一、Changes of expression of Fas and FasL protein in rats after renal ischemia/reperfusion injury（論文文獻(xiàn)綜述）
徐嘉元[1]（2021）在《ADSCs改善大鼠肝IRI合并部分切除損傷最佳移植時機(jī)的研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理隨著臨床上復(fù)雜肝臟外科手術(shù)的不斷增多,肝臟-缺血再灌注損傷（Ischemia reperfusion injury,IRI）成為術(shù)中不可避免的并發(fā)癥之一,肝IRI與局部和全身性損傷有關(guān),是肝臟移植或部分切除術(shù)后發(fā)生肝功能障礙或肝衰竭的主要因素。因此,如何對肝IRI損傷進(jìn)行防治,找出針對圍手術(shù)期肝IRI病理生理機(jī)制的治療策略具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價值。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）是一種多能干細(xì)胞,富含于脂肪組織中,可采用抽脂術(shù)或微創(chuàng)手術(shù)進(jìn)行分離。近年來發(fā)現(xiàn)ADSCs具有旁分泌活性,分泌各種刺激有絲分裂和血管生成因子來促進(jìn)組織修復(fù),通過抑制凋亡、抑制氧化應(yīng)激或調(diào)節(jié)免疫減輕IRI,作為一種潛在治療疾病的方法,在臨床上被廣泛應(yīng)用于再生醫(yī)學(xué)。干細(xì)胞移植的最佳時機(jī)仍是近年來的研究熱點(diǎn),選擇合適與否的移植時機(jī),直接與干細(xì)胞在組織內(nèi)的存活率、移植后生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮、改善肝功能程度密切相關(guān)。目前國內(nèi)外關(guān)于肝IRI合并部分切除中干細(xì)胞最佳移植時機(jī)的報道較少,因此本課題建立大鼠70%肝IRI合并部分切除損傷模型,觀察不同時機(jī)移植ADSCs對術(shù)后肝細(xì)胞凋亡的影響,探討ADSCs的最佳移植時機(jī)。將30只SD大鼠隨機(jī)分為5組:假手術(shù)組（Sham組,n=6）、模型組（IRI+PH組,n=6）、ADSCs術(shù)前2 h移植組（Pre-2h組,n=6）、ADSCs術(shù)后即刻移植組（0h組,n=6）、ADSCs術(shù)后6 h移植組（Post-6h組,n=6）。各組大鼠均術(shù)前禁食8～12 h,不禁水。Sham組沿大鼠腹正中線切開,暴露肝臟,僅用濕棉簽翻動肝葉,然后關(guān)腹。IRI+PH行70%部分肝（肝中葉+左外葉）缺血30 min,于再灌注前切除左外葉（占全肝的30%）。移植ADSCs的各組在各個時間點(diǎn)通過尾靜脈緩慢注射含有第3～4代ADSCs（約2×106個）的細(xì)胞懸液0.6 m L,Sham組和IRI+PH組術(shù)后即刻通過尾靜脈緩慢的注射PBS溶液0.6 m L。各組大鼠分別于再灌注24 h后采集血液樣本和肝組織樣本。試劑盒檢測肝功能指標(biāo)ALT、AST、ALP的變化,TUNEL試劑盒法檢測肝細(xì)胞凋亡指數(shù)率（Apoptotic index,AI）,肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化用透射電鏡觀察,應(yīng)用RT-q PCR和Western blot方法檢測肝組織中Bax、Bcl-2、Fas、Fasl、Apaf-1、AIF-1、P53 mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白相對表達(dá)量,酶活性檢測試劑盒檢測肝臟中的Caspase-3、8、9活性。本研究成功建立了大鼠肝IRI合并部分切除損傷模型。實(shí)驗室檢測結(jié)果如下:（1）肝功能檢測結(jié)果:與Sham組相比,IRI+PH組ALT、AST、ALP水平極顯著升高（p<0.01）;Pre-2h組和Post-6h組AST水平有顯著差異（p<0.05）。與IRI+PH組相比,0h組、Pre-2h組及Post-6h組ALT、AST水平極顯著降低（p<0.01）。（2）肝細(xì)胞凋亡指數(shù)率結(jié)果:與Sham組相比,IRI+PH組、Pre-2h組、0h組和Post-6h組凋亡指數(shù)顯著或極顯著升高（p<0.01或p<0.05）。與IRI+PH組比,Pre-2h組、0h組和Post-6h組凋亡指數(shù)顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）。（3）肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化:與Sham組相比,IRI+PH組肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷嚴(yán)重,細(xì)胞核核仁消失,核膜變形皺縮,染色質(zhì)嚴(yán)重邊集化且異染色質(zhì)增多,線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重腫脹擴(kuò)張,線粒體嵴斷裂消失。與IRI+PH組相比,0h組、Pre-2h組及Post-6h組損傷程度均有所改善。（4）凋亡相關(guān)因子的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)變化:與Sham組相比,IRI+PH組、Pre-2h組和Post-6h組中Fas、Fasl、Apaf-1、AIF-1、P53的mRNA和蛋白水平顯著或極顯著升高（p<0.01或p<0.05）,且IRI+PH組、Pre-2h組和Post-6h組中Bax/Bcl-2 mRNA比值或蛋白比值顯著或極顯著升高（p<0.01或p<0.05）;0h組中Bax、Fas、P53的mRNA水平極顯著升高（p<0.01）。與IRI+PH組相比,Pre-2h組中Fas、Apaf-1的mRNA水平顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）;Post-6h組中Fas、Apaf-1、AIF-1、P53基因和蛋白水平顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）;0h組中Fas、Fasl、Apaf-1、AIF-1、P53的mRNA和蛋白水平顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）;Pre-2h組、0h組和Post-6h組Bax/Bcl-2 mRNA比值或蛋白比值顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）。（5）Caspase活性檢測結(jié)果:與Sham組相比,IRI+PH組、Pre-2h組和Post-6h組肝組織中Caspase-3、8、9酶活性極顯著升高（p<0.01）。與IRI+PH組相比,Post-6h組中、0h組和Pre-2h組中肝組織中Caspase-3、8、9酶活性顯著或極顯著降低（p<0.01或p<0.05）。綜上所述,結(jié)論如下:（1）本研究成功建立了大鼠70%肝IRI合并部分切除模型,誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡。（2）通過肝功能檢測、電鏡掃描及TUNEL分析發(fā)現(xiàn)ADSCs能顯著改善大鼠肝損傷后的肝細(xì)胞形態(tài),減少肝細(xì)胞凋亡的數(shù)目,促進(jìn)術(shù)后肝功能恢復(fù),對大鼠肝損傷具有保護(hù)作用。（3）ADSCs能夠通過下調(diào)凋亡通路中關(guān)鍵信號分子Bax、Fas、Fasl、Apaf-1、AIF-1、P53 mRNA和蛋白的表達(dá)水平,抑制Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶活性,并促進(jìn)Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平,抑制細(xì)胞凋亡,保護(hù)肝組織。（4）術(shù)后即刻、術(shù)前2 h和術(shù)后6 h移植ADSCs對比發(fā)現(xiàn),術(shù)后即刻移植ADSCs在肝損傷模型中對肝細(xì)胞的保護(hù)效果最佳。
張亮[2]（2021）在《基于中醫(yī)象思維探討腎衰飲干預(yù)慢性腎功能衰竭大鼠的機(jī)制研究》文中認(rèn)為目的:基于中醫(yī)象思維研究腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信號通路、Fas/Fas L介導(dǎo)的凋亡途徑、PI3K/Akt信號通路的影響,探討該方防治慢性腎功能衰竭的作用機(jī)制。材料與方法:選取6周齡SPF級健康雄性SD大鼠84只,隨機(jī)抽取12只大鼠為正常組,其余72只為造模組。造模組大鼠應(yīng)用腺嘌呤（200mg/（kg·d））灌胃3周建立慢性腎功能衰竭大鼠模型,將造模成功大鼠再隨機(jī)分為模型組、腎衰飲組、尿毒清組、P13K抑制劑組（LY組）及腎衰飲+LY組。正常組和模型組予0.9%Nacl溶液8ml/（kg·d）灌胃。腎衰飲組給予中藥復(fù)方湯劑腎衰飲煎劑按生藥量33.3g/（kg·d）灌胃。尿毒清組給予尿毒清顆粒以2.25g/（kg·d）濃度灌胃。LY組給予腹腔注射P13K抑制劑（LY294002）稀釋液50mg/kg,周一次。腎衰飲+LY組在給予腎衰飲煎劑按生藥量33.3g/（kg·d）灌胃基礎(chǔ)上腹腔注射LY294002稀釋液50mg/kg,周一次。以上各組大鼠均連續(xù)用藥4周。各組分別留取大鼠血清及腎組織,檢測各項指標(biāo)。實(shí)驗一:觀察大鼠一般狀態(tài),肉眼觀察腎臟外觀形態(tài),光鏡下觀察大鼠腎組織病理改變及TUNEL染色法檢測凋亡細(xì)胞情況。全自動生化分析儀檢驗大鼠血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。實(shí)驗二:免疫印跡法（Western Blot法）和免疫組織化學(xué)法檢測大鼠腎臟組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗三:Western Blot法檢測腎臟組織Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗四:Western Blot法檢測腎臟組織Akt、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟形態(tài)學(xué)及腎功能的影響1.1腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠一般狀態(tài)的影響正常組:精神狀態(tài)良好,毛色光澤,較少有脫毛現(xiàn)象,活動正常,反應(yīng)靈活,每日進(jìn)食量及飲水量均正常,墊料氣味較淡,大鼠便質(zhì)如常排便未見異常。模型組:體重明顯下降,精神狀態(tài)萎靡,毛色干枯晦暗,并出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象,反應(yīng)遲鈍,活動減少,進(jìn)食量減少,飲水量增加,墊料氣味臭穢,稀便。尿毒清組:體重不同程度下降,精神狀態(tài)萎靡,毛色干枯、脫落,精神中度萎靡,反應(yīng)略有遲鈍,活動減少,進(jìn)食量減少,飲水量增多,墊料氣味臭穢,稀便。腎衰飲組:體重不同程度下降,精神輕度萎靡,毛色干枯脫毛現(xiàn)象較輕,反應(yīng)尚可,活動度尚可,進(jìn)食量尚可,飲水量略增加,墊料氣味臭穢,可見便質(zhì)如常排便未見異常。1.2腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟形態(tài)學(xué)的影響1.2.1腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟組織外觀形態(tài)的影響與正常組比較,其余各組大鼠腎臟體積均不同程度的增大,其中模型組改變最為明顯,尿毒清組其次,最后為腎衰飲組。與正常組比較,模型組大鼠腎臟組織表面均呈彌漫性細(xì)顆粒狀改變,凹凸不平,被膜粘連,不易剝離,且外觀顏色均明顯發(fā)白,肉眼觀察外觀顏色發(fā)白程度:模型組>尿毒清組>腎衰飲組>正常組。沿腎門縱行剖開,除空白組外各組腎組織切面處均可見腎皮質(zhì)不同程度變薄,且皮髓質(zhì)界限欠清晰,其中模型組最明顯,其他各組肉眼觀察無明顯區(qū)別。1.2.2腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠體質(zhì)量及腎指數(shù)的影響各組大鼠實(shí)驗前及造模第1周體質(zhì)量比較無明顯差異;與正常組比較,第2周、第3周造模組大鼠體質(zhì)量明顯降低（P<0.05）;治療期間:第1周:與正常組比較,模型組、尿毒清組和腎衰飲組大鼠體質(zhì)量明顯降低（P<0.01）;第2周和第3周:與正常組比較,模型組與尿毒清組大鼠體質(zhì)量明顯降低（P<0.05）,腎衰飲組無明顯差異;與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組大鼠體質(zhì)量無明顯差異;第4周:與正常組比較,模型組、尿毒清組和腎衰飲組大鼠體質(zhì)量明顯降低（P<0.01）,腎指數(shù)明顯升高（P<0.01）,與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組大鼠體質(zhì)量明顯升高（P<0.05）,腎指數(shù)降低（尿毒清組P<0.01,腎衰飲組P<0.05）,尿毒清組與腎衰飲組大鼠體質(zhì)量、腎指數(shù)比較無明顯差異。1.2.3腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟病理學(xué)的影響蘇木精-伊紅（HE）染色結(jié)果:正常組可見腎小球、腎小管、系膜結(jié)構(gòu)正常,間質(zhì)未見增寬,無炎性細(xì)胞浸潤。模型組可見腎小球囊腔變大,部分腎小管萎縮,小管的管壁薄厚不勻,腎小管上皮細(xì)胞彌漫空泡變性,成纖維細(xì)胞增多,系膜細(xì)胞增生明顯,腎小球周圍可見大量炎性細(xì)胞浸潤。尿毒清組可見腎小管上皮細(xì)胞空泡變性減輕,系膜細(xì)胞輕度增生,部分區(qū)域伴有炎性細(xì)胞浸潤。腎衰飲組可見成纖維細(xì)胞減少,系膜細(xì)胞輕度增生,部分區(qū)域伴有炎性細(xì)胞浸潤。腎衰飲組在腎小管上皮細(xì)胞空泡變性及系膜細(xì)胞增生程度均低于尿毒清組。1.3腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠血清Scr、BUN水平的影響與正常組比較,模型組血清Scr、BUN水平明顯升高（P<0.01）;與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組血清Scr、BUN水平均明顯降低（P<0.01）,尿毒清組和腎衰飲組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。2腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟細(xì)胞凋亡情況的影響TUNEL染色后顯微鏡下觀察:正常組大鼠腎臟組織中細(xì)胞正常,未見陽性細(xì)胞;模型組大鼠腎臟細(xì)胞凋亡數(shù)量明顯增多,且主要分布在髓質(zhì)區(qū);尿毒清組和腎衰飲組大鼠腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)較模型組降低（P<0.01）;尿毒清組和腎衰飲組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平的影響ELISA法檢測大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平:與正常組比較,模型組大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平明顯升高（P<0.01）;與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）;與尿毒清組比較,腎衰飲組大鼠血清IL-6、TNF-α表達(dá)水平降低（P<0.05）。4腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)水平的影響Western blot法檢測腎臟組織內(nèi)TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)水平:與正常組相比,模型組大鼠腎臟組織中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P<0.01）;與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組大鼠腎臟組織中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）,尿毒清組和腎衰飲組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠腎臟組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)情況:光鏡下觀察,正常組腎臟組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)為陰性,模型組TLR4、MyD88、NF-κB蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá),尿毒清顆粒和腎衰飲干預(yù)后均能不同程度的減少TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表達(dá)（P<0.01）,且兩組之間無明顯差異。5腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟組織Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)的影響Western blot法檢測腎臟組織Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá):與正常組比較,模型組大鼠腎臟組織Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)水平顯著增高（P<0.01）;與模型組比較,尿毒清組和腎衰飲組大鼠腎臟組織Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P<0.01）;尿毒清組和腎衰飲組相比差異均無顯著性意義。6腎衰飲對慢性腎功能衰竭大鼠腎臟組織PI3K/Akt信號通路蛋白表達(dá)的影響各組大鼠腎臟組織Akt蛋白表達(dá)無明顯差異。與正常組比較,模型組大鼠腎臟組織p-Akt蛋白表達(dá)水平降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值降低（P<0.01）;與模型組比較,P13K抑制劑組（LY組）大鼠腎臟組織p-Akt蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）,p-Akt/Akt比值顯著降低（P<0.01）;與LY組比較,腎衰飲+LY組大鼠腎臟組織p-Akt蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.01）,p-Akt/Akt比值顯著升高（P<0.01）。結(jié)論:1基于中醫(yī)象思維,根據(jù)腎藏象的病理之象,提出脾腎虛損是慢性腎功能衰竭發(fā)生和發(fā)展的病理基礎(chǔ),是產(chǎn)生毒邪的根源;毒邪（濕毒、痰毒、瘀毒）是加重病情進(jìn)展惡化及遷延不愈的重要外因,證屬本虛標(biāo)實(shí)。2擬“抗毒、解毒、排毒”三法于一方,腎衰飲健脾益腎扶正以抗毒;祛濕滌痰化瘀以解毒;通腑泄?jié)嵋耘哦?攻補(bǔ)兼施。3根據(jù)以上病因病機(jī)、治則治法,實(shí)驗研究表明:（1）腎衰飲能夠明顯改善腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭模型大鼠的一般狀態(tài)及腎功能,減輕腎臟組織病理損傷,抑制腎臟炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步抑制腎臟纖維化,達(dá)到治療慢性腎功能衰竭的目的;（2）腎衰飲能夠降低腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭模型大鼠腎臟組織TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá),從而抑制炎癥反應(yīng),減輕腎臟炎性損傷;（3）腎衰飲能夠降低腺嘌呤誘導(dǎo)的慢性腎功能衰竭模型大鼠Fas、Fas L、Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)水平,對腎臟細(xì)胞凋亡起到抑制作用;（4）腎衰飲可能通過激活PI3K/Akt信號通路,進(jìn)一步抑制其下游的效應(yīng)靶點(diǎn)Fas L來抑制慢性腎功能衰竭大鼠腎臟細(xì)胞凋亡。
呂建芳[3]（2021）在《腎精虧虛對SD雄性大鼠骨髓造血功能的影響及其機(jī)制研究》文中提出目的建立SD雄性大鼠腎精虧虛模型,以骨髓造血干細(xì)胞為切入點(diǎn),觀察其凋亡情況,研究腎精虧虛對骨髓造血功能的影響,探討其作用機(jī)制。觀察龜鹿二仙膠對腎精虧虛骨髓抑制性貧血大鼠的治療效果,通過其對大鼠的血象、骨髓象以及骨髓造血干細(xì)胞凋亡的影響,分析其“從腎論治”治療腎精虧虛引起的骨髓抑制性貧血的作用機(jī)制。方法1、理論研究:系統(tǒng)回顧古今文獻(xiàn),闡述腎精、髓、血的中醫(yī)理論研究及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究,立足腎精、髓以及血之間的關(guān)系,為腎精虧虛導(dǎo)致貧血提供中醫(yī)理論依據(jù)。剖析龜鹿二仙膠的組方以及總結(jié)補(bǔ)腎填精法的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用。2、動物實(shí)驗:SD雄性大鼠30只,SPF級,8周齡,體重270±20g,隨機(jī)分為空白組、模型組、補(bǔ)腎組,每組10只。采用模擬地震振動、光電刺激復(fù)合應(yīng)激恐嚇以及長期小劑量苯皮下注射和短期大劑量環(huán)磷酰胺腹腔注射,建立腎精虧虛大鼠模型。整個造模過程用時49天。前4周模型組和補(bǔ)腎組大鼠按體質(zhì)量皮下隔天注射苯（lm L/kg）,第25d開始用環(huán)磷酰胺（25mg/kg）腹腔注射,連續(xù)注射3d,同時每天用仿地震平臺模擬地震振動（2次/日,共15-20分鐘）以及光電刺激箱足底電擊刺激（每日不定時1-3次）?？瞻捉M正常喂養(yǎng)。在第4周最后一天隨機(jī)抽取模型組和補(bǔ)腎組各1只大鼠查外周血象及血清睪酮,檢測模型是否成功。第29天開始,補(bǔ)腎組用龜鹿二仙膠灌胃,根據(jù)大鼠與人體表面積折算劑量比值,灌胃劑量為11g/Kg,分兩次灌胃。給藥期間每隔一天稱重,根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量,連續(xù)21天。模型組和空白組大鼠給予等量去離子水灌胃,連續(xù)21天。造模過程中,每天觀察各組大鼠的皮毛、進(jìn)食量、活動狀態(tài)等一般情況。造模結(jié)束后,每組大鼠通過眼內(nèi)眥靜脈取血法測外周靜脈血紅細(xì)胞（RBC）和血紅蛋白（HGB）,觀察其貧血程度;采用ELISA檢測血清睪酮T以及用精子分析儀檢測附睪精子質(zhì)量,評價其生殖功能;取睪丸組織包埋切片,HE染色,觀察其形態(tài)學(xué)的改變;分離脛骨,取新鮮骨髓,用PBS制備單細(xì)胞懸液,采用血紅細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)單核細(xì)胞數(shù);取新鮮骨髓,制成骨髓涂片,瑞氏-吉姆薩染色,觀察骨髓細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;股骨包埋、切片,HE染色,觀察骨髓增生情況;取新鮮骨髓包埋超薄切片,觀察其超微病理改變。采用ELISA法檢測各組EPO的含量;用流式細(xì)胞儀以及TUNEL法檢測各組大鼠骨髓組織CD34+細(xì)胞凋亡情況;采用WB法檢測各組大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量;采用RT-PCR法檢測各組大鼠骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Faslm RNA的表達(dá)水平。3、統(tǒng)計學(xué)處理:各組組間進(jìn)行比較,所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（sx?）表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,單因素方差分析組間比較,采用t檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果（1）與正常組相比,模型組大鼠出現(xiàn)毛發(fā)干枯、聳立不齊、進(jìn)食量下降,活動度減少等現(xiàn)象。補(bǔ)腎組大鼠毛發(fā)恢復(fù)光澤、進(jìn)食量增加、活動度增加,腎虛癥狀得到改善。（2）與空白組比較,模型組血紅細(xì)胞（RBC）數(shù)量、血紅蛋白（HGB）含量從14d開始下降,有顯著性差異（p<0.01）;與模型組比較,補(bǔ)腎組血紅細(xì)胞（RBC）數(shù)量、血紅蛋白（HGB）含量從42d開始升高,有顯著性差異（p<0.05）。（3）與空白組比較,模型組血清EPO含量下降,有顯著性差異（P<0.01）;與模型組比較,補(bǔ)腎組血清EPO含量升高,有顯著性差異（P<0.01）。（4）睪丸病理切片顯示,空白組睪丸曲細(xì)精管被膜完整,支持細(xì)胞形態(tài)正常,曲細(xì)精管管腔內(nèi)可見大量精子;模型組曲細(xì)精管生精上皮明顯變薄,細(xì)胞層次雜亂,支持細(xì)胞形態(tài)斷裂,曲細(xì)精管管腔內(nèi)精子細(xì)胞、精子數(shù)量明顯減少;補(bǔ)腎組曲細(xì)精管被膜完整,細(xì)胞排布緊密,生精細(xì)胞數(shù)略有減少,部分區(qū)域可見脫落的少量生精細(xì)胞,但結(jié)構(gòu)清楚,層次較分明,管腔內(nèi)有較多精子。（5）與空白組比較,模型組附睪精子濃度及精子活力均下降（P<0.05）;模型組血清T含量明顯下降（P<0.01）;與模型組比較,補(bǔ)腎組附睪精子濃度及精子活力均明顯升高（P<0.01）,補(bǔ)腎組血清T含量升高,有顯著性差異（P<0.01）。（6）骨髓象顯示,與空白組比較,模型組骨髓有核細(xì)胞數(shù)量減少（P<0.05）;與模型組比較補(bǔ)腎組骨髓有核細(xì)胞數(shù)量增加,有顯著性差異（P<0.05）。骨髓涂片可見空白組骨髓造血結(jié)構(gòu)完整,組織豐富;模型組骨髓增生降低,巨核細(xì)胞減少;補(bǔ)腎組造血網(wǎng)織紅細(xì)胞雖增加,但仍沒有恢復(fù)正常水平。骨髓病理切片顯示:空白組造血細(xì)胞多且分布均勻,骨髓造血組織支架結(jié)構(gòu)緊密,脂肪細(xì)胞數(shù)量少;模型組造血組織面積減少,巨核細(xì)胞少見,造血細(xì)胞數(shù)目減少,內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等非造血細(xì)胞數(shù)目增多;補(bǔ)腎組造血結(jié)構(gòu)組織基本修復(fù),巨核細(xì)胞增多,造血細(xì)胞增加,仍可見脂肪細(xì)胞等非造血細(xì)胞。（7）骨髓超微病理形態(tài)學(xué)檢測示:空白組大鼠可見造血干細(xì)胞為圓形,單核,核大,細(xì)胞質(zhì)少,可見線粒體,線粒體內(nèi)膜折疊成較深的嵴。模型組大鼠造血干細(xì)胞可見線粒體數(shù)量減少,嵴變淺或消失,線粒體腫脹,可見凋亡小體。補(bǔ)腎組大鼠造血干細(xì)胞有核細(xì)胞增多,凋亡小體少見,線粒體的數(shù)量增多,線粒體嵴有所恢復(fù)。（8）與空白組比較,骨髓石蠟包埋切片TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)模型組可見較多凋亡CD34+細(xì)胞的綠色熒光點(diǎn),流式細(xì)胞儀檢測骨髓CD34+細(xì)胞凋亡的數(shù)量明顯增加（P<0.05）;與模型組比較,補(bǔ)腎組石蠟包埋切片TUNE L法檢測骨髓組織綠色熒光點(diǎn)數(shù)量減少,流式細(xì)胞儀檢測CD34+細(xì)胞凋亡的數(shù)量降低（P<0.05）。（9）WB檢測大鼠脛骨骨髓新鮮組織中Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白表達(dá)結(jié)果與空白組比較,模型組Bcl-2蛋白含量表達(dá)降低（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fas和Fasl蛋白含量表達(dá)均升高（P<0.05）。與模型組比較,補(bǔ)腎組Bcl-2蛋白含量表達(dá)升高（P<0.05）,Bax、caspase-3、Fa s和Fasl蛋白含量表達(dá)均減少（P<0.05）。（10）RT-PCR檢測大鼠脛骨骨髓新鮮組織Bcl-2、Bax、caspase-3、Fa s和Faslm RNA含量與空白組比較,模型組Bcl-2m RNA含量降低（P<0.05）,Baxm RNA、caspase-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均升高（P<0.05）。與模型組比較,補(bǔ)腎組Bcl-2m RNA蛋白含量升高（P<0.05）,Baxm RNA、caspa se-3m RNA、Fasm RNA和Faslm RNA含量均減少（P<0.05）。結(jié)論“腎藏精,生髓,化血”,腎藏先天之精,腎氣促脾胃化生水谷精微而藏之,而“精血同源”,腎精是化生血液的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。腎精虧虛則血液化生無源而導(dǎo)致血虛。腎主人體發(fā)育,也主骨髓生長發(fā)育,腎精充足,則骨髓充盈,反之腎精不足,骨髓空虛。骨髓具有化生血液的作用,髓化生血液主要取決于腎的功能,腎精虧虛則會導(dǎo)致骨髓功能低下,化生血液出現(xiàn)障礙而致血虛。本課題基于中醫(yī)“腎藏精、精生髓,髓生血,精化血”理論,以腎精虧虛則會導(dǎo)致血虛為實(shí)驗的病理依據(jù),以造血干細(xì)胞作為切入點(diǎn)。研究腎精虧虛對造血功能的影響及其作用機(jī)制。以“恐傷腎”傳統(tǒng)病因造模結(jié)合藥物干預(yù)病理造模,采用模擬地震平臺復(fù)合光電刺激法結(jié)合長期小劑量的苯和短期大劑量的環(huán)磷酰胺藥物干預(yù),建立腎精虧虛大鼠模型。大鼠出現(xiàn)腎虛癥狀,血液檢查可以看到血紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量降低,血清EPO含量下降,血清睪酮含量降低。骨髓象可以見到骨髓有核細(xì)胞數(shù)量減少,骨髓造血組織結(jié)構(gòu)疏松、造血面積減少、造血細(xì)胞減少。超微病理形態(tài)學(xué)可以觀察到骨髓造血干細(xì)胞線粒體腫脹,線粒體嵴變淺,出現(xiàn)凋亡小體的超微病理改變。龜鹿二仙膠灌胃治療后,能夠改善腎精虧虛的癥狀,促進(jìn)血紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量增高,血清EPO含量升高,血清睪酮含量增加,骨髓有核細(xì)胞數(shù)量增加,骨髓造血組織得到修復(fù)。骨髓造血干細(xì)胞線粒體數(shù)量增加,凋亡小體減少,減少骨髓CD34+細(xì)胞的凋亡。本實(shí)驗結(jié)論歸納如下:（1）利用“仿地震平臺及光電刺激+苯+環(huán)磷酰胺”成功建立腎精虧虛雄性大鼠模型。（2）腎精虧虛大鼠血清EPO含量下降,骨髓組織抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白、Bcl-2m RNA含量下降,促凋亡蛋白Bax蛋白及Baxm RNA表達(dá)增加,激活了線粒體/細(xì)胞色素c通路,發(fā)生級聯(lián)效應(yīng),激活Caspase-3蛋白,誘導(dǎo)骨髓CD34+細(xì)胞的凋亡。骨髓Fas和Fasl蛋白及Fas和Faslm RNA含量升高,激活了死亡受體途徑,激活Caspase-3蛋白,誘導(dǎo)CD34+細(xì)胞細(xì)胞的凋亡。CD34+細(xì)胞過度凋亡,骨髓造血干細(xì)胞活性降低,可能是腎精虧虛導(dǎo)致骨髓抑制影響骨髓造血功能的機(jī)制之一。（3）首次采用龜鹿二仙膠治療腎精虧虛,改善骨髓造血功能。龜鹿二仙膠能有效緩解腎精虧虛大鼠的癥狀,治療骨髓抑制性貧血有效。提高血清EPO含量,促進(jìn)抑凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表達(dá),抑制促凋亡蛋白Bax蛋白、Fas和Fasl蛋白的表達(dá),減少Caspase-3蛋白的表達(dá),抑制CD34+細(xì)胞的凋亡,從而保護(hù)造血干細(xì)胞。刺激骨髓造血干細(xì)胞的增殖,避免其發(fā)生過度凋亡,可能是龜鹿二仙膠發(fā)揮其療效機(jī)制之一。（4）從生成來源和生物學(xué)功能來看,EPO可能是腎精的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。（5）造血干細(xì)胞是腎精在細(xì)胞層次的表現(xiàn)形式,是“腎精化血”功能的執(zhí)行者。
姚球[4]（2021）在《AR/miR-21在小鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的作用及機(jī)制研究》文中指出背景與目的:在臨床診療中腎臟缺血再灌注損傷（Renal ischemia reperfusion injury,RIRI）是造成腎臟損傷的一種比較常見的病理過程,甚至是導(dǎo)致急性腎功能衰竭的主要原因之一。同時腎臟移植時,RIRI也影響供體腎的功能恢復(fù)和后期存活的重要因素。而且RIRI的病理生理機(jī)制非常復(fù)雜,到目前為止還沒有完全弄清。本研究是通過建立小鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型,模擬體內(nèi)腎缺血再灌注損傷的過程。研究雄激素受體AR/miR-21信號軸在的小鼠腎缺血損傷中的相互調(diào)控作用以及對miR-21靶基因PDCD4（程序性細(xì)胞死亡因子4）和凋亡蛋白caspase-3等的調(diào)控作用。本研究有望能為臨床上治療腎缺血再灌注損傷提供新的思路。方法:1、制備最佳小鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型:用三氣孵箱法建立小鼠腎小管上皮細(xì)胞TCMK-1缺氧/復(fù)氧損傷模型,酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）檢測上清液TNF-α含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡等,探討最佳缺氧/復(fù)氧時間。2、小鼠腎小管上皮細(xì)胞正常生理情況下和缺氧/復(fù)氧條件下細(xì)胞,熒光定量PCR檢測PDCD4m RNA以及Western-blot檢測PDCD4、caspase-3蛋白的表達(dá)。3、制備缺氧/復(fù)氧模型之前應(yīng)用pre-miR-21或antagomiR-21預(yù)處理細(xì)胞,分組（1）Control（2）miR-21-NC組;（3）pre-miR-21組（4）antagomiR-21組;（5）H/R（6）miR-21-NC+H/R組;（7）pre-miR-21+H/R組;（8）antagomiR-21+H/R檢測小鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)缺氧/復(fù)氧后AR和miR-21分子以及PDCD4/caspase-3信號通路的表達(dá)情況以及用流式細(xì)胞術(shù)等檢測細(xì)胞活力、凋亡情況。4、制備缺氧/復(fù)氧模型之前應(yīng)用AR干擾載體AR si RNA沉默AR基因,分組（1）Control（2）si RNA-NC（3）AR si RNA（4）H/R（5）H/R+si RNA-NC（6）H/R+AR si RNA檢測小鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)缺氧/復(fù)氧后miR-21分子和PDCD4/caspase-3信號通路的表達(dá)情況以及流式細(xì)胞術(shù)等檢測細(xì)胞活力、凋亡情況。結(jié)果:1、小鼠腎小管上皮細(xì)胞（TCMK-1）最佳缺氧復(fù)氧時間為缺氧4h復(fù)氧12h。2、TCMK-1細(xì)胞缺氧/復(fù)氧會使PDCD4、caspase-3表達(dá)升高。3、pre-miR-21會使TCMK-1細(xì)胞中miR-21表達(dá)升高,AR表達(dá)升高,PDCD4和caspase-3表達(dá)降低,antagomiR-21會使TCMK-1細(xì)胞中miR-21表達(dá)降低,AR表達(dá)降低,PDCD4和caspase-3表達(dá)升高。4、沉默AR基因后,TCMK-1細(xì)胞中AR表達(dá)降低,miR-21表達(dá)降低,PDCD4和caspase-3表達(dá)升高。結(jié)論:1、過表達(dá)miR-21可減輕小鼠腎小管上皮細(xì)胞（TCMK-1）缺氧/復(fù)氧損傷后的細(xì)胞凋亡,干擾miR-21會增加TCMK-1細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷后的細(xì)胞凋亡,miR-21可能對TCMK-1細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷起到保護(hù)作用。2、干擾AR會使TCMK-1細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷加重,證明AR對TCMK-1細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷可能也有一定保護(hù)作用。3、AR與miR-21可能存在正反饋關(guān)系。
龐燕[5]（2021）在《二氧化硫預(yù)處理對急性腎損傷的影響及其與PI3K/Akt信號通路的關(guān)系》文中認(rèn)為目的:評價二氧化硫衍生物預(yù)處理對腎缺血再灌注致急性腎損傷的作用,并探究其能否通過PI3K/Akt信號通路發(fā)揮作用。方法:SPF級健康成年雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分為以下5組（n=8）:Sham組、RIRI組、LY組、SO2組、LY+SO2組。第一次于缺血前1h,經(jīng)尾靜脈注射給藥,Sham、RIRI和SO2組予以生理鹽水,劑量為10ml/kg,LY和LY+SO2予LY294002 0.3mg/kg;第二次于缺血前30min,腹腔注射給藥,Sham、RIRI、LY組予生理鹽水,劑量為5mlkg,SO2和LY+SO2予SO2供體,劑量為85mg/kg;第二次給藥后30min,除Sham組外,其余各組通過夾閉雙側(cè)腎蒂45min,再灌注24h的方法建立腎缺血再灌注致急性損傷模型,Sham組僅開腹,翻動腸管,暴露術(shù)區(qū)及腎臟,不作缺血處理。再灌注24h后腹主動脈采血分離血清,處死大鼠后取下腎臟組織。測定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;HE染色觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)變化,并依照Paller標(biāo)準(zhǔn)評分;TUNEL熒光染色評估細(xì)胞凋亡并計算凋亡率;采用Western blot法檢測腎臟Caspase3、Bax、Bcl-2、及Akt、p-Akt蛋白表達(dá)。結(jié)果:與Sham組對比,RIRI組大鼠Scr、BUN濃度明顯升高,（P<0.01）;與RIRI組對比,SO2組大鼠Scr、BUN明顯下降（P<0.01）,LY組Scr、BUN無顯著差異;LY+SO2組Scr、BUN濃度明顯高于SO2組（P<0.01）。HE染色表明Sham組腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)及管腔大致正常;RIRI組大鼠腎小管管腔內(nèi)徑明顯增寬,部分腎小管上皮細(xì)胞扁平,刷狀緣損傷、脫落至管腔,可見管型形成;LY組可見腎小管管腔內(nèi)徑明顯增寬,上皮細(xì)胞核深染,管腔內(nèi)有管型形成;SO2組腎小管上皮細(xì)胞以水腫為主,可見管腔狹窄,呈“星芒”狀;LY+SO2組管腔明顯擴(kuò)張,部分可見管型形成;Paller評分結(jié)果表明:RIRI組顯著高于Sham組（P<0.01）;SO2預(yù)處理顯著降低RIRI大鼠Paller評分（P<0.01）,LY組同RIRI組比較,結(jié)果無差異（P>0.05）;與SO2組對比,LY+SO2組評分顯著高于SO2組（P<0.01）;TUNEL熒光染色結(jié)果表明:與Sham組對比,RIRI組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加,凋亡率明顯升高（P<0.01）;與RIRI組對比,SO2組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)顯著減少,凋亡率顯著降低（P<0.01）,LY組與RIRI組相比無明顯差異（P>0.05）;與SO2組相比,LY+SO2組TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)及凋亡指數(shù)升高明顯,（P<0.01）。Western blot檢測腎臟組織蛋白結(jié)果顯示,RIRI組Bax、Caspase3蛋白表達(dá)較Sham組顯著上調(diào),Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)（P<0.05）;SO2組Bax、Caspase3與RIRI組對比,表達(dá)顯著下調(diào),Bcl-2、p-Akt表達(dá)上調(diào)（P<0.05）;LY組與之相比差異不具有顯著性;與SO2組比較,LY+SO2組Bax、Caspase3表達(dá)上調(diào),Bcl-2、p-Akt表達(dá)顯著下降（P<0.05）。結(jié)論:SO2預(yù)先給藥可激活PI3K/Akt信號通路,增加p-Akt表達(dá),可能進(jìn)一步通過上調(diào)Bcl-2,下調(diào)Bax及Caspase3蛋白表達(dá),從而減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡,減輕腎臟缺血再灌注損傷,LY294002可消除SO2對PI3K/Akt信號通路的激活作用。
安海文,李李,李燕林,劉琳娜,黃琳,李錦山,楊文欽[6]（2020）在《尿毒康合劑對缺血再灌注損傷大鼠的腎保護(hù)作用及其機(jī)制研究》文中研究說明目的探究尿毒康合劑對大鼠腎臟缺血再灌注損傷（RIRI）的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法將73只SD大鼠隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、尿毒康合劑（低劑量4.95 g/kg、中劑量9.9 g/kg、高劑量19.8 g/kg）組,銀杏葉提取物（100 mg/kg）組（陽性藥組）,每組12只（模型組13只）。除假手術(shù)組以外,另外5組SD大鼠建立RIRI模型。建立RIRI模型前,連續(xù)7 d給予尿毒康合劑各劑量組及陽性藥大鼠相應(yīng)劑量藥物灌胃。24 h后,檢測各組大鼠血清中肌酐值（Scr）和尿素氮值（BUN）以及白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-α）和干擾素-γ（IFN-γ）指標(biāo);通過TUNEL試劑盒上的方法檢測大鼠腎小管上皮細(xì)胞的凋亡率;通過免疫組化法及Western blot法檢測FAS、FASL、Bax、Bad、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2和VEGF這9種細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清中的Scr、BUN、IL-6、TNF-a、IFN-γ水平及腎小管上皮細(xì)胞凋亡率均明顯升高（P<0.01）;模型組大鼠FAS、FASL、Bax、Bad、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表達(dá)量顯著升高,Bcl-2、VEGF蛋白的表達(dá)降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。尿毒康合劑各劑量組及陽性藥組大鼠血清中的Scr、BUN、IL-6、TNF-a、IFN-γ及腎小管上皮細(xì)胞凋亡率低于模型組（P<0.05）;尿毒康合劑各劑量組大鼠FAS、FASL、Bax、Bad、Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9蛋白表達(dá)量有降低趨勢,Bcl-2、VEGF蛋白表達(dá)有升高的趨勢。結(jié)論尿毒康合劑對RIRI大鼠腎臟具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能是調(diào)節(jié)炎癥因子,抑制炎癥反應(yīng),或是通過對細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)行干預(yù),從而抑制其凋亡。
彭顯月[7]（2020）在《高壓氧對小鼠缺血再灌注腎組織Fas/FasL表達(dá)的影響》文中研究指明目的:通過建立小鼠腎缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury,IRI）模型,觀察假手術(shù)組、缺血再灌注組以及高壓氧（hyperbaric oxygenation,HBO）治療組腎功能、腎組織病理學(xué)、細(xì)胞凋亡率及凋亡蛋白表達(dá)量的變化,探討HBO治療對缺血再灌注腎組織中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,以期進(jìn)一步闡明HBO對腎IRI的治療作用及機(jī)制。方法:將C57BL/6小鼠隨機(jī)分成3組,即假手術(shù)組、IRI組以及HBO治療組,每組分為1h、3h、6h、12h四個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)6只小鼠。假手術(shù)組:僅切開腹腔,雙側(cè)腎蒂不阻斷,于相應(yīng)時點(diǎn)切取雙腎及采血;IRI組:切開腹腔,雙側(cè)腎蒂阻斷45min后開放血流,分別于再灌注后1h、3h、6h、12h切取雙腎及采血;HBO治療組:切開腹腔,雙側(cè)腎蒂阻斷45min后開放血流,分別于再灌注后0h、2h、5h、11h時行HBO治療1h,HBO治療后切取雙腎及采血。自動血生化分析儀檢測血清SCr值,HE法觀察小鼠腎組織病理學(xué)變化,TUNEL法檢測腎組織細(xì)胞凋亡,通過免疫組織化學(xué)技術(shù)、RT-q PCR技術(shù)及Western blot檢測Fas、FasLm RNA和蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.腎功能變化:腎IRI組SCr值在各時間點(diǎn)均顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）,HBO治療后則顯著降低（P<0.05）;假手術(shù)組內(nèi)各時間點(diǎn)SCr值無明顯差異;腎IRI組和HBO組內(nèi)1h和3h比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,其余時間點(diǎn)SCr值差異顯著（P<0.05）,隨再灌注時間的延長,SCr值逐漸增高。2.腎組織病理變化:假手術(shù)組各時間點(diǎn)腎組織形態(tài)學(xué)正常,未見明顯改變。腎IRI組在1h和3h時可見腎小管上皮細(xì)胞渾濁腫脹,6h時可見胞漿顆粒樣變性,刷狀緣消失,12h時可見管腔內(nèi)可見少量壞死脫落的碎片,腎小管間質(zhì)有少量出血,隨再灌注時間延長病變呈逐漸加重的趨勢。經(jīng)HBO治療后腎小管上皮細(xì)胞腫脹和間質(zhì)出血等病變均有所減輕,在再灌注早期最明顯。3.細(xì)胞凋亡情況:假手術(shù)組腎組織中偶見TUNEL陽性細(xì)胞,而IRI組的腎組織中可見TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)組明顯增加（P<0.01）,HBO治療后TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低（P<0.01）;假手術(shù)組內(nèi)各時間點(diǎn)相比較陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異,而IRI組和HBO組內(nèi)各時間點(diǎn)相比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。4.免疫組化結(jié)果:Fas和FasL蛋白在腎組織中的表達(dá)變化規(guī)律一致,Fas、FasL主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,腎小球無表達(dá),而FasL蛋白在細(xì)胞核少量表達(dá)。相對定量分析顯示:腎IRI組各時間點(diǎn)二者的表達(dá)量均顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）,HBO治療后各二者的表達(dá)量均顯著降低（P<0.05）;在假手術(shù)組內(nèi)各時間點(diǎn)二者的表達(dá)量無明顯差異,而在腎IRI組和HBO治療組內(nèi)各時間點(diǎn)二者的表達(dá)量均有明顯差異（P<0.05）,隨再灌注時間的延長,二者的表達(dá)量逐漸增加。5.RT-qPCR結(jié)果:Fas和FasL mRNA在腎組織中的表達(dá)變化規(guī)律也一致,二者在腎IRI組各時間點(diǎn)的表達(dá)量均顯著高于假手術(shù)組（P<0.05）,HBO治療后二者的表達(dá)量均顯著降低（P<0.05）。在假手術(shù)組內(nèi)各時間點(diǎn)二者的表達(dá)量無明顯差異;IRI組和HBO治療組內(nèi)12h表達(dá)量較1h、3h、6h時明顯增加（P<0.05）,且隨再灌注時間的延長二者的表達(dá)量逐漸增加。6.Western blot結(jié)果:Fas和FasL蛋白在腎組織中的表達(dá)變化規(guī)律也基本類似,二者在腎IRI組各時間點(diǎn)的表達(dá)量均顯著高于假手術(shù)組（P<0.01）,HBO治療后二者的表達(dá)量則顯著降低（P<0.05）。在假手術(shù)組內(nèi)各時間點(diǎn)二者的表達(dá)量無明顯差異,隨再灌注時間的延長,二者的表達(dá)量均逐漸增加。在腎IRI組內(nèi)1h和3h時二者的表達(dá)量無明顯差異,其余時間點(diǎn)差異明顯（P<0.05）;HBO治療組內(nèi)Fas蛋白各時間點(diǎn)的表達(dá)量均有顯著差異（P<0.05）,而FasL蛋白表達(dá)量在1h和3h時無明顯差異,其余時間點(diǎn)差異顯著（P<0.05）。結(jié)論:1、腎IRI可能通過激活細(xì)胞凋亡Fas/FasL信號通路促進(jìn)腎組織細(xì)胞凋亡,加重腎損傷;2、HBO治療可通過抑制凋亡蛋白Fas和FasL的表達(dá),減少腎組織細(xì)胞凋亡,進(jìn)而減輕腎損傷。
劉超[8]（2020）在《MG53與胃泌素緩解急性腎損傷的研究》文中研究指明急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）已成為全世界范圍內(nèi)的公共衛(wèi)生問題,它起病急、發(fā)病率高且無特效治療藥物,具有很高的死亡風(fēng)險,而其預(yù)后不良則可進(jìn)展至慢性腎臟病,給我們帶來了沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。近年來,由于心血管介入診斷治療與碘造影劑的廣泛運(yùn)用,以及創(chuàng)傷、休克的發(fā)生和腎移植手術(shù)的開展,造影劑誘導(dǎo)的AKI（contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI）以及缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）誘導(dǎo)的AKI成為兩類比較常見的AKI。身體是一個有機(jī)整體,我們之前發(fā)現(xiàn)其他器官如骨骼肌和胃腸道對腎臟有一定的“對話”作用。當(dāng)發(fā)生AKI時,骨骼肌和胃腸道可能對損傷的腎臟有什么影響呢?因此,我們圍繞這一思路,嘗試了以下兩個主要部分的探究:（1）肌肉因子MG53（Mitsugumin 53）緩解造影劑誘導(dǎo)的急性腎損傷的作用與機(jī)制研究;（2）胃腸激素胃泌素緩解缺血再灌注誘導(dǎo)的急性腎損傷的作用及機(jī)制研究。第一部分MG53緩解造影劑誘導(dǎo)的急性腎損傷的作用與機(jī)制研究研究背景:MG53是一種新發(fā)現(xiàn)的由骨骼肌分泌的膜修復(fù)蛋白,通過其膜修復(fù)功能,MG53能緩解多種器官的損傷;CI-AKI是臨床上由于碘造影劑（contrast media,CM）的使用而引起的常見腎臟并發(fā)癥。有文獻(xiàn)報道在CI-AKI中,碘造影劑對腎小管細(xì)胞的毒性作用可能是由其對細(xì)胞膜的直接損傷而引發(fā)。因此,我們提出假設(shè):MG53可能通過其細(xì)胞膜修復(fù)作用而緩解CI-AKI。目的:探究MG53對CI-AKI是否具有緩解作用及其潛在的作用機(jī)制,為臨床上治療及預(yù)防CI-AKI提供可能的新策略。方法:（1）建立大鼠CI-AKI模型,檢測大鼠血肌酐（Serum creatinine,SCr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）的含量,驗證建模是否成功;通過免疫印跡（Western Blot,WB）檢測CI-AKI大鼠血漿和腎臟中MG53蛋白的含量變化;通過免疫組化染色檢測CI-AKI大鼠腎臟內(nèi)源性MG53的定位變化;通過免疫熒光觀察外源性熒光標(biāo)記重組人源MG53蛋白（recombinant human MG53,rh MG53）能否在CI-AKI大鼠腎臟聚集。（2）通過檢測SCr與BUN水平,并通過大鼠腎臟切片蘇木素伊紅（hematoxylin-eosin,H&E）染色,明確rh MG53預(yù)處理對CI-AKI有無緩解作用。（3）通過TUNEL染色,探究CI-AKI后大鼠腎小管細(xì)胞凋亡的變化,并研究rh MG53預(yù)處理有無緩解凋亡的作用。（4）建立體外碘普羅胺誘導(dǎo)腎近端小管（renal proximal tubular,RPT）細(xì)胞損傷的細(xì)胞模型,采用TUNEL染色驗證碘普羅胺對RPT細(xì)胞凋亡的影響,并研究rh MG53預(yù)處理對其有無保護(hù)作用。（5）通過細(xì)胞計數(shù)試劑盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）檢測rh MG53對碘普羅胺誘導(dǎo)的RPT細(xì)胞損傷有無緩解作用。（6）通過乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase,LDH）釋放實(shí)驗與FM1-43熒光染色檢測碘普羅胺對RPT細(xì)胞膜的損傷作用,并研究rh MG53預(yù)處理對RPT細(xì)胞膜是否有保護(hù)作用。（7）通過免疫熒光染色檢測MG53在RPT細(xì)胞中的定位分布。（8）通過q PCR與WB分別檢測MG53的m RNA及蛋白水平變化。（9）通過免疫熒光染色觀察MG53與Annexin V（一種在凋亡細(xì)胞外膜上標(biāo)記磷脂酰絲氨酸的敏感且特異的探針）的共定位情況。結(jié)果:（1）大鼠CI-AKI模型被成功建立,其血漿MG53蛋白含量減少而腎臟MG53蛋白增多,提示MG53從血漿向腎臟富集;MG53在大鼠腎小管細(xì)胞中存在表達(dá),而CI-AKI后MG53向腎小管管腔側(cè)聚集;外源性熒光標(biāo)記rh MG53在CI-AKI大鼠腎臟聚集。（2）SCr、BUN水平以及H&E染色分別表明rh MG53預(yù)處理能夠緩解CI-AKI的腎功能損傷及腎臟病理損傷。（3）CI-AKI大鼠腎小管細(xì)胞凋亡顯著增加,rh MG53預(yù)處理可減少其中的細(xì)胞凋亡。（4）碘普羅胺可導(dǎo)致培養(yǎng)的RPT細(xì)胞凋亡,rh MG53預(yù)處理可緩解碘普羅胺誘導(dǎo)的RPT細(xì)胞凋亡。（5）碘普羅胺以濃度和時間依賴性方式導(dǎo)致RPT細(xì)胞損傷,而rh MG53預(yù)處理可緩解該損傷。（6）碘普羅胺導(dǎo)致RPT細(xì)胞膜損傷,而rh MG53以濃度依賴性方式緩解碘普羅胺誘導(dǎo)的膜損傷。（7）MG53在RPT細(xì)胞膜與胞漿均有分布,但碘普羅胺處理后,MG53向RPT細(xì)胞膜聚集。（8）碘普羅胺處理后RPT細(xì)胞MG53的m RNA及蛋白表達(dá)無明顯改變,但碘普羅胺損傷的RPT細(xì)胞可大量攝取rh MG53蛋白。（9）MG53與Annexin V存在共定位,提示MG53通過與磷脂酰絲氨酸結(jié)合發(fā)揮其膜修復(fù)作用。結(jié)論:肌肉因子MG53可以通過修復(fù)細(xì)胞膜損傷及減少細(xì)胞凋亡來緩解CI-AKI,MG53可能成為治療或預(yù)防CI-AKI的有效藥物。第二部分胃泌素緩解缺血再灌注誘導(dǎo)的急性腎損傷的作用及機(jī)制研究研究背景:急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）的另一類主要原因為缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）損傷;胃腸道與腎臟之間存在密切的調(diào)節(jié)聯(lián)系,“胃腎軸”是近年來被提出的新穎概念,有文獻(xiàn)報道,胃腸激素胃泌素參與了對腎臟排鈉功能的調(diào)節(jié)并進(jìn)一步參與血壓調(diào)控。然而,胃泌素是否也能在I/R損傷的腎臟中發(fā)揮一定的作用仍不清楚。因此,我們提出假設(shè):胃泌素可能對腎臟I/R損傷有一定的保護(hù)作用。目的:探究胃泌素對腎臟I/R損傷的作用及其機(jī)制,為臨床預(yù)防及治療腎臟I/R損傷提供新的可能的方法。方法:（1）構(gòu)建腎臟I/R損傷的小鼠模型,分別通過q PCR、WB及IHC檢測腎臟I/R后胃泌素受體（也稱膽囊收縮素B型受體,cholecystokinin B receptor,CCKBR）的表達(dá)及定位有無改變。（2）小鼠腎臟I/R前給予胃泌素,通過檢測腎功能指標(biāo)SCr與BUN、腎臟切片H&E與過碘酸-雪夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色以及小管損傷標(biāo)志物腎損傷分子-1（kidney injury molecule-1,KIM-1）的表達(dá),判斷胃泌素預(yù)處理能否緩解腎臟I/R損傷。（3）通過TUNEL染色及caspase-3活性測定,探究胃泌素對I/R誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有無影響,并通過WB檢測胃泌素對凋亡上游分子Akt磷酸化水平的影響。（4）建立體外HK-2（human kidney-2）細(xì)胞缺氧/復(fù)氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）損傷模型,CCK-8及LDH檢測胃泌素對H/R處理的HK-2細(xì)胞活力的影響。（5）通過WB檢測體外H/R處理后HK-2細(xì)胞CCKBR蛋白的表達(dá)變化。（6）通過TUNEL染色及caspase-3活性測定,探究胃泌素對H/R處理的HK-2細(xì)胞凋亡的影響。（7）通過二氫乙錠（dihydroethidium,DHE）染色、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平測定,探究胃泌素對H/R處理的HK-2細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響。（8）通過WB檢測胃泌素對HK-2細(xì)胞PI3K、Akt及Bad磷酸化的影響。（9）通過CCK-8檢測渥曼青霉素（PI3K抑制劑）及Akt抑制劑VIII能否阻斷胃泌素介導(dǎo)的HK-2細(xì)胞活力保護(hù)作用。結(jié)果:（1）小鼠腎臟I/R損傷后,CCKBR的m RNA及蛋白水平均顯著上調(diào),CCKBR在腎小管細(xì)胞膜及胞漿均有分布。（2）小鼠腎臟I/R前給予胃泌素,緩解了I/R導(dǎo)致的SCr及BUN的升高幅度,緩解了腎小管病理損傷,減少了小管損傷標(biāo)志物KIM-1的增高幅度。（3）胃泌素預(yù)處理緩解了I/R誘導(dǎo)腎小管細(xì)胞凋亡,且胃泌素促進(jìn)腎組織Akt的磷酸化水平。（4）胃泌素在常氧條件下對HK-2細(xì)胞活力無明顯影響,但以濃度依賴性方式緩解H/R導(dǎo)致的HK-2細(xì)胞活力損傷,且該保護(hù)作用能被胃泌素特異性拮抗劑CI-988阻斷。（5）H/R處理后,HK-2細(xì)胞CCKBR蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)。（6）胃泌素緩解H/R誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞凋亡及細(xì)胞氧化應(yīng)激。（7）胃泌素預(yù)處理H/R損傷的HK-2細(xì)胞后,PI3K、Akt及Bad磷酸化水平增加。（8）渥曼青霉素（PI3K抑制劑）與Akt抑制劑VIII可阻斷胃泌素對HK-2細(xì)胞活力的保護(hù)作用。結(jié)論:胃腸激素胃泌素可通過PI3K/Akt/Bad通路緩解I/R誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞凋亡,從而緩解I/R誘導(dǎo)的急性腎損傷,胃泌素可能成為臨床預(yù)防或治療急性腎損傷的潛在藥物。研究背景:腎損傷與高血壓之間存在極為密切的關(guān)系,血管緊張素II 1型受體（angiotensin II type 1 receptor,AT1R）被認(rèn)為是高血壓治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)。分選蛋白（sorting nexins,SNXs）是一組以含有PX（phox homology）結(jié)構(gòu)域為特征的胞內(nèi)物流系統(tǒng)蛋白,它們在蛋白質(zhì)分選和運(yùn)輸?shù)恼{(diào)控中起關(guān)鍵作用。有文獻(xiàn)報道分選蛋白1（sorting nexin 1,SNX1）參與腎臟多巴胺D5受體的分選和運(yùn)輸,而血管緊張素和多巴胺是血壓調(diào)節(jié)中相互拮抗的系統(tǒng),SNX1是否也參與了AT1R的分選和運(yùn)輸仍不清楚。因此,我們提出假設(shè):SNX1缺失可能導(dǎo)致血管平滑肌中AT1R的分選及運(yùn)輸障礙,從而導(dǎo)致AT1R含量增多、血管收縮功能增強(qiáng)及高血壓。目的:探究SNX1是否參與血管平滑肌細(xì)胞中AT1R的分選和運(yùn)輸,為高血壓的預(yù)防與治療提供新思路。方法:（1）通過CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建基于C57BL/6背景的SNX1基因敲除(Snx1-/-)小鼠,分別從DNA、m RNA及蛋白水平層面驗證小鼠的基因型。（2）采用尾套法測量Snx1-/-小鼠及其同窩野生型小鼠的收縮壓、舒張壓及平均動脈壓水平。（3）通過腸系膜血管環(huán)實(shí)驗,檢測Snx1-/-小鼠腸系膜動脈對苯腎上腺素、硝普鈉及血管緊張素II的反應(yīng)性變化。（4）通過WB檢測Snx1-/-小鼠動脈組織中AT1R、AT2R及D5R的蛋白表達(dá)變化;通過免疫熒光染色共定位分析探究野生型小鼠動脈組織中AT1R與SNX1有無共定位。（5）在A10細(xì)胞中敲低SNX1后,檢測AT1R蛋白含量的變化及其下游Ca2+信號變化;通過免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）檢測A10細(xì)胞中AT1R與SNX1的有無結(jié)合。（6）在A10細(xì)胞中敲低SNX1后,檢測AT1R的m RNA水平變化;用放線菌酮（cycloheximide,CHX）抑制新蛋白從頭合成后,檢測SNX1是否影響AT1R蛋白的衰減。（7）用CHX抑制新蛋白從頭合成后,再分別抑制溶酶體及蛋白酶體途徑,探究AT1R蛋白的降解途徑。結(jié)果:（1）Snx1-/-小鼠被成功構(gòu)建,其收縮壓、舒張壓及平均動脈壓較其同窩野生型小鼠均顯著增高。（3）Snx1-/-小鼠腸系膜動脈對苯腎上腺素、硝普鈉的反應(yīng)性未發(fā)生顯著改變,但其對血管緊張素II的反應(yīng)性顯著增強(qiáng)。（4）Snx1-/-小鼠主動脈組織中AT2R與D5R的蛋白表達(dá)較對照組未見明顯改變,但其AT1R的表達(dá)顯著增加,且WT小鼠主動脈中AT1R與SNX1存在共定位。（5）在A10細(xì)胞中敲低SNX1后,AT1R蛋白含量顯著增加,且其下游Ca2+信號增強(qiáng),且A10細(xì)胞中AT1R與SNX1存在結(jié)合。（6）在A10細(xì)胞中敲低SNX1后,AT1R的m RNA水平無明顯變化,而用CHX進(jìn)一步抑制新蛋白從頭合成后,在SNX1敲低的A10細(xì)胞中,AT1R蛋白衰減顯著減慢。（7）用CHX抑制新蛋白從頭合成,并用clasto-乳胞素β-內(nèi)酯（clasto-lactacystinβ-lactone,CLBL）抑制蛋白酶體降解途徑,AT1R蛋白的降解進(jìn)一步被抑制。結(jié)論:SNX1缺失可導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞中AT1R的分選和運(yùn)輸異常、AT1R在蛋白酶體系統(tǒng)中的降解減少,進(jìn)而導(dǎo)致AT1R含量增加及血管收縮性增強(qiáng),最終導(dǎo)致血壓升高。
趙峰[9]（2020）在《腎氣丸對缺血再灌注損傷的小鼠腎細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究》文中指出目的:探討腎氣丸在小鼠I/R誘導(dǎo)的急性腎損傷中的作用及機(jī)制,為該藥物在臨床的應(yīng)用提供參考依據(jù)。方法:健康雄性C57BL6小鼠40只,利用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組（每組10只）:（1）假手術(shù)組（Sham）;（2）腎缺血再灌注組（腎I/R組）;（3）腎氣丸低劑量組（10.5g/kg/d）;（4）腎氣丸高劑量組（21.0g/kg/d）。分組后腎氣丸低劑量組給予10.5g/kg/d的腎氣丸灌胃,腎氣丸高劑量組給予21.0g/kg/d的腎氣丸灌胃,持續(xù)2周;假手術(shù)組和腎I/R組每天給予等量生理鹽水灌胃。2周后構(gòu)建腎I/R損傷模型,24h處死小鼠并取材。檢測血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）及腎臟組織中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;HE染色及TUNEL染色檢測腎組織損傷及凋亡水平;PCR及免疫組化檢測Bcl-2、Caspase-3表達(dá)水平;Western blot法檢測PI3K和AKT蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:HE及TUNEL染色表明,腎氣丸可抑制細(xì)胞損傷及凋亡。與假手術(shù)組比較,腎I/R組Scr、BUN、MDA含量、Caspase-3水平均升高（P<0.05）,SOD活性、Bcl-2水平、PI3K和AKT蛋白表達(dá)明顯下降（P<0.05）;與腎I/R組比較,腎氣丸組（低劑量組和高劑量組）Scr、BUN和MDA含量、Caspase-3水平均降低（P<0.05）,而SOD活性、Bcl-2水平、PI3K和AKT蛋白表達(dá)升高（P<0.05）;與腎氣丸低劑量組比較,腎氣丸組高劑量組Scr、BUN和MDA含量、Caspase-3水平均降低（P<0.05）,SOD活性、Bcl-2水平、PI3K和AKT蛋白表達(dá)均升高（P<0.05）。結(jié)論:腎氣丸可通過激活PI3K/AKT信號通路對小鼠I/R誘導(dǎo)的急性腎損傷起保護(hù)作用。
焦智慧[10]（2020）在《ADSC-CM對小型豬腹腔鏡肝IRI合并部分肝切除保護(hù)作用的研究》文中研究表明肝臟是哺乳動物最大的實(shí)質(zhì)器官,具有加工儲存營養(yǎng)物質(zhì)、代謝藥物毒物、分泌膽汁、合成蛋白質(zhì)等重要功能。肝臟缺血再灌注損傷是外科手術(shù)中常見的一種臨床綜合征,20世紀(jì)90年代出現(xiàn)了腹腔鏡的肝切除術(shù),腹腔鏡手術(shù)可以最大程度的減少腹壁神經(jīng)和肌肉的損傷,減少出血、術(shù)后疼痛和粘連,加快手術(shù)恢復(fù)。盡管采用微創(chuàng)外科手術(shù),在肝切除、肝移植、出血性休克等臨床手術(shù)中仍不可避免的出現(xiàn)肝臟缺血再灌注損傷,嚴(yán)重會導(dǎo)致肝炎以及術(shù)后肝功能的衰竭。對于晚期肝功能不全的有效治療辦法是原位肝移植,但也面臨著器官短缺,費(fèi)用昂貴、免疫排斥和移植并發(fā)癥等問題,因此,尋找能夠減輕肝臟缺血再灌注損傷以及提高肝臟再生能力的安全有效的治療辦法是目前肝臟外科亟待解決的問題之一。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）能夠自我更新、具有多向分化能力、來源豐富、取材損傷小,是目前細(xì)胞療法理想的種子細(xì)胞。ADSCs主要依靠分化和旁分泌發(fā)揮作用,旁分泌指干細(xì)胞釋放的多種生物因子在微環(huán)境里通過細(xì)胞基質(zhì)在局部以及臨近組織對靶細(xì)胞發(fā)揮的生物學(xué)作用。隨著對旁分泌機(jī)制的深入研究,發(fā)現(xiàn)ADSCs分泌的多種細(xì)胞因子具有促進(jìn)血管生成,抑制炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答,修復(fù)組織再生等多種生物學(xué)功能。ADSCs在體外培養(yǎng)的過程中,會將細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)分泌到培養(yǎng)液中,這種含有細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)液（ADSC-CM）。盡管ADSCs在臨床上對許多疾病有治療效果,但ADSCs具有免疫原性,對植入ADSCs的不可控分化仍是重要的安全隱患。因此,使用ADSC-CM的無細(xì)胞療法成為繞過細(xì)胞療法局限性的一種再生醫(yī)學(xué)治療方法。目前有關(guān)肝臟缺血再灌注損傷的動物模型以嚙齒類動物為主,而從比較醫(yī)學(xué)角度,小型豬與人的同源性好,體積大小以及器官大小與人更為接近,因此也作為研究缺血再灌注損傷理想的實(shí)驗動物,所獲得的研究數(shù)據(jù)更有價值,易于臨床轉(zhuǎn)化。而ADSC-CM在大型實(shí)驗動物的研究較少,特別是肝臟領(lǐng)域尚未見報道,所以本研究旨在通過建立小型豬肝臟缺血再灌注合并部分切除模型,探究ADSC-CM治療肝臟缺血再灌注合并部分切除損傷的療效,為比較醫(yī)學(xué)開展肝病治療,拓寬ADSC-CM移植領(lǐng)域提供研究依據(jù)。本研究使用30頭小型豬,其中6頭用于脂肪組織的獲取。采用膠原酶消化法分離培養(yǎng)ADSCs,使用誘導(dǎo)培養(yǎng)基和特定染色鑒定ADSCs成脂、成骨、成肝分化能力,應(yīng)用細(xì)胞流式鑒定ADSCs表面特異性抗原。ADSCs饑餓培養(yǎng)48 h獲得ADSC-CM,經(jīng)3 kda超濾管離心濃縮ADSC-CM用于后續(xù)實(shí)驗。另外24頭小型豬隨機(jī)分為四組:模型組（IRI）,DMEM對照組（DMEM）,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞組（ADSCs）,脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基組（CM）,每組6頭。四組實(shí)驗動物均通過腹腔鏡手術(shù)建立肝臟缺血再灌注合并部分肝切除模型,IRI組通過肝實(shí)質(zhì)注射生理鹽水,DMEM組注射基礎(chǔ)培養(yǎng)基,ADSCs組注射脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,數(shù)量為1×106/kg,CM組按照1×106/kg細(xì)胞數(shù)提取等量干細(xì)胞分泌的條件培養(yǎng)液,注射濃縮的ADSC-CM進(jìn)行干預(yù)。分別在術(shù)前、術(shù)后1 d、3 d、7 d采集血液樣本及肝組織樣本用于相關(guān)指標(biāo)的檢測。通過HE染色觀察病理組織學(xué)變化,透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)的變化,血常規(guī)檢測外周血的炎性細(xì)胞變化,試劑盒檢測抗氧化酶以及細(xì)胞凋亡酶活性,TUNEL染色檢測凋亡細(xì)胞的陽性率,ELISA法檢測血清中炎癥相關(guān)因子、再生相關(guān)因子以及ADSC-CM成分,q RT-PCR法檢測炎癥、凋亡以及再生相關(guān)基因水平變化,Western Blot法檢測肝組織中凋亡以及再生相關(guān)蛋白水平的變化,免疫組化染色檢測凋亡相關(guān)蛋白以及再生相關(guān)蛋白水平的變化。本研究結(jié)果如下:（1）病理組織學(xué)與超微結(jié)構(gòu)變化:術(shù)后各組肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞,肝索排列紊亂,肝細(xì)胞空泡變性明顯,炎性細(xì)胞浸潤,相比于IRI組和DMEM組,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)明顯減少空泡變性和炎性細(xì)胞浸潤;術(shù)后IRI組和DMEM組肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴(yán)重擴(kuò)張,細(xì)胞核膜皺縮,染色質(zhì)邊集化,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)改善了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張及肝細(xì)胞核膜皺縮的程度。（2）肝臟功能變化:術(shù)后各組ALT、AST、LDH、ALP和T-BIL均升高,TP呈降低趨勢,相比于IRI組和DMEM組,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)明顯降低了ALT、AST、LDH、ALP和T-BIL的升高程度,緩解了TP的降低程度,促進(jìn)肝臟功能的恢復(fù)。（3）氧化應(yīng)激指標(biāo)變化:術(shù)后各組肝組織抗氧化酶CAT、GSH-Px和SOD活性顯著降低,MPO酶活性和MDA含量顯著升高,相比于IRI組和DMEM組,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)顯著增強(qiáng)了抗氧化酶的活性,降低MPO酶活性,并能減少氧化產(chǎn)物MDA的水平,從而減少術(shù)后的氧化應(yīng)激反應(yīng),且兩個干預(yù)組的上述氧化應(yīng)激指標(biāo)均無顯著性差異。（4）炎癥指標(biāo)變化:術(shù)后外周血中炎性細(xì)胞WBC、NE、LY含量迅速升高,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)減少了外周血中的炎性細(xì)胞的數(shù)量;IRI組和DMEM組血清中的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量呈升高趨勢,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)降低促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,同時增強(qiáng)抑炎因子IL-10的表達(dá);肝組織中炎癥因子基因水平的表達(dá)與血清結(jié)果一致,ADSCs和ADSC-CM通過抑制促炎因子的過度釋放以及增強(qiáng)抑炎因子的表達(dá)顯著改善了術(shù)后的炎癥反應(yīng),且兩個干預(yù)組之間沒有顯著性差異。（5）凋亡指標(biāo)變化:術(shù)后各組P53、Bax、Fas、Fasl基因和蛋白水平均顯著升高,Bcl-2表達(dá)水平降低,相比于IRI組和DMEM組,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)抑制了凋亡相關(guān)指標(biāo)P53、Bax,、Fas、Fasl的表達(dá),提高抗凋亡Bcl-2的表達(dá)水平;ADSCs組和CM組顯著降低TUNEL陽性細(xì)胞率及Caspase酶活性,減少術(shù)后肝細(xì)胞凋亡,且兩組之間沒有顯著性差異。（6）再生指標(biāo)變化:相比于IRI組和DMEM組,ADSCs或ADSC-CM干預(yù)顯著提高血清中血管生成相關(guān)因子VEGF、ANG-1、ANG-2的表達(dá),增強(qiáng)組織中肝臟再生相關(guān)基因HGF、Cyclin D1的表達(dá),抑制肝再生終止基因TGF-β的表達(dá),提高Ki67的陽性細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞增殖PCNA蛋白的表達(dá),且ADSCs組和CM組之間沒有顯著性差異。（7）ADSC-CM成分檢測:通過ELISA法檢測到小型豬ADSC-CM中含有促進(jìn)血管生成的VEGF、ANG-1、ANG-2、b-FGF,調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)與肝臟再生的TNF-α、IL-1β、IL-6。綜上所述,經(jīng)肝實(shí)質(zhì)移植ADSCs和ADSC-CM均能夠改善肝臟缺血再灌注合并部分肝切除的病理組織學(xué)損傷及超微結(jié)構(gòu)變化,減輕過度炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激反應(yīng),減少細(xì)胞凋亡,促進(jìn)肝臟再生。本試驗成功應(yīng)用ADSCs和ADSC-CM干預(yù)肝臟缺血再灌注合并部分切除后的肝損傷,證明ADSCs和ADSC-CM抗氧化、抗炎、抗凋亡和促進(jìn)肝再生的作用,且二者干預(yù)效果無顯著差異,推測ADSCs發(fā)揮作用的機(jī)制很可能是通過分泌細(xì)胞因子的旁分泌途徑。
二、Changes of expression of Fas and FasL protein in rats after renal ischemia/reperfusion injury（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、Changes of expression of Fas and FasL protein in rats after renal ischemia/reperfusion injury（論文提綱范文）
（1）ADSCs改善大鼠肝IRI合并部分切除損傷最佳移植時機(jī)的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 肝臟缺血再灌注損傷概述 |
| 1.1.1 肝臟缺血再灌注損傷發(fā)生條件 |
| 1.1.2 肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制 |
| 1.1.3 肝臟缺血再灌注損傷的防治 |
| 1.2 凋亡的研究進(jìn)展 |
| 1.2.1 凋亡簡介 |
| 1.2.2 參與凋亡調(diào)控相關(guān)蛋白 |
| 1.2.3 凋亡發(fā)生的過程與調(diào)控 |
| 1.2.4 缺血再灌注與凋亡 |
| 1.3 干細(xì)胞研究概述 |
| 1.3.1 干細(xì)胞的生物特性和分類 |
| 1.3.2 干細(xì)胞的移植途徑、數(shù)量及時機(jī)的研究 |
| 1.3.3 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的獲取與標(biāo)志 |
| 1.3.4 干細(xì)胞對缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制 |
| 1.3.5 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用前景 |
| 1.4 目的與意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 試驗材料 |
| 2.1.1 試驗動物 |
| 2.1.2 試驗儀器與設(shè)備 |
| 2.1.3 試驗試劑與藥品 |
| 2.2 試驗方法 |
| 2.2.1 大鼠ADSCs的體外分離培養(yǎng) |
| 2.2.2 試驗動物分組與ADSCs移植 |
| 2.2.3 術(shù)前準(zhǔn)備 |
| 2.2.4 試驗動物麻醉 |
| 2.2.5 大鼠70%肝缺血再灌注合并部分切除模型的建立 |
| 2.2.6 試驗動物術(shù)后護(hù)理 |
| 2.2.7 樣本采集 |
| 2.2.8 實(shí)驗室檢測指標(biāo) |
| 2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 大鼠ADSCs的形態(tài)學(xué)觀察 |
| 3.2 成功建立大鼠70%肝IRI合并部分切除模型 |
| 3.3 不同時機(jī)移植ADSCs對肝功能的影響 |
| 3.3.1 對谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的檢測結(jié)果 |
| 3.3.2 對谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的檢測結(jié)果 |
| 3.3.3 對堿性磷酸酶(ALP)的檢測結(jié)果 |
| 3.4 肝細(xì)胞TUNEL檢測結(jié)果 |
| 3.5 不同時機(jī)移植ADSCs對肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響 |
| 3.6 肝組織凋亡相關(guān)基因mRNA水平的變化 |
| 3.6.1 Bax mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.2 Bcl-2 mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.3 Bax/Bcl-2 mRNA表達(dá)比值的檢測結(jié)果 |
| 3.6.4 Fas mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.5 Fasl mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.6 Apaf-1 mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.7 AIF-1 mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.6.8 P53 mRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7 肝組織凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化 |
| 3.7.1 Bax蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.2 Bcl-2蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.3 Bax/Bcl-2蛋白表達(dá)比值的檢測結(jié)果 |
| 3.7.4 Fas蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.5 Fasl蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.6 Apaf-1蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.7 AIF-1蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.7.8 P53蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果 |
| 3.8 不同時機(jī)移植ADSCs對 Caspase活性的影響 |
| 3.8.1 Caspase-3活性的檢測結(jié)果 |
| 3.8.2 Caspase-8活性的檢測結(jié)果 |
| 3.8.3 Caspase-9活性的檢測結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 4.1 不同時機(jī)移植ADSCs對大鼠肝功能的影響 |
| 4.2 不同時機(jī)移植ADSCs對肝細(xì)胞凋亡及超微結(jié)構(gòu)的影響 |
| 4.3 不同時機(jī)移植ADSCs對凋亡相關(guān)因子Bax、Bcl-2的影響 |
| 4.4 不同時機(jī)移植ADSCs對凋亡相關(guān)因子Fas、Fasl的影響 |
| 4.5 不同時機(jī)移植ADSCs對凋亡相關(guān)因子Apaf-1的影響 |
| 4.6 不同時機(jī)移植ADSCs對凋亡相關(guān)因子AIF-1的影響 |
| 4.7 不同時機(jī)移植ADSCs對凋亡相關(guān)因子P53的影響 |
| 4.8 不同時機(jī)移植ADSCs對Caspase酶活性的影響 |
| 5 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
（2）基于中醫(yī)象思維探討腎衰飲干預(yù)慢性腎功能衰竭大鼠的機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 論文一 觀察腎衰飲對CRF大鼠抗炎、抗凋亡的作用 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文二 基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探討腎衰飲對CRF大鼠抗炎機(jī)制的影響 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文三 腎衰飲對CRF大鼠腎臟細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 論文四 探討腎衰飲調(diào)控CRF大鼠PI3K/Akt通路的作用機(jī)制 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 本研究創(chuàng)新性的自我評價 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 從炎癥及細(xì)胞凋亡角度探討CRF的發(fā)病機(jī)制及中藥防治CRF的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 個人簡介 |
| 在學(xué)期間科研成績 |
| 致謝 |
（3）腎精虧虛對SD雄性大鼠骨髓造血功能的影響及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一部分 理論研究 |
| 1 腎藏精理論研究 |
| 1.1 腎精的生成來源 |
| 1.2 腎精的功能 |
| 1.3 腎精的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究 |
| 2 “髓”的理論研究 |
| 2.1 “髓”的含義及生理功能 |
| 2.2 “髓”的生成與腎精 |
| 2.3 “骨髓”的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究 |
| 3 “血”的研究理論 |
| 3.1 血的涵義及生理功能 |
| 3.2 血的生成與腎精 |
| 3.3 貧血的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究 |
| 4 補(bǔ)腎方龜鹿二仙膠 |
| 5 結(jié)語 |
| 第二部分 實(shí)驗研究 |
| 實(shí)驗1 腎精虧虛對SD雄性大鼠造血功能影響的實(shí)驗研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 實(shí)驗動物 |
| 1.2 實(shí)驗藥物 |
| 1.3 主要實(shí)驗試劑 |
| 1.4 主要儀器及耗材 |
| 1.5 造模方法及分組、給藥 |
| 1.6 檢測指標(biāo)及方法 |
| 1.7 統(tǒng)計方法 |
| 2 實(shí)驗結(jié)果 |
| 2.1 一般情況 |
| 2.2 紅細(xì)胞數(shù)量(RBC)、血紅蛋白(HGB)含量比較 |
| 2.3 血清促紅細(xì)胞生成素(EPO)、睪酮(T)含量比較 |
| 2.4 附睪精子質(zhì)量比較 |
| 2.5 睪丸組織病理學(xué)比較 |
| 2.6 骨髓象比較 |
| 3 討論 |
| 3.1 腎精虧虛大鼠模型的建立 |
| 3.2 腎精虧虛大鼠造血組織形態(tài)學(xué)的改變 |
| 3.3 腎精虧虛對血清EPO含量的影響 |
| 實(shí)驗2 腎精虧虛對SD雄性大鼠骨髓造血細(xì)胞及CD34+細(xì)胞凋亡的影響 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 動物及分組 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 藥物及灌胃 |
| 1.4 儀器設(shè)備及試劑 |
| 1.5 檢測指標(biāo) |
| 1.6 統(tǒng)計方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 各組大鼠骨髓造血干細(xì)胞的超微病理形態(tài)學(xué)觀察 |
| 2.2 流式細(xì)胞儀檢測骨髓CD34+細(xì)胞凋亡的結(jié)果 |
| 2.3 骨髓石蠟包埋切片TUNEL法檢測CD34+細(xì)胞凋亡結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 實(shí)驗3 腎精虧虛對SD雄性大鼠導(dǎo)致骨髓造血細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 動物及分組 |
| 1.2 造模方法 |
| 1.3 藥物及灌胃 |
| 1.4 儀器、試劑及耗材 |
| 1.5 檢測指標(biāo) |
| 1.6 統(tǒng)計方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 骨髓Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas和 Fasl蛋白表達(dá)結(jié)果 |
| 2.2 骨髓 Bcl-2、Bax、caspase-3、Fas 和 FaslmRNA RT-PCR 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 3.1 腎精虧虛對大鼠骨髓Fas/Fasl蛋白表達(dá)的影響 |
| 3.2 腎精虧虛對大鼠骨髓Bcl-2、Bax蛋白及Bcl-2m RNA、Baxm RNA表達(dá)的影響 |
| 3.3 腎精虧虛對大鼠骨髓Caspase-3 表達(dá)的影響 |
| 討論 |
| 1.腎精虧虛與貧血的關(guān)系 |
| 2.腎精虧虛大鼠模型建立評估 |
| 3.腎精虧虛對骨髓造血功能影響的可能機(jī)制 |
| 4.龜鹿二仙膠改善骨髓造血功能的作用機(jī)制 |
| 結(jié)論 |
| 展望與不足 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 1 綜述 腎虛與貧血關(guān)系的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 2 發(fā)表論文 |
| 致謝 |
（4）AR/miR-21在小鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文縮略詞 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 確定TCMK-1 細(xì)胞最佳缺氧/復(fù)氧時間 |
| 2.1 實(shí)驗材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗細(xì)胞 |
| 2.1.2 主要實(shí)驗試劑 |
| 2.2 主要實(shí)驗儀器設(shè)備 |
| 2.3 實(shí)驗方法 |
| 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 2.3.2 實(shí)驗分組 |
| 2.3.3 TCMK-1 細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型建立 |
| 2.3.4 酶聯(lián)免疫檢測細(xì)胞TNF-α |
| 2.3.5 流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞凋亡 |
| 2.3.6 熒光定量PCR測定細(xì)胞相關(guān)指標(biāo) |
| 2.3.7 Western-blot測定相關(guān)凋亡蛋白 |
| 2.3.8 數(shù)據(jù)處理 |
| 2.4 實(shí)驗結(jié)果 |
| 2.4.1 選定細(xì)胞最佳缺氧復(fù)氧時間 |
| 2.4.2 正常對照組與最佳缺氧/復(fù)氧組的PDCD4和Caspase-3 表達(dá)結(jié)果 |
| 第3章 AR/miR-21對TCMK-1 細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的影響 |
| 3.1 實(shí)驗材料 |
| 3.2 主要實(shí)驗儀器設(shè)備 |
| 3.3 實(shí)驗方法 |
| 3.3.1 實(shí)驗分組 |
| 3.4 實(shí)驗結(jié)果 |
| 3.4.1 AR與miR-21 轉(zhuǎn)染效果的驗證 |
| 3.4.2 用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡 |
| 3.4.3 干擾AR對于miR-21 及細(xì)胞缺氧復(fù)氧的影響 |
| 3.4.4 干擾及過表達(dá)miR-21 對細(xì)胞缺氧復(fù)氧的影響 |
| 3.4.5 各組細(xì)胞蛋白的表達(dá)結(jié)果 |
| 第4章 討論 |
| 第5章 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 非編碼RNA在腎缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
（5）二氧化硫預(yù)處理對急性腎損傷的影響及其與PI3K/Akt信號通路的關(guān)系（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 急性腎損傷與腎缺血再灌注損傷 |
| 1.2 腎缺血再灌注致急性腎損傷的發(fā)病機(jī)制 |
| 1.3 PI3K/Akt信號通路在腎缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡的作用 |
| 1.4 SO_2對器官缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 實(shí)驗動物 |
| 2.1.2 實(shí)驗藥品及配置 |
| 2.1.3 主要試劑及試劑盒 |
| 2.1.4 主要儀器設(shè)備 |
| 2.1.5 主要試劑配制 |
| 2.2 實(shí)驗方法 |
| 2.2.1 腎缺血再灌注損傷(RIRI)大鼠模型建立 |
| 2.2.2 動物分組及給藥方案 |
| 2.2.3 腎功能檢測 |
| 2.2.4 組織形態(tài)學(xué)觀察 |
| 2.2.5 TUNEL熒光染色檢測大鼠腎臟組織細(xì)胞凋亡 |
| 2.2.6 Western blot檢測腎臟組織中蛋白表達(dá) |
| 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 第三章 實(shí)驗結(jié)果 |
| 3.1 SO_2預(yù)處理對RIRI大鼠腎功能的影響 |
| 3.2 SO_2預(yù)處理對RIRI大鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)的影響 |
| 3.3 SO_2預(yù)處理對RIRI大鼠腎臟組織細(xì)胞凋亡的影響 |
| 3.4 SO_2預(yù)處理對RIRI大鼠腎臟組織凋亡相關(guān)蛋白的影響 |
| 3.5 SO_2預(yù)處理對RIRI大鼠腎臟組織PI3K/Akt通路蛋白表達(dá)的影響 |
| 第四章 討論 |
| 第五章 結(jié)論 |
| 第六章 參考文獻(xiàn) |
| 第七章 文獻(xiàn)綜述 二氧化硫在缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 在學(xué)期間的研究成果 |
| 致謝 |
（6）尿毒康合劑對缺血再灌注損傷大鼠的腎保護(hù)作用及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 實(shí)驗動物 |
| 1.1.2 藥品與試劑 |
| 1.1.3 儀器 |
| 1.2 分組、給藥與建模 |
| 1.3 血液生化指標(biāo)檢測[15-16] |
| 1.4 石蠟切片處理[17-19] |
| 1.5 腎小管上皮細(xì)胞凋亡率的檢測 |
| 1.6 腎組織FAS、FASL蛋白的表達(dá)檢測 |
| 1.7 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)檢測(Western blot法) |
| 1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果 |
| 2.2 腎小管上皮細(xì)胞凋亡率對比 |
| 2.3 各組大鼠FAS、FASL蛋白表達(dá)水平比較 |
| 2.4 Western blot法檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平 |
| 3 討論 |
（7）高壓氧對小鼠缺血再灌注腎組織Fas/FasL表達(dá)的影響（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 腎缺血再灌注損傷機(jī)制的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（8）MG53與胃泌素緩解急性腎損傷的研究（論文提綱范文）
| 縮略詞表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一部分 MG53緩解造影劑誘導(dǎo)的急性腎損傷的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 MG53緩解造影劑誘導(dǎo)的急性腎損傷的研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 主要實(shí)驗材料 |
| 2.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 2.1.3 主要實(shí)驗試劑及耗材 |
| 2.1.4 實(shí)驗方法 |
| 2.2 實(shí)驗結(jié)果 |
| 2.2.1 MG53 緩解大鼠CI-AKI |
| 2.2.2 MG53減少碘普羅胺誘導(dǎo)的RPT細(xì)胞凋亡 |
| 2.2.3 MG53減輕碘普羅胺誘導(dǎo)的RPT細(xì)胞膜損傷 |
| 2.2.4 MG53轉(zhuǎn)位至胞膜并結(jié)合PS以介導(dǎo)膜保護(hù)作用 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 第二部分 胃泌素緩解缺血再灌注誘導(dǎo)的急性腎損傷的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 胃泌素緩解缺血再灌注誘導(dǎo)的急性腎損傷的研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 主要實(shí)驗材料 |
| 2.1.2 主要儀器設(shè)備 |
| 2.1.3 主要實(shí)驗試劑 |
| 2.1.4 實(shí)驗方法 |
| 2.2 實(shí)驗結(jié)果 |
| 2.2.1 小鼠腎臟I/R損傷后CCKBR的表達(dá)增加 |
| 2.2.2 胃泌素緩解I/R損傷后腎功能及腎臟病理損害 |
| 2.2.3 胃泌素減少I/R誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞凋亡 |
| 2.2.4 胃泌素緩解H/R誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞活力抑制 |
| 2.2.5 胃泌素減少H/R誘導(dǎo)的HK-2 細(xì)胞凋亡和ROS生成 |
| 2.2.6 PI3K/Akt/Bad途徑參與了胃泌素的保護(hù)作用 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 第三部分 SNX1 調(diào)控AT1R參與血壓調(diào)節(jié)的初步拓展探究 |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 SNX1 調(diào)控AT1R參與血壓調(diào)節(jié)的初步拓展探究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 主要實(shí)驗材料 |
| 2.1.2 主要儀器設(shè)備與耗材 |
| 2.1.3 主要實(shí)驗試劑 |
| 2.1.4 實(shí)驗方法 |
| 2.2 實(shí)驗結(jié)果 |
| 2.2.1 SNX1基因敲除小鼠的構(gòu)建和鑒定 |
| 2.2.2 Snx1-/-小鼠血壓升高、腸系膜動脈對Ang II的反應(yīng)性增強(qiáng) |
| 2.2.3 Snx1-/-小鼠動脈中AT1R的表達(dá)增加 |
| 2.2.4 SNX1 敲低的A10 細(xì)胞中AT1R的表達(dá)增加 |
| 2.2.5 蛋白酶體途徑參與A10 細(xì)胞中SNX1 介導(dǎo)AT1R降解 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 結(jié)論 |
| 全文結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 急性腎損傷中細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文情況 |
| 致謝 |
（9）腎氣丸對缺血再灌注損傷的小鼠腎細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 實(shí)驗動物 |
| 1.1.2 藥品與試劑 |
| 1.2 分組與模型建立 |
| 1.2.1 分組 |
| 1.2.2 模型建立 |
| 1.3 檢測方法 |
| 1.3.1 腎組織勻漿制備 |
| 1.3.2 生化檢查 |
| 1.3.3 HE染色 |
| 1.3.4 TUNEL染色 |
| 1.3.5 PCR及免疫組化檢測Bcl-2、Caspase-3 表達(dá)水平 |
| 1.3.6 Western blot法檢測PI3K、AKT蛋白表達(dá) |
| 1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1 腎氣丸對BUN和 Scr含量的影響 |
| 2 腎氣丸對MDA含量及SOD活性的影響 |
| 3 腎缺血再灌注小鼠腎組織結(jié)構(gòu)各組的比較 |
| 4 PCR及免疫組化檢測Bcl-2、Caspase-3 表達(dá)水平 |
| 5 各組腎組織中PI3K、AKT蛋白表達(dá)測定 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 附錄或縮略詞表 |
| 致謝 |
（10）ADSC-CM對小型豬腹腔鏡肝IRI合并部分肝切除保護(hù)作用的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 腹腔鏡微創(chuàng)技術(shù)簡介 |
| 1.1.1 腹腔鏡微創(chuàng)技術(shù)的發(fā)展簡介 |
| 1.1.2 腹腔鏡肝切除術(shù)的發(fā)展應(yīng)用 |
| 1.1.3 腹腔鏡微創(chuàng)技術(shù)的客觀評價 |
| 1.1.4 腹腔鏡微創(chuàng)技術(shù)的發(fā)展方向 |
| 1.2 肝臟缺血再灌注損傷 |
| 1.2.1 肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制 |
| 1.2.2 肝臟缺血再灌注損傷的預(yù)防治療 |
| 1.2.3 探究肝臟缺血再灌注損傷的實(shí)驗動物模型 |
| 1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞概述 |
| 1.3.1 干細(xì)胞的生物學(xué)特性與分類 |
| 1.3.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的由來與定義 |
| 1.3.3 間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)功能 |
| 1.3.4 間充質(zhì)干細(xì)胞作用機(jī)制 |
| 1.3.5 干細(xì)胞臨床應(yīng)用的安全性 |
| 1.4 間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基 |
| 1.4.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的旁分泌作用 |
| 1.4.2 間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的治療作用 |
| 1.4.3 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基 |
| 1.4.4 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用 |
| 1.5 目的與意義 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 試驗動物 |
| 2.1.2 試驗器材 |
| 2.1.3 試驗藥品及試劑 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng) |
| 2.2.2 改良后小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定 |
| 2.2.3 改良后小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的評估 |
| 2.2.4 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的提取制備 |
| 2.2.5 小型豬腹腔鏡下肝缺血再灌注合并部分切除模型的建立 |
| 2.2.6 腹腔鏡建立肝缺血再灌注合并部分切除模型的安全性監(jiān)測 |
| 2.2.7 小型豬ADSC-CM對血液常規(guī)指標(biāo)的影響 |
| 2.2.8 小型豬ADSC-CM對肝組織形態(tài)學(xué)觀察 |
| 2.2.9 小型豬ADSC-CM對肝臟酶譜的影響 |
| 2.2.10 小型豬ADSC-CM對肝臟氧化應(yīng)激的影響 |
| 2.2.11 小型豬ADSC-CM對炎癥反應(yīng)的影響 |
| 2.2.12 小型豬ADSC-CM對肝細(xì)胞凋亡的影響 |
| 2.2.13 小型豬ADSC-CM對肝再生的影響 |
| 2.2.14 小型豬ADSC-CM成分檢測 |
| 2.2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和形態(tài)比較 |
| 3.2 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定 |
| 3.2.1 表面抗原的鑒定 |
| 3.2.2 成骨分化能力的鑒定 |
| 3.2.3 成脂分化能力的鑒定 |
| 3.2.4 成肝分化能力的鑒定 |
| 3.3 改良后小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的評估 |
| 3.3.1 增殖能力的比較 |
| 3.3.2 遷移能力的比較 |
| 3.4 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的提取制備 |
| 3.4.1 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的提取 |
| 3.4.2 小型豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的濃縮 |
| 3.5 腹腔鏡建立肝損傷模型安全性監(jiān)測結(jié)果 |
| 3.6 血液常規(guī)指標(biāo)檢測結(jié)果 |
| 3.6.1 白細(xì)胞(WBC) |
| 3.6.2 中性粒細(xì)胞(NE) |
| 3.6.3 淋巴細(xì)胞(LY) |
| 3.7 肝組織形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果 |
| 3.7.1 肝臟病理結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果 |
| 3.7.2 肝臟超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果 |
| 3.8 術(shù)后肝臟酶譜檢測結(jié)果 |
| 3.8.1 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT) |
| 3.8.2 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST) |
| 3.8.3 堿性磷酸酶(ALP) |
| 3.8.4 乳酸脫氫酶(LDH) |
| 3.8.5 總膽紅素(TBIL) |
| 3.8.6 總蛋白(TP) |
| 3.9 肝組織氧化應(yīng)激檢測結(jié)果 |
| 3.9.1 丙二醛(MDA) |
| 3.9.2 超氧化物歧化酶(SOD) |
| 3.9.3 過氧化氫酶(CAT) |
| 3.9.4 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px) |
| 3.9.5 髓內(nèi)過氧化物酶(MPO) |
| 3.10 炎癥反應(yīng)水平檢測結(jié)果 |
| 3.10.1 血清炎癥相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果 |
| 3.10.2 肝臟組織炎癥相關(guān)基因水平檢測結(jié)果 |
| 3.11 肝細(xì)胞凋亡水平檢測結(jié)果 |
| 3.11.1 肝臟組織凋亡相關(guān)酶活性檢測結(jié)果 |
| 3.11.2 肝臟組織凋亡相關(guān)基因水平檢測結(jié)果 |
| 3.11.3 肝臟組織凋亡相關(guān)蛋白水平檢測結(jié)果 |
| 3.11.4 肝臟組織Fas和Fasl免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 |
| 3.11.5 肝臟組織TUNEL染色結(jié)果 |
| 3.12 肝臟再生水平檢測結(jié)果 |
| 3.12.1 血清再生相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果 |
| 3.12.2 組織再生相關(guān)基因檢測結(jié)果 |
| 3.12.3 組織再生相關(guān)蛋白檢測結(jié)果 |
| 3.12.4 肝臟組織Ki67免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 |
| 3.13 小型豬ADSC-CM成分分析結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 4.1 ADSCs培養(yǎng)方法的改良 |
| 4.2 ADSC-CM對肝臟缺血再灌注損傷的研究基礎(chǔ) |
| 4.3 ADSC-CM對小型豬肝臟功能的影響 |
| 4.4 ADSC-CM對小型豬氧化應(yīng)激的影響 |
| 4.5 ADSC-CM對小型豬炎癥反應(yīng)的影響 |
| 4.6 ADSC-CM對小型豬細(xì)胞凋亡的影響 |
| 4.7 ADSC-CM對小型豬肝臟再生的影響 |
| 4.8 小型豬ADSC-CM成分分析的探討 |
| 5 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
四、Changes of expression of Fas and FasL protein in rats after renal ischemia/reperfusion injury（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]ADSCs改善大鼠肝IRI合并部分切除損傷最佳移植時機(jī)的研究[D]. 徐嘉元. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2021
- [2]基于中醫(yī)象思維探討腎衰飲干預(yù)慢性腎功能衰竭大鼠的機(jī)制研究[D]. 張亮. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué), 2021(02)
- [3]腎精虧虛對SD雄性大鼠骨髓造血功能的影響及其機(jī)制研究[D]. 呂建芳. 湖北中醫(yī)藥大學(xué), 2021(01)
- [4]AR/miR-21在小鼠腎小管上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷中的作用及機(jī)制研究[D]. 姚球. 南昌大學(xué), 2021(01)
- [5]二氧化硫預(yù)處理對急性腎損傷的影響及其與PI3K/Akt信號通路的關(guān)系[D]. 龐燕. 蘭州大學(xué), 2021(12)
- [6]尿毒康合劑對缺血再灌注損傷大鼠的腎保護(hù)作用及其機(jī)制研究[J]. 安海文,李李,李燕林,劉琳娜,黃琳,李錦山,楊文欽. 實(shí)用藥物與臨床, 2020(12)
- [7]高壓氧對小鼠缺血再灌注腎組織Fas/FasL表達(dá)的影響[D]. 彭顯月. 遵義醫(yī)科大學(xué), 2020
- [8]MG53與胃泌素緩解急性腎損傷的研究[D]. 劉超. 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué), 2020(07)
- [9]腎氣丸對缺血再灌注損傷的小鼠腎細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究[D]. 趙峰. 青島大學(xué), 2020(01)
- [10]ADSC-CM對小型豬腹腔鏡肝IRI合并部分肝切除保護(hù)作用的研究[D]. 焦智慧. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué), 2020(04)
標(biāo)簽：缺血再灌注損傷論文; 血清蛋白論文; 骨髓細(xì)胞論文; 骨髓檢查論文; 細(xì)胞凋亡論文;