一、438株金黃色葡萄球菌耐藥性分析（論文文獻(xiàn)綜述）
柴云美,何依蓉,馬青雯,黃艾祥[1]（2021）在《云南省部分地區(qū)雞蛋污染金黃色葡萄球菌的檢測(cè)與耐藥性分析》文中研究指明為研究云南省部分地區(qū)雞蛋中金黃色葡萄球菌的污染情況及其分子分型、抗生素敏感性,從云南省雞蛋主產(chǎn)區(qū)昆明市和曲靖市采集100份樣品,參照《GB 478—2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》分離金黃色葡萄球菌,通過革蘭氏染色鏡檢、血漿凝固酶試驗(yàn)和飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行鑒定,對(duì)分離菌株采用微量肉湯稀釋法分析抗生素敏感性。結(jié)果顯示:100份雞蛋樣品中共分離6株金黃色葡萄球菌,分離率為6.00%,昆明市、曲靖市兩個(gè)地區(qū)均分離出金黃色葡萄球菌;不同采樣地點(diǎn)僅有農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和雞場(chǎng)樣品分離出該菌,分離率分別為13.51%、2.94%;脈沖場(chǎng)凝膠電泳分子分型顯示,6株金黃色葡萄球菌的相似系數(shù)在67.80%～94.40%之間,表明菌株間同源關(guān)系高、親緣關(guān)系近;抗生素敏感性試驗(yàn)表明,6株金黃色葡萄球菌全部對(duì)四環(huán)素耐藥,83.33%對(duì)紅霉素、克林霉素、環(huán)丙沙星和慶大霉素耐藥,66.67%對(duì)頭孢西丁耐藥,50.00%對(duì)苯唑西林、氯霉素和頭孢他啶耐藥;6株金黃色葡萄球菌對(duì)2種及以上的抗生素呈現(xiàn)出不同程度耐藥,共有4個(gè)耐藥譜。研究提示,云南省部分地區(qū)雞蛋中存在一定程度的金黃色葡萄球菌污染,菌株間親緣關(guān)系近、耐藥情況嚴(yán)峻,建議加強(qiáng)防控以確保雞蛋及相關(guān)食品的安全性。
劉肖利,劉璐瑤,李鑌罡,裴文剛,李斌,程彪,蘇戰(zhàn)強(qiáng),李勤凡[2]（2021）在《金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎調(diào)查及菌株耐藥性和毒力分析》文中研究表明為了研究金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎發(fā)病情況,及相應(yīng)菌株的耐藥性和毒力基因分布情況,從新疆烏魯木齊、伊犁、昌吉地區(qū)的7個(gè)奶牛場(chǎng)隨機(jī)采集患乳房炎奶牛乳汁樣本,用綿羊血平板和Baird-Parker瓊脂平板初篩,利用生化試驗(yàn)、16S rDNA序列分析鑒定金黃色葡萄球菌。先用K-B紙片擴(kuò)散法對(duì)分離株進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè),再用PCR方法檢測(cè)其12種毒力基因,用小鼠攻毒試驗(yàn)檢測(cè)其致病性。結(jié)果從142份乳汁樣本中共分離出5株金黃色葡萄球菌,7個(gè)奶牛場(chǎng)有2個(gè)牛場(chǎng)檢出并分離到金黃色葡萄球菌,分離率分別為7.14%（2/28）和8.82%（3/34）;藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示這些金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G、氨芐西林、鏈霉素、頭孢他啶和阿莫西林的耐藥率為60%～80%,對(duì)紅霉素的耐藥率為20%,所有菌株最少對(duì)1種藥物耐受,最多耐5種藥物;分離株中共檢出nuc、clfa、fnbB、eta、sea 5種主要毒力基因,所有分離菌對(duì)小鼠均有很強(qiáng)的致病性。綜上所述,所檢牛場(chǎng)由金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的奶牛乳房炎感染情況較為嚴(yán)重,分離菌耐藥性不強(qiáng),許多菌株攜帶多個(gè)毒力基因且具有很強(qiáng)的致病性。
苑曉萌[3]（2021）在《奶源金黃色葡萄球菌的流行特點(diǎn)及其噬菌體藥效動(dòng)力學(xué)研究》文中研究指明金黃色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎最常見的病原菌之一?？股氐臑E用,不僅導(dǎo)致嚴(yán)重的多重耐藥還會(huì)增加抗生素在牛奶中的殘留,威脅公共衛(wèi)生安全。噬菌體具有特異性強(qiáng)、毒副作用小等特點(diǎn),展現(xiàn)了良好的殺菌作用,是一種理想的抗生素替代品。本研究首先通過宏基因組測(cè)序技術(shù)了解山東省生鮮牛乳中微生物多樣性及群落結(jié)構(gòu),分離鑒定金黃色葡萄球菌及其特異性裂解性噬菌體。通過對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行流行病學(xué)分析、噬菌體生物學(xué)特性、基因組學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)分析,探索噬菌體與抗生素聯(lián)合抗菌作用的規(guī)律,為金黃色葡萄球菌噬菌體的研究和后續(xù)的治療防控提供一定的理論基礎(chǔ)。1.利用宏基因組測(cè)序技術(shù)對(duì)患有乳房炎、隱形乳房炎和正常奶牛的18份牛奶樣品進(jìn)行微生物菌群分析。結(jié)果顯示:共獲得845574條序列和5465個(gè)OTU。在屬水平上,不同來源的牛奶樣品之間優(yōu)勢(shì)細(xì)菌類群及其所占比例不同,Halomonas在乳房炎牛奶樣品中所占比例最高為9.0%,Staphylococcus僅在隱形乳房炎牛奶樣品中檢測(cè)到,所占比例為13.5%,在正常牛奶樣品中,Lactobacillus為優(yōu)勢(shì)菌,其豐度為33.9%。該研究為準(zhǔn)確評(píng)估生鮮牛乳中的微生物群落及奶牛乳房炎的防治提供了理論依據(jù)。2.從山東省不同地區(qū)奶牛場(chǎng)418份生鮮牛乳樣品中分離出121株金黃色葡萄球菌,分離率為28.9%,其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的分離率為0.7%,金黃色葡萄球菌的多重耐藥率為55.4%;主要毒力基因?yàn)閟ed、sec,分別占13.2%和8.3%;采用多位點(diǎn)序列分型（MLST）方法鑒定了18種不同的ST類型,以ST50、ST398為主,分別占13.2%、12.4%;表面蛋白A基因（spa）分型中以t034、t189為主,分別占12.4%和9.9%;經(jīng)SCCmec基因分型發(fā)現(xiàn)攜帶mec A基因的MRSA為SCCmec III型。本研究可為山東地區(qū)生鮮牛乳中金黃色葡萄球菌的監(jiān)測(cè)與防控,以及合理選擇優(yōu)質(zhì)抗生素提供參考依據(jù)。3.對(duì)96株噬菌體進(jìn)行裂解譜測(cè)定,發(fā)現(xiàn)對(duì)121株金黃色葡萄球菌裂解范圍為3%-82.5%。選擇兩株裂解率高的噬菌體RPCSa20091、RPCSa20062進(jìn)行生物學(xué)特性及基因組分析,經(jīng)電鏡觀察兩株噬菌體為有尾目噬菌體,噬菌體長(zhǎng)度約194-294nm。2株噬菌體不耐高溫但對(duì)酸堿有一定的抵抗力,RPCSa20091最佳感染復(fù)數(shù)為0.1,RPCSa20062最佳感染復(fù)數(shù)為0.01。進(jìn)一步分析基因組序列,發(fā)現(xiàn)RPCSa20091的基因組大小為42829bp,GC含量為34.64%,預(yù)測(cè)到64個(gè)ORF,平均長(zhǎng)度為210bp,RPCSa20062的基因組大小為43274bp,GC含量為34.09%,預(yù)測(cè)到63個(gè)ORF,平均長(zhǎng)度為214bp。在預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌感染方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。4.初步建立了噬菌體藥理學(xué)體系與研究方法,發(fā)現(xiàn)經(jīng)噬菌體處理后的宿主菌對(duì)頭孢噻呋、多西環(huán)素、慶大霉素的MIC會(huì)顯著降低。在噬菌體與細(xì)菌藥效動(dòng)力學(xué)中,金黃色葡萄球菌噬菌體RPCSa20091的效價(jià)達(dá)到1011pfu·mL-1時(shí),可以在短時(shí)間內(nèi)抑制宿主菌的數(shù)量。恩諾沙星與噬菌體RPCSa20091聯(lián)合作用使MIC從4μg·mL-1降低至2μg·mL-1,表明恩諾沙星和噬菌體具有協(xié)同作用。該研究為應(yīng)用噬菌體與抗生素聯(lián)合制劑來治療防控奶牛乳房炎提供了理論依據(jù)。
閆繼愛[4]（2021）在《金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶及其結(jié)構(gòu)域的制備與功能特性研究》文中提出金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種全世界公認(rèn)的食源性病原菌之一,可造成許多食品安全問題。同時(shí),隨著抗生素的濫用,金黃色葡萄球菌已進(jìn)化為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant S.aureus,MRSA）等多種耐藥菌株。MRSA是食品安全、動(dòng)物健康和現(xiàn)代醫(yī)療保健等領(lǐng)域出現(xiàn)的新問題,需要開發(fā)新的抗菌藥物來取代過度使用的傳統(tǒng)抗生素。近年來,針對(duì)MRSA等食源性病原菌迫切需要新型殺菌、控菌技術(shù)的研發(fā)。噬菌體裂解酶被認(rèn)為是一種很有前途的抗菌劑。本文篩選了一株烈性的MRSA噬菌體,并根據(jù)其基因組序列構(gòu)建表達(dá)噬菌體裂解酶及其各功能域,根據(jù)各功能域的酶學(xué)性質(zhì),深入研究其在不同領(lǐng)域的應(yīng)用,為裂解酶及其功能域在食品及醫(yī)藥中應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1、金黃色葡萄球菌噬菌體篩選鑒定:從食源性垃圾中篩選到一株烈性噬菌體Z,可裂解MRSA,其效價(jià)約105。透射電鏡顯示此噬菌體屬于長(zhǎng)尾噬菌體,尾長(zhǎng)約200 nm,頭部直徑約80 nm。在平板上能夠完全抑制宿主菌生長(zhǎng)。通過測(cè)定和分析噬菌體Z的基因組序列,獲得噬菌體裂解酶lysz基因,并成功構(gòu)建含lysz基因的質(zhì)粒p ET15b-LysZ,通過轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)表達(dá)、分離純化獲得了裂解酶LysZ。該酶可裂解包括普通金黃色葡萄球菌和MRSA在內(nèi)的七種金黃色葡萄球菌,最適溫度為35oC,最適p H為6.0。LysZ是金屬依賴型酶。LysZ的活性隨著離子強(qiáng)度的升高逐漸升高。裂解酶LysZ在牛奶體系中的活性與牛奶組分NaCl（0.049%）。牛奶的低鹽環(huán)境也會(huì)造成裂解酶失活,但在牛奶中加入NaCl后,LysZ活性恢復(fù)。2、牛奶體系中裂解酶活性與裂解域和結(jié)合域的相關(guān)性研究。利用重疊延伸PCR技術(shù)成功構(gòu)建含egfp和cbdz基因的質(zhì)粒p ET15b-EGFP-CBDz,通過轉(zhuǎn)化、誘導(dǎo)表達(dá)、分離純化獲得了結(jié)合域EGFP-CBDz,此蛋白可以與金黃色葡萄球菌特異性結(jié)合,特異性結(jié)合的最適溫度為30oC,最適p H為4.0,結(jié)合能力隨著溶液中離子強(qiáng)度的增高而升高。在牛奶中,隨著牛奶中NaCl含量的升高,結(jié)合域結(jié)合MRSA活性增強(qiáng)。因此,裂解酶在低離子強(qiáng)度下活性較低,可能與結(jié)合域在此條件下與細(xì)胞壁結(jié)合能力較弱有關(guān)。噬菌體裂解酶裂解域CHAPLysZ也具有殺滅普通金黃色葡萄球菌和MRSA的特性,其最適溫度為40oC,最適p H為9.0。CHAPLysZ也屬于金屬依賴型酶。CHAPLysZ對(duì)離子強(qiáng)度高度敏感,與裂解酶相反,隨著離子強(qiáng)度的升高,其活性逐漸降低。CHAPLysZ的活性不受牛奶組分NaCl和乳脂肪的影響,在不另外添加NaCl的全脂乳和脫脂乳中均可發(fā)揮其裂解活性,減少M(fèi)RSA的污染。3、金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶在非酸性食品中應(yīng)用策略的選擇。研究了噬菌體裂解酶在不同鹽含量肉制品中的殺菌能力,CHAPLysZ（0.4 nmol/cm2）和LysZ（0.4nmol/cm2）可分別用于新鮮豬肉和鹽含量高達(dá)10%以上的臘肉中,4oC培養(yǎng)2 h均可分別將MRSA從104CFU/cm2降至0 CFU/cm2。在實(shí)際應(yīng)用中針對(duì)非酸性食品中的鹽含量不同可以根據(jù)LysZ和CHAPLysZ對(duì)離子強(qiáng)度的敏感性選擇不同的抗菌劑控制金黃色葡萄球菌的污染:低鹽食品中,可以使用CHAPLysZ,而高鹽食品中可以選擇LysZ。清除生產(chǎn)環(huán)境、設(shè)備上的生物膜可以減少食品加工過程中金黃色葡萄球菌的污染。不同的金黃色葡萄球菌菌株生成生物膜的能力各不相同,本文所用七株金黃色葡萄球菌菌株中MRSA 2102生成的生物膜最不易被裂解酶或裂解域清除,其對(duì)甲氧西林的MIC高達(dá)128μg/m L。CHAPLysZ單獨(dú)使用或者與甲氧西林聯(lián)合去除生物膜的能力優(yōu)于LysZ。0.05 n M CHAPLysZ聯(lián)合32μg/m L的甲氧西林協(xié)同增效可清除約98%以上MRSA 2102形成的生物膜,這可能與裂解域的大小和裂解機(jī)理有關(guān)。裂解域可以通過生物膜內(nèi)小孔隙進(jìn)入生物膜內(nèi)部,并不需要與細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)合即可發(fā)揮裂解作用。4、噬菌體裂解酶與裂解域可用于清除皮膚傷口上的MRSA,減少M(fèi)RSA的感染,促進(jìn)傷口愈合,可減少由外傷感染帶來的污染引發(fā)的食品安全問題。1 nmol/cm2裂解酶LysZ可以促進(jìn)小鼠傷口的愈合,作用一天可減少大約2.5 Log10 CFU的菌體,而裂解域CHAPLysZ僅減少0.4 Log10 CFU?？赡苁且?yàn)槿梭w細(xì)胞液的離子強(qiáng)度較高,裂解酶LysZ更適合于應(yīng)用于體內(nèi)減少M(fèi)RSA的污染。5、合成一種可以與MRSA細(xì)胞壁特異性結(jié)合的金納米顆粒Au@PEG@EGFP-CBDz,此材料呈二維三角形狀,平均水合粒徑為72.32 nm,Zeta電位為-5.08 m V,在808 nm激光輻照下具有良好的光熱轉(zhuǎn)化效應(yīng),其升溫速度和溫度與材料濃度及激光功率成正比,此材料具有較好的生物相容性,不影響細(xì)胞的活力。在含1×104MRSA的模擬體系中加入50μg/m L金納米顆粒Au@PEG@EGFP-CBDz分別接受NIR激光（808nm,1 W/cm2）輻照300 s,360 s,和420 s,可以分別使MRSA降低約1.2 Log10CFU,1.6 Log10CFU和3.1 Log10CFU,特異性殺滅MRSA。金納米顆粒Au@PEG@EGFP-CBDz可作為靶向蛋白特異性結(jié)合小鼠肺部感染的MRSA,通過光輻照靶向殺滅MRSA,減少其引起的肺部細(xì)菌感染,并減少由MRSA感染帶來的炎癥反應(yīng),促進(jìn)機(jī)體的好轉(zhuǎn)。
周永林[5]（2021）在《齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細(xì)菌性溶血素活性作用及其機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理近年來抗菌藥物在畜牧養(yǎng)殖過程中的廣泛應(yīng)用與細(xì)菌耐藥性形成已成惡性循環(huán),同時(shí)誘導(dǎo)和加速多種耐藥菌如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的出現(xiàn)和流行,導(dǎo)致抗生素治療日趨無效。金黃色葡萄球菌是獸醫(yī)臨床上重要的病原菌,可導(dǎo)致乳房炎和肺炎等多種疾病,嚴(yán)重威脅畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。金黃色葡萄球菌可通過分泌β-內(nèi)酰胺酶對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生抗性,舒巴坦等競(jìng)爭(zhēng)性酶抑制劑對(duì)B類金屬β-內(nèi)酰胺酶抑制作用差,而MRSA如USA300攜帶多種金屬β-內(nèi)酰胺酶,這使得耐藥金黃色葡萄球菌感染的防控難度加大。此外,在NDM-1耐藥酶未報(bào)道之前,碳青霉烯類抗生素一直被用于治療臨床上嚴(yán)重耐藥腸桿菌的感染。然而,隨著NDMs和KPCs等碳青霉烯酶的出現(xiàn)和廣泛傳播,導(dǎo)致所有β-內(nèi)酰胺類抗生素在碳青霉烯酶陽性菌感染后治療無效。而且臨床上已經(jīng)出現(xiàn)同時(shí)攜帶ndm和mcr基因的大腸桿菌等革蘭氏陰性菌。因此,臨床上迫切需要研發(fā)廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑協(xié)同抗菌藥物以控制攜帶β-內(nèi)酰胺酶耐藥菌尤其耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的感染。細(xì)菌性溶血素是細(xì)菌在致病過程中所分泌的一類重要毒力蛋白,常見的細(xì)菌性溶血素包括金黃色葡萄球菌溶血素Hla,李斯特菌溶血素LLO、肺炎鏈球菌溶血素PLY和豬鏈球菌溶血素SLY等。細(xì)菌性溶血素可裂解組織細(xì)胞和協(xié)助細(xì)菌逃避機(jī)體免疫攻擊和獲取營(yíng)養(yǎng),在細(xì)菌感染建立過程中發(fā)揮著不可或缺的作用。如金黃色葡萄球菌溶血素敲除菌株在細(xì)菌性肺炎、乳房炎和腎炎等模型中毒力顯著減弱,甚至缺失。因此,以細(xì)菌性溶血素為藥物靶點(diǎn)進(jìn)行抑制劑篩選是抑制細(xì)菌致病性的一種有效策略。綜上,篩選獲得一種可同時(shí)抑制耐藥酶和毒力因子的天然化合物,這將可能極大的提高耐藥致病菌感染的治療效果,同時(shí)減少開發(fā)藥物的成本。本研究最初的目標(biāo)是通過酶活性抑制試驗(yàn)從天然化合物中篩選出一種可抑制金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶活性的抑制劑。經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn),齊墩果酸可顯著抑制金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶的水解活性,同時(shí)對(duì)主要碳青霉烯酶如NDM-1、KPC-2和VIM-1也有顯著的抑制作用,而對(duì)頭孢菌素酶Amp C和超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的抑制作用不顯著。此外,加入不同金屬離子進(jìn)行酶活性抑制試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),齊墩果酸僅在鋅離子存在的緩沖液中對(duì)NDM-1的抑制作用受到影響,在其它金屬離子存在的緩沖液中無顯著影響,提示齊墩果酸并非特異性金屬離子螯合劑。本研究進(jìn)一步通過棋盤法最小抑菌濃度試驗(yàn)、生長(zhǎng)曲線試驗(yàn)、時(shí)間-殺菌曲線試驗(yàn)和細(xì)菌染色試驗(yàn)等驗(yàn)證了齊墩果酸及其類似物可顯著增強(qiáng)β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)β-內(nèi)酰胺酶陽性金黃色葡萄球菌和碳青霉烯酶陽性腸桿菌的抗菌作用（FIC≤0.33±0.07）,而舒巴坦僅對(duì)金黃色葡萄球菌與β-內(nèi)酰胺類抗生素具有顯著的協(xié)同效果,而與美羅培南聯(lián)合對(duì)NDM-1陽性大腸桿菌無顯著的協(xié)同效果。齊墩果酸在遠(yuǎn)大于32μg/m L濃度條件下對(duì)受試菌株的生長(zhǎng)無顯著影響。此外,本研究結(jié)果顯示,齊墩果酸單獨(dú)使用不會(huì)誘導(dǎo)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌USA300和NDM-1陽性大腸桿菌ZJ487對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生耐藥性,而耐甲氧西林金黃色葡萄球菌USA300在β-內(nèi)酰胺類抗生素壓力下可產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥性。為確定齊墩果酸聯(lián)合β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同效果,本研究建立了小鼠耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染肺炎模型,通過小鼠存活率、肺組織菌落定殖、肺組織β-內(nèi)酰胺酶活性檢測(cè)、靶器官病理變化和炎癥反應(yīng)等指標(biāo)評(píng)價(jià)齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同效果。與單獨(dú)青霉素G鈉治療相比,齊墩果酸聯(lián)合青霉素G鈉治療后金黃色葡萄球菌感染小鼠的存活率提高50.0%,而舒巴坦聯(lián)合青霉素G鈉治療后的存活率提高37.5%,略差于齊墩果酸聯(lián)合組。此外,單獨(dú)齊墩果酸對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠具有一定的治療效果,這提示齊墩果酸在針對(duì)金黃色葡萄球菌感染過程還具有其它藥理學(xué)作用,我們推測(cè)其可能抑制了金黃色葡萄球菌致病相關(guān)毒力因子。為驗(yàn)證上述推測(cè),本研究通過溶血試驗(yàn)和細(xì)胞保護(hù)試驗(yàn)等進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果顯示齊墩果酸及其類似物在4μg/m L濃度條件下可顯著抑制多種不同的細(xì)菌性溶血素的溶紅細(xì)胞活性,齊墩果酸可顯著降低MH-S細(xì)胞和A549細(xì)胞由金黃色葡萄球菌溶血素Hla介導(dǎo)的損傷。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了齊墩果酸單獨(dú)使用可降低耐藥金黃色葡萄球菌的致病性從而發(fā)揮保護(hù)作用。本研究通過酶活性抑制試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、熒光定量PCR試驗(yàn)、蛋白免疫印跡試驗(yàn)、分子動(dòng)力學(xué)模擬、氨基酸定點(diǎn)突變和熒光淬滅等試驗(yàn)確定了齊墩果酸不影響金黃色葡萄球菌攜帶的β-內(nèi)酰胺酶和金屬β-內(nèi)酰胺酶以及金黃色葡萄球菌溶血素Hla蛋白的分泌和表達(dá),而是與NDM-1蛋白和Hla蛋白通過范德華力直接結(jié)合發(fā)揮抑制作用。進(jìn)一步通過對(duì)突變子蛋白進(jìn)行酶活性抑制試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)和突變子菌株最小抑菌濃度檢測(cè)試驗(yàn)確證了分子動(dòng)力學(xué)模擬結(jié)果的可靠性。綜上所述,作為β-內(nèi)酰胺酶和細(xì)菌性溶血素雙靶標(biāo)抑制劑,齊墩果酸可顯著降低由細(xì)菌性溶血素對(duì)機(jī)體造成的損傷和顯著恢復(fù)β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)外抗菌活性。為基于抑制細(xì)菌致病性和耐藥性的雙靶標(biāo)抗耐藥致病菌感染新藥研發(fā)奠定了良好的前期試驗(yàn)基礎(chǔ)和提供了先導(dǎo)化合物。
張妤,孫冰清,姜芹,何成瑞,張文剛,顧欣[6]（2021）在《2016—2020年上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥性及最低抑菌濃度變遷情況分析》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理目的分析2016—2020年上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥性及其最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration, MIC）變遷情況。方法采用微量肉湯稀釋法對(duì)2016—2020年間采集的349株金黃色葡萄球菌進(jìn)行10種常見抗菌藥物敏感性測(cè)試,通過分析藥敏數(shù)據(jù)了解5年間上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥性變遷的情況。結(jié)果 349株金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素耐藥率較高,為74.2%,對(duì)其余9種抗菌藥物的耐藥率較低,均在20%以下。5年間,上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素、苯唑西林及阿莫西林/克拉維酸的抑制50%微生物生長(zhǎng)的MIC50值及抑制90%微生物生長(zhǎng)的抑菌濃度MIC90值均呈下降趨勢(shì);對(duì)頭孢西丁、頭孢噻呋、恩諾沙星、氧氟沙星及慶大霉素的MIC50值5年來無明顯變化,MIC90值呈下降趨勢(shì);對(duì)萬古霉素和利奈唑胺的MIC50值和MIC90值5年來無明顯變化,均處于較低水平。結(jié)論近年來上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥情況有所好轉(zhuǎn),但仍需繼續(xù)加強(qiáng)乳源金黃色葡萄球菌耐藥性監(jiān)測(cè)。
孫世意[7]（2021）在《新生兒下呼吸道感染中葡萄球菌屬耐藥基因多態(tài)性與疾病相性研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理呼吸道感染（Respiratory tract infections,RTI）是醫(yī)院最常見的高度傳染性疾病,還常伴有流感及流感樣疾病的發(fā)生。逐年上升的發(fā)病率和死亡率使呼吸道感染成為了全球性問題。呼吸道最初被認(rèn)為是無菌的,但是隨著研究的發(fā)現(xiàn),呼吸道中存在大量定植的共生微生物,且對(duì)人體健康有很大影響。人類處于正常生理狀態(tài)時(shí),呼吸道中的共生菌相互制約使其維持在某個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài)。對(duì)于新生兒,這種穩(wěn)態(tài)受生產(chǎn)方式、喂養(yǎng)類型、抗生素等的影響,但是一旦這種平衡被破壞,就會(huì)引起呼吸道微生物的紊亂,進(jìn)而誘發(fā)呼吸道感染等相關(guān)疾病。目前,臨床上針對(duì)呼吸道感染最常用的手段就是使用抗生素治療。而由于抗生素的長(zhǎng)時(shí)間、不合理使用及濫用,導(dǎo)致一系列耐藥菌的產(chǎn)生,使感染大大增加了臨床治療和社會(huì)經(jīng)濟(jì)的負(fù)擔(dān)。使用合適的抗生素對(duì)于治療感染是非常重要的步驟,能夠減少耐藥甚至死亡的發(fā)生。因此對(duì)于呼吸道感染尤其是耐藥菌感染,抗生素的選擇和用量就顯得尤為重要了。本課題旨在研究呼吸道感染患者下呼吸道微生物群落結(jié)構(gòu)以及感染患者與非呼吸道感染人群下呼吸道中微生物的組成比較規(guī)律;從中分離培養(yǎng)病原菌,并挑選部分分離得到的葡萄球菌以探究其耐藥性,明確耐藥性分布。并對(duì)其進(jìn)行耐藥基因的檢測(cè),利用共培養(yǎng)的手段探究耐藥基因的轉(zhuǎn)移。本研究的主要內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:本實(shí)驗(yàn)選取21名新生兒,包括19名呼吸道感染新生兒患者和2名非呼吸道感染新生兒,對(duì)其糞便及氣管分泌物進(jìn)行采集,基于α多樣性及β-多樣性分析其中微生物群落結(jié)構(gòu)組成。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到在門的水平上以Proteobacteria、Firmicutes和Actinobacteria門為優(yōu)勢(shì)門。而在屬的水平上看,各患者之間細(xì)菌屬的分布差異較大。在所有糞便樣本中,患病新生兒糞便樣品顯示主要屬為Enterococcus和Achromobacter,其次是Lactobacillus和Pantoea;在所有氣管分泌物樣品中主要屬為Achromobacter和Streptococcus,其次是為Pseudomonas、Rothia和Staphylococcus。通過分離培養(yǎng),在下呼吸道感染患者樣品中分離培養(yǎng)得到116株分離株,其中包括53株Staphylococcus epidermidis、1株Staphylococcus aureus、4株Staphylococcus cohnii、9株Staphylococcus hominis、14株Staphylococcus haemolyticus、1株Staphylococcus caprae、1株Staphylococcus warneri/pasteuri、2株Streptococcus thermophilus和15株Streptococcus salivarius和3株Moraxella osloensis、10株Lactobacillus plantarum、2株Micrococcus yunnanensis和1株Micrococcus luteus。利用K-B藥敏紙片擴(kuò)散法對(duì)挑選出的83株葡萄球菌分離株耐藥性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示83株葡萄球菌分離株對(duì)青霉素的耐藥率最高,為84.34%;其次是對(duì)紅霉素的耐藥率,為57.83%;其它耐藥率分別為:苯唑西林（8.43%）,環(huán)丙沙星（13.00%）,萬古霉素（4.82%）,氧氟沙星（14.46%）,氯霉素（43.37%）,卡那霉（38.85%）素,鹽酸克林霉素（14.46%）,頭孢唑林（16.87%）,利福平（8.43%）。挑選出77株葡萄球菌分離株進(jìn)行耐藥基因檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示grl A耐藥基因陽性檢出率是最高的,其檢出率為51.95%;其次是acc（6’）/aph（2’’）基因,其陽性檢出率為（31.17%）。其它耐藥基因陽性檢出率由高到低依次為:gyr A陽性檢出率,為27.27%、mec A基因陽性率為（23.88%）、nor A基因陽性率為（16.88%）、erm C基因陽性率為（16.88%）。fem A（9.09%）,erm A（7.79%）。但在這些分離株中并未檢測(cè)出Van A和Van B基因。本實(shí)驗(yàn)還利用共培養(yǎng)的方法探究耐藥基因的轉(zhuǎn)移情況,結(jié)果顯示表皮葡萄球菌可以通過共培養(yǎng)的方式將耐藥基因水平轉(zhuǎn)移到同屬葡萄球菌如科氏葡萄球菌細(xì)胞內(nèi),還可以水平轉(zhuǎn)移至不同屬如植物乳桿菌細(xì)胞內(nèi)。
屈云[8]（2021）在《奶牛乳房炎病原菌調(diào)查及裂解性噬菌體的分離鑒定與生物學(xué)特性研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理奶牛乳房炎是奶牛養(yǎng)殖過程中最常見的疾病之一,患有乳房炎的奶牛會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)奶量下降,產(chǎn)出的牛乳質(zhì)量下降,奶牛身體還會(huì)出現(xiàn)發(fā)燒、體重下降的情況,嚴(yán)重的病例還會(huì)引起奶牛的死亡。奶牛乳房炎常給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失,也一直制約著我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。最常見的奶牛乳房炎病因是微生物感染,特別是葡萄球菌,一旦奶牛乳腺被病原菌感染會(huì)非常難治愈,且還可能出現(xiàn)交叉?zhèn)魅厩闆r,給牧場(chǎng)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前治療奶牛乳房炎主要還是依靠抗生素,由于獸藥殘留嚴(yán)重和耐藥菌株的出現(xiàn)等問題,學(xué)者們正在積極尋找可以替代抗生素的治療方法。本研究通過對(duì)奶牛養(yǎng)殖過程中的乳房炎奶牛乳汁、乳頭、皮毛等部位,及牛圈、擠奶車間等環(huán)境進(jìn)行樣品進(jìn)行采集。分離鑒定出奶牛乳房炎致病菌,并挑選具有代表性且最難治愈的金黃色葡萄球菌作為研究對(duì)象,對(duì)其流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查,然后利用其作為宿主菌,從奶牛養(yǎng)殖環(huán)境中分離出裂解性金黃色葡萄球菌的噬菌體,并深入探究噬菌體對(duì)奶牛乳房炎病原菌的抑菌能力和生物學(xué)特性。主要研究結(jié)果如下:（1）從奶牛牧場(chǎng)共采集樣品1000份,分離出細(xì)菌494株,總分離率為49.40%。分離菌株經(jīng)過16S r DNA測(cè)序鑒定包括13種類別細(xì)菌,包括:葡萄球菌、糞腸球菌、變形桿菌、大腸桿菌、蠟狀芽孢桿菌、谷氨酸棒桿菌、海氏腸球菌、棒狀桿菌、克雷伯氏菌、淺綠氣球菌、豬糞細(xì)菌、尿鏈球菌、格氏乳桿菌,其中葡萄球菌屬又包括18個(gè)不同的種。（2）從上述葡萄球菌屬中進(jìn)一步鑒定出16株金黃色葡萄球菌,并對(duì)其流行病學(xué)特征進(jìn)行研究。分析發(fā)現(xiàn)所有分離菌株都攜帶有毒力基因和耐藥基因,共檢出13種腸毒素基因、5種其他毒力基因、2種耐消毒劑基因和12種耐藥基因。傳統(tǒng)腸毒素只檢測(cè)出sec,攜帶率為56.25%,12種新型腸毒素?cái)y帶率在12.50%和87.50%之間;12株金黃色葡萄球菌攜帶nuc基因,攜帶率為75.00%,其中6株攜帶mec A基因（37.50%）,所有nuc陽性菌株都同時(shí)攜帶hlα、hlβ基因（75.00%）,tsst-1攜帶率為（68.75%）,eta攜帶率為（12.50%）;5種耐消毒劑基因的檢測(cè)結(jié)果中,10株金黃色葡萄球菌同時(shí)攜帶qac A/B及qac G基因（62.50%）;共檢出12種耐藥基因的攜帶情況,其中g(shù)rl A攜帶率最高（87.50%）,van A和msr A檢出率最低（6.25%）,其余耐藥基因攜帶率在12.50%～81.25%之間。（3）16株金黃色葡萄球菌對(duì)19種抗生素藥物表現(xiàn)出耐受性,50.00%菌株為多重耐藥菌（3-15耐）,耐藥譜最廣達(dá)到15耐,12耐及以上菌株有6株。菌株對(duì)替考拉寧耐受性最強(qiáng)（75.00%）,其次為青霉素（50.00%）,也表現(xiàn)出對(duì)左氧氟沙星、氨芐西林、甲氧芐啶、諾氟沙星等其他抗生素不同程度的耐受性,菌株對(duì)頭孢他啶、苯唑西林、鏈霉素有不同大小的中介和敏感率,沒有菌株表現(xiàn)出對(duì)以上三種抗生素耐受;全部菌株對(duì)亞胺培南敏感。（4）以金黃色葡萄球菌分離株為宿主篩選得到一株肌尾科裂解性金黃色葡萄球菌噬菌體（命名為SP-Cm Sa-11）,其效價(jià)為:7.6×109PFU/m L;最佳MOI為:0.1;潛伏期為:60 min,爆發(fā)期為:40 min;裂解量約為:130 PFU/cell。該噬菌體的裂解譜包括13株乳房炎奶牛源金黃色葡萄球菌、7株人源MRSA、1株木糖葡萄球菌、1株表皮葡萄球菌、1株糞腸球菌。p H耐受范圍為4.0-10.0;在40℃溫度下可以正常存活,50℃生長(zhǎng)受到一定抑制,可以在60℃存活40min,70℃存活20 min;對(duì)氯仿及紫外不敏感。（5）SP-Cm Sa-11在LB培養(yǎng)基及巴氏殺菌乳中表現(xiàn)出了很好的抑菌效果,在LB培養(yǎng)基中SP-Cm Sa-11可以在4小時(shí)左右完全裂解培養(yǎng)基質(zhì)中的金黃色葡萄球菌,在巴氏殺菌乳中,相比于不加噬菌體的只接種金黃色葡萄球菌的對(duì)照組,可以使巴氏滅菌乳中的金黃色葡萄球菌菌濃度降低106CFU/m L,持續(xù)抑菌時(shí)間可以達(dá)到36 h。
晏霞,于會(huì)娜[9]（2020）在《兒童金黃色葡萄球菌感染462株臨床分布特點(diǎn)及耐藥趨勢(shì)分析》文中研究指明目的分析兒童金黃色葡萄球菌感染的臨床分布特點(diǎn)及耐藥性, 為合理使用抗菌藥物提供臨床依據(jù)。方法收集荊州市中心醫(yī)院2016-2019年住院患兒送檢的痰標(biāo)本中分離出的金黃色葡萄球菌462株, 分析金黃色葡萄球菌感染的臨床分布特點(diǎn)及對(duì)各種抗菌藥物的耐藥情況。結(jié)果 462株金黃色葡萄球菌感染中, 男性285株, 女性177株;金黃色葡萄球菌主要感染1歲以下患兒（χ2=73.163, P<0.001）, 季節(jié)以冬春季節(jié)為主（χ2=27.656, P<0.001）;共檢出462株金黃色葡萄球菌, 其中甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）363株, 占78.6%, 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）99株, 占21.4%, MSSA和MRSA對(duì)萬古霉素、替加環(huán)素、替考拉寧、利福平、利奈唑胺、奎奴普丁-達(dá)福普汀和呋喃妥因均100.0%敏感;MSSA對(duì)左氧氟沙星、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲惡唑、苯唑西林、莫西沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素的敏感性分別為100.0%、95.9%、91.7%、72.2%、96.7%、92.6%、90.0%;MRSA對(duì)左氧氟沙星、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲惡唑、苯唑西林、利福平、莫西沙星、環(huán)丙沙星、四環(huán)素的敏感性分別為91.9%、82.8%、80.8%、57.6%、90.9%、77.8%、76.8%, 提示MRSA的耐藥率較MSSA高;MSSA耐藥率較高的抗菌藥物主要是青霉素G（91.2%）、紅霉素（61.7%）、克林霉素（50.1%）, MRSA對(duì)青霉素G、紅霉素、克林霉素均100.0%耐藥。結(jié)論兒童金黃色葡萄球菌感染的形勢(shì)嚴(yán)峻, 且小兒呼吸道感染的標(biāo)本中檢出的金黃色葡萄球菌以MSSA為主, 對(duì)大部分的抗菌藥物的敏感性較好, MRSA和MSSA對(duì)各種抗菌藥物的耐藥性差異明顯, 應(yīng)合理使用抗菌素, 并加強(qiáng)院內(nèi)感染控制, 防止及減少M(fèi)RSA的產(chǎn)生。
常佳偉[10]（2020）在《寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌分子分型與生物被膜檢測(cè)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究》文中認(rèn)為金黃色葡萄球菌是人與動(dòng)物感染的重要致病菌之一,也是引起奶牛臨床和亞臨床乳腺炎的主要致病菌,其能產(chǎn)生多種毒素及侵襲性酶,并由于長(zhǎng)期的不當(dāng)使用抗菌藥物,導(dǎo)致金黃色葡萄球菌的耐藥性增加,這加劇了疾病的發(fā)生及治療成本的增加。金黃色葡萄球菌形成生物被膜后,使它的毒力、對(duì)抗菌藥物的抵抗力以及對(duì)營(yíng)養(yǎng)剝奪的耐受性增加,從而引起持續(xù)性感染,使治療更加困難。因此,研究生物被膜的形成與調(diào)控機(jī)制,有助于找到有效的抗金黃色葡萄球菌生物被膜藥物與靶點(diǎn),對(duì)預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌引起的感染具有重要意義。1.采用微量半定量法對(duì)寧夏地區(qū)234株牛源金黃色葡萄球菌進(jìn)行生物被膜檢測(cè),結(jié)合多種顯微鏡觀察生物被膜及其形成過程,通過MATH試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行表面疏水性分析。結(jié)果顯示,有185株金黃色葡萄球菌能形成生物被膜,陽性率為79.06%;具有親水性的生物被膜陰性菌株高于生物被膜陽性菌株,并且隨著生物被膜的形成能力增加,細(xì)菌的親水性逐漸降低,疏水性逐漸增高;隨著生物被膜形成能力的增強(qiáng),生物被膜逐漸增厚,同時(shí)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),其結(jié)構(gòu)越來越緊密。2.根據(jù)CLSI推薦的微量肉湯稀釋法,測(cè)定兩種狀態(tài)金葡菌對(duì)15種抗菌藥物的MIC值。結(jié)果顯示,浮游態(tài)的金葡菌對(duì)青霉素耐藥率最高,達(dá)到94.87%,其次對(duì)氨芐西林（85.90%）和磺胺異惡唑（82.05%）的耐藥率也較高,而對(duì)萬古霉素和替米考星敏感率為100%;在生物被膜狀態(tài)下金葡菌對(duì)萬古霉素的耐藥率為34.37%,對(duì)其余14種抗菌藥物的耐藥率達(dá)到90%以上,并且金葡菌在生物被膜狀態(tài)的MIC值比浮游狀態(tài)增加了 4-1024倍。3.采用PCR技術(shù)對(duì)15種生物被膜相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,clfA、clfB、sigB、atlE、fib、ebps和icaaD基因的檢出率均達(dá)到90%以上,fnbpB、bap和sarA基因的檢出率較低,未檢測(cè)出bbp基因;生物被膜陽性菌株atlE、icaA、bap、fnbpB、icaD和SaG基因的檢出率顯著高于陰性菌（P<0.05）。4.采用RAPD、agr、spa分子分型技術(shù),分析寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌的分子流行特征。結(jié)果顯示,RAPD分型有23株菌未擴(kuò)增出條帶,其余211株金葡菌分為6個(gè)型,主要以Ⅳ型為主,占29.06%;agr分型主要以Ⅰ型為主,占61.11%;234株金葡菌被分為20種spa型,主要以t224型為主,其次為t518、t359、t519和t5100。5.采用RNA-Seq測(cè)序技術(shù)從轉(zhuǎn)錄水平研究浮游態(tài)與生物被膜態(tài)金黃色葡萄球菌的差異。結(jié)果顯示,兩種狀態(tài)的細(xì)菌有1512個(gè)基因表達(dá)出現(xiàn)了差異,其中有760個(gè)基因顯著上調(diào),752個(gè)基因顯著下調(diào);顯著差異基因注釋到1825條GO條目,且注釋基因與79個(gè)通路相關(guān)。綜上所述,本研究通過對(duì)寧夏地區(qū)奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌進(jìn)行分子流行特征調(diào)查以及生物被膜、耐藥性的檢測(cè),同時(shí)比較兩種狀態(tài)下差異表達(dá)基因,挖掘與生物被膜形成相關(guān)的基因、信號(hào)通路等,為闡明金黃色葡萄球菌生物被膜形成和調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
二、438株金黃色葡萄球菌耐藥性分析（論文開題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級(jí)分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過主支變革、控制研究對(duì)象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、438株金黃色葡萄球菌耐藥性分析（論文提綱范文）
（1）云南省部分地區(qū)雞蛋污染金黃色葡萄球菌的檢測(cè)與耐藥性分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 樣品來源 |
| 1.2 主要儀器與試劑 |
| 1.3 試驗(yàn)方法 |
| 1.3.1 金黃色葡萄球菌分離鑒定 |
| 1.3.2 PFGE分子分型 |
| 1.3.3 藥敏試驗(yàn) |
| 1.4 統(tǒng)計(jì)與分析 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 分離菌鑒定 |
| 2.2 分離菌分布 |
| 2.3 分離菌同源性分析 |
| 2.4 分離菌耐藥性 |
| 2.4.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.2 耐藥譜 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
（2）金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎調(diào)查及菌株耐藥性和毒力分析（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 樣本采集及處理 |
| 1.2 主要試劑 |
| 1.3 主要儀器 |
| 1.4 試驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.5 金黃色葡萄球菌分離鑒定 |
| 1.5.1 金黃色葡萄球菌的初篩 |
| 1.5.2 生化鑒定 |
| 1.5.3 分離菌株16S rDNA序列擴(kuò)增 |
| (1)基因組DNA的提取： |
| (2)PCR鑒定： |
| 1.6 分離菌株耐藥性檢測(cè) |
| 1.7 分離菌株毒力基因檢測(cè) |
| 1.8 小鼠攻毒試驗(yàn) |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 金黃色葡萄球菌分離鑒定結(jié)果 |
| 2.2 分離菌株耐藥性檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.3 金黃色葡萄球菌分離株毒力基因PCR檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.4 小鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3 討 論 |
| 4 結(jié) 論 |
（3）奶源金黃色葡萄球菌的流行特點(diǎn)及其噬菌體藥效動(dòng)力學(xué)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 緒論 |
| 1 奶牛乳房炎的概況 |
| 2 金黃色葡萄球菌的研究進(jìn)展 |
| 2.1 金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性及流行性危害 |
| 2.2 金黃色葡萄球菌的腸毒素 |
| 2.3 金黃色葡萄球菌的抗藥性 |
| 2.4 金黃色葡萄球菌分子分型 |
| 2.5 宏基因組測(cè)序技術(shù) |
| 3 金黃色葡萄球菌噬菌體研究進(jìn)展 |
| 3.1 噬菌體概述 |
| 3.2 噬菌體的作用機(jī)制 |
| 3.3 金黃色葡萄球菌噬菌體的應(yīng)用 |
| 3.4 噬菌體療法的優(yōu)勢(shì)與局限性 |
| 4 噬菌體的藥理學(xué)探究 |
| 4.1 噬菌體藥理學(xué) |
| 4.2 噬菌體的藥效動(dòng)力學(xué) |
| 4.3 噬菌體的藥代動(dòng)力學(xué) |
| 4.4 噬菌體與抗生素的聯(lián)合應(yīng)用進(jìn)展 |
| 5 研究的目的及意義 |
| 第二章 山東地區(qū)生鮮牛乳菌群的宏基因組測(cè)序分析 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 樣品收集 |
| 2.2.2 宏基因組測(cè)序 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 2.3.1 生鮮牛乳中樣品的測(cè)序結(jié)果及多樣性指數(shù) |
| 2.3.2 生鮮牛乳樣品的稀釋曲線分析 |
| 2.3.3 生鮮牛乳中微生物OTU分布 |
| 2.3.4 生鮮牛乳中微生物群落的多樣性分析 |
| 2.3.5 生鮮牛乳中OTU數(shù)及系統(tǒng)發(fā)育分析 |
| 2.3.6 生鮮牛乳中微生物Beta多樣性分析 |
| 2.3.7 生鮮牛乳中微生物組間顯著性差異分析 |
| 2.4 討論 |
| 第三章 金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)監(jiān)測(cè) |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 金黃色葡萄球菌的分離鑒定結(jié)果 |
| 3.2.2 金黃色葡萄球菌藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.3 金黃色葡萄球菌MRSA檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.2.4 金黃色葡萄球菌腸毒素基因檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.2.5 金黃色葡萄球菌SCCmec分型結(jié)果 |
| 3.2.6 金黃色葡萄球菌MLST分型結(jié)果 |
| 3.2.7 金黃色葡萄球菌spa分型結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 金黃色葡萄球菌噬菌體的分離鑒定及生物學(xué)特性 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 金黃色葡萄球菌噬菌體的分離純化結(jié)果 |
| 4.2.2 金黃色葡萄球菌噬菌體裂解譜結(jié)果 |
| 4.2.3 金黃色葡萄球菌噬菌體效價(jià)的測(cè)定 |
| 4.2.4 金黃色葡萄球菌噬菌體電鏡觀察 |
| 4.2.5 金黃色葡萄球菌噬菌體最適生長(zhǎng)溫度的測(cè)定結(jié)果 |
| 4.2.6 金黃色葡萄球菌噬菌體熱穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果 |
| 4.2.7 金黃色葡萄球菌噬菌體最適p H值的測(cè)定結(jié)果 |
| 4.2.8 金黃色葡萄球菌噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(OMOI)的測(cè)定結(jié)果 |
| 4.2.9 金黃色葡萄球菌噬菌體一步生長(zhǎng)曲線 |
| 4.2.10 金黃色葡萄球菌噬菌體基因組分析 |
| 4.3 討論 |
| 第五章 噬菌體與宿主菌的藥效動(dòng)力學(xué)研究 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析 |
| 5.2.1 噬菌體處理后金黃色葡萄球菌的抗藥性變化結(jié)果 |
| 5.2.2 噬菌體的殺菌動(dòng)力學(xué)結(jié)果 |
| 5.2.3 恩諾沙星與金黃色葡萄球菌噬菌體協(xié)同作用的研究結(jié)果 |
| 5.3 討論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 縮略詞說明 |
| 致謝 |
| 碩士研究生期間發(fā)表文章 |
（4）金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶及其結(jié)構(gòu)域的制備與功能特性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文縮略語對(duì)照表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 金黃色葡萄球菌概述 |
| 1.1.1 金黃色葡萄球菌生物學(xué)特征 |
| 1.1.2 金黃色葡萄球菌腸毒素及危害 |
| 1.1.3 金黃色葡萄球菌生物膜及危害 |
| 1.2 噬菌體及噬菌體裂解酶 |
| 1.2.1 噬菌體 |
| 1.2.2 噬菌體裂解酶 |
| 1.3 立題背景及研究意義 |
| 1.4 主要研究?jī)?nèi)容 |
| 第二章 金黃色葡萄球菌噬菌體的篩選及其裂解酶的功能特性研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 |
| 2.2.1 菌株與質(zhì)粒 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.2.3 試劑配制 |
| 2.2.4 主要儀器與設(shè)備 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 金黃色葡萄球菌噬菌體的篩選及鑒定 |
| 2.3.2 噬菌體裂解酶LysZ的原核表達(dá) |
| 2.3.3 金黃色葡萄球菌抗生素敏感性試驗(yàn) |
| 2.3.4 金黃色葡萄球菌菌懸液的制備 |
| 2.3.5 裂解酶LysZ酶活的測(cè)定 |
| 2.3.6 裂解酶LysZ最適溫度的研究 |
| 2.3.7 裂解酶LysZ最適pH的研究 |
| 2.3.8 金屬離子對(duì)裂解酶LysZ裂解活性的影響 |
| 2.3.9 離子強(qiáng)度對(duì)裂解酶LysZ裂解活性的影響 |
| 2.3.10 牛奶組分對(duì)裂解酶LysZ裂解活性的影響 |
| 2.3.11 牛奶體系中裂解酶LysZ的裂解活性 |
| 2.3.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2.4 結(jié)果與討論 |
| 2.4.1 噬菌體的篩選 |
| 2.4.2 重組質(zhì)粒p ET15b-LysZ的構(gòu)建 |
| 2.4.3 裂解酶LysZ的表達(dá)及純化 |
| 2.4.4 裂解酶LysZ的酶學(xué)性質(zhì) |
| 2.4.5 離子強(qiáng)度對(duì)裂解酶LysZ活性的影響 |
| 2.4.6 裂解酶LysZ在牛奶中的應(yīng)用研究 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 噬菌體裂解酶結(jié)合域和裂解域的制備與功能特性研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)原料與主要試劑 |
| 3.2.2 主要儀器與設(shè)備 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 重組質(zhì)粒pET28a-EGFP-CBDz的構(gòu)建 |
| 3.3.2 結(jié)合域EGFP-CBDz的表達(dá)與純化 |
| 3.3.3 結(jié)合域EGFP-CBDz與金黃色葡萄球菌結(jié)合 |
| 3.3.4 溫度對(duì)結(jié)合域EGFP-CBDz與金黃色葡萄球菌結(jié)合的影響 |
| 3.3.5 pH對(duì)結(jié)合域EGFP-CBDz與金黃色葡萄球菌結(jié)合的影響 |
| 3.3.6 離子強(qiáng)度對(duì)結(jié)合域EGFP-CBDz與金黃色葡萄球菌結(jié)合的影響 |
| 3.3.7 牛奶體系中結(jié)合域EGFP-CBDz與金黃色葡萄球菌結(jié)合研究 |
| 3.3.8 重組質(zhì)粒pET28a-CHAP的構(gòu)建 |
| 3.3.9 裂解域CHAP_(LysZ)的表達(dá)純化 |
| 3.3.10 裂解域CHAP_(LysZ)的裂解活性檢測(cè) |
| 3.3.11 裂解域CHAP_(LysZ)的酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定 |
| 3.3.12 裂解域CHAP_(LysZ)溫度穩(wěn)定性的研究 |
| 3.3.13 牛奶組分對(duì)裂解域CHAP_(LysZ)活性的影響及其在牛奶中的應(yīng)用 |
| 3.3.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 3.4 結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 結(jié)合域EGFP-CBDz酶學(xué)性質(zhì)研究 |
| 3.4.2 基于牛奶體系中裂解酶結(jié)合域與MRSA的結(jié)合能力評(píng)價(jià) |
| 3.4.3 重組質(zhì)粒pET28a-CHAP的構(gòu)建 |
| 3.4.4 裂解域CHAP_(LysZ)的表達(dá)純化 |
| 3.4.5 裂解域CHAP_(LysZ)的酶學(xué)性質(zhì) |
| 3.4.6 基于牛奶體系中裂解域CHAP_(LysZ)控制MRSA污染能力評(píng)價(jià) |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第四章 噬菌體裂解酶及其裂解域在肉制品殺菌中應(yīng)用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)原料與主要試劑 |
| 4.2.2 主要儀器與設(shè)備 |
| 4.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)對(duì)豬肉和臘肉的MRSA污染的削減能力評(píng)估 |
| 4.3.2 最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定 |
| 4.3.3 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)對(duì)MRSA生物膜去除能力評(píng)估 |
| 4.3.4 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)與抗生素協(xié)同對(duì)生物膜去除能力評(píng)估. |
| 4.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 4.4 結(jié)果與討論 |
| 4.4.1 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)對(duì)鮮豬肉中MRSA的削減能力 |
| 4.4.2 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)對(duì)鮮豬肉中MRSA的削減能力 |
| 4.4.3 裂解酶LysZ和裂解域CHAP_(LysZ)對(duì)MRSA生物膜的削減能力 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第五章 噬菌體裂解酶及其裂解域在皮膚殺菌中應(yīng)用研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 |
| 5.2.1 實(shí)驗(yàn)原料與主要試劑 |
| 5.2.2 主要儀器與設(shè)備 |
| 5.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 5.3.1 小鼠皮膚模型建立 |
| 5.3.2 實(shí)驗(yàn)分組及處理 |
| 5.3.3 血液白細(xì)胞檢測(cè) |
| 5.3.4 傷口MRSA計(jì)數(shù) |
| 5.3.5 皮膚組織蘇木精伊紅染色 |
| 5.3.6 炎癥因子酶聯(lián)免疫反應(yīng)試驗(yàn) |
| 5.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 5.4 結(jié)果與討論 |
| 5.4.1 裂解酶和裂解域?qū)ζつw損傷小鼠皮膚傷口愈合的影響研究 |
| 5.4.2 裂解酶和裂解域?qū)ζつw損傷小鼠傷口組織的影響研究 |
| 5.4.3 裂解酶和裂解域?qū)ζつw損傷小鼠傷口MRSA殺菌效果的研究 |
| 5.4.4 裂解酶和裂解域?qū)ζつw損傷小鼠炎癥反應(yīng)及免疫反應(yīng)的影響研究 |
| 5.5 小結(jié) |
| 第六章 噬菌體裂解酶結(jié)合域偶聯(lián)金納米顆粒制備與靶向殺菌研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備 |
| 6.2.1 實(shí)驗(yàn)原料與主要試劑 |
| 6.2.2 主要儀器與設(shè)備 |
| 6.2.3 溶液配制 |
| 6.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 6.3.1 金納米顆粒 Au@PEG-EGFP-CBDz 的制備 |
| 6.3.2 金納米顆粒Au@PEG-COOH的表征 |
| 6.3.3 金納米顆粒 Au@PEG-EGFP-CBDz 與 MRSA 的結(jié)合 |
| 6.3.4 金納米顆粒Au@PEG-EGFP-CBDz在模擬體系中對(duì)MRSA的殺滅效果研究 |
| 6.3.5 金納米顆粒Au@PEG-EGFP-CBDz對(duì)MRSA的體內(nèi)殺滅作用研究 |
| 6.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 6.4 結(jié)果與討論 |
| 6.4.1 金納米顆粒的表征 |
| 6.4.2 金納米顆粒Au@PEG@EGFP-CBDz在緩沖體系中對(duì)MRSA的殺滅效果研究 |
| 6.4.3 金納米顆粒Au@PEG@EGFP-CBDz對(duì)小鼠細(xì)菌性感染的MRSA的殺滅效果研究 |
| 6.5 本章小結(jié) |
| 主要結(jié)論與展望 |
| 主要結(jié)論 |
| 展望 |
| 論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄:作者在攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
（5）齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細(xì)菌性溶血素活性作用及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 第一篇 文獻(xiàn)綜述 |
| 第1章 革蘭氏陰性菌耐藥性研究進(jìn)展 |
| 1.1 腸桿菌科細(xì)菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 1.2 銅綠假單胞菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 1.3 不動(dòng)桿菌耐藥性研究現(xiàn)狀 |
| 第2章 金黃色葡萄球菌耐藥性研究進(jìn)展 |
| 2.1 金黃色葡萄球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性研究 |
| 2.2 金黃色葡萄球菌對(duì)萬古霉素耐藥性研究 |
| 2.3 金黃色葡萄球菌對(duì)氨基糖苷類抗生素耐藥性研究 |
| 2.4 金黃色葡萄球菌對(duì)四環(huán)素類抗生素耐藥性研究 |
| 2.5 金黃色葡萄球菌對(duì)磷霉素耐藥性研究 |
| 2.6 金黃色葡萄球菌對(duì)氯霉素耐藥性研究 |
| 2.7 金黃色葡萄球菌對(duì)氟喹諾酮類抗生素耐藥性研究 |
| 2.8 金黃色葡萄球菌對(duì)磺胺類抗生素耐藥性研究 |
| 2.9 金黃色葡萄球菌對(duì)其它抗生素耐藥性研究 |
| 第3章 細(xì)菌性溶血素研究進(jìn)展 |
| 3.1 金黃色葡萄球菌溶血素在其致病過程中的作用研究 |
| 3.2 單增李斯特菌溶血素(LLO) |
| 3.3 肺炎球菌溶血素(PLY) |
| 3.4 豬鏈球菌溶血素(SLY) |
| 3.5 產(chǎn)氣莢膜梭菌溶血素(PFO) |
| 3.6 大腸桿菌溶血素 |
| 第4章 主要五環(huán)三萜類化合物的藥理學(xué)作用研究進(jìn)展 |
| 4.1 齊墩果酸 |
| 4.2 熊果酸 |
| 4.3 山楂酸 |
| 4.4 科羅索酸 |
| 4.5 其它五環(huán)三萜化合物 |
| 第5章 新型抗耐藥菌感染藥物研究進(jìn)展 |
| 5.1 現(xiàn)有抗生素的改造和聯(lián)合使用研究 |
| 5.2 新型抗菌藥物的研究 |
| 5.3 天然化合物在抗耐藥菌感染中的替代策略研究 |
| 第二篇 研究?jī)?nèi)容 |
| 第1章 廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的篩選 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 小結(jié) |
| 第2章 齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體外協(xié)同作用研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 小結(jié) |
| 第3章 齊墩果酸與β-內(nèi)酰胺類抗生素的體內(nèi)協(xié)同作用研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 小結(jié) |
| 第4章 齊墩果酸抑制細(xì)菌性溶血素活性作用的發(fā)現(xiàn) |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 小結(jié) |
| 第5章 齊墩果酸抑制Β-內(nèi)酰胺酶和細(xì)菌性溶血素活性作用機(jī)制的確證 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 結(jié)果 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 本碩博連讀期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文 |
| 導(dǎo)師簡(jiǎn)介 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
| 致謝 |
（6）2016—2020年上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥性及最低抑菌濃度變遷情況分析（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 試劑試藥 |
| 1.2 金黃色葡萄球菌抗菌藥物敏感性測(cè)試 |
| 1.2.1 藥敏檢測(cè) |
| 1.2.2 結(jié)果判讀 |
| 2 結(jié)果與分析 |
| 2.1 金黃色葡萄球菌耐藥率結(jié)果 |
| 2.2 金黃色葡萄球菌耐藥性變遷情況 |
| 2.2.1 β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物 |
| 2.2.2 氟喹諾酮類抗菌藥物 |
| 2.2.3 氨基糖苷類、糖肽類及唑烷酮類抗菌藥物 |
| 3 結(jié)論與討論 |
（7）新生兒下呼吸道感染中葡萄球菌屬耐藥基因多態(tài)性與疾病相性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第一章 緒論 |
| 1.1 呼吸道感染(Respiratory tract infections,RTI)概述 |
| 1.1.1 呼吸道感染的危害 |
| 1.1.2 呼吸道微生物群落組成 |
| 1.2 葡萄球菌 |
| 1.2.1 葡萄球菌簡(jiǎn)介 |
| 1.3 抗生素的種類和應(yīng)用及其殺菌機(jī)制 |
| 1.3.1 抗生素的種類和應(yīng)用 |
| 1.3.1.1 β-內(nèi)酰胺類抗生素 |
| 1.3.1.2 喹諾酮類抗生素 |
| 1.3.1.3 糖肽類抗生素 |
| 1.3.1.4 氯霉素類抗生素 |
| 1.3.1.5 林可酰胺類抗生素 |
| 1.3.1.6 大環(huán)內(nèi)酯類抗生素 |
| 1.3.1.7 氨基糖苷類抗生素 |
| 1.3.2 抗生素抑菌的作用機(jī)制 |
| 1.4 葡萄球菌耐藥性研究進(jìn)展 |
| 1.4.1 金黃色葡萄球菌耐藥 |
| 1.4.2 凝固酶陰性葡萄球菌耐藥進(jìn)展 |
| 1.4.2.1 表皮葡萄球菌耐藥進(jìn)展 |
| 1.4.2.2 溶血葡萄球菌 |
| 1.5 耐藥性檢測(cè) |
| 1.6 研究目的與意義 |
| 1.7 研究?jī)?nèi)容 |
| 1.7.1 下呼吸道樣品高通量測(cè)序 |
| 1.7.2 呼吸道感染患者病原菌分離純化 |
| 1.7.3 分離菌的耐藥性及耐藥基因檢測(cè) |
| 1.7.4 共培養(yǎng) |
| 1.8 技術(shù)路線 |
| 第二章 新生兒下呼道感染患者糞便和氣管分泌物細(xì)菌群落分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)樣本采集 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.2.4 實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑的配制 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.3.1 實(shí)驗(yàn)樣品的采集 |
| 2.3.2 總DNA的提取 |
| 2.3.2.1 糞便DNA |
| 2.3.2.2 氣管分泌物 |
| 2.3.3 16S rRNA基因擴(kuò)增 |
| 2.3.4 數(shù)據(jù)預(yù)處理 |
| 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.4.1 序列信息及α多樣性 |
| 2.4.2 呼吸道感染與非呼吸道感染新生兒糞便和氣管分泌物的分類分析與比較 |
| 2.4.3 基于OTU構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹分析 |
| 2.4.4 PCA分析 |
| 2.4.5 對(duì)應(yīng)分析(CORA) |
| 2.4.6 雙胞胎新生兒細(xì)菌組成及聚類分析 |
| 2.5 討論 |
| 2.6 結(jié)論 |
| 第三章 呼吸道感染患者咽、氣管分泌物中病原菌的分離培養(yǎng) |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 3.2.3 實(shí)驗(yàn)用試劑的配制 |
| 3.2.4 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基 |
| 3.3 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.3.1 試驗(yàn)樣品 |
| 3.3.2 呼吸道感染患者樣品中病原菌分離 |
| 3.3.2.1 病原菌的分離純化 |
| 3.3.2.2 菌種保藏 |
| 3.3.3 菌株鑒定 |
| 3.3.3.1 革蘭氏染色 |
| 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.4.1 菌株革蘭氏染色結(jié)果 |
| 3.4.2 病原菌的分離鑒定及進(jìn)化樹的構(gòu)建 |
| 3.5 討論 |
| 3.6 結(jié)論 |
| 第四章 葡萄球菌耐藥性檢測(cè)及耐藥基因水平轉(zhuǎn)移研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 4.2.0 藥敏檢測(cè)實(shí)驗(yàn)菌株 |
| 4.2.1 耐藥菌株共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)菌株 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器 |
| 4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 4.2.4 實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基 |
| 4.2.4.1 試劑配制 |
| 4.2.5 藥敏紙片的制備 |
| 4.2.5.1 抗菌藥物配制 |
| 4.2.5.2 藥敏紙片的制備 |
| 4.3 試驗(yàn)方法 |
| 4.3.1 藥敏試驗(yàn)步驟 |
| 4.3.2 MIC的測(cè)定 |
| 4.3.2.1 抗菌藥物和MH肉湯培養(yǎng)基的制備 |
| 4.3.2.2 MIC板的制備 |
| 4.3.2.3 接種物的制備 |
| 4.3.2.4 結(jié)果判定 |
| 4.3.3 耐藥基因檢測(cè) |
| 4.3.3.1 菌株活化 |
| 4.3.3.2 耐藥基因引物設(shè)計(jì) |
| 4.3.4 菌株共培養(yǎng)試驗(yàn) |
| 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.1 抗生素藥敏試驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.4.2 MIC的測(cè)定結(jié)果 |
| 4.4.3 耐藥基因檢測(cè) |
| 4.4.4 共培養(yǎng)結(jié)果 |
| 4.5 討論 |
| 4.6 結(jié)論 |
| 第五章 總結(jié)與展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄:攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果 |
（8）奶牛乳房炎病原菌調(diào)查及裂解性噬菌體的分離鑒定與生物學(xué)特性研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞對(duì)照表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 奶牛乳房炎概述 |
| 1.1.1 奶牛乳房炎的病因 |
| 1.1.2 奶牛乳房炎的診斷 |
| 1.1.3 奶牛乳房炎的預(yù)防與治療 |
| 1.1.4 葡萄球菌性奶牛乳房炎 |
| 1.2 噬菌體概述 |
| 1.2.1 噬菌體的分類 |
| 1.2.2 噬菌體與細(xì)菌的作用原理 |
| 1.2.3 噬菌體治療的優(yōu)勢(shì)與局限性 |
| 1.2.4 噬菌體的實(shí)際應(yīng)用與發(fā)展趨勢(shì) |
| 1.3 本研究意義及創(chuàng)新點(diǎn) |
| 第二章 引起奶牛乳房炎致病菌調(diào)查 |
| 2.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.1 試驗(yàn)培養(yǎng)基及主要試劑 |
| 2.1.2 試驗(yàn)儀器及設(shè)備 |
| 2.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2.1 樣品采集 |
| 2.2.2 菌株分離篩選及純化 |
| 2.2.3 分離菌株DNA提取及16S rDNA序列測(cè)序 |
| 2.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.1 樣品采集及分菌結(jié)果 |
| 2.3.2 分離菌株的鑒定結(jié)果 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 本章小結(jié) |
| 第三章 奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌流行特征分析 |
| 3.1 試驗(yàn)材料 |
| 3.1.1 試驗(yàn)培養(yǎng)基及主要試劑 |
| 3.1.2 試驗(yàn)儀器及設(shè)備 |
| 3.2 試驗(yàn)方法 |
| 3.2.1 金黃色葡萄球菌攜帶毒力基因的檢測(cè) |
| 3.2.2 金黃色葡萄球菌攜帶抗性基因的檢測(cè) |
| 3.2.3 金黃色葡萄球菌抗生素敏感性實(shí)驗(yàn) |
| 3.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.3.1 金黃色葡萄球菌攜帶毒力基因檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.2 金黃色葡萄球菌攜帶抗性基因檢測(cè)結(jié)果 |
| 3.3.3 金黃色葡萄球菌抗生素敏感性結(jié)果 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第四章 金黃色葡萄球菌裂解性噬菌體分離及其生物學(xué)特性 |
| 4.1 試驗(yàn)材料 |
| 4.1.1 試驗(yàn)培養(yǎng)基及主要試劑 |
| 4.1.2 試驗(yàn)儀器及設(shè)備 |
| 4.2 試驗(yàn)方法 |
| 4.2.1 噬菌體的分離 |
| 4.2.2 噬菌體的篩選 |
| 4.2.3 噬菌體的純化 |
| 4.2.4 噬菌體效價(jià)的測(cè)定 |
| 4.2.5 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)的測(cè)定 |
| 4.2.6 高效價(jià)噬菌體的制備 |
| 4.2.7 噬菌體擴(kuò)增與保存 |
| 4.2.8 噬菌體透射電鏡觀察 |
| 4.2.9 噬菌體基因組提取及測(cè)序分析 |
| 4.2.10 噬菌體一步生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 |
| 4.2.11 噬菌體宿主范圍的測(cè)定 |
| 4.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.3.1 噬菌體分離純化結(jié)果與效價(jià)的測(cè)定 |
| 4.3.2 噬菌體的電鏡觀察 |
| 4.3.3 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)的測(cè)定 |
| 4.3.4 噬菌體基因組測(cè)序結(jié)果及分析 |
| 4.3.5 噬菌體一步生長(zhǎng)曲線 |
| 4.3.6 噬菌體宿主范圍的測(cè)定結(jié)果 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 本章小結(jié) |
| 第五章 噬菌體在不同條件下的穩(wěn)定性及其抑菌效果評(píng)價(jià) |
| 5.1 試驗(yàn)材料 |
| 5.1.1 試驗(yàn)培養(yǎng)基及主要試劑 |
| 5.1.2 試驗(yàn)儀器及設(shè)備 |
| 5.2 試驗(yàn)方法 |
| 5.2.1 噬菌體pH敏感性研究 |
| 5.2.2 噬菌體熱穩(wěn)定性研究 |
| 5.2.3 噬菌體紫外敏感性研究 |
| 5.2.4 噬菌體氯仿敏感性研究 |
| 5.2.5 噬菌體體外試管殺菌效力研究 |
| 5.2.6 噬菌體在牛奶中的殺菌效力研究 |
| 5.3 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 5.3.1 噬菌體pH敏感性 |
| 5.3.2 噬菌體熱穩(wěn)定性 |
| 5.3.3 噬菌體紫外敏感性 |
| 5.3.4 噬菌體氯仿敏感性 |
| 5.3.5 噬菌體體外試管殺菌效力 |
| 5.3.6 噬菌體在牛奶中的殺菌效力 |
| 5.4 討論 |
| 5.5 本章小結(jié) |
| 結(jié)論與展望 |
| 1.本研究主要結(jié)論 |
| 2.本研究的不足與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 附錄 |
（10）寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌分子分型與生物被膜檢測(cè)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 文獻(xiàn)綜述 |
| 1.1 細(xì)菌生物被膜的研究進(jìn)展 |
| 1.1.1 生物被膜的形成過程 |
| 1.1.2 生物被膜的調(diào)控機(jī)制 |
| 1.1.3 影響生物被膜形成的因素 |
| 1.1.4 生物被膜耐藥機(jī)制 |
| 1.2 生物被膜的檢測(cè)方法 |
| 1.3 金黃色葡萄球菌分子分型 |
| 1.3.1 RAPD分型 |
| 1.3.2 agr分型 |
| 1.3.3 spa分型 |
| 1.4 轉(zhuǎn)錄組概述 |
| 1.5 研究目的與意義 |
| 第二章 金黃色葡萄球菌生物被膜的檢測(cè) |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 2.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 2.2 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.2.1 金黃色葡萄球菌生物被膜形成能力檢測(cè)結(jié)果 |
| 2.2.2 激光共聚焦顯微鏡觀察金黃色葡萄球菌生物被膜 |
| 2.2.3 金黃色葡萄球菌表面疏水性檢測(cè) |
| 2.2.4 金黃色葡萄球菌生物被膜形成過程及結(jié)構(gòu) |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 第三章 金黃色葡萄球菌耐藥性檢測(cè) |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 3.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 3.2 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 3.2.1 金黃色葡萄球菌對(duì)15種抗菌藥物的耐藥情況 |
| 3.2.2 金黃色葡萄球菌多藥耐藥情況 |
| 3.2.3 生物被膜態(tài)金黃色葡萄球菌對(duì)抗菌藥物敏感性結(jié)果 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 第四章 金黃色葡萄球菌生物被膜相關(guān)基因檢測(cè) |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 4.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 4.2 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 4.2.1 金黃色葡萄球菌生物被膜相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果 |
| 4.2.2 攜帶多種生物被膜相關(guān)基因情況 |
| 4.3 討論 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 金黃色葡萄球菌分子分型 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 5.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 5.2 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 5.2.1 金黃色葡萄球菌RAPD分型結(jié)果 |
| 5.2.2 金黃色葡萄球菌agr分型結(jié)果 |
| 5.2.3 金黃色葡萄球菌spa分型結(jié)果 |
| 5.3 討論 |
| 5.4 小結(jié) |
| 第六章 浮游態(tài)與生物被膜態(tài)金黃色葡萄球菌轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究 |
| 6.1 材料與方法 |
| 6.1.1 試驗(yàn)材料 |
| 6.1.2 試驗(yàn)方法 |
| 6.2 試驗(yàn)結(jié)果 |
| 6.2.1 RNA樣品質(zhì)量檢測(cè)分析 |
| 6.2.2 測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估與比對(duì)統(tǒng)計(jì) |
| 6.2.3 樣品間質(zhì)量評(píng)估 |
| 6.2.4 基因差異表達(dá)分析 |
| 6.2.5 差異基因G0富集分析 |
| 6.2.6 差異基因KEGG富集 |
| 6.3 討論 |
| 6.3.1 差異基因分析 |
| 6.3.2 KEGG富集分析 |
| 6.4 小結(jié) |
| 第七章 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)介 |
四、438株金黃色葡萄球菌耐藥性分析（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]云南省部分地區(qū)雞蛋污染金黃色葡萄球菌的檢測(cè)與耐藥性分析[J]. 柴云美,何依蓉,馬青雯,黃艾祥. 中國(guó)家禽, 2021(10)
- [2]金黃色葡萄球菌性奶牛乳房炎調(diào)查及菌株耐藥性和毒力分析[J]. 劉肖利,劉璐瑤,李鑌罡,裴文剛,李斌,程彪,蘇戰(zhàn)強(qiáng),李勤凡. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2021(10)
- [3]奶源金黃色葡萄球菌的流行特點(diǎn)及其噬菌體藥效動(dòng)力學(xué)研究[D]. 苑曉萌. 山東師范大學(xué), 2021(12)
- [4]金黃色葡萄球菌噬菌體裂解酶及其結(jié)構(gòu)域的制備與功能特性研究[D]. 閆繼愛. 江南大學(xué), 2021(01)
- [5]齊墩果酸抑制β-內(nèi)酰胺酶和細(xì)菌性溶血素活性作用及其機(jī)制研究[D]. 周永林. 吉林大學(xué), 2021(01)
- [6]2016—2020年上海地區(qū)乳源金黃色葡萄球菌耐藥性及最低抑菌濃度變遷情況分析[J]. 張妤,孫冰清,姜芹,何成瑞,張文剛,顧欣. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2021(10)
- [7]新生兒下呼吸道感染中葡萄球菌屬耐藥基因多態(tài)性與疾病相性研究[D]. 孫世意. 昆明理工大學(xué), 2021(02)
- [8]奶牛乳房炎病原菌調(diào)查及裂解性噬菌體的分離鑒定與生物學(xué)特性研究[D]. 屈云. 西南民族大學(xué), 2021(02)
- [9]兒童金黃色葡萄球菌感染462株臨床分布特點(diǎn)及耐藥趨勢(shì)分析[J]. 晏霞,于會(huì)娜. 中國(guó)基層醫(yī)藥, 2020(24)
- [10]寧夏地區(qū)牛源金黃色葡萄球菌分子分型與生物被膜檢測(cè)及轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 常佳偉. 寧夏大學(xué), 2020(03)