一、持續(xù)性外周炎癥引起脊髓背角淺層nociceptin/or phanin放射性結(jié)合位點增加(英文)（論文文獻(xiàn)綜述）

蔣莉^[1]（2021）在《小膠質(zhì)細(xì)胞P2X7受體介導(dǎo)慢性偏頭痛中樞敏化及其機(jī)制研究》文中指出第一部分P2X7受體介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化參與慢性偏頭痛中樞敏化目的目前認(rèn)為中樞敏化是導(dǎo)致慢性偏頭痛（chronic migraine,CM）發(fā)生的主要原因,而小膠質(zhì)細(xì)胞活化后啟動的炎癥反應(yīng)是介導(dǎo)中樞敏化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明P2X7受體（P2X7 receptor,P2X7R）激活后,可以促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,導(dǎo)致炎癥相關(guān)物質(zhì)表達(dá)外釋至胞外。目前尚無任何研究探索P2X7R在CM中樞敏化中的作用,以及這種作用是否與P2X7R介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞功能調(diào)控有關(guān)。所以,本部分實驗旨在完成以下幾個目的:1.研究CM模型中,三叉神經(jīng)脊束核（trigeminal nucleus caudalis,TNC）部位P2X7R的表達(dá)情況;2.探索TNC部位P2X7R對CM中樞敏化的影響;3.明確P2X7R對CM中樞敏化的影響是否與該受體調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞的免疫炎癥功能有關(guān);方法1.使用反復(fù)硝酸甘油（nitroglycerin,NTG）腹腔注射構(gòu)建CM模型;在建模的第1天、第3天、第5天、第9天,使用免疫印跡法（Western blotting,WB）分析TNC部位P2X7R蛋白表達(dá)的時間規(guī)律;然后使用實時熒光定量PCR（real-time RT-PCR,RT-q PCR）和免疫熒光,比較正常組和模型組TNC部位P2X7R的表達(dá)情況。最后使用免疫熒光雙標(biāo)技術(shù),界定TNC部位P2X7R表達(dá)的細(xì)胞類型。2.給予P2X7R拮抗劑亮藍(lán)-G（brilliant blue G,BBG）干預(yù),以等體積溶劑（vehicle,VEH）作為對照,將小鼠隨機(jī)分為五組:SHAM組、SHAM+BBG組、NTG組、NTG+VEH組、NTG+BBG組。使用電子Von Frey測痛儀和熱刺痛儀檢測各組小鼠機(jī)械痛閾和熱痛閾變化情況,評估中樞敏化表征—痛覺過敏的變化。使用WB和免疫熒光對各組小鼠TNC區(qū)域的中樞敏化相關(guān)生化指標(biāo)—降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）和c-fos進(jìn)行檢測。3.體內(nèi)實驗中,給予BBG抑制P2X7R后,一方面使用免疫熒光定量分析Iba-1陽性細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)變化,另一方面使用WB定量分析炎癥相關(guān)物質(zhì)的表達(dá)變化。4.體外實驗中,使用Bz ATP 0.8m M刺激BV-2細(xì)胞,模擬CM狀態(tài)下TNC部位P2X7R激活,并使用WB確定P2X7R表達(dá)變化。給予BBG干預(yù)BV-2細(xì)胞,以等體積溶劑作為對照,將細(xì)胞隨機(jī)分為四組:SHAM組、BBG組、Bz ATP組、Bz ATP+BBG組。使用免疫熒光技術(shù)分析各組細(xì)胞形態(tài)和i NOS表達(dá)變化,然后采取WB聯(lián)合酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）的方法對細(xì)胞炎癥相關(guān)物質(zhì)的表達(dá)釋放進(jìn)行檢測。結(jié)果1.WB分析提示,反復(fù)NTG給藥過程中,TNC部位P2X7R蛋白表達(dá)逐漸上調(diào),在第5天趨勢顯著（p<0.001）,并持續(xù)整個造模過程。從RT-q PCR和熒光層面來看,模型組P2X7R m RNA、P2X7R陽性細(xì)胞數(shù)和平均免疫熒光強度均顯著升高。免疫熒光證實P2X7R在TNC區(qū)域主要分布表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞上。2.行為學(xué)檢測結(jié)果顯示,反復(fù)NTG給藥后模型組小鼠機(jī)械痛和熱痛閾值均下降,表現(xiàn)出痛覺過敏。BBG干預(yù)可以顯著改善模型鼠痛覺過敏現(xiàn)象。WB和免疫熒光結(jié)果顯示,BBG干預(yù)可以抑制模型鼠TNC部位CGRP釋放、c-fos表達(dá),改善中樞敏化。3.體內(nèi)實驗中:免疫熒光結(jié)果顯示,造模后TNC區(qū)域Iba-1染色陽性的細(xì)胞增多,其免疫熒光強度增加,形態(tài)上胞體變圓增大、突起縮短消失,定量分析顯示細(xì)胞突起的總長度和平均長度縮短,提示小膠質(zhì)細(xì)胞活化。給予BBG干預(yù)后,小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及平均免疫熒光強度顯著降低,細(xì)胞突起延長。此外,WB結(jié)果顯示,BBG干預(yù)顯著降低模型鼠炎癥相關(guān)物質(zhì):NLRP3、IL-1β、IL-18表達(dá)（p<0.01）。4.體外實驗中:WB結(jié)果顯示,Bz ATP處理BV-2細(xì)胞后,P2X7R表達(dá)上調(diào)。這種上升趨勢出現(xiàn)在Bz ATP處理60min,于120min達(dá)峰,可維持至180min。在免疫熒光鏡下,Bz ATP處理后BV-2細(xì)胞胞體變圓增大,突起消失,i NOS表達(dá)升高。若在Bz ATP刺激前,先給予BBG預(yù)處理,細(xì)胞則表現(xiàn)為梭形,突起顯著變長,i NOS表達(dá)降低。此外,WB聯(lián)合ELISA檢測到,BBG顯著抑制Bz ATP誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞炎癥相關(guān)物質(zhì):NLRP3、IL-1β、IL-18表達(dá)。結(jié)論CM模型中TNC部位小膠質(zhì)細(xì)胞P2X7R表達(dá)上調(diào),伴隨著小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和相關(guān)炎癥物質(zhì)表達(dá)增加。抑制P2X7R功能可以遏制小膠質(zhì)細(xì)胞激活,限制炎癥反應(yīng),改善中樞敏化表征—痛覺過敏現(xiàn)象,抑制中樞敏化相關(guān)生化指標(biāo)CGRP、c-fos表達(dá)。這些結(jié)果提示P2X7R通過介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化參與CM中樞敏化,針對該受體的干預(yù)可能為CM的防治提供新靶點。第二部分P2X7受體通過自噬介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化參與慢性偏頭痛中樞敏化目的自噬水平變化可以調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化狀態(tài),左右炎癥反應(yīng)的結(jié)局。既往研究提示P2X7R對自噬過程具有調(diào)控作用。但是在CM模型中,P2X7R對小膠質(zhì)細(xì)胞免疫炎癥功能的調(diào)控作用是否由自噬介導(dǎo)完成,尚無任何研究報道。此外,在CM研究領(lǐng)域,自噬研究仍是一片空白。因此,本部分實驗旨在完成以下幾個目的:1.探索CM模型小鼠TNC部位自噬活動改變;2.研究自噬活動改變對CM的中樞敏化影響;3.探索CM模型中,P2X7R是否通過自噬介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞激活,進(jìn)而影響中樞敏化形成。方法1.反復(fù)NTG腹腔注射構(gòu)建CM模型;首先使用WB技術(shù)檢測正常組和模型組TNC部位自噬相關(guān)蛋白表達(dá),然后在透射電鏡（transmission electron microscope,TEM）下計數(shù)各組TNC區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞的自噬體,最后加用氯喹（chloroquine,CQ）干預(yù)明確CM模型中TNC部位自噬潮變化。2.給予誘導(dǎo)自噬藥物,雷帕霉素（rapamycin,RAPA）,以等體積的溶劑（vehicle,VEH）作為對照,將小鼠隨機(jī)分四組:SHAM-VEH組、SHAM-RAPA組、NTG-VEH組、NTG-RAPA組。使用電子Von Frey測痛儀和熱刺痛儀檢測各組小鼠機(jī)械痛閾和熱痛閾變化情況,評估中樞敏化表征—痛覺過敏的變化。使用WB和免疫熒光檢測各組小鼠TNC部位CGRP、c-fos表達(dá)變化,評估中樞敏化的生化改變。3.分別給予RAPA和BBG干預(yù),使用WB技術(shù)分析自噬相關(guān)蛋白、P2X7R的表達(dá)變化。4.給予RAPA誘導(dǎo)自噬后,一方面使用免疫熒光定量分析Iba-1陽性細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)變化,另一方面使用WB定量分析NLRP3、IL-1β、IL-18的表達(dá)變化。結(jié)果1.從WB結(jié)果可以看出,造模后LC3-II表達(dá)上調(diào)、伴隨p62蛋白堆積、beclin1表達(dá)無變化。模型組給予氯喹前后,LC3-II表達(dá)并無明顯變化,提示CM模型TNC部位自噬潮降低。與WB結(jié)果呈現(xiàn)的CM高LC3-II表達(dá)一致,造模后TNC部位小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)自噬體增多。2.行為學(xué)檢測結(jié)果顯示,反復(fù)NTG給藥后模型組小鼠機(jī)械痛和熱痛閾值均下降,表現(xiàn)出痛覺過敏。RAPA誘導(dǎo)自噬后,可以部分逆轉(zhuǎn)小鼠基礎(chǔ)疼痛閾值下降,但是對急性痛閾改變沒有影響。WB和免疫熒光結(jié)果顯示,RAPA干預(yù)可以抑制模型鼠TNC部位CGRP釋放、c-fos表達(dá),改善中樞敏化。3.WB結(jié)果顯示,給予BBG干預(yù)后,模型鼠TNC部位LC3-II和p62表達(dá)降低;給予RAPA干預(yù)后,P2X7R表達(dá)無變化。4.免疫熒光數(shù)據(jù)顯示,給予RAPA誘導(dǎo)自噬后,模型鼠TNC部位小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量及平均免疫熒光強度降低,細(xì)胞突起延長。WB結(jié)果顯示,RAPA干預(yù)顯著降低模型鼠NTG誘導(dǎo)的NLRP3、IL-1β、IL-18表達(dá)（p<0.05）。結(jié)論CM模型中TNC部位存在自噬水平抑制,激活自噬抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、削弱免疫炎癥反應(yīng),改善中樞敏化。P2X7R作為自噬調(diào)控的上游受體,通過自噬應(yīng)答缺陷介導(dǎo)了小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,從而參與CM中樞敏化。自噬調(diào)節(jié)中樞敏化作為CM研究的新機(jī)制,為CM的防治提供了新靶點。

朱麗蓉^[2]（2021）在《褪黑素經(jīng)MT2受體抑制中樞敏感化治療神經(jīng)根性疼痛》文中研究表明背景腰椎間盤突出癥（lumbar disc herniation,LDH）是一種以青壯年人群患病居多的臨床常見疾病,患者可發(fā)生腰部疼痛和腿放射性痛以及下肢麻痹、活動受限等一系列癥狀。LDH引起的神經(jīng)根性疼痛（radicular pain,RP）屬于病理性疼痛的一種,長期困擾著患者。盡管有許多學(xué)者對該疾病進(jìn)行了大量研究,但LDH具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。病理性疼痛產(chǎn)生的機(jī)理包括外周敏感化和中樞敏感化。外周敏感化指初級傳入神經(jīng)元離子通道的表達(dá)及功能的改變,導(dǎo)致神經(jīng)元興奮性增強,疼痛信號生成增加。中樞敏感化指接受傷害性刺激的初級傳入纖維將痛信號傳送至脊髓背角神經(jīng)元,引發(fā)突觸間信號交換效率的增強而引起的長時程增強（long-term potentiation,LTP）,將疼痛信號擴(kuò)大。本課題組于2017年證實并報道了中樞敏感化是RP發(fā)生的重要原因,這為治療RP提供了新的方向。褪黑素（melatonin,MLT）屬于一種脂溶性神經(jīng)內(nèi)分泌激素,主要由松果體分泌,經(jīng)由受體MT1和MT2在機(jī)體多個系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。有研究表明MLT抑制正常小鼠海馬CA1區(qū)LTP的誘導(dǎo),但也有研究發(fā)現(xiàn)MLT可改善阿爾茲海默癥和癲癇造成的海馬LTP損傷,提高大鼠的學(xué)習(xí)能力,即MLT可促進(jìn)海馬LTP的誘導(dǎo)和維持。這些研究表明在生理和病理狀態(tài)下,MLT對海馬LTP的作用可能完全相反。而MLT在LDH誘導(dǎo)的脊髓LTP中作用如何?目前尚未有報道。研究發(fā)現(xiàn)正常小鼠體內(nèi)MLT水平在夜間更高,此時小鼠對痛刺激不敏感;在神經(jīng)損傷和炎癥導(dǎo)致的病理性疼痛中,MLT具有鎮(zhèn)痛作用。但MLT是否可以緩解神經(jīng)根性疼痛?其具體機(jī)制如何?還值得深入探討。研究目的證實MLT通過抑制痛覺傳遞的中樞敏感化治療LDH引起的RP,并從MLT相關(guān)受體入手探討具體機(jī)制。方法及結(jié)果本次實驗中,我們用自體髓核NP（Nucleus pulposus）移植方法構(gòu)建大鼠LDH模型,腹腔注射MLT。痛行為學(xué)檢測結(jié)果顯示MLT提高NP大鼠機(jī)械性撤足閾值（mechanical paw withdraw threshold,PWT）和熱撤足潛伏期（thermal withdraw latency,PWL）,表明MLT可緩解NP大鼠機(jī)械性痛敏和熱痛敏;電生理實驗發(fā)現(xiàn)MLT明顯降低NP大鼠脊髓背角C纖維誘發(fā)電位幅度,表明MLT可抑制中樞敏感化;進(jìn)一步通過Western blot檢測N-甲基-D-天冬氨酸受體亞基2A（N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2A,NR2A）和N-甲基-D-天冬氨酸受體亞基2B（N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B）蛋白表達(dá),以及用免疫熒光檢測降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）、植物凝集素b4（Isolectin b4,Ib4）和NF200的蛋白表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)MLT可通過抑制NR2B、CGRP和Ib4表達(dá)抑制中樞敏感化。以上結(jié)果表明MLT可通過抑制痛覺傳遞的中樞敏感化緩解疼痛的發(fā)生。用Western blot檢測MT1和MT2受體蛋白表達(dá),結(jié)果顯示NP組MT2表達(dá)比假手術(shù)組明顯升高,而MT1無明顯差異;免疫熒光雙染顯示MT2與神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞共定位。進(jìn)一步鞘內(nèi)注射MLT受體工具藥:8-甲氧基-2-丙酰胺四胺（8-methoxy-2-propionamidotetralin,8MP,MT2受體激動劑）,N-乙酰-2-芐基色胺（luzindole,luz,MT1、MT2受體拮抗劑）、4-苯基-2-丙酰胺四胺（4-phenyl-2-propionamidotetralin,4PP,MT2受體拮抗劑）。研究發(fā)現(xiàn)8MP可提高模型組大鼠PWT和PWL;降低C纖維誘發(fā)電位幅度;降低NR2B、CGRP及Ib4的表達(dá),并且luzindole和4PP均可逆轉(zhuǎn)8MP的作用,表明MLT可能是主要通過MT2發(fā)揮抗中樞敏感化和緩解疼痛的作用。結(jié)論褪黑素可通過抑制痛覺傳遞的中樞敏感化緩解神經(jīng)根性疼痛的發(fā)展,其機(jī)制可能與下調(diào)谷氨酸受體NR2B的表達(dá),降低C纖維末梢重要遞質(zhì)CGRP和Ib4的釋放有關(guān),并且MLT可能主要通過MT2受體抑制中樞敏感化并緩解疼痛。以褪黑素及其MT2受體為靶點的治療方案可能為臨床治療神經(jīng)根性疼痛提供新的研究方向。

胡育銘^[3]（2020）在《TLR4/NF-κB通路促進(jìn)大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)參與神經(jīng)根性疼痛的作用及機(jī)制》文中研究說明腰椎間盤突出癥（lumbar disc herniation,LDH）是臨床常見疾病,也是神經(jīng)根性疼痛（radicular pain,RP）的主要病因。主要表現(xiàn)為長期的痛覺過敏（hyperalgesia）,痛覺超敏（allodynia）和自發(fā)性疼痛。此病發(fā)病率極高、覆蓋人群廣泛、患者易忽視病情導(dǎo)致長期慢性的神經(jīng)根性疼痛,對人類正常的生產(chǎn)生活將產(chǎn)生巨大的不良影響,并形成相應(yīng)的經(jīng)濟(jì)壓力,影響身心健康,因此成為一個需要立即謹(jǐn)慎對待的社會經(jīng)濟(jì)問題。進(jìn)一步分析且探究LDH誘導(dǎo)的神經(jīng)根性疼痛的緣由與體系擁有推廣的巨大臨床價值。多年來,盡管國內(nèi)外已經(jīng)進(jìn)行了大量研究,但RP的機(jī)制仍然有待明晰。Toll樣受體（TLRs）是模式識別受體家族中（PRR）極為關(guān)鍵的組成部分。近些年來的免疫學(xué)文獻(xiàn)報道發(fā)現(xiàn)TLRs不僅在先天性免疫中發(fā)揮著極其關(guān)鍵的作用,TLRs還可較好地協(xié)調(diào)獲得性免疫。激活后的TLR4能夠利用MAPK/NF-κB和NF-κB/IRF3等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方式,表達(dá)各種炎性細(xì)胞組織從而出現(xiàn)炎癥。TLR4在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）中的神經(jīng)元、小膠質(zhì)細(xì)胞（microglia,MG）等相關(guān)細(xì)胞中都有較多的表達(dá),而表達(dá)最顯著的是在MG中。參與先天免疫應(yīng)答的TLR4是一種跨膜蛋白富含亮氨酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞質(zhì)信號結(jié)構(gòu)域。與內(nèi)源性或外源性配體結(jié)合,TLR4可能通過激活NF-κB或p38誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子釋放。據(jù)報道,TLR4拮抗劑可減輕神經(jīng)損傷引起的痛覺過敏或其輔助因子CD14導(dǎo)致的遺傳缺陷膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎性疼痛。然而,TLR4在LDH引起的神經(jīng)根性疼痛尚不清楚。本研究的目的是明確TLR4/NF-κB通路在神經(jīng)根性疼痛中的作用,大鼠LDH模型的建立及脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化機(jī)制和隨后的炎癥反應(yīng)的探討。小膠質(zhì)細(xì)胞作為CNS固有的免疫效應(yīng)細(xì)胞,數(shù)量在CNS中盡管只占了大概十個百分點,然而其在生理或病理情況下調(diào)節(jié)CNS,免疫反應(yīng)中擁有巨大的效果。當(dāng)前的分析證實了,在普通人CNS內(nèi)TLR4在腦與脊髓的血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等各種組織中都比較活躍,同時在MG中的表現(xiàn)最為活躍。TLR4/NF-κB信號路徑在CNS損傷中起到了十分巨大的效果,而MG為損傷介質(zhì)的重要出處。在組織損傷時放出的內(nèi)源性配體導(dǎo)致的過度炎癥反應(yīng)對神經(jīng)系統(tǒng)的恢復(fù)將產(chǎn)生極大的不良影響。不僅會生成促炎癥細(xì)胞組織與趨化組織,被激活的MG也能生成各種自由基,包括氧自由基,進(jìn)而對神經(jīng)細(xì)胞帶來不良影響。小膠質(zhì)細(xì)胞中的TLR4在內(nèi)毒素的影響下將帶來活性氧,使得上皮細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞開始死亡。LDH引起的慢性疼痛模型中,MG是如何激活的?激活的MG又如何引起慢性疼痛?具體機(jī)制如何?還值得進(jìn)行深入研究。本研究的目的是:1.證實TLR4/NF-κB（P65）通路在大鼠腰椎間盤突出誘導(dǎo)的神經(jīng)根性疼痛中的作用;2.探求TLR4/NF-κB介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的激活與脊髓炎癥反應(yīng)在神經(jīng)根性疼痛中的關(guān)聯(lián)及機(jī)制。第一章脊髓TLR4/NF-κB通路的活化是LDH模型大鼠慢性疼痛產(chǎn)生的重要原因本研究用自體髓核（nucleus pulposus,NP）移植方法復(fù)制大鼠LDH模型。術(shù)后3-21d分別檢測手術(shù)同側(cè)和對側(cè)后肢機(jī)械性撤足閾值（Paw withdraw threshold,PWT）和熱撤足潛伏期（Paw withdraw latency,PWL）。發(fā)現(xiàn):⑴與假手術(shù)組相比,NP植入大鼠表現(xiàn)為爪子退縮閾值（PWT）和爪子退縮潛伏期閾值（PWL）明顯降低,而對側(cè)后肢的PWT和PWL均無明顯差異。這表明NP移植可引起單側(cè)的機(jī)械性痛覺過敏和熱痛覺超敏。運用western blotting方法和免疫熒光方法檢測假手術(shù)組和NP移植（3d,7d,14d,21d）組大鼠同側(cè)和對側(cè)脊髓背角TLR4和p-p65的表達(dá)和細(xì)胞學(xué)定位。⑴western blotting檢測發(fā)現(xiàn),與假手術(shù)組相比,NP移植后3-21d同側(cè)脊髓背角TLR4和p-p65的表達(dá)明顯增加,但是對側(cè)脊髓背角TLR4和p-p65的表達(dá)無明顯差異。⑵免疫熒光雙染結(jié)果發(fā)現(xiàn)脊髓背角TLR4主要存在于小膠質(zhì)細(xì)胞,而不是在星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元中。為了進(jìn)一步證實TLR4/NF-κB通路的激活是慢性疼痛產(chǎn)生的原因,我們檢測TLR4拮抗劑TAK242對脊髓p-p65表達(dá)的影響。結(jié)果表明:TLR4拮抗劑TAK242明顯降低脊髓p-p65的表達(dá),但對TLR4表達(dá)無影響。TLR4抑制劑TAK242和NF-κB抑制劑PDTC能有效減輕疼痛行為,抑制脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,減少脊髓炎性反應(yīng)。以上結(jié)果提示脊髓TLR4/NF-κB通路的活化是LDH模型大鼠慢性疼痛產(chǎn)生的重要原因。第二章TLR4/NF-κB通路通過激活脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞并促進(jìn)致炎細(xì)胞因子的表達(dá)引起RP由于TLR4主要存在于脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞,因此我們推斷TLR4/NF-κB通路可能通過影響小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和功能,如致炎細(xì)胞因子的釋放,從而引起慢性疼痛。結(jié)果表明:⑴ELISA檢測發(fā)現(xiàn),與假手術(shù)組相比,LDH大鼠脊髓中IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)增加,IL-10表達(dá)降低。與LDH組相比,TAK242和PDTC組大鼠脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)下降,IL-10表達(dá)上升。大量文獻(xiàn)已經(jīng)證實IL-1β、IL-6、TNF-α均可引起中樞敏感化和慢性疼痛。因此我們認(rèn)為:NP移植后,脊髓背角TLR4/NF-κB通路的激活引起慢性疼痛的機(jī)制與促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞活化和致炎細(xì)胞因子釋放有關(guān)。結(jié)論:1.NP移植引起大鼠同側(cè)后肢機(jī)械性痛覺過敏和熱痛覺超敏。2.脊髓背角TLR4/NF-κB通路活化是慢性疼痛產(chǎn)生的重要原因。3.脊髓TLR4/NF-κB通路通過促進(jìn)脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和炎癥反應(yīng)參與神經(jīng)根性疼痛,靶向這一途徑可能有助于緩解神經(jīng)根性疼痛。

張向輝^[4]（2019）在《多位點改造的內(nèi)嗎啡肽類似物設(shè)計合成與活性研究》文中認(rèn)為內(nèi)嗎啡肽（EMs）是一類阿片受體的內(nèi)源性配體,由Zadina課題組于1997年發(fā)現(xiàn)。EMs是μ阿片受體的選擇性激動劑,對μ受體具有顯著的親和力與激動活性,鎮(zhèn)痛活性與嗎啡相當(dāng),并且在發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的同時能夠避免許多嗎啡的副作用,在近年的研究中被認(rèn)為是有希望替代嗎啡的新型先導(dǎo)化合物。但同時,EMs存在許多缺陷,如生物利用度差,酶解穩(wěn)定性低,難以穿透血腦屏障,這些缺陷使其難以進(jìn)入臨床應(yīng)用。所以,通過化學(xué)結(jié)構(gòu)的改造對EMs進(jìn)行修飾,避免其在臨床應(yīng)用中出現(xiàn)的缺點,成為了諸多藥物化學(xué)家們的研究方向。在本文中,我們將自主合成的非天然氨基酸（2-furyl）Map引入EMs的4位,替換Phe4殘基;將2位以D-Arg、D-Lys（Ac）、（S,S）-γ-lactam（Trp）、（R,S）-γ-lactam（Trp）替換Pro2殘基,得到六條內(nèi)嗎啡肽的類似物。通過放射性配體競爭性結(jié)合實驗、cAMP功能實驗、腦勻漿及血漿酶解穩(wěn)定性實驗及在體的動物鎮(zhèn)痛活性實驗來評價類似物的親和能力、鎮(zhèn)痛活性、離體穩(wěn)定性與透血腦屏障能力。體外活性實驗中,以D-Arg、D-Lys（Ac）取代的四條EM-1,EM-2類似物均體現(xiàn)出類似或優(yōu)于母肽的對μ受體親和能力,此外D-Arg、D-Lys（Ac）替換Pro2得到的類似物還具備母肽不存在的對δ-受體的親和能力。通過cAMP功能實驗檢測類似物對μ受體的激動活性,結(jié)果顯示類似物具有與母肽相當(dāng)?shù)募踊钚?。酶解穩(wěn)定性實驗得到的結(jié)果顯示類似物在血漿和腦勻漿中的半衰期相較于母肽均得到提升。在體鎮(zhèn)痛實驗中,類似物表現(xiàn)出優(yōu)于母肽的鎮(zhèn)痛活性,其鎮(zhèn)痛作用與鎮(zhèn)痛時間均強于母肽。在尾靜脈與側(cè)腦室的不同給藥方式中,類似物同樣發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用,這顯示類似物能夠穿透血腦屏障發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。而腹腔注射納洛酮能夠阻斷尾靜脈注射類似物產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛作用,說明類似物通過阿片受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。以上實驗結(jié)果顯示設(shè)計合成的類似物具有強于母肽的鎮(zhèn)痛活性與穩(wěn)定性,此類化學(xué)修飾能夠提高EMs的鎮(zhèn)痛能力,延長其體內(nèi)半衰期,幫助我們了解EMs的鎮(zhèn)痛機(jī)制,為之后EMs的改造提供了思路。

石學(xué)睿^[5]（2019）在《阿片/神經(jīng)肽FF受體的多靶點分子DN-9：外周鎮(zhèn)痛活性及其阿片樣副作用評價》文中研究表明疼痛是一種與組織損傷或潛在的損傷相關(guān)的不愉快的軀體感覺和心理體驗。阿片類鎮(zhèn)痛藥是臨床上中、重度鎮(zhèn)痛的一線治療藥物,但阿片藥物的濫用和成癮等副作用限制了其臨床應(yīng)用范圍。本實驗室基于神經(jīng)肽,利用“分子嵌合”策略通過設(shè)計、合成和結(jié)構(gòu)優(yōu)化獲得了阿片/神經(jīng)肽FF（NPFF）受體的多靶點肽類分子DN-9（Tyr-D.Ala-Gly-NMe.Phe-Gly-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2）,已有藥理學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)DN-9能同時激活μ、δ、κ阿片、NPFF1和NPFF2受體,脊髓以上水平注射在急性痛模型中能產(chǎn)生高效的無耐受鎮(zhèn)痛。由于肽類分子不易穿透血腦屏障（BBB）,預(yù)實驗也發(fā)現(xiàn)DN-9的外周鎮(zhèn)痛主要是通過外周阿片受體介導(dǎo)的。為了進(jìn)一步評價其成藥性,本論文研究了該多靶點分子DN-9的外周鎮(zhèn)痛活性及其阿片樣副作用。在小鼠光熱甩尾急性痛模型中,皮下注射DN-9能產(chǎn)生劑量依賴的鎮(zhèn)痛作用,利用阿片受體拮抗劑藥理學(xué)阻斷發(fā)現(xiàn),DN-9不能通透血腦屏障（BBB）,其鎮(zhèn)痛活性是由外周的μ和κ阿片受體介導(dǎo)的,并且不受NPFF受體拮抗劑RF9的影響。進(jìn)一步研究表明,在角叉菜膠誘導(dǎo)的炎癥痛和坐骨神經(jīng)結(jié)扎（CCI）誘導(dǎo)的神經(jīng)痛模型上,皮下注射DN-9也引起劑量依賴的鎮(zhèn)痛活性,其鎮(zhèn)痛活性能被阿片受體阻斷劑納洛酮阻斷,并獨立于NPFF受體系統(tǒng)。并且,利用μ阿片受體敲除的MOR-/-小鼠研究也證實,皮下注射DN-9在炎癥痛中所介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛活性是由μ阿片受體介導(dǎo)的。此研究結(jié)果還顯示,在急性和慢性痛模型中,皮下注射DN-9所產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛活性無性別差異。在有效鎮(zhèn)痛劑量下,小鼠轉(zhuǎn)棒實驗表明皮下注射DN-9對運動協(xié)調(diào)性無明顯的影響,從而表明其鎮(zhèn)痛活性與運動調(diào)節(jié)作用無關(guān)。本論文還檢測了皮下注射DN-9是否產(chǎn)生鎮(zhèn)痛耐受、成癮和便秘等副作用。利用小鼠的急性痛、炎癥痛和神經(jīng)痛不同模型評價了其鎮(zhèn)痛耐受現(xiàn)象,結(jié)果顯示:連續(xù)七天皮下注射嗎啡產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛耐受現(xiàn)象,而連續(xù)注射DN-9未出現(xiàn)明顯的鎮(zhèn)痛耐受現(xiàn)象,并且在嗎啡鎮(zhèn)痛耐受小鼠上,皮下注射DN-9仍能產(chǎn)生顯著的鎮(zhèn)痛活性。免疫組化結(jié)果也表明,與嗎啡不同,皮下注射DN-9不能引起脊髓中小膠質(zhì)細(xì)胞的明顯激活。進(jìn)一步,利用納洛酮誘導(dǎo)的阿片戒斷、條件位置偏愛、運動活性增強三種實驗評價了其成癮性,結(jié)果現(xiàn)象表明,與嗎啡相比,皮下注射DN-9的成癮性大幅降低,無明顯的運動增強現(xiàn)象。此外,在有效鎮(zhèn)痛劑量范圍內(nèi),皮下注射DN-9對小鼠胃腸運動的抑制作用較弱,明顯低于嗎啡的抑制作用。綜上所述,本論文研究表明:阿片/NPFF的多靶點分子DN-9不能穿透BBB,皮下注射DN-9在急性痛、神經(jīng)痛和炎癥痛模型中均表現(xiàn)出高效的鎮(zhèn)痛活性,該鎮(zhèn)痛作用是通過外周的μ和κ阿片受體介導(dǎo)的,并且皮下注射DN-9無鎮(zhèn)痛耐受現(xiàn)象,與嗎啡不產(chǎn)生交叉耐受。與嗎啡相比,外周注射DN-9的成癮和便秘等阿片的中樞副作用也明顯的減弱。因此,多靶點分子DN-9在高效、低副作用鎮(zhèn)痛新藥研究中具有潛在的應(yīng)用前景,并且其臨床應(yīng)用時可選用外周給藥途徑。

陶艷紅^[6]（2017）在《撥法對CCI大鼠脊髓抑制性神經(jīng)遞質(zhì)及炎性因子表達(dá)的影響研究》文中認(rèn)為[目的]從行為學(xué)和形態(tài)學(xué)角度觀察撥法對坐骨神經(jīng)慢性壓迫損傷（chronic constriction injury,CCI）模型大鼠痛覺過敏現(xiàn)象的影響,從中樞抑制性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT2A和GABA-B受體、促炎性細(xì)胞因子IL-1β,以及外周血清IL-1β表達(dá)的改變,探究撥法干預(yù)神經(jīng)病理性疼痛的起效機(jī)制,完善撥法促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)的機(jī)理。擬通過本次研究,為臨床運用撥法治療神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)疾病,改善及預(yù)防患者相關(guān)癥狀提供理論依據(jù)。[方法]以SD大鼠作為實驗動物,分為正常組、假手術(shù)組、撥法組以及模型組四組,后兩組通過對坐骨神經(jīng)環(huán)繞結(jié)扎造成CCI模型,撥法組大鼠用"按摩推拿手法模擬儀"模擬撥法,對大鼠進(jìn)行定性、定量的干預(yù),依次刺激患側(cè)殷門、承山和陽陵泉穴,每穴各刺激3min。干預(yù)結(jié)束后再通過以下三方面研究撥法對神經(jīng)病理性疼痛損傷感覺功能恢復(fù)的影響:1取造模后7天和撥法干預(yù)20天后為兩個時間點,通過光熱耐痛閾實驗觀察大鼠的熱痛覺過敏情況,探尋撥法減輕NPP痛覺過敏狀態(tài)的行為學(xué)依據(jù);采用光學(xué)顯微鏡觀察并分析坐骨神經(jīng)損傷處軸突、髓鞘等結(jié)構(gòu)的變化,探尋撥法促進(jìn)神經(jīng)病理性疼痛損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)依據(jù)。2通過免疫印跡雜交法（Western blot）,對L3-L5節(jié)段脊髓中5-HT2a受體進(jìn)行蛋白定量分析,采用免疫組織化學(xué)法對L3-L5節(jié)段脊髓背角中GABA-B受體進(jìn)行分析,探究撥法干預(yù)是否可以通過促進(jìn)脊髓中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT2A受體與GABA-B受體的表達(dá),減輕中樞去抑制作用,進(jìn)而抑制疼痛的發(fā)生與發(fā)展,有效地緩解NPP自發(fā)性疼痛的相關(guān)癥狀。3為探究撥法對于促進(jìn)炎性疼痛的機(jī)制,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）對大鼠血清中促炎性細(xì)胞因子IL-1β的含量進(jìn)行定量分析,采用免疫組織化學(xué)法對脊髓背角中IL-1β進(jìn)行定位的分析,探究撥法干預(yù)是否可以有效地減少脊髓背角與外周血清中炎癥因子的表達(dá),在中樞中減輕中樞敏化作用,在外周中減輕NPP的炎性癥狀,起到"消炎鎮(zhèn)痛"的作用。[結(jié)果]1行為學(xué)結(jié)果:造模后7天的撥法組與模型組的行為學(xué)表現(xiàn)相同（P>0.05）,二者與正常組相比,光熱耐痛閾閾值明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;假手術(shù)組與正常組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。撥法干預(yù)20天后,雖然模型組、撥法組與正常組相比,閾值均明顯下調(diào)（P<0.05）,但撥法組與模型組相比,閾值已有顯著性升高（P<0.05）。2形態(tài)學(xué)結(jié)果:造模后7天,正常組和假手術(shù)組可見神經(jīng)元軸突排列整齊,軸索及神經(jīng)髓鞘完好無損;模型組軸索崩解,髓鞘破碎,出現(xiàn)大量增生破裂的雪旺細(xì)胞。撥法干預(yù)20天后,模型組軸索、髓鞘稍有序,仍可見增生破裂的雪旺細(xì)胞;相比之下,撥法組的神經(jīng)纖維排列稍有序、軸索模糊可見,增生破裂的雪旺細(xì)胞減少。3脊髓中5-HT2A受體與GABA-B受體的表達(dá)結(jié)果:造模后7天的撥法組與模型組中,CCI模型大鼠脊髓5-HT2A受體與GABA-B受體蛋白的表達(dá)量與正常組相比表達(dá)明顯下降（P<0.05）;假手術(shù)組與正常組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。撥法干預(yù)20天后,撥法組大鼠脊髓中兩種受體的表達(dá)含量與正常組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）,但模型組與正常組相比,含量仍明顯下降（P<0.05）。4中樞及外周中IL-1β的表達(dá)結(jié)果:造模后7天的撥法組、模型組與正常組相比,脊髓背角及外周血清中IL-1β的表達(dá)均上升,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;假手術(shù)組與正常組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。撥法干預(yù)20天后,撥法組與模型組相比,已有顯著性下降（P<0.05）。本實驗研究結(jié)果顯示,經(jīng)過撥法干預(yù)20天后,雖然模型組、撥法組與正常組相比,脊髓背角及外周血清中IL-1β的表達(dá)依舊明顯上調(diào)（P<0.05）;但撥法組與模型組相比,已有顯著性下降（P<0.05）。[結(jié)論]1撥法可減輕CCI模型大鼠的痛敏狀態(tài),促進(jìn)損傷后坐骨神經(jīng)纖維髓鞘的再生,減輕雪旺細(xì)胞胞質(zhì)和線粒體的水腫,為撥法治療周圍神經(jīng)損傷類疾病提供了行為學(xué)和形態(tài)學(xué)證據(jù)。2撥法可上調(diào)CCI模型大鼠脊髓中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)5-HT2A受體與GABA-B受體的表達(dá),參與減輕中樞去抑制作用,減少傷害性感受信息的傳遞,緩解神經(jīng)病理性疼痛自發(fā)性疼痛的程度。3撥法可下調(diào)CCI模型大鼠脊髓以及血清中促炎性細(xì)胞因子IL-1β的表達(dá),在中樞抑制中樞敏化作用,在外周中減輕炎癥反應(yīng),可有效地起到"消炎鎮(zhèn)痛"的作用。4以上結(jié)論相互印證,說明經(jīng)過撥法干預(yù),可有效地改善神經(jīng)病理性疼痛的痛覺過敏狀態(tài),修復(fù)受損的神經(jīng)纖維,減輕異常疼痛的程度。

王俊英^[7]（2013）在《電針鎮(zhèn)痛的累積效應(yīng)與海馬神經(jīng)元可塑性及胞內(nèi)MAPK/ERK信號通路活動關(guān)系分析》文中認(rèn)為研究背景慢性疼痛包括慢性神經(jīng)病理性疼痛是臨床上常見的病癥,目前采用西醫(yī)藥治療的效果有限。針刺治療慢性痛具有較好的療效,但是其作用機(jī)制還不太清楚。海馬作為邊緣系統(tǒng)的一部分,除參與學(xué)習(xí)記憶、情緒活動等等的功能外,還參與疼痛信息的加工處理和針刺鎮(zhèn)痛的過程。我們前期在慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎造成的神經(jīng)痛（CCI）大鼠模型上的實驗結(jié)果表明,重復(fù)電針產(chǎn)生累積鎮(zhèn)痛效應(yīng)的同時,可顯著改善CCI大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元突觸間隙、突觸厚膜厚度、突觸活性帶長度明顯減小的變化,上調(diào)海馬鎮(zhèn)痛物質(zhì)乙酰膽堿及其M受體、γ-氨基丁酸受體等基因的表達(dá)變化密切相關(guān)。但是,針刺鎮(zhèn)痛累積效應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)分子機(jī)制尚不清楚。慢性神經(jīng)病理性疼痛是神經(jīng)可塑性的一種表達(dá)方式。神經(jīng)損傷產(chǎn)生的持續(xù)性劇烈的傷害性刺激傳入導(dǎo)致中樞敏化,該敏化反應(yīng)是活動-依賴性的功能可塑性的變化；在細(xì)胞水平上產(chǎn)生于細(xì)胞內(nèi)各種各樣的激酶級聯(lián)的激活進(jìn)和許多關(guān)鍵細(xì)胞膜受體、離子通道的磷酸化等的變化。MAPK（mitogen-activated protein kinase）/ERK （Extracellular signal-regulated kinases）級聯(lián)是細(xì)胞內(nèi)一個主要的生化信號通路,參與啟動和調(diào)節(jié)細(xì)胞外的各種刺激信息引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)許多信號通路（蛋白分子轉(zhuǎn)化）加工處理過程,包括神經(jīng)的可塑性、學(xué)習(xí)記憶等等,特別是,它還是痛覺過敏中樞敏化過程中細(xì)胞內(nèi)多個信號通路調(diào)節(jié)的總開關(guān)（master switch）。此外,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子（腦源性神經(jīng)生長因子brain derived neurophic factor, BDNF等）信號通路之間的相互作用（interplay）可調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對疼痛過敏條件下環(huán)境變化的適應(yīng)性反應(yīng)。為此,本研究在CCI大鼠模型上,采用行為學(xué)、電生理學(xué)、分子生物學(xué)等技術(shù),進(jìn)一步研究針刺累積鎮(zhèn)痛效應(yīng)與海馬BDNF/MAPK/ERK/CREB信號通路活動變化的關(guān)系。研究方法實驗一,行為學(xué)實驗：Wistar雄性大鼠80只,隨機(jī)分為正常對照組（n=16）,慢性壓迫性損傷（CCI）組（n=16）,CCI+EA2天（D）（n=16）,CCI+EAl周（W）（n=16）,CCI+EA2W （n=16）.采用坐骨神經(jīng)四道結(jié)扎造成CCI神經(jīng)痛模型,電針雙側(cè)“足三里”-“陽陵泉”穴,采用2/15Hz,1-2mA,每天1次,分別為不電針、電針2天、電針1周和電針2周,用熱輻射測痛儀測量熱痛閾,以手術(shù)側(cè)和假手術(shù)側(cè)的痛閾值的差值作為痛敏分?jǐn)?shù)來觀察動物的痛閾的變化。實驗二,生理學(xué)實驗：Wistar雄性大鼠43只,隨機(jī)分為正常對照組（n=15）,CCI組（n=13）,U0126組（n=15）,用腦立體定位儀固定大鼠頭部,刺激坐骨神經(jīng)作為傷害性刺激,刺激脈沖（間隔50ms,波寬0.3ms,電流強度5mA）,刺激10s,將微量注射器定位于側(cè)腦室（前囟后1.0mm,旁開1.3-2.0mm,深3.5mm）注射ERK抑制劑U0126,電極尖端定位于海馬CA1區(qū)（前囟后3.2-3.6mm,旁開2.5-3.0mm,深2.5-3.1mm）記錄各組大鼠海馬CA1痛相關(guān)神經(jīng)元的自發(fā)放電變化,以及電針和U026對自發(fā)放電的影響作用。實驗三,分子生物學(xué)實驗：上述行為學(xué)動物,正常對照組（n=8）,CCI組（n=8）,CCI+EA2D （n=8）, CCI+EA1W （n=8）, CCI+EA2W （n=8）,應(yīng)用real-time PCR方法檢測大鼠海馬部位BDNF, trk2PKA和pCREB的mRNA表達(dá)的變化；正常對照組（n=8）, CCI組（n=8）, CCI+EA2D （n=8）, CCI+EA1W （n=8）, CCI+EA2W （n=8）,應(yīng)用western blot方法檢測大鼠海馬部位Ras、Raf、MEK、p-ERK1/2、P38、CREB等的蛋白的表達(dá)變化。實驗結(jié)果1、累積電針對各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)的影響1.1CCI大鼠行為學(xué)表現(xiàn)術(shù)后24小時即可見手術(shù)組大鼠,手術(shù)側(cè)肢體（左側(cè)后肢）自發(fā)性抬起,足趾蜷曲、縮回、足掌極少平伸著地。手術(shù)后4d,可以觀察到有明顯的外翻和避免患肢著地,明顯的患肢跛行等的行為異常,但沒有出現(xiàn)托行。熱輻射輕微照射造成熱輻射痛,大鼠即長時間舔足,不停甩足,但沒有出現(xiàn)自殘現(xiàn)象。1.2累積電針對CCI大鼠的熱輻射痛閾的影響CCI大鼠在術(shù)后4天（3.15±1.05）,痛敏分?jǐn)?shù)明顯高于正常對照組（-0.063±0.23）（P<0.05）；在術(shù)后18天,也就是取材前,CCI對照組痛敏分?jǐn)?shù)（3.69±0.24）仍然明顯高于正常對照組（0.011±0.24,P<0.05）;CCI+EA2D組痛敏分?jǐn)?shù)（3.01±1.65）明顯高于正常對照組,明顯低于CCI對照組（P<0.05）:CCI+EA1W組痛敏分?jǐn)?shù)（2.34±1.85）明顯高于正常對照組（P<0.05）,明顯低于CCI對照組和CCI+EA2W組（P<0.05）：CCI+EA2W痛敏分?jǐn)?shù)（0.98±0.1）明顯低于CCI對照組、CCI+EA2D組（P<0.05）,與正常對照比較沒有顯著差異（P>0.05）,說明電針具有明顯鎮(zhèn)痛效應(yīng),且這種鎮(zhèn)痛效應(yīng)具有明顯的累積性。2、電針鎮(zhèn)痛對大鼠海馬痛相關(guān)神經(jīng)元自發(fā)放電的影響2.1痛刺激坐骨神經(jīng)及電針對正常動物自發(fā)放電的影響對正常大鼠海馬CAl區(qū)痛興奮性神經(jīng)元（n=17）分析可以看到,在痛刺激后單純痛刺激組放電頻率（134.53%±37）和痛刺激加電針組放電頻率（126.1%±20.05）都有明顯的增加,且單純痛刺激組與痛刺激加電針組沒有差異（P>0.05）；在痛刺激后2min,單純痛刺激組的放電頻率（168.61%±58.72）明顯多于痛刺激加電針組的放電頻率（121.76%±21.67,P<0.05）；在痛刺激后4min,單純痛刺激組放電頻率（145.08%±21.67）明顯多于痛刺激加電針組的放電頻率（108.65%±14.16,P<0.05）,痛刺激加電針組已經(jīng)基本恢復(fù)至痛刺激前水平。在痛刺激后6min單純痛刺激組的放電頻率仍然處于增加的水平（125.87%±23.92）,明顯高于痛刺激加電針組的放電頻率（105.72%±22.49,P<0.05）；在痛刺激后8min,10min,單純痛刺激組的放電頻率已接近恢復(fù)正常水平（116.86%±25.97,103.22%±6.03）,與痛刺激加電針組（102.14%±22.58,97.65%±14.4）相比,沒有明顯的差異（P>0.05）,但電針組的放電頻率仍然低于單純痛刺激組。這說明電針有抑制痛興奮神經(jīng)元自發(fā)放電增加的作用。對正常大鼠痛抑制神經(jīng)元（n=12）分析可以看到,在痛刺激完即刻,單純痛刺激組放電頻率減少（67.88%±14.71）,電針加痛刺激組放電頻率為痛刺激前的（93.35%±15.83）,兩組有顯著差異（P<0.05）；痛刺激后2min,單純痛刺激組的放電頻率（54.35%±19.37）明顯低于電針加痛刺激組（74.36%±16.62）；痛刺激后4min,單純痛刺激組的放電頻率（53.01%±19.37）仍然明顯低于電針加痛刺激組（87.37%±9.25,P<0.05）；從痛刺激后6min開始,單純痛刺激組的放電頻率開始增加（67.93%±26.47）,慢慢恢復(fù),至10min,已經(jīng)基本恢復(fù)至痛刺激前的放電頻率（95.06%±15.92）,而痛刺激加電針組痛刺激后6min已經(jīng)恢復(fù)至痛刺激前的放電頻率（100.59%±23.28）,在痛刺激后8min和l0min的放電頻率均與痛刺激前的放電頻率一致。而單純痛刺激組和痛刺激加電針組兩組在痛刺激后6min,8min,10min均有明顯的差異（P<0.05）。電針鎮(zhèn)痛有解除痛抑制神經(jīng)元放電減少的作用。2.2痛刺激坐骨神經(jīng)及電針對CCI動物自發(fā)放電的影響分析在CCI大鼠上記錄海馬痛興奮神經(jīng)元（n=14）可以觀察到,在單純痛刺激后海馬神經(jīng)元放電立刻顯著增加（204.24%±95.07）,與痛刺激加電針組（203.34%±127.56）無顯著差異（P>0.05）；在痛刺激后2min增加率達(dá)到了痛刺激前的193.54%±80.45,并且明顯高于痛刺激加電針組（133.41%±43.19）比較（P<0.05）；在痛刺激后6min,單純痛刺激組仍然處于放電頻率增多（188.82%±60.45）,而與痛刺激加電針組有顯著的差異（P<0.05）,痛刺激加電針組已經(jīng)基本恢復(fù)到痛刺激前的放電頻率（113.6%±64.66）,；在痛刺激后8min和10min,單純痛刺激組的放電頻率仍然明顯多于痛刺激前,分別為167.27%±55.60和148.82%±71.75,痛刺激加電針組基本在痛刺激前的狀態(tài)（108.81%±43.07,99.17%±27.21）,單純痛刺激組與痛刺激加電針組有顯著差異（P<0.05）。在CCI大鼠上記錄到的痛抑制神經(jīng)元（n=4）分析可以看到,在單純痛刺激后海馬神經(jīng)元放電立刻顯著減少（56.44%±17.35）,與痛刺激加電針組（83.21%±36.84）無顯著差異（P>0.05）；在痛刺激后2min仍然保持在痛刺激前的59.14%±22.72,并且與痛刺激加電針組（66.54%±27.32）比較無顯著差異（P>0.05）；在痛刺激后4min,單純痛刺激組（67.17%±12.17）和痛刺激加電針組（73.83%±39.81）仍然處于放電頻率減少的狀態(tài),并且兩組無差異（P>0.05）；在痛刺激后6min,單純痛刺激組減頻的影響仍然存在（59.82%±19.14）,而痛刺激加電針組放電頻率逐漸恢復(fù)（94.22%±41.45）；在痛刺激后8min和l0min,單純痛刺激組的放電頻率逐漸恢復(fù)分別為70.65%±20.62和90.75%±18.50,痛刺激加電針組基本在痛刺激前的狀態(tài)（90.75%±18.50,97.50%±11.28）,單純痛刺激組與痛刺激加電針組無顯著差異（P>0.05）。2.3正常大鼠與CCI大鼠痛刺激和電針對痛相關(guān)神經(jīng)元自發(fā)放電變化的比較正常大鼠與CCI大鼠海馬CA1痛興奮神經(jīng)元自發(fā)放電的比較,單純痛刺激后即可,痛刺激后2min,兩組無差異（P>0.05）；痛刺激后4min,6min,8min,CCI大鼠的痛興奮神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率明顯高于正常組（P<0.05）；痛刺激后10min,兩組無明顯差異（P>0.05）。兩組大鼠海馬CA1痛抑制神經(jīng)元的自發(fā)放電在單純痛刺激即可,痛刺激后2min,4min,6min,8min,10min都有明顯的差異（P<0.05）,這可能與CCI組痛抑制神經(jīng)元數(shù)量太少有關(guān)。比較正常大鼠和CCI大鼠痛刺激加電針后,痛興奮神經(jīng)元和痛抑制神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率除了痛刺激即刻,痛刺激后各個時間均無顯著的差異（P>0.05）。2.4給予ERK抑制劑U0126后對大鼠針刺的影響在大鼠海馬部位記錄到的痛興奮神經(jīng)元（n=9）自發(fā)放電的變化,我們可以觀察到,在痛刺激后即可,U0126組（128.72%±47.36）與單純電針組（126.1%±20.05）的放電無差異（P>0.05）,在給藥后即可即刺激后2min,U0126組的神經(jīng)元自發(fā)放電（190.52%±49.01）明顯高于單純電針組的自發(fā)放電（121.76%±11.41,P<0.05）,在痛刺激后4min,6min,8min, U0126組的神經(jīng)元自發(fā)放電均明顯高于單純電針組（P<0.05）,而在痛刺激后10min,U0126組的神經(jīng)元自發(fā)放電（118.34%±55.03）仍高于單純電針組（97.65%±15.4）,但無明顯差異（P>0.05）。在大鼠海馬部位記錄到的痛抑制神經(jīng)元（n=6）自發(fā)放電的變化,我們可以觀察到,在痛刺激后即刻,U0126組（100.6%±47.22）與單純電針組（93.35%±15.83）的放電無差異（P>0.05）,在給藥后即刻即痛刺激后2min,U0126組的神經(jīng)元自發(fā)放電（55.6%±29.67）低于單純電針組的自發(fā)放電（74.36%±16.62）,但無明顯差異（P>0.05）。在痛刺激后4min,U0126組的神經(jīng)元白發(fā)放電（49.67%±19.79）明顯低于單純電針組（87.37%±9.25,P<0.05）,在痛刺激后6min,8min, U0126組的神經(jīng)元自發(fā)放電（45.17%±21.05,42.9%±15.92）仍然明顯低于單純電針組（100.59%±23.28,98.06%±15.92,P<0.05）。在痛刺激后10min,U0126組的自發(fā)放電（40.43%±23.37）仍然沒有恢復(fù)至痛刺激前狀態(tài),仍然明顯低于單純電針組（103.45%±9.69,P<0.05）。3、電針鎮(zhèn)痛對CCI大鼠海馬ERK信號通路的影響3.1電針對BDNF及其受體表達(dá)的影響海馬的BDNF蛋白在CCI模型組（0.12±0.02）表達(dá)顯著低于正常對照組（0.40±0.06,p<0.05）。與CCI模型組比,海馬CCI+EA2D （0.25±0.02）, CCI+EAIW（0.24±0.03）及CCI+EA2W組（0.35±0.02）的BDNF表達(dá)均顯著高于CCI組（P<0.05）,其中CCI+EA2D, CCI+EAIW之間BDNF的表達(dá)無顯著差異（P>0.05）,而CCI+EA2W組的BDNF表達(dá)明顯高于CCI+EA2D和CCI+EA1W組（p<0.05）,顯示出兩周電針有累積效應(yīng)；與正常對照組（0.84±0.2）比較,CCI組（0.17±0.3）海馬trk mRNA的相對表達(dá)量顯著降低（p<0.05）,電針2天（0.13±0.08）、電針1周（0.15±0.06）和電針2周（0.36±0.11）后,海馬trkmRNA的相對表達(dá)量與CCI對照組比較沒有顯著差異（P>0.05）。3.2電針對MEK/ERK表達(dá)的影響3.2.1電針對各組大鼠Ras、Raf和MEK蛋白的影響CCI組海馬組織Ras蛋白（0.74±0.25）和C-Raf蛋白（0.84±0.15）的表達(dá)水平均明顯的低于正常對照組（1.25±0.38,1.15±0.09,p<0.05）。與CCI模型組比,海馬Ras蛋白和c-Raf蛋白的表達(dá)在CCI+EA2D （0.89±0.14,0.89±0.18）, CCI+EAIW （1±0.13,0.97±0.3）略有升高,但都沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.5）。與CCI組比較,CCI+EA2W組在海馬Ras蛋白（1.35±0.31）和c-Raf蛋白（1.12±0.24）的表達(dá)明顯上調(diào)（p<0.05）。CCI+EAIW組與CCI+EA2D組比較,海馬組織的Ras蛋白和c-Raf蛋白的表達(dá)沒有顯著差異（P>0.05）。海馬組織Ras蛋白的表達(dá)在CCI+EA2W組明顯高于CCI+EA2D和CCI+EAIW組（P<0.05）,而c-Raf蛋白在CCI+EA2W組的表達(dá)與CCI+EA2D和CCI+EAIW組沒有顯著的差異（P>0.05）而MEK蛋白在海馬組織的表達(dá),在正常對照組（1.08±0.07）和CCI模型組（0.99±0.11）,都沒有明顯的差異（P>0.05）；不同的電針時間,電針2天（0.98±0.12）、電針1周（1.02±0.15）和電針2周（1.09±0.09）各組對MEK蛋白也沒有明顯影響（P>0.05）。3.2.2電針對各組大鼠ERK1/2及p-ERK1/2CCI模型組ERKl/2mRNA與ERK1/2蛋白在海馬組織的表達(dá)與正常對照組比較,均沒有顯著的差異P>0.05)而電針2天、電針1周與CCI模型組比較,ERK1/2mRNA與ERK1/2蛋白在海馬組織的表達(dá)均沒有顯著差異（P>0.05）；CCI+EA2W組與CCI組,CCI+EA2D組,CCI+EA1W組比較,ERKl/2mRNA和ERK2蛋白的表達(dá)均沒有顯著的改變（P>0.05）；僅海馬ERK1蛋白在CCI+EA2W組的表達(dá)高于CCI組（P<0.05）。與對照組（1.1±0.06）比較,CCI組海馬組織磷酸化ERK蛋白（p-ERK）（0.43±0.06）表達(dá)水平均顯著降低（p<0.05）。與CCI模型組比,海馬p-ERK蛋白表達(dá)在CCI+EA2D組（0.63±0.03）明顯升高（p<0.05）；與CCI+EA2D, CCI+EA1W（0.07±0.05）海馬p-ERK蛋白表達(dá)沒有明顯的差異（P>0.05）,但CCI+EA1W組明顯高于CCI組（p<0.05）；CCI+EA2W海馬p-ERK的表達(dá)（0.83±0.45）明顯高于CCI組和CCI+EA2D組（p<0.05）,但與CCI+EA1W組無明顯的差異（P>0.05）。這說明針刺在上調(diào)p-ERK的表達(dá)具有一定的累積性。3.3累積電針對各組大鼠p38及p-p38表達(dá)的影響與正常對照組比較,海馬組織p38MAPKmRNA的表達(dá)在CCI組、CCI+EA2D組和CCI+EA1W組都有顯著降低（p<0.05）；電針2W組p38MAPKmRNA的表達(dá)與CCI,CCI+EA2D組比較都有明顯的上調(diào)（p<0.05）,但仍明顯低于正常對照組（p<0.05）。但是在蛋白的表達(dá)與mRNA的表達(dá)不是非常一致。與正常對照組比較,海馬組織P38MAPK蛋白在CCI組略有降低（p>0.05）；電針各組海馬組織p38MAPK蛋白的表達(dá)量也沒有明顯影響（P>0.05）。與正常對照組比較,海馬組織的p-p38MAPK蛋白的表達(dá)在CCI模型組略有下降,但差異不顯著,（p>0.05）; p-p38MAPK蛋白的表達(dá)在CCI+EA2D和CCI+EA1W組都略有升高（p>0.05）, p-p38MAPK蛋白在CCI+EA2W組與CCI組比較有較明顯的上調(diào)（P<0.05）。3.4電針鎮(zhèn)痛對CCI大鼠海馬PKA和CREB的影響海馬PKA mRNA在CCI模型組3.30±1.37的表達(dá)明顯高于正常對照組（1.62±0.50,P<0.05）；與CCI模型組比較,CCI+EA2D組PKA mRNA的表達(dá)（4.65±0.79）明顯上調(diào)（P<0.05）；CCI+EAIW組（4.30±0.49,P<0.05）PKA mRNA的表達(dá)明顯高于正常對照組和CCI模型組（P<0.05）,略低于CCI+EA2D組,但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；而CCI+EA2W組（3.38±0.73）PKAmRNA的明顯低于CCI+EA2D和CCI+EAIW組（P<0.05）,但仍明顯高于正常對照組（P<0.05）?？梢钥吹诫娽槍KA mRNA的調(diào)節(jié)作用呈現(xiàn)先上升后下調(diào)的作用。與正常對照組（23.98±12.94）比較,CCI模型組（59.77±27.35）海馬部位的CREB mRNA表達(dá)明顯上調(diào)P<0.05)海馬部位的CREB mRNA表達(dá)在CCI+EA2D組（44.25±24.64）明顯高于正常對照組（P<0.05）,與CCI組比較,略低但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與CCI組比較,CCI+EAIW組（32.46±16.91）和CCI+EA2W組（26.85±15.27）,海馬部位的CREB mRNA表達(dá)量明顯降低（P<0.05）,而與CCI+EA2D組比較,CCI+EA1W組和CCI+EA2W組海馬部位的CREB mRNA表達(dá)量略有降低,但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；CCI+EA2W組與CCI+EAIW組,CREB mRNA表達(dá)沒有顯著差異（P>0.05）。以上結(jié)果說明電針1周和電針2周明顯累積性下調(diào)了由于CCI導(dǎo)致的已經(jīng)升高的CREBmRNA。與正常對照組比較,海馬組織CREB和p-CREB蛋白在CCI組略有降低（p>0.05）；電針2天、1周、2周都有上調(diào),但均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論本研究從行為學(xué)、電生理和分子生物學(xué)的角度探討了電針鎮(zhèn)痛與海馬神經(jīng)元可塑性變化及海馬神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)ERK信號通路的關(guān)系。在CCI模型下,大鼠海馬神經(jīng)元的電活動發(fā)生異常的變化,電針可以緩解熱輻射痛敏的狀態(tài),且這種緩解作用與電針時間呈正比。電針的鎮(zhèn)痛作用可能與海馬內(nèi)神經(jīng)元的ERK信號通路的活性有關(guān),電針可能通過激活ERK信號通路來發(fā)揮鎮(zhèn)痛的目的。

朱小燕^[8]（2013）在《p300介導(dǎo)調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛因子COX-2的表觀遺傳學(xué)研究》文中認(rèn)為研究背景神經(jīng)病理性疼痛是指由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而直接造成的疼痛,主要以痛覺過敏、感覺異常、自發(fā)性疼痛等為特征。全世界約有3%的人正在遭受神經(jīng)病理性疼痛的困擾,然而由于目前人們對神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制的認(rèn)知仍然有限,且缺乏有效的治療手段,往往導(dǎo)致患者的病情得不到緩解,因此完善對神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制的認(rèn)知并探索有效的治療措施,一直是疼痛研究領(lǐng)域函待解決的難題。表觀遺傳學(xué)是指基于非基因序列改變所導(dǎo)致的基因表達(dá)水平變化,即通過DNA甲基化、組蛋白乙?；头蔷幋aRNA控制等方式對基因進(jìn)行調(diào)控。p300是一個具有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的轉(zhuǎn)錄輔激活因子,在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)有豐富的表達(dá)。目前的研究證實,p300與神經(jīng)細(xì)胞的激活有關(guān),它可以通過表觀遺傳學(xué)機(jī)制介導(dǎo)大量下游基因的轉(zhuǎn)錄。通過干預(yù)p300進(jìn)而調(diào)控下游疼痛基因的轉(zhuǎn)錄很可能成為治療神經(jīng)病理性疼痛的一個新途徑。研究目的構(gòu)建大鼠慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎（chronic constriction injury, CCI）模型,通過觀察各組大鼠的疼痛行為學(xué)改變,組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶p300在脊髓水平的動態(tài)變化以及在各類神經(jīng)細(xì)胞中的定位,探索p300在神經(jīng)病理性疼痛中的潛在作用；采用特異性的小發(fā)卡RNA （specific small hairpin RNA, shRNA）下調(diào)p300的表達(dá)和小分子抑制劑C646化學(xué)抑制p300的轉(zhuǎn)移酶活性,觀察CCI大鼠的疼痛行為學(xué)改變,并檢測下游疼痛相關(guān)因子環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase-2, COX-2）的表達(dá)水平變化,探索p300參與神經(jīng)病理性疼痛的潛在表觀遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制。研究方法1.將雄性Sprague-Dawley （SD）大鼠隨機(jī)分為正常組（naive組）、假手術(shù)組（sham組）和CCI組。測量各組大鼠的熱痛閾和機(jī)械性痛閾基礎(chǔ)值后,按照Bennett和Xie的方法建立大鼠左側(cè)CCI神經(jīng)病理性疼痛模型,sham組僅暴露坐骨神經(jīng)不行結(jié)扎。分別在術(shù)后第3、7、14、21天對各組大鼠行熱痛閾、機(jī)械痛閾檢測并取大鼠脊髓腰膨大部分保存,分別檢測p300的蛋白表達(dá)水平,在脊髓背角的形態(tài)表達(dá)變化和在各類神經(jīng)細(xì)胞中的定位,探索其在神經(jīng)病理性疼痛當(dāng)中的潛在作用。2.為了研究抑制p300后能否減輕神經(jīng)病理性疼痛,鞘內(nèi)置管成功的大鼠被隨機(jī)分為4組：假手術(shù)+生理鹽水組、CCI+生理鹽水組、CCI+慢病毒甾體陰性對照組（lentiviral vectors encoding small interfering RNA as the negative control, LV-NC）、CCI+’慢病毒甾體組（lentiviral vectors encoding small interfering RNA of p300gene, LV-shp300）。分別于CCI術(shù)后第7天鞘內(nèi)注射生理鹽水,生理鹽水,LV-NC和LV-shp30010μ1。同時在CCI術(shù)前,術(shù)后第3、5、7、10、12、14天測定各組大鼠的熱痛閡值和機(jī)械痛閾值,于術(shù)后第14天處死大鼠取脊髓腰膨大部分行慢病毒甾體轉(zhuǎn)染效率檢測、p300和COX-2的表達(dá)水平檢測,p300和COX-2相互作用的檢測等。3.選取鞘內(nèi)置管成功的大鼠隨機(jī)分為3組：CCI+二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）組、CCI+C37（646的類似對照物）組、CCI+646組。分別于CCI術(shù)后第7天起開始鞘內(nèi)注射10%DMSO,C37和C646（溶于10%DMSO）10μl。同時在CCI術(shù)前,術(shù)后第3、5、7、10、12、14天測定各組大鼠的熱痛閾值和機(jī)械痛閾值,于術(shù)后第14天處死大鼠取脊髓腰膨大部分行p300和COX-2的表達(dá)水平檢測,p300和COX-2相互作用的檢測等,進(jìn)一步探索p300的乙酰轉(zhuǎn)移酶活性對神經(jīng)病理性疼痛的影響。研究結(jié)果1.正常組、sham組和CCI組大鼠術(shù)前基礎(chǔ)熱痛閾值和機(jī)械性痛閾值無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。術(shù)后第3天,CCI組的熱痛閾和機(jī)械痛閾值較sham組和正常組明顯下調(diào)（P<0.05）,術(shù)后第7天趨于穩(wěn)定狀態(tài)（P<0.05）,一直持續(xù)至術(shù)后第21天（P<0.05）。western blot檢測結(jié)果表明p300脊髓表達(dá)水平從CCI術(shù)后第3天起至術(shù)后第21天都明顯升高（P<0.05vs.正常組和sham組）,其中CCI術(shù)后第14天達(dá)到最高值。免疫組化檢測示p300陽性細(xì)胞主要表達(dá)在灰質(zhì),在脊髓背角Ⅰ-Ⅲ層表達(dá)較致密；陽性顆粒主要位于細(xì)胞核,可見少量也位于細(xì)胞漿。在各組的表達(dá)趨勢類似于前面的western blot結(jié)果。免疫熒光雙標(biāo)表明p300陽性細(xì)胞主要定位于神經(jīng)元,在膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞未見明顯表達(dá)。2.在CCI術(shù)后第7天鞘內(nèi)給予慢病毒甾體LV-shp300后,LV-shp300組大鼠在給藥后第3天熱痛閾值和機(jī)械性痛閾值相比LV-NC組和CCI+生理鹽水組有所緩解,在給藥后第5天和第7天疼痛行為學(xué)顯著減輕（P<0.05）。p300和COX-2的mRNA、蛋白和組織表達(dá)水平檢測顯示CCI+生理鹽水組和LV-NC組相比假手術(shù)+生理鹽水組,p300和COX-2的表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）,而LV-shp300組相比CCI+生理鹽水組和LV-NC組明顯下調(diào)（P<0.05）。ChIP表明CCI+生理鹽水組和LV-NC組相比假手術(shù)+生理鹽水組p300在COX-2基因啟動子區(qū)招募增加（P<0.05）,而經(jīng)LV-shp300抑制表達(dá)后,p300在COX-2基因啟動子區(qū)招募水平明顯下降（P<0.05）。p300和COX-2免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果表明它們的陽性顆粒都共存于神經(jīng)元,進(jìn)一步證明它們之間的相互作用。HE染色表明鞘內(nèi)給予慢病毒甾體對大鼠脊髓組織無明顯損傷。3.在CCI術(shù)后第7天鞘內(nèi)給予p300乙酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑C646后,C646組大鼠在給藥后第3天熱痛閾值和機(jī)械性痛閾值有所緩解（P<0.05vs. DMSO組和C37組）,在給藥后第5天和第7天疼痛行為學(xué)顯著減輕（P<0.05）。COX-2的mRNA、蛋白和組織表達(dá)水平檢測顯示C646組相比DMSO組和C37組,COX-2的表達(dá)水平明顯受到抑制（P<0.05）。ChIP表明C646組相比DMSO組和C37組p300在COX-2基因啟動子區(qū)招募減少（P<0.05）。HE染色表明鞘內(nèi)給予C646或C37對大鼠脊髓組織無明顯損傷。結(jié)論1.p300主要在神經(jīng)元內(nèi)表達(dá),神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓p300表達(dá)增加。2.鞘內(nèi)注射LV-shp300可以緩解CCI誘導(dǎo)的疼痛行為學(xué)改變,調(diào)控并降低下游神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)因子COX-2的表達(dá),提示脊髓p300可能通過上調(diào)COX-2基因參與神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)病機(jī)制。3.鞘內(nèi)注射p300乙酰轉(zhuǎn)移酶特異性抑制劑C646可以緩解CCI誘導(dǎo)的疼痛行為學(xué)改變,調(diào)控并降低下游神經(jīng)病理性疼痛相關(guān)因子COX-2的表達(dá),提示p300的乙酰轉(zhuǎn)移酶表觀遺傳學(xué)調(diào)控在其所參與的大鼠神經(jīng)病理性疼痛發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。4.采用p300的乙酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑有望成為治療神經(jīng)病理性疼痛的潛在藥物。

魏小潔^[9]（2012）在《催產(chǎn)素對大鼠切割疼痛痛覺調(diào)制的作用及機(jī)制》文中研究指明目的觀察大鼠后足切割后中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)催產(chǎn)素的變化規(guī)律,腹腔、鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)給予外源性催產(chǎn)素對大鼠后足切割痛的痛覺調(diào)制作用,并用催產(chǎn)素受體阻斷劑atosiban和阿片類受體阻斷劑納洛酮預(yù)先阻斷相應(yīng)受體,研究中樞內(nèi)催產(chǎn)素痛覺調(diào)制作用與這兩種受體間的關(guān)系,探討其簡單作用機(jī)制。方法1.雄性SD大鼠隨機(jī)分為切割痛組和空白對照組,切割痛組按照Brennanl996年介紹的方法建立大鼠后足切割痛模型,空白對照組不做任何處理。切割痛組大鼠在切割后的30min、1h、3h、6h和24h取脊髓腰膨大和腦進(jìn)行免疫熒光檢測OT、OTR陽性細(xì)胞表達(dá),取背角和PVN行Western-blot以及RT-PCR測定,檢測OT. OTR轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)變化。2.雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組：腹腔注射組、鞘內(nèi)注射組、側(cè)腦室注射組；腹腔注射組分為100μl生理鹽水、0.5nmol、1nmol和2.5nmol四個劑量組,鞘內(nèi)注射組和側(cè)腦室注射組分為10μl（5μl）生理鹽水、0.05nmol、0.1nmol和口0.25nmol四個劑量組。腹腔注射組大鼠在注射后的30min、1h、3h、6h、12h、24h,鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)注射大鼠在注射后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進(jìn)行機(jī)械性痛閾測定。3.雄性SD大鼠隨機(jī)分為2大組：鞘內(nèi)注射組、側(cè)腦室注射組。每個大組又分為如下小組：①生理鹽水+OT0.05nmol組；②生理鹽水+OT0.1nmol組；③生理鹽水+OT0.25nmol組；④tosiban1.0nmol+OT0.05nmol組；⑤atosiban1.0nmol+OT0.1nmol組；⑥atosiban1.0nmol+OT0.25nmol組；⑦納洛酮0.5μg+OT0.05nmol組；⑧納洛酮0.5μg+OT0.1nmol組；⑨納洛酮0.5μg+OT0.25nmol組。各組大鼠在切割給藥后的10min、30min、1h、3h、6h、12h、24h進(jìn)行機(jī)械性痛閾測定,檢測其變化情況。結(jié)果1.切割痛大鼠與空白對照組大鼠相比,在切割后的30min開始持續(xù)至至少6h PVN內(nèi)的OT陽性細(xì)胞數(shù)量明顯下降,WB顯示在該時間段內(nèi)PVN內(nèi)的OT蛋白總量明顯下降,而mRNA卻在切割后的30min至1h內(nèi)升高；脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內(nèi)OT陽性細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)量在切割后的30min至6h開始上升,而RT-PCR顯示在脊髓腰膨大處無OT m RNA出現(xiàn)；無論切割前后PVN內(nèi)均未見OTR的表達(dá),而脊髓腰膨大背角Ⅰ、Ⅱ板層內(nèi)OTR在切割后30min至至少12h表達(dá)上升。2.腹腔注射0.5nmol、1nmol或2.5nmolOT對大鼠切割痛足機(jī)械痛閾無影響；側(cè)腦室內(nèi)注射0.05nmol、0.1nmol或0..25nmolOT對大鼠切割痛足機(jī)械痛閾有劑量依賴性地提高,其持續(xù)時間從給藥后10min至6h；鞘內(nèi)給藥同樣會使切割痛大鼠產(chǎn)生劑量依賴性機(jī)械痛閾增強；側(cè)腦室和鞘內(nèi)注射OT對切割痛的鎮(zhèn)痛作用均有封頂作用。3.鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)預(yù)注射atosiban都可以阻斷OT對切割痛的鎮(zhèn)痛作用,且增加OT劑量并不能逆轉(zhuǎn)該效應(yīng)；而鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)預(yù)注射納洛酮可以部分阻斷OT的鎮(zhèn)痛作用,OT劑量增加時該阻斷作用減弱,在OT劑量達(dá)到0.25nmol時其鎮(zhèn)痛作用再次出現(xiàn)。結(jié)論1.切割痛大鼠PVN內(nèi)OT轉(zhuǎn)錄增加而蛋白表達(dá)減少,脊髓內(nèi)OT雖無轉(zhuǎn)錄但蛋白表達(dá)增加,表明切割后PVN內(nèi)合成的OT轉(zhuǎn)運至脊髓和（或）其他位置發(fā)揮痛覺調(diào)制作用。2.無論切割與否大鼠PVN內(nèi)OTR表達(dá)均陰性,而切割后腰膨大背角淺層內(nèi)的OTR表達(dá)增加,表明PVN本身痛覺調(diào)制作用不大,而脊髓可能更為重要。3.腹腔注射OT對切割痛無鎮(zhèn)痛作用,而鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)注射OT均能產(chǎn)生劑量依賴的鎮(zhèn)痛作用。4.鞘內(nèi)和側(cè)腦室內(nèi)預(yù)注射atosiban對能完全阻斷OT的鎮(zhèn)痛作用,而預(yù)注射納洛酮則不能完全阻斷。表明OT的鎮(zhèn)痛作用主要通過OTR發(fā)揮,同時部分作用于阿片受體。

劉希江^[10]（2012）在《靶向抑制延髓下行易化作用在大鼠骨癌痛中的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其機(jī)制研究》文中進(jìn)行了進(jìn)一步梳理研究背景癌癥可表現(xiàn)出生理和心理的多種癥狀,但是癌癥引起的疼痛往往是關(guān)鍵癥狀之一。未經(jīng)治療的疼痛可嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,并能影響癌癥患者對治療的耐受程度從而影響癌癥患者的預(yù)后。隨著癌癥診療技術(shù)的進(jìn)步,癌癥患者生存時間明顯延長,緩解癌癥患者的疼痛,提高其生活質(zhì)量成為突出問題。據(jù)估計癌癥痛的患病率在新診斷出的癌癥患者中為25%,在積極治療的癌癥患者中為33%,而在晚期癌癥患者中癌癥痛的患病率超過75%。由于現(xiàn)有臨床治療癌癥痛措施的局限性,約45%的癌癥患者的疼痛未得到有效控制。因而,對癌痛機(jī)制和鎮(zhèn)痛手段的全面深入研究顯得尤為重要。癌癥導(dǎo)致的骨痛（簡稱骨癌痛）是癌癥患者最常見的一種疼痛,也是腫瘤發(fā)生骨轉(zhuǎn)移時最常見的癥狀之一。大約三分之一的晚期癌癥患者會發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,而在乳腺癌和前列腺癌晚期患者中超過70%的患者發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,骨轉(zhuǎn)移也是癌癥痛最常見的原因。骨癌痛是癌癥痛的典型代表,其主要表現(xiàn)是：持續(xù)的進(jìn)行性的背景痛（Ongoing pain）,爆發(fā)痛（Breakthrough pain）、痛覺過敏（Hyperalgesia）和痛覺超敏（Allodynia）。目前,臨床上尚缺乏有效且副作用小的骨癌痛治療措施,未合理控制的疼痛不但嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量而且顯著縮短生存期,這與對骨癌痛的發(fā)病機(jī)制缺乏了解有關(guān)。骨癌痛發(fā)生機(jī)制復(fù)雜,局部浸潤的腫瘤細(xì)胞、炎癥細(xì)胞及破/成骨細(xì)胞等產(chǎn)生的各種生物學(xué)活性物質(zhì),誘導(dǎo)外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的敏化,共同參與了骨癌痛的形成。并且,不同類型和不同階段的腫瘤以及不同的腫瘤生長部位,均可影響骨癌痛的發(fā)生發(fā)展。近來研究表明,中樞神經(jīng)下行易化系統(tǒng)激活對慢性疼痛的維持起重要作用。延髓頭端腹內(nèi)側(cè)區(qū)（rostral ventromedial medulla, RVM）是下行痛覺調(diào)控系統(tǒng)的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。RVM主要由中縫大核、網(wǎng)狀巨細(xì)胞核α部和腹側(cè)網(wǎng)狀巨細(xì)胞核等神經(jīng)核團(tuán)組成,是整合脊髓上中樞痛覺調(diào)控信息并下行傳遞至脊髓的中繼站。RVM內(nèi)50%左右的神經(jīng)元為5-羥色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）能神經(jīng)元,其中含有5-HT生物合成的限速酶--色氨酸羥化酶（Tryptophan hydroxylase, TPH）,其產(chǎn)生的5-HT可下行投射到脊髓背角,是下行調(diào)控系統(tǒng)參與脊髓疼痛處理的主要神經(jīng)遞質(zhì),來自RVM區(qū)的下行5-HT對脊髓的痛覺信息處理起重要作用。同時,在神經(jīng)病理性痛等慢性疼痛當(dāng)中,RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化并參與慢性疼痛的形成。但是,在骨癌痛中來自RVM區(qū)并下行投射到脊髓背角的5-HT對脊髓痛覺信息處理的具體作用以及骨癌痛中RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞是否參與下行痛覺調(diào)控均尚不清楚。以RVM為治療靶點研究癌痛治療策略可不受腫瘤生長、轉(zhuǎn)移部位的限制,還可有效控制癌癥治療引起的多發(fā)性神經(jīng)病理性痛?；诖?本研究擬通過探討從RVM區(qū)投射到脊髓的5-HT能下行通路以及RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞在骨癌痛大鼠疼痛機(jī)制中的作用,以期尋找癌痛治療的新靶點和新的治療策略。研究方法與結(jié)果1.骨癌痛大鼠脊髓背角5-羥色胺含量的變化及意義方法：實驗一（骨癌痛大鼠脊髓背角5-HT含量與其痛閾的相關(guān)性分析）：雌性SD大鼠57只,隨機(jī)分為3組,每組19只。1)正常對照組（Naive）:不作任何處理;2)假手術(shù)組（Sham）:于右側(cè)脛骨上段骨髓腔注射D-hank’s液10μl；3)骨癌痛組（CIBP）:于右側(cè)脛骨上段骨髓腔接種10μl（約3×104）Walker256大鼠乳腺癌細(xì)胞懸液制備脛骨癌痛模型。實驗二（鞘內(nèi)注射5-羥色胺能選擇性神經(jīng)毒素5,7-DHT對骨癌痛大鼠痛閾的影響）：雌性SD大鼠56只,隨機(jī)分為4組,每組14只。1)Sham-Saline組：假手術(shù)后第10天鞘內(nèi)置管,第14天鞘內(nèi)給生理鹽水（20μl）；2)Sham-5,7-DHT組：假手術(shù)后第10天鞘內(nèi)置管,第14天鞘內(nèi)給5,7-DHT （60μg）; 3) CIBP-Saline組：造模后第10天鞘內(nèi)置管,第14天鞘內(nèi)給生理鹽水（20μl）；4)CIBP-5,7-DHT組：造模后第10天鞘內(nèi)置管,第14天鞘內(nèi)給5,7-DHT（60μg）采用痛覺行為學(xué)和組織病理學(xué)方法鑒定模型構(gòu)建成功。分別于術(shù)后第7、14和21天取各組大鼠脊髓背角組織,采用高效液相色譜法檢測脊髓背角組織中5-HT含量,并與相應(yīng)時點的機(jī)械縮爪閾值和縮爪持續(xù)時間做雙變量相關(guān)分析。檢測鞘內(nèi)給予5,7-DHT對大鼠痛覺行為學(xué)的影響。采用高效液相色譜分析和免疫熒光染色檢測5,7-DHT對脊髓背角5-羥色胺能神經(jīng)的毀損效應(yīng)。結(jié)果：腫瘤細(xì)胞接種后7～21 d大鼠機(jī)械縮爪閾值明顯降低,縮爪持續(xù)時間延長,移動誘發(fā)痛評分進(jìn)行性升高（P<0.05）。光鏡下腫瘤注射部位可見大量腫瘤細(xì)胞浸潤,骨組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞,表明模型制備成功。與對照組相比,骨癌痛組大鼠接種后7～21d時機(jī)械痛閾降低,接種后7、14和21d時脊髓背角5-HT含量升高,且5-HT含量與機(jī)械痛閾呈顯著相關(guān)（P<0.05）。鞘內(nèi)注射5,7-DHT后可顯著降低脊髓背角中5-HT含量,并能顯著緩解骨癌痛大鼠的疼痛行為。2.靶向抑制RVM區(qū)5-羥色胺能下行易化作用在骨癌痛大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)評價方法：雌性SD大鼠108只,隨機(jī)分為4組,每組27只。1)Sham-Saline組：假手術(shù)后第14天RVM區(qū)給生理鹽水（0.5μl）；2)Sham-PCPA組：假手術(shù)后第14天RVM區(qū)給PCPA（50μg）；3)CIBP-Saline組：造模后第14天RVM區(qū)給生理鹽水（0.5μl）;4)CIBP-PCPA組：造模后第14天RVM區(qū)給PCPA（50μg）.檢測各組大鼠不同時點的機(jī)械縮爪閾值、縮爪持續(xù)時間和移動誘發(fā)痛評分。免疫印跡法檢測RVM區(qū)TPH的表達(dá)。高效液相色譜法檢測RVM給藥后不同時點脊髓背角5-HT含量。應(yīng)用免疫熒光染色法檢測RVM區(qū)和脊髓背角5-HT的表達(dá)。結(jié)果：色氨酸羥化酶選擇性抑制劑PCPA可下調(diào)RVM區(qū)5-HT的表達(dá),并可降低大鼠脊髓背角的5-HT含量（P<0.05）。行為學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),RVM區(qū)注射PCPA后大鼠觸誘發(fā)痛閾值升高,縮爪持續(xù)時間縮短且移動誘發(fā)痛評分減低（P<0.05）。免疫熒光染色結(jié)果顯示RVM區(qū)注射PCPA可降低脊髓背角5-HT含量。3.RVM區(qū)5-羥色胺能下行易化作用參與大鼠骨癌痛的機(jī)制研究方法：實驗一：雌性SD大鼠48只,隨機(jī)分為4組,每組12只。1)Sham-DMSO組：假手術(shù)后第14天RVM區(qū)注射DMSO（1μl）；2)Sham-SB203580:假手術(shù)后第14天RVM區(qū)注射SB203580（50μg）；3)CIBP-DMSO組：造模后第14天RVM區(qū)注射DMSO （1μl）; 4) CIBP-SB203580組：造模后第14天RVM區(qū)注射SB203580（50μg）。檢測各組大鼠不同時點的痛閾。免疫印跡法檢測RVM區(qū)給藥后TPH的表達(dá)。高效液相色譜法分析RVM區(qū)給藥后脊髓背角5-HT含量。應(yīng)用免疫熒光染色法分別檢測RVM區(qū)TPH和脊髓背角5-HT的表達(dá)。實驗二：雌性SD大鼠12只,隨機(jī)分為2組：正常對照組（Naive組,n=3）和骨癌痛組（CIBP組,n=9）。分別于模型構(gòu)建后第7、14和21d處死大鼠,取脊髓腰膨大組織進(jìn)行基因芯片檢測5-HT受體的表達(dá)。結(jié)果：骨癌痛大鼠RVM區(qū)注射p38MAPK選擇性抑制劑SB203580后機(jī)械縮爪閾值顯著升高,縮爪持續(xù)時間明顯縮短且移動誘發(fā)痛評分顯著降低（P<0.05）。免疫蛋白印跡檢測發(fā)現(xiàn),RVM區(qū)注射SB203580在產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的同時顯著抑制了RVM區(qū)色氨酸羥化酶（TPH）的蛋白表達(dá)（P<0.05）。免疫熒光染色顯示RVM區(qū)注射SB203580后RVM區(qū)TPH染色陽性神經(jīng)元減少。高效液相色譜分析結(jié)果顯示脊髓背角5-HT的水平降低（P<0.05）。基因芯片結(jié)果顯示,骨癌痛大鼠脊髓中參與5-HT易化疼痛作用和抑制疼痛作用的受體表達(dá)均上調(diào),但參與易化作用的受體表達(dá)高于抑制作用的受體。4.RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化參與大鼠骨癌痛的機(jī)制研究方法：雌性SD大鼠99只,隨機(jī)分為7組：1)正常對照組（Naive,n=6）:不做任何處理；2)假手術(shù)組（Sham,n=18）:于右后肢脛骨上段骨髓腔注射D-hank’s液10μl；3)骨癌痛組（CIBP,n=18）:于右后肢脛骨上段骨髓腔注射walker256乳腺癌細(xì)胞懸液10μl（3×104個）；4)假手術(shù)加生理鹽水組（sham/NS,n=15）:假手術(shù)后第10天RVM注射生理鹽水0.5μl；5)骨癌痛加生理鹽水組（CIBP/NS,n=15）:骨癌痛造模后第10天RVM注射生理鹽水0.5μl；6)骨癌痛加米諾環(huán)素組（CIBP/Minocycline,n=15）:骨癌痛造模后第10天RVM注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素0.5μl（25μg）；7)骨癌痛加氟代檸檬酸組（CIBP/Fluorocitrate,n=12）:骨癌痛模型構(gòu)建后第10天RVM注射星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑氟代檸檬酸1μg。應(yīng)用影像學(xué)方法檢測骨癌痛大鼠脛骨骨質(zhì)的破壞情況。熒光定量PCR法檢測RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化標(biāo)志物mRNA表達(dá)的變化。Western-blot和免疫熒光染色檢測不同藥物處理對RVM膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。痛覺行為學(xué)檢測不同藥物處理后大鼠痛閾的改變。熒光定量PCR法檢測RVM給予小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑后促炎性介質(zhì)IL-1β、IL-6、TNF-α和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)。結(jié)果：骨癌痛大鼠RVM區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞顯著活化,且小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎性介質(zhì)IL-1β、IL-6、TNF-α和BDNF表達(dá)升高（P<0.05）。RVM區(qū)注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑和星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑可分別抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化,并能呈時間依賴性的緩解骨癌痛大鼠的疼痛。RVM區(qū)注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑可逆轉(zhuǎn)小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎性介質(zhì)的高表達(dá),并能有效地緩解骨癌痛大鼠的疼痛。5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；兩組數(shù)據(jù)之間比較采用t檢驗,多組數(shù)據(jù)之間比較采用方差分析（ANOVA）,分析后post-hoc檢驗采用Student-Newman-Keuls test,脊髓背角5-HT含量與機(jī)械痛閾進(jìn)行雙變量相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。研究總結(jié)一、主要研究結(jié)果1.骨癌痛大鼠脊髓背角5-HT含量增加,且與大鼠疼痛程度呈正相關(guān)關(guān)系。鞘內(nèi)注射5,7-DHT選擇性消除脊髓5-HT可顯著緩解骨癌痛大鼠的疼痛。脊髓背角5-HT參與了大鼠骨癌痛的維持。2.骨癌痛大鼠RVM區(qū)向脊髓背角的5-HT投射增多,并參與了骨癌痛的下行易化作用。3.骨癌痛大鼠RVM區(qū)TPH的表達(dá)增高,5-HT合成和向脊髓投射增加并起下行易化作用,這一過程與骨癌痛中RVM區(qū)p38MAPK通路激活有關(guān)。骨癌痛大鼠脊髓背角中與5-HT下行痛覺易化作用和抑制作用有關(guān)的受體表達(dá)均增高,但是參與易化作用的受體表達(dá)水平高于抑制性受體,5-HT受體的抑制和易化疼痛的平衡向易化疼痛的方向偏移。4.骨癌痛大鼠RVM區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎性介質(zhì)表達(dá)上調(diào)。RVM區(qū)注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑和星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑可分別抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化,并能呈時間依賴性的緩解骨癌痛大鼠的疼痛。RVM區(qū)注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素可逆轉(zhuǎn)膠質(zhì)細(xì)胞釋放的促炎性介質(zhì)的高表達(dá),并能有效地緩解骨癌痛大鼠的痛覺超敏。二、研究結(jié)論].RVM區(qū)5-羥色胺能下行易化作用參與了大鼠骨癌痛的維持,其機(jī)制包括：（1）骨癌痛中RVM區(qū)p38MAPK通路激活并促進(jìn)了該區(qū)內(nèi)色氨酸羥化酶（TPH）的表達(dá)增高,促使RVM區(qū)5-羥色胺能神經(jīng)元合成并向脊髓投射的5-HT增加。（2）脊髓中5-HT受體的抑制和易化疼痛的平衡向易化疼痛的方向偏移。2.RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化參與了大鼠骨癌痛的維持,其機(jī)制與膠質(zhì)細(xì)胞活化并釋放下游促炎性介質(zhì)增強下行痛覺易化作用有關(guān)。三、創(chuàng)新之處1.本研究首次證實RVM區(qū)5-羥色胺能下行通路參與了大鼠骨癌痛的下行痛覺易化作用,其機(jī)制與5-HT下行投射增多和脊髓5-HT受體向易化疼痛的方向偏移有關(guān)。2.本研究首次證實RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化參與了大鼠骨癌痛的維持,其機(jī)制與膠質(zhì)細(xì)胞激活并釋放下游促炎性介質(zhì)增強下行痛覺易化作用有關(guān)。四、展望1.本研究中骨癌痛大鼠脊髓5-HT受體表達(dá)發(fā)生不同程度的改變,使得脊髓5-HT呈現(xiàn)易化疼痛的作用,但由于5-HT受體家族成員眾多,每種受體在不同疼痛狀態(tài)中的定位和功能仍需深入研究,以獲得新的疼痛治療靶點。2.本研究中RVM區(qū)膠質(zhì)細(xì)胞活化參與了大鼠骨癌痛的下行易化,5-HT及其受體與膠質(zhì)細(xì)胞之間存在聯(lián)系,深入研究不同疼痛狀態(tài)中二者之間的關(guān)系,有望為疼痛治療提供新途徑。

二、持續(xù)性外周炎癥引起脊髓背角淺層nociceptin/or phanin放射性結(jié)合位點增加(英文)（論文開題報告）

（1）論文研究背景及目的

此處內(nèi)容要求：

首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。

寫法范例：

本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。

（2）本文研究方法

調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。

觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。

實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。

文獻(xiàn)研究法：通過調(diào)查文獻(xiàn)來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。

實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。

定性分析法：對研究對象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。

定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進(jìn)一步精確化。

跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行研究。

功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。

模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。

三、持續(xù)性外周炎癥引起脊髓背角淺層nociceptin/or phanin放射性結(jié)合位點增加(英文)（論文提綱范文）

（1）小膠質(zhì)細(xì)胞P2X7受體介導(dǎo)慢性偏頭痛中樞敏化及其機(jī)制研究（論文提綱范文）

（2）褪黑素經(jīng)MT2受體抑制中樞敏感化治療神經(jīng)根性疼痛（論文提綱范文）

（3）TLR4/NF-κB通路促進(jìn)大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)參與神經(jīng)根性疼痛的作用及機(jī)制（論文提綱范文）

（4）多位點改造的內(nèi)嗎啡肽類似物設(shè)計合成與活性研究（論文提綱范文）

（5）阿片/神經(jīng)肽FF受體的多靶點分子DN-9：外周鎮(zhèn)痛活性及其阿片樣副作用評價（論文提綱范文）

（6）撥法對CCI大鼠脊髓抑制性神經(jīng)遞質(zhì)及炎性因子表達(dá)的影響研究（論文提綱范文）

（7）電針鎮(zhèn)痛的累積效應(yīng)與海馬神經(jīng)元可塑性及胞內(nèi)MAPK/ERK信號通路活動關(guān)系分析（論文提綱范文）

（8）p300介導(dǎo)調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛因子COX-2的表觀遺傳學(xué)研究（論文提綱范文）

（9）催產(chǎn)素對大鼠切割疼痛痛覺調(diào)制的作用及機(jī)制（論文提綱范文）

（10）靶向抑制延髓下行易化作用在大鼠骨癌痛中的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其機(jī)制研究（論文提綱范文）

四、持續(xù)性外周炎癥引起脊髓背角淺層nociceptin/or phanin放射性結(jié)合位點增加(英文)（論文參考文獻(xiàn)）

• [1]小膠質(zhì)細(xì)胞P2X7受體介導(dǎo)慢性偏頭痛中樞敏化及其機(jī)制研究[D]. 蔣莉. 重慶醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
• [2]褪黑素經(jīng)MT2受體抑制中樞敏感化治療神經(jīng)根性疼痛[D]. 朱麗蓉. 廣州醫(yī)科大學(xué), 2021(02)
• [3]TLR4/NF-κB通路促進(jìn)大鼠脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化和炎癥反應(yīng)參與神經(jīng)根性疼痛的作用及機(jī)制[D]. 胡育銘. 廣州醫(yī)科大學(xué), 2020(01)
• [4]多位點改造的內(nèi)嗎啡肽類似物設(shè)計合成與活性研究[D]. 張向輝. 蘭州大學(xué), 2019(08)
• [5]阿片/神經(jīng)肽FF受體的多靶點分子DN-9：外周鎮(zhèn)痛活性及其阿片樣副作用評價[D]. 石學(xué)睿. 蘭州大學(xué), 2019(08)
• [6]撥法對CCI大鼠脊髓抑制性神經(jīng)遞質(zhì)及炎性因子表達(dá)的影響研究[D]. 陶艷紅. 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2017(08)
• [7]電針鎮(zhèn)痛的累積效應(yīng)與海馬神經(jīng)元可塑性及胞內(nèi)MAPK/ERK信號通路活動關(guān)系分析[D]. 王俊英. 中國中醫(yī)科學(xué)院, 2013(11)
• [8]p300介導(dǎo)調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛因子COX-2的表觀遺傳學(xué)研究[D]. 朱小燕. 中南大學(xué), 2013(06)
• [9]催產(chǎn)素對大鼠切割疼痛痛覺調(diào)制的作用及機(jī)制[D]. 魏小潔. 中南大學(xué), 2012(12)
• [10]靶向抑制延髓下行易化作用在大鼠骨癌痛中的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及其機(jī)制研究[D]. 劉希江. 華中科技大學(xué), 2012(09)

標(biāo)簽：小膠質(zhì)細(xì)胞論文;  脊髓論文;  神經(jīng)元細(xì)胞論文;  科學(xué)論文;  海馬論文;