一、噬菌體展示肽在血管導(dǎo)向治療方面的應(yīng)用（論文文獻綜述）
孟祥州[1]（2021）在《多肽藥物篩選及基于腫瘤細胞膜的多肽運載體系的構(gòu)建與應(yīng)用》文中研究表明多肽通常指不超過50個氨基酸構(gòu)成的肽鏈,分子量介于小分子和蛋白之間。多肽在結(jié)構(gòu)和功能上具有和蛋白類似的性質(zhì),例如,很多激素,生長因子,神經(jīng)遞質(zhì)就是多肽類物質(zhì)。多肽作為功能分子,具有合成工藝簡單、成本低、安全性高等優(yōu)點,因此在藥物研發(fā)領(lǐng)域引起了廣大研究者的關(guān)注。本論文針對腫瘤和感染性疾病的熱門靶點蛋白進行了多肽藥物的篩選和開發(fā),以期獲得具有臨床應(yīng)用潛能的多肽藥物。腫瘤免疫療法由于其卓越的臨床治療效果,已經(jīng)成為腫瘤治療的重要的手段之一。腫瘤免疫治療包括過繼性細胞治療,腫瘤疫苗和針對免疫檢查點（immune checkpoint）的生物治療等等,其中針對免疫檢查點之一的程序性死亡受體-1/程序性死亡分子配體-1（Programmed cell death protein-1/Programmed cell death ligand-1,PD-1/PD-L1）的抗體治療在臨床上取得了巨大的成功。盡管如此,由于抗體的高成本以及高的免疫原性,需要我們尋找更多能夠替代抗體的生物分子。我們通過細菌表面展示技術(shù)篩選獲得了 PD-1特異結(jié)合多肽,并對其阻斷PD-1/PD-L1信號通路的可能性進行了檢測。具體來說,我們運用細菌表面展示技術(shù)從隨機多肽庫中獲得6條能與PD-1結(jié)合的多肽。序列比對發(fā)現(xiàn)兩類保守序列DDCWXD（X代表:D/E/H）和DGW。經(jīng)ELISA和流式細胞術(shù)檢測,與PD-1結(jié)合效果最佳的多肽被命名為PBP-1。實驗證明了該多肽與PD-1的結(jié)合具有特異性以及阻斷PD-1/PD-L1相互作用的功能。在以上結(jié)果初步顯示PBP-1多肽可以作為拮抗PD-1的候選分子,參與腫瘤的免疫治療。2019 年底至今,COVID-19（Corona Virus Disease 2019）全球迅速蔓延,造成了全球發(fā)病率和死亡率的上升,給社會帶來了巨大的動亂和經(jīng)濟損失。文獻報道,COVID-19病毒進入人體細胞是由病毒細胞膜表面的S（Spike）蛋白與人體細胞中的ACE-2（Angiotensin converting enzyme 2）受體介導(dǎo)的。因此,阻斷S蛋白與ACE-2受體的結(jié)合的藥物有可能遏制COVID-19的蔓延。基于此,我們首次運用細菌表面展示技術(shù)對ACE-2分子進行特異性結(jié)合多肽的篩選。經(jīng)過多輪篩選最終得到12條與ACE-2特異性結(jié)合的多肽,經(jīng)序列比對沒有發(fā)現(xiàn)這些多肽的保守序列。通過流式驗證并選擇與ACE-2結(jié)合效果最佳的多肽,命名為TAP-1。利用熒光ELISA的方法進一步驗證了 TAP-1與ACE-2結(jié)合的特異性。通過競爭實驗和假病毒試驗,確認了 TAP-1多肽可以與S蛋白競爭結(jié)合ACE-2且具有濃度依賴性。以上結(jié)果得出TAP-1多肽可以有潛力阻斷COVID-19進入細胞,新冠肺炎的治療提供新的治療方案。由于多肽本身具有半衰期短和易降解等特點,因此限制了其臨床的廣泛應(yīng)用。為了解決這一問題,本研究結(jié)合納米遞送技術(shù),設(shè)計并開發(fā)了利用腫瘤細胞膜納米載藥體系運輸多肽藥物。我們構(gòu)建了基于腫瘤細胞膜的多肽傳遞系統(tǒng)（SPIO NP@M-P）,用于運載課題組前期獲得針對PD-L1的拮抗性多肽TPP1。實驗證明,H460細胞膜囊泡具有優(yōu)越的同源靶向能力,可以介導(dǎo)納米囊泡在腫瘤部位的富集。該系統(tǒng)中的SPIONPs（Superparamagnetic Iron Oxide）可以用于腫瘤磁共振成像（Magnetic Resonance Imaging）,便于對多肽藥物的腫瘤治療效果進行監(jiān)控。表面修飾TPP1多肽的SPIO NP@M-P不但仍然具有阻斷PD-LI和PD-1相互作用的能力,而且具有了較長的半衰期（是游離多肽的60倍）。SPIO NP@M-P中含有的MMP2酶（Metallomatrix protease 2）的底物肽有助于TPP1肽在腫瘤微環(huán)境的釋放。腫瘤細胞膜的SPIO NP@M-P多肽傳遞系統(tǒng)的成功構(gòu)建,為多肽藥物的臨床轉(zhuǎn)化提供了新途徑。綜上所述,本研究通過細菌表面展示技術(shù)對PD-1和ACE-2的兩個靶點進行多肽篩選,分別得到結(jié)合效果較好的多肽序列,并驗證了多肽具有較好的分子靶向能力以及阻斷功能。在多肽應(yīng)用方面,成功構(gòu)建了基于腫瘤細胞膜的多肽傳遞系統(tǒng)（SPIO NP@M-P）,延長多肽半衰期,同時賦予了多肽在腫瘤中的診療功能,為多肽提供臨床轉(zhuǎn)化的可能性。
鄭磊[2]（2020）在《利用噬菌體展示技術(shù)篩選靶向胰腺癌細胞肽段并利用凋亡—靶向融合肽段抑制胰腺癌生長》文中研究說明背景:胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）在消化系統(tǒng)中屬于惡性程度很高的腫瘤。早期胰腺癌由于其非典型的臨床癥狀以及早期篩查指標(biāo)缺乏特異性,通常難以診斷,從而失去了進行根治性手術(shù)切除的機會。而晚期胰腺癌對臨床放射療法和化學(xué)療法的敏感性較低,而且放化療副作用對病人身體影響較大,胰腺癌患者的預(yù)后很差。我們想通過提高抗腫瘤藥物的靶向性,從而提高抗腫瘤藥物對胰腺癌的療效并降低對機體正常細胞的損傷。在靶向性問題上,我們利用噬菌體展示技術(shù)進行篩選。在抗腫瘤藥物上,我們選擇了KLA（（KLAKLAK）2）凋亡肽作為治療肽段,KLA凋亡肽段與化學(xué)治療藥物相比,具有分子量小、腫瘤穿透能力強、免疫原性低、生物相容性好、毒性作用小、易于合成和修飾等優(yōu)點[12-13],是理想的抗腫瘤藥物。但KLA凋亡肽很難透過細胞膜,無法進入細胞后就不能破壞線粒體膜以誘導(dǎo)細胞凋亡[16]。因此本研究旨在通過利用噬菌體展示技術(shù),篩選出能特異性作用于胰腺癌細胞的靶向肽段。利用該肽段的靶向性,實現(xiàn)對胰腺癌的影像學(xué)診斷。并利用該肽段結(jié)合凋亡肽段KLA,以期實現(xiàn)融合肽段對胰腺癌細胞具有靶向性并對胰腺癌細胞及腫瘤的生長有抑制作用,并對其相關(guān)作用機制進行探討。方法:本研究選取人源胰腺癌細胞系PANC-1作為靶細胞。首先,我們利用噬菌體展示技術(shù)篩選出靶向PANC-1細胞的噬菌體。接著,將篩選到的噬菌體進行擴增后、DNA提取,然后測序。通過與試劑盒提供的簡要遺傳密碼表進行比對,推算出氨基酸序列。利用得到的氨基酸序列合成靶向肽段HMNPWSD,用異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC）標(biāo)記,并與PANC-1細胞共孵育后,利用細胞免疫熒光實驗及流式細胞儀對其靶向性進行了評估。然后,將靶向肽段HMNPWSD與KLA肽段進行了共軛,并再次利用細胞免疫熒光實驗及小動物活體成像系統(tǒng)（In vivo imaging system,IVIS）對融合肽段HMNPWSD-KLA進行了體外細胞及體內(nèi)腫瘤的靶向性評估實驗。我們通過MTT法檢測了HMNPWSD-KLA融合肽段對PANC-1細胞增殖功能的影響;并利用流式細胞凋亡分析、Western Blot以及線粒體膜電位評估等方法對其抑制PANC-1細胞生長機制進行了研究。最后我們建立了荷載PANC-1腫瘤的裸鼠模型,然后,通過動物實驗觀察了融合肽段HMNPWSD-KLA在體內(nèi)對PANC-1腫瘤生長影響。并通過裸鼠器官組織切片及相關(guān)血液指標(biāo)對融合肽段HMNPWSD-KLA的副作用進行了評估。結(jié)果:我們通過噬菌體展示技術(shù)篩選到的靶向PANC-1細胞的肽段HMNPWSD,細胞免疫熒光實驗及流式細胞熒光分析實驗結(jié)果驗證了其對PANC-1細胞具有特異性。細胞免疫熒光及IVIS實驗結(jié)果證實了融合肽段HMNPWSD-KLA對PANC-1細胞及腫瘤的靶向性。MTT法證實了融合肽段對PANC-1細胞的生長增殖抑制作用。流式細胞凋亡分析、Western Blot以及線粒體膜電位評估等結(jié)果證實了對其抑制PANC-1細胞生長機制是通過破壞細胞線粒體,誘導(dǎo)細胞凋亡。利用融合肽段HMNPWSD-KLA作用于荷載PANC-1腫瘤的裸鼠模型實驗結(jié)果證明了融合肽段對PANC-1腫瘤生長起到明顯抑制作用。此外,通過檢測裸鼠的器官組織切片及血液學(xué)參數(shù)證明融合肽段對裸鼠機體影響不大。結(jié)論:融合肽段HMNPWSD-KLA對胰腺癌細胞系PANC-1細胞及腫瘤具有靶向特異性,而且該融合肽段通過破壞PANC-1細胞線粒體,誘導(dǎo)細胞凋亡,對細胞及腫瘤的生長起到了明顯抑制作用。此外,該融合肽段對于裸鼠重要器官及血液學(xué)參數(shù)影響不大。
郭超[3]（2020）在《體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)篩選人髓樣乳腺癌細胞Bcap-37特異性結(jié)合肽》文中指出目的:利用噬菌體展示技術(shù)體內(nèi)篩選法獲得人髓樣乳腺癌細胞Bcap-37特異性結(jié)合肽,為乳腺癌早期診斷提供分子靶向探針。方法:制備人髓樣乳腺癌Bcap-37細胞荷瘤裸鼠模型,采用噬菌體環(huán)七肽庫進行3輪體內(nèi)篩選。免疫組化檢測篩選過程中噬菌體在腫瘤及正常組織中的分布情況。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）鑒定單克隆噬菌體對Bcap-37細胞的親和力。提取陽性單克隆噬菌體DNA并測序,選取重復(fù)率高的序列合成多肽,制備光學(xué)分子探針。MTT法檢測多肽及光學(xué)分子探針對Bcap-37細胞的毒性。用熒光倒置顯微鏡術(shù)和流式細胞術(shù)鑒定光學(xué)分子探針與Bcap-37細胞的特異性。最后在荷瘤裸鼠模型體內(nèi)驗證其對乳腺移植瘤的特異性和靶向性。結(jié)果:1經(jīng)過三輪體內(nèi)篩選,獲得了特異性結(jié)合Bcap-37細胞異體移植瘤的噬菌體。隨著每輪篩選,噬菌體的回收率不斷提高,第三輪的回收率是第一輪的107.2倍。2免疫組化結(jié)果顯示,隨著篩選輪數(shù)的增加,腫瘤組織中結(jié)合的噬菌體數(shù)依次增加,腫瘤組織中噬菌體結(jié)合數(shù)明顯高于正常組織。腫瘤組織切片掃描圖像的吸光度（A）值均較正常組織高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。3經(jīng)ELISA鑒定,隨機選擇的50個噬菌體克隆中有22個是陽性單克隆噬菌體（親和力≥2）。4陽性單克隆噬菌體DNA序列分析結(jié)果顯示,重復(fù)出現(xiàn)兩次及以上的氨基酸序列有4條,CSPLNTRFC的重復(fù)率最高,而且與數(shù)據(jù)庫中已知的氨基酸序列均無同源性,被命名為BCSP1。5化學(xué)合成多肽（BCSP1）、FITC標(biāo)記的多肽（FITC-BCSP1）及FITC標(biāo)記的對照肽（FITC-svBCSP1）,通過質(zhì)譜鑒定,所合成肽的純度≥98%。6 MTT結(jié)果顯示:導(dǎo)向肽BCSP1、光學(xué)分子探針FITC-BCSP1及FITC-svBCSP1在不同濃度下對Bcap-37細胞的增殖及活性基本無影響。7光學(xué)分子探針FITC-BCSP1和FITC-svBCSP1分別與Bcap-37細胞孵育后,在熒光倒置顯微鏡下觀察到,FITC-BCSP1與Bcap-37細胞特異性結(jié)合,而FITCsvBCSP1與Bcap-37細胞基本不結(jié)合。8流式細胞術(shù)結(jié)果:根據(jù)Bcap-37細胞空白組檢測結(jié)果設(shè)置陰性閾值為0.18%。經(jīng)FITC-BCSP1孵育的細胞中,Bcap-37細胞的陽性細胞百分比為94.53±2.26%明顯高于其它細胞（P<0.05）,表明FITC-BCSP1能與Bcap-37細胞特異性結(jié)合。9將200μL濃度為280μmol/L的光學(xué)分子探針（FITC-BCSP1）從尾靜脈注入Bcap-37細胞荷瘤裸鼠模型體內(nèi)2.5h后,FITC-BCSP1能明顯富集在乳腺移植瘤組織,活體腫瘤區(qū)的熒光信號強度達到最強（灰度值78.68）。離體腫瘤組織可檢測到較強熒光信號（灰度值80.43）,正常組織除膽囊外幾乎看不到熒光信號。結(jié)論:本實驗通過噬菌體展示體內(nèi)篩選獲得了能夠特異性結(jié)合人髓樣乳腺癌細胞Bcap-37的多肽BCSP1（CSPLNTRFC）,并在體外和體內(nèi)初步驗證了其特異性及靶向性,為乳腺癌早期診斷的研究奠定了基礎(chǔ)。
沈志偉[4]（2020）在《多肽自組裝超分子的生物功能化材料設(shè)計及其應(yīng)用》文中提出自組裝超分子生物材料相較于傳統(tǒng)高分子材料具有眾多優(yōu)勢,包括結(jié)構(gòu)功能可調(diào)性、響應(yīng)性、可逆性,以及良好的生物相容性。蛋白質(zhì)是生命體所有活動的執(zhí)行分子,利用多肽鏈來構(gòu)建自組裝超分子生物材料,除了具備一般超分子材料的優(yōu)點,也能最大化地實現(xiàn)其活性與功能,具有豐富的生物應(yīng)用場景,為新型生物材料的開發(fā)提供了無限可能。然而,盡管已有了很大進展,人們?nèi)匀粚Χ嚯淖越M裝超分子體系的設(shè)計、結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系缺乏規(guī)律性的認識。本論文聚焦于多肽自組裝超分子的生物功能化材料的設(shè)計及應(yīng)用,希望能為制備更安全有效的生物材料提供一些解決方案。論文的主要研究內(nèi)容概述如下。第一部分:設(shè)計了靶向細菌膜的自組裝抗菌肽。抑菌肽作為天然的抗菌分子,可作用于微生物磷脂膜,因其能抵抗細菌產(chǎn)生耐藥性而備受關(guān)注。其中,聚合陽離子肽能與病原菌的負電微生物膜相互作用,導(dǎo)致細菌死亡。但共價聚合陽離子肽成本高、效率低,對細菌磷脂膜的靶向作用和破壞作用也不強。本文基于多肽自組裝超分子,開發(fā)了一種可增強抗菌活性的抗菌肽。我們在六價陽離子肽的序列中插入具有自組裝功能的雙苯丙氨酸（FF）的核心基序,得到新型抑菌肽KRRFFRRK（FF8）。FF8在中性環(huán)境下表面具有大量的正電荷,能穩(wěn)定地溶于水中而不發(fā)生聚集。當(dāng)遇到病原菌帶負電微生物膜時,FF8通過長程靜電力吸附到細菌膜上,多肽表面電荷被屏蔽而發(fā)生去質(zhì)子化,暴露出疏水的自組裝核心序列,響應(yīng)性的誘發(fā)FF8在微生物膜上自組裝成多肽納米纖維。FF8多肽纖維的張力導(dǎo)致膜發(fā)生無法修復(fù)的破裂,由此對病原菌產(chǎn)生致命性傷害。通過對比FF8與無自組裝序列的六價陽離子八肽GG8（KRRGGRRK）,FF自組裝基序的嵌入能提高抑菌肽近32倍的抗菌性能。這種全新的自組裝抗菌肽的設(shè)計思路與理論機制,為新型抗菌肽的開發(fā)提供新的可能,并能進一步推動抗菌肽的應(yīng)用。第二部分:設(shè)計了具自由基清除能力并可生物降解的多肽自組裝水凝膠用于心肌細胞的三維培養(yǎng)。心肌缺血再灌注會產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）,從而造成心肌組織的持續(xù)性損傷。清除心肌組織中的過量ROS將減少組織損害,但全身性ROS的清除會引起代謝紊亂。傳統(tǒng)的具自由基清除功能的高聚物水凝膠可定點清除局部過量ROS,但存在著不明確的毒性、難以體內(nèi)降解等問題。在本文中,利用多肽自組裝序列結(jié)合具有活性的巰基短肽,得到的五肽分子ECAFF（ECF-5）可自組裝成超分子水凝膠,具有很強的自由基清除能力并可生物降解。ECF-5多肽水凝膠不影響心肌細胞的正?；盍?且能顯著減少ROS對細胞造成的損傷。另外,多肽水凝膠具有良好的生物降解性能,避免難降解水凝膠對毛細血管造成栓塞的風(fēng)險。ECF-5水凝膠高效的ROS清除能力使其能用于治療因活性氧引起的局部組織損傷,并且可用作心肌細胞的三維培養(yǎng),使得心肌細胞在短時間內(nèi)生長成組織樣細胞球。ECF-5水凝膠的這些能力使其在未來的心肌組織工程領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。第三部分:基于多肽自組裝超分子纖維構(gòu)建了特異性吸附外泌體的微流控芯片。外泌體是由細胞主動分泌到胞外環(huán)境中的完整的磷脂囊泡,攜帶了包括蛋白質(zhì)和核酸在內(nèi)的眾多生物活性分子,含有大量母細胞的信息,參與和其他細胞交流的過程。但當(dāng)前外泌體的分離手段極為有限,獲得的不均質(zhì)外泌體缺乏穩(wěn)定性,限制了其在液體活檢中的應(yīng)用。我們利用噬菌體展示技術(shù)淘選得到能與外泌體標(biāo)志蛋白CD63分子特異性親和的多肽（D17）。在此基礎(chǔ)上,設(shè)計了具有自組裝功能的、包含D17序列的多肽Fmoc-FH13。多肽Fmoc-FH13自組裝后形成纖維,將CD63特異性結(jié)合表位（D17）展示在多肽纖維表面。這種自組裝超分子聚合平臺,放大了CD63親和表位,提高了結(jié)合效率。該多肽纖維能響應(yīng)pH進行CD63陽性外泌體的高效分離。我們還將CD63特異親和的多肽纖維固定在微流控芯片內(nèi)部,分離捕獲CD63陽性外泌體,通過ELISA檢測腫瘤細胞外泌體的PD-L1含量。
林平[5]（2019）在《噬菌體展示技術(shù)篩選雙環(huán)肽配體》文中研究表明雙環(huán)肽是非常具有吸引力的骨架分子,可以用于設(shè)計有效的蛋白結(jié)合配體以及新型的多肽治療藥物。雙環(huán)肽主要包括自然界中富含二硫鍵的多肽以及通過有機小分子交聯(lián)的合成肽。雖然近年來基于自然界富含二硫鍵的多肽骨架開發(fā)了許多蛋白結(jié)合配體,但是由于天然多肽序列的保守性,因此在針對新的靶標(biāo)蛋白發(fā)展結(jié)合配體時具有一定的難度。而體外通過有機小分子交聯(lián)的雙環(huán)肽的結(jié)構(gòu)剛性隨著序列長度的增加而顯著降低,特別是那些缺乏α螺旋、β折疊二級結(jié)構(gòu)以及疏水核心的多肽,這不利于得到與蛋白具有高親和力的雙環(huán)肽配體。因此,具有有序的空間結(jié)構(gòu)并且耐受序列改造的新型雙環(huán)肽骨架分子對于設(shè)計有效的蛋白結(jié)合配體具有重要的意義。本論文通過噬菌體展示技術(shù)針對靶標(biāo)蛋白MDM2篩選后得到了一類具有有序但不規(guī)則二級結(jié)構(gòu)的雙環(huán)肽骨架分子。這些多肽具有保守的半胱氨酸/脯氨酸框架結(jié)構(gòu),可以指導(dǎo)多肽氧化折疊形成具有一個310螺旋和四個不規(guī)則轉(zhuǎn)角的熔環(huán)型雙環(huán)肽。本論文共分為三章,主要內(nèi)容如下:第一章:首先介紹了多肽在靶向蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用界面中的潛力、環(huán)肽限制性結(jié)構(gòu)帶來的優(yōu)勢以及環(huán)肽藥物的發(fā)展。其次綜述了自然界富含二硫鍵的多肽的結(jié)構(gòu)特點以及藥理活性。然后主要介紹了兩種發(fā)展新型環(huán)肽結(jié)合配體的方法:基于自然界富含二硫鍵的多肽骨架的表位嫁接;構(gòu)建噬菌體展示隨機肽庫針對感興趣的靶標(biāo)進行親和篩選。最后在相關(guān)研究背景基礎(chǔ)上提出本論文的研究思路和意義。第二章:通過噬菌體展示雙環(huán)肽庫（骨架序列:GCXCX5CX5C）針對靶標(biāo)蛋白MDM2進行篩選,實驗組單克隆菌落基因測序后得到了一組具有保守序列的多肽。隨機挑選部分序列進行體外合成,氧化折疊后通過熒光偏振競爭實驗測定雙環(huán)肽產(chǎn)物與MDM2的結(jié)合活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這組含有四個半胱氨酸的多肽可以精準(zhǔn)配對,生成單一的折疊產(chǎn)物（產(chǎn)率>90%）,雙環(huán)肽產(chǎn)物與靶標(biāo)蛋白的親和力都在納摩爾級別（Ki=62～1450 nM）。第三章:氨基酸突變實驗和NMR結(jié)構(gòu)表征揭示了序列中規(guī)則嵌入的脯氨酸對半胱氨酸殘基的精準(zhǔn)配對和最終剛性有序的雙環(huán)結(jié)構(gòu)具有關(guān)鍵作用。pb-13和pb-18的NMR實驗結(jié)果表明它們的結(jié)構(gòu)中含有一個310螺旋以及4個不規(guī)則的轉(zhuǎn)角。兩條雙環(huán)肽具有相似的構(gòu)象并展示出整體的結(jié)構(gòu)剛性,剛性結(jié)構(gòu)主要通過兩對二硫鍵,四個主鏈氫鍵和保守的脯氨酸共同驅(qū)動。最后,對本文的研究內(nèi)容進行了總結(jié)和展望。
王強[6]（2019）在《靶向FGFRs的新型抗腫瘤12肽的篩選及作用機制研究》文中認為目的:成纖維細胞生長子受體（FGFRs）屬于酪氨酸酶受體家族成員,其在多種腫瘤中存在異常的信號激活,故是抗腫瘤的重要靶點。在本研究中,我們采用噬菌體展示肽庫獲得靶向FGFRs的特異性結(jié)合肽,并探究其治療腫瘤的潛力和作用機制。方法:首先利用Ph.D.-12噬菌體展示肽庫,以FGFR2Ⅲc胞外段重組蛋白為靶標(biāo),經(jīng)過4輪淘選獲得高親和力的噬菌體,測序獲得具體的氨基酸序列,以此合成多肽。細胞增殖實驗初步檢測各親和肽的抑增殖能力,等溫滴定量熱法（ITC）檢測各肽與FGFR2Ⅲc胞外段的親和力,從中篩選獲得具有抗癌潛力和與FGFRs高親和力的T1肽。進一步的,細胞增殖實驗和克隆形成實驗檢測T1肽對多種癌細胞的抗增殖能力,裸鼠移植瘤實驗檢測T1肽抑制人胃癌移植瘤生長的情況。蛋白免疫印跡技術(shù)檢測T1對FGFRs及其下游信號通路磷酸化的影響;轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒灆z測T1肽處理后腫瘤細胞內(nèi)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平的影響;通過分子對接和分子動力學(xué)模擬進一步分析T1肽和FGFR的相互作用模式。結(jié)果:篩選獲得的T1肽與FGFR1-4的胞外段蛋白均具有高親和力。T1肽能顯著地抑制人胃癌細胞SGC-7901的增殖和克隆形成;并能抑制人胃癌細胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生長。T1肽能夠降低bFGF誘導(dǎo)的FGFRs及其下游信號通路的磷酸化,改變了包括Wnt等腫瘤相關(guān)信號通路在內(nèi)的多個基因的轉(zhuǎn)錄表達。分子對接及分子動力學(xué)模擬結(jié)果顯示T1肽與FGFR2的結(jié)合位點可能位于FGFR2的D2和D3的連接區(qū)（即FGFR2的活性口袋）。結(jié)論:從噬菌體隨機十二肽庫中成功篩選到了對FGFRs具有高親和力的T1肽。T1肽通過與FGFRs結(jié)合發(fā)揮抗腫瘤生長的作用。該研究將為開發(fā)FGFRs多肽類拮抗劑奠定研究基礎(chǔ)。
譚喬燕[7]（2018）在《FGFR1特異結(jié)合多肽的篩選與應(yīng)用》文中進行了進一步梳理當(dāng)前藥物靶點的篩選主要集中在細胞膜受體和代謝相關(guān)的酶類等。成纖維細胞生長因子受體（Fibroblast growth factor receptors,FGFRs）屬于酪氨酸激酶家族成員之一,具有自身酪氨酸磷酸化活性,與其相應(yīng)配體成纖維細胞生長因子（Fibroblast growth factors,FGFs）結(jié)合調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、遷移和存活等。目前已發(fā)現(xiàn)4種FGFR,即FGFR1-4。骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是關(guān)節(jié)軟骨老化、變性和繼發(fā)的軟骨增生,骨化為主要病理變化,以關(guān)節(jié)僵硬、功能障礙為主要臨床表現(xiàn)的一種慢性疾病,是嚴重影響人民生活質(zhì)量、國家經(jīng)濟和社會發(fā)展的重大問題。藥物治療主要圍繞緩解疼痛、抑制炎癥等方面,如口服甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥;物理治療主要對持續(xù)性的疼痛采取關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射透明質(zhì)酸、類固醇激素與富含血小板的血漿等,但這些治療難以從根本上緩解OA的進展。全關(guān)節(jié)置換是晚期OA患者僅有的有效治療措施,但到此階段,患者生活質(zhì)量已長時間受到嚴重影響,且并發(fā)癥多。因此,深入研究OA退變的機制,尋找和開發(fā)有效防治OA退變的藥物與措施是我國當(dāng)前健康領(lǐng)域重大的戰(zhàn)略需求。課題組前期利用他莫昔芬可誘導(dǎo)關(guān)節(jié)軟骨特異性敲除Fgfr1小鼠模型,通過分析3種關(guān)節(jié)炎模型(衰老模型、抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型（Antigen-induced arthritis,AIA）、創(chuàng)傷誘導(dǎo)的內(nèi)側(cè)半月板不穩(wěn)定模型（Destabilization of the Medial Meniscus,DMM）的關(guān)節(jié)病理及量化評分,結(jié)果顯示關(guān)節(jié)軟骨細胞敲除Fgfr1能夠延緩衰老模型、AIA模型導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)蛋白多糖的丟失并減輕DMM模型導(dǎo)致的關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu)破壞。同時發(fā)現(xiàn)拮抗FGFR1的小分子化合物GL-141可阻止DMM模型誘導(dǎo)的OA的病理發(fā)展,達到保護關(guān)節(jié)軟骨的目的。上述研究結(jié)果提示靶向抑制FGFR1可能是緩解或治療關(guān)節(jié)軟骨損傷和退變的新策略。當(dāng)前在全球范圍內(nèi),肺癌依然是人類癌癥致死的重要原因。統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)大于90%的肺癌患者都有吸煙史或曾長期使用煙草制品。不過,諸如氡氣,石棉,空氣污染物暴露以及慢性感染之類的其它因素也在肺癌的形成中起到一定的作用。另外,人們也發(fā)現(xiàn)了多種遺傳性及獲得性易感機制。根據(jù)組織病理學(xué)特點肺癌主要分為兩類,即小細胞型肺癌（Small-cell lung carcinomas,SCLC）和非小細胞型肺癌（Non small-cell lung carcinomas,NSCLC）。過去25年間對肺癌的診斷和治療有一些進步,但肺癌患者的預(yù)后仍不樂觀。目前標(biāo)準(zhǔn)治療方案對肺癌的效果十分有限,僅對一些極為局限的肺癌有較好的效果。有研究表明FGF2和FGFR1在多數(shù)腫瘤中高表達,并且與某些腫瘤的分期、分級、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。FGF2可通過自分泌和旁分泌作用刺激腫瘤細胞,FGFR1和FGF2結(jié)合后發(fā)生自身酪氨酸磷酸化,激活下游信號通路,從而促進腫瘤細胞增殖,促進腫瘤血管發(fā)生,對腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后起重要作用。提示靶向抑制Fgfr1可能是治療腫瘤的新策略。本課題以FGFR1為靶蛋白,通過噬菌體展示技術(shù)篩選與FGFR1特異結(jié)合的12肽,研究其在緩解或治療OA和延緩肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。經(jīng)過三輪“吸附-洗脫-擴增”淘選,得到3個與FGFR1特異結(jié)合的12肽序列。多肽與FGFR1結(jié)合,通過MAPK信號通路抑制FGFR1及下游ERK1/2信號。進一步在小鼠膝關(guān)節(jié)行DMM手術(shù),關(guān)節(jié)腔注射多肽R1-P1的小鼠關(guān)節(jié)軟骨退變和基質(zhì)丟失程度顯著性降低,提示R1-P1多肽可以緩解DMM模型導(dǎo)致的小鼠關(guān)節(jié)炎表型。另外,體外建立雞胚絨毛尿囊膜模型和Tube模型,R1-P2多肽處理可抑制血管發(fā)生。進一步在裸鼠皮下注射A549細胞建立在體成瘤模型,腹腔注射R1-P2多肽可顯著減小成瘤組織塊的體積和質(zhì)量,提示R1-P2多肽可通過抑制細胞增殖和血管發(fā)生抑制肺癌發(fā)展。因此,FGFR1特異結(jié)合多肽可能是調(diào)節(jié)FGFR1活性的新型抑制劑,為進一步研制用于治療OA和肺癌的高靶向性藥物奠定了實驗基礎(chǔ)。研究方法:第一部分:噬菌體展示技術(shù)篩選與FGFR1特異結(jié)合的多肽1.以FGFR1為靶蛋白,噬菌體展示技術(shù)篩選隨機12肽。2.ELISA檢測陽性單克隆與FGFR1的親和力及與FGF2的競爭洗脫率。3.基于氨基酸序列分析12肽的基本物理化學(xué)性質(zhì)（網(wǎng)址:http://www.expasy.org/tools/protparam.html）。第二部分:FGFR1特異結(jié)合多肽R1-P1緩解OA的進展1.ELISA和分子對接分析多肽R1-P1和FGFR1的親和力。2.IL-β1處理人股骨頭全層軟骨組織塊,番紅O染色檢測多肽R1-P1存在或不存在情況下胞外基質(zhì)著色情況。3.qRT-PCR分析小鼠原代軟骨細胞中多肽R1-P1對軟骨穩(wěn)態(tài)維持相關(guān)基因表達的影響。4.WB分析小鼠原代軟骨細胞中多肽R1-P1對FGFR1及其下游信號的影響。5.8周小鼠膝關(guān)節(jié)行DMM手術(shù),術(shù)后連續(xù)4,8,12周關(guān)節(jié)腔注射R1-P1肽,小鼠關(guān)節(jié)軟骨損傷組織學(xué)評估參考關(guān)節(jié)炎研究學(xué)會推薦方法進行評分。6.IHC和TUNTL法檢測術(shù)后連續(xù)8周關(guān)節(jié)腔注射R1-P1肽對胞外基質(zhì)代謝相關(guān)蛋白表達及軟骨細胞凋亡的影響。第三部分:FGFR1特異結(jié)合多肽R1-P2抑制肺癌進程1.ELISA和分子對接分析多肽R1-P2和FGFR1的親和力。2.WB分析A549和NCI-H460細胞中多肽R1-P2對FGFR1及其下游信號的影響。3.MTT法、TUNEL法、細胞劃痕法和Transwell小室法檢測多肽R1-P2對A549和NCI-H460細胞增殖、凋亡、遷移能力和侵襲能力的影響。4.在體建立裸鼠成瘤模型,腹腔注射多肽R1-P2檢測對裸鼠成瘤的影響。5.體外建立Tube模型和CAM模型,檢測多肽R1-P2對血管發(fā)生的影響。實驗結(jié)果:第一部分:噬菌體展示技術(shù)篩選到3個與FGFR1特異結(jié)合的多肽1.經(jīng)過三輪“淘選”,得到23個陽性噬菌體單克隆,進行DNA測序分析,得到3個與FGFR1結(jié)合的多肽序列,分別命名為多肽R1-P1,R1-P2和R1-P3。2.3種噬菌體單克隆與FGFR1均具有較高親和力,且FGF2對這三種噬菌體單克隆與FGFR1的結(jié)合具有競爭作用。3.多肽R1-P1相對分子質(zhì)量為1462.65,分子式為C68H91N19O16S1,不穩(wěn)定系數(shù)為33.87,理論等電點為6.92,總平均親水性為-1.350;多肽R1-P2相對分子質(zhì)量為1388.50,分子式為C63H89N17O19,不穩(wěn)定系數(shù)為25.22,理論等電點為6.74,總平均親水性為-0.883;多肽R1-P3相對分子質(zhì)量為1523.76,分子式為C72H106N20O17,不穩(wěn)定系數(shù)為89,理論等電點為8.60,總平均親水性為-1.483。第二部分:FGFR1新型抑制劑R1-P1多肽可緩解或治療OA1.多肽與FGFR1形成FGFR1/R1-P1復(fù)合物,總體評分和C評分分別是7.87和5。另外,根據(jù)RMSD圖,RMSD在70 ns后波動接近2.5 A,且R1-P1肽可通過氫鍵、靜電和疏水相互作用穩(wěn)定結(jié)合到FGFR1上。2.R1-P1肽與FGFR1有較高的結(jié)合OD450值,但與FGFR2和FGFR3的結(jié)合OD450值較低。隨著R1-P1肽濃度增加到50和100 mM,與FGFR1的親和力逐漸增強。另外,25和50 mM R1-P1多肽顯著抑制FGF2激活的磷酸化ERK1/2活性。3.20 ng/ml IL-1β處理人股骨頭軟骨全層組織塊,25和50 mM多肽R1-P1處理后能顯著減少胞外基質(zhì)丟失,并能顯著減少釋放到培養(yǎng)基中的GAG含量。4.IL-1β處理后,小鼠原代軟骨細胞中基質(zhì)分解代謝相關(guān)酶Adamts5和MMP13的mRNA表達水平顯著增高,基質(zhì)合成代謝相關(guān)基因Aggrecan和Col II的mRNA表達水平顯著降低,多肽R1-P1處理后恢復(fù)胞外基質(zhì)代謝相關(guān)基因穩(wěn)態(tài)的維持。同時,R1-P1肽可降低小鼠原代關(guān)節(jié)軟骨細胞MMP13的表達和增加Aggrecan的表達,并抑制FGFR1下游信號ERK1/2的磷酸化水平。5.DMM術(shù)后4周呈現(xiàn)OA樣表型,軟骨基質(zhì)丟失和關(guān)節(jié)軟骨破壞。DMM術(shù)后8周OA樣表型更加顯著。連續(xù)8,12周關(guān)節(jié)腔注射R1-P1肽可顯著緩解DMM所致關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)丟失和關(guān)節(jié)軟骨破壞。另外,H&E染色和滑膜組織學(xué)評分提示連續(xù)8,12周關(guān)節(jié)腔注射R1-P1肽可顯著緩解DMM所致滑膜炎癥。6.DMM術(shù)后8周關(guān)節(jié)軟骨組織增加基質(zhì)水解酶Adamts5和MMP13的表達,減少軟骨細胞基質(zhì)Aggrecan和Col II的合成,增加Col X陽性細胞比率和凋亡陽性細胞比率,連續(xù)8周關(guān)節(jié)腔注射R1-P1肽可顯著緩解DMM所致關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)Aggrecan和Col II丟失和減少基質(zhì)水解酶Adamts5和MMP13的表達,減少關(guān)節(jié)軟骨組織Col X陽性細胞比率和凋亡陽性細胞比率。第三部分:FGFR1特異結(jié)合多肽R1-P2通過抑制細胞增殖和血管發(fā)生抑制肺癌進展1.多肽R1-P2分別以A、B鏈結(jié)合位點與FGFR1蛋白胞外段特異結(jié)合,且親和力為1.538×10-77 M。2.FGF2激活A(yù)549和NCI-H460細胞的FGFR1活性及其下游ERK1/2信號的磷酸化水平,多肽R1-P2處理后顯著抑制FGFR1的磷酸化水平及ERK1/2的磷酸化水平。3.體外細胞實驗中,多肽R1-P2抑制FGFR1活性,包括降低A549和NCI-H460細胞的增殖活性,促進凋亡,并降低遷移能力和侵襲能力。4.裸鼠皮下注射A549細胞有顯著的腫瘤包塊形成,腹腔連續(xù)注射R1-P2多肽28 d顯著抑制腫瘤包塊的質(zhì)量和體積。5.多肽R1-P2抑制血管發(fā)生和降低腫瘤組織中α-SMA,SM22和CD31的表達。結(jié)論:1.噬菌體展示技術(shù)篩選得到3個與FGFR1有較高親和力的12肽序列。2.關(guān)節(jié)腔局部注射多肽R1-P1可緩解DMM引起的小鼠關(guān)節(jié)軟骨退變。3.腹腔注射多肽R1-P2可通過抑制細胞增殖和血管發(fā)生抑制肺癌進展。
苗婕,張瑞,楊曉峰[8]（2016）在《腫瘤導(dǎo)向肽的研究進展》文中認為惡性腫瘤是造成人類死亡的主要原因之一,其早期診斷和早期治療很關(guān)鍵。鑒于目前大多數(shù)抗癌藥物無法區(qū)分腫瘤細胞和正常細胞,研究有效的腫瘤特異性藥物輸送系統(tǒng)很有必要。應(yīng)用噬菌體展示技術(shù),已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一類能夠特異識別并結(jié)合到腫瘤細胞或腫瘤血管的多肽——腫瘤導(dǎo)向肽,它能夠靶向在體腫瘤,特異性地傳遞抗癌藥物、顯像劑、無機納米粒子、脂質(zhì)體等到達腫瘤組織。腫瘤導(dǎo)向肽作為目前研究的熱點,相比于抗體導(dǎo)向藥物具有相對分子質(zhì)量小、滲透性高、特異性高、成本低等諸多優(yōu)點,已經(jīng)在腫瘤靶向診斷和治療方面顯示出獨特的優(yōu)勢。本文將對腫瘤導(dǎo)向肽的研究進展進行較為全面的綜述。
張洋,張小明,劉剛[9]（2015）在《噬菌體肽庫技術(shù)篩選腫瘤靶向短肽的研究進展》文中指出噬菌體展示技術(shù)是一項特殊的基因重組表達技術(shù),亦是一種強大的篩選工具。1985年,Smith等成功地創(chuàng)立了噬菌體展示技術(shù);1990年,Scott等在噬菌體展示技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展并構(gòu)建了噬菌體展示隨機肽庫。噬菌體肽庫技術(shù)是一種新興的藥物發(fā)現(xiàn)工具[1],通過噬菌體隨機肽庫篩選獲得的肽可以作為分子載體運載藥物,起到生物導(dǎo)彈的功能。篩選的肽也可以直接與藥物靶點分子特異性結(jié)合,起到生物治療的作用。近年
郝葆青,車晨,李涵依[10]（2014）在《腫瘤靶向多肽生物淘選技術(shù)研究進展》文中研究表明生物淘選腫瘤或癌細胞的各種特異性靶向多肽是探索腫瘤早期診斷和治療方法的有效途徑.特異性靶向多肽既可用于探測腫瘤細胞表型特征,又可將其與抗癌藥物結(jié)合進行靶向治療,同時還可作為體內(nèi)腫瘤的成像制劑,用于腫瘤及腫瘤細胞微轉(zhuǎn)移的早期探測.噬菌體展示肽庫技術(shù)能夠有效地進行生物淘選或識別出與癌或腫瘤細胞某一靶點連結(jié)的,具有特異性、高親和性的多肽.近年來,利用體內(nèi)或體外噬菌體展示肽庫技術(shù)已成功地淘選或識別出一些癌細胞的靶向多肽.本文就這些方面的研究進展進行了簡要闡述,重點介紹了癌或腫瘤細胞靶向多肽的體外和體內(nèi)生物淘選最新技術(shù)和臨床應(yīng)用.
二、噬菌體展示肽在血管導(dǎo)向治療方面的應(yīng)用（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、噬菌體展示肽在血管導(dǎo)向治療方面的應(yīng)用（論文提綱范文）
（1）多肽藥物篩選及基于腫瘤細胞膜的多肽運載體系的構(gòu)建與應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 多肽在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用 |
| 1.1.1 多肽在腫瘤治療診斷領(lǐng)域中的概述 |
| 1.1.2 多肽在新冠病毒治療中的應(yīng)用 |
| 1.2 多肽藥物的設(shè)計與開發(fā) |
| 1.2.1 依據(jù)多肽-蛋白質(zhì)相互作用原理進行多肽設(shè)計 |
| 1.2.2 多肽藥物的設(shè)計方法 |
| 1.3 表面展示技術(shù)功能多肽篩選 |
| 1.3.1 噬菌體表面展示技術(shù) |
| 1.3.2 細菌表面展示技術(shù) |
| 1.3.3 酵母表面展示技術(shù) |
| 1.4 用于多肽運輸?shù)募毎ぜ{米載藥體系 |
| 1.4.1 細胞膜納米載藥體系 |
| 1.4.2 診療一體化納米載藥體系 |
| 1.5 課題設(shè)計思路與研究目標(biāo) |
| 第2章 PD-1多肽抑制劑的篩選 |
| 2.1 本章引言 |
| 2.2 實驗材料 |
| 2.2.1 實驗試劑 |
| 2.2.2 實驗設(shè)備 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.3 實驗操作流程 |
| 2.3.1 PD-1蛋白的生物素標(biāo)記,標(biāo)記效率及標(biāo)記后蛋白活性測定 |
| 2.3.2 從細菌隨機多肽庫中篩選PD-1特異性結(jié)合多肽 |
| 2.3.3 多肽理化性質(zhì)測定 |
| 2.3.4 游離多肽生理活性測定 |
| 2.3.5 ZDOCK模擬PD-1靶向多肽與PD-1結(jié)合位點 |
| 2.3.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理 |
| 2.4 實驗結(jié)果與討論 |
| 2.4.1 PD-1蛋白生物素標(biāo)記情況 |
| 2.4.2 磁珠分選與流式分選 |
| 2.4.3 PD-1結(jié)合多肽的保守序列分析 |
| 2.4.4 多肽理化性質(zhì) |
| 2.4.5 PBP-1多肽與PD-L1競爭結(jié)合PD-1 |
| 2.4.6 PBP-1多肽阻斷T細胞中PD-1與PD-L1結(jié)合 |
| 2.4.7 PBP-1多肽與PD-1的結(jié)合位點預(yù)測 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第3章 ACE-2多肽抑制劑的篩選 |
| 3.1 本章引言 |
| 3.2 實驗材料 |
| 3.3 實驗方法 |
| 3.3.1 從eCPX庫中篩選ACE-2特異性結(jié)合多肽 |
| 3.3.2 多肽理化性質(zhì)測定 |
| 3.3.3 游離多肽生理活性測定 |
| 3.3.4 ZDOCK模擬ACE-2靶向多肽與S結(jié)合位點 |
| 3.3.5 數(shù)據(jù)處理 |
| 3.4 實驗結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 從eCPX庫中篩選ACE-2特異性結(jié)合多肽 |
| 3.4.2 ACE-2結(jié)合多肽的保守序列分析 |
| 3.4.3 細菌表面多肽理化性質(zhì) |
| 3.4.4 游離多肽理化性質(zhì) |
| 3.4.5 TAP-1多肽的生理活性 |
| 3.4.6 多肽阻斷ACE-2的假病毒入侵細胞 |
| 3.4.7 TAP-1多肽與ACE-2/S的結(jié)合位點預(yù)測 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第4章 腫瘤細胞膜運輸多肽的載藥體系建立 |
| 4.1 本章引言 |
| 4.2 實驗材料 |
| 4.2.1 實驗試劑及配制 |
| 4.2.2 實驗設(shè)備 |
| 4.3 實驗方法 |
| 4.3.1 細胞膜載藥體系建立 |
| 4.3.2 細胞膜包載鐵磁粒子(SPIO NP@M-P)載藥體系建立 |
| 4.3.3 SPIO NP@M-P體內(nèi)實驗 |
| 4.3.4 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 4.4 實驗結(jié)果與討論 |
| 4.4.1 腫瘤細胞膜囊泡的合成與表征 |
| 4.4.2 細胞膜包載鐵磁粒子(SPIO NP@M-P)載藥體系建立 |
| 4.4.3 SPIO NP@M-P體內(nèi)實驗 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第5章 結(jié)論與展望 |
| 5.1 研究總結(jié) |
| 5.2 討論與展望 |
| 5.2.1 多肽成為藥物的關(guān)鍵要素 |
| 5.2.2 腫瘤細胞膜載藥體系用于的多肽運輸 |
| 附錄 |
| 參考文獻 |
| 在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果 |
| 致謝 |
（2）利用噬菌體展示技術(shù)篩選靶向胰腺癌細胞肽段并利用凋亡—靶向融合肽段抑制胰腺癌生長（論文提綱范文）
| 致謝 |
| 序言 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 縮略詞表 |
| 第一部分 利用噬菌體展示技術(shù)篩選靶向胰腺癌細胞肽段 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料與方法 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 結(jié)論 |
| 第二部分 凋亡-靶向融合肽段的靶向性驗證及胰腺癌生長抑制作用研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 綜述 噬菌體展示技術(shù)在腫瘤治療中的應(yīng)用進展 |
| 參考文獻 |
| 作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果 |
（3）體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)篩選人髓樣乳腺癌細胞Bcap-37特異性結(jié)合肽（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用縮寫詞中英文對照表 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要材料、試劑與儀器 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 荷瘤裸鼠模型的建立 |
| 2.2 腫瘤組織特異性結(jié)合噬菌體的富集 |
| 2.3 篩選中噬菌體在不同組織的分布情況 |
| 2.4 陽性單克隆噬菌的鑒定 |
| 2.5 陽性單克隆噬菌體DNA測序結(jié)果分析 |
| 2.6 多肽及光學(xué)分子探針的合成 |
| 2.7 多肽及熒光探針對Bcap-37 細胞毒性鑒定結(jié)果 |
| 2.8 熒光倒置顯微鏡鑒定熒光探針對Bcap-37 細胞的特異性 |
| 2.9 流式細胞術(shù)鑒定熒光探針與Bcap-37 細胞的特異性結(jié)合 |
| 2.10 熒光探針FITC-BCSP1 的最適濃度及穩(wěn)定性分析 |
| 2.11 FITC-BCSP1 探針在荷瘤裸鼠體內(nèi)的特異性和靶向性分析 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 綜述 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
（4）多肽自組裝超分子的生物功能化材料設(shè)計及其應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 生物體內(nèi)的多肽自組裝 |
| 1.2 多肽超分子自組裝機制 |
| 1.3 多肽超分子生物功能材料的優(yōu)點 |
| 1.4 多肽超分子生物功能材料的應(yīng)用 |
| 1.5 多肽自組裝超分子體系的設(shè)計 |
| 1.6 多肽自組裝纖維結(jié)構(gòu)與形貌的常用研究方法 |
| 1.7 本文的出發(fā)點以及主要研究內(nèi)容 |
| 1.8 本章參考文獻 |
| 第二章 合理設(shè)計靶向細菌膜響應(yīng)性自組裝抗菌肽 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 多肽在質(zhì)子化和去質(zhì)子化兩種狀態(tài)的分子動力學(xué)研究 |
| 2.3 不同pH環(huán)境對多肽的形貌及其結(jié)構(gòu)的影響 |
| 2.4 磷脂膜與抗菌肽的相互作用研究 |
| 2.5 抗菌肽對細菌內(nèi)外膜滲透性的影響 |
| 2.6 抗菌肽對細菌的影響 |
| 2.7 抗菌肽的細胞毒性實驗 |
| 2.8 結(jié)論及展望 |
| 2.9 本章參考文獻 |
| 第三章 具有自由基清除能力的多肽水凝膠的設(shè)計及應(yīng)用 |
| 3.1 背景介紹 |
| 3.2 ECF-5自組裝成纖維水凝膠 |
| 3.3 ECF-5多肽纖維水凝膠的微觀形貌 |
| 3.4 ECF-5多肽纖維水凝膠的性質(zhì)表征 |
| 3.5 ECF-5水凝膠的自由基清除能力 |
| 3.6 ECF-5水凝膠降低心肌細胞氧化應(yīng)激損傷 |
| 3.7 ECF-5水凝膠對心肌細胞的毒性測試 |
| 3.8 ECF-5水凝膠對過量ROS環(huán)境中心肌細胞刮傷愈合的影響 |
| 3.9 ECF-5水凝膠用于細胞的3D培養(yǎng)支架 |
| 3.10 ECF-5水凝膠的細胞降解特性 |
| 3.11 結(jié)論及展望 |
| 3.12 本章參考文獻 |
| 第四章 基于多肽自組裝超分子纖維構(gòu)建特異性吸附外泌體的微流控芯片 |
| 4.1 背景介紹 |
| 4.2 使用噬菌體展示技術(shù)篩選特異靶向CD63的多肽 |
| 4.3 以D17肽為基礎(chǔ)設(shè)計具有自組裝成纖維能力的多肽 |
| 4.4 Fmoc-FH13 肽纖維特異吸附CD63 陽性外泌體 |
| 4.5 微流控芯片的設(shè)計及制作 |
| 4.6 定量檢測CD63陽性外泌體上PD-L1 |
| 4.7 總結(jié)與展望 |
| 4.8 本章參考文獻 |
| 第五章 總結(jié)與展望 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果 |
（5）噬菌體展示技術(shù)篩選雙環(huán)肽配體（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 自然界富含二硫鍵的多肽 |
| 1.2.1 二硫鍵橋連的雙環(huán)肽 |
| 1.2.2 動物防御素 |
| 1.2.3 具有半胱氨酸結(jié)基序的環(huán)肽 |
| 1.3 基于自然界環(huán)肽骨架的分子嫁接 |
| 1.3.1 分子嫁接提高穩(wěn)定性 |
| 1.3.2 分子嫁接增強親和力 |
| 1.3.3 分子嫁接促進胞內(nèi)遞送 |
| 1.3.4 分子嫁接改善口服活性 |
| 1.4 噬菌體展示技術(shù) |
| 1.4.1 噬菌體展示技術(shù)的概述 |
| 1.4.2 噬菌體展示單環(huán)肽庫 |
| 1.4.3 噬菌體展示雙環(huán)肽庫 |
| 1.4.4 噬菌體展示天然環(huán)肽庫 |
| 1.5 研究思路 |
| 第二章 噬菌體展示雙環(huán)肽庫針對靶標(biāo)蛋白MDM2進行篩選 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗部分 |
| 2.2.1 主要試劑 |
| 2.2.2 主要儀器 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 實驗方法 |
| 2.3 實驗結(jié)果與討論 |
| 2.3.1 MDM2蛋白的表達與純化 |
| 2.3.2 以MDM2為靶標(biāo)蛋白的噬菌體篩選 |
| 2.3.3 ELISA實驗鑒定噬菌體單克隆與MDM2的結(jié)合 |
| 2.3.4 單克隆菌落的基因測序 |
| 2.3.5 多肽氧化折疊 |
| 2.3.6 熒光偏振競爭實驗測定雙環(huán)肽與MDM2的親和力 |
| 2.4 本章小結(jié) |
| 第二章 附錄 |
| 第三章 雙環(huán)肽的性質(zhì)表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗部分 |
| 3.2.1 實驗試劑 |
| 3.2.2 實驗儀器 |
| 3.2.3 實驗方法 |
| 3.3 實驗結(jié)果與討論 |
| 3.3.1 pb-13和pb-18脯氨酸突變肽的氧化折疊 |
| 3.3.2 pb-13和pb-18雙環(huán)肽結(jié)構(gòu)的表征 |
| 3.3.3 鑒定脯氨酸對多肽構(gòu)象的影響 |
| 3.3.4 序列分析 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第三章 附錄 |
| 總結(jié)與展望 |
| 參考文獻 |
| 碩士期間發(fā)表文章及獎勵 |
| 致謝 |
（6）靶向FGFRs的新型抗腫瘤12肽的篩選及作用機制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 FGFR 與腫瘤 |
| 1.1.1 FGFR的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)性質(zhì) |
| 1.1.2 FGFRs信號在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用 |
| 1.1.3 FGFRs靶向抗腫瘤藥物研發(fā)現(xiàn)狀 |
| 1.2 多肽藥物 |
| 1.2.1 多肽藥物簡介 |
| 1.2.2 抗腫瘤多肽藥物 |
| 1.2.3 靶向RTK家族的多肽 |
| 1.3 噬菌體展示肽庫 |
| 1.3.1 基本原理 |
| 1.3.2 噬菌體展示技術(shù)的應(yīng)用 |
| 1.3.3 噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)缺點 |
| 1.4 本研究的主要目的、內(nèi)容和意義 |
| 1.4.1 主要研究目的 |
| 1.4.2 研究技術(shù)路線 |
| 1.4.3 主要意義與創(chuàng)新點 |
| 第二章 FGFRs高親和12 肽的篩選和初步鑒定 |
| 2.1 實驗儀器和試劑 |
| 2.1.1 主要實驗儀器 |
| 2.1.2 實驗試劑和耗材 |
| 2.1.3 主要試劑配制 |
| 2.1.4 實驗細胞株 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 利用噬菌體隨機十二肽庫篩選FGFR2 結(jié)合肽 |
| 2.2.2 等溫滴定量熱法測定候選肽與FGFRs的結(jié)合親和力 |
| 2.2.3 細胞增殖實驗(Cell Counting Kit-8 法) |
| 2.2.4 激光共聚焦顯微鏡熒光檢測12 肽在細胞中的共定位實驗 |
| 2.3 實驗結(jié)果 |
| 2.3.1 FGFR2 特異性親和噬菌體的富集和測序 |
| 2.3.2 候選肽與FGFR2 胞外段的親和力檢測 |
| 2.3.3 候選肽的腫瘤細胞增殖抑制率檢測 |
| 2.3.4 T1 肽與不同F(xiàn)GFR的親和力 |
| 2.3.5 T1 肽對不同腫瘤細胞的抑制能力 |
| 2.3.6 T1 肽與細胞結(jié)合的定位情況 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 T1肽的抗腫瘤功能研究 |
| 3.1 實驗儀器和試劑 |
| 3.1.1 主要實驗儀器 |
| 3.1.2 實驗試劑和耗材 |
| 3.1.3 主要試劑配制 |
| 3.2 實驗方法 |
| 3.2.1 腫瘤細胞的克隆形成實驗 |
| 3.2.2 裸鼠移植瘤模型的建立及給藥實驗 |
| 3.2.3 移植瘤石蠟切片制備及H&E染色分析 |
| 3.2.4 移植瘤組織切片的Ki67 表達檢測 |
| 3.2.5 Tunel法檢測移植瘤細胞凋亡情況 |
| 3.3 實驗結(jié)果 |
| 3.3.1 T1 肽抑制SGC-7901 細胞的克隆形成 |
| 3.3.2 T1 肽抑制SGC-7901 細胞裸鼠移植瘤的生長 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 T1肽抑制腫瘤增殖的作用機制研究 |
| 4.1 實驗試劑和儀器 |
| 4.1.1 主要實驗儀器 |
| 4.1.2 實驗試劑和耗材 |
| 4.1.3 主要試劑配制 |
| 4.2 實驗方法 |
| 4.2.1 蛋白免疫印跡實驗 |
| 4.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒灱胺治?/td> |
| 4.2.3 分子對接 |
| 4.2.4 分子動力學(xué)模擬 |
| 4.2.5 統(tǒng)計及作圖 |
| 4.3 實驗結(jié)果 |
| 4.3.1 T1 肽抑制FGFRs及下游信號通路的激活 |
| 4.3.2 T1 肽對SGC-7901 細胞多種基因轉(zhuǎn)錄水平影響 |
| 4.3.3 T1 肽與FGFR2 胞外段的相互作用模式預(yù)測 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 總結(jié)和展望 |
| 5.1 總結(jié) |
| 5.2 展望 |
| 參考文獻 |
| 碩士期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（7）FGFR1特異結(jié)合多肽的篩選與應(yīng)用（論文提綱范文）
| 縮略語表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 噬菌體展示技術(shù)篩選FGFR1 特異結(jié)合的多肽 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 實驗材料與方法 |
| 1.3 實驗結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 第二章 FGFR1 特異結(jié)合短肽在骨性關(guān)節(jié)炎中的作用與機制研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 實驗材料與方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 FGFR1 特異結(jié)合短肽在肺癌中的作用與機制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 實驗材料與方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻 |
| 文獻綜述 關(guān)節(jié)軟骨干/祖細胞研究進展 |
| 參考文獻 |
| 攻讀學(xué)位期間主要成績 |
| 致謝 |
（8）腫瘤導(dǎo)向肽的研究進展（論文提綱范文）
| 1 腫瘤導(dǎo)向肽的結(jié)構(gòu)及其理化特性 |
| 2 腫瘤導(dǎo)向肽的篩選與分類 |
| 2.1 靶向腫瘤血管的導(dǎo)向肽 |
| 2.2 靶向腫瘤淋巴管的導(dǎo)向肽 |
| 2.3 靶向腫瘤細胞的導(dǎo)向肽 |
| 2.4 腫瘤穿膜肽 |
| 3 腫瘤導(dǎo)向肽的應(yīng)用 |
| 3.1 腫瘤診斷 |
| 3.2 腫瘤治療 |
| 3.3 腫瘤的治療診斷 |
| 4 腫瘤導(dǎo)向肽的臨床進展 |
| 5 展望 |
（9）噬菌體肽庫技術(shù)篩選腫瘤靶向短肽的研究進展（論文提綱范文）
| 1 噬菌體展示肽庫 |
| 2 噬菌體隨機肽庫技術(shù)篩選腫瘤靶向短肽的研究 |
| 3 結(jié) 語 |
（10）腫瘤靶向多肽生物淘選技術(shù)研究進展（論文提綱范文）
| 1 引言 |
| 2 腫瘤靶向多肽生物淘選 |
| 2.1 腫瘤細胞的全細胞淘選 |
| 2.2 腫瘤靶向短肽體內(nèi)淘選 |
| 2.3 腫瘤靶向多肽的研究現(xiàn)狀 |
| 3 挑戰(zhàn)與展望 |
四、噬菌體展示肽在血管導(dǎo)向治療方面的應(yīng)用（論文參考文獻）
- [1]多肽藥物篩選及基于腫瘤細胞膜的多肽運載體系的構(gòu)建與應(yīng)用[D]. 孟祥州. 中國科學(xué)技術(shù)大學(xué), 2021(09)
- [2]利用噬菌體展示技術(shù)篩選靶向胰腺癌細胞肽段并利用凋亡—靶向融合肽段抑制胰腺癌生長[D]. 鄭磊. 浙江大學(xué), 2020(01)
- [3]體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)篩選人髓樣乳腺癌細胞Bcap-37特異性結(jié)合肽[D]. 郭超. 山西醫(yī)科大學(xué), 2020(11)
- [4]多肽自組裝超分子的生物功能化材料設(shè)計及其應(yīng)用[D]. 沈志偉. 中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院上海應(yīng)用物理研究所), 2020(01)
- [5]噬菌體展示技術(shù)篩選雙環(huán)肽配體[D]. 林平. 廈門大學(xué), 2019(07)
- [6]靶向FGFRs的新型抗腫瘤12肽的篩選及作用機制研究[D]. 王強. 暨南大學(xué), 2019
- [7]FGFR1特異結(jié)合多肽的篩選與應(yīng)用[D]. 譚喬燕. 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué), 2018(03)
- [8]腫瘤導(dǎo)向肽的研究進展[J]. 苗婕,張瑞,楊曉峰. 生命的化學(xué), 2016(02)
- [9]噬菌體肽庫技術(shù)篩選腫瘤靶向短肽的研究進展[J]. 張洋,張小明,劉剛. 重慶醫(yī)學(xué), 2015(08)
- [10]腫瘤靶向多肽生物淘選技術(shù)研究進展[J]. 郝葆青,車晨,李涵依. 西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2014(03)