一、異種肝移植中補(bǔ)體作用及抑制策略（論文文獻(xiàn)綜述）
李婷[1]（2020）在《肝臟異種移植后CD47-SIRPα不兼容介導(dǎo)血細(xì)胞吞噬作用的研究》文中指出背景:臨床肝移植的成功開展,為肝臟疾病的外科治療開啟了新的篇章。目前肝移植已經(jīng)成為公認(rèn)的治療終末期肝病的唯一有效手段,同時(shí)也是急性爆發(fā)性肝衰竭、肝細(xì)胞癌、肝門部膽管癌和一些代謝性疾病的最佳選擇。隨著手術(shù)技術(shù)和免疫抑制劑的不斷進(jìn)步,肝移植的手術(shù)適應(yīng)證不斷擴(kuò)大,可能的受益人群也在不斷的增加,伴隨而來的便是日益凸顯的供體短缺問題。雖然活體肝移植、心臟死亡后器官捐獻(xiàn)和其他一些邊緣供肝的應(yīng)用可以一定程度上緩解供體短缺帶來的壓力,然而由于數(shù)量有限并且會增加潛在的并發(fā)癥無法從根本上解決問題。從長遠(yuǎn)的角度來講,最實(shí)用和有效的解決方法便是異種移植。豬由于其器官大小及生理特點(diǎn)與人類類似并且具有良好的繁殖特性,基因修飾的可行性等優(yōu)勢成為了理想的異種供器官來源。然而相比于非靈長類哺乳動物而言,顯然豬與人的親緣性更遠(yuǎn),因此需要更大程度的基因修飾。識別可能獲益的遺傳表位靶點(diǎn)并辨別其可能的作用對于轉(zhuǎn)基因豬遺傳修飾表位的篩選顯得至關(guān)重要。隨著各種轉(zhuǎn)基因豬的不斷問世,豬器官異種移植取得了重大進(jìn)展,異位豬心臟異種移植和腎異種移植分別達(dá)到了 945天和435天的生存記錄。然而,異種的豬肝臟移植存活時(shí)間卻仍然無法突破一個(gè)月。原因雖然尚不十分明確,但是與凝血功能失調(diào)特別是嚴(yán)重的血小板丟失導(dǎo)致的致命出血密切相關(guān)。此外,貧血的發(fā)生被認(rèn)為也與肝臟異種移植相關(guān)。目前認(rèn)為異種肝移植后血小板減少的主要原因包含以下兩點(diǎn):（1）豬內(nèi)皮細(xì)胞與靈長類動物的血小板之間的細(xì)胞表面受體-配體相互作用不協(xié)調(diào);（2）豬肝內(nèi)皮抗原天然抗體的存在,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞活化。其中,脫唾液酸蛋白受體-1（asialoglycoprotein receptor-1,ASGR1）和 CD11b/CD18（MAC-1）的作用較為明確。同樣,豬肝臟的吞噬細(xì)胞可以參與人紅細(xì)胞的吞噬作用。學(xué)界普遍認(rèn)為CD47-信號調(diào)節(jié)蛋白α（signal regulatory protein-α,SIRPα）信號通路通過識別自我與非我調(diào)節(jié)吞噬反應(yīng),在體外的吞噬實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)的細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)中可介導(dǎo)排斥反應(yīng),可能參與了異種肝移植后的血小板減少和貧血的發(fā)生,但一直缺乏有力的器官水平的證據(jù)。研究目的:通過小鼠肝移植模型及大鼠-小鼠異種肝移植模型,探索CD47-SIRPα不兼容在肝臟移植器官水平對血細(xì)胞吞噬作用的影響,從而為轉(zhuǎn)基因豬遺傳修飾的表位篩選提供可靠的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法:（1）通過完善技術(shù)細(xì)節(jié)和優(yōu)化非技術(shù)細(xì)節(jié)構(gòu)建出成熟穩(wěn)定可靠的小鼠肝移植模型。（2）利用小鼠肝移植模型,探究在同種同基因肝移植后,CD47-SIRPα不兼容對外周血紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)的影響。并通過免疫熒光染色觀察CD41熒光信號的變化以及與F4/80的共定位現(xiàn)象。（3）構(gòu)建大鼠-小鼠異種肝臟移植模型,通過組織學(xué)檢查、ALT檢測及流式細(xì)胞技術(shù),確定其存在排斥反應(yīng)及產(chǎn)生的排斥反應(yīng)類型。（4）使用大鼠-小鼠肝臟異種移植模型,探究在異種肝移植后,排斥反應(yīng)環(huán)境下,CD47-SIRPα不兼容對外周血紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)的影響。并通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測血小板活化的情況。結(jié)果:（1）通過優(yōu)化選擇小鼠品系及膽道支架,小鼠原位肝移植的遠(yuǎn)期預(yù)后可以達(dá)到2周、1個(gè)月及3個(gè)月100%、80%及80%的生存率。（2）同種同基因肝移植模型后,野生型（wild-type,WT）肝臟移植后,與WT受體小鼠相比,CD47KO小鼠的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)無明顯下降,血小板計(jì)數(shù)術(shù)后第1天（Postoperative day 1,POD1）和POD5有輕度下降。免疫熒光染色共聚焦顯微鏡觀察,CD41熒光信號無明顯增加,且與F4/80無共定位現(xiàn)象。（3）選用未脫乳與受體小鼠體重相仿的F344大鼠構(gòu)建大鼠-小鼠異種肝移植模型,組織學(xué)檢查和ALT檢測證實(shí)存在嚴(yán)重的排斥反應(yīng)。流式檢測證實(shí)主要的浸潤細(xì)胞為CD8+T細(xì)胞,且T細(xì)胞的免疫表型從幼稚的和中樞記憶T細(xì)胞向效應(yīng)型記憶T細(xì)胞大量轉(zhuǎn)化。（4）利用大鼠-小鼠異種肝移植模型,F344肝臟移植后,與WT受體小鼠相比,CD47KO小鼠外周血紅細(xì)胞和血小板的變化并沒有顯著差異。兩組的紅細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)均隨著時(shí)間的推移而不斷下降,并且活化的血小板比例無明顯變化。結(jié)論:（1）小鼠品系和膽道支架的選擇制約至小鼠原位肝移植的遠(yuǎn)期預(yù)后。（2）同基因小鼠肝臟移植后,CD47-SIRPα不兼容不能介導(dǎo)肝臟對血細(xì)胞的吞噬作用。（3）大鼠-小鼠異種肝移植后產(chǎn)生的排斥反應(yīng)主要是由CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)。（4）大鼠-小鼠異種肝移植后,CD47-SIRPα不兼容亦不能介導(dǎo)肝臟對血細(xì)胞的吞噬作用。
張玄,李霄,王權(quán)成,張虹,白鴿,陶開山,竇科峰[2]（2018）在《豬-猴肝移植中的凝血調(diào)節(jié)障礙問題》文中提出異種器官移植是未來解決同種器官短缺的有效途徑之一,而豬被認(rèn)為是最佳異種器官供體。隨著α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶敲除（α-1,3-galactosyltransferase gene knockout, GTKO）豬的逐漸人源化改造,以及新型共刺激信號阻斷劑進(jìn)入臨床前試驗(yàn)階段,異種移植的免疫學(xué)屏障正不斷被攻克,臨床異種器官移植已經(jīng)離我們越來越近。與心臟、腎臟移植相比,異種肝移植不僅存在
陳鵬飛,聶惠蓉,戴一凡,蔡志明,牟麗莎[3]（2017）在《基因修飾豬在異種器官移植中的研究進(jìn)展》文中研究表明器官移植是治療終末期器官衰竭的最有效手段,但供器官嚴(yán)重匱乏已成為器官移植發(fā)展的最大障礙,異種器官移植為解決這一問題開辟了新思路。豬在遺傳學(xué)、解剖學(xué)及生理特性等方面與人具有較大的相似性,因此被認(rèn)為是異種器官移植最理想的供體來源。隨著基因編輯技術(shù)的發(fā)展,基因修飾豬在異種器官移植領(lǐng)域中的研究與應(yīng)用已取得較大進(jìn)展。本文就基因修飾豬在豬-靈長類動物異種器官移植中的研究與應(yīng)用進(jìn)行綜述。
李亞光[4]（2017）在《來氟米特延長大鼠—小鼠異種異位心臟移植物生存期的研究》文中研究表明目的:異種移植是解決器官移植供體短缺問題的有效手段。在解決了超急性排斥反應(yīng)之后,目前急性血管性排斥反應(yīng)（AVR）及細(xì)胞性排斥反應(yīng)（CMR）的發(fā)生成為了異種移植應(yīng)用于臨床的最大免疫學(xué)障礙。因此,建立具有典型AVR及CMR表現(xiàn)的小動物異種移植模型,并在該模型基礎(chǔ)上研究新型免疫抑制劑來氟米特（LEF）的作用機(jī)制十分重要。本實(shí)驗(yàn)的主要目的如下:1.首次運(yùn)用套管法建立小鼠為受體的異種心臟移植模型2.比較以BALB/c及以C57BL/6小鼠為受體的兩種模型的典型免疫排斥機(jī)制3.探究來氟米特對以上兩種模型中典型免疫排斥的影響及作用機(jī)制。方法:首先運(yùn)用套管法建立Lewis大鼠——小鼠為受體的異種心臟移植模型,并進(jìn)行初步評估,要點(diǎn)如下:（1）供體大鼠最佳體重范圍18—25g,個(gè)例不可超過30g。（2）供心在升主動脈根部,常見有一上行并匯入左上腔靜脈的細(xì)小分支,在分離時(shí)需將其電凝或結(jié)扎,以免術(shù)后難止性出血。（3）供心大鼠升主動脈內(nèi)膜脆弱,且與血管其它層結(jié)合疏松易損傷,故全身肝素化時(shí)選擇從供體胸主動脈以免損傷動脈內(nèi)膜。穩(wěn)定建模后,將BALB/c及C57BL/6兩種受體的小鼠各分成三組:其中,陽性對照組單純移植而不用藥物處理,來氟米特處理組用LEF 30mg/kg/d腹腔注射干預(yù)。兩受體分別在陽性組供心完全排斥當(dāng)天取樣,做移植物病理分析,并使用流式細(xì)胞數(shù)術(shù)對受體血清抗體,T細(xì)胞、B細(xì)胞及Tfh細(xì)胞進(jìn)行分析。結(jié)果:穩(wěn)定期建模發(fā)現(xiàn),Lewis——BALB/c移植組平均生存期為4.3±0.8天（n=6）,LEF給藥組生存期最長可達(dá)15天,而Lewis——C57BL/6移植組平均生存期為11.7±2.4天（n=6）,LEF給藥組生存期最長可達(dá)25天。HE分析發(fā)現(xiàn),Lewis——BALB/c陽性對照組供心表現(xiàn)為典型AVR表現(xiàn),Lewis——C57BL/6陽性對照組供心表現(xiàn)為AVR+CMR混合型表現(xiàn)。兩組相應(yīng)的用藥處理組AVR表現(xiàn)大大減輕。BALB/c為受體移植組移植后第4天,B6為受體移植組移植后第9天取樣FCS分析發(fā)現(xiàn),BALB/c組陽性組血清IgG1、IgG2a、IgM水平相比于空白組及給藥組明顯上升,給藥組及空白組之間無明顯差異。結(jié)論:1.使用套管法可以成功建立小鼠為受體的異種異位心臟移植模型,BALB/c受體中移植物表現(xiàn)出典型AVR排斥反應(yīng),而C57BL/6受體中移植物表現(xiàn)為AVR+CMR混合型排斥反應(yīng)。2.來氟米特主要通過抑制AVR顯著延長異種移植物生存期,該作用主要與抑制模型受體血清中IgG1、IgG2a和IgM的水平有關(guān)。
霍海龍[5]（2016）在《版納微型豬近交系5個(gè)潛在相關(guān)豬→人異種器官移植免疫排斥反應(yīng)基因的克隆、表達(dá)及功能生物信息學(xué)分析》文中研究指明當(dāng)前器官移植治療疾病面臨的最大問題是供體器官嚴(yán)重缺乏,器官衰竭患者多因無法及時(shí)得到供體器官而死亡。異種器官移植已成為目前科學(xué)界和醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的解決供體器官短缺的有效途徑,豬已被認(rèn)為是最理想的非人靈長類異種器官移植的供體。豬→人異種器官移植的主要屏障是超急性排斥反應(yīng)（HAR）,α1,3半乳糖（α1,3Gal）是引起HAR的主要抗原。臨床上將清除了 α1,3Gal的豬器官移植給狒狒,仍會發(fā)生排斥反應(yīng),提示在豬體內(nèi)還存在其他非α1,3Gal異種抗原。為了早日實(shí)現(xiàn)豬→人異種器官移植的臨床應(yīng)用,廣大醫(yī)學(xué)和科研工作者把目光轉(zhuǎn)向了非α1,3Gal基因的挖掘和功能研究。本試驗(yàn)以有望成為豬→人異種器官移植良好供體的版納微型豬近交系（BMI）為研究材料,以與豬→人異種器官移植免疫排斥反應(yīng)潛在相關(guān)的CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALMT2等5個(gè)非α1,3Gal基因?yàn)楹蜻x基因,從分子、蛋白、細(xì)胞水平同時(shí)入手,驗(yàn)證這5個(gè)基因與豬→人異種器官移植免疫排斥反應(yīng)的相關(guān)性。首先從mRNA水平分離并鑒定這些基因的完全CDS編碼區(qū)序列,并進(jìn)行免疫相關(guān)多組織轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的qPCR檢測分析,獲得其在mRNA水平的表達(dá)情況;然后采用Western Blot方法進(jìn)一步對相同組織進(jìn)行驗(yàn)證,獲得其在蛋白水平的表達(dá)情況;構(gòu)建目的基因和綠色熒光報(bào)告基因GFP的融合表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染示蹤進(jìn)行細(xì)胞水平的驗(yàn)證;并對相關(guān)蛋白質(zhì)進(jìn)行基本信息、特征信息、結(jié)構(gòu)域、功能位點(diǎn)、高級結(jié)構(gòu)等功能生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明豬CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因的全長CDS序列分別為1734 bp、1590 bp、894 bp、861 bp、1509 bp,并提交到GenBank獲得了認(rèn)證。qPCR分析和Western Blot驗(yàn)證表明CMAH mRNA和OXSR1 mRNA均在頜下腺組織中表達(dá)最高;CD80 mRNA在脾組織中表達(dá)最高;ASGR1 mRNA在肝臟中特異表達(dá),在其它組織中不表達(dá);B4GALNT2 mRNA在扁桃體中表達(dá)最高;揭示同一基因在不同組織和不同基因在相同組織中差異表達(dá)的現(xiàn)象,也說明基因主要在哪些組織發(fā)揮重要的功能,為下一步深入研究提供了線索,這些重要組織將是我們后續(xù)研究該基因功能以及進(jìn)行基因敲除和基因修飾研究的靶組織。構(gòu)建了CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因和綠色熒光蛋白AcGFP1真核融合表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)染豬腎上皮PK15細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá),均檢測到了綠色熒光表達(dá)。在此基礎(chǔ)上為了研究這些豬的基因與人免疫排斥反應(yīng)的相關(guān)性,將這些真核融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC進(jìn)行表達(dá),均檢測到了穩(wěn)定表達(dá)的綠色熒光,表明CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因與豬→人異種器官免疫排斥反應(yīng)相關(guān)。為進(jìn)一步研究這些基因在豬→人異種移植排斥反應(yīng)中的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。為深入了解基因編碼的蛋白質(zhì)的相關(guān)功能性質(zhì),我們對相應(yīng)蛋白質(zhì)進(jìn)行了功能生物信息學(xué)分析,包括分析其氨基酸組成、分子式、分子量、等電點(diǎn)、消光系數(shù)、半衰期、原子組成、不穩(wěn)定系數(shù)、脂肪指數(shù)、親水系數(shù)等蛋白質(zhì)基本信息;疏水性、跨膜結(jié)構(gòu)、卷曲螺旋、信號肽、固有無序性、亮氨酸富集的核輸出信號、亞細(xì)胞定位等蛋白質(zhì)的特征信息;結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)（磷酸化和糖基化）;二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)等。這些蛋白質(zhì)的基本信息、特征信息、結(jié)構(gòu)域、功能位點(diǎn)以及高級結(jié)構(gòu)的生物信息學(xué)分析為CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2 5個(gè)蛋白質(zhì)的進(jìn)一步功能研究和驗(yàn)證提供了理論依據(jù),也為下一步進(jìn)行豬→人異種器官免疫排斥反應(yīng)相關(guān)基因的聯(lián)合敲除和基因修飾提供了參考數(shù)據(jù)。本研究填補(bǔ)了豬→人異種器官移植非超急性排斥反應(yīng)α1,3Gal基因研究之外的空白,本研究結(jié)果可為版納微型豬近交系豬→人異種器官移植利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)資料,同時(shí)也為促進(jìn)版納微型豬近交系的開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。
竇科峰,紀(jì)洪辰[6]（2016）在《異種肝移植的研究和進(jìn)展》文中研究表明目前,同種移植面臨供體器官嚴(yán)重短缺問題,使用動物器官橋接或替代人類器官的異種移植,是解決這一問題的可行手段,也是移植研究的熱點(diǎn)[1]。目前,異種腎移植的受體最長存活時(shí)間達(dá)到90 d,異種異位心臟移植的供體器官存活長達(dá)945 d,微囊化胰島細(xì)胞在受體體內(nèi)存活830 d,并在臨床試驗(yàn)中被證實(shí)可有效調(diào)節(jié)受體血糖[2]。但是,異種肝移植受體最長存活時(shí)間僅為15 d,其面臨的主要
魏靜[7]（2016）在《人源化基因修飾豬內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理異種移植（Xenotransplantation）是解決臨床器官供體短缺的重要途徑之一,豬被認(rèn)為是人類異種器官移植的理想供體。然而,豬器官應(yīng)用于人類器官移植方面卻面臨著多種排斥反應(yīng)。將豬的α-1,3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因（0α-1,3GT）敲除及轉(zhuǎn)人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD46能基本克服超急性排斥,但是仍然存在急性血管排斥反應(yīng)和凝血紊亂等問題,其中血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷是介導(dǎo)放大免疫排斥反應(yīng)及凝血功能紊亂的重要環(huán)節(jié)。在豬到狒狒的肝移植中發(fā)現(xiàn),受體在術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重的血小板減少性內(nèi)出血,初步發(fā)現(xiàn)血小板的減少與肝臟中肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬有關(guān)。本研究分離培養(yǎng)了豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞（Porcine arterial endothelial cell, pAEC）和豬肝竇內(nèi)皮細(xì)胞（Porcine liver sinusoidal endothelial cell, pLSEC）建立了豬肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分離純化的方法,為在體外研究異種移植免疫排斥奠定了基礎(chǔ)。利用課題組創(chuàng)建GGTA1、ASGR1、CMAH基因敲除的和轉(zhuǎn)入hCD46、hTBM基因的異種移植小型豬,分離培養(yǎng)pAEC和pLSEC,并對GGTA1、ASGR1、 CMAH、hCD46在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行流式分析。利用FITC-CD31流式細(xì)胞分析pAEC和pLSEC的純度,掃描電鏡和透射電鏡觀察pLSEC窗孔結(jié)構(gòu),免疫熒光法檢測pAEC、pLSEC攝取DiI標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍祝―iI-Ac-LDL）的內(nèi)吞功能,實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Real-time PCR, qRT-PCR）檢測pLSEC、pAEC、豬耳成纖維細(xì)胞（Porcine ear fibroblast cell, pEFC）的CD31、CD146、Ⅷ因子、vWF因子的表達(dá)。采用端粒酶的逆轉(zhuǎn)錄的酶（Telomerase reverse transcripatase of human, hTERT）對pAEC進(jìn)行永生化。流式細(xì)胞術(shù)對多基因修飾豬的相關(guān)基因GGTA1、ASGR1、CMAH、hCD46在內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)進(jìn)行分析。研究結(jié)果如下：（1）分離培養(yǎng)的pAEC呈典型的內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),鋪路石樣排列,生長狀態(tài)良好；pAEC吸收Dil-Ac-LDL,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明培養(yǎng)第3代的pAEC表達(dá)CD31的純度高達(dá)99.8%。（2）利用CD31作為肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記來分離豬肝竇內(nèi)皮細(xì)胞,得到的pLSEC呈內(nèi)皮細(xì)胞的典型形態(tài),鋪路石樣排列,具有標(biāo)志性的窗孔結(jié)構(gòu)；pLSEC具有DiI標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍祝―iI-Ac-LDL）的內(nèi)吞功能；培養(yǎng)第3代的pLSEC表達(dá)CD31高達(dá)96.3%,說明pLSEC傳代培養(yǎng)的穩(wěn)定性高、純度達(dá)96.3%。pLSEC表達(dá)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記分子CD146、Ⅷ因子、vWF, pLSEC表達(dá)CD31、CD 146、Ⅷ因子、vWF表達(dá)量顯著高于pAEC和豬耳成纖維細(xì)胞（Porcine ear fibroblast cell, pEFC）。（3）質(zhì)粒pCI-neo-hTERT電轉(zhuǎn)染pAEC后,細(xì)胞已傳代至第14代,pAEC永生化后保持了正常的血管內(nèi)皮的生物學(xué)特性。（4）通過流式細(xì)胞術(shù)對GGTA1、ASGR1、CMAH基因敲除和轉(zhuǎn)入hCD46基因的用于異種移植的小型豬基因在內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)進(jìn)行分析,表明多基因修飾豬的無GGTA1、ASGR1、CMAH基因相關(guān)蛋白的表達(dá),hCD46基因修飾豬表達(dá)hCD46蛋白?？傊?本研究成功建立了多種基因修飾豬的主動脈內(nèi)皮細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞,利用CD31來純化pAEC,同時(shí)轉(zhuǎn)入pCI-neo-hTERT,得到永生化的pAECo確定了CD31可作為分離純化pLSEC的特異性標(biāo)記分子。pAEC和pLSEC為研究非Gal抗原以及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞對血小板吞噬的問題提供了良好的細(xì)胞模型。利用流式細(xì)胞分析的方法對多基因修飾豬的GGTA1、ASGR1、CMAH基因敲除和hCD46基因轉(zhuǎn)入進(jìn)行檢測,提供了一種快速、準(zhǔn)確的鑒定多基因修飾豬的方法。
竇科峰,李霄,陶開山[8]（2013）在《異種肝移植凝血功能調(diào)節(jié)障礙的免疫生物學(xué)機(jī)制》文中指出器官短缺是目前困擾移植醫(yī)學(xué)發(fā)展的主要難題。美國器官資源共享網(wǎng)絡(luò)的數(shù)據(jù)顯示,至2012年4月,共有110000例患者在等待捐獻(xiàn)器官,而其中肝病患者就有17 000例[1]。我國器官短缺形勢則更為嚴(yán)峻,每年等待移植的患者有150萬人,僅能實(shí)施1萬例移植[2-3],有30萬人因缺乏供肝而死亡。開展異種器官移植研究,用動物器官橋接甚至代替人體器官進(jìn)行移植,是解決供者器官短缺的有效途徑[4]。豬是當(dāng)前公認(rèn)的可能用于人類的異種移植合適供者,其
丁利民[9]（2011）在《異種胰島細(xì)胞分離及生物活性的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究說明目的探討魚綱（羅非魚）、爬行綱（中華鱉）動物胰島細(xì)胞分離、提取的方法及功能評價(jià),為臨床胰島移植探索新的供體來源。方法采用膠原酶消化分離羅非魚、中華鱉胰島細(xì)胞,光鏡下觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)；臺盼藍(lán)染色流檢測細(xì)胞存活率；雙硫腙（DTZ）染色,鏡下計(jì)算分離胰島的純度；采用含10%胎牛血清、RPMI 1640培養(yǎng)液等培養(yǎng)胰島細(xì)胞,在體外用不同濃度的葡萄糖刺激胰島細(xì)胞,ELISA法測定其生物學(xué)活性。結(jié)果分離的羅非魚、中華鱉胰島細(xì)胞活度均大于90%,分離物中胰島純度均大于80%,羅非魚、中華鱉胰島細(xì)胞在體外對不同濃度的葡萄糖刺激具有明確的生物學(xué)反應(yīng),并隨著葡萄糖濃度的增加胰島素的產(chǎn)生也相應(yīng)增加；二者胰島細(xì)胞在同一時(shí)間組對不同濃度的葡萄糖刺激產(chǎn)生胰島素具有量效關(guān)系（P<0.05）,不同時(shí)間組間對同一濃度的葡萄糖刺激產(chǎn)生胰島素?zé)o明顯差異（P>0.05）。結(jié)論采用膠原酶消化分離羅非魚、中華鱉胰島細(xì)胞的方法可行,胰島細(xì)胞在體外對不同濃度的葡萄糖刺激產(chǎn)生胰島素并具有正相關(guān)；中華鱉胰島細(xì)胞在相似條件下分泌胰島素顯著高于羅非魚胰島細(xì)胞,這體現(xiàn)了爬行綱動物胰島較之魚綱動物胰島在生物進(jìn)化上更高級,其為魚綱、爬行綱與哺乳綱動物之間的胰島細(xì)胞移植奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
丁利民,時(shí)軍[10]（2010）在《異種肝移植的排斥機(jī)制》文中研究說明背景:隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展和免疫抑制劑的開發(fā)利用,同種異體肝移植已獲得顯著成效,但由于人類供肝短缺,肝移植界重新認(rèn)識異種肝移植的價(jià)值,目前認(rèn)為豬是較理想的異種供肝來源。目的:以豬為例著重探討異種肝移植中的主要免疫障礙（超急性排斥、急性血管性排斥、急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)）以及克服排斥策略、誘導(dǎo)免疫耐受的研究進(jìn)展。方法:檢索人為第一作者,檢索文獻(xiàn)時(shí)限為1994/2010,檢索數(shù)據(jù)庫為SPRINGER數(shù)據(jù)庫及中國期刊全文數(shù)據(jù)庫。英文檢索詞為"liver transplantation,xenograft,immune rejection,mechanism",中文檢索詞為"肝移植,異種供肝,免疫排斥,免疫耐受,機(jī)制"。納入與異種肝移植中的主要免疫障礙以及克服排斥策略、誘導(dǎo)免疫耐受的研究進(jìn)展相關(guān)度較高、近期發(fā)表或權(quán)威雜志的研究和綜述文獻(xiàn),排除重復(fù)研究。結(jié)果與結(jié)論:計(jì)算機(jī)初檢得到205篇文獻(xiàn),根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn),29篇文獻(xiàn)被選用（中文2篇,英文27篇）。結(jié)果提示克服異種肝移植中出現(xiàn)的免疫障礙以及探索抗排斥策略、誘導(dǎo)免疫耐受等是異種肝移植臨床應(yīng)用研究的重要方向,隨著對異種肝移植排斥反應(yīng)機(jī)制認(rèn)識的不斷深入、新免疫抑制劑的開發(fā)利用等,異種肝移植有可能成為一個(gè)解決目前供肝短缺的重要途徑。
二、異種肝移植中補(bǔ)體作用及抑制策略（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、異種肝移植中補(bǔ)體作用及抑制策略（論文提綱范文）
（1）肝臟異種移植后CD47-SIRPα不兼容介導(dǎo)血細(xì)胞吞噬作用的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文縮略詞對照表 |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 肝臟移植 |
| 1.1.1 肝臟移植的概況 |
| 1.1.2 肝臟移植發(fā)展面臨的難題 |
| 1.2 肝臟異種移植 |
| 1.2.1 肝臟異種移植供體選擇 |
| 1.2.2 轉(zhuǎn)基因豬與肝臟異種移植 |
| 1.2.3 肝臟異種移植的瓶頸 |
| 1.3 肝臟異種移植血小板減少的作用機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1.3.1 體內(nèi)移植模型 |
| 1.3.2 體外灌注模型 |
| 1.3.3 體外實(shí)驗(yàn) |
| 1.4 CD47-SIRPA信號通路與異種移植 |
| 1.4.1 CD47-SIRPα信號通路 |
| 1.4.2 CD47-SIRP α信號通路維持血細(xì)胞穩(wěn)態(tài) |
| 1.4.3 CD47-SIRP α信號通路參與腫瘤發(fā)生發(fā)展 |
| 1.4.4 CD47-SIRP α信號通路介導(dǎo)異種細(xì)胞移植排斥 |
| 1.4.5 CD47-SIRP α信號通路與異種器官移植 |
| 1.5 本課題的立題依據(jù) |
| 第2章 小鼠原位肝移植模型的建立與優(yōu)化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2.2.3 主要手術(shù)器械和材料 |
| 2.2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 手術(shù)前準(zhǔn)備 |
| 2.3.2 供體手術(shù)(圖2.1) |
| 2.3.3 供肝修整(圖2.2) |
| 2.3.4 受體手術(shù) |
| 2.3.5 術(shù)后管理 |
| 2.3.6 蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin,H&E)染色 |
| 2.3.7 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.1 無肝期時(shí)間是手術(shù)成功的先決條件 |
| 2.4.2 手術(shù)后死亡原因分析 |
| 2.4.3 小鼠品系及膽道支架是小鼠肝移植術(shù)后遠(yuǎn)期生存的主要制約因素 |
| 2.4.4 通過優(yōu)化供體品系及膽道支架達(dá)到滿意的遠(yuǎn)期預(yù)后 |
| 2.5 討論 |
| 第3章 肝臟器官移植后CD47-SIRPA不兼容介導(dǎo)血細(xì)胞吞噬的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 3.2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和材料 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 小鼠血小板及紅細(xì)胞CD47表達(dá)檢測 |
| 3.3.2 小鼠原位肝移植 |
| 3.3.3 紅細(xì)胞計(jì)數(shù) |
| 3.3.4 血小板計(jì)數(shù) |
| 3.3.5 肝臟組織獲取及固定 |
| 3.3.6 免疫熒光 |
| 3.3.7 HE染色 |
| 3.3.8 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 肝臟移植后,CD47-SIRP α不兼容不能誘發(fā)貧血及嚴(yán)重的血小板減少 |
| 3.4.2 肝臟移植后,CD47-SIRP α不兼容產(chǎn)生的血小板減低不影響小鼠的存活 |
| 3.4.3 肝臟移植后,CD47-SIRP α不兼容不能誘發(fā)肝臟吞噬血小板 |
| 3.5 討論 |
| 第4章 異種肝臟移植后CD47-SIRP A不兼容介導(dǎo)血細(xì)胞吞噬的作用研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 4.2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑和材料 |
| 4.2.4 主要的流式檢測抗體 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 小鼠血小板及紅細(xì)胞CD47表達(dá)檢測 |
| 4.3.2 大鼠-小鼠異種原位肝移植 |
| 4.3.3 紅細(xì)胞計(jì)數(shù) |
| 4.3.4 血小板計(jì)數(shù) |
| 4.3.5 密度梯度離心法分離小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC) |
| 4.3.6 小鼠血清分離 |
| 4.3.7 移植肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞分離 |
| 4.3.8 小鼠脾臟單細(xì)胞懸液的制備 |
| 4.3.9 血小板流式檢測 |
| 4.3.10 PBMC、脾臟單細(xì)胞懸液、肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞流式細(xì)胞檢測 |
| 4.3.11 HE染色 |
| 4.3.12 小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測 |
| 4.3.13 統(tǒng)計(jì)方法 |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 大鼠-小鼠異種原位肝移植可作為異種肝移植的小動物模型 |
| 4.4.2 大鼠-小鼠異種原位肝移植術(shù)后產(chǎn)生強(qiáng)烈的排斥反應(yīng) |
| 4.4.3 大鼠-小鼠異種肝移植后排斥反應(yīng)主要為T細(xì)胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng) |
| 4.4.4 大鼠-小鼠異種肝移植后CD47-SIRP α不兼容對血細(xì)胞的吞噬作用 |
| 4.5 討論 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 本研究主要創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介及在學(xué)期間取得成績 |
| 致謝 |
（2）豬-猴肝移植中的凝血調(diào)節(jié)障礙問題（論文提綱范文）
| 1 豬-猴肝移植時(shí)出現(xiàn)嚴(yán)重的凝血功能紊亂 |
| 2 豬-猴肝移植凝血功能紊亂病理特征 |
| 3 丟失血小板的去向:聚集、激活或吞噬? |
| 3.1 體內(nèi)肝移植研究: |
| 3.2 離體血液灌注研究: |
| 3.3 體外細(xì)胞干預(yù)研究: |
| 4 凝血障礙相關(guān)干預(yù)方案 |
| 4.1 信號調(diào)節(jié)蛋白α (signal regulatory protein-α, SIRPα) -CD47: |
| 4.2 血栓調(diào)節(jié)蛋白 (thrombomodulin, TM) : |
| 4.3 組織因子途徑抑制物 (tissue factor pathway inhibitor, TFPI) : |
| 4.4 三磷酸腺苷二磷酸水解酶-1 (CD39) /胞外核苷酸酶 (CD73) : |
| 4.5 von Willebrand因子 (vWF) : |
| 4.6 人凝血酶原復(fù)合物 (human prothrombin concentrate complex, h PCC) : |
| 5 小結(jié) |
（3）基因修飾豬在異種器官移植中的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1 基因編輯技術(shù) |
| 2 基因修飾豬的構(gòu)建 |
| 3 基因修飾豬在異種器官移植中的研究與應(yīng)用 |
| 3.1 腎移植 |
| 3.2 肝移植 |
| 3.3 心臟移植 |
| 3.4 胰島移植 |
| 3.5 角膜移植 |
| 4 展望 |
（4）來氟米特延長大鼠—小鼠異種異位心臟移植物生存期的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 器官移植概述 |
| 1.1.1 器官移植簡史 |
| 1.1.2 器官供體短缺及可能的解決方案 |
| 1.2 異種移植 |
| 1.2.1 異種移植發(fā)展簡史 |
| 1.2.2 異種移植供體的選擇 |
| 1.2.3 異種移植的基礎(chǔ)研究及使用模型 |
| 1.2.4 嚙齒動物異種心臟移植模型及免疫排斥反應(yīng) |
| 1.2.5 小鼠為受體的異種心臟移植模型優(yōu)勢及制作方法概述 |
| 1.3 異種移植免疫排斥反應(yīng)及常用免疫抑制劑 |
| 1.3.1 異種移植排斥反應(yīng)及可能機(jī)制 |
| 1.3.2 異種移植免疫調(diào)節(jié)策略 |
| 1.3.3 異種移植常見免疫抑制劑及作用機(jī)制 |
| 1.4 本實(shí)驗(yàn)的研究目的、內(nèi)容、意義 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及手術(shù)器械 |
| 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 大鼠—小鼠異種心臟移植模型的制作 |
| 2.2.2 組織學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 2.2.3 細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 第一部分 大鼠——小鼠異種頸部心臟移植套管法模型的建立及其免疫排斥機(jī)制初探究 |
| 第三章 結(jié)果與討論 |
| 3.1 大鼠—小鼠頸部異位心臟移植套管法模型制作高重復(fù)率的關(guān)鍵 |
| 3.1.1 模型制作的關(guān)鍵點(diǎn) |
| 3.1.2 模型高重復(fù)率與供受體鼠體重差的關(guān)系 |
| 3.2 大鼠——小鼠頸部異位心臟移植套管法模型的免疫排斥機(jī)制探究 |
| 3.2.1 大鼠—小鼠異種心臟移植物生存期分析 |
| 3.2.2 大鼠—小鼠異種心臟移植物病理學(xué)分析 |
| 3.2.3 大鼠—小鼠異種心臟移植受體T細(xì)胞總?cè)杭癇細(xì)胞總?cè)鹤兓闆r |
| 3.2.4 大鼠—小鼠異種心臟移植受體Tfh細(xì)胞的變化情況 |
| 3.2.5 大鼠—小鼠異種心臟移植受體血清抗體的變化情況 |
| 3.3 本部分結(jié)果小結(jié) |
| 第二部分 來氟米特對小鼠為受體的異種心臟移植模型移植物生存期的影響 |
| 第四章 結(jié)果與討論 |
| 4.1 來氟米特對小鼠為受體的異種心臟移植作用研究 |
| 4.1.1 來氟米特對小鼠為受體的異種心臟移植物生存期的影響 |
| 4.1.2 來氟米特對小鼠為受體的異種心臟移植物病理學(xué)特征影響 |
| 4.1.3 來氟米特對小鼠受體的T細(xì)胞總?cè)杭癇細(xì)胞總?cè)旱挠绊?/td> |
| 4.1.4 來氟米特對小鼠受體血清抗體的影響 |
| 4.1.5 來氟米特減輕移植物內(nèi)特異性抗體的浸潤程度 |
| 4.2 本部分結(jié)果小結(jié) |
| 第五章 結(jié)論與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀碩士期間待發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（5）版納微型豬近交系5個(gè)潛在相關(guān)豬→人異種器官移植免疫排斥反應(yīng)基因的克隆、表達(dá)及功能生物信息學(xué)分析（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英漢縮略語名詞對照 |
| 1 引言 |
| 1.1 器官移植簡介 |
| 1.2 供臨床移植的器官供體嚴(yán)重缺乏 |
| 1.3 異種器官移植供體的選擇 |
| 1.4 異種器官移植概況 |
| 1.5 版納微型豬近交系(BMI)是潛在的豬→人異種器官移植供體 |
| 1.6 豬→人異種器官移植免疫排斥相關(guān)基因簡介 |
| 1.6.1 豬胞苷磷酸-N-乙酰神經(jīng)氨酸羥化酶(CMAH)基因研究進(jìn)展 |
| 1.6.2 豬氧化應(yīng)激反應(yīng)1(OXSR1)基因研究進(jìn)展 |
| 1.6.3 豬共刺激因子CD80 (CD80)基因研究進(jìn)展 |
| 1.6.4 肝臟去唾液酸糖蛋白受體1(ASGR1)基因研究進(jìn)展 |
| 1.6.5 β1,4-N-乙酰半乳糖氨基轉(zhuǎn)移酶2(B4GALNT2)基因研究進(jìn)展 |
| 1.7 本研究目的和意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 生物材料 |
| 2.1.2 購買試劑 |
| 2.1.2.1 RNA分析所需試劑 |
| 2.1.2.2 蛋白分析所需試劑 |
| 2.1.2.3 真核表達(dá)試劑 |
| 2.1.3 試劑配制 |
| 2.1.3.1 RNA分析試劑 |
| 2.1.3.2 蛋白分析試劑 |
| 2.1.3.3 真核表達(dá)試劑 |
| 2.1.4 儀器 |
| 2.2 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因擴(kuò)增和序列分析 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 組織總RNA的提取和制備 |
| 2.2.3 組織總RNA質(zhì)量和完整性檢測 |
| 2.2.4 cDNA第一鏈合成 |
| 2.2.5 設(shè)計(jì)并合成PCR引物 |
| 2.2.6 PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物檢測 |
| 2.2.7 PCR產(chǎn)物的回收純化 |
| 2.2.8 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2與pMD18-T克隆載體連接 |
| 2.2.9 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化、鑒定、質(zhì)粒提取和序列測定 |
| 2.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因的表達(dá)研究 |
| 2.3.1 qPCR分析基因的多組織表達(dá)情況 |
| 2.3.1.1 引物設(shè)計(jì) |
| 2.3.1.2 qPCR表達(dá)分析 |
| 2.3.2 Western Blot (WB)檢測CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2蛋白的表達(dá) |
| 2.3.2.1 組織總蛋白的提取 |
| 2.3.2.2 BCA法測總蛋白濃度 |
| 2.3.2.3 蛋白質(zhì)變性 |
| 2.3.2.4 制作SDS-PAGE凝膠 |
| 2.3.2.5 Western Blot檢測 |
| 2.3.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2真核表達(dá)分析 |
| 2.3.3.1 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALMT2真核表達(dá)引物設(shè)計(jì) |
| 2.3.3.2 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2真核表達(dá)序列擴(kuò)增 |
| 2.3.3.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2真核表達(dá)產(chǎn)物與pMD18-T重組克隆載體的構(gòu)建 |
| 2.3.3.4 pIRES2-AcGFP1質(zhì)粒的擴(kuò)增、提取與保存 |
| 2.3.3.5 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2與pIRES2-AcGFP1重組真核表達(dá)載體的構(gòu)建 |
| 2.3.3.6 培養(yǎng)轉(zhuǎn)染用豬腎上皮PK15細(xì)胞 |
| 2.3.3.7 真核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞 |
| 2.3.3.8 真核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的PK15細(xì)胞中總RNA的提取和cDNA的合成 |
| 2.3.3.9 半定量PCR檢測BMI CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2 mRNA表達(dá)量的差異 |
| 2.3.3.10 培養(yǎng)轉(zhuǎn)染用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC |
| 2.3.3.11 真核表達(dá)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUYEC細(xì)胞 |
| 2.4 蛋白質(zhì)序列的生物信息學(xué)分析 |
| 3 結(jié)果與分析 |
| 3.1 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因序列擴(kuò)增與分析結(jié)果 |
| 3.1.1 組織總RNA檢測結(jié)果 |
| 3.1.2 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因PCR擴(kuò)增結(jié)果 |
| 3.1.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因序列測定結(jié)果 |
| 3.1.3.1 CMAH基因序列 |
| 3.1.3.2 OXSR1基因序列 |
| 3.1.3.3 CD80基因序列 |
| 3.1.3.4 ASGR1基因序列測定結(jié)果 |
| 3.1.3.5 B4GALNT2基因序列測定結(jié)果 |
| 3.2 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2基因的表達(dá)分析結(jié)果 |
| 3.2.1 qPCR分析的CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2 mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.1.1 qPCR分析的CMAH mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.1.2 qPCR分析的OXSR1 mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.1.3 qPCR分析的CD80 mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.1.4 qPCR分析的ASGR1 mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.1.5 qPCR分析的B4GALNT2 mRNA多組織表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.2 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2蛋白表達(dá)情況 |
| 3.2.2.1 BCA法測總蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 |
| 3.2.2.2 Western Blot分析BMICMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2蛋白表達(dá)情況 |
| 3.2.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2真核表達(dá)結(jié)果 |
| 3.2.3.1 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2真核表達(dá)序列擴(kuò)增結(jié)果 |
| 3.2.3.2 pMD1 8-T-CMAH/OXSR1/CD80/ASGR1/B4GALNT2(真核表達(dá)序列)重組質(zhì)粒菌液PCR和雙酶切鑒定結(jié)果 |
| 3.2.3.3 pIRES2-AcGFP1質(zhì)粒的鑒定 |
| 3.2.3.4 pIRES2-AcGFP1、pMD18-T-CMAH/OXSR1/CD80/ASGR1/B4GALNT2(真核表達(dá)序列)真核表達(dá)序列雙酶切結(jié)果 |
| 3.2.3.5 真核表達(dá)重組質(zhì)粒菌液PCR和雙酶切鑒定結(jié)果 |
| 3.2.3.6 真核表達(dá)重組質(zhì)粒在真核細(xì)胞中的表達(dá) |
| 3.2.3.7 細(xì)胞總RNA電泳檢測結(jié)果 |
| 3.2.3.8 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2細(xì)胞mRNA表達(dá)分析結(jié)果 |
| 3.3 CMAH、OXSR1、CD80、ASGR1和B4GALNT2蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.1 CMAH蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.1.1 CMAH蛋白質(zhì)序列的基本信息分析 |
| 3.3.1.2 CMAH蛋白質(zhì)序列的特征信息分析 |
| 3.3.1.3 CMAH蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)分析 |
| 3.3.1.4 CMAH蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 |
| 3.3.2 OXSR1蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.2.1 OXSR1蛋白質(zhì)序列的基本信息分析 |
| 3.3.2.2 OXSR1蛋白質(zhì)序列的特征信息分析 |
| 3.3.2.3 OXSR1蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)分析 |
| 3.3.2.4 OXSR1蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 |
| 3.3.3 CD80蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.3.1 CD80蛋白質(zhì)序列的基本信息分析 |
| 3.3.3.2 CD80蛋白質(zhì)序列的特征信息分析 |
| 3.3.3.3 CD80蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)分析 |
| 3.3.3.4 CD80蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 |
| 3.3.4 ASGR1蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.4.1 ASGR1蛋白質(zhì)序列的基本信息分析 |
| 3.3.4.2 ASGR1蛋白質(zhì)序列的特征信息分析 |
| 3.3.4.3 ASGR1蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)分析 |
| 3.3.4.4 ASGR1蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 |
| 3.3.5 B4GALNT2蛋白質(zhì)功能生物信息學(xué)分析 |
| 3.3.5.1 B4GALNT2蛋白質(zhì)序列的基本信息分析 |
| 3.3.5.2 B4GALNT2蛋白質(zhì)序列的特征信息分析 |
| 3.3.5.3 B4GALNT2蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)分析 |
| 3.3.5.4 B4GALNT2蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析 |
| 4 討論 |
| 4.1 所研究基因mRNA水平的多組織表達(dá)差異分析 |
| 4.2 所研究基因?qū)?yīng)蛋白質(zhì)的組織表達(dá)分析 |
| 4.3 所研究基因細(xì)胞水平的真核表達(dá)分析 |
| 4.4 所研究基因編碼蛋白質(zhì)的功能生物信息學(xué)分析 |
| 4.5 問題及展望 |
| 5 小結(jié) |
| 5.1 主要研究結(jié)果 |
| 5.2 本研究的創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 在讀研究生期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文 |
| 致謝 |
（6）異種肝移植的研究和進(jìn)展（論文提綱范文）
| 異種肝移植免疫排異研究 |
| 異種肝移植凝血功能障礙研究 |
| 建立異位肝移植的新術(shù)式 |
| 生物安全性的研究 |
| 前景展望 |
（7）人源化基因修飾豬內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文對照表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 異種器官移植的歷史和現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 異種器官移植的歷史概述 |
| 1.1.2 豬作為異種移植供體的優(yōu)點(diǎn)及問題 |
| 1.1.3 豬到非人靈長類的異種移植HAR的解決方案 |
| 1.1.4 異種器官移植的基因修飾豬研究進(jìn)展 |
| 1.2 內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及特征 |
| 1.2.1 內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能 |
| 1.2.2 內(nèi)皮細(xì)胞的表面抗原 |
| 1.2.3 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展簡況與應(yīng)用 |
| 1.2.4 內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)特性及培養(yǎng)的條件 |
| 1.3 端粒、端粒酶與細(xì)胞永生化 |
| 1.3.1 端粒與細(xì)胞的衰老和危機(jī) |
| 1.3.2 端粒酶與細(xì)胞衰老 |
| 1.3.3 永生化細(xì)胞 |
| 1.4 本研究的目的和意義 |
| 第二章 豬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定及永生化 |
| 2.1 主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1.3 結(jié)果與分析 |
| 2.2 hTERT基因轉(zhuǎn)染主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.3 結(jié)果與分析 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 豬肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)分析 |
| 3.1 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.1.3 結(jié)果與分析 |
| 3.2 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)與特異性表達(dá)分析 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2.3 結(jié)果與分析 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 基因修飾豬內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)的流式分析 |
| 4.1 敲除GGTA1、ASGR1、CMAH基因的表達(dá)分析 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.1.3 結(jié)果與分析 |
| 4.2 轉(zhuǎn)入hCD46基因的表達(dá)分析 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.2.3 結(jié)果與分析 |
| 4.3 討論 |
| 第五章 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡介 |
| 碩士期間發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（9）異種胰島細(xì)胞分離及生物活性的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料與方法 |
| 2.1 研究對象 |
| 2.2 主要儀器及試劑 |
| 2.2.1 主要儀器 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.2.3 主要試劑的配制 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 第3章 結(jié)果 |
| 3.1 羅非魚、中華鱉胰腺大體解剖及形態(tài)學(xué)觀察 |
| 3.2 分離后羅非魚、中華鱉胰島純度測定 |
| 3.3 胰島細(xì)胞活性測定 |
| 3.4. 體外胰島素釋放誘導(dǎo) |
| 第4章 討論 |
| 第5章 結(jié)論與展望 |
| 5.1 結(jié)論 |
| 5.2 進(jìn)一步的研究工作 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附圖 |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 |
（10）異種肝移植的排斥機(jī)制（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 資料和方法 |
| 1.1 資料來源 |
| 1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.3 質(zhì)量評估 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 納入文獻(xiàn)基本情況 |
| 2.2 結(jié)果描述 |
| 2.2.1 HAR |
| 2.2.2 AVR |
| 2.2.3 ACR |
| 3 免疫耐受在異種肝移植中的應(yīng)用 |
四、異種肝移植中補(bǔ)體作用及抑制策略（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]肝臟異種移植后CD47-SIRPα不兼容介導(dǎo)血細(xì)胞吞噬作用的研究[D]. 李婷. 吉林大學(xué), 2020(01)
- [2]豬-猴肝移植中的凝血調(diào)節(jié)障礙問題[J]. 張玄,李霄,王權(quán)成,張虹,白鴿,陶開山,竇科峰. 實(shí)用器官移植電子雜志, 2018(05)
- [3]基因修飾豬在異種器官移植中的研究進(jìn)展[J]. 陳鵬飛,聶惠蓉,戴一凡,蔡志明,牟麗莎. 中華移植雜志(電子版), 2017(02)
- [4]來氟米特延長大鼠—小鼠異種異位心臟移植物生存期的研究[D]. 李亞光. 廈門大學(xué), 2017(07)
- [5]版納微型豬近交系5個(gè)潛在相關(guān)豬→人異種器官移植免疫排斥反應(yīng)基因的克隆、表達(dá)及功能生物信息學(xué)分析[D]. 霍海龍. 云南大學(xué), 2016(06)
- [6]異種肝移植的研究和進(jìn)展[J]. 竇科峰,紀(jì)洪辰. 外科理論與實(shí)踐, 2016(03)
- [7]人源化基因修飾豬內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[D]. 魏靜. 西北民族大學(xué), 2016(03)
- [8]異種肝移植凝血功能調(diào)節(jié)障礙的免疫生物學(xué)機(jī)制[J]. 竇科峰,李霄,陶開山. 中華器官移植雜志, 2013(08)
- [9]異種胰島細(xì)胞分離及生物活性的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 丁利民. 南昌大學(xué), 2011(05)
- [10]異種肝移植的排斥機(jī)制[J]. 丁利民,時(shí)軍. 中國組織工程研究與臨床康復(fù), 2010(53)
標(biāo)簽：排斥反應(yīng)論文; 活體肝移植論文; 免疫抑制論文; 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)論文; 細(xì)胞免疫論文;