一、獻(xiàn)血者體內(nèi)攜帶的HCV包膜區(qū)基因同源性分析（論文文獻(xiàn)綜述）
楊娜娜[1]（2020）在《核酸檢測技術(shù)在基層血站的應(yīng)用與質(zhì)量控制探討》文中研究指明研究背景為減少經(jīng)輸血傳播疾病事件的發(fā)生,世界各國采供血機(jī)構(gòu)都對獻(xiàn)血者血樣進(jìn)行了嚴(yán)格的病毒檢測。研究發(fā)現(xiàn)血清學(xué)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）檢測技術(shù)作為血液篩查的基本方法仍有不足,存在漏檢風(fēng)險,越來越多的國家在此種方法的檢測基礎(chǔ)之上補(bǔ)充核酸擴(kuò)增技術(shù)（Nucleic acid amplification testing,NAT）,以保證血液制品安全。與血清學(xué)檢測相比,NAT檢測的特點(diǎn)是靈敏度高,對檢測標(biāo)本的質(zhì)量控制要求高,容易受到污染、對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、人員操作和設(shè)施要求嚴(yán)格以及檢測成本高等。因此,加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控尤為重要。研究目的了解國家衛(wèi)生部于2015年將核酸檢測技術(shù)正式納入《血站技術(shù)操作規(guī)程》后,在基層血站應(yīng)用與質(zhì)量監(jiān)控的情況,探討核酸檢測技術(shù)在血液篩查中的作用以及實(shí)現(xiàn)NAT實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控量化的措施。研究方法1.××市中心血站2013年1月1日至2018年12月31日期間采集了163782份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本,采用速率法、雙試劑酶聯(lián)免疫方法對血樣進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、乙型肝炎表面抗原（HBs Ag）、丙型肝炎抗體（HCV-Ab）、艾滋病抗體（HIV-Ab）、梅毒螺旋體抗體（TP-Ab）篩查;2016年1月1日-2018年12月31日期間對雙試劑ELISA檢測結(jié)果陰性的獻(xiàn)血者標(biāo)本77721份,利用上海浩源或美國羅氏檢測系統(tǒng),分別采用8人份、6人份血液樣本匯集的方法,經(jīng)血液樣本混合、核酸提取、病毒核酸擴(kuò)增及檢測三個階段進(jìn)行NAT混樣檢測,混檢陰性的視為陰性結(jié)果,混檢陽性的進(jìn)行拆分檢測,并以拆分結(jié)果為最終結(jié)果,每批檢測均設(shè)一個陰性對照、一個陽性對照和一個室內(nèi)質(zhì)控品。本課題收集上述檢測資料,應(yīng)用SPSS軟件中的卡方（χ2）檢驗(yàn)方法,比較國產(chǎn)、進(jìn)口兩種核酸檢測系統(tǒng)NAT陽性率、陽性拆分率以及不同年份NAT陽性率的差異。統(tǒng)計分析核酸混檢陽性率、有效拆分率、結(jié)果無效率等相關(guān)質(zhì)量指標(biāo)。2.采用擬定的《××市中心血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理調(diào)查表》,通過聽取介紹、現(xiàn)場查看實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和實(shí)施以及相關(guān)檔案記錄資料、口頭詢問的方式,對血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制情況進(jìn)行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)存在的問題。研究結(jié)果1.××市中心血站2013年1月1日至2018年12月31日期間采集的163782份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中,有5269份ALT陽性,陽性率為3.22%;ELISA雙試劑檢測HIV-Ab陽性數(shù)255,陽性率為0.16%,TP-Ab陽性數(shù)829,陽性率為0.51%,HCV-Ab陽性數(shù)373,陽性率為0.23%,HBs Ag陽性數(shù)1199,陽性率為0.73%。從2013年到2018年間,ALT、HIV-Ab、TP、HCV-Ab、HBs Ag陽性率總體呈現(xiàn)降低趨勢。2016年NAT實(shí)驗(yàn)開展后三年ALT、HIV-Ab、TP-Ab、HCV-Ab、HBs Ag這五項檢測項目陽性率均低于NAT實(shí)驗(yàn)開展前三年,經(jīng)χ2檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為296.512、47.014、25.218、77.564、41.098,P<0.05）。提示開展核酸檢測項目后,血液初篩檢測更加規(guī)范嚴(yán)格,有助于減少對不合格血液檢測的資源消耗。2.該血站2016年1月-2018年12月采用上海浩源和美國羅氏兩種檢測系統(tǒng)對77721份標(biāo)本進(jìn)行HBV-DNA、HIV-RNA、HCV-RNA檢測,共檢出112份陽性標(biāo)本,其中上海浩源檢測系統(tǒng)NAT檢測陽性標(biāo)本62份,NAT陽性率為0.17%（62/36563）,美國羅氏檢測系統(tǒng)NAT檢測陽性標(biāo)本50份,NAT陽性率為0.12%（50/41158）,經(jīng)χ2檢驗(yàn),兩種檢測系統(tǒng)的NAT陽性率差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.111,P>0.05）。上海浩源檢測系統(tǒng)三年間的NAT陽性率經(jīng)χ2檢驗(yàn),差別有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.889,P<0.05）;美國羅氏檢測系統(tǒng)三年間的NAT陽性率經(jīng)χ2檢驗(yàn),差別無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.226,P>0.05）。結(jié)果提示上海浩源和美國羅氏兩種檢測系統(tǒng)對HBV-DNA、HIV-RNA、HCV-RNA的檢測結(jié)果不存在差異,美國羅氏檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果較上海浩源檢測系統(tǒng)穩(wěn)定。3.該血站2016年1月-2018年12月兩種檢測系統(tǒng)三年間混檢陽性率差異經(jīng)χ2檢驗(yàn)均無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為1.741、2.862,P>0.05）,上海浩源檢測系統(tǒng)的混檢陽性率1.93%（107/5556）高于美國羅氏檢測系統(tǒng)的混檢陽性率0.85%（68/7961）,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=24.409,P<0.05）;美國羅氏檢測系統(tǒng)的有效拆分率73.53%（50/68）高于上海浩源檢測系統(tǒng)的有效拆分率57.01%（61/107）,經(jīng)χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.892,P<0.05）;上海浩源檢測系統(tǒng)結(jié)果無效率為0.14%,三年間上海浩源檢測系統(tǒng)結(jié)果無效率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.032,P>0.05）,導(dǎo)致無效結(jié)果的原因?yàn)檠汉怂岷Y查內(nèi)參（Internal Control,IC）無效;美國羅氏檢測系統(tǒng)結(jié)果無效率為0.19%,經(jīng)排查導(dǎo)致無效結(jié)果的原因是該批次康徹斯坦質(zhì)控血清存在問題,更換質(zhì)控血清后核酸檢測結(jié)果無效池數(shù)為0,結(jié)果無效率為0.00%。上述結(jié)果提示兩種檢測系統(tǒng)的NAT檢測結(jié)果均較為穩(wěn)定,羅氏檢測系統(tǒng)有效拆分能力較浩源檢測系統(tǒng)強(qiáng),無效結(jié)果的發(fā)生是隨機(jī)性的,需要保持對核酸無效結(jié)果的密切監(jiān)測,使檢測系統(tǒng)、檢測流程穩(wěn)定、可靠運(yùn)行。4.××市中心血站血液篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理情況調(diào)查分析顯示,該血站制定了較為完善的核酸實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系并依此運(yùn)行,存在的主要問題是未選取適合本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)進(jìn)行NAT過程的量化質(zhì)量監(jiān)控和趨勢分析。結(jié)論核酸擴(kuò)增技術(shù)靈敏度高,作為對ELISA檢測病毒陰性血樣的補(bǔ)充檢測,可進(jìn)一步提高血液質(zhì)量,降低輸血傳播疾病的發(fā)生率;NAT檢測技術(shù)應(yīng)用于獻(xiàn)血員血樣篩查后,提高了血樣初篩過程的嚴(yán)謹(jǐn)性,減少了核酸檢測前篩查實(shí)驗(yàn)的工作量與血液檢測資源的消耗。國產(chǎn)與進(jìn)口兩種檢測系統(tǒng)的NAT檢測結(jié)果沒有差異,進(jìn)口檢測系統(tǒng)更加穩(wěn)定一些。建議選取適合于本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo),建立NAT過程的量化質(zhì)量監(jiān)控和趨勢分析體系并付諸實(shí)施,將有利于血液制品更高安全性的保證。
李天一[2]（2019）在《云南紅河州高危人群HIV及其共感染的HCV/HPgV-2病毒的分子流行病學(xué)研究》文中研究表明艾滋病1985年傳入我國,近10年來,我國艾滋病的流行模式由血液和靜脈吸毒傳播為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐孕詡鞑橹?經(jīng)性傳播的比例從2006年的33.1%增加到2017年的94.6%,其中異性性傳播的比例為69.2%。在我國,估計有400-1000萬女性性工作者（Female sex workers,FSWs）,1860歲成年男性約69%有嫖娼史,FSWs具有特殊的脆弱性,容易被邊緣化,具有特別高的HIV（Human Immunodeficiency Virus）感染的負(fù)擔(dān),是HIV和其他性病從高危人群向一般人群傳播的橋梁人群,FSWs及嫖客人群是應(yīng)該受到特別重視的我國HIV流行的關(guān)鍵人群。HCV（Hepatitis C virus）主要經(jīng)血液及經(jīng)皮暴露傳播,與HIV具有共同的傳播途徑和危險人群,共同感染十分普遍。HIV感染可增加HCV感染的風(fēng)險,降低HCV的體內(nèi)清除率,加快HCV感染的疾病進(jìn)程,HCV感染也可加快HIV的疾病進(jìn)展,HCV相關(guān)肝病也是HIV感染者主要的疾病和死亡原因。HPgV-2（Human pegivirus 2）是2015年由兩個獨(dú)立的研究小組報道的一種新的主要經(jīng)血傳播的人類病毒,屬于黃病毒科的一個新屬（Pegivirus）,目前,僅有幾項研究證實(shí)其主要感染HCV陽性的人,對這個病毒與HIV和HCV感染的關(guān)系、致病性等目前尚無定論。云南省是我國艾滋病流行的起源地,紅河州是云南省艾滋病疫情最為嚴(yán)重的地區(qū)。為了摸清紅河州艾滋病流行的特點(diǎn)和規(guī)律,2008年5月至2014年6月,中國疾病預(yù)防控制中心汪寧教授課題組在云南紅河州的開遠(yuǎn)、蒙自和河口針對暗娼和嫖客人群進(jìn)行了艾滋病的流行病學(xué)研究,通過系列橫斷面研究和前瞻性隊列研究,獲得了FSW及嫖客人群的HIV新發(fā)感染率及其變化趨勢、新發(fā)感染相關(guān)的危險因素、HIV陽性FSW二代傳播的風(fēng)險等一批重要的研究結(jié)果。本課題在此基礎(chǔ)上,以歷次調(diào)查確認(rèn)的771名HIV陽性者為研究對象,利用采集并保存的血漿標(biāo)本和調(diào)查信息,進(jìn)行HIV的分子流行病學(xué)研究、與HIV共感染的HCV和HPgV-2的分子流行病學(xué)研究,目的是闡明當(dāng)?shù)馗呶Ｈ巳褐蠬IV及其共感染的HCV和HPgV-2的基因變異特征,從分子水平進(jìn)一步揭示流行規(guī)律,明確病毒傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié),為HIV及其他兩種病毒感染的防控提供依據(jù)。第一部分云南省紅河州高危人群HIV感染的分子流行病學(xué)研究背景:HIV具有高度的變異性,HIV-1的M群廣泛流行,可進(jìn)一步分成A-D、F-H、J和K共9個亞型及88個流行重組型（Circulating Recombinant Forms,CRF）及無數(shù)的獨(dú)特重組型（Unique Recombinant Forms,URF）。云南省是我國主要流行HIV-1毒株的傳入地和重組毒株的起源地,流行毒株的分布有顯著的地理、民族和傳播途徑的差異,對紅河州以暗娼和嫖客為主的高危人群缺乏HIV-1基因亞型分布及長期變化的研究。方法:挑選HIV抗體確認(rèn)陽性標(biāo)本并整理背景信息,提取純化血漿病毒RNA（Ribonucleic Acid）,一步法逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR（Polymerase Chain Reaction）擴(kuò)增HIV-1pol區(qū)約3100bp的片段并測序,進(jìn)行下列研究:（1）病毒基因亞型:采用構(gòu)建NJ（Neighbor-Joining）進(jìn)化樹和使用在線工具COMET和REGA的方法分型,兩種工具分型結(jié)果一致且置信值為100%的為確定的分型結(jié)果,結(jié)合流行病學(xué)信息,分析基因亞型與人群特征的關(guān)系及隨時間的變化。（2）病毒基因重組:用jpHMM軟件進(jìn)行病毒基因重組分析,將不同插入片段分別與標(biāo)準(zhǔn)參考株構(gòu)建NJ進(jìn)化樹,判斷重組片段的來源,分析不同高危人群的重組模式特征。（3）傳播簇分析:對不同亞型的序列分組,剪切為相同長度,刪除已知的耐藥位點(diǎn),構(gòu)建ML（Maximum-likelihood）進(jìn)化樹,判斷傳播簇的標(biāo)準(zhǔn)是bootstrap大于990,基因距離小于0.015。分析成簇人員的特征以及成簇相關(guān)的因素。將HIV感染者的首次標(biāo)本及其病毒基因序列分為20082010年、20082012年、2008年2014年3組,分別構(gòu)建ML樹并進(jìn)行成簇分析,觀察傳播簇數(shù)目和規(guī)模隨時間的變化。（4）耐藥分析:將拼接編輯的pol區(qū)序列提交美國斯坦福大學(xué)的HIV耐藥數(shù)據(jù)庫（http://hivdb.stanford.edu）,通過序列比對確定耐藥突變的位置、種類、耐藥程度及藥物敏感性的解釋。（5）紅河毒株與云南省流行毒株的關(guān)系:收集318例20082010年采樣的云南各地HIV感染者的pol區(qū)基因序列,與本研究獲得的序列一并構(gòu)建進(jìn)化樹,對成簇的流行毒株構(gòu)建MCC（Maximum clade credibility）進(jìn)化樹,分析紅河州HIV-1毒株與云南省流行毒株的關(guān)系。結(jié)果:獲得386例研究對象的HIV-1 pol區(qū)基因序列,除20082009年采樣的標(biāo)本擴(kuò)增測序失敗的比例顯著高于其他時間采樣的標(biāo)本外,擴(kuò)增測序成功與失敗的人員在人口學(xué)特征方面均無顯著性差異。獲得的主要結(jié)果:（1）HIV-1基因亞型及其人群分布和時間變化:當(dāng)?shù)亓餍械腍IV-1毒株比例由高到低依次為CRF08BC（62.95%）、CRF07BC（10.88%）、新型重組毒株URF（10.88%）、CRF01AE（8.03%）、C（6.99%）和B（0.26%）。各亞型HIV-1在各類人群的分布有顯著差異,吸毒人群中CRF08BC的比例顯著高于嫖客和暗娼人群;CRF01AE毒株幾乎僅出現(xiàn)在不吸毒的嫖客和暗娼;HIV-1基因亞型的分布隨時間呈現(xiàn)明顯變化,CRF08BC的比例下降,在性傳播人群中最為顯著;暗娼人群中CRF07BC和CRF01AE的比例顯著提高;嫖客人群中URF毒株的比例顯著高于其他人群,是新型HIV-1毒株主要來源。（2）不同人群中新型重組毒株（URF）的基因重組模式有顯著差異,B/C重組主要出現(xiàn)IDU（Intravenous Drug Users）人群,CRF01AE參與的重組主要出現(xiàn)在不吸毒的暗娼和嫖客人群,B/C重組的C亞型病毒骨架主要來源于CRF08BC或CRF07BC。（3）參與分析的386條序列形成32個傳播簇,成簇率20.98%,簇的大小為28,含2條序列的簇占絕對優(yōu)勢（71.88%）,大部分簇內(nèi)人員發(fā)生過商業(yè)性行為。年齡大（50歲以上）、單身、感染CRF07BC毒株等因素與成簇相關(guān)。雖然各亞型的成簇數(shù)均隨時間而增加,但是簇內(nèi)人員數(shù)和成簇率均未見增加,未見傳播簇的擴(kuò)張。（4）CRF07BC、C和CRF01AE均形成紅河當(dāng)?shù)氐牧餍写?呈現(xiàn)奠基效應(yīng)。結(jié)論:（1）CRF08BC是當(dāng)?shù)貎?yōu)勢毒株,CRF01AE在不吸毒的嫖客和暗娼中的比例顯著高于吸毒人群,當(dāng)?shù)卣诎l(fā)生優(yōu)勢毒株由CRF08BC向CRF07BC和CRF01AE的轉(zhuǎn)變,與性傳播超越靜脈吸毒成為當(dāng)?shù)刂饕獋鞑ネ緩降霓D(zhuǎn)變是一致的。（2）IDU人群病毒的主要重組模式是B/C,多數(shù)源于CRF08BC或CRF07BC的二代重組。CRF01AE參與的重組主要出現(xiàn)在不吸毒的暗娼和嫖客,主要源于CRF01AE與CRF08BC或CRF07BC的二代重組。不吸毒的嫖客人群是新型重組毒株的孵化器,應(yīng)密切監(jiān)測。（3）HIV-1傳播簇以含2條序列的小簇為主,形成傳播簇的多為有IDU行為的人,推測IDU嫖客與IDU暗娼在從事性交易的同時,可能也常共用注射器吸毒。未見傳播簇隨時間的擴(kuò)張,推測靜脈吸毒的暗娼和嫖客多數(shù)以長期穩(wěn)定的“對子”形式活動,很少有新成員加入。（4）主要流行毒株形成當(dāng)?shù)氐牧餍写?與云南其他地區(qū)交集不多,是艾滋病預(yù)防控制的有利條件。第二部分云南省紅河州高危人群與HIV共感染的HCV分子流行病學(xué)研究背景:HCV的復(fù)制和突變速率均大于HIV-1,在RNA病毒中居首。目前將HCV分為7個基因型和83個亞型,1型和3型流行范圍最廣,4型和5型是低收入國家最常見的亞型。我國是HCV感染大國,已檢出HCV 6個基因型的24個亞型。云南省是HCV的高流行地區(qū),吸毒人群中HCV基因亞型復(fù)雜,各亞型毒株的分布有顯著的地區(qū)差異。對紅河州及以暗娼和嫖客為主且感染了HIV的人群,尚缺乏HCV基因亞型分布及其長期變化的研究。方法:挑選HIV抗體確認(rèn)陽性標(biāo)本并整理背景信息,進(jìn)行下列研究:（1）用ELISA法檢測HCV抗體,分析各類人群中HCV抗體陽性率的差異。（2）提取純化血漿病毒RNA。（3）一步法逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR擴(kuò)增HCV CE2（1300bp）和NS5B（1000bp）區(qū)基因片段并測序。（4）分析HCV基因亞型:將CE2和NS5B區(qū)的序列質(zhì)量控制后提交到COMET HCV比對網(wǎng)站,得出分型結(jié)果。再下載53條各基因型的參考序列,分別導(dǎo)入CE2和NS5B的fas文件,用MEGA 6構(gòu)建NJ樹,匯總兩種方法的結(jié)果確定基因亞型。（5）HCV成簇分析:將序列構(gòu)建ML進(jìn)化樹確定傳播簇,傳播簇的判斷標(biāo)準(zhǔn)為bootstrap值大于99%、基因距離小于0.05。將研究對象的首次標(biāo)本及其HCV基因序列分為20082010年、20082012年、20082014年3組,分別進(jìn)行成簇分析,觀察傳播簇數(shù)目和規(guī)模隨時間的變化,對主要流行毒株進(jìn)行流行動力學(xué)分析。（6）HIV與HCV的共傳播:對同時獲得HIV和HCV序列的研究對象進(jìn)行兩種病毒傳播簇的比較。結(jié)果:（1）檢出HCV抗體陽性500例,僅靜脈吸毒的人群（IDU）HCV抗體的陽性率是99.25%,有靜脈吸毒行為的人群HCV抗體陽性率顯著高于無靜脈吸毒行為的人群（97.85%vs19.10%,P<0.05）。單純嫖客人群和單純暗娼人群HCV抗體的陽性率分別是36.89%和7.93%。（2）有357例HCV RNA擴(kuò)增測序成功,其中CE2區(qū)334例、NS5B區(qū)293例,擴(kuò)增測序成功率為71.2%,不同特征人群擴(kuò)增測序的成功率無顯著差異。依據(jù)CE2和/或NS5B區(qū)確定HCV基因亞型,構(gòu)成比由高到低依次為3b（37.25%）、3a（26.05%）、6n（17.37%）、1b（10.36%）、6a（7.84%）和其他亞型（6k、6v和2a）。不同人群HCV基因亞型的分布有顯著差異,暗娼人群6a多于1b,且未檢出5個亞型（3b、3a、6n、1b、6a）以外的其他亞型。（3）HCV基因亞型的分布在20082011、20122014兩個時間段呈明顯變化,6n在各人群均呈下降趨勢、6a在暗娼和嫖客人群顯著上升、3a在吸毒人群中顯著升高而在嫖客和暗娼人群中下降、3b在嫖客人群中顯著升高,在其他人群中變化不大。（4）共確認(rèn)30個傳播簇,成簇率為16.81%,絕大多數(shù)（93.33%）為僅有2條序列的傳播對。簇內(nèi)人員為IDU嫖客與IDU暗娼的占75%、均為僅IDU人員的占25%、簇內(nèi)人員同民族的居多（85.71%）、文化程度均偏低居多（66.67%）、含單身人士的居多（89.34%）,不同HCV基因亞型成簇率具有顯著差異,由高到低依次是6a（37.04%）、3b（21.37%）、3a（17.02%）、6n（6.35%）、1b（5.41%）,不同類型高危人群的成簇率未見顯著差異。（5）HCV傳播簇的數(shù)目和成簇率隨時間增加,但未見傳播簇隨時間而擴(kuò)張,保持以2條序列的小簇為主。在同時獲得HIV和HCV序列的研究對象中,有6對2種病毒均成簇,可能為共同傳播。結(jié)論:（1）有靜脈吸毒行為的人群HCV抗體陽性率最高。獲得了性高危人群（暗娼和嫖客）HCV抗體陽性率的數(shù)據(jù),明顯高于目前所知異性傳播HCV的水平,需要密切監(jiān)測和研究。（2）HCV的基因亞型復(fù)雜,毒株的種類和分布正在發(fā)生變化,3b毒株在嫖客人群中的增加最為顯著。（3）HCV的成簇率為16.81%,絕大多數(shù)為傳播對,簇內(nèi)人員的社會人口學(xué)特征多數(shù)相近,基本信息未知的人顯示成簇率較高的趨勢,提示調(diào)查依從性較差的人可能具有多重危險因素,感染和傳播的危險較大。不同HCV基因亞型成簇率的差異,體現(xiàn)了不同毒株的流行和傳播特征,成簇率較高的更多在共用注射器吸毒的人群中傳播,成簇率低的可能主要通過偶發(fā)的針刺等事件傳播。（4）未見傳播簇隨時間而擴(kuò)張,提示當(dāng)?shù)毓灿米⑸淦魑镜娜藛T長期保持穩(wěn)定的關(guān)系,很少有新成員加入,HCV傳播的增加主要是由于共用注射器吸毒的對子（2人）增加所導(dǎo)致的,預(yù)防控制的重點(diǎn)應(yīng)該是減少新增吸毒人員。第三部分云南省紅河州高危人群與HIV共感染的HPgV-2分子流行病學(xué)研究背景:HPgV-2是一個新的經(jīng)皮傳播的血源性傳染性病毒,幾乎所有確診的HPgV-2病例都是與HCV雙重感染,但在無HCV感染的人群中也有低流行率。在云南省的特殊高危人群中HPgV-2的流行狀況如何?是否HPgV-2影響HIV和HCV感染的進(jìn)程?都需要深入研究。由于這個病毒多數(shù)是與HIV和/或HCV共感染,對其致病性尚無定論。方法:挑選HIV抗體確認(rèn)陽性標(biāo)本并整理背景信息,進(jìn)行下列研究:（1）檢測HPgV-2抗體,采用自建的ELISA法檢測HPgV-2抗體,分析不同特征人群抗體陽性率的差異。（2）提取純化血漿病毒RNA。（3）獲得HPgV-2基因片段并測序,采用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR擴(kuò)增HPgV-2 NS3區(qū)長度為153bp的基因片段并測序,比較不同特征人群的HPgV-2 RNA陽性率。（4）高通量測序獲得HPgV-2的全長基因組。（5）整理HPgV-2基因序列,質(zhì)量控制后,進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,確定HPgV-2與其他Pegivirus屬病毒的親緣關(guān)系,比較全長序列各基因片段的基因離散率。（6）HIV和HCV載量的檢測和比較:取全部HPgV-2 RNA陽性標(biāo)本,挑選2倍數(shù)量HPgV-2 RNA陰性標(biāo)本,兩組標(biāo)本HIV和HCV RNA均陽性,采樣時間為同一年份、抗病毒治療情況和傳播途徑相同。分別檢測HIV和HCV載量。結(jié)果:（1）HIV-1感染者的HPgV-2抗體陽性率為25.29%,HIV抗體和HCV抗體均陽性者的HPgV-2抗體陽性率顯著高于HIV抗體陽性而HCV抗體陰性者（27.69%vs 20.83%,p<0.05）。HPgV-2與HIV-1共感染率呈隨時間升高的趨勢。HIV-1感染者的HPgV-2核酸陽性率為5.32%,HIV-1與HCV同時陽性者的HPgV-2核酸陽性率高于僅僅HIV-1陽性者（6.37%vs 3.35%,p<0.05）。（2）單純吸毒者、單純暗娼嫖客人群和混合行為組,HPgV-2抗體和核酸的陽性率分別為38.57%和6.09%、21.75%和3.57%、19.55%和6.77%,單純吸毒人群的陽性率顯著高于暗娼和嫖客人群（p值均<0.01）。（3）HPgV-2核酸陽性組和陰性組的HCV載量平均值分別為1.11E+06cp/ml和7.19E+05cp/ml、HIV載量的平均值分別為5.36E+04cp/ml和2.14E+05cp/ml,均無顯著性差異。（4）獲得了7條HPgV-2的全基因組序列,紅河的HPgV-2獨(dú)自成簇,奠基者效應(yīng)顯著。鑒定出3個可能的傳播簇,1個簇可能為HPgV-2與HIV和HCV的共傳播。結(jié)論:（1）本研究特殊HIV感染的高危人群中,HPgV-2的流行率較高,可能與研究對象既有IDU等經(jīng)皮經(jīng)血暴露的行為,還有頻繁的經(jīng)性暴露行為有關(guān)。（2）HPgV-2感染最常發(fā)生于HCV陽性的人,常通過經(jīng)皮經(jīng)血途徑傳播,也可能存在經(jīng)性傳播。（3）未發(fā)現(xiàn)HPgV-2感染對HIV和HCV的復(fù)制有影響。（4）HPgV-2基因序列較為保守,紅河的毒株在局部地區(qū)獨(dú)立傳播流行,與HIV和HCV的共感染比較罕見。靜脈吸毒與性亂行為交織的高危人群是新病毒產(chǎn)生和傳播的沃土,需要密切監(jiān)測和深入研究。
周兵[3]（2018）在《快速抗體人源化平臺的建立及乙型肝炎病毒人源化抗體的成藥性研究》文中研究指明感染性疾病是指由細(xì)菌、病毒等致病微生物侵襲人體,進(jìn)而引起機(jī)體所發(fā)生的一系列具有感染性臨床癥狀的疾病,嚴(yán)重威脅著人類的生命及健康。近年來,抗感染的抗體藥物研究發(fā)展十分迅速,目前,已經(jīng)有25種抗感染的抗體藥物正在進(jìn)行臨床研究。HBV感染可以導(dǎo)致慢性乙型肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌等疾病,全世界每年約有88萬人死于急性或慢性HBV感染。盡管現(xiàn)有預(yù)防性疫苗已顯著減少了新發(fā)HBV感染,全球仍有3億的慢性HBV感人者需要得到有效的治療,以預(yù)防該病的并發(fā)癥。當(dāng)前FDA批準(zhǔn)用于慢乙肝治療的藥物有兩大類,干擾素和核苷類似物,分別通過調(diào)節(jié)宿主免疫和抑制病毒的復(fù)制從而起到抗病毒的效果。現(xiàn)有的藥物雖有著很強(qiáng)的安全性和抗病毒活性,但治療效果十分有限。這些藥物HBsAg的陰轉(zhuǎn)率都不足5%,無法實(shí)現(xiàn)臨床治愈。因此,需要開發(fā)更有效的新藥物,以改善HBV相關(guān)疾病的臨床管理。盡管全人源抗體技術(shù)的發(fā)展極大增加了全人源抗體成為臨床候選株的數(shù)量,但FDA批準(zhǔn)的大部分治療性抗體藥物仍然以人源化抗體為主?？贵w人源化技術(shù)主要包括CDR移植（常用噬菌體展示等抗體庫技術(shù)）、表面重塑、鏈替換以及計算機(jī)輔助設(shè)計等,但是現(xiàn)有技術(shù)存在改造后人源化抗體親和力降低、具有較大的免疫原性、工作量大、篩選不可視以及與轉(zhuǎn)換成完整抗體活性不一致等問題,這些都延長了抗體人源化的時間,因此發(fā)展新的快速人源化方法勢在必行。本研究旨在建立快速點(diǎn)突變抗體人源化新方法,實(shí)現(xiàn)快速獲得人源化程度高、保持親本鼠抗活性的人源化抗體。并利用該方法對HBV鼠抗E6F6進(jìn)行人源化改造,獲得有臨床治療潛力的人源化抗體。本研究分為兩部分,第一部分是快速點(diǎn)突變抗體人源化平臺的建立。通過對CDR劃分方法、人源化模板選擇方法的比較和分析,確定結(jié)合采用Kabat和Contact定義CDR區(qū)域,并選擇同源性最高的人胚系基因作為模板。通過對現(xiàn)有大量上市或者臨床試驗(yàn)中抗體序列和結(jié)構(gòu)的分析以及一些前期人源化改造工作經(jīng)驗(yàn)總結(jié),抗體序列中每個氨基酸的位置和功能是有一定的規(guī)律可尋的?？偨Y(jié)規(guī)律包括:（1）FR中有些氨基酸存在于CDR接觸面上,直接或間接參與抗體與抗原的結(jié)合或者對維持抗體CDR構(gòu)象具有重要的作用,突變時通常選擇保留;（2）有些FR殘基存在于VH-VK的交界面上,突變時通常選擇保留;（3）還有些FR殘基屬于抗體序列中內(nèi)部包埋的氨基酸,突變時選擇性保留;（4）最后剩下的FR殘基就是對抗體活性影響很小的氨基酸,可以直接突變。不管是屬于哪一種功能的FR殘基,它的位置是相對固定的。12G6是本實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的一株能高效中和乙型流感病毒（Flu-B）的具有廣譜性的鼠源單克隆抗體,我們首先分別對它的輕重鏈可變區(qū)進(jìn)行Kabat編號,然后按照Kabat和Contact定義的CDR區(qū)域劃分CDR。再利用IMGT網(wǎng)站搜索比對,找出同源性最高的2-3條人胚系基因,進(jìn)行序列比對。最后根據(jù)上述總結(jié)的氨基酸規(guī)律,對和胚系基因FR中存在的差異氨基酸進(jìn)行選擇性突變,共設(shè)計4條重鏈和4條輕鏈,分別將其兩兩互搭進(jìn)行真核表達(dá),以親本鼠抗為對照,檢測16株人源化抗體的表達(dá)情況、結(jié)合活性、中和活性等生物學(xué)功能。最終,針對12G6,我們挑選出7株優(yōu)勢的人源化抗體。發(fā)現(xiàn)在2個不同亞系的乙型流感病毒HA蛋白的結(jié)合實(shí)驗(yàn)、中和實(shí)驗(yàn)和HI實(shí)驗(yàn)中,7株人源化抗體保留了 12G6的生物學(xué)活性。5B11和7G5是本實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的兩株能同時高效中和A/B型呼吸道合胞病毒（RSV）的鼠源單克隆抗體。根據(jù)12G6的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分別對5B11和7G5各設(shè)計一種人源化方案,獲得N-5B11和N-7G5兩株人源化抗體。兩株人源化抗體均顯示出良好的反應(yīng)活性和中和活性,且活性與親本相當(dāng)。至此我們針對12G6、5B11和7G5三株鼠抗的人源化改造初步完成,驗(yàn)證了改造方案的可行性,完成快速點(diǎn)突變抗體人源化平臺的構(gòu)建。本研究第二部分是利用第一部分建立的新的人源化平臺對乙型肝炎病毒鼠抗E6F6人源化,并對獲得的人源化抗體進(jìn)行性質(zhì)驗(yàn)證及成藥性評估。E6F6是本實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的一株針對HBV外膜蛋白（HBsAg）上一個特定表位的鼠源單克隆抗體;它能夠有效并持久地清除轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的HBV和HBsAg,具有發(fā)展成為HBV治療性抗體的潛力。在前期研究中,我們利用噬菌體展示技術(shù)對其進(jìn)行了人源化及親和力成熟,成功獲得了人源化程度為89%,體內(nèi)外活性與鼠抗相當(dāng)?shù)娜嗽椿贵w162。本研究利用BIAcoreT200對162進(jìn)行了親和力測定,其親和力為4.18×10-10M。通過對162 Fab的晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析,獲得了 162晶體三維結(jié)構(gòu)。將162與HBsAg表位短肽進(jìn)行對接,得到抗原-抗體相互作用的重要氨基酸。為了驗(yàn)證第一部分所建立的人源化平臺的可行性及提高抗體的人源化程度,本研究第二部分利用第一部分中建立的快速點(diǎn)突變抗體人源化平臺,結(jié)合162氨基酸序列、162晶體結(jié)構(gòu)、與HBsAg短肽對接數(shù)據(jù)及Discovery Studio模擬平臺,對E6F6進(jìn)行人源化改造,獲得3株人源化抗體,huAb1、huAb2和huAb3。在CHO-S細(xì)胞中瞬時表達(dá)和純化,并從抗體的均一性、與抗原反應(yīng)性、中和活性、體內(nèi)病毒清除效果、成藥性評估等方面進(jìn)行綜合分析。huAb1、huAb2和huAb3的人源化程度高達(dá)97%,體外結(jié)合及中和活性與162相當(dāng),但是在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)持續(xù)清除HBsAg的能力有所下降。C57b1/6小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)人源化程度為97%的huAb1清除速率較快。說明人源化程度高的抗體在異源小鼠動物模型中免疫原性增加,被較快的清除,但是人源化程度高的抗體在人體內(nèi)可能具有更高的優(yōu)勢。同時,huAb1、huAb2和huAb3的反嵌合抗體的體外結(jié)合、中和以及體內(nèi)活性均與鼠抗E6F6相當(dāng)。162、huAb1、huAb2和huAb3的溶解度高達(dá)140mg/mL以上,粘度小于14,等電點(diǎn)在8-9之間,達(dá)到了抗體藥物的標(biāo)準(zhǔn),TM值大于80℃,具有較好的熱穩(wěn)定性。在人體內(nèi)環(huán)境和藥物儲存環(huán)境的模擬條件下同樣具有較好的穩(wěn)定性。食蟹猴體內(nèi)藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)評估162、huAb1、huAb2和huAb3的半衰期符合標(biāo)準(zhǔn),均能持續(xù)有效的清除食蟹猴體內(nèi)的HBsAg,其中意外發(fā)現(xiàn)huAb3的半衰期較長,分析與其表面電荷分布有關(guān),表面電荷降低可能會延緩抗體的清除。藥代動力學(xué)參數(shù)及食蟹猴血常規(guī)和血生化結(jié)果提示,162、huAb1、huAb2和huAb3具有良好的藥物有效性和安全性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)162、huAb1、huAb2和huAb3與HBsAg形成免疫復(fù)合物較小,有利于細(xì)胞的高效吞噬。通過對人IgG1Fc區(qū)域的突變,獲得了體外活性與162相當(dāng),吞噬效應(yīng)顯著提高的162-IgG1-KD突變體。發(fā)現(xiàn)CH的替換可能導(dǎo)致Fc不依賴與FcγR作用途徑,而是通過改變Fab與靶標(biāo)的結(jié)合方式,形成不同大小的免疫復(fù)合物,影響吞噬效應(yīng)。同時首次發(fā)現(xiàn)了抗體VH和CH1之間的linker對吞噬的影響,在162重鏈可變區(qū)末端引入柔性linker（Gly4Ser）3可能會增大Fab雙臂間的距離,降低抗體的吞噬功能。綜上所述,本研究建立了快速點(diǎn)突變抗體人源化方法并利用3株不同靶點(diǎn)的鼠抗完成了全面的驗(yàn)證,大大縮短了改造的時間,為鼠源抗體人源化的改造奠定了堅實(shí)的基礎(chǔ),豐富了人源化技術(shù)手段,為抗體人源化改造提供了新的選擇。獲得了具有專利保護(hù)的用于HBV感染相關(guān)疾病治療的人源化抗體分子162、huAb1、huAb2和huAb3,并完成了較為全面的體內(nèi)外活性評估及成藥性分析,完善了抗體人源化改造平臺,為相應(yīng)疾病治療性人源化抗體的研發(fā)奠定了堅實(shí)的基礎(chǔ),有望成為治療慢乙肝的新藥物。
吳浩明[4]（2016）在《湖北省HIV患者體內(nèi)人類Pegivirus病毒的進(jìn)化和動力學(xué)分析以及E2來源多肽的抗病毒活性研究》文中指出人類Pegi virus病毒（簡稱HPgV,之前被稱為庚型肝炎病毒,GBV-C/HGV）是一種正義單鏈RNA （+ssRNA）病毒,屬于黃病毒科Pegivirus病毒屬。HPgV主要有五種基因亞型,廣泛分布在世界各地,并且具有一定程度的地域特異性,其中在中國主要流行的是3亞型HPgV。HPgV主要的傳播方式有血源傳播、性傳播和垂直傳播,由于HPgV和HIV具有相似的傳播途徑,大約17-41%的HIV感染者合并感染HPgV。據(jù)報道,持續(xù)性的HPgV病毒血癥能夠降低HIV感染者的發(fā)病率和死亡率,HPgV通過抑制HIV病毒的進(jìn)入和復(fù)制過程,并調(diào)控宿主的細(xì)胞因子以改善HIV患者的疾病進(jìn)程。我們分析了湖北省13個地區(qū)的156例HIV感染患者,發(fā)現(xiàn)有57例合并感染了HPgV （36.5%）,對其中33位HIV/HPgV共感染患者體內(nèi)的HPgV病毒E2基因進(jìn)行測序并進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,發(fā)現(xiàn)有29例感染了3亞型HPgV,只有4例感染的是2亞型HPgV。對10例HIV/HPgV共感染患者200條全長的HPgVE2基因序列進(jìn)化分析結(jié)果表明,HPgV病毒種群在病人體內(nèi)的進(jìn)化呈現(xiàn)病人特異性特征,利用中性檢驗(yàn)結(jié)合錯配分布的方法分析了病人體內(nèi)HPgV病毒種群歷史動態(tài)變化,發(fā)現(xiàn)大部分病人體內(nèi)的病毒種群存在過快速擴(kuò)張的歷史,并最終達(dá)到穩(wěn)定的種群大小,HIV病毒對HPgV的復(fù)制沒有產(chǎn)生抑制作用；另外,病人體內(nèi)的HPgV病毒受到很強(qiáng)的凈化選擇壓力,該結(jié)果提示HPgV病毒獲得免疫逃逸能力和實(shí)現(xiàn)種群擴(kuò)張的過程中,E2蛋白的結(jié)構(gòu)和功能沒有出現(xiàn)變化,這可能與患者的免疫能力受到削弱或者機(jī)體對不具致病能力的HPgV病毒微弱的免疫應(yīng)答有關(guān)。為了進(jìn)一步探索驅(qū)動HPgV病毒種群變化的因素,我們詳細(xì)分析了HIV/HPgV共感染患者E2基因重組發(fā)生情況,發(fā)現(xiàn)了男性占主導(dǎo)的同源重組現(xiàn)象（7例男性和1例女性）,我們還發(fā)現(xiàn)部分患者被不同類型的病毒株感染,這種現(xiàn)象在男性中也更為普遍。另外,某些男性病人更易被同源的病毒株感染,而女性病人體內(nèi)的毒株則呈現(xiàn)病人特異性特征。這些結(jié)果提示男性占主導(dǎo)的同源重組,可能與男性高風(fēng)險行為方式高于女性的因素有關(guān)。綜上所述,病人體內(nèi)的HPgV的多重感染和不同毒株之間的重組,導(dǎo)致了HPgV的遺傳多樣性,并有可能導(dǎo)致了HPgV病毒種群不同的擴(kuò)張方式。據(jù)報道,HPgVE2蛋白和多肽能夠抑制HIV病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞,由于HPgV流行有嚴(yán)格的地理特異性,不同亞型的HPgV對HIV-1病毒復(fù)制的影響也出現(xiàn)差異,所以我們對HPgV不同基因型E2蛋白抗原位點(diǎn)區(qū)域（267-298aa）的進(jìn)化特點(diǎn)進(jìn)行分析,并結(jié)合不同基因型的抗原結(jié)合肽以及不同區(qū)域的多肽對HIV-1的抑制活性,認(rèn)為HPgV膜蛋白中可能存在多個區(qū)域或者是膜蛋白的空間結(jié)構(gòu),參與了對HIV的抑制作用?？偠灾?我們使用HIV/HPgV共感染模型,對HIV-1感染者體內(nèi)HPgV病毒的進(jìn)化特征進(jìn)行了分析,并研究不同基因型及不同區(qū)域的膜蛋白來源多肽對HIV復(fù)制的抑制作用,有助于加深對HPgV病毒抑制HIV復(fù)制機(jī)制的理解,并為開發(fā)治療HIV感染的方法提供新的思路。
肖桂娥[5]（2014）在《廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究》文中研究指明研究背景丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染可導(dǎo)致75%-85%感染者發(fā)展為慢性肝病，是慢性肝炎、肝硬化及肝癌的重要病因，嚴(yán)重危害人類的健康和生命。全球HCV感染率約3.0%，即有1.7-2.0億的HCV感染者；我國的HCV感染率約為2.5-4.9%，感染人數(shù)已超過3000萬。HCV可經(jīng)靜脈吸毒、輸血、性傳播、垂直傳播、或經(jīng)破損的皮膚粘膜傳播如手術(shù)、紋身、拔牙、共用衛(wèi)生器具等。發(fā)達(dá)國家以靜脈吸毒傳播為主，我國早期以輸血和血制品傳播為主，在實(shí)行血液篩查HCV制度后，此傳播途徑大幅下降。但隨著我國吸毒人群增多，經(jīng)靜脈吸毒感染HCV的比例增大。HCV基因型繁多，目前國內(nèi)外常采用Simmonds命名法，將HCV分為6種基因型和80多種基因亞型?；蛐头植加忻黠@的地域差異性，la、lb、2a、2b、3a型呈全球廣泛分布，其中1b型分布最廣；中國以1b和2a型多見，其中以1b型為主，2a型主要分布在中國北部，3型主要分布在云南等西南地區(qū)，4型、5型報道罕見，6型主要見于香港、澳門及南方邊境省份，6亞型最復(fù)雜，變異株最多，到目前為止，6型已發(fā)現(xiàn)有23個亞型。有報導(dǎo)廣東地區(qū)獻(xiàn)血員和靜脈吸毒人群中，以1b和6a型為主，并發(fā)現(xiàn)新的6型變異株。而本地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基型變化有待進(jìn)一步研究。不同基因型的HCV對肝臟損傷程度不同，1b型對肝臟的損傷嚴(yán)重度大于其他基因型。目前多采用聚乙二醇干擾素（PEG-IFN）α聯(lián)合利巴韋林（RBV）進(jìn)行抗病毒治療，不同基因型感染者療效不一，1、4型病毒應(yīng)答率低于2、3型，因此，準(zhǔn)確診斷HCV基因型對HCV抗病毒治療方案選擇及療效判斷至關(guān)重要。為了精準(zhǔn)分型，國際上對HCV基因分型技術(shù)進(jìn)行了長期研究。目前，HCV基因分型技術(shù)包括基因測序法、型特異性引物擴(kuò)增法、探針雜交法、基因芯片法、限制性片段長度多態(tài)性分析（RELP）、異源分子遷移率分析法（HMA）等。對HCV全基因組測序是最準(zhǔn)確的方法，但難度大、費(fèi)時、成本高，臨床上難以實(shí)行，而部分基因測序法相對簡單易行，目前已將HCV基因NSB5區(qū)測序分型法視為“金標(biāo)準(zhǔn)”。但我們臨床上常規(guī)采用國產(chǎn)商業(yè)試劑（探針雜交法）對HCV基因分型，此法只能分出1型與非1型，且準(zhǔn)確率較低。鑒于基因分型方法存在的問題和廣東地區(qū)HCV基因型的復(fù)雜性，為配合臨床丙型肝炎診療的需求，本研究以廣州地區(qū)丙型肝炎患者為主體，對其HCV基因相關(guān)問題進(jìn)行了研究，包括臨床切實(shí)可行的兩種基因分型方法的準(zhǔn)確性比較和HCV分子流行病學(xué)研究兩部分內(nèi)容。第一部分臨床切實(shí)可行的兩種基因分型法（部分基因測序法與探針雜交法）的準(zhǔn)確性比較研究內(nèi)容及目的比較臨床常規(guī)使用的HCV部分基因測序法和探針雜交法對HCV基因分型的準(zhǔn)確性，為臨床選擇HCV基因分型方法、基因型診斷和制定抗病毒治療策略及HCV分子流行病學(xué)研究提供可靠依據(jù)。研究方法收集2012-2013年在廣州市第八人民醫(yī)院就診的191例臨床丙型肝炎患者，其血清標(biāo)本已采用國產(chǎn)探針雜交法進(jìn)行了HCV基因分型。以國際HCV基因庫中HCV全基因序列代表株的分型結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，設(shè)計C區(qū)和NS5B區(qū)基因序列擴(kuò)增引物，分別擴(kuò)增HCV C區(qū)和NS5B區(qū)基因，基因產(chǎn)物的測序結(jié)果與“金標(biāo)準(zhǔn)”共建系統(tǒng)進(jìn)化樹進(jìn)行基因分型，分型結(jié)果與患者的探針雜交法分型結(jié)果進(jìn)行對比。研究結(jié)果1.從國際HCV基因庫中共獲得92個代表株，涵蓋7個基因型、54個基因亞型和5個重組基因型。分別構(gòu)建代表株的全基因、C區(qū)和NS5B區(qū)的系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示，92個代表株的全基因序列分型結(jié)果與其C區(qū)和NS5B區(qū)基因分型結(jié)果一致。2.用HCV C區(qū)和NS5B區(qū)擴(kuò)增引物分別檢測191例臨床丙型肝炎患者的HCV基因，結(jié)果顯示兩區(qū)均擴(kuò)增成功的有171例，其中167例C區(qū)和NS5B區(qū)HCV基因分型結(jié)果一致。3.167例基因測序分型結(jié)果與患者的探針雜交法分型結(jié)果對比顯示，總符合率為84.43%（141/167）。探針雜交法誤檢的26例中，23例6a型誤檢為1型；2例1b和1例1a型被誤檢為非1型。171例患者中另外4例（2.34%）的C區(qū)與NS5B區(qū)HCV分型結(jié)果不一致，其中3例C區(qū)分型為6a而NS5B區(qū)分型為1b，另外1例C區(qū)分型為1b而NS5B分型為6a，4例患者的探針雜交結(jié)果顯示，2例與C區(qū)結(jié)果一致；另外2例與NS5B區(qū)結(jié)果一致。結(jié)論1.目前臨床上常規(guī)使用的國產(chǎn)商業(yè)試劑（探針雜交法）誤檢率高，且易在1型和6型間出現(xiàn)誤檢。2.建立了更精確的基因分型法：C區(qū)和NS5B區(qū)基因同時測序可使分型結(jié)果更加準(zhǔn)確，兩區(qū)分型結(jié)果一致時可以取代HCV全基因測序分型，兩區(qū)分型結(jié)果不一致時，提示可能存在混合株或重組株感染，需做進(jìn)一步分析。第二部分廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV分子流行病學(xué)研究研究內(nèi)容及目的研究廣州地區(qū)丙型肝炎患者HCV基因型特點(diǎn)及其與患者年齡、性別、傳播途徑及HCV病毒載量的相關(guān)性，以便了解本地區(qū)丙肝臨床HCV分子流行病學(xué)變化趨勢及對臨床預(yù)后的影響。研究方法收集2012-2013年在廣州市第八人民醫(yī)院就診的207例HCV RAN陽性的丙型肝炎患者血清，分別提取病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄生成cDNA。對其HCV C區(qū)和NS5B區(qū)基因序列進(jìn)行RT-NPCR擴(kuò)增，兩區(qū)擴(kuò)增成功的PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因測序，測序結(jié)果分別與相應(yīng)的參照株序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，兩區(qū)基因分型結(jié)果一致者確定HCV基因亞型，分析廣州地區(qū)HCV基因型特點(diǎn)及傳播途徑。并采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析性別、年齡、HCV病毒載量與基因型的相關(guān)性。研究結(jié)果1.179例結(jié)果納入分析207例標(biāo)本分別進(jìn)行HCV C區(qū)及NS5B區(qū)巢式PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物分別為401bp，375bp，目的條帶清晰且單一，無非特異性雜帶。有185例HCV C區(qū)和NS5B區(qū)都擴(kuò)增成功，其中179例兩區(qū)基因分型結(jié)果一致。2. HCV基因型特點(diǎn)1)179例HCV基因特點(diǎn)共檢出1型、2型、3型、6型四種基因型和八種基因亞型，以1b和6a為主。各亞型所占比例為：1b型40.78﹪（73/179），6a型27.37﹪（49/179），3b型11.73﹪（21/179），3a型8.94﹪（16/179），2a型6.15﹪（11/179），1a型3.91﹪（7/179），2b型0.56﹪（1/179），6n型0.56﹪（1/179）。未發(fā)現(xiàn)新的6型變異株。2)1b和6a型系統(tǒng)進(jìn)化樹特點(diǎn)1b株主要分為在A、B、C三簇，A簇與中國廣泛流行1b株同源性高、B簇與中國中部及南部地區(qū)流行1b株同源性高；6a型株分為Ⅰ、Ⅱ兩大簇，與廣東地區(qū)獻(xiàn)血人群及靜脈吸毒人群中HCV6a型感染株同源性高。3.流行病學(xué)特點(diǎn)：1)傳播途徑患者主要通過靜脈吸毒、輸血和血制品感染HCV。靜脈吸毒感染者中主要以6a型為主，占57.45%（27/47），其次為3a型，占21.28%（10/47）；通過輸血和血制品感染者中主要以1b型為主，占78.95%（30/38）。2)性別6組基因亞型間患者的性別比例有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.002）。3)年齡6組基因亞型間患者年齡分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.007），2a型患者平均年齡最大（53.45±11.02歲），與其他組相比，均有統(tǒng)計學(xué)差異（均為P<0.05），而其他組兩兩比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。4)病毒載量6組基因亞型間患者的病毒載量有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.000），1b型患者病毒載量平均水平最高（6.51±0.90log10IU/ml），與其他組相比，均有統(tǒng)計學(xué)差異（均為P<0.05），而其他組兩兩比較均無統(tǒng)計學(xué)差異。5)合并HIV感染患者特點(diǎn)179例患者中，有30例患者合并HIV感染，其中以6a型患者最多，達(dá)51.51%（17/33）。采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，比較單純HCV與合并HIV感染者的HCV載量均值，結(jié)果顯示，兩組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.691）。結(jié)論：1.廣州地區(qū)丙型肝炎患者HCV基因型存在多種亞型；以1b、6a、3型為主，1b型株包含中國大部分地區(qū)的1b型株，6a、3型已取代2a型分別成為第二、三主要流行基因型；未發(fā)現(xiàn)其他文獻(xiàn)報道的或未曾發(fā)現(xiàn)的6型變異株。2.丙型肝炎患者性別比例、年齡、病毒載量在基因亞型上均有統(tǒng)計學(xué)差異，其中2a型平均年齡水平最高。1b型病毒載量最高，這與1b型比其他基因型有更強(qiáng)的致病性等報道是相符的。輸血及血制品傳播中以lb型為主，靜脈吸毒傳播中以6a型為主。3. HCV/HIV共感染者以6a型占主要，其病毒載量與單純HCV感染者相比無統(tǒng)計學(xué)差異。
黃璜,李軍,張衛(wèi)東[6]（2012）在《合并感染HIV對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因影響》文中研究指明目的研究人類免疫缺陷病毒（HIV）感染對1 b型丙型肝炎病毒（HCV）E2/NS1包膜區(qū)基因變異的影響,探討2組間E2/NS1區(qū)基因序列同源性差異,為HCV/HIV合并感染者中HCV的治療提供依據(jù)。方法對河南省某有償獻(xiàn)血村進(jìn)行隨訪,將得到的所有HCV陽性病例255例根據(jù)合并HIV感染的情況分成2組,并對其基因分型,然后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄（RT）-巢式PCR擴(kuò)增1 b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因,繼而進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（SSCP）、純化后測序。結(jié)果 HCV單純感染組和HIV/HCV合并感染組SSCP平均條帶數(shù)分別為（3.4±0.55）、（2.6±0.55）條,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.32,P=0.049）;HCV單純感染組和HIV/HCV合并感染組HCV E2/NS1包膜區(qū)同源性分別為76.7%和87.6%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=20.13,P<0.001）;2組第一高變區(qū)（HVR-1）同源性分別為59.3%和81.9%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=10.39,P=0.001）;2組第3高變區(qū)（HVR-3）同源性分別為71.7%和83.9%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.60,P=0.03）;單純HCV組中變異性較高的氨基酸位點(diǎn)在HCV/HIV合并感染組中表現(xiàn)出較高的保守性。結(jié)論 HIV感染對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因變異具有抑制作用,且其主要體現(xiàn)在HVR-1和HVR-3區(qū)。
張國英[7]（2011）在《山東煙臺地區(qū)HCV基因分型研究》文中研究表明目的了解山東煙臺地區(qū)丙型肝炎病毒的基因分型,結(jié)合受試者的肝功能指標(biāo)觀察基因型別與肝損情況是否相關(guān)。方法采用特異性PCR引物對HCV RNA5’UTR區(qū)和/或NS5B區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列分析,通過與GenBank中參考序列的比對,聯(lián)合遺傳進(jìn)化樹對標(biāo)本予以分型。結(jié)果22份HCV RNA陽性無償獻(xiàn)血員標(biāo)本有9例可明確分型,可分型率為40.9%;48例HCV RNA陽性丙型肝炎患者標(biāo)本,有33例可明確分型,可分型率為68.8%。9例無償獻(xiàn)血員中檢出1b和3a兩種基因亞型,分別為8例（88.9%）和1例（11.1%）；33例丙肝患者中,檢出1b、2a和6a三種基因亞型,分別為22（66.7%）、10（30.3%）和1（3.03%）例。1b亞型是煙臺地區(qū)HCV攜帶者的優(yōu)勢流行基因亞型,在不同人群中分布差異無顯著性（χ2=0.796,P=0.373）；不同基因分型的受試者其肝損指標(biāo)的差異有顯著性（P<0.05）,2a型攜帶者的ALT、AST均值明顯高于1b型。結(jié)論山東煙臺地區(qū)HCV基因型呈現(xiàn)多樣性,以1b型為主,并首次檢出3a和6a亞型；人群存在HCV潛伏感染,應(yīng)加強(qiáng)獻(xiàn)血員HCV感染的檢測,確保臨床輸血安全：HCV基因型與肝損指標(biāo)具有相關(guān)性,2a型HCV感染可能在肝細(xì)胞的病變過程中起著重要作用。
張立新[8]（2011）在《丙型肝炎病毒5’非編碼區(qū)及非結(jié)構(gòu)蛋白5A的基因變異及其臨床意義》文中研究表明研究背景和目的：丙型肝炎（Hepatitis C）是威脅人類身體健康的重要傳染病,其病原體是丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）,全球范圍內(nèi)大約有1.7億人感染了HCV,我國的感染率約為3%。HCV感染容易慢性化,慢性丙型肝炎約有20%-30%會在20年內(nèi)緩慢進(jìn)展為肝硬化和肝癌,HCV感染成為導(dǎo)致肝癌及終末期肝病的重要原因。HCV為單股正鏈RNA病毒,整個基因組只有一個開放讀碼框（Open reading frame, ORF）,位于基因組中央,在基因組的5’和3’末端各含有一段非編碼序列（Non-cording Region, NCR）?；蚪M從5’NCR依次為C、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B及3’NCR, C區(qū)編碼核殼蛋白,E1、E2區(qū)編碼包膜糖蛋白,P7及NS2到NS5分別編碼不同功能的非結(jié)構(gòu)蛋白。HCV具有高度變異性,但不同區(qū)段變異率不同,有些區(qū)段變異性較大,而另有些區(qū)段則遺傳保守性很高,其中5’NCR和C區(qū)最保守,E區(qū)最容易變異。HCV 5’NCR是整個基因組最為保守的區(qū)域,長度和序列非常穩(wěn)定,這個區(qū)段核苷酸突變少,并且其變異可以代表基因型。HCV可以分為6個基因型及不同亞型,HCV基因型分布有明顯的地域差別,我國大陸主要是1b、2a型及少量的la、2b、3b、4a及6a型等。研究表明,HCV基因型與臨床有密切的關(guān)系,基因1型HCV感染者往往病毒載量較高,疾病進(jìn)展快,對干擾素的應(yīng)答較差,但是基因型對臨床的影響仍然存在一定的爭議。HCV 5’NCR是病毒復(fù)制的起始部分,在病毒的復(fù)制及病毒蛋白的翻譯方面起到很重要的作用,5’NCR某些核苷酸的特異性變異可能會影響病毒的復(fù)制水平及對干擾素的治療應(yīng)答。NS5A是HCV編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白,在HCV多蛋白的成熟和RNA的復(fù)制過程中具有十分重要的作用,具有抗肝細(xì)胞凋亡作用,并下調(diào)干擾素a（IFNa）刺激的抗病毒效應(yīng)。HCV NS5A某些區(qū)域的基因變異可能導(dǎo)致其抗干擾素作用的減弱,研究最多的區(qū)域是ISDR,日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)NS5A羧基末端第2209到2248氨基酸的40個氨基酸區(qū)域的序列與干擾素治療的敏感性有關(guān),將這個區(qū)域稱為干擾素敏感決定區(qū)（ISDR）,認(rèn)為ISDR變異株（4個以上氨基酸突變）對干擾素的應(yīng)答較好,但是歐洲和美國的一些研究并未證實(shí)ISDR的突變與治療轉(zhuǎn)歸的關(guān)系,考慮ISDR外還存在與干擾素療效相關(guān)的序列,如V3區(qū)、干擾素及利巴韋林耐藥區(qū)（IFN/RBV resistance determining region, IRRDR）等。目前對ISDR變異與干擾素應(yīng)答關(guān)系的研究較多,但是對NS5A區(qū)基因全序列的變異對干擾素應(yīng)答影響的研究還很少,國內(nèi)尚未見報道。為了明確HCV 5’NCR及NS5A的變異情況以及變異對臨床的影響,本研究應(yīng)用基因芯片法及基因測序法檢測山東地區(qū)HCV感染者5’NCR區(qū),對進(jìn)行抗病毒治療的基因1b型慢性丙型肝炎病人進(jìn)行NS5A序列測定,觀察HCV 5’NCR及NS5A的變異情況及其臨床意義。材料與方法：1.2005年1月至2008年10月期間濟(jì)南市傳染病醫(yī)院門診及住院的慢性丙型肝炎及肝硬化病人170例,抗HCV及HCV RNA均陽性,并排除了HAV、HBV、HEV、HIV感染及酒精性肝炎和藥物性肝炎,空腹抽靜脈血5m1。應(yīng)用聚乙二醇干擾素a-2a 180ug或a-2b 1.0-1.5ug/kg治療,基因1型療程12個月聯(lián)合利巴韋林800-1200mg,非基因1型療程6個月聯(lián)合利巴韋林800-1000mg。應(yīng)用基因芯片法檢測HCV基因型,觀察基因型與疾病嚴(yán)重程度、感染途徑、HCV RNA定量及干擾素應(yīng)答的關(guān)系。2.2008年1月至2009年12月期間濟(jì)南市傳染病醫(yī)院住院的慢性丙型肝炎病人118例,進(jìn)行HCV 5’NCR的序列測定,應(yīng)用分子生物學(xué)軟件ClustalX2.0及Mega4.0進(jìn)行分析,以Mega4.0軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹,以此了解不同病毒株的親源性；與國內(nèi)外HCV流行株相比較,觀察不同病毒株5’NCR區(qū)核苷酸序列的變異,了解山東地區(qū)HCV 5’NCR的基因變異特點(diǎn)；觀察特征性的基因變異與HCVRNA定量水平及干擾素應(yīng)答的關(guān)系。3.對35例進(jìn)行抗病毒治療的基因1b型慢性丙型肝炎病人治療前的血清進(jìn)行NS5A序列測定,全長NS5A序列設(shè)計5對引物,分5段進(jìn)行測序,測序結(jié)果應(yīng)用ClustalX2.0及Mega4.0軟件進(jìn)行核苷酸及氨基酸序列的比對,與HCV 1b型標(biāo)準(zhǔn)株HCV-J比較,觀察NS5A全基因的核苷酸及氨基酸變異率及特異性的區(qū)域ISDR、V3區(qū)、IRRDR等的變異情況,以及以上變異與干擾素應(yīng)答的關(guān)系。結(jié)果：1.基因芯片法檢測HCV基因型結(jié)果為：基因1b型63.1%,2a型28.6%,1a及3b型均為1.19%,1b+2a及1a+1b混合型6%；肝硬化和慢性肝炎兩組病人基因型分布無差別；有輸血史者占67.9%,有輸血史者及無輸血史者基因型分布無差別；基因1b型與基因2a型血清HCV RNA定量log值分別為：6.42±1.0及5.69±1.15,t=3.89,p=0.0001；基因1b型與基因2a型抗病毒治療SVR率分別為63.6%、90%,0.01<p<0.05。2.慢性丙型肝炎病人的5’NCR區(qū)基因序列分析結(jié)果表明：基因型分別為1b型65例、基因2a型45例、1a型2例、3a型1例、3b型2例及6a型3例。3.42例1b型慢性丙型肝炎病人5’NCR區(qū)序列跟國內(nèi)外多數(shù)參考株序列相同,23例病人發(fā)生1-2堿基變異,存在120位C-T（9例）和204位C-T（8例）兩個位點(diǎn)的特征性變異。2例1a病人5’NCR區(qū)基因序列與中國株序列相同,與2株美國株同源性為99.5%-100%。2a型病人5’NCR序列同源性為97.8%-100%,存在與參考株完全相同的病毒株,共有11個位點(diǎn)存在堿基變異,有222位及247位兩個位點(diǎn)的特征性變異,根據(jù)這兩個位點(diǎn)堿基的不同可以將2a型病人分為3組：均為T組、均為C組及分別為C、T組。3a型5’NCR和標(biāo)準(zhǔn)株同源性為98.1%,有4個堿基不同。2例3b型病人的5’NCR與國內(nèi)外流行株同源性分別為99.1%-100%。6a病人都具有特征性的第-145位的CA插入,病人及參考株之間僅存在3個位點(diǎn)的堿基的不同,其中2例病人序列與中國株之一相同,與另一中國株及香港株同源性均為99.5%,另外1例病人與參考株的同源性為98.5%-99.5%。4.1b型5’NCR區(qū)120位C-T變異株和野毒株HCV RNA定量分別為5.16+1.40 log和6.14+1.01 log（p=0.041）,差別有顯著性；而1b型5’NCR區(qū)204位C-T變異株和野毒株HCV RNA定量分別為5.95±0.95 log和6.14±1.01log（p=0.23）。2a型病人根據(jù)5’NCR第222位及247位的堿基分為3組,3組病人HCV RNA定量沒有明顯差別。1b型及2a型5’NCR區(qū)變異株與野毒株比較干擾素的應(yīng)答率沒有差異。5.35例病人中有20例得到全序列HCV NS5A測序結(jié)果,其中11例實(shí)現(xiàn)持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（SVR）,9個病人無應(yīng)答或停藥后復(fù)發(fā)（NR）。與HCV標(biāo)準(zhǔn)株J株進(jìn)行比較,NS5A變異率較高,核苷酸變異數(shù)目為136+9.2,氨基酸變異數(shù)目為31.3士4.2,但病人之間同源性較高。SVR及NR兩組病人NS5A全長序列的氨基酸變異數(shù)目沒有差別（32.4+4.4及30.4士3.7,p=0.302）, ISDR為突變型、中間型及野生型人數(shù)分別為：1、6、2及0、4、7（p>0.05）, IRRDR氨基酸變異數(shù)目在SVR組及NR組分別為：6+1.33及4.4+1.14（p=0.014）, SVR組及NR組氨基酸變異數(shù)≥6的比例分別為6/9及2/11（p=0.04）,差異有顯著性。結(jié)論：1.山東地區(qū)HCV主要流行株是基因1b型,其次為2a型,存在少量的1a、3a、3b、6a型及混合型感染。其中基因3a和6a型感染以前在山東地區(qū)未見報道。2.HCV感染者大部分有輸血史,基因型與疾病的進(jìn)展無關(guān),1b型感染者HCVRNA定量（病毒載量）較高,且持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答較差。3.HCV 5’NCR區(qū)序列高度保守,與國內(nèi)外流行株同源性高,變異率低。基因1b型及2a型5’NCR區(qū)均有特征性的核苷酸變異,1b型HCV感染者5’NCR第120位C-T的變異減弱了病毒的復(fù)制水平,其余位點(diǎn)的變異不影響病毒的復(fù)制水平,5’NCR的變異對干擾素的應(yīng)答無明顯的影響。4.與HCV J株比較,山東地區(qū)慢性丙型肝炎病人HCV NS5A區(qū)核苷酸及氨基酸變異率較高,但病人之間NS5A序列的同源性較高。ISDR的氨基酸變異率較高者抗病毒治療應(yīng)答者較好,但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,IRRDR氨基酸變異數(shù)≥6預(yù)示丙型肝炎抗病毒治療療效較好。
李軍[9]（2011）在《合并HIV感染對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因的影響》文中研究說明丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）是慢性肝病的主要病原體,單股正鏈RNA病毒,其感染呈世界性分布,目前全球約有1.7億感染者,而且每年仍有約300萬-400萬新發(fā)病例；我國HCV感染率約為3.2%,即約有3800萬HCV感染者,80%以上的感染者形成與慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭及肝細(xì)胞癌相關(guān)的持續(xù)性感染,感染20年后有10%-20%慢性患者發(fā)展至肝硬化,感染30年后有1%-5%慢性患者發(fā)展為肝癌。目前對慢性HCV感染的治療主要是長效干擾素結(jié)合利巴韋林進(jìn)行抗病毒治療,但有效率僅在50%左右,因此能否研制出安全有效的預(yù)防性及治療性的疫苗成為了當(dāng)今解決HCV慢性感染的重要問題。但HCV在機(jī)體內(nèi)常以部分變異但又高度同源的準(zhǔn)種形式存在,并表現(xiàn)出不同部位具有不同的變異程度,編碼包膜蛋白的E2/NS1區(qū)可變性最高,且有研究顯示該區(qū)的變異可能與HCV感染的慢性化及疾病進(jìn)程有關(guān)。HCV和人類免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus, HIV）因傳播途徑相同,即血液傳播、性接觸傳播、母嬰傳播,常合并感染,不同的傳播途徑合并感染率不同,以血液傳播的合并感染率最高,因此有償獻(xiàn)血人群中常合并感染。目的研究HIV對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因變異的影響,探討兩組間該區(qū)基因序列同源性的差異,為HCV/HIV合并感染者中HCV的治療奠定基礎(chǔ)。方法對某有償獻(xiàn)血村隨訪到的所有HCV陽性的病例根據(jù)合并HIV的情況分成兩組,并進(jìn)行基因分型,然后RT-巢式-PCR擴(kuò)增1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因,進(jìn)行SSCP、純化后測序。結(jié)果HCV基因型在HCV/HIV合并感染組及單純HCV感染組兩組間的的分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=35.4,P<0.001）,且單純HCV感染組中HCV的基因型較復(fù)雜；SSCP的平均條帶數(shù)在兩組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,單純HCV感染組較多；兩組內(nèi)的變異均主要來自于HVR-1、HVR-2、HVR-3,而兩組間HCVE2/NS1包膜區(qū)、HVR-1、HVR-3同源性差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；單純HCV組中變異性較高的氨基酸位點(diǎn)在HCV/HIV合并感染組中均表現(xiàn)出較高的保守性。結(jié)論1、兩組均以HCV1b基因型為主,但全部HCV基因型在兩組間分布的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。2、HIV/HCV感染降低了1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因的變異性,主要體現(xiàn)在HVR-1和HVR-3區(qū)。
張向穎,修冰水,張賀秋,祁自柏,安媛,邱艷[10]（2010）在《HCV感染者第一高變區(qū)及部分膜區(qū)序列變異的分子進(jìn)化分析》文中指出目的比較分析HCV第一高變區(qū)及包含第一高變區(qū)（HVR1）在內(nèi)的部分膜區(qū)序列變異,從分子進(jìn)化角度探討獻(xiàn)血者體內(nèi)HCV變異。方法通過RT-PCR釣取5名HCV感染獻(xiàn)血者體內(nèi)含HVR1的部分膜區(qū)序列,選取10個克隆進(jìn)行序列測定,并采用ClustalX軟件,對獲得的50條HVR1區(qū)和50條膜區(qū)序列進(jìn)行了橫斷面的分子進(jìn)化樹分析。結(jié)果部分HCV感染者體內(nèi)自身10條HVR1序列之間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn);但感染者體內(nèi)10條膜區(qū)序列之間親緣關(guān)系較近,并呈現(xiàn)出一定的個體特異性。結(jié)論相比單純分析HVR1區(qū)的變異情況,以含HVR1的膜區(qū)序列進(jìn)行的進(jìn)化分析更能體現(xiàn)出個體的差異,對于HCV的溯源更有意義。
二、獻(xiàn)血者體內(nèi)攜帶的HCV包膜區(qū)基因同源性分析（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、獻(xiàn)血者體內(nèi)攜帶的HCV包膜區(qū)基因同源性分析（論文提綱范文）
（1）核酸檢測技術(shù)在基層血站的應(yīng)用與質(zhì)量控制探討（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 資料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 核酸檢測技術(shù)應(yīng)用于血液篩查的現(xiàn)狀 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（2）云南紅河州高危人群HIV及其共感染的HCV/HPgV-2病毒的分子流行病學(xué)研究（論文提綱范文）
| 縮略語表 摘要 Abstract 前言 第一部分 云南省紅河州高危人群HIV感染的分子流行病學(xué)研究 |
| 1 背景 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 研究對象 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.3 研究方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 研究對象及其基本情況 |
| 3.2 HIV-1 pol區(qū)擴(kuò)增測序基本情況 |
| 3.3 HIV-1 基因亞型及其在不同人群和時間的分布 |
| 3.4 基于全長基因組的2株新型重組毒株和4株G亞型病毒的鑒定 |
| 3.5 新型重組毒株(URFs)的鑒定及人群特征 |
| 3.6 HIV-1 傳播簇分析 |
| 3.7 與云南其他地區(qū)毒株流行的關(guān)系 |
| 3.8 主要HIV-1 毒株的流行動力學(xué)分析 |
| 3.9 耐藥毒株流行情況 |
| 4 討論 第二部分 云南省紅河州高危人群與HIV共感染的HCV分子流行病學(xué)研究 |
| 1 背景 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 研究對象 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.3 研究方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 HCV共感染的情況 |
| 3.2 HCV CE2/NS5B區(qū)擴(kuò)增測序結(jié)果 |
| 3.3 HCV的基因亞型及其構(gòu)成 |
| 3.4 HCV的成簇分析 |
| 3.5 不同時間段的成簇分析 |
| 3.6 HIV與 HCV的共傳播 |
| 3.7 HCV的流行動力學(xué)析 |
| 4 討論 第三部分 云南省紅河州高危人群與HIV共感染的HPg V-2 分子流行病學(xué)研究 |
| 1 背景 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 研究對象 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.3 研究方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 HPgV-2抗體與核酸檢測結(jié)果 |
| 3.2 HPgV-2陽性人員的流行病學(xué)特征 |
| 3.3 HPgV-2與HCV的共感染情況 |
| 3.4 HPgV-2抗體陽性者中HPgV-2 RNA陽性的比例 |
| 3.5 單獨(dú)HPgV-2 RNA陽性率 |
| 3.6 HPgV-2的基因變異和遺傳特征 |
| 3.7 HPgV-2的致病特征分析 |
| 3.8 HPgV-2的成簇分析 |
| 4 討論 參考文獻(xiàn) 作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果 主要簡歷 致謝 |
（3）快速抗體人源化平臺的建立及乙型肝炎病毒人源化抗體的成藥性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 抗體(Antibody)的概述 |
| 1.1.1 抗體的結(jié)構(gòu)與功能 |
| 1.1.2 抗體的人源化 |
| 1.1.3 抗體藥物市場 |
| 1.1.4 抗感染抗體藥物的概況及趨勢 |
| 1.1.5 Fc改造對效應(yīng)功能的影響 |
| 1.2 乙型肝炎病毒(HBV)的概述 |
| 1.2.1 HBV基因組 |
| 1.2.2 HBV的病毒結(jié)構(gòu) |
| 1.2.3 HBV的生命周期 |
| 1.2.4 HBV基因編碼的蛋白 |
| 1.2.5 HBV的基因型 |
| 1.2.6 HBV的流行病學(xué) |
| 1.2.7 HBV的預(yù)防 |
| 1.2.8 HBV感染的抗病毒治療 |
| 1.3 本研究的目的、意義和思路 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要儀器 |
| 2.1.2 主要耗材 |
| 2.1.3 主要試劑 |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)常用溶液及試劑配置 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 常規(guī)分子克隆實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.2 常規(guī)細(xì)胞生物學(xué)方法 |
| 2.2.3 抗體的表達(dá)、純化及鑒定 |
| 2.2.4 免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.5 體外調(diào)理吞噬實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.6 抗原-抗體免疫復(fù)合物特征分析 |
| 2.2.7 HBV相關(guān)抗體的小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.8 親和力常數(shù)測定 |
| 2.2.9 抗體晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析 |
| 2.2.10 食蟹猴體內(nèi)評估抗體的藥代動力學(xué) |
| 2.2.11 抗體生物物理特性相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.12 數(shù)據(jù)處理統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 第三章 結(jié)果與分析 |
| 第一部分 快速點(diǎn)突變抗體人源化平臺的構(gòu)建 |
| 3.1 流感病毒鼠源抗體12G6的人源化 |
| 3.1.1 12G6-cAb體外活性的評估 |
| 3.1.2 12G6-cAb的人源化設(shè)計 |
| 3.1.3 12G6人源化抗體真核表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 3.1.4 12G6人源化抗體小量轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清性質(zhì)鑒定 |
| 3.1.5 12G6人源化抗體大量表達(dá)、純化及性質(zhì)鑒定 |
| 3.2 呼吸道合胞病毒鼠源抗體5B11和7G5的人源化 |
| 3.2.1 5B11-cAb和7G5-cAb體外活性的評估 |
| 3.2.2 5B11-cAb和7G5-cAb的人源化設(shè)計 |
| 3.2.3 5B11和7G5人源化抗體構(gòu)建、表達(dá)、純化及性質(zhì)鑒定 |
| 3.3 第一部分小結(jié) |
| 第二部分 乙型肝炎病毒治療性抗體的改造及成藥性評估 |
| 3.4 E6F6人源化抗體162的親和力測定 |
| 3.4.1 E6F6人源化抗體162的晶體培養(yǎng)及結(jié)構(gòu)解析 |
| 3.4.2 E6F6鼠抗的人源化改造 |
| 3.4.3 E6F6人源化抗體體內(nèi)外活性的評估 |
| 3.4.4 E6F6人源化抗體的成藥性評估 |
| 3.4.5 E6F6人源化抗體與HBsAg免疫復(fù)合物的結(jié)構(gòu)特征分析 |
| 3.4.6 E6F6人源化抗體162 Fc改造對吞噬的影響 |
| 3.5 第二部分小結(jié) |
| 第四章 討論 |
| 4.1 鼠源抗體人源化方法 |
| 4.2 抗體CDR的劃分和人源化模板的選擇 |
| 4.3 FR區(qū)人源化點(diǎn)突變規(guī)則 |
| 4.4 E6F6人源化抗體在小鼠體內(nèi)的清除速率 |
| 4.5 E6F6人源化抗體huAb1和huAb3在食蟹猴體內(nèi)的半衰期 |
| 4.6 抗原-抗體復(fù)合物電鏡觀察與納米流式檢測 |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在校期間的科研成果 |
| 致謝 |
（4）湖北省HIV患者體內(nèi)人類Pegivirus病毒的進(jìn)化和動力學(xué)分析以及E2來源多肽的抗病毒活性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 1 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 HPgV病毒的發(fā)現(xiàn)和命名 |
| 1.2 HPgV的基因組結(jié)構(gòu) |
| 1.2.1 非編碼區(qū) |
| 1.2.2 結(jié)構(gòu)蛋白區(qū) |
| 1.2.3 非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū) |
| 1.3 HPgV的生活周期 |
| 1.3.1 HPgV的細(xì)胞嗜性 |
| 1.3.2 HPgV的初始復(fù)制位點(diǎn) |
| 1.3.3 HPgV的細(xì)胞受體 |
| 1.4 HPgV病毒實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和檢測方法 |
| 1.5 HPgV流行病學(xué) |
| 1.5.1 HPgV的流行情況 |
| 1.5.2 HPgV的傳播途徑 |
| 1.5.3 HPgV的基因型 |
| 1.6 HPgV的致病能力 |
| 1.6.1 HPgV的非致病性 |
| 1.6.2 HPgV與非霍奇金淋巴瘤(NHL) |
| 1.6.3 HPgV與肝炎相關(guān)性再生障礙性貧血(HAAA) |
| 1.7 HPgV與HIV之間的相互關(guān)系 |
| 1.7.1 HPgV共感染現(xiàn)象 |
| 1.7.2 HPgV抑制HIV感染的機(jī)制 |
| 1.8 HPgV的進(jìn)化特點(diǎn) |
| 1.8.1 起源假說 |
| 1.8.2 HPgV的突變速度 |
| 1.8.3 HPgV基因組的保守性 |
| 1.8.4 HPgV的遺傳重組 |
| 1.9 RNA病毒的遺傳進(jìn)化 |
| 1.8.1 突變(mutation) |
| 1.8.2 重組(recombination) |
| 1.8.3 選擇(selection) |
| 1.8.4 遺傳漂變(genetic drift) |
| 1.8.5 遷移(migration) |
| 1.8.6 “準(zhǔn)種”理論(quasispecies) |
| 1.8.7 研究RNA病毒進(jìn)化的意義 |
| 2 湖北地區(qū)HIV感染者體內(nèi)HPgV病毒遺傳多樣性及個體特異性病毒譜系形成的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)耗材 |
| 2.2.3 常用試劑 |
| 2.2.4 試劑盒 |
| 2.2.5 溶液配制 |
| 2.2.6 質(zhì)粒、菌種和細(xì)胞系 |
| 2.2.7 引物 |
| 2.2.8 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.9 數(shù)據(jù)分析 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.1 標(biāo)本采集與病毒檢測 |
| 2.3.2 系統(tǒng)發(fā)育分析與基因分型 |
| 2.3.3 種群動態(tài)分析 |
| 2.3.4 溯祖分析 |
| 2.3.5 選擇壓力分析 |
| 2.4 討論 |
| 3 HIV感染者體內(nèi)HPgV病毒遺傳重組 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.1 標(biāo)本收集和病人情況 |
| 3.3.2 系統(tǒng)發(fā)育分析和重組檢測 |
| 3.3.3 RNA二級結(jié)構(gòu)預(yù)測 |
| 3.4 討論 |
| 4 HPgV病毒E2蛋白抗原位點(diǎn)序列多樣性分析及膜蛋白多肽對HIV的抑制作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.3.1 抗原位點(diǎn)系統(tǒng)進(jìn)化分析 |
| 4.3.2 抗原位點(diǎn)選擇壓力分析 |
| 4.3.3 HPgV膜蛋白多肽抑制HIV-1的活性 |
| 4.3.4 多肽對HIV-1的抑制可能發(fā)生在病毒進(jìn)入階段 |
| 4.3.5 改造多肽的抑制活性 |
| 4.4 討論 |
| 總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 博士期間發(fā)表和待發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（5）廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文對照表 |
| 前言 |
| 第一部分 臨床切實(shí)可行的兩種基因分型法（部分基因測序法與探針雜交法）的準(zhǔn)確性比較 |
| 材料 |
| 方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第二部份 廣州地區(qū)丙型肝炎患者的 HCV 分子流行病研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士學(xué)位期間參與撰寫的文章 |
| 致謝 |
（6）合并感染HIV對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 血樣來源 |
| 1.1.2 主要試劑與儀器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 HCV基因分型 |
| 1.2.2 HCV E2/NS1 包膜區(qū)基因變異性 |
| 1.3 統(tǒng)計分析 |
| 2 結(jié) 果 |
| 2.1 基本情況 |
| 2.2 10株不同來源的HCV E2/NS1包膜區(qū)基因SSCP結(jié)果 (圖1) |
| 2.3 2組間HCV E2/NS1 |
| 2.4 2組間HCV E2/NS1包膜區(qū)內(nèi)HVR-1氨基酸序列比較 |
| 2.5 2組間的系統(tǒng)發(fā)生樹 (圖2) |
| 3 討 論 |
（7）山東煙臺地區(qū)HCV基因分型研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 材料與方法 |
| 1.1 標(biāo)本來源 |
| 1.2 主要儀器和試劑 |
| 1.2.1 主要儀器 |
| 1.2.2 主要試劑和耗材 |
| 1.3 基因分型方法 |
| 1.4 RT-PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物的測序 |
| 1.4.1 RNA提取 |
| 1.4.2 逆轉(zhuǎn)錄(RT) |
| 1.4.3 PCR擴(kuò)增 |
| 1.4.4 序列測定 |
| 1.4.4.1 酶純化 |
| 1.4.4.2 測序反應(yīng) |
| 1.4.4.3 乙醇純化 |
| 1.4.4.4 上機(jī)測序 |
| 1.5 HCV基因序列的遺傳進(jìn)化樹分析 |
| 1.6 HCV基因分型與肝臟損傷的關(guān)系 |
| 第二章 結(jié)果 |
| 2.1 HCV基因分型 |
| 2.2 HCV基因型遺傳進(jìn)化樹 |
| 2.3 HCV基因型與肝臟損傷的關(guān)系 |
| 第三章 討論 |
| 第四章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（8）丙型肝炎病毒5’非編碼區(qū)及非結(jié)構(gòu)蛋白5A的基因變異及其臨床意義（論文提綱范文）
| 中文摘要 Abstract 符號說明 第一部分 |
| 基因芯片法檢測丙型肝炎病毒的5’非編碼區(qū) |
| #13的基因變異及意義 前言 材料和方法 結(jié)果 討論 結(jié)論 參考文獻(xiàn) 第二部分 |
| 丙型肝炎病毒5’非編碼區(qū)的基因序列分析及意義 前言 材料和方法 結(jié)果 討論 結(jié)論 附圖 參考文獻(xiàn) 第三部分 |
| 丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)區(qū)5A的基因變異 |
| #75及與干擾素應(yīng)答的相關(guān)性 前言 材料和方法 結(jié)果 討論 結(jié)論 附圖 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀博士期間發(fā)表的論文 學(xué)位論文評閱及答辯情況表 英文文章1 英文文章2 |
（9）合并HIV感染對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因的影響（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 引物設(shè)計 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 HCV基因型在兩組間構(gòu)成 |
| 3.2 本次研究中所有HCV病毒株的基因分型結(jié)果 |
| 3.3 兩組間HCV基因型的構(gòu)成 |
| 3.4 HCVEZN/51包膜區(qū)的目的片段的電泳圖 |
| 3.5 10株不同來源的HCVEZ/N51包膜區(qū)基因的SSCP的結(jié)果 |
| 3.6 兩組間HCVEZN/51包膜區(qū)核昔酸序列的比較 |
| 3.7 兩組間HCVEZ閃ls包膜區(qū)內(nèi)HVR-1氨基酸序列的比較 |
| 3.8 用DNAMAN和MEGA4.1構(gòu)建兩組間的系統(tǒng)發(fā)生樹 |
| 4 討論 |
| 4.1 HCV基因型在兩組間構(gòu)成的比較 |
| 4.2 兩組間SSCP條帶數(shù)的比較 |
| 4.3 兩組間E2/NS1包膜區(qū)核苷酸序列的比對 |
| 4.4 兩組間HVR-1區(qū)氨基酸序列的比對 |
| 4.5 兩組間該區(qū)基因的系統(tǒng)發(fā)生樹分析 |
| 4.6 本研究的創(chuàng)新之處及需要進(jìn)一步研究的方向 |
| 5 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 HCV合并HIV感染的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 個人簡歷、攻讀碩士期間發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（10）HCV感染者第一高變區(qū)及部分膜區(qū)序列變異的分子進(jìn)化分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 標(biāo)本來源 |
| 1.2 試劑與儀器 |
| 1.3 引物設(shè)計 |
| 1.4 RNA抽提、逆轉(zhuǎn)錄、PCR反應(yīng) |
| 1.5 序列測定及同源性分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 PCR檢測 |
| 2.2 不同獻(xiàn)血者體內(nèi)HCV-HVR1基因片段的分子進(jìn)化分析 |
| 2.3 獻(xiàn)血人群中不同HCV感染者體內(nèi)部分膜區(qū)片段 (含HVR1基因) 的分子進(jìn)化分析 |
| 3 討論 |
四、獻(xiàn)血者體內(nèi)攜帶的HCV包膜區(qū)基因同源性分析（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]核酸檢測技術(shù)在基層血站的應(yīng)用與質(zhì)量控制探討[D]. 楊娜娜. 東南大學(xué), 2020(01)
- [2]云南紅河州高危人群HIV及其共感染的HCV/HPgV-2病毒的分子流行病學(xué)研究[D]. 李天一. 軍事科學(xué)院, 2019(09)
- [3]快速抗體人源化平臺的建立及乙型肝炎病毒人源化抗體的成藥性研究[D]. 周兵. 廈門大學(xué), 2018(06)
- [4]湖北省HIV患者體內(nèi)人類Pegivirus病毒的進(jìn)化和動力學(xué)分析以及E2來源多肽的抗病毒活性研究[D]. 吳浩明. 武漢大學(xué), 2016(06)
- [5]廣州地區(qū)丙型肝炎患者的HCV基因型相關(guān)研究[D]. 肖桂娥. 廣州醫(yī)科大學(xué), 2014(03)
- [6]合并感染HIV對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因影響[J]. 黃璜,李軍,張衛(wèi)東. 中國公共衛(wèi)生, 2012(06)
- [7]山東煙臺地區(qū)HCV基因分型研究[D]. 張國英. 青島大學(xué), 2011(06)
- [8]丙型肝炎病毒5’非編碼區(qū)及非結(jié)構(gòu)蛋白5A的基因變異及其臨床意義[D]. 張立新. 山東大學(xué), 2011(12)
- [9]合并HIV感染對1b型HCV E2/NS1包膜區(qū)基因的影響[D]. 李軍. 鄭州大學(xué), 2011(04)
- [10]HCV感染者第一高變區(qū)及部分膜區(qū)序列變異的分子進(jìn)化分析[J]. 張向穎,修冰水,張賀秋,祁自柏,安媛,邱艷. 中國輸血雜志, 2010(11)