一、豬卵母細胞電激活參數的研究（論文文獻綜述）
劉聰[1]（2017）在《鈣敏感受體參與豬卵母細胞成熟、激活及胚胎發(fā)育的研究》文中認為卵母細胞內外鈣離子均在雌性生殖活動中發(fā)揮著非常重要的作用。細胞膜上鈣離子受體（Calcium sensing receptor,CASR）的發(fā)現開辟了以細胞外游離鈣離子作為一級信使調控細胞生殖活動的新的研究領域。本學位論文旨在探究CASR在豬卵母細胞體外成熟、激活及胚胎發(fā)育過程中的生理作用。首先,對CASR在豬卵母細胞體外成熟中的作用進行研究。通過Western blot和免疫熒光實驗表明在成熟過程中添加促性腺激素,會上調卵母細胞的CASR表達水平和CASR的皮質區(qū)分布,但是添加表皮生長因子（Epidermal Growth Factor,EGF）卻無此現象。在含有激素（添加單獨卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH）;黃體生成素（Luteinizing hormone,LH）或者二者同時）的成熟液中添加CASR的激動劑NPS R-568會顯著提高卵母細胞的核成熟率（73.80±1.55 vs 65.20±1.15;67.57±2.73 vs 59.00±1.00;79.05±0.76 vs 66.15±0.71;P<0.05）;而添加 CASR 的抑制劑NPS2390則會抑制核成熟。在卵母細胞成熟過程中添加CASR的激動劑NPS R-568后,會顯著提高卵母細胞孤雌激活后的囊胚發(fā)生率（49.67±0.68 vs 38.14±1.56;p<0.05）。Western Blot結果顯示,成熟過程中NPS R-568的添加會進一步提高卵母細胞MAPK3/1的活性。結果表明,CASR作為一個受促性腺激素調控的因子,通過MAPK3/1通路調控了豬卵母細胞成熟。其次,對CASR在豬的卵母細胞激活過程中的作用進行研究。Western Blot結果發(fā)現,在卵母細胞激活過程中細胞內CASR的表達明顯上調;在培養(yǎng)液中添加CASR激動劑NPS R-568能夠顯著地促進卵母細胞激活后的原核形成率,表明CASR參與了卵母細胞激活過程。通過添加細胞內Ca2+的螯合劑BAPTA-AM,驗證了 CASR在卵母細胞激活中的作用是依賴細胞內Ca2+來實現的。在卵母細胞激活過程中CASR的激活能顯著地提高CaMKⅡ的磷酸化水平,而添加CaMKⅡ的抑制劑KN-93則會抑制CASR的表達。結果表明,在CASR與CaMKⅡ之間存在相互調節(jié)作用,二者共同參與調控了卵母細胞的激活過程。最后,對CASR在受精和早期胚胎發(fā)育過程中的作用進行研究。通過Reversed transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）發(fā)現,CASR在豬配子和不同發(fā)育階段的胚胎上均有表達。通過在體外受精及胚胎發(fā)育過程中的添加CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390處理,發(fā)現CASR在促進精子穿膜和阻止多精受精以及促進胚胎發(fā)育發(fā)面都發(fā)揮了正向調節(jié)作用。結果表明,細胞外鈣離子的細胞膜上受體CASR作為其效應因子調控了豬體外受精和早期胚胎發(fā)育過程。綜上所述,在豬卵母細胞成熟過程中,CASR作為一個受促性腺激素調控的因子,通過MAPK3/1信號通路調控了卵母細胞成熟。在卵母細胞的激活過程中,CASR與CaMKⅡ發(fā)生相互調節(jié)作用,協(xié)同調控了卵母細胞的激活過程。在體外受精和胚胎發(fā)育過程中,CASR作為細胞外鈣離子在卵母細胞膜上的效應因子調控了豬體外受精過程和早期胚胎發(fā)育。
劉帥[2]（2015）在《豬卵胞質注射及單精子胞質內注射介導的轉基因方法研究》文中進行了進一步梳理卵胞質注射轉基因（CI-MGT）具有操作簡單、胚胎損傷小和胚胎體外停留時間短等優(yōu)點,結合體內受精胚胎和高效基因編輯技術,最近被廣泛應用于轉基因動物生產中。單精子胞質內注射轉基因（ICSI-MGT）適于大片段外源基因轉移,并能有效解決豬體外受精胚胎多精子受精等問題,特別適用于轉基因豬的生產。廣西地處高溫高濕的亞熱帶地區(qū),為優(yōu)化此種環(huán)境下豬胚胎和轉基因技術體系,本研究在優(yōu)化豬卵母細胞體外成熟、激活及胚胎培養(yǎng)條件的基礎上,系統(tǒng)探討了體外受精及孤雌激活胚胎CI-MGT和ICSI-MGT的相關影響因素,并對CI-MGT體外受精胚胎及ICSI-MGT胚胎生產轉基因豬可行性進行了研究。研究結果如下：1.探討了成熟液和胚胎培養(yǎng)液組分對豬卵母細胞成熟及胚胎發(fā)育效果的影響。結果顯示,成熟基礎液為TCM-199核成熟率和胚胎發(fā)育效率顯著高于NCSU-37和PZM-3（P<0.05）。以TCM-199為成熟基礎液,不加額外能量底物（PMt）的核成熟率和孤雌囊胚發(fā)育率分別為74.1土2.4%和29.3+1.3%,顯著高于添加0.91 mmol/L丙酮酸鈉+3.05 mmol/L葡萄糖（PMtsg）或0.91 mmol/L丙酮酸鈉+3.05 mmol/L葡萄糖+0.1mg/mL谷氨酰胺（PMtsgg, P<0.05）。在成熟液中添加10 IU/mL eCG+15 IU/mL hCG組的核成熟率和胚胎發(fā)育效率顯著高于添加0.5μg/mL FSH+0.5μg/mLLH或0.5μg/mL FSH+10 UI/mL hCG。成熟液中添加50 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-I組囊胚率顯著高于添加10 ng/mL EGF和不添加組（P<0.05）。對豬卵母細胞體外成熟過程中核相變化研究顯示,成熟培養(yǎng)38 h的核成熟率為57%（105/184）,40 h為43%（82/189）,42 h為48%（75/155）,44 h為59%（208/354）,46 h為70%（59/84）,48 h為62%（51/82）,50 h為74%（154/207）。在以PZM-3為基礎液的胚胎培養(yǎng)液中添加0.277 mmol/L肌醇（PZMi）,其囊胚率顯著高于添加0.34 mmol/L檸檬酸鈉（PZMc）或0.34 mmol/L檸檬酸鈉+0.277 mmol/L肌醇（PZMci, P<0.05）;添加0.5 mg/mL透明質酸組的囊胚率顯著高于未添加組（P<0.05）；添加3 mg/mL BSA-FAF組的囊胚率顯著高于添加BSA-V組（41.4士4.1%vs 36.7±3.8%,P<0.05）。培養(yǎng)液中BSA濃度增加至5 mg/mL或在培養(yǎng)96 h后加入10%FBS的囊胚率和囊胚孵化率均有所增加,但差異不顯著。添加50 ng/mL IGF-I的囊胚率和囊胚細胞數高于未添加組,但差異不顯著。2.探討了激活方法對豬卵母細胞孤雌胚胎發(fā)育效果的影響。結果顯示,卵母細胞經5 μmol/L離子霉素（Ion）激活5 min后,再分別在含2 mmol/L6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）,5μg/mL細胞松弛素B （CB）+10放線菌酮（CHX）,5μg/mL CB+2 mmol/L 6-DMAP,5μg/mL CB+10μg/mL CHX+2 mmol/L 6-DMAP培養(yǎng)4 h的囊胚率顯著高于在10μg/mL CHX培養(yǎng)4 h的囊胚率（29.7±1.1%、29.8±1.2%、30.4±1.6%和30.2±2.7%vs 15.8土1.5%,P<0.05）,但四組間囊胚率、ICM細胞數、TE細胞數及ICM/TE均無顯著差異。當電脈電壓為1.25KV/cm時3次電脈沖電激活的囊胚發(fā)育率顯著高于2次電脈沖（P<0.05）,當電脈沖為3次時電場強度為0.80和1.00KV/cm的胚胎碎裂率顯著低于1.20 KV/cm,且1.00 KV/cm組的囊胚率顯著高于0.80和1.20 KV/cm組（P<0.05）。卵母細胞電激活后分別用5μg/mL CB+10 μg/mL CHX,5μg/mL CB+2 mmol/L 6-DMAP培養(yǎng)處理4 h的囊胚率（55.4±1.2%和50.4±2.9%）顯著高于用2 mmol/L 6-DMAP （37.9±2.4%）,5 μg/mL CB+10 μg/mL CHX+2 mmol/L 6-DMAP （36.9±3.1%）培養(yǎng)處理4 h的囊胚發(fā)育率,亦顯著高于單純電激活處理（40.7±1.7%）和Ion激活后用2 mmol/L 6-DMAP （30.6±0.8%）培養(yǎng)處理4 h的囊胚發(fā)育率(P<0.05。電激活后,用5μg/mLCB培養(yǎng)處理4 h的囊胚率顯著高于用5μg/mLCB培養(yǎng)處理4 h（54.0±4.1%vs 37.9±2.4%,P<0.05）,與7.5μg/mLCB組差異不顯著,但7.5μg/mLCB組的ICM細胞數和ICM/TE均顯著高于5 μg/mLCB組（P<0.05）。對胚胎核型進行分析結果表明,電激活后用7.5μg/mL CB+10 μg/mL CHX培養(yǎng)處理4 h的囊胚細胞二倍體率顯著高于單純電激活處理組（84.6% vs 40.0%,P<0.05）。3.研究了豬卵胞質內注射轉基因的影響因素。孤雌激活卵胞質注射（PA-CI）的研究結果顯示,注射外源RNA、外源RNA+1-4 U/μL RNA酶抑制劑對孤雌激活卵的囊胚率、ICM細胞數、TE細胞數及ICM/TE均無顯著影響,表明可同時注射外源RNA和RNA酶抑制劑。注射100 ng/μL EGFP-N1 DNA的孤雌囊胚陽性率顯著高于50 ng/μL和空注組,但囊胚率顯著低于其余兩組（33.9士1.1%vs 46.4±2.1%和50.5±1.9%,P<0.05）；注射100 ng/μL Talen-BMP15 RNA的囊胚率與50 ng/μL注射組和空注組差異不顯著,表明注射DNA對胚胎毒性大于注射RNA。孤雌激活后5-18 h注射的囊胚率均顯著低于注射后立刻激活或激活后立刻注射的囊胚率（P<0.05）。注射EGFP-N1線性化DNA的囊胚陽性率顯著高于環(huán)狀DNA（15.8±1.4%vs11.7±1.0%,P<0.05）,但兩者胚胎發(fā)育率差異不顯著,并且外源RNA注射組的囊胚率普遍高于注射DNA載體。當采用體外受精卵進行胞質內注射時（IVF-CI）,精卵孵育后5-18 h注射線性化EGFP-N1載體的囊胚率和囊胚細胞數差異均不顯著,但5-6、8-9和11-12 h注射組胚胎陽性率顯著高于14-15和17-18 h（12.6±0.6%,11.8土0.5%和13.6±0.6%vs 8.7±0.8%和6.5±1.0%,P<0.05）,表明外源DNA在豬雌雄原核形成期（約13 h）前注射的外源基因整合效率較高。注射40和50 ng/μL EGFP-N1 DNA組囊胚率顯著高于100 ng/μL,與10、20、30ng/μL和空注組差異不顯著,同時40、50和100 ng/pL組陽性率顯著高于其余各組（P<0.05）。IVF卵注射GDF8 Cas9 mRNA/sgRNA的囊胚率顯著低于PA卵（13.7±0.8%vs 52.6+3.1%,P<0.05）,但注射IVF卵的胚胎基因突變效率顯著高于注射PA卵（25.0% vs3.8%,P<0.05）,表明Cas9/sgRNA系統(tǒng)可以通過注射豬IVF卵對豬的基因組進行編輯。4.系統(tǒng)研究了豬單精子胞質內注射轉基因的影響因素。結果顯示,10和20 ng/μL EGFP-N1 DNA與精子共孵育的囊胚率顯著高于50和100 ng/μL（33.8±2.4%和31.0±0.9% vs 24.4±2.7和16.1±0.8%,P<0.05）,但20ng/μL孵育組胚胎陽性率顯著高于10ng/μL（30.5±1.5%vs 16.3±1.5,P<0.05）。精子與外源基因孵育5、30和60 min囊胚率顯著高于孵育24 h,但30和60 min組陽性率和囊胚陽性率顯著高于5 min（P<0.05）。采用不同冷凍液（DPBS、 BTS和mNIM）冷凍精子對ICSI-MGT胚胎發(fā)育率無顯著影響,但精子孵育液DPBS+EDTA （10 mmol/L EDTA）的囊胚率顯著高于DPBS（27.8±0.7%vs 22.2±1.6%, P<0.05）, mNIM （10 mmol/L EDTA+123.0 mmol/L KCl）組的囊胚率顯著高于DPBS+EDTA組（33.2±1.3%vs 27.8±0.7%,P<0.05）,表明孵育液中的EDTA和K+對注射后的胚胎發(fā)育有影響。精子超聲+凍融處理和NaOH處理的囊胚率顯著高于鮮精、A23187、超聲、凍融和三次凍融處理組,超聲+凍融和NaOH處理組的胚胎外源基因陽性率亦顯著高于鮮精和A23187處理組。此外,卵母細胞激活后注射超聲+凍融和NaOH處理精子的囊胚率顯著高于激活前注射組（35.7±2.4%vs 30.2+0.6%；34.5±0.3% vs28.5±0.9%,P<0.05）,表明精子破膜與激活影響ICSI-MGT胚胎的發(fā)育。卵母細胞激活后0-30 min注射的囊胚率顯著低于60-90 min注射組,但陽性率和囊胚陽性率均顯著高于60-90 min注射組。對ICSI后不同時間合子內的GSH含量分析顯示,激活后0-30 min注射組的6 h合子GSH含量顯著低于60-90 min注射組和孤雌激活組（3.22±0.06 vs 5.02±0.09和4.73±0.14,P<0.05）,而60-90 min注射組的6 h和12 h合子GSH含量與孤雌組均無顯著差異。進一步原核分析發(fā)現,0-30 min注射組的雌雄雙原核形成率顯著高于60-90 min（56.9±3.7% vs 36.3±2.0%,P<0.05）,且0-30min注射組精子解聚率顯著高于60-90min,表明延長激活以后的注射時間會造成更高的孤雌胚胎產生。采用不同外源基因載體（EGFP-N1、Anti-FMDV. PRL-EGFP和IFN-EGFP）的ICSI-MGT囊胚率差異不顯著,但顯著影響胚胎陽性率,其中EGFP-N1線性化載體陽性率顯著高于環(huán)狀載體（35.9±0.2%vs20.9±0.9%,P<0.05）,而Anti-FMDV RNAi載體陽性率和囊胚陽性率均顯著低于其它載體（P<0.05）。將Cas-GDF8、Anti-FMDV和EGFP-N1的ICSI-MGT胚胎移植入6頭自然發(fā)情受體內,4頭未見返情,其中7557號受體流產獲得3頭胎豬,7645號受體妊娠到期得到4頭仔豬,對仔豬耳朵皮膚EGFP和Neo雙基因進行PCR鑒定均顯示陽性,表明應用優(yōu)化的ICSI-MGT技術可以獲得轉基因豬后代。
劉帥,呂玲燕,孫俊銘,劉慶友,石德順,崔奎青[3]（2012）在《豬卵母細胞電激活方法初探》文中認為本實驗比較了已報道的4組常用的豬卵母細胞電激活方法,并對電激活參數進行系統(tǒng)探索。結果表明:電激活參數（125 V/mm,80μs,1 DC）,激活液0.3 mol/L甘露醇+0.1 mmol/L MgSO4+0.1 mmmol/L CaCl2+0.01%PVA的激活方案,囊胚發(fā)育率顯著優(yōu)于其他3組方案（25.6%vs 12.6%vs 21.5%vs 15.2,P<0.05）;脈沖電壓100 V/mm時3次脈沖激活組囊胚發(fā)育率優(yōu)于2次和1次脈沖組（27.3%vs 16.2%vs 21.7%,P<0.05）;激活液中Ca2+濃度（0.1%,0.05%）對激活效果無顯著影響,囊胚發(fā)育率分別為36.5%和40.9%;本實驗結果中電激活效果明顯優(yōu)于化學激活（46.3%vs 29.4%,P<0.05）。通過上述實驗本研究建立了一種優(yōu)化的豬卵母細胞電激活方法,為生產單精子顯微注射與體細胞核移植豬奠定了基礎。
石俊松,羅綠花,周榮,周秀,麥然標,李紫聰,吳珍芳[4]（2012）在《不同電激活參數及CB處理對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響》文中研究表明從豬卵巢上獲取的卵母細胞經體外培養(yǎng)成熟42～44 h后去除顆粒細胞,選取成熟的卵母細胞進行孤雌激活培養(yǎng).試驗采用不同的場強、脈沖時程和脈沖次數進行對照試驗,并比較了細胞松弛素B（CB）輔助激活對孤雌胚胎發(fā)育的影響.結果顯示:1)當場強為0.8 kV.cm-1,選取4個脈沖時程（80、100、120、140μs）參數分別進行1次、2次脈沖激活時,100μs、1次脈沖囊胚率最高,為（42.22±5.38）%,但同其他組無顯著差異（P>0.05）.2)脈沖時程為100μs,選取4個場強（0.8、1.0、1.2、1.4 kV.cm-1）參數分別進行1次、2次脈沖激活時,1.4 kV.cm-1、1次脈沖囊胚率最高,為（44.04±0.68）%,但同其他組無顯著差異（P>0.05）.3)場強為0.8 kV.cm-1和1.4 kV.cm-1,選取4個脈沖時程（80、100、120、140μs）進行1次脈沖激活時,1.4 kV.cm-1+80μs組囊胚率（54.60±2.86）%均高于其他組,且極顯著高于1.4 kV.cm-1+140μs、0.8 kV.cm-1+80μs和0.8 kV.cm-1+140μs組（P<0.01）.4)用1.4 kV.cm-1、80μs、1次脈沖激活卵母細胞后,使用CB輔助激活4 h的囊胚率為（54.07±3.12）%,極顯著（P<0.01）高于不使用CB組.以上結果說明,電激活中脈沖次數對豬孤雌胚胎發(fā)育無顯著影響,且在本試驗條件下,采用1.4 kV.cm-1的場強、80μs的脈沖時程,并使用CB輔助激活4 h,能夠得到較高囊胚率的豬孤雌激活效率.
潘偉榮,魏太云,信吉閣,張崇義,卿玉波,魏紅江[5]（2011）在《電激活參數和培養(yǎng)基對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響》文中研究說明為優(yōu)化電激活和胚胎培養(yǎng)的相關技術體系,研究電激活參數和培養(yǎng)液對豬卵母細胞孤雌胚胎發(fā)育的影響。結果表明:在脈沖電壓為150 V（以每1 mm電激槽寬計,下同）、脈沖持續(xù)時間為100μs、脈沖1次的電激活條件下,豬卵母細胞孤雌激活的效果較好;在脈沖持續(xù)時間和脈沖次數恒定的條件下,脈沖電壓150 V組的囊胚率顯著高于100 V組和125 V組（P<0.05）,達46.3%;在脈沖電壓和脈沖次數恒定的條件下,脈沖持續(xù)時間100μs的囊胚率顯著高于75、125μs組（P<0.05）,達50.5%;在脈沖電壓和脈沖持續(xù)時間恒定的條件下,1次脈沖的卵裂率和囊胚率顯著高于2次脈沖組（P<0.05）,分別達82.7%、50.3%;PZM3和NCSU23培養(yǎng)液對豬孤雌激活胚胎發(fā)育的影響差異不顯著（P>0.05）,但PZM3培養(yǎng)液組的卵裂率、囊胚率和囊胚細胞數均略高于NCSU23組。
張文昌,王秀愛,劉鳳軍,莊益芬,陳曦,謝旭東,洪志勇,陳梅芳,葉屹峰,余翠月[6]（2010）在《豬成熟卵母細胞的孤雌激活及體外胚胎培養(yǎng)的研究》文中指出為優(yōu)化并提高卵母細胞的孤雌激活效率,研究了不同濃度離子霉素作用不同時間并聯(lián)合6-DMAP對豬卵母細胞孤雌激活的影響。結果表明5μM的離子霉素作用4min的卵裂/囊胚率最高（66.7%,13.6%）,比較了不同電激活參數激活對孤雌胚發(fā)育的影響,經多次孤雌激活試驗表明激活參數120v/mm,60μs,1DC的激活效果最佳。探討了不同培養(yǎng)基對孤雌胚體外發(fā)育的影響,結果表明:NCSU-2 3和PZM-3培養(yǎng)孤雌胚胎卵裂率無明顯差異（55.2%,56.1%）,但在囊胚率上,PZM-3顯著高于NCSU-23（13.8%vs 7.84%,P<0.05）。
趙金鳳[7]（2010）在《豬卵母細胞孤雌激活方法的研究》文中研究表明本研究以豬體外成熟卵母細胞為實驗材料,分別采用了單次電激活,二次電激活,化學激活以及物理化學聯(lián)合激活方法,對豬體外成熟卵母細胞進行孤雌激活,并比較分析了各方法的激活效果。旨在選擇出較好的孤雌激活方法,以提高豬體外成熟卵母細胞的孤雌激活率和孤雌胚的囊胚發(fā)育率,為提高核移植的成功率,以及進一步研究奠定基礎。本研究包括以下主要內容:1.選擇不同的電場強度和脈沖時程,做單次電激活,比較不同組合對激活效率的影響。2.固定脈沖時程及脈沖次數,分別選擇不同的電場強度,做二次電激活,比較不同組合對孤雌激活胚早期發(fā)育的影響。3.不同濃度Ionomycin作用不同時間;Ionomycin分別與6-DMAP、CB及CHX組合;9% Ethanol作用不同時間,對每一組合的激活效率進行比較,旨在研究較好的化學激活方法。4.電激活處理結合化學試劑（6-DMAP、CB及CHX）,比較不同組合對體外成熟卵母細胞孤雌激活后孤雌胚早期發(fā)育的影響。研究結果表明:1.對于單次電刺激對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活參數的確定,電場強度為2.0kV/cm,脈沖次數為1次,脈沖時程分別為10、20和30μs的條件對孤雌胚早期發(fā)育的影響無顯著差異,且均為較優(yōu)條件,其中以脈沖時程為30μs最為理想;2.對于二次電刺激對豬體外成熟卵母細胞的孤雌激活參數選擇,二次電場強度分別2.0kV/cm和1.4kV/cm,脈沖時程均為30μs,脈沖次數均為1次的條件為最優(yōu);3.不同濃度Ionomycin作用不同時間對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活效果的影響,Ionomycin濃度為20mmol/L,作用時間為10min、15min的條件較好,10min最為理想;4. Ionomycin分別與6-DMAP、CB組合對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活后,孤雌胚的卵裂率和囊胚率高于Ionomycin與CHX組;5. 9% Ethanol作用10min、20min組合對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活后,孤雌胚的卵裂率和囊胚率均顯著高于作用30min、40min,前二者之間差異不顯著;6.電刺激處理后應用6-DMAP或CB處理對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活效率顯著優(yōu)于電處理后應用CHX。
王秀愛[8]（2010）在《莆田黑豬體細胞核移植的研究》文中研究說明體細胞克隆豬在人的動物疾病模型和人類異種器官移植方面具有巨大的優(yōu)勢和應用潛力,已成為當今體細胞克隆領域研究的熱點。本研究以莆田黑豬耳成纖維細胞為供體細胞,豬卵母細胞作為受體細胞,以建立高效的豬體細胞核移植體系為目的,主要優(yōu)化了卵母細胞體外成熟培養(yǎng)條件,研究了成熟卵母細胞的孤雌激活方法,以及微電極融合法對重構胚融合率的影響,應用開放式拉長細管（OPS）對重構胚胎進行了玻璃化冷凍,結果表明:1、本試驗采用出生3～5d的莆田黑豬,采用組織塊法培養(yǎng)豬耳成纖維細胞,傳代、純化及冷凍后,得到了大量穩(wěn)定的供體細胞系。2、對影響卵母細胞體外成熟培養(yǎng)（IVM）的幾項因素即卵母細胞的培養(yǎng)方式,石蠟油的添加,不同外源激素的組合及ITS的添加進行研究分析,結果顯示（1）凹槽皿組豬卵母細胞成熟率高于四孔板和30mm塑料皿,但差異不顯著（P>0.05）。（2）石蠟油的添加對卵丘細胞擴展和卵母細胞體外成熟率均有顯著提高（P<0.05）。（3）激素PMSG+HCG+FSH組高于FSH+LH和HMG組（80.1%vs68.3%vs53.3%）,相互之間差異顯著（P<0.05）。（4）在豬卵母細胞成熟培養(yǎng)液中添加1%ITS（v/v）,結果,卵母細胞成熟率沒有明顯提高,但顯著提高了孤雌激活后胚胎的卵裂率和囊胚率（63.3%vs55.1%,18.7%vs12.1%）（P<0.05）,說明在卵母細胞成熟培養(yǎng)液中添加1%ITS能夠顯著提高豬卵母細胞激活后孤雌胚胎發(fā)育力。3、為優(yōu)化并提高卵母細胞的孤雌激活效率,研究了不同濃度離子霉素作用不同時間并聯(lián)合6-DMAP對豬卵母細胞孤雌激活的影響。結果表明5μM的離子霉素作用4min的卵裂/囊胚率最高（66.7%,13.6%）,比較了不同電激活參數對孤雌胚發(fā)育的影響,經多次孤雌激活試驗表明激活參數120v/mm,60μs,1DC的激活效果最佳。探討了不同培養(yǎng)基對孤雌胚體外發(fā)育的影響,結果表明NCSU-23和PZM-3培養(yǎng)孤雌胚胎卵裂率無明顯差異（55.2%,56.1%）,但在囊胚率上,PZM-3顯著高于NCSU-23（13.8%vs7.84%,P<0.05）。4、為了提高重構胚的融合效率,試驗采用微電極融合法,與傳統(tǒng)的槽式融合法相比,顯著提高了重構胚的融合效率（84.8%vs64.4%,P<0.05）,卵裂率和囊胚率無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。多次融合激活試驗摸索了微電極融合激活的最佳參數為16v,20μs,1DC。5、采用開放式拉長麥管（OPS）玻璃化冷凍克隆胚的桑葚胚和囊胚,結果:解凍后得到了72.3%的胚胎正常形態(tài)率。
侯文文[9]（2009）在《豬卵母細胞體外成熟及胚胎培養(yǎng)的相關研究》文中研究指明為了進一步探索建立穩(wěn)定、有效、經濟的豬胚胎體外生產方案,為豬克隆平臺的優(yōu)化提供依據。本研究針對影響豬胚胎體外生產效率的部分關鍵環(huán)節(jié),重點了研究如何提高豬卵母細胞體外成熟質量、優(yōu)化豬胚胎體外培養(yǎng)條件。研究了不同電擊活參數,必需氨基酸和非必需氨基酸對豬卵母細胞體外成熟與成熟后孤雌發(fā)育的影響;探索了Leptin對豬卵母細胞體外成熟和孤雌胚胎體外發(fā)育的影響;比較了在體外培養(yǎng)過程中添加丙戊酸對豬克隆胚的影響。（1）將經過體外成熟的卵母細胞隨機分別以1.56 kv/cm、100μs、2DC;1.56 kv/cm、100μs、1DC;1.00 kv/cm、80μs、2DC三組參數進行電激活,發(fā)現經1.00 kv/cm、80μs、2DC電激活的卵母細胞,無論是胚胎的卵裂率還是囊胚率都低于1.56 kv/cm、100μs、2DC和1.56 kv/cm、100μs、1DC電激活的組（卵裂率65.77±0.31% vs. 78.90±0.19%、77.78±0.18%, P<0.05;囊胚率27.71±0.39% vs. 39.98±0.38%、36.55±0.25%, P<0.05）。（2）為了探討瘦素（Leptin）對豬卵母細胞體外成熟及孤雌激活后胚胎早期發(fā)育的影響,本研究選擇在Earle’s鹽緩沖的TCM199中添加10 IU/mL PMSG,10 IU/mL hCG,10 ng/mL EGF配制成化學限定的基礎液,添加不同濃度Leptin對豬卵母細胞進行體外成熟培養(yǎng)為各試驗組,以未添加Leptin的基礎液為對照組1,而添加5%的胎牛血清（FBS）,10%豬卵泡液為對照組2。比較分析各組卵母細胞核成熟效率,孤雌激活后胚胎的卵裂率,囊胚發(fā)育率,結果表明,各添加組卵母細胞成熟率與對照組之間無顯著差異（P>0.05）;孤雌激活后,各組間的卵裂率和囊胚發(fā)育率也無明顯差異。（ 3 ）以不同濃度必需氨基酸和非必需氨基酸（ 1%EAA+1%NEAA ,2%EAA+1%NEAA）添加到豬卵母細胞IVM培養(yǎng)液,發(fā)現無論是成熟率還是孤雌激活后的卵裂率,實驗組與對照組都沒有顯著差異（P>0.05）;而胚胎的后期培養(yǎng)上,發(fā)現添加組（1%EAA+1%NEAA,2%EAA+1%NEAA）的囊胚率要顯著低于對照組1和2（19.07±3.15% ,16.89±2.41% vs.26.53±2.00% ,27.55±1.64%,P<0.05）。（4）在胚胎培養(yǎng)液PZM-3和PZM-4中分別添加不同濃度的瘦素（10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL）發(fā)現處理組胚胎發(fā)育情況均優(yōu)于對照組,盡管在卵裂率和囊胚細胞總數上沒有顯著差異,但在囊胚率方面,發(fā)現無論是PZM-3還是PZM-4添加組都比對照組要高,且差異顯著（P<0.05）,而且相對于對照組,添加50ng/mL的組囊胚率最高（PZM-3,51.23±3.48% vs. 34.37±4.03%,P<0.05;PZM-4,31.76±5.07% vs. 12.14±1.89%,P<0.05）。（5）在胚胎培養(yǎng)液PZM-3中添加不同濃度的VPA,發(fā)現添加組的卵裂率與對照組沒有顯著差別（P>0.05）;而添加組胚胎的后期均不能發(fā)育到囊胚。結果表明:①用1.56 kv/cm、100μs、2DC作為孤雌激活的電擊活參數效果最好。②在成熟液中添加Leptin對卵母細胞成熟作用不明顯,也沒有顯著提高后期胚胎發(fā)育的能力。③在成熟液中添加必需氨基酸和非必需氨基酸對于卵母細胞的成熟并不影響,但對孤雌激活胚的后期發(fā)育不利,囊胚率顯著降低。④在胚胎培養(yǎng)液中添加Leptin對胚胎發(fā)育有促進作用,添加50ng/mL和100ng/mL能顯著提高囊胚率,且添加50ng/mL囊胚率最高。⑤在胚胎培養(yǎng)液中添加全程VPA對重構胚胎的發(fā)育不利,不能發(fā)育到達囊胚期。綜上所述,在豬卵母細胞的體外培養(yǎng)過程中,利用1.56 kv/cm、100μs、2DC的電擊活參數,激活后在PZM-3胚胎培養(yǎng)液中添加50ng/mL Leptin,使得豬的胚胎在體外培養(yǎng)過程中可以獲得較好的發(fā)育能力。
張玲,黃友防,何若鋼,盧晟盛,許惠艷,蘭宗寶,房慧伶,潘天彪,藍海恩,黃敏瑞,盧克煥[10]（2009）在《利用電極盤進行豬卵母細胞電激活》文中指出[目的]研究不同電激活參數以及電脈沖聯(lián)合6-DMAP對豬卵母細胞孤雌激活效果的影響。[方法]使用電極盤,測定不同場強（1.1、1.3、1.5、1.71、.9 kV/cm）,不同脈沖時程（305、07、09、0、110μs）,1次脈沖下豬卵母細胞囊胚率的變化。[結果]結果表明,脈沖強度以1.5和1.7 kV/cm效果最好,在80μs時其豬卵母細胞囊胚率分別達到（22.35±5.16）%和（20.59±9.41）%;脈沖強度1.5 kV/cm,1次電脈沖后4 h聯(lián)合6-DMAP激活卵母細胞,當脈沖時程達到70和90μs時,囊胚率分別達到（21.65±9.95）%和（23.10±16.27）%。[結論]在試驗條件下,使用電極盤的最適電激活參數為脈沖強度1.51.7 kV/cm,脈沖時長80μs,1次脈沖電激活。
二、豬卵母細胞電激活參數的研究（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結構并詳細分析其設計過程。在該MMU結構中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結構映射地址空間,并詳細論述了四級頁表轉換過程,TLB結構組織等。該MMU結構將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現與確認事物間的因果關系。
文獻研究法：通過調查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據現有的科學理論和實踐的需要提出設計。
定性分析法：對研究對象進行“質”的方面的研究，這個方法需要計算的數據較少。
定量分析法：通過具體的數字，使人們對研究對象的認識進一步精確化。
跨學科研究法：運用多學科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學用來分析社會現象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、豬卵母細胞電激活參數的研究（論文提綱范文）
（1）鈣敏感受體參與豬卵母細胞成熟、激活及胚胎發(fā)育的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1.1 鈣敏感受體的生理功能及其研究進展 |
| 1.1.1 CASR的表達 |
| 1.1.2 CASR的結構 |
| 1.1.3 CASR信號通路 |
| 1.1.4 CASR的生理功能 |
| 1.2 卵母細胞成熟調控機制 |
| 1.2.1 卵母細胞的核成熟 |
| 1.2.2 卵母細胞的胞質成熟 |
| 1.3 卵母細胞激活調控機制 |
| 1.3.1 卵母細胞的MII阻滯 |
| 1.3.2 卵母細胞MII阻滯的退出 |
| 1.4 卵母細胞受精和胚胎發(fā)育 |
| 1.4.1 受精過程及調控機制 |
| 1.4.2 早期胚胎發(fā)育 |
| 第二章 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.2 儀器設備及試劑 |
| 2.2.1 主要儀器設備 |
| 2.2.2 主要試劑 |
| 2.3 溶液配制 |
| 2.4 實驗方法 |
| 2.4.1 卵母細胞收集與成熟培養(yǎng) |
| 2.4.2 RNA提取、反轉錄PCR與實時熒光定量PCR |
| 2.4.3 免疫熒光染色 |
| 2.4.4 Western Blot檢測 |
| 2.4.5 核成熟的檢測 |
| 2.4.6 卵母細胞孤雌激活和早期胚胎體外培養(yǎng) |
| 2.4.7 卵母細胞電激活及體外培養(yǎng) |
| 2.4.8 原核形成的檢測 |
| 2.4.9 體外受精 |
| 2.4.10 受精率的檢測 |
| 2.4.11 囊胚細胞數檢測 |
| 2.4.12 卵母細胞ROS和GSH水平檢測 |
| 2.4.13 數據分析 |
| 第三章 CASR在豬卵母細胞體外成熟中作用的研究 |
| 3.1 CASR在豬的卵母細胞和顆粒細胞上的表達 |
| 3.2 在不同成分成熟液對卵母細胞的CASR表達和分布的影響 |
| 3.3 CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390對于豬卵母細胞核成熟的影響 |
| 3.4 CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390對于豬卵母細胞胞質成熟的影響 |
| 3.5 CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390對于豬卵母細胞孤雌激活早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.6 CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390對豬卵母細胞成熟過程中MAPK3/1磷酸化水平的影響 |
| 3.7 小結與討論 |
| 3.7.1 小結 |
| 3.7.2 討論 |
| 第四章 CASR在豬卵母細胞激活中作用的研究 |
| 4.1 CASR在豬的激活的卵母細胞上的表達和分布 |
| 4.2 CASR在豬卵母細胞激活過程中的表達變化 |
| 4.3 CASR的激動劑NPS R-568和抑制劑NPS2390對豬卵母細胞激活的影響 |
| 4.4 豬卵母細胞激活過程中胞內鈣離子對CASR功能的影響 |
| 4.5 在豬卵母細胞激活中CaMKⅡ活性對于CASR功能的影響 |
| 4.6 在豬卵母細胞激活過程中CaMKⅡ調控CASR的表達 |
| 4.7 在豬卵母細胞激活過程中CASR對CaMKⅡ磷酸化水平的影響 |
| 4.8 小結與討論 |
| 4.8.1 小結 |
| 4.8.2 討論 |
| 第五章 CASR在豬體外受精和早期胚胎發(fā)育中作用的研究 |
| 5.1 CASR在豬配子和IVF胚胎上的表達 |
| 5.2 CASR對豬體外受精胚胎體外生產的影響 |
| 5.3 CASR對豬孤雌激活早期胚胎發(fā)育的影響 |
| 5.4 小結與討論 |
| 5.4.1 小結 |
| 5.4.2 討論 |
| 結論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡介 |
| 博士期間參與的文章 |
（2）豬卵胞質注射及單精子胞質內注射介導的轉基因方法研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 第一章 文獻綜述 |
| 1 卵母細胞成熟、激活與胚胎培養(yǎng) |
| 1.1 卵母細胞成熟 |
| 1.2 卵母細胞激活 |
| 1.3 早期胚胎發(fā)育 |
| 2 卵胞質注射轉基因 |
| 2.1 卵胞質注射研究進展 |
| 2.2 卵胞質注射轉基因機理 |
| 2.3 卵胞質注射影響因素 |
| 3 單精子胞質內注射轉基因 |
| 3.1 精子載體法 |
| 3.2 單精子胞質內注射 |
| 4 本論文的研究意義 |
| 第二章 豬卵母細胞體外成熟與胚胎培養(yǎng)影響因素研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料與試劑 |
| 1.2 儀器與設備 |
| 1.3 試劑配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.5 試驗設計 |
| 1.6 數據統(tǒng)計分析 |
| 2 試驗結果 |
| 2.1 豬卵母細胞體外成熟影響因素研究 |
| 2.2 豬胚胎培養(yǎng)影響因素研究 |
| 3 分析與討論 |
| 3.1 豬卵母細胞體外成熟影響因素研究 |
| 3.2 豬胚胎培養(yǎng)影響因素研究 |
| 4 結論 |
| 第三章 豬卵母細胞孤雌激活方法研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料與試劑 |
| 1.2 儀器與設備 |
| 1.3 試劑配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.5 試驗設計 |
| 1.6 數據統(tǒng)計分析 |
| 2 試驗結果 |
| 2.1 豬卵母細胞化學激活方法的初步研究 |
| 2.2 豬卵母細胞電激活方法的初步研究 |
| 2.3 豬卵母細胞電激活聯(lián)合化學激活方法的初步研究 |
| 3 分析與討論 |
| 3.1 豬卵母細胞化學激活方法的初步研究 |
| 3.2 豬卵母細胞電激活方法的初步研究 |
| 3.3 豬卵母細胞電激活聯(lián)合化學激活方法的初步研究 |
| 4 結論 |
| 第四章 豬卵胞質注射轉基因影響因素研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料與試劑 |
| 1.2 儀器與設備 |
| 1.3 試劑配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.5 試驗設計 |
| 1.6 數據統(tǒng)計分析 |
| 2 試驗結果 |
| 2.1 孤雌激活和IVF方法的完善 |
| 2.2 孤雌卵胞質注射轉基因方法的初步研究 |
| 2.3 受精卵胞質注射轉基因方法的初步研究 |
| 3 分析與討論 |
| 3.1 孤雌激活和IVF方法的完善 |
| 3.2 孤雌卵胞質注射轉基因方法的初步研究 |
| 3.3 受精卵胞質注射轉基因方法的初步研究 |
| 4 結論 |
| 第五章 豬單精子胞質內注射轉基因影響因素研究 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料與試劑 |
| 1.2 儀器與設備 |
| 1.3 試劑配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.5 試驗設計 |
| 1.6 數據統(tǒng)計分析 |
| 2 試驗結果 |
| 2.1 不同激活方法對豬ICSI胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.2 不同外源基因濃度對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.3 精子與外源基因孵育時間對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.4 不同精子冷凍液和孵育液對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.5 不同精子處理方法和激活方法對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.6 激活后精子注射時間對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.7 激活后精子注射時間對不同發(fā)育時間合子內谷胱甘肽含量的影響 |
| 2.8 激活后精子注射時間對豬ICSI胚胎原核形成的影響 |
| 2.9 不同外源基因載體對ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 2.10 單精子卵胞質注射胚胎的體內發(fā)育 |
| 3 分析與討論 |
| 3.1 不同激活方法對豬ICSI胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.2 不同外源基因濃度對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.3 精子與外源基因孵育時間對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.4 不同精子冷凍液和孵育液對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.5 精子處理和激活對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.6 激活后精子注射時間對豬ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.7 不同外源基因載體對ICSI胚胎發(fā)育能力及轉基因效率的影響 |
| 3.8 單精子卵胞質注射胚胎的體內發(fā)育 |
| 4 結論 |
| 參考文獻 |
| 附圖 |
| 致謝 |
| 攻讀學位期間發(fā)表論文情況 |
（3）豬卵母細胞電激活方法初探（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試劑 |
| 1.2 卵母細胞收集與成熟 |
| 1.3 卵母細胞激活及胚胎培養(yǎng) |
| 1.4 實驗方案 |
| 1.4.1 不同激活方案對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 1.4.2 脈沖次數對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 1.4.3 脈沖電壓對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 1.4.4 激活液中Ca2+濃度對豬卵母細胞電激活效果的影響 |
| 1.4.5 不同激活模式對豬卵母細胞電激活效果的影響 |
| 1.5 胚胎細胞計數 |
| 1.6 統(tǒng)計分析 |
| 2 結果 |
| 2.1 不同激活方案對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 2.2 脈沖次數對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 2.3 脈沖電壓對豬卵母細胞激活效果的影響 |
| 2.4 激活液中Ca2+濃度對豬卵母細胞電激活效果的影響 |
| 2.5 不同激活模式對豬卵母細胞電激活效果的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 激活模式的選擇 |
| 3.2 電激活參數的選擇 |
| 3.3 電激活液選擇 |
| 3.4 激活方法選擇 |
| 4 結論 |
（4）不同電激活參數及CB處理對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要試劑與培養(yǎng)液 |
| 1.2 豬卵母細胞的收集及體外成熟培養(yǎng) |
| 1.3 成熟卵的孤雌激活及體外培養(yǎng)處理 |
| 1.4 試驗設計 |
| 1.4.1 脈沖時程和脈沖次數對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 1.4.2 場強和脈沖次數對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 1.4.3 場強和脈沖時程對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 1.4.4 CB對孤雌激活胚胎發(fā)育的影響 |
| 1.5 統(tǒng)計分析 |
| 2 結果與分析 |
| 2.1 脈沖時程和脈沖次數對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.2 場強和脈沖次數對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.3 場強和脈沖時程對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.4 CB處理對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 脈沖次數對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.2 場強和脈沖時程對孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.3 CB處理對豬孤雌胚胎的影響 |
（5）電激活參數和培養(yǎng)基對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 卵母細胞的來源及采集 |
| 1.2 卵母細胞的體外成熟培養(yǎng) |
| 1.3 試驗設計 |
| 1.4 數據分析 |
| 2 結果與分析 |
| 2.1 脈沖電壓對豬體外成熟卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 2.2 脈沖持續(xù)時間對豬卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 2.3 脈沖次數對豬卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 2.4 培養(yǎng)液對豬孤雌激活胚胎發(fā)育的影響 |
| 3 結論與討論 |
（7）豬卵母細胞孤雌激活方法的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 卵母細胞的生長和成熟 |
| 1.2 卵母細胞體外成熟的研究 |
| 1.2.1 卵母細胞體外成熟的影響因素 |
| 1.2.2 卵母細胞體外成熟的調節(jié)機制 |
| 1.3 卵母細胞孤雌激活的研究 |
| 1.3.1 卵母細胞孤雌激活的機制 |
| 1.3.2 卵母細胞孤雌激活的方法及研究進展 |
| 1.3.3 卵母細胞孤雌激活的影響因素 |
| 1.4 體細胞核移植概述 |
| 1.4.1 體細胞核移植的研究進展 |
| 1.4.2 核移植研究中存在的問題 |
| 1.4.3 體細胞核移植的應用前景 |
| 1.5 本研究的目的與意義 |
| 2 材料與方法 |
| 2.1 實驗材料 |
| 2.1.1 儀器設備及耗材 |
| 2.1.2 主要試劑 |
| 2.2 實驗方法 |
| 2.2.1 卵母細胞的成熟培養(yǎng) |
| 2.2.2 卵母細胞的激活處理 |
| 2.2.3 實驗數據分析 |
| 3 結果與分析 |
| 3.1 卵母細胞的單次電激活 |
| 3.2 卵母細胞的二次電激活 |
| 3.3 卵母細胞的化學激活 |
| 3.3.1 不同濃度Ionomycin 作用不同時間 |
| 3.3.2 Ionomycin 分別與6-DMAP、CB 及CHX 組合 |
| 3.3.3 9% Ethanol 作用不同時間 |
| 3.4 卵母細胞的物理化學聯(lián)合激活 |
| 4 討論 |
| 4.1 卵母細胞體外成熟對豬孤雌胚胎早期發(fā)育的影響 |
| 4.2 電刺激對豬孤雌胚胎早期發(fā)育的影響 |
| 4.3 化學試劑對豬孤雌胚胎早期發(fā)育的影響 |
| 4.4 電刺激結合化學試劑對豬孤雌胚胎早期發(fā)育的影響 |
| 5 結論 |
| 致謝 |
| 參考文獻 |
| 圖版 |
| 圖版說明 |
| 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文 |
（8）莆田黑豬體細胞核移植的研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文對照 |
| 第一部分 文獻綜述 |
| 1 體細胞核移植 |
| 2 豬體細胞核移植的研究進展 |
| 3 影響豬體細胞核移植的幾個因素 |
| 3.1 供體細胞 |
| 3.2 胞質受體 |
| 3.3 胚胎重構 |
| 3.4 克隆胚的激活 |
| 3.5 克隆胚的培養(yǎng) |
| 4 豬胚胎冷凍的研究進展 |
| 5 核移植的應用價值 |
| 6 存在的問題 |
| 7 本試驗研究的目的和意義 |
| 第二部分 試驗研究 |
| 第一章 供體細胞的準備 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料 |
| 1.2 主要儀器和耗材 |
| 1.3 試驗試劑 |
| 1.3.1 主要試劑 |
| 1.3.2 溶液配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.4.1 成纖維細胞組織塊培養(yǎng)法 |
| 1.4.2 成纖維細胞傳代培養(yǎng) |
| 1.4.3 成纖維細胞的純化 |
| 1.4.4 成纖維細胞液氮冷凍保存 |
| 1.4.5 成纖維細胞的解凍復蘇 |
| 2 結果 |
| 3 討論 |
| 3.1 核移植供體細胞的選擇 |
| 3.2 成纖維細胞生長特性 |
| 3.3 成纖維細胞培養(yǎng)方法 |
| 3.4 成纖維細胞分離純化 |
| 3.5 成纖維細胞的冷凍與解凍 |
| 第二章 豬卵母細胞體外成熟培養(yǎng) |
| 1 材料與方 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要儀器和耗材 |
| 1.3 試驗試劑 |
| 1.3.1 主要試劑 |
| 1.3.2 溶液的配制 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 卵丘-卵母細胞復合體（COCs）的回收 |
| 1.4.2 IVM 的培養(yǎng) |
| 1.4.3 IVM 后顆粒細胞的去除 |
| 1.4.4 成熟卵母細胞孤雌激活 |
| 1.4.5 胚胎培養(yǎng) |
| 1.4.6 數據分析 |
| 2 試驗結果 |
| 2.1 不同培養(yǎng)方式對IVM 的影響 |
| 2.2 石蠟油的添加對IVM 培養(yǎng)的影響 |
| 2.3 不同外源激素組合對IVM 的影響 |
| 2.4 ITS 對IVM 及孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 不同培養(yǎng)方法對IVM 的影響 |
| 3.2 石蠟油的添加對IVM 的影響 |
| 3.3 外源激素對IVM 的影響 |
| 3.4 ITS 對IVM 及孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 第三章 豬卵母細胞的孤雌激活及體外胚胎培養(yǎng) |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要儀器和耗材 |
| 1.2 試劑 |
| 1.3 溶液的配制 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.4.1 卵母細胞的采集和體外成熟培養(yǎng) |
| 1.4.2 卵母細胞孤雌激活 |
| 1.4.3 孤雌胚胎的體外培養(yǎng) |
| 1.4.4 數據分析 |
| 2 結果 |
| 2.1 Ion 聯(lián)合6-DMAP 對卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 2.2 不同電激活參數激活對孤雌胚發(fā)育的影響 |
| 2.3 激活后不同培養(yǎng)基對孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 Ion 聯(lián)合6-DMAP 對卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 3.2 不同電激活參數激活對孤雌胚發(fā)育的影響 |
| 3.3 激活后不同培養(yǎng)基對孤雌胚體外發(fā)育的影響 |
| 第四章 微電極融合法對豬體細胞克隆胚胎融合激活 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 主要儀器設備 |
| 1.2 主要試劑配制 |
| 1.3 微電極的制作與連接 |
| 1.4 試驗方法 |
| 1.4.1 供體細胞的準備 |
| 1.4.2 卵母細胞的體外成熟培養(yǎng) |
| 1.4.3 受體卵母細胞去核 |
| 1.4.4 去核后卵母細胞的注核 |
| 1.4.5 重構胚的電融合和激活 |
| 1.4.6 融合率的觀察 |
| 1.4.7 重構胚胎的培養(yǎng) |
| 1.4.8 微電極融合激活試驗設計 |
| 1.4.9 數據分析 |
| 2 結果 |
| 2.1 電場強度對電融合效果的影響 |
| 2.2 電脈沖時間對電融合效果的影響 |
| 2.3 電脈沖次數對電融合效果的影響 |
| 2.4 電場強度對電融合效果的影響 |
| 2.5 微電極融合法與槽式融合法對電融合效果的影響 |
| 3 討論 |
| 第五章 重構胚的冷凍與解凍 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 主要儀器和耗材 |
| 1.3 OPS 的制備 |
| 1.4 主要試劑 |
| 1.5 主要溶液的配制 |
| 1.6.1 供體細胞（成纖維細胞）的培養(yǎng) |
| 1.6.2 卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)及核移植 |
| 1.6.3 重構胚的體外培養(yǎng) |
| 1.6.4 重構胚的冷凍 |
| 1.7 重構胚胎的解凍 |
| 1.8 形態(tài)學觀察法 |
| 2 結果 |
| 3 討論 |
| 全文總結 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
（9）豬卵母細胞體外成熟及胚胎培養(yǎng)的相關研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 縮略詞表 |
| 文獻綜述 |
| 1 豬卵母細胞體外成熟 |
| 1.1 卵母細胞體外成熟 |
| 1.2 卵母細胞體外成熟的影響因素 |
| 2 豬胚胎的體外培養(yǎng) |
| 2.1 豬胚胎體外培養(yǎng)的影響因素 |
| 3 豬的體細胞核移植及其影響因素 |
| 3.1 供核細胞的影響 |
| 3.2 核移植方法的影響 |
| 3.3 表觀修飾劑干預的影響 |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 試驗材料 |
| 1.2 主要試劑與溶液 |
| 1.3 主要儀器 |
| 1.4 試劑與溶液配制 |
| 1.5 方法 |
| 1.6 試驗設計 |
| 1.7 統(tǒng)計與分析 |
| 2 結果 |
| 2.1 不同電激活參數對卵母細胞孤雌發(fā)育的影響 |
| 2.2 Leptin 對卵母細胞體外成熟及后期發(fā)育的影響 |
| 2.3 NEAA 和 EAA 對卵母細胞體外成熟培養(yǎng)及后期胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.4 Leptin 對豬孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 2.5 VPA 處理對重構胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 3 討論 |
| 3.1 不同電激活參數對卵母細胞孤雌發(fā)育的影響 |
| 3.2 不同 Leptin 對卵母細胞體外成熟及后期發(fā)育的影響 |
| 3.3 NEAA 和 EAA 對卵母細胞體外成熟培養(yǎng)及后期胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.4 Leptin 對豬孤雌胚胎發(fā)育的影響 |
| 3.5 VPA 對重構胚胎體外發(fā)育的影響 |
| 結論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
（10）利用電極盤進行豬卵母細胞電激活（論文提綱范文）
| 1 材料與方法 |
| 1.1 培養(yǎng)液 |
| 1.2 卵母細胞的準備 |
| 1.3 卵母細胞的電激活 |
| 1.4 卵母細胞電激活后的體外培養(yǎng) |
| 1.5 數據處理 |
| 2 結果與分析 |
| 2.1 不同電場強度對豬卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 2.2 不同脈沖時程聯(lián)合6-DMAP對豬卵母細胞孤雌激活的影響 |
| 3 結論與討論 |
四、豬卵母細胞電激活參數的研究（論文參考文獻）
- [1]鈣敏感受體參與豬卵母細胞成熟、激活及胚胎發(fā)育的研究[D]. 劉聰. 中國農業(yè)大學, 2017(05)
- [2]豬卵胞質注射及單精子胞質內注射介導的轉基因方法研究[D]. 劉帥. 廣西大學, 2015(01)
- [3]豬卵母細胞電激活方法初探[J]. 劉帥,呂玲燕,孫俊銘,劉慶友,石德順,崔奎青. 中國畜牧雜志, 2012(23)
- [4]不同電激活參數及CB處理對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響[J]. 石俊松,羅綠花,周榮,周秀,麥然標,李紫聰,吳珍芳. 華南農業(yè)大學學報, 2012(03)
- [5]電激活參數和培養(yǎng)基對豬卵母細胞孤雌發(fā)育的影響[J]. 潘偉榮,魏太云,信吉閣,張崇義,卿玉波,魏紅江. 湖南農業(yè)大學學報(自然科學版), 2011(04)
- [6]豬成熟卵母細胞的孤雌激活及體外胚胎培養(yǎng)的研究[A]. 張文昌,王秀愛,劉鳳軍,莊益芬,陳曦,謝旭東,洪志勇,陳梅芳,葉屹峰,余翠月. 中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（上冊）, 2010
- [7]豬卵母細胞孤雌激活方法的研究[D]. 趙金鳳. 東北農業(yè)大學, 2010(05)
- [8]莆田黑豬體細胞核移植的研究[D]. 王秀愛. 福建農林大學, 2010(04)
- [9]豬卵母細胞體外成熟及胚胎培養(yǎng)的相關研究[D]. 侯文文. 安徽農業(yè)大學, 2009(07)
- [10]利用電極盤進行豬卵母細胞電激活[J]. 張玲,黃友防,何若鋼,盧晟盛,許惠艷,蘭宗寶,房慧伶,潘天彪,藍海恩,黃敏瑞,盧克煥. 安徽農業(yè)科學, 2009(15)
標簽：卵母細胞論文; 胚胎發(fā)育論文; 囊胚論文; 胚胎論文;