?如果有促修復(fù)作用具體機(jī)制又是什么?是否通過(guò)調(diào)節(jié)TSCs的多向分化而實(shí)現(xiàn)上述過(guò)程?圍繞上述問(wèn)題我們開(kāi)展本研究。本研究首先篩選相對(duì)安全的阿司匹林給藥濃度,然后擬觀察阿司匹林對(duì)大鼠跟腱病損傷修復(fù)的作用,最后闡述阿司匹林通過(guò)調(diào)節(jié)TSCs的多向分化而促進(jìn)大鼠肌腱病損傷修復(fù)的機(jī)制。1阿司匹林對(duì)TSCs凋亡的影響本章研究通過(guò)觀察不同濃度阿司匹林對(duì)TSCs凋亡的影響結(jié)合臨床實(shí)際用藥劑量,篩選出相對(duì)安全的給藥劑量,同時(shí)闡述相關(guān)信號(hào)通路在凋亡過(guò)程中的作用。1.1實(shí)驗(yàn)方法1.1.1設(shè)置阿司匹林濃度梯度,根據(jù)臨床實(shí)際用藥濃度、查閱相關(guān)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)并結(jié)合其可能的與組織修復(fù)相關(guān)的作用,分別為0、0.25、0.5、1、2、5m M,對(duì)TSCs處理24h;時(shí)間依賴實(shí)驗(yàn)設(shè)置時(shí)間節(jié)點(diǎn),分別為0、1、2、4、8、12、16、20、24h,濃度為5m M。1.1.2通過(guò)Hoechst33342細(xì)胞核染色和FITC/PI流式細(xì)胞學(xué)分析來(lái)檢測(cè)TSCs的凋亡情況。1.1.3通過(guò)Western blot（WB）來(lái)觀察凋亡相關(guān)線粒體通路蛋白Bcl2、Bax以及Cleavaged（Cl）.Caspase3表達(dá)變化情況。1.1.4通過(guò)WB來(lái)觀察經(jīng)典Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白DKK1、P-GSK-3β、P-β-Catenin、C-myc和Cyclin D1表達(dá)變化情況。1.1.5在TSCs中加入經(jīng)典Wnt/β-Catenin通路激活劑Wnt3a和Li Cl后,通過(guò)WB來(lái)觀察Wnt通路相關(guān)蛋白和凋亡相關(guān)線粒體通路蛋白的表達(dá)變化情況。1.1.6在TSCs中加入經(jīng)典Wnt通路激活劑Wnt3a和Li Cl后,通過(guò)Hoechst33342和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)來(lái)觀察凋亡變化情況。1.1.7通過(guò)WB技術(shù)來(lái)觀察阿司匹林對(duì)COX-2表達(dá)的影響,同時(shí)觀察加入COX-2抑制劑NS398后凋亡相關(guān)蛋白Cl.Caspase-3表達(dá)變化情況。1.1.8通過(guò)Hoechst33342和流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)來(lái)觀察在阿司匹林處理基礎(chǔ)上,加入NS398后觀察凋亡變化情況。1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2.1從濃度依賴和時(shí)間依賴性來(lái)看,阿司匹林分別增加了Hoechst33342（+）細(xì)胞數(shù)量和FITC（+）/PI（+）的細(xì)胞數(shù)量,尤其在阿司匹林在濃度5m M時(shí)凋亡率超過(guò)40%,盡管1和2m M下阿司匹林同樣有誘導(dǎo)凋亡的作用,但結(jié)合其臨床有效作用濃度,02m M可被認(rèn)為是相對(duì)安全給藥濃度。在加入經(jīng)典Wnt通路激活劑Li Cl和Wnt3a后,上述陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量減少。1.2.2從濃度依賴和時(shí)間依賴性來(lái)看,加入阿司匹林后,凋亡標(biāo)志蛋白Bax和Cl.Caspase-3的表達(dá)升高,凋亡拮抗蛋白Bcl2表達(dá)降低。并在加入經(jīng)典Wnt通路激活劑Li Cl和Wnt3a后,上述蛋白表達(dá)趨勢(shì)得到逆轉(zhuǎn)。1.2.3從濃度依賴和時(shí)間依賴性來(lái)看,加入阿司匹林后,經(jīng)典Wnt通路上游抑制劑DKK1表達(dá)升高,通路相關(guān)蛋白P-β-Catenin表達(dá)升高,P-GSK-3β、Cyclin D1和C-myc表達(dá)降低,并在加入Wnt通路激活劑Li Cl和Wnt3a后,上述蛋白表達(dá)趨勢(shì)得到逆轉(zhuǎn)。1.2.4阿司匹林促進(jìn)了COX-2的表達(dá),在加入NS398后,Hoechst33342（+）細(xì)胞數(shù)量和FITC（+）/PI（+）的細(xì)胞數(shù)量減少,Cl.Caspase-3的表達(dá)升高。1.3小結(jié)1.3.1確立了相對(duì)安全給藥劑量為02m M,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了給藥濃度。2阿司匹林對(duì)大鼠肌腱病損傷修復(fù)的作用本章研究在前一章所篩相對(duì)安全給藥劑量基礎(chǔ)上,觀察阿司匹林對(duì)大鼠肌腱病損傷修復(fù)的作用。2.1實(shí)驗(yàn)方法2.1.1大鼠跟腱病動(dòng)物模型的建立24只雄性大鼠,腹腔麻醉后,于右側(cè)跟腱中點(diǎn)部位給予10mg/ml I型膠原酶注射,左側(cè)注射PBS作為對(duì)照組。2.1.2阿司匹林的治療經(jīng)過(guò)1周急性炎癥期后給予阿司匹林喂服治療,喂服劑量為30mg/d,持續(xù)時(shí)間為4周。實(shí)驗(yàn)分組具體為:對(duì)照組、肌腱病損傷組、肌腱病阿司匹林治療組,每組8只大鼠,治療4周后收集跟腱進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.1.3體外細(xì)胞炎癥模型的建立于6孔板中種植TSCs細(xì)胞（6萬(wàn)/孔）,添加IL-1β（10ng/ml）用來(lái)體外建立炎癥模型,具體實(shí)驗(yàn)分組為:對(duì)照組、IL-1β組、ASA組、IL-1β+ASA（2m M）組,處理時(shí)間為24h。2.1.4阿司匹林對(duì)損傷跟腱巨噬細(xì)胞表型和炎癥因子表達(dá)的影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,阿司匹林治療4周后收集跟腱。通過(guò)免疫組化觀察I型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物i NOS、單核細(xì)胞標(biāo)志物CD14和II型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD206表達(dá)的變化;同時(shí)觀察炎癥因子IL-6和抗炎因子IL-10的變化。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分,4組細(xì)胞在處理24h后通過(guò)q RT-PCR來(lái)觀察IL-6和IL-10因子的變化。2.1.5阿司匹林對(duì)損傷肌腱外基質(zhì)合成和分解的影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,治療4周后收集跟腱。通過(guò)免疫組化觀察MMP-3、TIMP-3和Col-I的變化;細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分,通過(guò)q RT-PCR分析MMP-3、TIMP-3和Col-I的表達(dá)變化。2.1.6阿司匹林對(duì)肌腱損傷后瘢痕相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)的影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分,在治療4周后收集跟腱組織,通過(guò)免疫熒光觀察瘢痕相關(guān)標(biāo)志物Biglycan、COMP、Fibronectin和TGF-β1的表達(dá)變化;細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分,通過(guò)q RT-PCR觀察ACAN、COMP、EGR-1和FMOD的表達(dá)變化。2.1.7阿司匹林對(duì)TSCs增殖和遷移能力的影響通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)觀察在IL-1β的處理下,經(jīng)過(guò)阿司匹林的治療后,TSCs遷移能力的變化;通過(guò)Brd U實(shí)驗(yàn)觀察在IL-1β的誘導(dǎo)下,經(jīng)過(guò)阿司匹林處理后,TSCs增殖的變化。2.1.8阿司匹林對(duì)跟腱損傷愈合和生物力學(xué)的影響動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),通過(guò)免疫熒光觀察經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后損傷肌腱Col-I/Col-III的變化情況;通過(guò)跟腱牽拉實(shí)驗(yàn),觀察損傷跟腱經(jīng)過(guò)治療后生物力學(xué)性能的變化。2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1動(dòng)物實(shí)驗(yàn),免疫組化結(jié)果顯示,相比損傷組,經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,I型巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量減少,而II型巨噬細(xì)胞增多;促炎因子IL-6減少,抗炎因子IL-10增多;基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-3表達(dá)降低,組織相關(guān)金屬蛋白酶抑制劑TIMP-3表達(dá)升高,跟腱修復(fù)指標(biāo)Col-I表達(dá)升高。2.2.2細(xì)胞實(shí)驗(yàn),PCR結(jié)果顯示相比IL-1β組,阿司匹林組治療后,IL-6和MMP-3表達(dá)降低,IL-10、TIMP-3和Col1a1表達(dá)升高。2.2.3動(dòng)物實(shí)驗(yàn),免疫熒光結(jié)果顯示,相比損傷組,經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,瘢痕標(biāo)志物Biglycan、COMP、Fibronectin和TGF-β1表達(dá)降低;細(xì)胞實(shí)驗(yàn),PCR結(jié)果顯示,相比IL-1β組,經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,ACAN、COMP、EGR-1的表達(dá)降低,而瘢痕抑制因子FMOD的表達(dá)升高;Col-1/III的比例相比損傷組有明顯提升。2.2.4細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),IL-1β促進(jìn)了TSCs的遷移,而經(jīng)過(guò)阿司匹林處理后,TSCs的遷移能力得到逆轉(zhuǎn);細(xì)胞增殖Brd U實(shí)驗(yàn)結(jié)果示,IL-1β促進(jìn)了TSCs的增殖,而加入阿司匹林后則抑制了TSCs的過(guò)度增殖。2.2.5跟腱牽拉試驗(yàn)結(jié)果提示,相比損傷組,經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,最大拉斷力和楊氏模量都得到明顯提升。2.3小結(jié)2.3.1阿司匹林促進(jìn)了病腱損傷修復(fù)過(guò)程。2.3.2阿司匹林提升了病腱的生物力學(xué)性能,降低了再斷裂發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。3阿司匹林對(duì)TSCs成肌腱分化的影響本章研究在前面兩章研究基礎(chǔ)上探究阿司匹林是否通過(guò)調(diào)節(jié)TSCs成肌腱分化而促進(jìn)病腱損傷修復(fù)的機(jī)制。3.1實(shí)驗(yàn)方法3.1.1細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn),在成肌腱誘導(dǎo)培養(yǎng)基基礎(chǔ)上,根據(jù)阿司匹林的濃度分組為:0、0.25、0.5、1、2m M,天狼星紅染色觀察各組成肌腱水平。3.1.2以2m M阿司匹林為基礎(chǔ),分別成肌腱誘導(dǎo)3、7和14天,通過(guò)q RT-PCR觀察成肌腱指標(biāo)SCX、TNMD和TNC的變化,通過(guò)WB觀察3個(gè)時(shí)間點(diǎn)TNC、TNMD和SCX的表達(dá)變化。3.1.3通過(guò)m RNA測(cè)序觀察成肌腱誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)+阿司匹林組,篩選出兩組間的分子變化;通過(guò)WB和PCR來(lái)驗(yàn)證所篩分子是否跟m RNA測(cè)序結(jié)果一致。3.1.4通過(guò)m RNA測(cè)序、WB和PCR結(jié)果,篩選出目的分子,向TSCs細(xì)胞中加入目的蛋白分子,分別通過(guò)天狼星紅染色、WB和PCR來(lái)驗(yàn)證目的蛋白分子對(duì)成肌腱分化標(biāo)志物Col-1、TNMD、SCX和TNC表達(dá)的變化。3.1.5通過(guò)WB觀察兩組細(xì)胞（誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)+阿司匹林組）之間在3天、7天和14天P-Smad1/5的變化,同時(shí)驗(yàn)證篩選目的蛋白分子對(duì)P-Smad1/5的影響以及加入其抑制劑后P-Smad1/5的變化。通過(guò)天狼星紅染色、WB和PCR觀察加入目的蛋白因子和抑制劑后成肌腱分化標(biāo)志物TNMD、SCX表達(dá)的變化。3.1.6對(duì)于動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn),通過(guò)I型膠原酶造跟腱病損傷模型1周后,阿司匹林治療4周后,HE染色來(lái)觀察造模及治療效果,同時(shí)給予進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分;通過(guò)免疫熒光觀察成肌腱標(biāo)志物SCX、TNMD和TNC的表達(dá)變化;通過(guò)對(duì)正常跟腱組、肌腱病組和肌腱病阿司匹林治療組跟腱的牽拉實(shí)驗(yàn),分析三組跟腱生物力學(xué)性能包括最大拉斷力、終斷壓強(qiáng)和拉斷伸長(zhǎng)率的變化。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.2.1對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),隨著阿司匹林濃度的增加,天狼星紅染色面積及成梭形形態(tài)的細(xì)胞陽(yáng)性率增加;PCR和WB結(jié)果示在3天、7天和14天,SCX、TNMD和TNC分別不同程度的表達(dá)升高。3.2.2 m RNA測(cè)序結(jié)果提示,兩組別之間篩選出差別分子生長(zhǎng)分化因子6（growth differentiation factor 6,GDF6）、GDF7和GDF11;通過(guò)WB和PCR驗(yàn)證提示,GDF7和GDF11表達(dá)升高,而GDF6變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,因而舍棄GDF6。3.2.3進(jìn)一步驗(yàn)證GDF7和GDF11對(duì)TSCs成肌腱分化的影響,天狼星紅染色、WB和PCR結(jié)果示,GDF7可以促進(jìn)成肌腱分化水平,而GDF11對(duì)成肌腱分化的影響不大,因而舍棄GDF11。3.2.3 GDF7增加了P-Smad1/5的磷酸化水平,其抑制劑LDN193189則逆轉(zhuǎn)了該趨勢(shì),以上通過(guò)天狼星紅染色、WB和PCR驗(yàn)證。3.2.4對(duì)于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),組織學(xué)評(píng)分顯示經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后病腱評(píng)分明顯升高,HE鏡下可見(jiàn)跟腱排列更加有序;免疫熒光結(jié)果提示SCX、TNMD和TNC表達(dá)在治療組分別增加;跟腱牽拉實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,生物力學(xué)性能得到明顯提升。3.3小結(jié)3.3.1阿司匹林通過(guò)調(diào)節(jié)GDF7/Smad1/5通路來(lái)促進(jìn)TSCs的成肌腱分化。3.3.2阿司匹林通過(guò)促進(jìn)TSCs的成肌腱分化而促進(jìn)病腱損傷的修復(fù)。4阿司匹林對(duì)TSCs成脂肪分化的影響本章研究在前面三章基礎(chǔ)上繼續(xù)探討阿司匹林促進(jìn)病腱修復(fù)的機(jī)制,是否通過(guò)調(diào)節(jié)TSCs成脂肪分化和成骨分化而實(shí)現(xiàn)其促損傷修復(fù)的作用。4.1實(shí)驗(yàn)方法4.1.1細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn),在成脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)基基礎(chǔ)上,根據(jù)阿司匹林的濃度分組為:0、0.25、0.5、1、2m M,處理24h,油紅O染色觀察各組成脂肪分化水平。4.1.2以2m M阿司匹林為基礎(chǔ),分別成脂肪誘導(dǎo)3、7和14天,通過(guò)PCR觀察成脂肪分化指標(biāo)ap2、PPARγ和C/EBPα的變化,通過(guò)WB觀察3個(gè)時(shí)間點(diǎn)ap2、PPARγ和C/EBPα的表達(dá)變化。4.1.3通過(guò)m RNA測(cè)序觀察成脂肪分化誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)+阿司匹林組,篩選出兩組間差異顯著分子;通過(guò)WB來(lái)驗(yàn)證所篩選信號(hào)通路是否跟m RNA測(cè)序結(jié)果一致。4.1.4通過(guò)m RNA測(cè)序篩選、WB結(jié)果驗(yàn)證得出相關(guān)信號(hào)通路,向TSCs細(xì)胞中加入該通路的激活劑或者抑制劑,分別通過(guò)油紅O染色和WB來(lái)觀察成脂肪分化的變化,PPARγ表達(dá)的變化。4.1.5對(duì)于動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn),通過(guò)I型膠原酶造跟腱病損傷模型后,阿司匹林治療4周,HE染色來(lái)觀察造模、治療效果和脂肪的變化情況,同時(shí)進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分;通過(guò)免疫熒光觀察成脂肪分化標(biāo)志物ap2和PPARγ的表達(dá)變化;通過(guò)對(duì)正常跟腱、模型組病腱、治療組跟腱三組跟腱的牽拉實(shí)驗(yàn),分析三組跟腱生物力學(xué)性能包括最大拉斷力、終斷壓強(qiáng)和拉斷伸長(zhǎng)率的變化。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.2.1對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),隨著阿司匹林濃度的增加,油紅O染色脂肪形成顯著降低;q PCR和WB結(jié)果示在3天、7天和14天,ap2、PPARγ和C/EBPα分別不同程度的表達(dá)降低。4.2.2 m RNA測(cè)序結(jié)果示,兩組別之間篩選出有差異的信號(hào)通路PTEN/PI3K/AKT通路;向TSCs中加入通路抑制劑VO-Ohpic和IGF-1后通過(guò)WB驗(yàn)證提示,阿司匹林可以激活該通路。4.2.3進(jìn)一步驗(yàn)證阿司匹林是否通過(guò)激活PTEN/PI3K/AKT通路來(lái)抑制TSCs成脂肪分化的影響,油紅O染色和WB結(jié)果示,阿司匹林通過(guò)激活PTEN/PI3K/AKT通路抑制了TSCs的成脂肪分化,加入該通路抑制劑VO-Ohpic和IGF-1后,成脂肪抑制趨勢(shì)得到逆轉(zhuǎn)。4.2.3對(duì)于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),組織學(xué)評(píng)分顯示經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后的病腱評(píng)分明顯升高,HE鏡下可見(jiàn)跟腱排列更加有序,脂肪聚集浸潤(rùn)明顯減少;免疫熒光結(jié)果提示ap2和PPARγ在治療組分別減少;跟腱牽拉實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示經(jīng)過(guò)阿司匹林治療后,生物力學(xué)性能得到明顯改善。4.3小結(jié)4.3.1阿司匹林通過(guò)調(diào)節(jié)PTEN/PI3K/AKT通路來(lái)抑制TSCs的成脂肪分化,抑制成骨分化。4.3.2阿司匹林通過(guò)抑制TSCs的成脂肪分化和脂肪浸潤(rùn)而促進(jìn)病腱損傷的修復(fù)。
二、不同跟腱修復(fù)材料特性的臨床意義（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫(xiě)法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、不同跟腱修復(fù)材料特性的臨床意義（論文提綱范文）
（1）膠原/磷酸鈣仿生礦化材料的制備與優(yōu)化（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 骨修復(fù)材料概述 |
| 1.1.1 天然骨組織 |
| 1.1.2 骨修復(fù)材料研究現(xiàn)狀 |
| 1.2 膠原/磷酸鈣骨修復(fù)材料 |
| 1.2.1 膠原/磷酸鈣材料的特點(diǎn) |
| 1.2.2 膠原/磷酸鈣材料的制備方法 |
| 1.3 PILP構(gòu)筑膠原/磷酸鈣骨修復(fù)材料 |
| 1.3.1 PILP仿生礦化的概述 |
| 1.3.2 PILP仿生礦化的研究現(xiàn)狀 |
| 1.4 PILP 仿生礦化膠原制備方法的優(yōu)化 |
| 1.5 本課題意義及研究?jī)?nèi)容 |
| 1.5.1 課題意義 |
| 1.5.2 主要研究?jī)?nèi)容 |
| 1.5.3 課題創(chuàng)新性 |
| 第二章 滴加礦化工藝流程探索 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 |
| 2.1.3 樣品制備 |
| 2.1.4 透射電鏡分析 |
| 2.1.5 X射線衍射分析 |
| 2.1.6 熱重分析 |
| 2.1.7 X射線熒光光譜分析 |
| 2.1.8 傅里葉紅外光譜分析 |
| 2.1.9 顯著性差異分析 |
| 2.2 結(jié)果與討論 |
| 2.2.1 PAA加入方式 |
| 2.2.2 PAA加入量 |
| 2.2.3 氯化鈣、磷酸氫二鉀加入速率 |
| 2.2.4 氯化鈣、磷酸氫二鉀加入量 |
| 2.3 結(jié)論 |
| 第三章 靜壓力場(chǎng)介入對(duì)滴加礦化的影響 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 |
| 3.1.3 樣品制備 |
| 3.1.4 透射電鏡分析 |
| 3.1.5 掃描電鏡分析 |
| 3.1.6 X射線衍射分析 |
| 3.1.7 熱重和微商熱重分析 |
| 3.1.8 X射線熒光光譜分析 |
| 3.1.9 傅里葉紅外光譜分析 |
| 3.1.10 溶脹比分析 |
| 3.1.11 差示掃描量熱分析 |
| 3.1.12 抗壓縮性能分析 |
| 3.1.13 激光共聚焦實(shí)驗(yàn) |
| 3.1.14 顯著性差異分析 |
| 3.2 結(jié)果與討論 |
| 3.2.1 壓力對(duì)礦化產(chǎn)物形貌構(gòu)造的影響 |
| 3.2.2 壓力對(duì)礦化產(chǎn)物物相狀態(tài)的影響 |
| 3.2.3 壓力對(duì)礦化產(chǎn)物性能的影響 |
| 3.3 結(jié)論 |
| 第四章 交聯(lián)對(duì)滴加礦化工藝制備的仿生礦化產(chǎn)物的影響 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)原料 |
| 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 |
| 4.1.3 樣品制備 |
| 4.1.4 透射電鏡分析 |
| 4.1.5 掃描電鏡分析 |
| 4.1.6 X射線衍射分析 |
| 4.1.7 熱重和微商熱重分析 |
| 4.1.8 X射線熒光光譜分析 |
| 4.1.9 傅里葉紅外光譜分析 |
| 4.1.10 溶脹比分析 |
| 4.1.11 差示掃描量熱分析 |
| 4.1.12 抗壓縮性能分析 |
| 4.1.13 激光共聚焦實(shí)驗(yàn) |
| 4.1.14 顯著性差異分析 |
| 4.2 結(jié)果與討論 |
| 4.2.1 交聯(lián)對(duì)礦化產(chǎn)物形貌構(gòu)造的影響 |
| 4.2.2 交聯(lián)對(duì)礦化產(chǎn)物物相狀態(tài)的影響 |
| 4.2.3 交聯(lián)對(duì)礦化產(chǎn)物性能的影響 |
| 4.3 結(jié)論 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
（2）自體闊筋膜移植治療陳舊性閉合跟腱斷裂的療效分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文對(duì)照縮略表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 資料和方法 |
| 一、一般資料 |
| 二、方法 |
| 第三章 結(jié)果 |
| 第四章 典型病例 |
| 病例A |
| 病例B |
| 第五章 討論 |
| 第六章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 陳舊性跟腱斷裂臨床治療進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 評(píng)分 |
| 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果 |
| 致謝 |
（3）不同濃度PRP對(duì)兔跟腱病動(dòng)物模型中Ⅰ型與Ⅲ型膠原、TGF-β1及α-SMA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 跟腱愈合的相關(guān)機(jī)制研究 |
| 1.1.1 跟腱的結(jié)構(gòu)組成 |
| 1.1.2 跟腱損傷愈合機(jī)制 |
| 1.2 PRP在跟腱損傷中的作用 |
| 1.2.1 TGF-β1 在肌腱損傷愈合中的作用 |
| 1.2.2 α-SMA在跟腱愈合中的作用 |
| 1.3 PRP的制備及活化 |
| 1.4 PRP濃度的選擇 |
| 1.5 富白細(xì)胞富血小板血漿或低白細(xì)胞富血小板血漿的研究進(jìn)展 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備 |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn) |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 |
| 2.2.2 不同濃度PRP制備 |
| 2.2.3 建立跟腱病動(dòng)物模型 |
| 2.2.4 干預(yù)方法 |
| 2.3 測(cè)試樣本采集與指標(biāo)檢測(cè) |
| 2.3.1 HE染色 |
| 2.3.2 q RT-PCR檢測(cè) |
| 2.3.3 Western Blot檢測(cè)跟腱組織中目標(biāo)蛋白的表達(dá) |
| 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1 一般情況 |
| 3.2 PRP血小板數(shù)目計(jì)數(shù) |
| 3.3 跟腱多普勒超聲檢查 |
| 3.4 跟腱大體觀察 |
| 3.5 跟腱組織學(xué)形態(tài)結(jié)果 |
| 3.6 q RT-PCR檢測(cè)兔跟腱組織I型與Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)測(cè)定 |
| 3.6.1 Ⅰ型膠原mRNA表達(dá) |
| 3.6.2 Ⅲ型膠原mRNA表達(dá) |
| 3.7 TGF-β1 與α-SMA蛋白測(cè)定 |
| 3.7.1 TGF-β1 蛋白表達(dá) |
| 3.7.2 α-SMA蛋白表達(dá) |
| 4 討論 |
| 4.1 跟腱病造模評(píng)價(jià) |
| 4.2 不同濃度PRP療效評(píng)價(jià) |
| 4.3 LR-PRP療效評(píng)價(jià) |
| 4.4 跟腱病標(biāo)本HE染色 |
| 4.5 qRT-PCR檢測(cè)標(biāo)本Ⅰ型Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá) |
| 4.6 Western blot檢測(cè)兔跟腱中TGF-β1 與α-SMA蛋白表達(dá) |
| 5 結(jié)論 |
| 6 本實(shí)驗(yàn)存在的局限性 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（4）可用于肩袖與跟腱修復(fù)的聚乳酸基纖維膜的制備及體外研究（論文提綱范文）
| 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 肌腱結(jié)構(gòu)及修復(fù)機(jī)制 |
| 1.2 不同部位肌腱損傷機(jī)制及修復(fù)現(xiàn)狀:肩袖和跟腱 |
| 1.2.1 結(jié)構(gòu)及損傷機(jī)制 |
| 1.2.2 肩袖腱-骨界面修復(fù)方法 |
| 1.2.2.1 肩袖補(bǔ)片 |
| 1.2.2.2 細(xì)胞種植支架 |
| 1.2.2.3 干細(xì)胞技術(shù) |
| 1.2.2.4 其他方法 |
| 1.2.3 跟腱防粘連方法 |
| 1.2.3.1 手術(shù)預(yù)防 |
| 1.2.3.2 藥物/生長(zhǎng)因子 |
| 1.2.3.3 物理屏障 |
| 1.3 靜電紡絲在肩袖腱-骨愈合及跟腱防粘連方面的應(yīng)用進(jìn)展 |
| 1.3.1 靜電紡絲概述 |
| 1.3.2 靜電紡絲制備肩袖補(bǔ)片研究進(jìn)展 |
| 1.3.2.1 電紡不可降解型肩袖補(bǔ)片 |
| 1.3.2.2 電紡可降解型聚合物復(fù)合材料 |
| 1.3.2.3 電紡負(fù)載細(xì)胞/藥物/生長(zhǎng)因子的肩袖補(bǔ)片 |
| 1.3.2.4 現(xiàn)存問(wèn)題 |
| 1.3.3 靜電紡絲制備跟腱防粘連膜研究進(jìn)展 |
| 1.3.3.1 加載藥物/細(xì)胞/因子的電紡跟腱防粘連膜 |
| 1.3.3.2 電紡膜用作物理屏障 |
| 1.3.3.3 現(xiàn)存問(wèn)題 |
| 1.4 論文的研究?jī)?nèi)容及意義 |
| 第二章 PLLA/HA復(fù)合肩袖補(bǔ)片的制備及性能研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.3.1 正交實(shí)驗(yàn)法探究制備PLLA/HA混合纖維膜的最佳實(shí)驗(yàn)參數(shù) |
| 2.2.3.2 肩袖補(bǔ)片的制備 |
| 2.2.3.3 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的獲取及培養(yǎng) |
| 2.2.4 測(cè)試與表征 |
| 2.2.4.1 纖維形貌表征 |
| 2.2.4.2 HA的分散性及微觀結(jié)構(gòu) |
| 2.2.4.3 表面親水性測(cè)試 |
| 2.2.4.4 X射線衍射 |
| 2.2.4.5 紅外光譜 |
| 2.2.4.6 力學(xué)性能測(cè)試 |
| 2.2.4.7 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的細(xì)胞形態(tài)觀察 |
| 2.2.4.8 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的成骨誘導(dǎo)分化 |
| 2.2.4.9 細(xì)胞相容性評(píng)價(jià) |
| 2.2.4.10 細(xì)胞粘附及活性觀察 |
| 2.2.4.11 堿性磷酸酶(ALP)含量測(cè)定 |
| 2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 纖維形貌 |
| 2.3.2 HA的分散性 |
| 2.3.3 親水性 |
| 2.3.4 物相及結(jié)晶性能分析 |
| 2.3.5 官能團(tuán)分析 |
| 2.3.6 力學(xué)性能 |
| 2.3.7 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)及成骨誘導(dǎo)分化 |
| 2.3.8 細(xì)胞相容性 |
| 2.3.9 細(xì)胞粘附檢測(cè) |
| 2.3.10 ALP含量分析 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第三章 跟腱防粘連膜的制備及性能研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)部分 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2.3.1 最佳PLLA紡絲質(zhì)量濃度的確定 |
| 3.2.3.2 最佳Ⅰ型膠原紡絲質(zhì)量濃度的確定 |
| 3.2.3.3 成分梯度化跟腱防粘連纖維膜的制備 |
| 3.2.3.4 兔成纖維細(xì)胞的分離及培養(yǎng) |
| 3.2.4 測(cè)試與表征 |
| 3.2.4.1 跟腱防粘連膜不同層的纖維形貌 |
| 3.2.4.2 跟腱防粘連膜不同層的水接觸角 |
| 3.2.4.3 跟腱防粘連膜的紅外光譜 |
| 3.2.4.4 成分梯度化跟腱防粘連膜的力學(xué)性能 |
| 3.2.4.5 成分梯度化跟腱防粘連膜的細(xì)胞相容性 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 兔成纖維細(xì)胞的形態(tài) |
| 3.3.2 跟腱防粘連膜的纖維形貌 |
| 3.3.3 跟腱防粘連膜的水接觸角 |
| 3.3.4 跟腱防粘連膜的官能團(tuán)分析 |
| 3.3.5 跟腱防粘連膜的力學(xué)性能 |
| 3.3.6 跟腱防粘連膜的細(xì)胞相容性 |
| 3.4 本章小結(jié) |
| 第四章 總結(jié)與展望 |
| 4.1 總結(jié) |
| 4.2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 導(dǎo)師簡(jiǎn)介 |
| 附件 |
（5）LncRNA KCNQ1OT1通過(guò)miR-138調(diào)控肌腱干細(xì)胞成脂及成骨分化的機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 縮略詞表 |
| 前言(含綜述) |
| 第一部分 TSCs對(duì)損傷肌腱組織中LncRNA KCNQ1OT1表達(dá)的影響 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.3 數(shù)據(jù)分析 |
| 2. 結(jié)果 |
| 2.1 小鼠肌腱損傷模型的建立 |
| 2.2 LncRNA KCNQ1OT1和miR-138在小鼠損傷肌腱組織中的表達(dá) |
| 2.3 RUNX2和PPARγ在小鼠損傷肌腱組織中的表達(dá) |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 第二部分 LncRNA KCNQ1OT1和miR-138在TSCs成脂和成骨分化中的作用 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑 |
| 1.2 主要試劑配制 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4 數(shù)據(jù)分析 |
| 2. 結(jié)果 |
| 2.1 TSCs的鑒定 |
| 2.2 LncRNA KCNQ1OT1和miR-138在TSCs成脂和成骨分化中的表達(dá) |
| 2.3 干擾LncRNA KCNQ1OT1對(duì)TSCs成脂和成骨分化的影響 |
| 2.4 驗(yàn)證LncRNA KCNQ1OT1和miR-138的結(jié)合 |
| 2.5 干擾LncRNA KCNQ1OT1對(duì)miR-138表達(dá)的影響 |
| 2.6 干擾LncRNA KCNQ1OT1通過(guò)miR-138抑制TSCs成脂和成骨分化 |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 第三部分 LncRNA KCNQ1OT1促進(jìn)肌腱干細(xì)胞的成脂分化和成骨分化及抑制肌腱愈合 |
| 前言 |
| 1. 材料和方法 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑 |
| 1.2 主要試劑配制 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.4 數(shù)據(jù)分析 |
| 2. Results |
| 2.1 LncRNA KCNQ1OT1對(duì)TSCs治療肌腱損傷的影響 |
| 2.2 LncRNA KCNQ1OT1對(duì)miR-138的調(diào)控作用 |
| 2.3 LncRNA KCNQ1OT1抑制損傷肌腱組織愈合 |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 全文結(jié)論反展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄 |
| 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表 |
| 英文文章(一) |
| 英文文章(二) |
（6）微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的仿生制備及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 縮略語(yǔ)表 |
| abstract |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 肌腱顯微結(jié)構(gòu)與力學(xué)性能分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 仿生絲素蛋白薄膜的制備、改性與表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜在體內(nèi)對(duì)損傷肌腱的修復(fù)作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜對(duì)TSPCs生物學(xué)行為的調(diào)控及分子機(jī)制 |
| 5.1 微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜對(duì)TSPCs生物學(xué)行為的調(diào)控 |
| 5.1.1 引言 |
| 5.1.2 材料與方法 |
| 5.1.3 結(jié)果 |
| 5.1.4 討論 |
| 5.1.5 小結(jié) |
| 5.2 微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜調(diào)控TSPCs的內(nèi)在分子機(jī)制 |
| 5.2.1 引言 |
| 5.2.2 材料與方法 |
| 5.2.3 結(jié)果 |
| 5.2.4 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 肌腱損傷及肌腱組織工程的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士研究生期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（7）電流體3D打印組織工程支架修復(fù)大鼠跟腱缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 電流體3D打印支架的構(gòu)建及其理化性能評(píng)估 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要儀器設(shè)備 |
| 1.1.2 主要試劑和器材 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 打印溶液的配置 |
| 1.2.2 電流體3D打印支架和薄膜的制備 |
| 1.2.3 支架理化性質(zhì)評(píng)估 |
| 1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.3.1 支架的機(jī)械強(qiáng)度 |
| 1.3.2 材料的表面潤(rùn)濕性能 |
| 1.3.3 支架的表面特征 |
| 1.3.4 支架的體外降解 |
| 1.4 討論 |
| 第二部分 電流體3D打印跟腱支架的體外及體內(nèi)生物學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞 |
| 2.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 2.1.3 主要試劑和手術(shù)器材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.2 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 肌腱損傷修復(fù)的組織工程研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 縮略表 |
| 碩士研究生期間發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（8）基于反向旋轉(zhuǎn)擠出技術(shù)構(gòu)建的取向性膠原纖維及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要縮略詞 |
| 1 緒論 |
| 1.1 問(wèn)題的提出及研究意義 |
| 1.2 肌腱的生物學(xué)和生理學(xué)特性 |
| 1.2.1 細(xì)胞組成 |
| 1.2.2 細(xì)胞外基質(zhì) |
| 1.2.3 肌腱愈合機(jī)制 |
| 1.3 肌腱組織工程中支架仿生策略的研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 支架的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)對(duì)干細(xì)胞向肌腱和骨系分化行為的影響 |
| 1.3.2 支架的表面化學(xué)對(duì)干細(xì)胞向肌腱和骨系分化行為的影響 |
| 1.3.3 取向性膠原纖維支架在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用 |
| 1.4 研究思路及主要研究?jī)?nèi)容 |
| 1.4.1 研究思路 |
| 1.4.2 主要研究?jī)?nèi)容 |
| 1.5 本論文的創(chuàng)新點(diǎn) |
| 2 取向性膠原纖維薄膜的制備及表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 主要儀器設(shè)備、耗材及試劑 |
| 2.2.1 儀器設(shè)備 |
| 2.2.2 試劑及耗材 |
| 2.2.3 相關(guān)試液的配制 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 牛皮的前處理 |
| 2.3.2 難溶性膠原纖維(ICFs)的提取 |
| 2.3.3 酶溶性膠原(PSC)的提取 |
| 2.3.4 膠原的結(jié)構(gòu)和組成分析 |
| 2.3.5 相關(guān)性能的比較 |
| 2.3.6 取向性膠原纖維薄膜(CMs)的制備 |
| 2.3.7 CMs表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)觀察 |
| 2.3.8 CMs纖維取向的驗(yàn)證 |
| 2.3.9 CMs力學(xué)拉伸性能測(cè)定 |
| 2.3.10 伯氨基含量的測(cè)定 |
| 2.3.11 統(tǒng)計(jì)分析 |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.1 前處理后牛皮和粗提膠原纖維的理化性質(zhì)分析 |
| 2.4.2 ICFs提取條件的優(yōu)化 |
| 2.4.3 PSC和 ICFs的組成分析 |
| 2.4.4 PSC和 ICFs的結(jié)構(gòu)分析 |
| 2.4.5 PSC與 ICFs相關(guān)性能的比較 |
| 2.4.6 CMs的纖維取向和表面拓?fù)浣Y(jié)構(gòu) |
| 2.4.7 CMs纖維取向的驗(yàn)證分析 |
| 2.4.8 CMs力學(xué)拉伸性能分析 |
| 2.4.9 CMs的化學(xué)性質(zhì)分析 |
| 2.5 討論 |
| 2.6 本章小結(jié) |
| 3 取向性CMs對(duì) rBMSCs早期行為及后期分化的影響 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 主要儀器設(shè)備、耗材及試劑 |
| 3.2.1 儀器設(shè)備 |
| 3.2.2 試劑及耗材 |
| 3.2.3 相關(guān)試劑的配制 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 rBMSCs的分離(全骨髓貼壁法)和培養(yǎng) |
| 3.3.2 rBMSCs的凍存和復(fù)蘇 |
| 3.3.3 rBMSCs表面標(biāo)志物流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) |
| 3.3.4 rBMSCs三系分化潛能檢測(cè) |
| 3.3.5 取向性CMs的細(xì)胞相容性評(píng)價(jià) |
| 3.3.6 取向性CMs對(duì) rBMSCs早期形態(tài)的影響 |
| 3.3.7 取向性CMs對(duì) rBMSCs分化的影響 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 rBMSCs的鑒定 |
| 3.4.2 取向性CMs的細(xì)胞相容性評(píng)價(jià) |
| 3.4.3 取向性CMs對(duì) rBMSCs早期形態(tài)的影響 |
| 3.4.4 在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中CMs纖維取向?qū)BMSCs分化的影響 |
| 3.4.5 在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中CMs纖維取向?qū)BMSCs分化的影響 |
| 3.4.6 在軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基中CMs纖維取向?qū)BMSCs分化的影響 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 本章小結(jié) |
| 4 高取向性CM_a-BMSCs支架對(duì)損傷腱體的原位修復(fù) |
| 4.1 前言 |
| 4.2 主要儀器設(shè)備、耗材及試劑 |
| 4.2.1 儀器設(shè)備 |
| 4.2.2 試劑及耗材 |
| 4.2.3 相關(guān)試液的配制 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 組織工程肌腱的構(gòu)建 |
| 4.3.2 裸鼠異位模型 |
| 4.3.3大鼠跟腱缺損模型的構(gòu)建及體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn) |
| 4.3.4 直觀形態(tài)評(píng)分系統(tǒng)及其評(píng)測(cè) |
| 4.3.5 功能指數(shù)(AFI)測(cè)定 |
| 4.3.6 核磁共振成像(MRI) |
| 4.3.7 組織學(xué)分析 |
| 4.3.8 組織的基因和蛋白分析 |
| 4.3.9 力學(xué)拉伸測(cè)試 |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 裸鼠異位模型 |
| 4.4.2 CM-BMSCs組織工程肌腱力學(xué)拉伸性能測(cè)試 |
| 4.4.3 再生腱體的直觀形態(tài)評(píng)價(jià) |
| 4.4.4 再生腱體的功能性評(píng)價(jià) |
| 4.4.5 再生腱體的核磁共振成像 |
| 4.4.6 肌腱相關(guān)的基因和蛋白的表達(dá) |
| 4.4.7 再生腱體的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 4.4.8 再生腱體的異位骨化評(píng)價(jià) |
| 4.4.9 植入物的體內(nèi)安全性評(píng)價(jià) |
| 4.4.10 再生腱體的力學(xué)拉伸性能 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 本章小結(jié) |
| 5 分級(jí)取向CM_(ar)-BMSCs支架對(duì)腱-骨連接處原位修復(fù)的初探 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 主要儀器設(shè)備、耗材及試劑 |
| 5.2.1 儀器設(shè)備 |
| 5.2.2 耗材及試劑 |
| 5.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.3.1 分級(jí)復(fù)合支架的制備及力學(xué)拉伸測(cè)試 |
| 5.3.2 免疫熒光和化學(xué)法染色 |
| 5.3.3大鼠跟腱-跟骨連接處模型的構(gòu)建及體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn) |
| 5.3.4 X光成像 |
| 5.3.5 Micro-CT成像 |
| 5.3.6 組織學(xué)分析 |
| 5.3.7 力學(xué)拉伸測(cè)試 |
| 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 5.4.1 分級(jí)取向支架(CM_(ar))的力學(xué)拉伸性能穩(wěn)定性 |
| 5.4.2 分級(jí)取向支架(CM_(ar))對(duì)rBMSCs早期形態(tài)和分化的影響 |
| 5.4.3 跟腱-跟骨的直觀形態(tài) |
| 5.4.4 跟腱-跟骨的影像學(xué)成像分析 |
| 5.4.5 跟腱-跟骨的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 5.4.6 跟腱-跟骨的力學(xué)拉伸性能 |
| 5.5 討論 |
| 5.6 本章小結(jié) |
| 6 主要結(jié)論與后續(xù)建議 |
| 6.1 主要結(jié)論 |
| 6.2 后續(xù)工作建議 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| A.作者在攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄 |
| B.作者在攻讀學(xué)位期間取得的科研成果目錄 |
| C.作者在攻讀學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目 |
| D.學(xué)位論文數(shù)據(jù)集 |
| 致謝 |
（9）維拉帕米通過(guò)TGF-β1/smad3/P38/ERK1/2信號(hào)通路緩解大鼠跟腱損傷修復(fù)后的纖維化粘連（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞對(duì)照表 |
| 第1章 緒論 |
| 第2章 綜述 |
| 2.1 肌腱粘連纖維化的分子機(jī)制 |
| 2.2 與肌腱修復(fù)及粘連相關(guān)的細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子 |
| 2.2.1 TGF-β |
| 2.2.2 結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF) |
| 2.2.3 生長(zhǎng)分化因子(GDFs) |
| 2.2.4 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b-FGF) |
| 2.2.5 胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF) |
| 2.2.6 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF) |
| 2.2.7 血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF) |
| 2.2.8 白細(xì)胞介素(IL) |
| 2.3 預(yù)防肌腱粘連的方法 |
| 2.3.1 早期運(yùn)動(dòng) |
| 2.3.2 材料預(yù)防 |
| 2.3.3 化學(xué)試劑預(yù)防 |
| 2.3.4 其它預(yù)防方法 |
| 2.4 鈣離子通道阻滯劑在緩解瘢痕中的應(yīng)用 |
| 2.4.1 廣泛抗炎作用 |
| 2.4.2 抗纖維化作用 |
| 2.5 展望 |
| 第3章 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 3.1 維拉帕米在大鼠跟腱損傷修復(fù)中的療效觀察 |
| 3.1.1 引言 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料及方法 |
| 3.1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.1.4 討論 |
| 3.2 維拉帕米介導(dǎo)TGF-Β1/SMAD3 信號(hào)通路緩解大鼠跟腱粘連研究 |
| 3.2.1 引言 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)材料及方法 |
| 3.2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.4 討論 |
| 3.3 維拉帕米介導(dǎo)P38/ERK1/2 信號(hào)通路緩解大鼠跟腱損傷的纖維化 |
| 3.3.1 引言 |
| 3.3.2 實(shí)驗(yàn)材料及方法 |
| 3.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.4 討論 |
| 第4章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡(jiǎn)介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 致謝 |
（10）阿司匹林對(duì)肌腱干細(xì)胞和肌腱病損傷修復(fù)的作用和機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 縮略語(yǔ)表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 不同濃度阿司匹林對(duì)肌腱干細(xì)胞凋亡作用的機(jī)制研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第三章 阿司匹林對(duì)大鼠肌腱病損傷修復(fù)的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第四章 阿司匹林通過(guò)調(diào)節(jié)GDF7/Smad1/5信號(hào)通路促進(jìn)TSCs成肌腱分化和病腱損傷愈合 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第五章 阿司匹林通過(guò)調(diào)節(jié)PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路抑制TSCs成脂肪分化和病腱的脂肪浸潤(rùn) |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料與方法 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 小結(jié) |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 肌腱病損傷與修復(fù)的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
四、不同跟腱修復(fù)材料特性的臨床意義（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]膠原/磷酸鈣仿生礦化材料的制備與優(yōu)化[D]. 魏旭. 武漢輕工大學(xué), 2021(02)
- [2]自體闊筋膜移植治療陳舊性閉合跟腱斷裂的療效分析[D]. 王斌. 揚(yáng)州大學(xué), 2021(02)
- [3]不同濃度PRP對(duì)兔跟腱病動(dòng)物模型中Ⅰ型與Ⅲ型膠原、TGF-β1及α-SMA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 譚春鳳. 成都體育學(xué)院, 2021(08)
- [4]可用于肩袖與跟腱修復(fù)的聚乳酸基纖維膜的制備及體外研究[D]. 桑新雨. 北京化工大學(xué), 2021
- [5]LncRNA KCNQ1OT1通過(guò)miR-138調(diào)控肌腱干細(xì)胞成脂及成骨分化的機(jī)制研究[D]. 余洋. 山東大學(xué), 2021(10)
- [6]微結(jié)構(gòu)絲素蛋白薄膜的仿生制備及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用[D]. 陸康. 中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué), 2021(01)
- [7]電流體3D打印組織工程支架修復(fù)大鼠跟腱缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 張航. 蘇州大學(xué), 2020(02)
- [8]基于反向旋轉(zhuǎn)擠出技術(shù)構(gòu)建的取向性膠原纖維及其在肌腱修復(fù)中的應(yīng)用[D]. 楊爽. 重慶大學(xué), 2019(01)
- [9]維拉帕米通過(guò)TGF-β1/smad3/P38/ERK1/2信號(hào)通路緩解大鼠跟腱損傷修復(fù)后的纖維化粘連[D]. 宮鳳艷. 吉林大學(xué), 2019(02)
- [10]阿司匹林對(duì)肌腱干細(xì)胞和肌腱病損傷修復(fù)的作用和機(jī)制研究[D]. 王云蛟. 中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué), 2019(03)
標(biāo)簽：細(xì)胞分化論文; he染色論文; 血管支架論文; 礦化作用論文;