一、中國普通人群的基因特點和對HIV遺傳易感性的初步評估（論文文獻(xiàn)綜述）
陳鵬[1]（2021）在《陜西漢族非編碼RNA基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌風(fēng)險相關(guān)性及MIR17HG與其microRNAs在結(jié)直腸癌中的作用研究》文中指出目的:通過非編碼RNA基因多態(tài)性篩選出陜西漢族結(jié)直腸癌易感人群,篩選與結(jié)直腸癌發(fā)生密切相關(guān)microRNA,并對其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用進(jìn)行探討,為臨床預(yù)防及早期診斷結(jié)直腸癌提供理論依據(jù)。方法:1.設(shè)計一項包括514例CRC患者和510例健康對照的病例-對照關(guān)聯(lián)研究,選取9個lnc RNAs基因[MIR137HG、MIR143HG（CARMN）、MIR3142HG、LINC-PINT、MIR124-1HG、MIR675HG（H19）、MIR17HG、MIR497HG和MIR133A1HG]、7個miRNAs基因（MIR577、MIR608、MIR675、MIR192、MIR618、MIR492和MIR423）及GREM1基因的49個SNPs,采用Agena Mass ARRAY基因分型技術(shù),對所篩選的SNPs位點進(jìn)行基因分型,通過卡方檢驗、logistic回歸分析在遺傳模型和分層分析下這些位點與中國陜西漢族人群CRC發(fā)病風(fēng)險及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。并進(jìn)行單倍型分析及MDR分析尋找預(yù)測CRC風(fēng)險的最佳模型。2.分析MIR17HG及miR-17-92a簇在CRC病例及對照組的組織及血液中的表達(dá)。從TCGA和GDC數(shù)據(jù)庫下載腫瘤RNA-seq數(shù)據(jù),分析MIR17HG的mRNA表達(dá)。在TCGA數(shù)據(jù)庫中下載生存數(shù)據(jù)用于生存分析,下載miRNA-seq表達(dá)量數(shù)據(jù)用于分析不同疾病分期的差異。從SRA和GEO數(shù)據(jù)庫中下載數(shù)據(jù)用于健康人和患者血清及不同臨床分期患者血清中游離miR-17-92a簇的豐度比較。3.納入未經(jīng)過任何治療的陜西漢族病例50例,健康對照50例,用RT-qPCR對其血清中miR-17-92a簇的microRNAs表達(dá)進(jìn)行檢測,用ROC曲線判斷這些microRNAs在診斷結(jié)直腸癌病例中的作用。4.用hsa-miR-18a-5p mimics和hsa-miR-18a-5p inhibitor對結(jié)直腸癌HCT116和SW480進(jìn)行處理,研究hsa-miR-18a-5p對結(jié)直腸癌細(xì)胞的作用。利用shortest path算法分析蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中各基因與表達(dá)差異基因之間的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系,篩選結(jié)直腸癌的候選關(guān)鍵靶基因并進(jìn)行初步驗證。結(jié)果:1.rs73376930與增加中國陜西漢族CRC發(fā)病風(fēng)險相關(guān);而rs7549905、rs7318578、rs633727和rs58658771與降低中國陜西漢族CRC發(fā)病風(fēng)險相關(guān)。單倍型GA較CA（rs3024270和rs2075744）、單倍型CT較TA（rs4779584和rs58658771）、單倍型AA較AG（rs2293581和rs73376930）均與降低CRC風(fēng)險相關(guān)。含5個SNPs位點的模型（rs9440302,rs353300,rs1582417,rs157928,rs3024270）為預(yù)測CRC最佳模型,其交叉檢驗一致性為9/10,平衡精確性為:0.719,可預(yù)測患CRC的風(fēng)險OR為6.65（95%CI:4.96-8.91）。2.MIR17HG在CRC組織中高表達(dá),在Ⅳ期病例及黑種人中最高。miR-17-92a簇在CRC組織及血清中高表達(dá),hsa-miR-20a-5p表達(dá)量最高。3.在陜西漢族結(jié)直腸癌病例血清中hsa-miR-18a-5p和has-miR-92a-1相對表達(dá)量高于正常人群。hsa-miR-18a-5p表達(dá)量與臨床分期相關(guān)。血清hsa-miR-18a-5p+CEA+AFP診斷早期結(jié)直腸癌的AUC=0.899（95%CI:0.836-0.962,P<0.001）,靈敏度=0.88,特異性=0.738,優(yōu)于單一指標(biāo)。4.hsa-miR-18a-5p能降低CRC細(xì)胞的增殖、克隆形成能力,增加細(xì)胞凋亡的發(fā)生。用最短距離算法評估hsa-miR-18a-5p可能的11個靶基因,hsa-miR-18a-5p可能通過靶向LIF起到抑制CRC發(fā)展的作用。結(jié)論:1.非編碼RNA基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌風(fēng)險相關(guān)。含五個SNPs的模型可以預(yù)測CRC的發(fā)病風(fēng)險。2.MIR17HG與結(jié)直腸癌發(fā)生密切相關(guān)。MIR17HG及其microRNAs在CRC組織中高表達(dá),表達(dá)量與臨床分期及種族相關(guān)。miR-17-92a簇在CRC血清中高表達(dá)。3.在陜西漢族CRC血清中hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-92a-3p表達(dá)量增加,hsa-miR-18a-5p+CEA+AFP在診斷早期結(jié)直腸癌中具有優(yōu)越性。4.hsa-miR-18a-5p的高表達(dá)能降低結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、克隆形成能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
蔣光明[2]（2021）在《腸道菌群及FUT2/3基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究》文中研究表明目的強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）對患者的生活質(zhì)量和工作能力可產(chǎn)生顯著影響,已成為較為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。AS的發(fā)生與遺傳因素密切相關(guān),特別是HLA-B*27基因。至今已發(fā)現(xiàn)的AS易感基因至少有36種,它們涉及人類免疫學(xué)的各個方面。AS與腸道粘膜損傷和腸道炎癥均密切相關(guān),50%～60%的AS患者伴有腸道炎癥。AS的易感基因中約2/3與炎性腸?。╥nflammatory bowel disease,IBD）的易感基因重疊,而且同樣的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）在兩種疾病中的效應(yīng)相同或相似。腸道菌群失衡可誘發(fā)IBD,并與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）等多種免疫性疾病密切相關(guān)。數(shù)項研究顯示AS患者與健康對照的腸道菌群結(jié)構(gòu)有顯著差異,提示腸道菌群失調(diào)可能在AS的發(fā)生中具有一定作用。因此,在腸道炎癥及腸道菌群相關(guān)基因中進(jìn)一步尋找新的AS易感基因具有特殊價值。人類FUT2和FUT3基因是兩個血型基因,它們共同控制人體組織血型抗原（histo-blood group antigens,HBGAs）的合成。有多項研究表明FUT2和FUT3基因多態(tài)性與腸道菌群及IBD均有相關(guān)性。據(jù)此推測,這些基因可能通過影響腸道菌群而與AS易感性及其臨床癥狀產(chǎn)生關(guān)聯(lián)。但是,關(guān)于腸道菌群與AS的相關(guān)性的研究數(shù)量至今仍然偏少,而且針對不同人群的部分研究結(jié)果也不一致,其結(jié)論尚需要進(jìn)一步驗證。飲食因素對腸道菌群的結(jié)構(gòu)有顯著影響,因而也可能影響AS的易感性,但此前大多數(shù)研究忽視了這一問題,故而其研究結(jié)果可能存在一定偏倚。鑒于這些原因,本研究擬進(jìn)一步在本地人群中驗證腸道菌群與AS的相關(guān)性,并探討飲食因素對腸道菌群及AS的影響。在此基礎(chǔ)上,再探討FUT2/FUT3基因、HBGAs與AS及其臨床癥狀的相關(guān)性,為深入開展相關(guān)機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。第一部分強(qiáng)直性脊柱炎患者腸道菌群的變化方法采用病例對照研究方案,分別招募AS患者及年齡和性別頻數(shù)匹配的健康對照。對研究對象進(jìn)行飲食習(xí)慣、生活環(huán)境及健康狀況調(diào)查。采集研究對象新鮮糞便標(biāo)本,提取糞便菌群DNA并進(jìn)行16S r DNA擴(kuò)增。用Agencourt AMPure XP核酸純化微珠對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化,向DNA片段末端引入特異性標(biāo)簽序列并再次純化。對得到的DNA文庫作質(zhì)量評估,采用Mi Seq Benchtop測序儀進(jìn)行測序。對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選和分析,對得到的操作分類單元（operational taxonomic units,OTU）進(jìn)行分類學(xué)注釋,并作腸道菌群的α多樣性和β多樣性分析。比較病例組和對照組之間、以及各飲食類型組之間腸道菌群的差異,分析腸道菌群與AS疾病指數(shù)的相關(guān)性。在GMrepo數(shù)據(jù)庫中檢索AS患者中發(fā)生顯著變化的細(xì)菌亞群,獲取其在其他疾病中的檢測數(shù)據(jù),并分析這些亞群在不同疾病中相對豐度的變化特征。結(jié)果本研究共納入研究對象207名（包括103名AS患者和104名健康對照）,病例組和對照組間在男/女比例（85/18 vs.84/20,?2=0.106,P=0.744）及年齡方面（33.29±11.66 vs.33.66±12.53,t=0.221,P=0.825）的差異均無顯著性。從所有標(biāo)本中共獲得優(yōu)化后檢測序列1.77×107個。經(jīng)過篩選和分析后,共獲得OTU 1270個,其中951個（74.9%）是病例組和對照組共有的。在優(yōu)勢菌種結(jié)構(gòu)和α多樣性指數(shù)方面,病例組和對照組間差異均無顯著性（均為P>0.05）,但兩組間有49/225個屬的相對豐度差異有顯著性(均為Pcorrected<0.05)。巨單胞菌屬（Megamonas）和鏈球菌屬（Streptococcus）是AS組中相對豐度增幅最大的2個屬,而毛螺旋菌屬（Lachnospira）和支原體屬（Mycoplasma）是相對豐度降幅最大的2個屬。在腸道菌群的β多樣性方面,主坐標(biāo)分析（Principal Coordinate Analysis,PCo A）、主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）、非度量多維尺度分析（nonmetric multidimensional scaling,NMDS）及Adonis分析均顯示兩組標(biāo)本菌群間的差異有顯著性（P<0.05）。按因子分析結(jié)果將研究對象分為A、B、C和D四種飲食類型,病例組和對照組的飲食類型的差異存在顯著性（?2=9.540,P=0.023）。不同飲食類型組間腸道菌群的α多樣性基本相似（均為P>0.05）,但氣味桿菌屬（Odoribacter）和澤瀉菌屬（Alistipes）等菌屬的相對豐度差異有顯著性（均為P<0.05）。吸煙和鍛煉等環(huán)境因素也與腸道菌群的結(jié)構(gòu)有相關(guān)性（均為P<0.05）。在不同分類水平上,腸道菌群的結(jié)構(gòu)與AS的疾病指數(shù)均存在相關(guān)性（均為P<0.05）。與GMrepo數(shù)據(jù)庫中菌群檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,在本研究中發(fā)現(xiàn)的AS病例組及健康對照組間差異最大的細(xì)菌亞群（6個屬和6個種）,其相對豐度大多數(shù)與IBD（包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎）、銀屑病、白塞綜合癥及RA等患者中的水平較為相似,但是少數(shù)亞群的豐度在這些疾病中有明顯差異。結(jié)論腸道菌群與AS的易感性和臨床表現(xiàn)存在相關(guān)性,飲食類型與腸道菌群結(jié)構(gòu)及AS的易感性均有關(guān)。吸煙等環(huán)境因素也與腸道菌群的結(jié)構(gòu)有相關(guān)性。病例及對照組間差異顯著的細(xì)菌亞群大多數(shù)可能在AS及相關(guān)疾病的發(fā)生中發(fā)揮著相似的作用。本研究提示與腸道菌群有關(guān)的因素可能在AS研究中普遍具有一定價值。第二部分FUT2和FUT3基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究方法采用病例對照研究方案,從本地醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診篩選AS確診患者,并從該醫(yī)院體檢中心和本地社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站按年齡和性別頻數(shù)匹配原則招募健康對照。詳細(xì)告知研究對象本研究的相關(guān)情況,征得其同意并自愿簽署《知情同意書》。對AS患者健康狀況進(jìn)行詳細(xì)問卷調(diào)查,內(nèi)容包括患者的生活及飲食習(xí)慣、疾病史、臨床癥狀及疾病活動指數(shù)等。采集所有研究對象外周靜脈血標(biāo)本,采用SNPscan檢測技術(shù)針對篩選的3個FUT2 SNPs位點和2個FUT3基因SNPs位點作基因分型。根據(jù)檢測結(jié)果確定受試者的分泌型狀態(tài)、Lewis血型狀態(tài)和Lewis HBGAs血清型。對AS患者組和健康對照組間的基因型、等位基因、單倍型、分泌型狀態(tài)、Lewis血型狀態(tài)及Lewis HBGAs血清型等頻率進(jìn)行比較,對這些因素、年齡及性別間的交互作用進(jìn)行評估,并對它們與AS患者疾病指數(shù)的相關(guān)性進(jìn)行分析。校正后的多重比較P值以P’表示。結(jié)果本研究中共納入AS確診患者673例（男性546例,女性127例;年齡為28.58±9.31歲）和健康對照687例（男性560例,女性127例;年齡為28.62±7.76歲）,病例組和對照組間在男女比例（4.30 vs.4.41,χ2=0.856,P=0.890）和年齡方面（28.6±9.3歲vs.28.6±7.8歲,t=0.004,P=0.997）的差異均無顯著性。rs28362459的等位基因頻率在病例組和對照組間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.515,P=0.006,P’=0.030;ORG/T=0.782,95%CI,0.650–0.941),rs28362459-G在AS患者組中的頻率顯著低于健康對照組（20.3%vs.24.7%）。但在男性和女性亞群中,該位點等位基因頻率在病例和對照組間的差異都無顯著性（均為P’>0.05）。其他SNPs位點的等位基因頻率及全部SNPs位點的基因型頻率在病例及對照組間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均為P’>0.05）。在總研究對象中,病例及對照組間單倍型TT（rs812936–rs28362459）（χ2=5.663,P=0.017,P’=0.039）和TG（rs812936–rs28362459）頻率的差異均存在顯著性（χ2=7.456,P=0.006,P’=0.013）。在女性研究對象中,單倍型TG（rs812936–rs28362459）在病例組及健康對照組間頻率的差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.624,P=0.018,P’=0.047）。另外,rs28362459與年齡、rs28362459與性別、rs28362459與rs1047781、Lewis狀態(tài)與分泌型狀態(tài)等因素間均存在二因素交互作用。但在這些因素中未發(fā)現(xiàn)多因素交互交用。從表型層面看,無論對于總?cè)巳?還是不同性別亞群,研究對象分泌型狀態(tài)及Lewis血型狀態(tài)的頻率在病例及對照組間的差異都無統(tǒng)計學(xué)意義（均為P’>0.05）,而且由其共同決定的Lewis HBGAs血清型的頻率在AS患者及健康對照組間的差異也無顯著性（均為P’>0.05）。未發(fā)現(xiàn)FUT2和FUT3基因多態(tài)性與巴氏強(qiáng)直性脊柱炎功能指數(shù)（Bath ankylosing spondylitis functional index,BASFI）、巴氏強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動度指數(shù)（Bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI）、強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動度評分（ankylosing spondylitis disease activity score,ASDAS）、疼痛程度、脊柱活動度等AS臨床癥狀指標(biāo)間存在關(guān)聯(lián)（均為P’>0.05）。但rs28362459-G與部分BASFI/BASDAI單項指數(shù)有相關(guān)性（均為P’<0.05）。結(jié)論FUT3基因多態(tài)性與人類AS易感性存在關(guān)聯(lián),但未發(fā)現(xiàn)FUT2基因與AS易感性之間有相關(guān)性。rs28362459-G與較低的AS易感性有關(guān),可能是AS的保護(hù)因素。FUT2和FUT3基因多態(tài)性可能與部分AS臨床癥狀有相關(guān)性。本研究結(jié)果提示部分人類血型基因、HBGAs及腸道菌群可能與AS的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),但這需要在不同種族人群中擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗證,并需要進(jìn)一步開展相關(guān)機(jī)制研究。
劉歡[3]（2021）在《新疆地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群及代謝的多組學(xué)研究》文中研究說明目的:尋找腸道菌群和糞便代謝物在維吾爾族及漢族潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis,UC）患者中的差異,篩選UC患者糞便代謝水平的生物標(biāo)志物及具有疾病鑒別能力的標(biāo)志菌,分析維吾爾族與漢族UC患者腸道菌群與代謝差異的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。通過動物模型構(gòu)建了解差異菌及差異代謝物在UC炎癥表現(xiàn)中的作用。方法:1)有完整隨訪資料及糞便標(biāo)本的初診維吾爾族UC患者23例、漢族UC患者25例,分別選擇患者組共同生活大于1年的健康配偶或一級親屬與患者1:1匹配作為對照組,對提供的糞便樣本進(jìn)行細(xì)菌16S r RNA基因V3-V4區(qū)的擴(kuò)增,構(gòu)建Miseq文庫及IIIumina測序,比對Sliva數(shù)據(jù)庫,獲得樣本微生物各分類學(xué)水平上的物種注釋信息,進(jìn)行分類學(xué)及物種結(jié)構(gòu)組成分析,進(jìn)一步通過隨機(jī)森林分析篩選具有疾病鑒別能力的細(xì)菌;2)第一階段相同糞便樣本,提取全部代謝物,采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）代謝組學(xué)分析平臺對維吾爾族及漢族UC患者的差異代謝物進(jìn)行定量和鑒定。尋找各組間差異代謝物,篩選UC糞便標(biāo)本代謝水平生物標(biāo)志物。綜合微生物多樣性和代謝組實驗結(jié)果,運用兩組學(xué)關(guān)聯(lián)整合分析方法,分析維吾爾族與漢族UC患者差異表達(dá)微生物與代謝物的相關(guān)性;3)建立UC大鼠模型,對UC模型大鼠及正常大鼠分別進(jìn)行維吾爾族及漢族潰瘍性結(jié)腸炎患者糞菌液的糞菌移植。取結(jié)腸粘膜組織,檢測UC相關(guān)細(xì)胞因子（TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10）的表達(dá)。結(jié)果:1)Shannon和Chao指數(shù)所示的微生物群落多樣性和豐富度在維吾爾族UC患者和維吾爾族正常對照、維吾爾族正常對照和漢族正常對照、漢族UC患者和維吾爾族正常對照之間均存在有顯著差異,維吾爾族UC患者較正常對照組微生物多樣性顯著降低。漢族UC患者及其親屬的微生物多樣性和豐富度指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。維吾爾族UC組中Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia的豐度顯著高于漢族UC組,漢族UC組中的Faecalibacterium（糞桿菌屬）、Bifidobacterium（雙歧桿菌屬）和Blautia（布勞氏桿菌屬）的豐度顯著高于維吾爾族UC組（P<0.05）。維吾爾族UC組與維吾爾族正常對照組相比,Veillonella（韋榮氏球菌屬）的豐度顯著偏高,Subdoligranulum和Ruminococcaceae＿UCG-002（瘤胃菌屬）的豐度顯著偏低（P<0.05）。漢族UC組中Prevotella＿9（普雷沃菌屬）的豐度顯著高于漢族正常對照組,Blautia（布勞氏桿菌屬）,Anaerostipes和[Eubacterium]＿h(yuǎn)allii＿group（霍氏真桿菌屬豐度顯著低于漢族正常對照組（P<0.05）。通過ROC分析篩選出6種對維吾爾族UC疾病狀態(tài)與健康對照有一定鑒別能力的重要物種:Christensenellaceae＿R＿7＿group（克里斯滕森氏菌屬）、Ruminococcaceae＿UCG＿005（瘤胃菌屬）、Ruminococcaceae＿UCG＿010（瘤胃菌屬）、Ruminococcaceae＿UCG＿013（瘤胃菌屬）、Haemophilus（嗜血桿菌屬）與Ezakiella（埃扎基拉菌屬）;2）偏最小二乘法判別分析（PLS-DA）發(fā)現(xiàn),各組間代謝組有顯著性差異,漢族UC組與正常對照組間篩選出2種可被注釋的潛在生物標(biāo)志物,維吾爾族UC組與正常對照組間篩選出21種可被注釋的潛在生物標(biāo)志物。Omega-3花生四烯酸作為潛在生物標(biāo)志物在維吾爾族UC患者中顯著降低;微生物多樣性與代謝組學(xué)關(guān)聯(lián)分析中,在維吾爾族UC患者中發(fā)現(xiàn)嗜血桿菌屬與N-乙酰半乳糖胺的高度負(fù)相關(guān);3)維吾爾族及漢族UC患者糞菌液對UC模型大鼠灌腸后,與對照組相比,兩組TNF-α、IL-6水平均顯著升高（P<0.05）,IL-4、IL-10水平顯著降低（P<0.05）。維吾爾族與漢族糞便細(xì)菌移植組TNF-α、IL-10和IL-4水平無顯著性差異（P>0.05）,但I(xiàn)L-6水平顯著高于漢族糞菌液灌腸組（P<0.05）。在正常大鼠兩民族糞菌液灌腸處理組中未觀察到炎癥因子表達(dá)水平的顯著變化。結(jié)論:維吾爾族及漢族UC患者在腸道微生物結(jié)構(gòu)及糞便代謝水平上均存在顯著差異?？死锼闺暇鷮俚?種微生物種屬可能對維吾爾族UC患者與健康對照組有一定診斷能力。漢族UC患者與正常對照組間篩選出溶血磷脂酰絲氨酸類等2種可被注釋的潛在生物標(biāo)志物,維吾爾族UC組與正常對照組間篩選出Omega-3花生四烯酸等21種可被注釋的潛在生物標(biāo)志物,并且Omega-3花生四烯酸表達(dá)水平在維吾爾族UC患者中明顯降低。維吾爾族UC患者中嗜血桿菌屬與N-乙酰半乳糖胺的高度負(fù)相關(guān),嗜血桿菌屬很可能通過影響N-乙酰半乳糖胺表達(dá)量影響腸粘膜屏障。維吾爾族及漢族UC患者腸道微生物及代謝水平的差異可能通過影響IL-6的表達(dá)水平造成疾病表現(xiàn)的差異。腸道微生物結(jié)構(gòu)的差異與代謝水平間的相互作用及Omega-3、IL-6間的相互影響可能與新疆地區(qū)維吾爾族UC患者特殊臨床表現(xiàn)及遺傳背景相關(guān)。兩民族患者糞菌液灌腸在正常大鼠中沒有引起炎癥因子表達(dá)的差異,腸道微生物及其所影響的代謝水平可能是UC疾病的促進(jìn)因素而不是始動因素。
曹媛媛[4]（2021）在《肺表面活性物質(zhì)及其相關(guān)基因與阻塞性睡眠呼吸暫停的相關(guān)性研究》文中研究表明目的:（1）測定調(diào)節(jié)氣道阻力和肺泡彈性回縮力的重要物質(zhì)-肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白（SPs）在阻塞性睡眠呼吸暫停（OSA）患者的血清水平,探討其與睡眠參數(shù)、肺功能指標(biāo)之間是否有相關(guān)性;（2）篩選在OSA發(fā)病過程中起重要作用的中間表型的相關(guān)功能基因為候選基因,利用目標(biāo)區(qū)域測序技術(shù)確定這些基因及其變異位點是否與OSA有關(guān)聯(lián);（3）對通過目標(biāo)區(qū)域測序篩選出的與肺表面活性物質(zhì)（PS）合成、代謝及調(diào)控相關(guān)的基因及其變異位點進(jìn)行進(jìn)一步關(guān)聯(lián)分析,探討其與OSA及臨床表型的相關(guān)性。方法:（1）收集2016年4月-12月期間新疆人民醫(yī)院高血壓診療研究中心明確診斷為OSA的患者198例及同期住院的非OSA者173例,收集所有研究對象的一般臨床資料、多導(dǎo)睡眠監(jiān)測結(jié)果、肺功能指標(biāo),采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清SPs濃度,分析肺容積、SPs與OSA之間的關(guān)系;（2）根據(jù)呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）選擇表型極嚴(yán)重者與表型正常者各50例,對與OSA中間表型相關(guān)的170個候選基因進(jìn)行目標(biāo)區(qū)域二代測序,利用生物信息學(xué)方法篩選出可能影響OSA的基因;（3）對通過測序篩選出的PS相關(guān)基因的高頻SNP位點進(jìn)行病例-對照關(guān)聯(lián)分析,分別探討單個位點、多個位點構(gòu)成的單倍型以及遺傳風(fēng)險評分（GRS）與OSA的風(fēng)險關(guān)系,同時基于GEO公共數(shù)據(jù)庫中OSA微陣列基因芯片,利用生物信息學(xué)方法分析目的基因在OSA樣本中的表達(dá)特征及基因之間的相關(guān)性;對低頻功能性突變利用分子動力學(xué)模擬（MD）方法研究突變后蛋白分子構(gòu)象的改變及表面電荷分布的差異,以分析突變后蛋白功能的變化。結(jié)果:（1）OSA患者中FRC、RV、TLC、FRC實%預(yù)等肺容積指標(biāo)降低,FRC實%預(yù)與AHI、HI指標(biāo)成負(fù)相關(guān),與LSa O2、MSa O2指標(biāo)成正相關(guān),校正性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)后,FRC實%預(yù)仍與LSa O2、MSa O2指標(biāo)成正相關(guān),這可能與FRC的增加使上氣道穩(wěn)定性增加、可塌陷性降低,外周氣道阻力降低有關(guān)。與高血清SPs水平組相比,低血清SPs水平組中OSA所占比率增高,部分睡眠參數(shù)或肺功能指標(biāo)也存在統(tǒng)計學(xué)差異;校正性別、吸煙、飲酒等混雜因素后,低血清SP-A、B、C水平仍是影響OSA的危險因素,提示SPs的降低可能在OSA發(fā)生中起一定作用。（2）利用目標(biāo)區(qū)域二代測序技術(shù)對納入的研究對象的與OSA中間表型相關(guān)的170個候選基因進(jìn)行測序,共篩選過濾出總變異12907個,包括SNV位點11027個,In Del位點1880個。通過生物信息學(xué)分析,在已知中間表型（肥胖、顱面結(jié)構(gòu)、上呼吸道肌肉的神經(jīng)調(diào)節(jié)、睡眠和晝夜節(jié)律）的146個候選基因中,篩選獲得與OSA發(fā)生有關(guān)的基因變異主要包括HLA-DRB1、HLA-DQB1、GHRL、DLAT、VDR、KSR2、BTBD9、HTR2A、HTR3B。在前期工作基礎(chǔ)上,推測呼吸系統(tǒng)順應(yīng)性下降,特別是肺的順應(yīng)性下降可能亦是OSA重要的中間表型,在24個與該表型相關(guān)的功能基因中,發(fā)現(xiàn)與PS合成、代謝及調(diào)控相關(guān)的基因（FASN、LPCAT1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC、STAT3、VEGFA）與OSA的發(fā)生有關(guān),而且這些基因在構(gòu)建的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中與146個已知候選基因有著直接或間接的連接,提示它們之間互相關(guān)聯(lián)、相互作用,參與OSA的發(fā)生。（3）對PS相關(guān)基因進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),FASN和VEGFA可能是OSA的遺傳易感基因,FASN rs72634334位點,VEGFA rs833067、rs1413711、rs58414032、rs735286、rs3025000、rs3024998、rs3025006、rs2010963位點可能是OSA發(fā)病的遺傳位點,這些位點多態(tài)性與多個PSG睡眠參數(shù)存在顯著關(guān)聯(lián)。FASN基因由rs45557233-rs17848939組成的單倍型AC、rs12937862-rs57686731組成的單倍型GA、rs57686731-rs78330892組成的單倍型AC,NFATC3基因由rs151338754-rs78537727-rs12446198-rs137976506-rs1259917-rs9932251-rs766989438-rs12447640-rs12599880-rs7205935-rs73612690-rs74024145-rs76419201-rs3815173組成的單倍型-AGCCAAG-AAAGGGT,可能是OSA的保護(hù)因素;SFTPD基因由rs911886-rs2243639-rs3793925-rs17884887-rs2181204-rs2255601組成的單倍型CCGGAG,由rs6413523-rs721917-rs726288-rs2819096-rs723192-rs958865-rs726014-rs12219080-rs145443778組成的單倍型CGCCCCTCTTT可能會增加OSA的發(fā)病風(fēng)險。PS相關(guān)基因SNP變異的累積效應(yīng)與OSA發(fā)生風(fēng)險有關(guān),其GRS與AHI、HI指標(biāo)獨立相關(guān),且可提高性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)等傳統(tǒng)危險因素組成的基線模型對OSA的預(yù)測能力?；谖㈥嚵谢蛐酒牟町惐磉_(dá)分析證明FASN、VEGFA、SFTPA1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC、SFTPD在OSA樣本中的表達(dá)顯著下調(diào),且VEGFA與FASN、SFTPA1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC表達(dá)呈正相關(guān)。分子動力學(xué)模擬發(fā)現(xiàn)VEGFA一個低頻功能性突變（K346R）的突變體較野生型蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、構(gòu)象波動小、表面電荷的空間分布發(fā)生明顯變化,提示K346R可能為有利突變。結(jié)論:（1）OSA患者中功能殘氣量、殘氣量、肺總量等肺容積指標(biāo)降低;低血清SPs水平組中OSA所占比率增高,與部分睡眠參數(shù)或肺功能指標(biāo)存在關(guān)聯(lián);低血清SP-A、B、C水平是影響OSA的獨立危險因素,SPs的降低可能在OSA發(fā)生中起一定作用。（2）與PS合成、代謝及調(diào)控相關(guān)的基因（FASN、LPCAT1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC、STAT3、VEGFA）可能與OSA的發(fā)生有關(guān)。（3）FASN和VEGFA可能是OSA的遺傳易感基因,其位點多態(tài)性與多個PSG睡眠參數(shù)存在關(guān)聯(lián);FASN、VEGFA及編碼SPs蛋白的基因在OSA樣本中的表達(dá)顯著下調(diào),且VEGFA與FASN、SFTPA1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC表達(dá)呈正相關(guān),提示OSA患者肺內(nèi)VEGFA表達(dá)下降可能通過調(diào)節(jié)SPs基因的轉(zhuǎn)錄、表達(dá),影響SPs蛋白的合成,從而影響到OSA的發(fā)病過程;PS相關(guān)基因SNP變異的累積效應(yīng)與OSA發(fā)生風(fēng)險有關(guān),其GRS與AHI、HI指標(biāo)獨立相關(guān),且可提高傳統(tǒng)危險因素組成的基線模型對OSA的預(yù)測能力;低頻功能性突變VEGFA K346R可能為有利突變,后續(xù)可構(gòu)建該突變真核表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行功能驗證。
胡乃文[5]（2020）在《TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究》文中認(rèn)為第一部分中國漢族人群TNF和GRN基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究研究背景脊柱關(guān)節(jié)炎（spondyloarthritis,SpA）是一組具有共同臨床特點和遺傳學(xué)特征的慢性炎癥性疾病。強(qiáng)直性脊柱炎（Ankylosingspondylitis,AS）是SpA最常見的表現(xiàn)形式。家族聚集性是AS的重要特征。人類白細(xì)胞抗原（humanleukocyte antigen,HLA）-B27是迄今為止所發(fā)現(xiàn)與AS關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)的基因。但近年來的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因在AS發(fā)病中亦具有重要作用。因此,為進(jìn)一步明確AS的病因及發(fā)病機(jī)制,有必要探討非HLA-B27基因在AS發(fā)病中的作用。單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymophisms,SNP）,是指單個核苷酸在基因組水平上發(fā)生變異所導(dǎo)致的DNA序列多態(tài)性。由于SNP廣泛存在于各人群的基因組中,且易于分型,目前業(yè)已成為現(xiàn)代遺傳變異與復(fù)雜性狀研究中的最重要研究對象。腫瘤壞死因子（tumornecrosis factor,TNF）基因,位于6p21.33,是一種非HLA的MHC基因。該基因編碼一種屬于腫瘤壞死因子超家族的、主要由巨噬細(xì)胞分泌的促炎細(xì)胞因子。它可以與TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR受體結(jié)合,從而發(fā)揮作用。TNF與包括自身免疫病在內(nèi)的多種疾病有關(guān)。近來的研究表明TNF在AS發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。關(guān)于TNF是脊柱關(guān)節(jié)炎的關(guān)鍵細(xì)胞因子的最有力證據(jù)是,在臨床中使用TNF抑制劑可以有效改善脊柱關(guān)節(jié)炎（包括強(qiáng)直性脊柱炎）患者的癥狀和體征。從組織水平上,TNF抑制劑可以引起一系列的組織學(xué)改善,包括減少中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的炎性浸潤、減少新骨形成等。既往已有諸多關(guān)于TNF基因的SNP與AS相關(guān)性的研究,但是存在爭議。因此,有必要進(jìn)一步研究TNF的SNP與AS的關(guān)系。GRN基因即顆粒蛋白前體（granulin precursor,PGRN）基因,位于17q21.31,其功能為編碼顆粒蛋白（granulin,GRN）前體。這種信號肽切割后產(chǎn)生成熟的顆粒蛋白,可以進(jìn)一步裂解成6kDa的各種活性肽。這些肽和完整的顆粒蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞生長。然而,顆粒蛋白家族的不同成員可以作為抑制劑、激動劑或?qū)?xì)胞生長具有雙向調(diào)節(jié)作用。近年來,顆粒蛋白被認(rèn)為與許多自身免疫性疾病有關(guān)。有研究提示顆粒蛋白前體是炎癥的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,其抗炎作用可能是通過阻斷TNF與其受體的結(jié)合來實現(xiàn)。還有研究發(fā)現(xiàn)PGRN抗體陽性的銀屑病關(guān)節(jié)炎（PsA）患者,發(fā)生肌腱附著點炎和指（趾）炎的幾率較高。AS和PsA均屬于血清陰性脊柱炎（SpA）,因此同時研究TNF和GRN基因多態(tài)性是否與AS相關(guān)具有重要意義?；谝陨嫌^點,為探討TNF和GRN基因在AS發(fā)病機(jī)制中的潛在作用,我們選擇了 TNF和GRN基因的多個SNP位點,為AS的易感基因評估提供依據(jù)。研究目的探討TNF、GRN基因單核苷酸多態(tài)性與我國山東地區(qū)漢族人群強(qiáng)直性脊柱炎（AS）的關(guān)聯(lián)性。研究方法1.研究對象病例組選取861例AS患者,均屬于中國山東地區(qū)漢族人群,為2014年1月至2015年12月在山東大學(xué)附屬山東省立醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診或病房的符合1984年修訂的紐約AS分類標(biāo)準(zhǔn)的患者。記錄患者的癥狀、體征、受累關(guān)節(jié)、家族史;采用流式細(xì)胞術(shù)測定HLA-B27;所有患者均完成骶髂關(guān)節(jié)X線檢查,由影像科專業(yè)醫(yī)師按骶髂關(guān)節(jié)的國際統(tǒng)一分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。所有患者均需排除其他自身免疫性疾病。正常對照組864例均來自于本研究中心體檢中心健康中國山東漢族人群,已排除腫瘤、其他結(jié)締組織病、傳染病等疾病,年齡、性別均與AS組匹配。所有入選者均在知情同意后入組。2.實驗方法2.1 標(biāo)本收集用EDTA抗凝管采集AS患者和對照組人群空腹外周靜脈血2ml,放置冰箱中在-80℃條件下保存,備檢。2.2 基因組DNA提取使用基因組DNA提取試劑盒,按照說明書操作步驟提取病例組和對照組DNA。2.3 DNA濃度和純度測定向DNA樣本2ul中加入三蒸水48ul,將濃度稀釋至1/25,用紫外分光光度儀測量OD260/OD280比值以及DNA濃度,并分析DNA純度。2.4 多態(tài)性位點的選擇根據(jù)dbSNP數(shù)據(jù)庫獲取TNF、GRN基因的SNPs資料,各個SNP位點的分布頻率由HaploView軟件來確定,同時應(yīng)用Tagger功能篩選TagSNP。初步篩選需滿足次要等位基因頻率>5%及連鎖不平衡系數(shù)r2>0.8。根據(jù)篩選結(jié)果,最終確定 TNF 基因的 rs361525、rs1799964、rs1800629、rs1800630、rs769178和GRN基因的 rs850713、rs3785817、rs3760365、rs4792939、rs25646、rs5848作為研究位點。2.5 基因分型使用Taqman探針Real-time PCR方法按照步驟進(jìn)行基因分型。2.6 檢測結(jié)果分析應(yīng)用SDS軟件（Applied Biosystem,2.0 version）進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和處理TaqMan-PCR擴(kuò)增后的FAM和VIC熒光信號。3.統(tǒng)計學(xué)分析3.1 Hardy-Weinberg 平衡檢驗使用 SHEsis 軟件進(jìn)行 Hardy-Weinberg 平衡檢驗。3.2病例組與對照組基因型和等位基因頻率的統(tǒng)計分析 用SPSS24.0軟件通過卡方檢驗對各個等位基因、基因型和單倍型進(jìn)行分析。使用SHEsis程序計算單倍型頻率、優(yōu)勢比及95%可信區(qū)間。3.3患者臨床表現(xiàn)/實驗室結(jié)果與基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析將收集的相關(guān)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS24.0軟件完成統(tǒng)計學(xué)分析。3.4連鎖不平衡及單倍體型分析各個多態(tài)性位點之間的連鎖不平衡及單倍體型的統(tǒng)計學(xué)分析分別由HaploView2.0及SHEsis軟件來完成。4.SNP位點的生物信息學(xué)功能分析使用GTEx,Haploreg和Regulome DB數(shù)據(jù)庫對 TNF 基因的 rs1799964,rs1800629,rs1800630,rs769178 功能進(jìn)行注釋。研究結(jié)果1.基本信息共對861例AS病人及864例正常健康對照進(jìn)行了基因分型。AS病人中,男性患者634例,女性患者227例,年齡15-71歲,平均年齡30.56±10.98歲。正常對照組,男性619例,女性245例,年齡14-73歲,平均年齡31.97±11.23歲。所有研究對象均屬山東漢族人群。病例組與對照組在年齡、性別上無顯著性差異（p>0.05）。2.Hardy-We i nberg 平衡檢驗本實驗所有SNPs的p值>0.05,均符合Hardy-Weinberg平衡定律,提示所有研究的SNP位點基因型和吻合基因的觀察值和期望值吻合良好。3.TNF基因型頻率和等位基因頻率在AS及正常人的分布3.1有統(tǒng)計學(xué)差異的位點對于rs1799964位點,AS組與對照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001;OR=0.60,95%CI=0.50-0.71）,提示 C 等位基因是 AS 的保護(hù)性基因。對于rs1800629位點,AS組與對照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.0004）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（p=0.0001;OR=0.60,95%CI=0.39-0.74）,提示A等位基因是AS的保護(hù)性基因。對于rs1800630位點,AS組與對照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001,95%CI=0.48-0.72）,提示A等位基因是AS的保護(hù)性基因。對于rs769178位點,AS組與對照組基因型分布的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001）;兩組等位基因分布的差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.0001,95%CI=2.18-3.09）,提示T等位基因是AS的危險性基因。3.2無統(tǒng)計學(xué)差異的位點對于rs361525位點,AS組與對照組基因型和等位基因頻率無顯著性差異。4.GRN基因型頻率和等位基因頻率在AS及正常人的分布對于 rs850713、rs3785817、rs3760365、rs4792939、rs25646、rs5848 位點,AS組與對照組基因型和等位基因頻率均無顯著性差異。提示GRN基因多態(tài)性與AS易感性無關(guān)。5.對TNF等位基因頻率分布具有顯著性差異位點的基因型遺傳模式分析對于rs1799964位點,在顯性遺傳模式下,CC基因型和CT基因型可降低AS的風(fēng)險;在隱性遺傳模式下,CC基因型可降低AS的風(fēng)險。對于rs1800629位點,在顯性遺傳模式,AA基因型和AG基因型可降低AS的風(fēng)險;在隱性遺傳模式下,AA基因型可降低AS的風(fēng)險。對于rs1800630位點,在顯性遺傳模式下,AA基因型和AC基因型可降低AS的風(fēng)險;在隱性遺傳模式下,AA基因型可降低AS的風(fēng)險。對于rs769178位點,在顯性遺傳模式下,TT基因型和GT基因型可增加AS的風(fēng)險;在隱性遺傳模式下,TT基因型可增加AS的風(fēng)險。6.TNF基因多態(tài)性與AS患者臨床/實驗室指標(biāo)關(guān)聯(lián)分析rs1799964、rs1800629、rs1800630、rs769178 在顯性和隱性遺傳模式下的基因型與AS患者的性別、年齡、病程、家族史、HLA-B27陽性、外周關(guān)節(jié)受累、葡萄膜炎均無明顯關(guān)聯(lián)性。7.連鎖不平衡及單倍型分析統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示,TNF及GRN基因的各研究位點之間存在弱的連鎖不平衡。TNF基因5個研究位點的CGAGG、CGCAG、TACGG、TGCGG、TGCGT單倍型以及GRN基因6個研究位點的CTGACA單倍型在AS組與正常對照組之間比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異。8.TNF基因生物信息學(xué)分析在 GTEx 數(shù)據(jù)庫中對 TNF 基因的 rs1800629、rs1800630、rs769178 和rs1799964位點進(jìn)行eQTL分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)上述SNPs可影響多個基因的表達(dá)量,且在GSE25101數(shù)據(jù)集中顯示,上述部分基因在AS患者中亦具有差異表達(dá),提示rs1800629、rs1800630、rs769178 和 rs1799964 的 SNPs 可能通過調(diào)控其他基因的表達(dá)量從而在強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮生物學(xué)功能。結(jié)論1.我們在國內(nèi)外首次確認(rèn)了 TNF基因位點rs769178多態(tài)性與AS易感性相關(guān);驗證了 rs1800629、rs1800630、rs769178 和 rs1799964 在 AS 組與對照組等位基因頻率及基因型差異顯著,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。TNF基因多態(tài)性與山東地區(qū)漢族人群AS易感性相關(guān),eQTL分析顯示其可能通過影響某些基因的表達(dá)量影響AS的易感性。目前未發(fā)現(xiàn)其與AS的臨床表現(xiàn)具有顯著相關(guān)性。2.GRN基因多態(tài)性與山東地區(qū)漢族人群的AS易感性無關(guān),但是SNP基因型頻率在不同種族、不同地區(qū)的分布存在明顯差異,故需要更收集不同地區(qū)、不同人群的更多資料,來進(jìn)一步研究GRN基因與AS是否存在關(guān)聯(lián)性。第二部分ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎易感性關(guān)系的Meta分析研究背景強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）是一種以累及中軸和外周關(guān)節(jié)、韌帶和肌腱附著點為主要特征的慢性、全身性、炎癥性疾病。AS具有高度遺傳性,人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen,HLA）-B27基因是迄今為止發(fā)現(xiàn)的和AS關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)的基因。但近年來的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因在AS發(fā)病中也具有重要作用,研究其在AS發(fā)病中所起作用對進(jìn)一步明晰AS的病因及發(fā)病機(jī)制具有重要意義。近年來的研究發(fā)現(xiàn),非HLA-B27基因中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶（endoplasmic reticulum aminopeptidase,ERAP）1基因在AS風(fēng)險中也起重要作用。許多病例對照研究發(fā)現(xiàn)ERAP1的基因多態(tài)性與AS相關(guān),但研究結(jié)果不盡一致。結(jié)果不一致的原因之一可能與人群差異有關(guān)。Meta分析是一種總結(jié)許多研究結(jié)果的有效的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。既往已有多篇相關(guān)的Meta分析,但是既往研究所選擇的數(shù)據(jù)庫、研究人群不盡一致,且近2年多來又有多篇新的關(guān)于ERAP1基因多態(tài)性與AS關(guān)系的文章數(shù)據(jù)。故在本研究中,我們結(jié)合全基因組關(guān)聯(lián)研究（genomewide association studies,GWAS）和病例對照研究進(jìn)行 Meta 分析,以探討ERAP1是否與總體人群和不同種族亞群的AS易感性相關(guān)。研究目的通過Meta分析,確定ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性是否與總體人群和不同種族亞群AS易感性之間的關(guān)系。研究方法1.一般資料主題詞采用“ankylosing spondylitis”、“ERAP1”和“polymorphism”,檢索Pubmed、Embase和Cochrane數(shù)據(jù)庫,同時檢索相關(guān)自由詞。語種設(shè)置為英語。2.篩選方法按照提前制定好的文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)與剔除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)。每項研究均摘錄以下信息:第一作者,發(fā)表年份,研究人群的國家和種族,病例組和對照組的數(shù)量,ERAP1多態(tài)性的等位基因數(shù)量。采用Newcastle-Ottawascale（NOS）文獻(xiàn)質(zhì)量評價量表評價納入的研究的質(zhì)量。3.統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用Review Manager 5.3進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。使用OR值及其95%可信區(qū)間來作為效應(yīng)指標(biāo),進(jìn)行總體人群和按照種族劃分的人群亞組分析。使用I2來對異質(zhì)性進(jìn)行定量分析。對于存在明顯異質(zhì)性的數(shù)據(jù),再進(jìn)行敏感性分析。采用漏斗圖來分析發(fā)表偏倚。研究結(jié)果1.文獻(xiàn)檢索結(jié)果初步文獻(xiàn)檢索Pubmed數(shù)據(jù)庫92篇,Embase數(shù)據(jù)庫21篇,Cochrane數(shù)據(jù)庫2篇,總計105篇。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)過仔細(xì)閱讀文獻(xiàn)題目、摘要和全文,最終納入文獻(xiàn)31篇。總共包括26291名AS患者和45779名健康人對照。2.Meta分析結(jié)果對 rs27044,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27980,rs27037,rs27434,rs26653,rs1065407,rs27529,rs27582,rs469876,rs7711564,rs27038,rs3734016,rs11209032,rs26618,rs27895,rs17481856,rs13167972等共21個位點進(jìn)行Meta分析,并按照地域和人種進(jìn)行亞組分析。結(jié)果顯示,rs27434的A等位基因在總體人群和高加索人群、中東人群、東亞人群中均為AS的危險因素;rs27980、rs27582、rs469876、rs27038、rs11209032、rs26618、rs27895、rs17481856 SNP在總體人群中和各亞組人群中均與AS無明顯相關(guān)性;其余12個位點在總體人群和各亞組人群中與AS的相關(guān)性各有不同。在總體人群中,rs27434,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27037,rs26653,rs7711564和rs13167972 SNP與AS的易感性相關(guān)。在高加索人群中,rs27044,rs17482078,rs10050860,rs30187,rs2287987,rs27037,rs27434,rs26653,rs1065407,rs13167972 SNP與AS的易感性相關(guān)。在中東人群中,rs27044,rs27434,rs26653 SNP 與 AS 相關(guān)。在東亞人群中,rs30187,rs27037,rs27434,rs27529,rs7711564 SNP 與 AS 易感性相關(guān)。結(jié)論對目前已發(fā)表的有關(guān)ERAP1基因SNP與AS易感性關(guān)系的研究進(jìn)行Meta分析表明,ERAP1基因的單核苷酸多態(tài)性與總體人群、高加索人群、中東人群和東亞人群的AS易感性有關(guān),具體每個位點對AS易感性的影響大小在不同種族之間存在差異。對rs27434的功能注釋提示,其可能通過影響ERAP1的表達(dá)以及間接影響TNF的作用從而對AS易感性產(chǎn)生影響,但尚需進(jìn)一步研究以明確。下一步還需進(jìn)一步的種族特異性關(guān)聯(lián)研究來確定不同人群ERAP1的SNP與AS易感性的遺傳關(guān)系。
劉攀[6]（2020）在《ALDH2和C12orf30基因多態(tài)性與新疆漢族、哈薩克族食管鱗癌的易感性及預(yù)后的相關(guān)研究》文中提出目的:探討新疆漢族、哈薩克族人群染色體12q24區(qū)域中ALDH2（乙醛脫氫酶2）基因單核苷酸多態(tài)性rs671（G>A）和c12orf30（N-α-乙醛轉(zhuǎn)移酶）基因單核苷酸多態(tài)性rs4767364（A>G）與食管癌易感性及預(yù)后的關(guān)系。方法:新疆地區(qū)食管癌患者哈薩克族65例,漢族62例;同一地區(qū)無腫瘤病史的正常人群對照哈薩克族75例,漢族50例。采用Taq Man等位基因鑒別技術(shù)檢測研究對象染色體12q24區(qū)域中ALDH2基因rs671位點和c12orf30基因rs4767364位點的多態(tài)性基因型分布;采用Hardy-Weinberg平衡定律檢驗基因型分布情況。分析rs671位點和rs4767364位點各基因型與食管癌患者預(yù)后的關(guān)聯(lián)。結(jié)果:新疆哈薩克族食管癌組與對照組中,ALDH2基因rs671位點GG、GA、AA基因型頻率分別為46.15%、40.00%、13.85%和68.00%、26.67%、5.33%,ALDH2基因rs671位點基因型頻率在新疆哈薩克族食管癌組與對照組之間有顯著性差異（P<0.05）;新疆漢族食管癌組與對照組中,rs671位點GG、GA、AA基因型頻率分別為54.84%、40.32%、4.84%和58.00%、38.00%、4.00%,rs671位點基因型頻率在新疆漢族食管癌組與對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。新疆哈薩克族食管癌組與對照組中,c12orf30基因rs4767364位點AA、AG、GG基因型頻率分別為75.38%、21.54%、3.08%和78.67%、18.67%、2.67%,c12orf30基因rs4767364位點基因型頻率在新疆哈薩克族食管癌組與對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。新疆漢族食管癌組與對照組中,c12orf30基因rs4767364位點AA、AG、GG基因型頻率分別為64.52%、32.26%、3.23%和66.00%、30.00%、4.00%,c12orf30基因rs4767364位點基因型頻率在新疆漢族食管癌組與對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。ALDH2基因rs671位點與新疆哈薩克族、漢族食管癌預(yù)后均相關(guān)（P<0.05）,c12orf30基因rs4767364位點與新疆哈薩克族食管癌預(yù)后相關(guān)（P<0.05）,與漢族食管癌患者預(yù)后無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論:染色體12q24區(qū)域中,ALDH2基因rs671（G>A）與新疆哈薩克族食管癌易感性及哈薩克族、漢族的食管癌患者預(yù)后可能均相關(guān)。c12orf30基因rs4767364位點與哈薩克族食管癌患者預(yù)后可能相關(guān)。通過對ALDH2基因、C12orf30基因多態(tài)性與吸煙、飲酒及體重指數(shù)的相關(guān)性研究得出,ALDH2基因的rs671位點在飲酒人群和不飲酒人群中,以及在不同分級的BMI指數(shù)人群中,病例組和對照組分布差異均不顯著。C12orf30基因rs4767364位點在飲酒人群和不飲酒人群中、吸煙人群和不吸煙人群中,病例組和對照組分布差異均不顯著。C12orf30基因rs4767364位點基因型、等位基因頻率在III+IV級人群中分布差異顯著,經(jīng)性別、診斷年齡、家族史、吸煙、飲酒等因素調(diào)整后則無顯著相關(guān)性。在進(jìn)一步的研究中發(fā)現(xiàn),ALDH2基因、C12orf30基因多態(tài)性與新疆漢族、哈薩克族ESCC放射敏感性的相關(guān)性研究,顯示ALDH2基因rs671位點的AA基因型的放療療效與其他兩個基因型比較,有統(tǒng)計學(xué)差異。余均與放射敏感性不相關(guān)。
王燕[7]（2020）在《新疆地區(qū)變應(yīng)性鼻炎吸入變應(yīng)原譜及相關(guān)拷貝數(shù)變異分析》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的:通過對新疆地區(qū)近13年變應(yīng)原皮膚點刺試驗結(jié)果回顧性分析及對變應(yīng)性鼻炎家系的全基因組測序和變應(yīng)性鼻炎病例對照組拷貝數(shù)變異分析,了解了本區(qū)變應(yīng)性鼻炎患者變應(yīng)原譜的分布及變化情況,探討了基因拷貝數(shù)變異與變應(yīng)性鼻炎的相關(guān)性。方法:第一部分:回顧性分析了2007年1月-2019年12月間5019例患者的皮膚點刺試驗結(jié)果,研究分析了不同變應(yīng)原在13年間的分布情況及變化規(guī)律以及在不同性別、年齡、族別患者中的分布情況。第二部分:對1個新疆地區(qū)漢族家系（3個變應(yīng)性鼻炎樣本,2個正常樣本）進(jìn)行了低深度全基因組測序,并采用了生物信息學(xué)的方法及拷貝數(shù)變異片段區(qū)域的基因功能尋找篩選候選拷貝數(shù)變異;第三部分:收集漢族變應(yīng)性鼻炎患者696例,漢族對照528例,對其外周血提取DNA后,采用AccucopyTM拷貝數(shù)檢測技術(shù)對13個候選基因拷貝數(shù)變異進(jìn)行檢測:8＿1、8＿2、9＿1、9＿2、ADAM8、CCL3L1、IL1RL1、MUC5B、MUC5AC、NME7、ORMDL3、SERPINA1＿1、SERPINA1＿2。分析13個候選基因拷貝數(shù)變異在病例對照組中的分布情況及其與變應(yīng)性鼻炎的相關(guān)性。結(jié)果:第一部分:1)14種變應(yīng)原在不同時間的分布明顯不同,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,變應(yīng)原陽性率隨年份不同而變化,但藜屬在13年間基本處于本區(qū)變應(yīng)原的首位。14種變應(yīng)原總體陽性率分別是藜屬48.2%、車前草33.2%、艾蒿33.1%、豚草32.7%、刺槐32.1%、梯牧草32%、粉螨31.5%、楊樹30.3%、塵螨29.6%、蟑螂26.9%、貓上皮11.6%、特異青霉菌9.4%、狗上皮8.5%、交鏈孢霉7.7%;2)不同性別間的比較,男性2140例（42.6%）,女性2879例（57.4%）。艾蒿、藜屬、豚草、車前草、梯牧草、刺槐、交鏈孢霉、特異青霉、塵螨、粉螨、蟑螂、楊樹、貓上皮的男性陽性率明顯高于女性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。狗上皮的陽性率在男性女性之間分布均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）;3)不同年齡之間的比較,除狗上皮陽性率在不同年齡間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.288）外,其余13種:艾蒿、藜屬、豚草、車前草、梯牧草、刺槐、楊樹、交鏈孢霉、特異青霉、貓上皮、塵螨、粉螨、蟑螂在不同年齡間變應(yīng)原陽性率差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;4)不同民族間的比較,漢族3850例、維吾爾族694例、哈薩克族270例、回族113例、其他民族92例,交鏈孢霉、特異青霉、貓上皮、塵螨、粉螨、蟑螂陽性率在不同民族間分布,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。艾蒿、藜屬、豚草、車前草、梯牧草、刺槐、楊樹、狗上皮在不同民族間變應(yīng)原陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。第二部分:通過對家系全基因組測序后,總共發(fā)現(xiàn)了1360個拷貝數(shù)變異,其中3個變應(yīng)性鼻炎樣本攜帶而2正常個體未攜帶,篩選出62個拷貝數(shù)變異,將測序質(zhì)量低、結(jié)果不可靠;拷貝數(shù)變異片段范圍內(nèi)沒有功能基因的以及拷貝數(shù)變異內(nèi)基因與變應(yīng)性鼻炎沒有明確關(guān)系的剔除,最終得到與變應(yīng)性鼻炎相關(guān)的候選拷貝數(shù)變異;第三部分:8＿1、8＿2、9＿1、9＿2、ADAM8、CCL3L1、IL1RL1、MUC5B、NME7、ORMDL3、SERPINA1＿1、SERPINA1＿2的拷貝數(shù)在病例對照組的分布無明顯差異（P>0.05）.MUC5AC在病例對照組中差異分布具有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.002）。結(jié)論:第一部分:新疆地區(qū)變應(yīng)原分布隨時間不同在不斷變化,主要變應(yīng)原以草本類為主,變應(yīng)原在不同性別、年齡、族別變應(yīng)性鼻炎患者中的分布不同。第二部分:經(jīng)過測序篩選共得到13個候選拷貝數(shù)變異,分別是8＿1、8＿2、9＿1、9＿2、ADAM8、CCL3L1、IL1RL1、MUC5B、MUC5AC、NME7、ORMDL3、SERPINA1＿1、SERPINA1＿2;第三部分:MUC5AC基因拷貝數(shù)變異與變應(yīng)性鼻炎存在相關(guān)性。同時CCL3L1在新疆漢族人群中的拷貝數(shù)范圍是1-10。
何林熹[8]（2020）在《中醫(yī)體質(zhì)分類辨識及腎陽虛體質(zhì)線粒體基因SNP研究》文中研究指明目的:1.研究通過系統(tǒng)梳理古今文獻(xiàn),厘清中醫(yī)體質(zhì)內(nèi)涵和外延,深入考證中醫(yī)體質(zhì)分類與辨識體系,構(gòu)建中醫(yī)體質(zhì)客觀化辨識體系。為中醫(yī)體質(zhì)臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。2.為探索體質(zhì)客觀化分類與辨識診斷的有效途徑,以腎陽虛體質(zhì)為切入點,采用線粒體基因組全測序方法,篩選腎陽虛體質(zhì)線粒體基因SNP位點。通過位點功能注釋,探索腎陽虛體質(zhì)辨識的分子生物學(xué)基礎(chǔ),為腎陽虛體質(zhì)分類及辨識篩選可能的生物標(biāo)志物。方法:1.文獻(xiàn)研究（1）文獻(xiàn)檢索:古代文獻(xiàn)檢索以“體質(zhì)”、“稟質(zhì)”、“素質(zhì)”、“稟賦”、“氣稟”、“稟質(zhì)”、“素稟”為關(guān)鍵詞在《中華醫(yī)典》中對兩漢至明清的古籍文獻(xiàn)進(jìn)行檢索。此外以“體質(zhì)內(nèi)涵”、“體質(zhì)辨識”、“體質(zhì)診斷”、“體質(zhì)分類”、“體質(zhì)差異”、“Constitution of Traditional Chinese Medicine”、“Constitution of TCM”為關(guān)鍵詞在CNKI、Pub Med上檢索1979年1月至2018年12月期間公開發(fā)表的文獻(xiàn)。（2）文獻(xiàn)摘錄:按照文獻(xiàn)納入排除標(biāo)準(zhǔn)對文獻(xiàn)進(jìn)行摘錄和整理。（3）文獻(xiàn)整理歸納與凝練:通過文獻(xiàn)整理、歸納古今文獻(xiàn),凝練中醫(yī)體質(zhì)的學(xué)術(shù)思想,并以此為核心,深入考證中醫(yī)體質(zhì)分類與辨識方法,厘清體質(zhì)內(nèi)涵及外延。2.腎陽虛體質(zhì)受試者線粒體基因SNP研究。（1）腎陽虛體質(zhì)受試者納入:根據(jù)課題組前期制定的腎陽虛體質(zhì)評判標(biāo)準(zhǔn)初步篩選腎陽虛體質(zhì)受試者,采用《中醫(yī)體質(zhì)分類判定標(biāo)準(zhǔn)》排除受試者中陽虛體質(zhì)外的其余兼夾體質(zhì)。經(jīng)3名中醫(yī)診斷學(xué)專業(yè)人員診斷確認(rèn)后,簽署知情同意書納入實驗研究。（2）線粒體基因組全測序:腎陽虛體質(zhì)受試者血液樣本采集后,抽取樣本線粒體DNA,經(jīng)質(zhì)檢、擴(kuò)增后進(jìn)行線粒體基因組全測序。（3）線粒體基因SNP位點篩選:將納入受試者DNA序列與線粒體基因標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比較,篩選腎陽虛體質(zhì)受試者的共同SNP位點。（4）線粒體基因SNP位點分子生物學(xué)功能注釋。結(jié)果:1.文獻(xiàn)研究（1）檢索納入古代文獻(xiàn)條目3997條;檢索到現(xiàn)代中文文獻(xiàn)2603篇,英文文獻(xiàn)150篇。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)篩選后納入中文文獻(xiàn)365篇,英文文獻(xiàn)16篇。（2）體質(zhì)形成:體質(zhì)的形成秉承于先天得養(yǎng)于后天,以先天為主后天為輔。（3）體質(zhì)內(nèi)涵:體質(zhì)是在先天稟賦和后天環(huán)境共同作用下,“身心合一”觀的指導(dǎo)下,在外貌體態(tài)、生理特征、精神情志方面所表現(xiàn)的人體特質(zhì)。（4）體質(zhì)分類:古代體質(zhì)分類以“陰陽”“五行”為綱。其中《靈樞·通天》和《靈樞·陰陽二十五人》中分類最為詳盡,涵蓋面最廣。現(xiàn)代體質(zhì)分類主要包括病理體質(zhì)分類法和更為多元化的綜合分類法14種,并對特殊群體（如兒童、婦女）的體質(zhì)進(jìn)行了分類。（5）體質(zhì)辨識:中醫(yī)古代體質(zhì)辨識內(nèi)涵非常豐富,其中主要包括外貌體態(tài)、生理特點及心理特點?，F(xiàn)代中醫(yī)體質(zhì)辨識研究聚焦于中醫(yī)體質(zhì)的客觀化診斷,其中中醫(yī)體質(zhì)量表的運用最為廣泛。此外,四診信息的客觀化及現(xiàn)代生物學(xué)指標(biāo)的引入推動了體質(zhì)客觀化的發(fā)展。（6）體質(zhì)分類辨識體系框架:形成以“身心合一”觀為核心,外貌體態(tài)特征為基礎(chǔ),分子生物學(xué)及客觀化舌、脈診信息數(shù)據(jù)為參考,體質(zhì)問卷量表數(shù)據(jù)為輔助的中醫(yī)體質(zhì)客觀化分類辨識體系框架。2.腎陽虛體質(zhì)受試者線粒體基因SNP研究（1）通過體質(zhì)量表評定和專業(yè)人員評估共納入腎陽虛體質(zhì)受試者31例。（2）基因序列比對篩選了10個腎陽虛體質(zhì)共同突變位點,這些位點分別位于以下6個基因片段上:MT-RNR1（m.73A>G,m.263A>G,m.750A>G,m.1438A>G）、MT-RNR2（m.3105ACN>AC）、MT-CO1（m.7028 C>T）、MT-ATP6（m.8860A>G）、MT-ND4（m.11719 G>A）、MT-CYB（m.14766 C>T,m.15326A>G）。位點中有2個位點m.73A>G及m.263A>G位于線粒體DNA上游非編碼區(qū),其余位點均位于外顯子區(qū)域。（3）腎陽虛體質(zhì)線粒體基因位點注釋發(fā)現(xiàn)突變位點與衰老進(jìn)程、能量代謝、生殖功能及精神情志異常相關(guān)。結(jié)論:1.體質(zhì)是在先天稟賦和后天環(huán)境共同作用下,“身心合一”觀指導(dǎo)下,外貌體態(tài)、生理功能和精神情志方面所表現(xiàn)的個體特質(zhì)?！吧硇暮弦弧彼枷胴灤┱麄€體質(zhì)分類、體質(zhì)辨識的全過程,是體質(zhì)理論的核心思想。2.以“身心合一”觀為核心,外貌體態(tài)特征為基礎(chǔ),分子生物學(xué)及客觀化舌、脈診信息數(shù)據(jù)為參考,體質(zhì)問卷量表數(shù)據(jù)為輔助的中醫(yī)體質(zhì)客觀化分類辨識體系的構(gòu)建為中醫(yī)體質(zhì)診斷客觀化奠定了理論基礎(chǔ)。3.線粒體基因SNP改變所導(dǎo)致的線粒體功能不良可能是腎陽虛體質(zhì)形成的生物學(xué)基礎(chǔ),這是腎陽虛體質(zhì)實質(zhì)研究新的切入點。4.研究篩選出的6個基因及其上的10個位點可能是腎陽虛體質(zhì)辨識的潛在生物標(biāo)志物。5.體質(zhì)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究,是探索體質(zhì)分類辨識客觀化的途徑之一。
馬潔瓊[9]（2020）在《干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體、核酸方法建立及應(yīng)用策略研究》文中提出研究背景為科學(xué)、有效地預(yù)防與控制HIV（Human immunodeficiency virus,HIV）、HCV（Hepatitis C virus,HCV）及TP（Treponema Pallidum,TP）傳播,獲知其流行趨勢與動態(tài),我國建立了全國艾滋病哨點監(jiān)測系統(tǒng),多年來該系統(tǒng)在艾滋病防治中發(fā)揮著不可替代的重要作用。截至目前全國共有1975個哨點,每年需進(jìn)行數(shù)十萬人份的檢測,包括HIV、HCV、TP。現(xiàn)有哨點樣本檢測采用的是血漿檢測法,每年需在規(guī)定的時間內(nèi)集中采集大量血漿樣本,由專人將其運送至實驗室,分別對每份樣本進(jìn)行HIV、HCV、TP的檢測,同時實驗室管理辦法規(guī)定陽性血漿樣本須長期儲存。現(xiàn)行的血漿檢測方法在實際工作中面臨著諸多挑戰(zhàn),包括現(xiàn)場采集血漿樣本需要大量人力和耗材、樣本運輸要求高尤其是HIV屬于高致病性病原微生物必須符合高級別生物安全運輸要求、長期積累的陽性血漿樣本保存空間難以持續(xù)擴(kuò)大、需要溯源時無法用血漿樣本追溯到個體的遺傳特征等諸多問題。需要創(chuàng)新研究,建立更加適宜我國艾滋病哨點監(jiān)測的實驗室檢測方法。與血漿相比,干血/漿斑樣本具有采樣方便、穩(wěn)定性好、儲存簡單、無需冷鏈運輸,可最大限度降低生物安全風(fēng)險等諸多優(yōu)勢,既往研究已經(jīng)證實干血/漿斑對監(jiān)測遺傳性疾病是一個有效方法,也有相關(guān)研究干血斑檢測HIV、HCV和TP的報道。但已有研究檢測HIV、HCV、TP的干血斑處理缺乏標(biāo)化的統(tǒng)一方法,檢測每個病原菌時需要分別處理干血斑。為了提高檢測效率,需要創(chuàng)新,研究標(biāo)化干血斑處理方法,一份干血斑一次性標(biāo)化處理后可檢測三種病原菌,不需要分別處理三次干血斑。研究建立更加適宜我國哨點監(jiān)測的實驗室檢測方法,對于提高我國艾滋病哨點監(jiān)測的實驗室總體效率具有十分重要的現(xiàn)實應(yīng)用價值。研究方法1.干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立、評價及策略研究方法學(xué)建立:基于現(xiàn)有商業(yè)化試劑盒,通過優(yōu)化血液采集體積、干血斑洗脫液加樣量、干血斑大小、洗脫液體積、洗脫液組分、洗脫溫度及洗脫時間等實驗參數(shù),建立適宜的應(yīng)用一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的酶聯(lián)免疫檢測方法。實驗室評價:構(gòu)建系列實驗室評價盤,包括實驗室基礎(chǔ)盤、實驗室干擾盤、實驗室精密度盤等,評價應(yīng)用一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的敏感性與特異性、線性范圍、分析靈敏度、分析特異性、精密度性等實驗室性能指標(biāo),并評價干血斑樣本穩(wěn)定性。臨床評價:以男同人群（Men who have sex withmen,MSM）,注射吸毒人群（people who injectdrugs,PWIDs）兩類重點人群作為研究對象,2018年6月至2019年11月,在黑龍江省哈爾濱市男同人群監(jiān)測哨點、江西省南昌市美沙酮門診共采集429份血液/血漿配對樣本,其中229份為MSM人群樣本,200份為PWIDs人群樣本。采用已建立的一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法進(jìn)行檢測。以血漿檢測結(jié)果作為參考標(biāo)準(zhǔn),分析一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的臨床敏感性與臨床特異性,并計算PPV、NPV及Kappa值。策略研究:提出干血斑抗體篩查策略,即直接采用一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法進(jìn)行HIV、HCV及TP感染的篩查,以常規(guī)實驗室檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),初步探討其應(yīng)用效果。2.干漿斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立與評價方法學(xué)建立:基于現(xiàn)有商業(yè)化試劑盒,通過優(yōu)化血漿采集體積、干漿斑大小、洗脫液體積、洗脫液組分、洗脫溫度及洗脫時間等實驗參數(shù),建立適宜的應(yīng)用一份干漿斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA檢測方法。實驗室評價:構(gòu)建系列實驗室評價盤,包括實驗室基礎(chǔ)盤、實驗室干擾盤、實驗室精密度盤等,評價應(yīng)用一份干漿斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的敏感性與特異性、線性范圍、分析靈敏度、分析特異性、精密度性等實驗室性能指標(biāo),并評價干漿斑樣本穩(wěn)定性。臨床評價:以MSM、PWIDs兩類重點人群作為研究對象,2018年6月至2019年10月,在黑龍江省哈爾濱市男同人群監(jiān)測哨點、江西省南昌市美沙酮門診共采集329份血液/血漿配對樣本,其中129份為MSM人群樣本,200份為PWIDs人群樣本。采用己建立的一份干漿斑檢測HIV/HCV/TP抗體ELISA方法進(jìn)行檢測。以血漿檢測結(jié)果作為參考標(biāo)準(zhǔn),分析一份干漿斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的臨床敏感性與臨床特異性,并計算PPV、NPV及Kappa值。進(jìn)一步比較分析一份干血斑與一份干漿斑分別用于檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的檢測性能。3.干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP核酸方法的建立與策略研究方法學(xué)建立:建立和優(yōu)化應(yīng)用一份干血斑檢測HIV/HCV/TP的核酸方法。與血漿檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),評價所建立方法的準(zhǔn)確性。策略研究:首次提出干血斑HIV/HCV/TP抗體與核酸檢測相結(jié)合的干血斑篩查策略,即第一步采用一份干血斑進(jìn)行HIV/HCV/TP抗體檢測;第二步采用一份干血斑對HIV抗體陽性樣本進(jìn)行HIV-1 RNA或HIV-1 DNA檢測,對HCV抗體陽性樣本進(jìn)行HCV RNA檢測,對TP抗體陽性樣本則再次采用ELISA方法復(fù)檢,結(jié)果以第二步檢測結(jié)果為準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上,以常規(guī)實驗室檢測結(jié)果為參考標(biāo)準(zhǔn),初步探討此干血斑篩查策略的應(yīng)用效果。研究結(jié)果1.干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立、評價及策略研究方法學(xué)建立:一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法最適條件為血液收集量為70～100 μL,取全斑,采用500 μL 1‰ Tween20-PBS洗脫液于RT下洗脫4 h,HIV檢測時加入樣本為（30 μL干血斑洗脫液+70 μL 1‰ Tween20-PBS洗脫液）。實驗室評價:結(jié)果表明分析特異性良好;不同抗體水平干血斑樣本的日間精密度、批內(nèi)精密度、斑間精密度的變異系數(shù)（CV）均小于15%;干血斑樣本穩(wěn)定性良好。臨床評價:429份配對樣本的結(jié)果顯示,HIV、HCV、TP抗體陽性率分別為6.1%（26/429）、27.7%（119/429）與 15.0%（64/429）;其中,HIV/HCV/TP、HIV/HCV、HIV/TP及HCV/TP合并感染樣本分別為2份、2份、4份、9份。一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的臨床特異性均為100%,臨床敏感性分別為88.5%（95%CI:0.69～0.97）、98.3%（95%CI:0.93～1.00）、92.2%（95%CI:0.82～0.97）;PPV均為100%,NPV 分別為 99.3%、98.3%、92.2%;Kappa 值分別為 0.96、0.99、0.95。策略研究:采用干血斑抗體篩查策略檢測HIV、HCV及TP抗體,與實驗室檢測結(jié)果相比,兩種方法檢測結(jié)果的一致性為:在HIV檢測中,陽性符合率88.5%（23/26）,陰性符合率100%（403/403）,總符合率為99.3%（426/429）;在HCV檢測中,陽性符合率 98.3%（117/119）,陰性符合率 100%（310/310）,總符合率為 99.5%（427/429）;在TP檢測中,陽性符合率92.2%（59/64）,陰性符合率100%（365/365）,總符合率為 98.8%（424/429）。2.干漿斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立與評價方法學(xué)建立:一份干漿斑檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法的最適條件為血漿收集量為100 μL取全斑,采用500μL 1‰Tween20-PBS于RT下洗脫2 h。實驗室評價:結(jié)果表明分析特異性良好;不同抗體水平干漿斑樣本的日間精密度、批內(nèi)精密度、斑間精密度的CV均小于15%;干漿斑樣本穩(wěn)定性良好。臨床評價:329份配對樣本的結(jié)果顯示,血漿樣本中,HIV、HCV、TP抗體陽性率分別為 3.0%（10/329）、35.9%（118/329）與 11.2%（37/329）。其中,HIV/HCV/TP、HIV/HCV、HIV/TP及HCV/TP合并感染樣本量分別為1份、2份、4份、9份。千漿斑用于HIV/HCV/TP抗體檢測的臨床敏感性分別為90.0%（95%CI:0.54～0.99）、99.2%（95%CI:0.97～1.00）、86.5%（95%CI:0.70～0.95）;臨床特異性均為 100%。Kappa值分別為 0.95、0.99、0.92。干血斑與干漿斑檢測結(jié)果比較分析顯示:整體而言,與血漿檢測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),干血斑與干漿斑用于聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP的總符合率分別為:HIV抗體檢測,干血斑的總符合率為99.4%（327/329）,干漿斑的總符合率為99.7%（328/329）;HCV抗體檢測,干血斑的總符合率為99.4%（327/329）,干漿斑的總符合率為99.7%（328/329）;TP抗體檢測,干血斑的總符合率為98.5%%（324/329）,干漿斑的總符合率為98.8%（325/329）。兩種樣本的HIV/HCV/TP抗體檢測結(jié)果S/CO比值整體分布相似,S/CO比值分布的中位數(shù)與平均值相近。3.干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP核酸方法的建立與策略研究方法學(xué)建立:成功建立了一份干血斑用于HIV RNA/DNA及HCV RNA聯(lián)合檢測的方法。結(jié)果表明:HIV-1 VL干血斑的檢出率為84.4%（27/32）;血漿與干血斑HCV VL檢測結(jié)果的一致率為98.1%（101/103）。血漿與干血斑樣本HIV-1 VL檢測相關(guān)性r=0.68（n=27,P<0.05）。對于 HCV VL 檢測,二者相關(guān)性 r=0.61（n=89,P<0.05）。Altman-Bland分析顯示:血漿與干血斑中HIV-1 VL檢測值平均差異為1.00±1.01 log10 copies/mL;所有干血斑樣本HIV-1 VL均在±1.96 SDs范圍之內(nèi)即-0.97～+2.97 log10 copies/mL。針對HCV VL檢測,血漿與干血斑樣本中VL平均差異為0.15±1.08 log10 copies/mL,94.38%（84/89）樣本檢測結(jié)果在±1.96 SDs 范圍內(nèi)即-1.96～+2.67 log10 copies/mL。采用干血斑進(jìn)行HIV-1 DNA檢測,與血漿HIV-1 RNA檢測結(jié)果一致且RT-PCR檢測性能良好。策略研究:在一份干血斑檢測HIV/HCV/TP抗體與檢測核酸方法相結(jié)合的基礎(chǔ)上,提出干血斑抗體與核酸相結(jié)合篩查策略,其實驗流程為:即第一步采用一份干血斑進(jìn)行HIV/HCV/TP抗體檢測;第二步采用一份干血斑檢測HIV/HCV核酸方法對HIV抗體陽性樣本進(jìn)行HIV-1 RNA或HIV-1 DNA檢測,對HCV抗體陽性樣本進(jìn)行HCV RNA檢測,對TP抗體陽性樣本則再次采用ELISA方法復(fù)檢,結(jié)果以第二步檢測結(jié)果為準(zhǔn)。將常規(guī)實驗室檢測結(jié)果與干血斑抗體與核酸篩查策略進(jìn)行比較,采用干血斑抗體與核酸監(jiān)測HIV、HCV及TP的總符合率分別為:HIV-1 RNA總符合率為99.3%或HIV-1 DNA總符合率為100%;HCVRNA總符合率為98.6%;TP總符合率為98.8%。研究結(jié)論1.本研究標(biāo)化了干血/漿斑處理方法,優(yōu)化了實驗流程,成功建立了一份干血/漿斑樣本檢測HIV/HCV/TP抗體的ELISA方法,顯著縮短了試驗流程;并證實所建立方法具有良好敏感性與特異性,可滿足實驗室檢測需要。干血斑與干漿斑樣本具有良好的穩(wěn)定性;二者檢測結(jié)果一致性高,可適應(yīng)于不同檢測環(huán)境。2.應(yīng)用一份干血斑聯(lián)合檢測HIV-1 RNA、HIV-1 DNA及HCV RNA,其HIV-1 DNA檢測結(jié)果與血漿檢測結(jié)果一致;HIV-1 RNA與HCV RNA檢測具有較高檢出率。證實一份干血斑可用于HIV-1 DNA、HIV-1 RNA及HCV RNA聯(lián)合檢測。3.本研究將一份干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體和核酸監(jiān)測策略應(yīng)用于艾滋病哨點監(jiān)測,與現(xiàn)行策略檢測結(jié)果一致性高,為提升現(xiàn)有哨點樣本檢測效率提供了新的技術(shù)策略,對建立適宜我國哨點監(jiān)測的實驗室檢測策略具有重要參考價值。
李達(dá)[10]（2020）在《TNF-α在深靜脈血栓形成中的作用及其機(jī)制研究》文中研究指明深靜脈血栓形成（DVT）是血管外科一類常見疾病,好發(fā)于下肢,靜脈血栓一旦脫落可導(dǎo)致肺動脈栓塞（PE）,具有潛在的致死風(fēng)險。下肢深靜脈血栓形成的發(fā)病原因復(fù)雜,針對其致病機(jī)制的研究始終是血管外科研究領(lǐng)域中的熱點,越來越多的研究證據(jù)顯示炎癥反應(yīng)可能是深靜脈血栓形成的重要病因,但是有關(guān)炎癥相關(guān)因子在下肢深靜脈血栓形成發(fā)病過程中的作用機(jī)制尚未被全面闡釋。腫瘤壞死因子α（TNF-α）作為一種重要的炎癥因子,具有調(diào)節(jié)血管滲透性,刺激促凝因子釋放和誘導(dǎo)高凝狀態(tài)形成等一系列生理功能,既往研究已顯示TNF-α可能參與動脈血栓形成過程,但是動脈與靜脈血栓形成在機(jī)制方面存在差異。截止目前,針對TNF-α是否參與靜脈血栓形成過程的研究極少。本研究結(jié)合多種實驗方法,探討TNF-α以及TNF-α基因在深靜脈血栓形成過程中的作用以及可能的作用機(jī)制。研究首先檢測TNF-α在DVT患者與健康對照人群中的表達(dá)情況;通過分離并培養(yǎng)外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）,觀察TNF-αm RNA的表達(dá)情況以及組織因子（TF）、纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1）以及細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）的表達(dá);在深靜脈血栓組PBMCs中加入TNF-α抑制劑后再觀察以上幾種因子的變化情況,探索TNF-α與TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)之間關(guān)聯(lián)性。在第二部分研究中,采用PCR-LDR方法檢測TNF-α基因rs1800629（-308G/A）位點的多態(tài)性情況,并結(jié)合薈萃分析方法,探索該位點多態(tài)性與靜脈血栓易感性之間的關(guān)聯(lián)。在第三部研究中,通過制作小鼠深靜脈血栓形成模型,分組實驗觀察TNF-α是否具有促進(jìn)靜脈血栓形成的作用,探索TNF-α影響靜脈血栓形成的可能作用機(jī)制以及具體受體通路和信號通路機(jī)制;并驗證具有炎癥抑制作用的ATL（15-epi-lipoxin A4）是否能夠減輕靜脈血栓形成過程中的炎癥反應(yīng),以及是否具有抑制TNF-α誘導(dǎo)產(chǎn)生的促血栓作用以及可能的作用機(jī)制。研究的第一部分結(jié)果顯示在深靜脈血栓患者中TNF-α的表達(dá)顯著增高,血栓患者PBMCs中TNF-αmRNA高表達(dá),在深靜脈血栓發(fā)病過程中,可能存在TNF-α相關(guān)基因的激活。TNF-α的高表達(dá)與TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的高表達(dá)相關(guān),加入TNF-α抑制劑可以降低這些因子的表達(dá)。研究的第二部分結(jié)果顯示TNF-α基因rs1800629位點多態(tài)性與下肢深靜脈血栓易感性之間無明顯相關(guān)性。研究的第三部分結(jié)果顯示TNF-α對于靜脈血栓形成具有促進(jìn)作用。TNF-α的促血栓作用可能是通過TNFR2受體介導(dǎo)的PI3K/AKT/NF-κB信號通路激活并引起TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等多種促凝因子、纖溶抑制因子以及粘附因子的表達(dá)升高實現(xiàn)。ATL能夠抑制靜脈血栓發(fā)生過程中的炎癥反應(yīng),降低TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表達(dá),也顯示出對于TNF-α誘導(dǎo)的促血栓生成作用具有一定抑制作用。本課題研究對于TNF-α在深靜脈血栓形成過程中具體作用以及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了較為深入的探索,可能為日后深靜脈血栓的診治提供新的思路和方法。本課題研究分為三個部分,下面就各部分研究目的、方法、結(jié)果和結(jié)論進(jìn)行分述。第一部分TNF-α在下肢深靜脈血栓形成患者中的表達(dá)及其影響深靜脈血栓形成的可能機(jī)制探討目的:觀察孤立性下肢深靜脈血栓（DVT）患者TNF-α的表達(dá)情況以及在經(jīng)過抗凝溶栓治療后的TNF-α表達(dá)變化情況。通過分離并培養(yǎng)健康對照人群和DVT患者的外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）,觀察TNF-α的表達(dá)以及組織因子（TF）、纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）以及細(xì)胞粘附因子（ICAM-1/VCAM-1）的表達(dá)。初步探討TNF-α在下肢深靜脈血栓形成過程中的可能機(jī)制。方法:經(jīng)過篩選后納入無明顯誘因的孤立性急性下肢深靜脈血栓形成的患者共50例,對照組為同時期體檢的健康人群50例,通過酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）方法檢測兩組血漿TNF-α的表達(dá)水平。深靜脈血栓組患者應(yīng)用依諾肝素抗凝以及尿激酶溶栓治療,ELISA法檢測經(jīng)治療一周后深靜脈血栓組患者的TNF-α水平,比較治療前后TNF-α水平變化情況。分離并培養(yǎng)健康對照人群以及DVT患者的外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）,實時熒光定量PCR（RT-q PCR）檢測TNF-αm RNA表達(dá)情況,Western Blot方法檢測TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)情況。最后再加入TNF-α抑制劑,檢測TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)變化情況。結(jié)果:下肢深靜脈血栓形成的患者血漿中TNF-α表達(dá)水平顯著升高,經(jīng)過抗凝溶栓治療后TNF-α表達(dá)水平降低。通過培養(yǎng)PBMCs,可檢測到深靜脈血栓患者TNF-αm RNA水平顯著高于健康對照組,TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1表達(dá)也顯著高于健康對照組。在深靜脈血栓組PBMCs中加入TNF-α抑制劑后,TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1表達(dá)情況顯著降低。結(jié)論:TNF-α在深靜脈血栓形成患者血漿中顯著高表達(dá),經(jīng)過抗凝溶栓治療后表達(dá)水平降低。通過細(xì)胞實驗證實,深靜脈血栓組PBMCs中TNF-αm RNA表達(dá)升高。TNF-α與TF、PAI-1等凝血系統(tǒng)激活以及纖溶系統(tǒng)抑制因子高表達(dá)相關(guān),同時與ICAM-1以及VCAM-1等粘附因子的高表達(dá)相關(guān)。第二部分TNF-α基因rs1800629多態(tài)性與深靜脈血栓形成易感性之間的相關(guān)性研究目的:探討TNF-α基因rs1800629（-308G>A）位點多態(tài)性與漢族人群下肢深靜脈血栓形成之間的關(guān)系。并通過meta分析方法,結(jié)合本部分所得的研究數(shù)據(jù),全面分析rs1800629位點多態(tài)性與靜脈血栓易感性之間相關(guān)性。方法:收集2017年11月至2019年1月期間于連云港市第一人民醫(yī)院住院治療的孤立性急性下肢深靜脈血栓形成患者50例為病例組,選取同時期于連云港市第一人民醫(yī)院體檢中心體檢的健康人群50例為對照組。下肢深靜脈血栓形成的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2017年第三版中國深靜脈血栓診療指南,所有患者均經(jīng)由血管彩超或者下肢靜脈造影檢查確診。收集病例組及對照組入組人員基本臨床資料以及外周血樣本,應(yīng)用PCR-LDR方法檢測病例組及對照組中TNF-α基因rs1800629位點多態(tài)性情況,分析rs1800629多態(tài)性與下肢深靜脈血栓形成之間的關(guān)聯(lián)性。隨后通過系統(tǒng)化檢索pubmed、embase、web of science、中國知網(wǎng)以及萬方數(shù)據(jù)庫,收集既往有關(guān)TNF-α基因rs1800629位點多態(tài)性與靜脈血栓栓塞癥關(guān)聯(lián)性的研究文獻(xiàn),提取研究數(shù)據(jù)后,整合我們所得出的rs1800629多態(tài)性與靜脈血栓易感性之間關(guān)聯(lián)性的數(shù)據(jù),采用Revman5.3軟件進(jìn)行薈萃分析。結(jié)果:病例組中TNF-α基因rs1800629位點的各基因型分布頻率分別為GG型42例（84%）,GA型6例（12%）以及AA型2例（4%）,對照組中各基因型分布頻率分別為GG型44例型（88%）,GA型5例（10%）以及AA型1例（2%）,對照組人群符合Hardy-Weinberg平衡,病例組及對照組之間基因型分布無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。按照等位模型（G vs.A）、雜合模型（GA vs.GG）、純合模型（AA vs.GG）、顯性模型（GA+AA vs.GG）以及隱性模型（AA vs.GG+GA）五種基因?qū)Ρ饶Ｐ瓦M(jìn)行統(tǒng)計分析后,也未發(fā)現(xiàn)TNF-α基因rs1800629位點多態(tài)性與下肢深靜脈血栓易感性之間存在顯著相關(guān)性。在薈萃分析部分中,通過系統(tǒng)化檢索相關(guān)數(shù)據(jù)庫并結(jié)合本研究所得的相關(guān)研究數(shù)據(jù),共納入5項相關(guān)研究,所納入薈萃分析的病例組總樣本量1396例,對照組總樣本量1311例,通過軟件計算后,五種基因?qū)Ρ饶Ｐ徒y(tǒng)計結(jié)果如下:等位模型（OR:1.05 95%CI 0.91-1.23 p=0.49）、顯性模型（OR:1.06 95%CI 0.89-1.25 p=0.52）、雜合模型（OR:1.05 95%CI 0.88-1.25 p=0.59）、純合模型（OR:1.14 95%CI 0.66-1.97p=0.65）以及隱性模型（OR:1.14 95%CI 0.66-1.96 p=0.65）,所有基因?qū)Ρ饶Ｐ途窗l(fā)現(xiàn)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在所有的基因?qū)Ρ饶Ｐ椭芯匆婏@著異質(zhì)性（I2<50%）。按照不同族群進(jìn)行的亞組分析結(jié)果也未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計學(xué)差異的基因?qū)Ρ饶Ｐ?。結(jié)論:TNF-α基因rs1800629位點多態(tài)性與下肢深靜脈血栓形成易感性之間無明顯相關(guān)性。第三部分TNF-α在小鼠深靜脈血栓模型中的作用影響及機(jī)制研究目的:建立小鼠深靜脈血栓形成模型,觀察TNF-α是否具有促進(jìn)靜脈血栓形成的作用,并探索可能的作用機(jī)制。研究TNF-α對靜脈血栓影響的具體受體通路及信號通路機(jī)制。通過進(jìn)一步實驗驗證ATL（15-epi-lipoxin A4）是否能夠抑制靜脈血栓形成過程中的炎癥反應(yīng),以及是否具有抑制TNF-α誘導(dǎo)的促血栓生成作用,并研究ATL產(chǎn)生影響的可能信號通路機(jī)制。方法:1、通過游離結(jié)扎小鼠下腔靜脈建立小鼠深靜脈血栓形成模型,確認(rèn)小鼠血栓模型建立成功;分別給與血栓模型小鼠靜脈注射PBS或者溶有TNF-α的PBS,分別觀察建模手術(shù)后不同的時間點（6h、12h、24h、48h）TNF-α對小鼠靜脈血栓形成的影響情況,通過對血栓長度及重量的測量,確定血栓差異最大的時間點。2、將小鼠隨機(jī)分為4組,分別為:○1對照組（Control組）○2假手術(shù)組（Sham組）○3 DVT手術(shù)組（術(shù)前10min尾靜脈注射PBS再進(jìn)行血栓建模）○4 TNF-α+手術(shù)組（術(shù)前10min尾靜脈注射溶解有0.4μg/kg TNF-α的PBS再進(jìn)行血栓建模）,在血栓形成差異最大的時間點,處死小鼠并對各組小鼠血栓形成情況進(jìn)行測量;ELISA法檢測血栓組小鼠及對照組和假手術(shù)組小鼠TNF-α水平;流式細(xì)胞方法檢測血小板表面活化標(biāo)記CD61和CD49β的表達(dá),通過血小板聚集實驗檢測各組小鼠血小板聚集情況;Western Blot方法測量各組小鼠下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)情況。3、通過TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠進(jìn)行血栓建模（術(shù)前10min尾靜脈注射0.4μg/kg溶有TNF-α的PBS再進(jìn)行血栓建模）,對TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠靜脈血栓形成情況進(jìn)行測量;測量各組小鼠下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)情況;對比TNFR1-/-以及TNFR2-/-小鼠與野生型TNF-α+手術(shù)組小鼠之間是否存在血栓形成的差別以及各種因子表達(dá)的差別。4、再取小鼠分為兩組,一組為ATL+DVT手術(shù)組（術(shù)前1h尾靜脈注射溶解有100μg/kg 15-epi-lipoxin A4的PBS再進(jìn)行血栓建模）,另外一組為ALT+TNF-α+手術(shù)組（術(shù)前1h尾靜脈注射溶解有100μg/kg15-epi-lipoxin A4的PBS,術(shù)前10min尾靜脈注射溶解有0.4μg/kg TNF-α的PBS再進(jìn)行血栓建模）,測量各組小鼠下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)情況;采用HE染色以及免疫組化的方法分析血栓組織中炎癥細(xì)胞表達(dá)情況以及各組小鼠下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1以及ICAM-1表達(dá)情況;RT-q PCR方法檢測TNF-α以及ATL對于小鼠下腔靜脈血管組織中PI3K、AKT1以及NF-κB m RNA表達(dá)的影響;Western Blot方法檢測各組小鼠下腔靜脈內(nèi)皮組織中p-PI3K、PI3K、pAKT1、AKT1以及NF-κB表達(dá)情況。結(jié)果:1、DVT手術(shù)組小鼠血漿TNF-α水平顯著升高,通過分組研究發(fā)現(xiàn)TNF-α對于靜脈血栓形成具有促進(jìn)作用,術(shù)后24小時TNF-α對血栓形成效果影響最大。與對照組、假手術(shù)組以及DVT手術(shù)組相比,TNF-α+手術(shù)組小鼠血栓長度和重量都增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2、TNF-α+手術(shù)組小鼠與DVT手術(shù)組小鼠在血小板聚集實驗中無顯著性差異,流式細(xì)胞檢測方法也顯示在兩組小鼠血漿中活化的血小板無顯著差異。3、與對照組、假手術(shù)組以及DVT手術(shù)組相比,TNF-α+手術(shù)組小鼠下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表達(dá)均升高。4、對比野生型TNF-α+手術(shù)組,TNFR1-/-小鼠中血栓形成長度和重量沒有顯著差異;TNFR2-/-小鼠在血栓形成長度和重量方面降低,下腔靜脈血管組織中TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子表達(dá)情況減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。5、HE染色結(jié)果顯示TNF-α+手術(shù)組血栓組織中炎癥細(xì)胞浸潤水平顯著高于手術(shù)組,而ATL+手術(shù)組小鼠血栓組織中炎癥細(xì)胞浸潤水平顯著低于DVT手術(shù)組。免疫組化以及Western Blot方法檢測結(jié)果顯示ATL+手術(shù)組小鼠TF、PAI-1、ICAM-1以及ICAM-1的表達(dá)相較DVT手術(shù)組小鼠受到抑制,ATL+TNF-α+手術(shù)組小鼠TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1的表達(dá)相較TNF-α+手術(shù)組小鼠顯著降低。6、RT-q PCR檢測結(jié)果以及Western Blot方法檢測結(jié)果顯示TNF-α+手術(shù)組小鼠下腔靜脈血管組織中PI3K、ATK1以及NF-κB m RNA表達(dá)顯著高于DVT手術(shù)組,相關(guān)蛋白的表達(dá)也顯著增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。而ATL則能夠抑制PI3K、ATK1以及NF-κB的表達(dá)。結(jié)論:在小鼠深靜脈血栓模型中,TNF-α表達(dá)水平升高。TNF-α對于靜脈血栓形成具有促進(jìn)作用。TNF-α在小鼠體內(nèi)沒有顯示出影響血小板聚集及活化的作用。其促血栓形成作用可能主要通過TNFR2受體介導(dǎo)的PI3K/AKT/NF-κB信號通路激活并引起TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子表達(dá)升高實現(xiàn)。ATL能夠抑制靜脈血栓發(fā)生過程中的炎癥反應(yīng)以及TF、PAI-1、ICAM-1以及VCAM-1等因子的表達(dá),也顯示出對于TNF-α誘導(dǎo)的促血栓生成作用具有一定抑制作用。ATL所產(chǎn)生的抑制作用可能是通過抑制PI3K/AKT/NF-κB信號通路進(jìn)而下調(diào)由TNF-α介導(dǎo)的一系列促凝因子以及粘附因子的表達(dá)來實現(xiàn)。
二、中國普通人群的基因特點和對HIV遺傳易感性的初步評估（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、中國普通人群的基因特點和對HIV遺傳易感性的初步評估（論文提綱范文）
（1）陜西漢族非編碼RNA基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌風(fēng)險相關(guān)性及MIR17HG與其microRNAs在結(jié)直腸癌中的作用研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 縮略語對照表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 結(jié)直腸癌(CRC)簡述 |
| 1.2 microRNAs與CRC關(guān)系 |
| 1.3 LncRNAs與CRC關(guān)系 |
| 1.4 結(jié)直腸癌的早篩 |
| 1.4.1 目前用于平均風(fēng)險人群的CRC篩查主要包括以下方法 |
| 1.4.2 microRNAs可作為腫瘤的早期篩查指標(biāo) |
| 1.5 MIR17HG及其在結(jié)直腸癌中的作用 |
| 1.6 本課題的研究目標(biāo)和意義 |
| 第二章 LncRNAs,miRNAs及GREM1基因多態(tài)性與中國陜西漢族結(jié)直腸癌風(fēng)險的相關(guān)性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 研究對象 |
| 2.2.2 主要儀器及試劑 |
| 2.2.3 實驗方法 |
| 2.2.4 統(tǒng)計分析方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 參與者的基本特征 |
| 2.3.2 HWE檢驗結(jié)果 |
| 2.3.3 等位基因分布及與CRC風(fēng)險的關(guān)系 |
| 2.3.4 遺傳模型下SNPs與CRC風(fēng)險的關(guān)系 |
| 2.3.5 SNPs與CRC風(fēng)險相關(guān)分層分析 |
| 2.3.6 SNPs與CRC臨床特征相關(guān)性 |
| 2.3.7 單倍型與CRC風(fēng)險的關(guān)系 |
| 2.3.8 多個SNPs交互作用的MDR分析 |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 MIR137HG和MIR577多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.2 MIR143HG多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.3 MIR3142HG多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.4 LINC-PINT多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.5 MIR124-1HG多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.6 MIR608多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.7 H19和MIR675多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.8 MIR192、MIR618和MIR492多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.9 MIR17HG多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.10 GREM1 多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.4.11 MIR497HG、MIR423和MIR133A1HG多態(tài)性與CRC的關(guān)系 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 第三章 MIR17HG及其編碼的micro RNAs在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床信息關(guān)聯(lián)的生物信息學(xué)分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 研究方法 |
| 3.2.1 研究對象 |
| 3.2.2 研究方法 |
| 3.2.3 統(tǒng)計方法 |
| 3.3 研究結(jié)果 |
| 3.3.1 MIR17HG的泛癌分析 |
| 3.3.2 MIR17HG在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與臨床預(yù)后分析 |
| 3.3.3 miR-17-92a簇在結(jié)直腸癌與癌旁正常組織中的表達(dá)及臨床預(yù)后分析 |
| 3.3.4 miR-17-92a簇在結(jié)直腸癌病例與健康對照,病例不同分期中血清中的表達(dá)及預(yù)后分析 |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 miR-17-92a簇在大多數(shù)腫瘤及CRC中高表達(dá) |
| 3.4.2 miR-17-92a簇的microRNAs在大多數(shù)腫瘤及結(jié)直腸癌組織中高表達(dá) |
| 3.4.3 miR-17-92a簇的microRNAs在CRC病例血清中高表達(dá) |
| 3.5 結(jié)論 |
| 第四章 miR-17-92簇在結(jié)直腸癌病例與健康人群血清中的表達(dá)分析及診斷作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 研究方法 |
| 4.2.1 研究對象 |
| 4.2.2 主要儀器和試劑 |
| 4.2.3 實驗方法 |
| 4.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 4.3 研究結(jié)果 |
| 4.3.1 研究對象基本特征 |
| 4.3.2 病例組與對照組血清學(xué)指標(biāo) |
| 4.3.3 血清中microRNA的相對表達(dá)量 |
| 4.3.4 CEA、AFP、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-92a-1診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線 |
| 4.3.5 CEA、AFP、hsa-miR-18a-5p聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌的ROC曲線 |
| 4.3.6 各指標(biāo)與結(jié)直腸癌分期的相關(guān)性分析 |
| 4.3.7 hsa-miR-18a-5p、CEA對早期結(jié)直腸的診斷的ROC曲線 |
| 4.3.8 各指標(biāo)區(qū)分早晚結(jié)直腸癌的ROC曲線 |
| 4.4 討論 |
| 4.4.1 糖蛋白癌胚抗原和甲胎蛋白 |
| 4.4.2 miR-17-92a簇作為血清腫瘤診斷標(biāo)志物的應(yīng)用 |
| 4.4.3 hsa-miR-18a-5p作為血清腫瘤診斷標(biāo)志物的應(yīng)用 |
| 4.5 結(jié)論 |
| 第五章 hsa-miR-18a-5p對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及候選靶基因分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 研究方法 |
| 5.2.1 實驗材料 |
| 5.2.2 主要儀器及試劑 |
| 5.2.3 實驗方法 |
| 5.2.4 統(tǒng)計方法 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.3.1 hsa-miR-18a-5p在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào) |
| 5.3.2 結(jié)直腸癌細(xì)胞中hsa-miR-18a-5p干預(yù)效果 |
| 5.3.3 hsa-miR-18a-5p差異表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響 |
| 5.3.4 hsa-miR-18a-5p差異表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞克隆形成能力的影響 |
| 5.3.5 hsa-miR-18a-5p差異表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的影響 |
| 5.3.6 結(jié)直腸癌表達(dá)差異基因及功能注釋 |
| 5.3.7 hsa-miR-18a-5p靶基因及其預(yù)后分析 |
| 5.3.8 關(guān)鍵靶基因分析 |
| 5.3.9 靶基因LIF與hsa-miR-18a-5p結(jié)合位點預(yù)測 |
| 5.3.10 Western Blot檢測LIF與hsa-miR-18a-5p表達(dá)關(guān)系 |
| 5.3.11 LIF功能預(yù)測 |
| 5.4 討論 |
| 5.4.1 hsa-miR-18a-5p促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展 |
| 5.4.2 hsa-miR-18a-5p抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展 |
| 5.4.3 在不同發(fā)育階段和不同組織學(xué)亞型的同一器官的癌癥中已觀察到hsa-miR-18a的相反作用 |
| 5.4.4 hsa-miR-18a-5p抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展 |
| 5.5 結(jié)論 |
| 結(jié)語和展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄1:基因與泛癌的相關(guān)性 |
| 附錄2:HCT116細(xì)胞鑒定證明 |
| 致謝 |
| 攻讀博士期間的科研成果 |
| 個人簡歷 |
（2）腸道菌群及FUT2/3基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 強(qiáng)直性脊柱炎患者腸道菌群的變化 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 研究流程 |
| 2.2 研究材料 |
| 2.2.1 主要儀器設(shè)備及試劑 |
| 2.2.2 研究對象 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 調(diào)查方法 |
| 2.3.2 患者糞便樣本的收集 |
| 2.3.3 基因組DNA的提取和檢測 |
| 2.3.4 質(zhì)控處理和序列篩選 |
| 2.3.5 操作分類單元的獲取和注釋 |
| 2.3.6 生物信息學(xué)分析 |
| 2.3.7 與相關(guān)疾病中菌群相對豐度的比較 |
| 2.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 研究對象的人口學(xué)特征及臨床情況 |
| 3.2 16S rDNA 測序概況 |
| 3.3 病例組與對照組腸道菌群的差異 |
| 3.4 飲食和環(huán)境因素對腸道菌群的影響 |
| 3.5 腸道菌群與AS疾病指數(shù)的相關(guān)性 |
| 3.6 主要差異菌群在相關(guān)疾病中相對豐度的比較 |
| 4 討論 |
| 4.1 腸道菌群與AS的相關(guān)性 |
| 4.2 飲食因素對菌群及AS的影響 |
| 4.3 與相關(guān)疾病菌群豐度的比較 |
| 4.4 腸道菌群在AS治療中的潛在價值 |
| 4.5 評價及展望 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 FUT2和FUT3基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 研究流程 |
| 2.2 研究材料 |
| 2.2.1 主要實驗儀器及試劑 |
| 2.2.2 研究對象 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.3.1 調(diào)查方法 |
| 2.3.2 全血樣本基因組DNA的抽提 |
| 2.3.3 FUT2和FUT3 基因分型 |
| 2.3.3.1 檢測方法及其原理 |
| 2.3.3.2 檢測位點 |
| 2.3.3.3 操作步驟 |
| 2.3.4 表型的推測 |
| 2.3.5 數(shù)據(jù)的處理與分析 |
| 2.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 3 結(jié)果 |
| 3.1 研究對象的人口學(xué)及臨床特征 |
| 3.2 FUT2/FUT3 基因多態(tài)性與AS易感性 |
| 3.3 FUT2/FUT3 基因表型與AS易感性 |
| 3.4 FUT2/FUT3 基因多態(tài)性與AS疾病指數(shù)的相關(guān)性 |
| 4 討論 |
| 4.1 本研究的主要發(fā)現(xiàn) |
| 4.2 對于AS研究的意義 |
| 4.3 對于研究血型基因功能的意義 |
| 4.4 對本研究方法的評估 |
| 4.5 不足點和研究展望 |
| 5 結(jié)論 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 本人簡歷 |
| 在學(xué)期間的研究成果目錄 |
| 致謝 |
| 綜述 組織血型抗原在感染和免疫性疾病中的作用 |
| 1 組織血型抗原簡介 |
| 2 HBGAs與腸道菌群的關(guān)系 |
| 2.1 HBGAs對腸道菌群的影響 |
| 2.2 腸道菌群對HBGAs的影響 |
| 3 HBGAs與感染 |
| 3.1 HBGAs與細(xì)菌感染 |
| 3.2 HBGAs與其他感染 |
| 4 HBGAs與免疫性疾病 |
| 5 結(jié)語 |
| 6 參考文獻(xiàn) |
（3）新疆地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群及代謝的多組學(xué)研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 維吾爾族與漢族潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群的差異研究 |
| 1 研究方法與內(nèi)容 |
| 1.1 研究對象與標(biāo)本 |
| 1.2 實驗材料及儀器設(shè)備 |
| 1.3 測序?qū)嶒灹鞒?/td> |
| 1.4 Miseq文庫構(gòu)建及Illumina測序 |
| 1.5 Miseq測序數(shù)據(jù)處理 |
| 1.6 統(tǒng)計學(xué)處理及方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 維吾爾族與漢族潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道糞便代謝組學(xué)差異研究 |
| 1 研究方法與內(nèi)容 |
| 1.1 研究對象與標(biāo)本 |
| 1.2 實驗材料及儀器設(shè)備 |
| 1.3 代謝組學(xué)LC-MS實驗流程 |
| 1.4 LC-MS數(shù)據(jù)分析 |
| 1.5 統(tǒng)計學(xué)處理及方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 維吾爾族與漢族潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道糞便微生物及代謝差異對潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠腸道炎癥影響 |
| 1 研究方法與內(nèi)容 |
| 1.1 潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠、分組 |
| 1.2 實驗材料及儀器設(shè)備 |
| 1.3 動物模型建立方法 |
| 1.4 糞菌移植方法及取材 |
| 1.5 ELISA檢測實驗步驟 |
| 1.6 統(tǒng)計學(xué)處理及方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 腸道菌群及代謝差異在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 個人簡歷 |
| 新疆醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表 |
（4）肺表面活性物質(zhì)及其相關(guān)基因與阻塞性睡眠呼吸暫停的相關(guān)性研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白與阻塞性睡眠呼吸暫停的相關(guān)性研究 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 資料與方法 |
| 1.3 質(zhì)量控制 |
| 1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 目標(biāo)區(qū)域測序鑒定阻塞性睡眠呼吸暫停的候選基因和變異位點 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 試劑、耗材和儀器 |
| 1.3 資料與方法 |
| 1.4 質(zhì)量控制 |
| 1.5 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 肺表面活性物質(zhì)相關(guān)基因與阻塞性睡眠呼吸暫停的關(guān)聯(lián)研究 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 臨床資料收集、多導(dǎo)睡眠監(jiān)測、生化指標(biāo)測定、基因組DNA提取、目標(biāo)區(qū)域測序 |
| 1.3 數(shù)據(jù)處理與分析 |
| 1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 阻塞性睡眠呼吸暫停的遺傳學(xué)研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 個人簡歷 |
| 導(dǎo)師評閱表 |
（5）TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| English Abstract |
| 符號說明 |
| 第一部分 中國漢族人群TNF和GRN基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎易感性關(guān)系的Meta分析 |
| 前言 |
| 研究方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
| 學(xué)位論文評閱及答辯情況表 |
| 外文論文Ⅰ (已發(fā)表) |
| 外文論文Ⅱ |
（6）ALDH2和C12orf30基因多態(tài)性與新疆漢族、哈薩克族食管鱗癌的易感性及預(yù)后的相關(guān)研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 ALDH2 基因rs671、C12orf30 基因rs4767364 多態(tài)性在新疆漢族、哈薩克族ESCC中的分布情況 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 質(zhì)量控制 |
| 1.4 隨訪 |
| 1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 新疆漢族、哈薩克族食管鱗癌ALDH2 基因、C12orf30 基因多態(tài)性與吸煙、飲酒及體重指數(shù)的相關(guān)性研究 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 ALDH2 基因、C12orf30 基因多態(tài)性與新疆漢族、哈薩克族ESCC放射敏感性的相關(guān)性研究 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 實驗方法 |
| 1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 食管癌相關(guān)基因研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 個人簡歷 |
| 新疆醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表 |
（7）新疆地區(qū)變應(yīng)性鼻炎吸入變應(yīng)原譜及相關(guān)拷貝數(shù)變異分析（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞對照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 新疆地區(qū)5019例變應(yīng)性鼻炎患者吸入變應(yīng)原譜分析 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 研究方法(皮膚點刺試驗) |
| 1.3 技術(shù)路線圖 |
| 1.4 統(tǒng)計方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第二部分 基于低深度全基因組測序篩選致變應(yīng)性鼻炎的拷貝數(shù)變異 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 質(zhì)量控制 |
| 1.4 技術(shù)路線圖 |
| 1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 第三部分 13個基因拷貝數(shù)變異與新疆地區(qū)漢族變應(yīng)性鼻炎的相關(guān)性研究 |
| 1 研究內(nèi)容與方法 |
| 1.1 研究對象 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 質(zhì)量控制 |
| 1.4 技術(shù)路線圖 |
| 1.5 統(tǒng)計方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 拷貝數(shù)變異的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀博士學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果 |
| 個人簡歷 |
| 導(dǎo)師評閱表 |
（8）中醫(yī)體質(zhì)分類辨識及腎陽虛體質(zhì)線粒體基因SNP研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要專業(yè)詞匯縮略詞表 |
| 引言 |
| 第一部分 中醫(yī)體質(zhì)分類辨識研究 |
| 1.研究方法 |
| 1.1 古代文獻(xiàn)來源 |
| 1.2 檢索方法 |
| 1.3 資料摘錄 |
| 2.研究結(jié)果 |
| 2.1 體質(zhì)形成的影響因素 |
| 2.1.1 體質(zhì)秉承于先天——先天為主 |
| 2.1.2 體質(zhì)得養(yǎng)于后天——后天為輔 |
| 2.2 中醫(yī)體質(zhì)內(nèi)涵 |
| 2.2.1 體質(zhì)古代內(nèi)涵 |
| 2.2.2 體質(zhì)現(xiàn)代內(nèi)涵 |
| 2.3 中醫(yī)體質(zhì)分類 |
| 2.3.1 中醫(yī)體質(zhì)分類古代研究 |
| 2.3.2 中醫(yī)體質(zhì)分類現(xiàn)代研究 |
| 2.4 中醫(yī)體質(zhì)辨識 |
| 2.4.1 中醫(yī)體質(zhì)辨識古代研究 |
| 2.4.2 中醫(yī)體質(zhì)辨識現(xiàn)代研究 |
| 2.5 中醫(yī)體質(zhì)分類辨證體系框架 |
| 3.討論 |
| 3.1 “身心合一”是中醫(yī)體質(zhì)的核心思想 |
| 3.2 基于體質(zhì)分類辨識體系的智能化辨識設(shè)想 |
| 3.2.1 以外貌體態(tài)為基礎(chǔ)——借鑒生物識別技術(shù) |
| 3.2.2 以舌、脈診信息為參考——加快儀器研發(fā) |
| 3.2.3 以生物學(xué)指標(biāo)為參考——篩選體質(zhì)生物標(biāo)志物 |
| 3.2.4 以體質(zhì)問卷為輔助——完善體質(zhì)量表 |
| 第二部分 腎陽虛體質(zhì)線粒體基因SNP研究 |
| 1.研究方法 |
| 1.1 受試者納入 |
| 1.1.1 腎陽虛體質(zhì)判定 |
| 1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.1.4 倫理審查 |
| 1.2 樣本采集 |
| 1.3 實驗試劑和設(shè)備 |
| 1.3.1 實驗主要試劑 |
| 1.3.2 實驗主要器材 |
| 1.4 樣本線粒體DNA抽提與質(zhì)檢 |
| 1.4.1 線粒體DNA的抽提與純化 |
| 1.4.2 樣本質(zhì)檢 |
| 1.5 線粒體DNA全測序 |
| 1.5.1 測序文庫構(gòu)建 |
| 1.5.2 文庫質(zhì)檢 |
| 1.5.3 Cluster生成 |
| 1.5.4 上機(jī)測序 |
| 1.6 數(shù)據(jù)分析 |
| 1.6.1 數(shù)據(jù)庫信息及數(shù)據(jù)分析程序 |
| 1.6.2 數(shù)據(jù)分析方法 |
| 2 研究結(jié)果 |
| 2.1 腎陽虛體質(zhì)受試者體質(zhì)評分 |
| 2.2 腎陽虛體質(zhì)受試者樣本質(zhì)檢 |
| 2.3 數(shù)據(jù)分析結(jié)果 |
| 2.3.1 原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評估結(jié)果 |
| 2.3.2 測序序列質(zhì)量評估結(jié)果 |
| 2.3.3 Indel檢測統(tǒng)計結(jié)果 |
| 2.3.4 SNP檢測統(tǒng)計結(jié)果 |
| 2.3.5 突變位點注釋 |
| 3 討論 |
| 3.1 線粒體功能不良是腎陽虛體質(zhì)生物學(xué)基礎(chǔ)研究新的切入點 |
| 3.2 線粒體基因組遺傳特性 |
| 3.2.1 線粒體具有獨立的遺傳系統(tǒng)且基因突變率高 |
| 3.2.2 線粒體基因非編碼調(diào)控區(qū)在復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起著重要作用 |
| 3.2.3 線粒體遵循較為嚴(yán)格的母系遺傳規(guī)律 |
| 3.3 線粒體基因突變是對腎陽虛體質(zhì)臨床表現(xiàn)產(chǎn)生機(jī)制的有效闡釋 |
| 3.3.1 能量代謝紊亂 |
| 3.3.2 生長發(fā)育異常 |
| 3.3.3 生殖功能減退 |
| 3.3.4 異常情緒狀態(tài) |
| 3.3.5 腎陽虛體質(zhì)與遺傳疾病 |
| 3.4 線粒體基因SNP位點與腎陽虛體質(zhì)辨識 |
| 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點 |
| 問題與展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附件一:綜述 腎陽虛證候及體質(zhì)分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附件二:腎陽虛體質(zhì)判定標(biāo)準(zhǔn)表 |
| 附件三:倫理審查批件 |
| 附件四:在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果 |
（9）干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體、核酸方法建立及應(yīng)用策略研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文縮略詞表 |
| 引言 |
| 1. HIV/HCV/TP流行現(xiàn)狀、挑戰(zhàn)與應(yīng)對 |
| 2. 干血/漿斑樣本應(yīng)用于傳染性疾病的研究進(jìn)展 |
| 第一章 干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立、評價及應(yīng)用策略研究 |
| 前言 |
| 1. 實驗材料 |
| 2. 實驗方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 5. 結(jié)論 |
| 第二章 干漿斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體方法的建立與評價 |
| 前言 |
| 1. 實驗材料 |
| 2. 實驗方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 5. 結(jié)論 |
| 第三章 干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP核酸方法的建立與應(yīng)用策略研究 |
| 前言 |
| 1. 實驗材料 |
| 2. 實驗方法 |
| 3. 結(jié)果與分析 |
| 4. 討論 |
| 5. 結(jié)論 |
| 總結(jié) |
| 創(chuàng)新性分析 |
| 不足與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間成果 |
| 附錄1 已發(fā)表文章-綜述 |
| 附錄2 已發(fā)表文章-論著 |
| 附錄3 已發(fā)表文章-論著 |
| 附錄4 已發(fā)表文章-SCI |
（10）TNF-α在深靜脈血栓形成中的作用及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 TNF-α在下肢深靜脈血栓形成患者中的表達(dá)及其影響深靜脈血栓形成的可能機(jī)制探討 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 第二部分 TNF-α基因rs1800629 多態(tài)性與漢族人群下肢深靜脈血栓形成相關(guān)性研究以及TNF-α基因rs1800629 多態(tài)性與深靜脈血栓形成易感性薈萃分析 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 第三部分 TNF-α在小鼠深靜脈血栓模型中的作用影響及機(jī)制研究 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文小結(jié) |
| 研究創(chuàng)新與不足 |
| 一、研究創(chuàng)新 |
| 二、研究不足 |
| 綜述 |
| 綜述1:TNF-α以及TNF-α基因rs1800629 多態(tài)性與血栓性疾病關(guān)聯(lián)性研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述2:炎癥反應(yīng)與靜脈血栓栓塞癥 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 英文縮略詞表 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 |
| 致謝 |
四、中國普通人群的基因特點和對HIV遺傳易感性的初步評估（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]陜西漢族非編碼RNA基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌風(fēng)險相關(guān)性及MIR17HG與其microRNAs在結(jié)直腸癌中的作用研究[D]. 陳鵬. 西北大學(xué), 2021(12)
- [2]腸道菌群及FUT2/3基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究[D]. 蔣光明. 安徽醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [3]新疆地區(qū)潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群及代謝的多組學(xué)研究[D]. 劉歡. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [4]肺表面活性物質(zhì)及其相關(guān)基因與阻塞性睡眠呼吸暫停的相關(guān)性研究[D]. 曹媛媛. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2021(08)
- [5]TNF，GRN和ERAP1基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)性研究[D]. 胡乃文. 山東大學(xué), 2020(04)
- [6]ALDH2和C12orf30基因多態(tài)性與新疆漢族、哈薩克族食管鱗癌的易感性及預(yù)后的相關(guān)研究[D]. 劉攀. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2020(03)
- [7]新疆地區(qū)變應(yīng)性鼻炎吸入變應(yīng)原譜及相關(guān)拷貝數(shù)變異分析[D]. 王燕. 新疆醫(yī)科大學(xué), 2020(03)
- [8]中醫(yī)體質(zhì)分類辨識及腎陽虛體質(zhì)線粒體基因SNP研究[D]. 何林熹. 成都中醫(yī)藥大學(xué), 2020(01)
- [9]干血斑聯(lián)合檢測HIV/HCV/TP抗體、核酸方法建立及應(yīng)用策略研究[D]. 馬潔瓊. 中國疾病預(yù)防控制中心, 2020(02)
- [10]TNF-α在深靜脈血栓形成中的作用及其機(jī)制研究[D]. 李達(dá). 蘇州大學(xué), 2020(06)