一、肉堿對(duì)再灌注所致心肌細(xì)胞凋亡的影響──與缺血預(yù)處理作用比較（論文文獻(xiàn)綜述）
李曉文[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信號(hào)通路探討糖心平膠囊治療糖尿病心肌病藥效及機(jī)制》文中提出研究背景糖尿病心肌?。―iabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖狀態(tài)下出現(xiàn)的以心臟結(jié)構(gòu)和功能異常為主要特征的病理改變,是糖尿病相關(guān)心臟并發(fā)癥之一。糖心平膠囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治療和改善糖尿病心臟病的中藥制劑,但其機(jī)制仍不十分明確。本研究基于北京市科委課題“十病十藥研發(fā)-治療糖尿病合并冠心病新藥糖心平膠囊成藥性研究”,整合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的研究方法,挖掘和驗(yàn)證TXPC藥效及機(jī)制。研究目的通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的研究方法挖掘并評(píng)價(jià)TXPC對(duì)DCM的治療作用及機(jī)制探究。研究方法1、方法一:本研究通過(guò)TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中藥材化學(xué)信息數(shù)據(jù)庫(kù)挖掘TXPC組方中的活性成分化合物;通過(guò)Pubchem及Swiss Target Prediction平臺(tái)預(yù)測(cè)篩選出組方作用靶點(diǎn);通過(guò)Cytoscape軟件構(gòu)建TXPC藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),利用Network Analyze插件分析篩選出TXPC組方中的核心成分;通過(guò)OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建DCM靶點(diǎn)合集;通過(guò)R Studio軟件映射出TXPC靶點(diǎn)及DCM靶點(diǎn)交集;利用String在線蛋白功能分析網(wǎng)站構(gòu)建TXPC-DCM-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò),并導(dǎo)入Cytoscape軟件進(jìn)行可視化,構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),通過(guò)Network Analyze分析篩選出PPI網(wǎng)絡(luò)的核心靶點(diǎn);通過(guò)MCODE插件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行模塊分析;最后通過(guò)Matescape在線富集分析平臺(tái)對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行GO及KEGG分析,得到核心靶點(diǎn)的生物過(guò)程（BP）、分子功能（MF）、細(xì)胞組成（CC）及富集通路分析結(jié)果。2、方法二:本實(shí)驗(yàn)采用高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射的方法制備DCM大鼠模型。在高脂飲食喂養(yǎng)4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用隨機(jī)數(shù)字法將高脂喂養(yǎng)大鼠分為模型組（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低劑量（TXPD）組及二甲雙胍組（Met）,正常飲食組為正常對(duì)照組（Control）。分組后連續(xù)給藥6周,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高劑量組分別使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC藥粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲雙胍組采用每日0.15g/kg二甲雙胍藥粉水溶液1ml/100g灌胃。給藥時(shí)于第2、4、6周測(cè)大鼠空腹血糖;給藥結(jié)束后,生化測(cè)大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,計(jì)算HOMA-IR 值;ELISA 檢測(cè)大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通過(guò)心臟病理切片觀察心肌組織損傷情況,以明確TXPC對(duì)DCM的治療作用;通過(guò)心臟超聲檢查評(píng)估心臟功能,利用舌下注射垂體后葉加壓素制備大鼠急性心肌缺血模型,觀察TXPC治療后大鼠心電圖ST-T段位移;進(jìn)一步組織學(xué)檢測(cè)DCM大鼠心肌組織 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印跡法檢測(cè)大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA轉(zhuǎn)錄水平,以探究TXPC藥效機(jī)制。研究結(jié)果1、方法一結(jié)果:糖心平組方中活性有效成分共107個(gè);核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)192個(gè),關(guān)鍵靶點(diǎn)主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通過(guò)模塊分析共聚類出4個(gè)功能模塊,其中模塊1和模塊2所包含靶點(diǎn)數(shù)目較多,對(duì)糖心平膠囊對(duì)糖尿病心肌病的整體治療效果具有較強(qiáng)的代表性;共富集到生物過(guò)程961個(gè);分子功能75個(gè);細(xì)胞組成60個(gè);信號(hào)通路218條,能通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、內(nèi)分泌抵抗等途徑發(fā)揮對(duì)DCM的治療作用。2、方法二結(jié)果:①TXPC能夠改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同時(shí)升高HDL-C水平,減輕心肌組織中的脂質(zhì)沉積,發(fā)揮調(diào)節(jié)糖脂代謝得作用;②TXPC能夠降低心肌損傷指標(biāo)CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纖維斷裂、損傷等,可能通過(guò)降低炎癥水平,發(fā)揮心肌保護(hù)效應(yīng);③TXPC能夠降低血清ET-I及TXB2,同時(shí)升高6-KPG水平,調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能,預(yù)防心肌微血管病變;④TXPC能夠降低血清MDA水平,緩解氧化應(yīng)激損傷;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,維持心臟結(jié)構(gòu)及形態(tài)的穩(wěn)定,從而發(fā)揮心肌保護(hù)的作用;⑥TXPC能抵抗加壓素所引起的ST-T抬高,提高心肌對(duì)急性心肌缺血的抵抗能力,從而發(fā)揮心臟保護(hù)的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促進(jìn)GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá),通過(guò)激活PI3K/AKT/GLUT4信號(hào)通路,調(diào)節(jié)DCM大鼠能量代謝;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同時(shí)降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表達(dá)及NF-κBmRNA轉(zhuǎn)錄,通過(guò)激活PI3K/AKT/NF-κB信號(hào)通路,發(fā)揮抑制炎癥的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表達(dá)水平,同時(shí)降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通過(guò)激活PI3K/AKT/GSK-3β信號(hào)途徑抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá),發(fā)揮抗心肌細(xì)胞損傷的作用;TXPC能促進(jìn)PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表達(dá),同時(shí)能促進(jìn)PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的轉(zhuǎn)錄水平的提高,提示TXPC對(duì)DCM治療效應(yīng)的發(fā)揮,與PI3K/AKT通路有關(guān)。研究結(jié)論1、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果顯示,TXPC能通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路,發(fā)揮對(duì)DCM的治療作用;2、TXPC能調(diào)節(jié)糖脂代謝,改善炎癥,降低氧化應(yīng)激水平,發(fā)揮血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)的作用;保護(hù)心功能、抗心肌缺血,具有心臟保護(hù)的作用;3、TXPC藥效的發(fā)揮與PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān),通過(guò)激活PI3K/AKT信號(hào)通路,從PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途徑發(fā)揮對(duì)DCM的治療作用。
張偉[2]（2021）在《參附湯對(duì)腦缺血后血腦屏障保護(hù)的協(xié)同增效作用以及機(jī)制研究》文中研究指明背景:腦卒中在中醫(yī)學(xué)上又稱為中風(fēng),是全球首要致殘因素,也是我國(guó)首位致死因素,其中缺血性腦卒中的發(fā)病率占卒中總數(shù)的86%。針對(duì)如此高發(fā)病率和高死亡率的疾病,目前國(guó)際公認(rèn)的治療方法是靜脈溶栓和/或血管內(nèi)治療,但是其只有3-4.5小時(shí)的治療時(shí)間窗,限制了疾病的治療。研究證明,血腦屏障（Blood-brainbarrier,BBB）作為腦組織和血液之間的屏障,通過(guò)維持其結(jié)構(gòu)和功能的完整性,對(duì)缺血性腦卒中的治療有著重要作用。參附湯作為益氣溫陽(yáng)固脫的代表方劑,在中國(guó)古代就有用參附湯治療中風(fēng)的記載,《馮氏錦囊·雜癥》中記載:證見(jiàn)中風(fēng),手撒口開(kāi),遺尿,參附湯用之。目前有研究顯示人參和附子中的活性單體對(duì)腦缺血后的BBB有保護(hù)作用,但是參附湯相比人參和附子單味中藥對(duì)BBB的保護(hù)是否有協(xié)同增效作用,是否可以通過(guò)脂肪酸氧化（Fatty acid oxidation,FAO）機(jī)制發(fā)揮作用,目前有一定的研究空間。目的:為探討參附湯對(duì)腦缺血后BBB的保護(hù)是否有協(xié)同增效作用,本課題首先通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)從小鼠BBB滲透性和緊密連接蛋白的表達(dá)方面進(jìn)行驗(yàn)證;然后通過(guò)體外實(shí)驗(yàn),構(gòu)建體外BBB模型,進(jìn)一步觀察參附湯含藥血清對(duì)氧糖剝奪再?gòu)?fù)氧（OGD/R）后BBB滲透的影響;最后通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)初步從FAO過(guò)程的限速酶肉堿棕櫚油轉(zhuǎn)移酶IA（CPT1A）表達(dá)方面研究參附湯的作用機(jī)制。本課題基于古方的臨床運(yùn)用基礎(chǔ),通過(guò)實(shí)驗(yàn)探索益氣溫陽(yáng)方劑參附湯對(duì)腦缺血再灌注損傷后BBB的保護(hù)是否有協(xié)同增效作用,以及具體的作用機(jī)制。方法:（1）建立小鼠大腦中動(dòng)脈阻塞缺血再灌注[MCAO（I/R）]模型和分組:建模在顯微鏡輔助下進(jìn)行,分離小鼠頸部肌肉后,將線栓從頸外動(dòng)脈插入,經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈進(jìn)入大腦前動(dòng)脈,阻斷來(lái)自栓塞一側(cè)的大腦前動(dòng)脈的血供,同時(shí)阻塞接受后交通動(dòng)脈血供的頸內(nèi)動(dòng)脈顱內(nèi)段,缺血1小時(shí)后拔栓再灌注。將所有小鼠分為5組:SHAM組、MCAO組、MCAO+紅參組（HS組）、MCAO+附子組（FZ組）和MCAO+參附組（SF組）。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探索紅參和附子單味中藥對(duì)腦缺血再灌注損傷后的BBB通透性和緊密連接蛋白的影響,以及紅參和附子配伍后的參附湯與各單味藥比較是否具有協(xié)同增效作用:對(duì)MCAO造模后15分鐘的小鼠,進(jìn)行對(duì)應(yīng)藥物灌胃處理,即HS組進(jìn)行單味紅參灌胃,FZ組進(jìn)行單味附子灌胃,SF組進(jìn)行參附湯灌胃。通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)免疫球蛋白（IgG）、微管相關(guān)蛋白2（MAP2）和閉合蛋白-5（Claudin-5）表達(dá);蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot,WB）檢測(cè)緊密連接蛋白Claudin-5、咬合蛋白（Occludin）和閉合小環(huán)蛋白1（ZO-1）的表達(dá)。（3）體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)參附湯對(duì)BBB通透性的影響:用腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（bEnd.3）建立體外BBB單層培養(yǎng)模型。用從動(dòng)物體內(nèi)提取且經(jīng)過(guò)滅菌處理的參附湯含藥血清,于造模第三天對(duì)模型進(jìn)行預(yù)處理,將造模完成的BBB模型放入低氧倉(cāng)進(jìn)行1小時(shí)的氧糖剝奪（OGD）,再經(jīng)過(guò)2小時(shí)復(fù)氧處理,模擬腦缺血再灌注損傷,復(fù)氧時(shí)用參附湯含藥血清對(duì)損傷的體外BBB模型進(jìn)行干預(yù)治療。用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖（FITC-dextran）作為熒光探針,檢測(cè)BBB的通透性。（4）研究FAO機(jī)制在參附湯保護(hù)缺血性中風(fēng)后BBB中的作用:具體造模、分組和給藥方式與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)同,用免疫熒光技術(shù)和蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)FAO的速率控制酶CPT1A的表達(dá),通過(guò)CPT1A表達(dá)分析給藥組和模型組,以及不同給藥組之間的表達(dá)差別。判斷參附湯在FAO過(guò)程中是否有協(xié)同增效作用。結(jié)果:（1）建立小鼠MCAO（I/R）模型和分組:建模以后用激光散斑成像技術(shù)和Longa評(píng)分法評(píng)價(jià)建模成功與否,最終納入實(shí)驗(yàn)組的所有MCAO模型均符合標(biāo)準(zhǔn),證明動(dòng)物造模成功。分組為SHAM組、MCAO組、MCAO+紅參組（HS組）、MCAO+附子組（FZ組）和MCAO+參附組（SF組）共五組,每組10只。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探索紅參和附子單味中藥對(duì)腦缺血再灌注損傷后的BBB通透性和緊密連接蛋白的影響,以及參附湯的協(xié)同增效作用:與SHAM組相比,其余四組均有較明顯的IgG表達(dá),說(shuō)明造模后存在BBB通透性增加現(xiàn)象。與MCAO組相比,給藥組（HS組、FZ組和SF組）的IgG滲透明顯降低（P<0.01）,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是就目前數(shù)據(jù)而言,無(wú)法確定參附湯干預(yù)治療的腦缺血后BBB保護(hù)作用是否優(yōu)于單獨(dú)的紅參或附子用藥,需要進(jìn)一步檢測(cè)。下面從緊密連接蛋白Claudin-5的熒光表達(dá)上進(jìn)一步分析差異,結(jié)果顯示所有經(jīng)過(guò)MCAO（I/R）方式造模的組別中Claudin-5表達(dá)水平均低于SHAM組,說(shuō)明造模后出現(xiàn)BBB的損傷。與MCAO組相比較,所有給藥組（HS組、FZ組和SF組）的Claudin-5的表達(dá)水平均有較大程度提高（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步通過(guò)分析SF組與HS組、FZ組的差異,發(fā)現(xiàn)參附湯用藥對(duì)緊密連接蛋白Claudin-5的表達(dá)高于紅參和附子單獨(dú)用藥的表達(dá)（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步通過(guò)WB技術(shù)檢測(cè)緊密蛋白Occludin、ZO-1和Claudin-5的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,HS組和FZ組的Occludin表達(dá)與MCAO組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是SF組Occludin的表達(dá)明顯高于MCAO組,效果較突出（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在Claudin-5的表達(dá)上,HS組與FZ組與MCAO模型組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但SF組的表達(dá)比MCAO組強(qiáng)（P<0.05）,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SF組的ZO-1表達(dá)明顯高于MCAO組（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Occludin和Claudin-5表達(dá)相同,HS組和FZ組與MCAO組相比無(wú)明顯差異。（3）體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)參附湯對(duì)BBB通透性的影響:實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BBB的跨膜電阻大約在建模的第三天增加明顯,建模的第5-6天達(dá)到最高峰,提示建模成功。在電阻達(dá)到峰值時(shí),進(jìn)一步通過(guò)4h滲漏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),4h后小室內(nèi)外液面下降小于0.1 mm,進(jìn)一步證實(shí)體外BBB模型建成。進(jìn)一步檢測(cè)FITC-dextran急性期的滲漏情況,結(jié)果顯示參附湯含藥血清干預(yù)對(duì)OGD/R造成的BBB損傷有所降低,提示參附湯的BBB保護(hù)作用。進(jìn)一步論證發(fā)現(xiàn),參附湯血清干預(yù)的各組均比OGD模型組的FITC-dextran 的滲透率低（P<0.05）,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其中以 20%高劑量參附湯血清組的作用最顯著（P<0.01）,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯。進(jìn)一步分析不同濃度參附湯血清組之間的差異,發(fā)現(xiàn)5%參附湯血清組和10%參附湯血清組與20%參附湯血清組相比無(wú)明顯區(qū)別,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是20%參附湯血清組的滲透率比5%參附湯血清組和10%參附湯血清組的低（P<0.05）,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。判斷20%濃度的參附湯對(duì)OGD處理的體外BBB保護(hù)作用更強(qiáng)。但鑒于附子有一定毒副作用,參附湯含藥血清的濃度與BBB保護(hù)程度之間的關(guān)系有待進(jìn)一步商榷。（4）研究FAO機(jī)制在參附湯保護(hù)缺血性中風(fēng)后BBB中的作用:免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示,HS組、FZ組和SF組的CPT1A表達(dá)均高于MCAO組（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步論證給藥組之間是否有差異,將HS組和FZ組分別與SF組進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)SF組的CPT1A表達(dá)明顯高于其他兩組（P<0.01）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證明在FAO的過(guò)程中,紅參與附子協(xié)同作用的效果優(yōu)于其單獨(dú)作用的效果。WB結(jié)果顯示,通過(guò)MCAO造模后,血管內(nèi)皮細(xì)胞的FAO水平降低,除SHAM組以外,各組的CPT1A表達(dá)均有所降低。但是與MCAO組相比,給藥處理的HS組、FZ組和SF組的CPT1A表達(dá)水平有所提升（P<0.05）,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1、研究發(fā)現(xiàn)參附湯對(duì)腦缺血再灌注損傷后的BBB具有保護(hù)作用,參附湯與方中各個(gè)單味藥相比具有協(xié)同增效作用。2、初步作用機(jī)制的研究結(jié)果顯示,SF組能夠增加FAO限速酶CPT1A的表達(dá),且與各個(gè)單味藥比較具有協(xié)同增效作用,說(shuō)明參附湯對(duì)BBB的保護(hù)可能是通過(guò)FAO機(jī)制,但是具體上下游通路有待進(jìn)一步探究。
李瑛[3]（2020）在《苦碟子注射液與臨床常用藥物配伍應(yīng)用的可行性研究》文中認(rèn)為近年來(lái),冠心病等心肌缺血類疾病的發(fā)病率逐年增長(zhǎng),嚴(yán)重威脅人們的健康。作為一種活血化瘀的中藥注射液,苦碟子注射液由菊科植物抱莖苦荬菜（Ixeris sonchifolia Hance）經(jīng)提取、精制而成,目前已被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療心肌缺血、冠心病、中風(fēng)、腦梗塞等疾病。在臨床使用中,苦碟子注射液常與不同溶媒和其他藥物配伍合用,但臨床配伍合用仍存在兩個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題,第一,藥物配伍合用是否具有可行性,不同藥物之間是否存在配伍禁忌,是否會(huì)造成不良反應(yīng)的發(fā)生;第二,藥物配伍合用是否會(huì)影響藥物的穩(wěn)定性而導(dǎo)致臨床療效降低。針對(duì)目前存在的關(guān)鍵問(wèn)題,本研究從體外藥物配伍的化學(xué)穩(wěn)定性、體內(nèi)配伍藥效角度開(kāi)展苦碟子注射液與臨床常用藥物配伍應(yīng)用的可行性研究,以期為臨床上安全合理合用藥物提供參考。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)論如下:（一）苦碟子注射液與常用藥物配伍的化學(xué)穩(wěn)定性研究基于藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則并模擬苦碟子注射液臨床常用藥物濃度,以0.9%氯化鈉注射液與5%葡萄糖注射液為溶媒,考察苦碟子注射液與兩種常用配伍藥物（注射用鹽酸頭孢替安、鹽酸川芎嗪注射液）在4℃、室溫、30℃環(huán)境下配伍溶液的外觀、p H值、不溶性微粒、吸光度及有效成分含量的變化情況。結(jié)果表明,苦碟子注射液與上述兩種溶媒及藥物配伍后,配伍溶液在8h內(nèi)未出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象,p H值、吸光度與有效成分含量在配伍8h內(nèi)均未發(fā)生明顯變化,不溶性微粒存在明顯變化及超出藥典規(guī)定范圍的現(xiàn)象。綜合各項(xiàng)研究結(jié)果,苦碟子注射液與注射用鹽酸頭孢替安、鹽酸川芎嗪注射液在臨床上配伍使用時(shí),應(yīng)注意選擇溶媒,盡早用完。研究發(fā)現(xiàn),苦碟子注射液與0.9%氯化鈉注射液及鹽酸川芎嗪注射液配伍較為穩(wěn)定,后續(xù)可進(jìn)行體內(nèi)相關(guān)研究。（二）基于代謝組學(xué)的苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血作用機(jī)制研究本實(shí)驗(yàn)采用異丙腎上腺素（ISO）建立大鼠心肌缺血模型并給予藥物,通過(guò)生化指標(biāo)檢測(cè)和心臟病理組織切片對(duì)比觀察,發(fā)現(xiàn)苦碟子注射液和鹽酸川芎嗪配伍應(yīng)用對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用更為突出。此外,采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)進(jìn)行無(wú)靶向代謝組學(xué)分析,經(jīng)多元統(tǒng)計(jì)分析篩選得到17個(gè)心臟組織標(biāo)志物和16個(gè)血漿標(biāo)志物,其主要調(diào)控鞘脂代謝,甘油磷脂代謝,色氨酸代謝,谷胱甘肽代謝,亞麻酸代謝,甾類激素生物合成等通路。本研究結(jié)果顯示,相較于單獨(dú)用藥,苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍可回調(diào)更多的代謝物,且代謝物水平變化倍數(shù)較大,表明苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍對(duì)代謝物回調(diào)程度明顯,療效突出。本研究從藥效角度反映了苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍應(yīng)用可明顯增強(qiáng)對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用,為進(jìn)一步探究其對(duì)心肌缺血的保護(hù)機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。（三）基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血作用機(jī)制研究基于以上研究,本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)分析苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍前后的保護(hù)作用機(jī)制,以藥效成分和回調(diào)的心肌缺血代謝物挖掘預(yù)測(cè)潛在的靶點(diǎn),進(jìn)一步整合構(gòu)建“成分-作用靶點(diǎn)-疾病”調(diào)控網(wǎng)絡(luò),通過(guò)對(duì)潛在靶點(diǎn)的相關(guān)通路分析,探討其“多成分-多靶點(diǎn)-多途徑”的作用機(jī)制。本研究篩選出藥效成分可以調(diào)節(jié)心肌缺血代謝紊亂的靶點(diǎn)蛋白110個(gè),藥物配伍既可作用與苦碟子注射液和鹽酸川芎嗪的共有靶點(diǎn)Faah、Drd2等;同時(shí)也可作用于苦碟子注射液和鹽酸川芎嗪的作用靶蛋白,例如Ace、Kcnk2、Ccr1等;對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍應(yīng)用可作用于更多的靶點(diǎn)和通路,如鈣信號(hào)通路、神經(jīng)活性配體受體相互作用通路、環(huán)磷酸腺苷信號(hào)通路等,其藥效成分可能通過(guò)作用于上述信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子而改善心肌缺血。本研究證實(shí)苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪配伍應(yīng)用可共同發(fā)揮對(duì)心肌缺血的預(yù)防作用,可協(xié)同增效影響代謝物水平,對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用更為突出。
周海燕[4]（2020）在《基于Akt-FoxO1通路研究T1AM在心肌缺血再灌注損傷中抑制細(xì)胞代謝和凋亡的作用機(jī)制》文中研究指明缺血性心臟病是危害人類健康的重要疾病。早期血運(yùn)重建是目前治療缺血性心臟病最有效的治療手段,但是血運(yùn)重建常伴發(fā)心肌缺血/再灌注損傷,后者常導(dǎo)致心肌頓抑、心律失常及細(xì)胞死亡,因此深入探討缺血再灌注損傷的機(jī)制對(duì)保護(hù)心肌有重要的價(jià)值。治療性低溫能顯著縮小缺血再灌注損傷所致梗死面積,尋找降低體溫藥物有望為急性心肌梗死的心肌保護(hù)提供更有效方法。目的:1.研究降低體溫藥物3-碘甲狀腺原氨酸（3-Iodothyronamine,T1AM）在心肌缺血再灌注損傷中的作用;2.探索T1AM是否通過(guò)Akt/Fox O1信號(hào)通路減少心肌缺血再灌注損傷;3.探討T1AM是否通過(guò)調(diào)控Akt/Fox O1信號(hào)通路抑制心肌細(xì)胞代謝從而減少心肌細(xì)胞凋亡,尋找防治缺血再灌注有效的手段。方法:1.在體內(nèi),腹腔注射T1AM及溶劑對(duì)照,記錄正常大鼠肛溫變化情況;建立大鼠心肌缺血再灌注模型,給予冠狀動(dòng)脈左前降支缺血30 min,再灌注3 h。所有動(dòng)物隨機(jī)分為三組:（1）假手術(shù)組:只開(kāi)胸,不結(jié)扎線;（2）模型組:造模前腹腔注射給予對(duì)照溶劑后再將冠狀動(dòng)脈左前降支缺血30 min,再灌注3 h;（3）給藥組:造模前腹腔注射給予T1AM后再將冠狀動(dòng)脈左前降支缺血30 min,再灌注3 h。利用心電圖檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠ECG變化;利用心臟超聲檢測(cè)各組大鼠心臟左室壁活動(dòng)度及其射血分?jǐn)?shù);利用TTC染色觀察大鼠心肌梗死面積;利用透射電鏡觀察大鼠心肌細(xì)胞線粒體變化;利用血清標(biāo)本檢測(cè)其CK,CK-MB及LDH變化;利用Western Blot觀察各組Fox O1,Akt,p-Fox O1,PPARα,Glut1,Bcl-2及其Bax表達(dá)的變化。2.體外傳代培養(yǎng)AC-16細(xì)胞,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為四組（1）AC-16組:細(xì)胞常氧條件下培養(yǎng),給予對(duì)照溶劑處理;（2）T1AM組:細(xì)胞常氧條件下培養(yǎng),給予2μM T1AM處理AC-16細(xì)胞;（3）H/R組:給予對(duì)照溶劑處理后心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h;（4）H/R+T1AM組:給予2μM T1AM處理后心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h。利用RNA-Seq觀察各組細(xì)胞之間差異表達(dá)基因;利用韋恩圖分析共同的差異基因;利用KEGG分析差異表達(dá)基因主要涉及的信號(hào)通路;利用RT-q PCR法驗(yàn)證差異基因的表達(dá)的可靠性。3.體外傳代培養(yǎng)AC-16細(xì)胞,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為七組（1）AC-16組:細(xì)胞常氧條件下培養(yǎng),給予對(duì)照溶劑處理;（2）T1AM組:細(xì)胞常氧條件下培養(yǎng),給予2μM T1AM處理AC-16細(xì)胞;（3）H/R組:給予對(duì)照溶劑處理后,心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h;（4）H/R+0.5μM T1AM組:給予0.5μM T1AM處理后,心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4h。（5）H/R+2μM T1AM組:給予2μM T1AM處理后,心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h。（6）H/R+5μM T1AM組:給予5μM T1AM處理后,心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h。（7）H/R+2μM T1AM+30 n M AS1842856組:給予2μM T1AM和30 n M AS1842856處理后,心肌細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h。利用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化;利用葡萄糖攝取比色法測(cè)定各組細(xì)胞細(xì)胞葡萄糖攝取;利用乳酸比色法測(cè)定各組細(xì)胞乳酸生成;利用Annexin V-PI檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡及壞死的比例;Western Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)Akt,Fox O1,p-Fox O1,PPARα,Gck,Glut1,Bax及Bcl-2蛋白水平的表達(dá);q RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)Akt,Fox O1,PPARα,Gck分子水平的表達(dá)。結(jié)果:1.在體內(nèi),給予正常大鼠T1AM后,大鼠體溫迅速下降,最低可降至32.68+1.08℃（P<0.01）;較假手術(shù)組比較,缺血再灌注模型組心臟超聲顯示大鼠心室壁活動(dòng)減弱,EF值為明顯降低（P<0.001）,TTC染色顯示心肌缺血面積明顯增大,透射電鏡結(jié)果提示線粒體內(nèi)外膜間隙較大,線粒體腫脹,心肌酶學(xué)結(jié)果提示,血清中CK,CK-MB及其LDH明顯升高（P<0.001）;與心肌缺血再灌注組相比,T1AM組心臟超聲顯示大鼠心室壁活動(dòng)增強(qiáng),射血分?jǐn)?shù)和左室短軸收縮率明顯增加（P<0.001,P<0.005）,TTC染色顯示心肌缺血面積明顯縮小,透射電鏡結(jié)果提示線粒體腫脹程度明顯減弱,心肌酶譜檢測(cè)結(jié)果提示血清中CK,CK-MB及LDH明顯降低;Western Blot結(jié)果提示,較假手術(shù)組比較,缺血再灌注組Fox O1,PPARα,Bcl-2表達(dá)明顯下降,p-Fox O1,Bax及其Glut1表達(dá)明顯增加;較缺血再灌注組比較,T1AM組Fox O1,PPARα,Bcl-2明顯上調(diào),Akt,p-Fox O1,Bax及其Glut1表達(dá)明顯下降。2.在細(xì)胞水平,CCK-8測(cè)定細(xì)胞活性,相對(duì)于正常對(duì)照組,缺氧24 h復(fù)氧4 h后細(xì)胞活性為62.47%+3.49%（P<0.001）;T1AM對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)濃度呈鐘型對(duì)稱,低濃度T1AM可以明顯提高缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞存活率,但隨著T1AM濃度（20μM,60μM）繼續(xù)增加,T1AM對(duì)心肌細(xì)胞AC-16產(chǎn)生毒性,細(xì)胞存活率逐漸降低。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用低濃度T1AM作用于心肌細(xì)胞,缺氧/復(fù)氧模型采用細(xì)胞缺氧24 h,復(fù)氧4 h方案進(jìn)行。RNA-Seq分析四組之間差異表達(dá)基因結(jié)果提示,相對(duì)于缺氧/復(fù)氧組,缺氧/復(fù)氧藥物處理后,表達(dá)上調(diào)基因有142個(gè),下調(diào)基因有68個(gè);相對(duì)于正常對(duì)照組,T1AM組表達(dá)上調(diào)的基因有89個(gè),下調(diào)的基因僅有9個(gè);相對(duì)于正常對(duì)照組,缺氧/復(fù)氧組表達(dá)上調(diào)基因有1215個(gè),下調(diào)的基因有452個(gè)。通過(guò)韋恩圖進(jìn)行分析,H/R vs.AC-16的差異基因和T1AM+H/R vs.H/R的差異基因,有135個(gè)基因重疊出現(xiàn),這些基因經(jīng)KEGG通路分析提示,差異表達(dá)基因主要富集到HIF-1信號(hào)通路,Fox O信號(hào)通路,p53信號(hào)通路,氨基酸合成信號(hào)通路,花生四烯酸代謝,α亞麻酸代謝信號(hào)通路,蛋白消化及吸收等信號(hào)通路上。GO分析結(jié)果提示,共同差異基因表達(dá)主要富集在細(xì)胞代謝過(guò)程等生物過(guò)程中。通過(guò)q RT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果提示,q RT-PCR結(jié)果與RNA-Seq結(jié)果一致,確保RNA-Seq結(jié)果的可靠性。3.在細(xì)胞水平,通過(guò)CCK-8檢測(cè)發(fā)現(xiàn),T1AM作用于正常AC-16細(xì)胞24 h,藥物IC50為62μM;通過(guò)倒置顯微鏡下觀察AC-16細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,AC-16組細(xì)胞之間連接緊密,核仁清晰可見(jiàn),H/R組可見(jiàn)細(xì)胞死亡增多,失去固有形態(tài),2μM T1AM可使缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞恢復(fù)細(xì)胞間的緊密連接及其細(xì)胞固有的形態(tài);通過(guò)細(xì)胞能量代謝實(shí)時(shí)測(cè)定發(fā)現(xiàn),與AC-16組比較,隨著T1AM濃度增加,線粒體呼吸曲線明顯降低,但在加入Fox O1抑制劑（30 n M AS1842856）,該呼吸曲線的降低效應(yīng)可以被恢復(fù);通過(guò)葡萄糖比色法及乳酸比色法發(fā)現(xiàn),與常氧組進(jìn)行對(duì)比,缺氧/復(fù)氧可以引起AC-16細(xì)胞葡萄糖攝取明顯增加（P<0.005）,乳酸生成明顯增加（P<0.01）,與缺氧/復(fù)氧組對(duì)比,隨T1AM濃度增加,AC-16細(xì)胞攝取葡萄糖逐漸減少,乳酸生成亦逐漸減少,與2μM T1AM+H/R組對(duì)比,30 n M AS1842856（Fox O1抑制劑）可明顯逆轉(zhuǎn)T1AM減少AC-16細(xì)胞攝取葡萄糖的現(xiàn)象及乳酸生成的現(xiàn)象（P<0.01）;通過(guò)Annexin V/PI染色發(fā)現(xiàn),與正常對(duì)照相比,缺氧/復(fù)氧組細(xì)胞凋亡比例明顯增加（P<0.01）,加入低濃度T1AM,使得細(xì)胞凋亡比例明顯減少（2μM T1AM:P<0.01;5μM T1AM:P<0.005）,加入Fox O1抑制劑（30n M AS1842856）,細(xì)胞的凋亡比例又明顯增加,該現(xiàn)象可以被恢復(fù)（P<0.005）;在蛋白水平上,隨著T1AM濃度增加,細(xì)胞內(nèi)Akt1,p-Fox O1,Glut1,Bax表達(dá)量明顯減少,Fox O1,PPARα,Bcl-2表達(dá)明顯增加,但應(yīng)用Fox O1抑制劑AS1842856后,Akt的表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）,p-Fox O1,Bax,Glut1的表達(dá)明顯增加,Fox O1,PPARα及Bcl-2的表達(dá)明顯降低,Fox O1抑制劑可以明顯回復(fù)p-Fox O1,Fox O1,Glut1,Bcl-2,Bax及其PPARα的表達(dá),但無(wú)論是T1AM還是Fox O1抑制劑對(duì)Gck的表達(dá)都無(wú)明顯差異（P>0.05）。在分子水平上,隨著T1AM濃度增加,細(xì)胞內(nèi)Akt1表達(dá)量明顯減少,細(xì)胞內(nèi)Fox O1,PPARα表達(dá)明顯增加,應(yīng)用Fox O1抑制劑AS1842856后,Akt的表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）,Fox O1及PPARα的表達(dá)明顯降低（P<0.01）。結(jié)論:1.T1AM可以減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷,保護(hù)心肌細(xì)胞。2.與常氧組比較,缺氧/復(fù)氧損傷對(duì)心肌細(xì)胞差異基因顯著,T1AM可以通過(guò)代謝相關(guān)通路減少心肌細(xì)胞（AC-16細(xì)胞）缺氧/復(fù)氧損傷。3.T1AM可通過(guò)調(diào)控Akt/Fox O1信號(hào)通路降低心肌細(xì)胞代謝從而減少細(xì)胞凋亡。
潘有梅[5]（2020）在《游離肉堿與急性心肌損傷的相關(guān)研究》文中提出目的:探索血清游離肉堿含量與急性心肌損傷嚴(yán)重程度及預(yù)后的相關(guān)性。方法:收集2015年10月至2019年10月期間,就診大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院內(nèi)科重癥監(jiān)護(hù)病房的急性心肌損傷患者51例（急性心肌損傷組）和普通病房的非急性心肌損傷患者52例（對(duì)照組）,收集一般資料,包括姓名、性別、年齡、基礎(chǔ)疾病、超敏肌鈣蛋白I、心電圖、住院28天生存預(yù)后,24小時(shí)急性生理和慢性健康評(píng)分（APACHEⅡ評(píng)分）,同時(shí)檢測(cè)患者24小時(shí)血清脂肪酸代謝譜（游離肉堿）。對(duì)比急性心肌損傷組與對(duì)照組血清游離肉堿含量,分析其差異性;根據(jù)APACHEⅡ評(píng)分將急性心肌損傷組分為A組（0<APACHEⅡ評(píng)分≤15）、B組（15<APACHEⅡ評(píng)分≤30）、C組（APACHEⅡ評(píng)分>30）3組,分析各組血清游離肉堿含量及超敏肌鈣蛋白I（hs-c Tn I）含量的差異性與相關(guān)性;根據(jù)患者28天預(yù)后情況,將急性心肌損傷組患者分為存活組與死亡組,分析其與血清游離肉堿含量的相關(guān)性。結(jié)果:1.急性心肌損傷組（51例）血清游離肉堿含量（24.93±9.90）μmol/L,對(duì)照組（52例）血清游離肉堿含量（31.22±10.77）μmol/L,兩組血清游離肉堿含量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）。2.急性心肌損傷組中血清游離肉堿含量（24.93±9.90）μmol/L與血清hs-c Tn I含量（0.57±0.18）ng/m L存在負(fù)相關(guān)性（r=-0.287,p=0.041<0.05）,與APACHEⅡ評(píng)分（25.88±9.81）分存在負(fù)相關(guān)性（r=-0.420,p=0.002<0.05）,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.急性心肌損傷組根據(jù)APACHEⅡ評(píng)分分為A組（10例）、B組（21例）、C組（20例）3組。3組血清游離肉堿含量分別為A組（30.11±12.19）μmol/L,B組（27.17±9.59）μmol/L,C組（19.99±6.74）μmol/L,3組血清游離肉堿含量存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（H=9.451,p=0.009<0.05）;3組血清hs-c Tn I含量分別為A組（0.44±0.13）ng/m L,B組（0.53±0.14）ng/m L,C組（0.67±0.19）ng/m L,3組血清hs-c Tn I含量存在統(tǒng)計(jì)差異（H=13.306,p=0.001<0.05）。4.急性心肌損傷組根據(jù)28天預(yù)后分為存活組（33例）與死亡組（18例）。血清游離肉堿含量存活組為（26.67±10.56）μmol/L,死亡組為（21.75±7.86）μmol/L,兩組血清游離肉堿含量不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.729,p=0.090>0.05）;APACHEⅡ評(píng)分存活組為（21.88±7.97）分,死亡組為（33.22±8.67）分,兩組APACHEⅡ評(píng)分具有顯著差異性（t=-4.710,p=0.000<0.05）;血清hs-c Tn I含量存活組為（0.53±0.15）ng/m L死亡組為（0.64±0.21）ng/m L,兩組血清hs-c Tn I含量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=-2.165,p=0.035<0.05）。結(jié)論:急性心肌損傷患者較非急性心肌損傷患者血清游離肉堿含量低,急性心肌損傷患者血清游離肉堿含量越低其心肌損傷越嚴(yán)重。所以,血清游離肉堿含量可能成為評(píng)估急性心肌損傷患者病情嚴(yán)重程度的生物學(xué)標(biāo)志物。
方曉玲[6]（2019）在《二甲雙胍保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制研究》文中研究表明第一部分二甲雙胍保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用研究目的:探討二甲雙胍干預(yù)后對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的抵抗作用。方法:選取SPF級(jí)2日齡Wistar大鼠乳鼠40只,應(yīng)用結(jié)扎前降支冠脈的方法構(gòu)建心肌缺血再灌注損傷的大鼠模型,將大鼠分成三組:心肌缺血再灌組,假手術(shù)組和二甲雙胍治療組。在缺血30min和再灌注2小時(shí)檢測(cè)各組指標(biāo)并收集。各組大鼠的心肌梗死面積通過(guò)心肌染色法檢測(cè)比較;應(yīng)用HE染色方法觀察心肌的病理學(xué)形態(tài)變化;應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肌鈣蛋白和肌酸激酶水平指標(biāo);應(yīng)用WST-1法檢測(cè)大鼠血漿SOD活力;應(yīng)用微量酶標(biāo)法檢測(cè)大鼠血漿LDH活力;各組血清TNF-α和IL-6濃度通過(guò)ELISA方法檢測(cè)比較,各組血漿MDA的濃度通過(guò)硫代巴比妥鈉酸法（TBA）檢測(cè)比較;大鼠心臟功能通過(guò)P-V導(dǎo)管監(jiān)測(cè)系統(tǒng)評(píng)估比較。結(jié)果:1、HE染色顯示缺血再灌注損傷組心肌細(xì)胞排列紊亂,胞漿腫脹,心肌纖維斷裂溶解,間隙增寬伴有水腫,間質(zhì)有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及紅細(xì)胞外滲;假手術(shù)組大鼠的心肌細(xì)胞排列整齊,包膜完整,間質(zhì)中無(wú)紅細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤(rùn);二甲雙胍治療組大鼠的心肌細(xì)胞排列稍紊亂,間質(zhì)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和少量紅細(xì)胞外滲,二甲雙胍治療組大鼠心肌損傷程度比缺血再灌注組較輕。TTC染色結(jié)果顯示假手術(shù)組大鼠心肌正常,未發(fā)生心肌梗死,二甲雙胍治療組大鼠的心肌梗死范圍比缺血再灌注損傷組明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（56.7±4.2%vs 30.2±3.6%,P<0.05）。2、缺血再灌注損傷組大鼠的肌鈣蛋白（37.82±5.13ng/mL vs 4.33±0.70ng/mL）、心肌酶譜（160.53±27.41ng/mL vs 75.52±12.13ng/mL）、TNF-α（1.60±0.14ng/mL vs（0.68±0.10ng/mL））、IL-6（180.80±10.29ng/mL vs 76.18±8.19ng/mL）、乳酸脫氫酶（5908.38±784.47 U/L vs 2498.04±480.15 U/L）和MDA 含量（11.41±1.91nmol/m L vs 5.11±1.02nmol/mL）比假手術(shù)顯著上升,SOD活性明顯減少（76.49±10.61 U/mL vs 123.72±12.26 U/mL）,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而二甲雙胍治療組大鼠的心肌酶譜（116.22±24.80ng/mL vs 160.53±27.41ng/mL）、肌鈣蛋白（22.13 ±3.84ng/mL vs 37.82±5.13ng/mL）、TNF-α（1.02±0.12ng/mL vs 1.60±0.14ng/mL）、IL-6（128.47±9.68ng/mL vs 180.80±10.29ng/mL）、乳酸脫氫酶（4778.03±803.38 U/L vs 5908.38±784.47 U/L）和 MDA 含量（7.86±1.52nmol/mL vs 11.41 ±1.91nmol/mL）比缺血再灌注損傷組明顯下降,SOD活性顯著增加（105.81±14.78 U/mL vs 76.49±10.61 U/mL）,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。3、缺血再灌注損傷組在再灌注 1 周（EF:25.02%±2.31%vs 62.04%±4.24%,PRSW:42.01±3.69mmHg vs 119.03±6.11mmHg）和1 月（EF:39.01%±4.38%vs 60.00%±5.08%,PRSW:39.28±2.89mmHg vs 121.13±6.26mmHg）不同時(shí)間點(diǎn)的缺血再灌注損傷大鼠的每搏功-舒張末期容積關(guān)系即前負(fù)荷可補(bǔ)充的心室搏出功（PRSW）和左室射血分?jǐn)?shù)（EF）比假手術(shù)組明顯下降,與缺血再灌注損傷組相比,二甲雙胍治療組大鼠的PRSW（1周:96.04±5.77mmHg,1 月:106.45±5.75mmHg）和 EF 值（1 周:46.04%±3.12%,1 月:56.02%±4.82%）顯著上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論:二甲雙胍能夠減少心肌缺血再灌注損傷大鼠中的心肌損傷反應(yīng),血清炎癥因子水平以及氧化應(yīng)激反應(yīng),改善大鼠的心臟功能。第二部分二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷中心肌細(xì)胞凋亡的作用研究目的:探討二甲雙胍對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷中心肌細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制。方法:隨機(jī)選取Wistar大鼠乳鼠40只,在無(wú)菌操作條件下剪取心臟,大鼠心肌細(xì)胞通過(guò)原代培養(yǎng),體外建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷（H/R）的模型。將大鼠分成4組:空白對(duì)照組、二甲雙胍組、H/R組和二甲雙胍+H/R組。各組原代大鼠心肌細(xì)胞的凋亡率通過(guò)TUNEL試劑盒檢測(cè)比較;各組原代大鼠心肌細(xì)胞的活性通過(guò)CCK-8法檢測(cè)比較;各組原代大鼠心肌細(xì)胞的HIF-1 α mRNA相對(duì)表達(dá)量通過(guò)Rea-time PCR檢測(cè);各組原代大鼠心肌細(xì)胞的Bcl-2和Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量通過(guò)Western Blot檢測(cè)比較。結(jié)果:與空白對(duì)照組[（6.8±1.4）%]相比,H/R組[（38.7±3.4）%]大鼠原代心肌細(xì)胞的凋亡率顯著增加（P<0.001）,細(xì)胞活性明顯降低（0.7±0.1 vs 1.5±0.4,P<0.001）;與H/R組相比,二甲雙胍能顯著減少心肌細(xì)胞凋亡率[（22.5±2.3）%vs（38.7±3.4）%,P<0.001],明顯促進(jìn)細(xì)胞活性（1.1±0.2 vs 0.7±0.1,P<0.001）;Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示HIF-1 α mRNA相對(duì)表達(dá)量在二甲雙胍+H/R組大鼠心肌中顯著減少（0.90±0.12 vs 2.21±0.52）,Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示Bcl-2蛋白相對(duì)表達(dá)量在二甲雙胍+H/R組明顯上升（0.7±0.2 vs 0.5±0.2）,Bax蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯減少（1.4±0.3 vs 1.8±0.4）,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:在大鼠缺血-再灌注損傷過(guò)程中,二甲雙胍能夠降低心肌細(xì)胞的凋亡,其作用機(jī)制可能是促進(jìn)心肌細(xì)胞活性,減少HIF-1 α表達(dá),以及增加凋亡抑制因子Bcl-2表達(dá)和減少Bax表達(dá)。第三部分二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞自噬功能的作用研究目的:探討二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞心肌細(xì)胞自噬功能的影響。方法:采用結(jié)扎前降支冠脈的方法建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型,將大鼠分成如下3組:假手術(shù)組,對(duì)照組和治療組。治療組中的大鼠每天通過(guò)灌胃方式給予二甲雙胍200mg/kg,治療持續(xù)時(shí)間總共12周;以生理鹽水作為對(duì)照。在術(shù)后4周、8周、12周的不同時(shí)間點(diǎn)上分別檢測(cè)并收集大鼠的心臟彩超指標(biāo)。全部大鼠在治療12周后通過(guò)24h禁食后處死,檢測(cè)各組大鼠心肌細(xì)胞自噬率;應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)Cathepsin D和Beclin-1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:超聲心動(dòng)圖顯示建模后4周心肌收縮功能減弱,二甲雙胍組干預(yù)12周后的左室射血分?jǐn)?shù)（1VEF）比對(duì)照組顯著升高（0.716±0.002 vs 0.618±0.036,P<0.05）,而兩組之間其他心臟彩超指標(biāo)如收縮末期室間隔厚度（IVSs）、收縮末期左心室后壁厚度（LVPWs）、舒張末期室間隔厚度（IVSd）和舒張末期左心室后壁厚度（LVPWd）差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組（39.15%±4.26%）相比,治療組（21.65%±3.82%）心肌細(xì)胞自噬率明顯降低（P<0.05）;對(duì)照組的Beclin-1和Cathepsin D蛋白表達(dá)（0.867±0.005和0.812±0.002）顯著高于假手術(shù)組（0.223±0.002和0.327±0.002）,治療組（0.412±0.002和0.646±0.003）則較對(duì)照組明顯降低（P<0.05）.結(jié)論:二甲雙胍能降低心肌細(xì)胞自噬發(fā)生,改善心肌缺血再灌注損傷的心臟收縮功能。第四部分二甲雙胍對(duì)急性心肌梗死患者行PCI術(shù)后損傷的保護(hù)作用目的:探討二甲雙胍對(duì)急性心肌梗死后行PCI手術(shù)的效果以及可能的機(jī)制。方法:選擇從2016年1月至2018年3月本院收治的急性心肌梗死進(jìn)行PCI手術(shù)的80例糖尿病患者作為研究對(duì)象。根據(jù)心梗前服用二甲雙胍藥物情況將患者分為觀察組（40例）和對(duì)照組（40例）,所有患者均給予常規(guī)治療,對(duì)照組患者沒(méi)有口服二甲雙胍藥物,觀察組患者在心梗前口服過(guò)二甲雙胍藥物治療,兩組患者的治療均為1個(gè)月,比較兩組患者的PCI術(shù)后的心絞痛治療效果,心絞痛持續(xù)時(shí)間和發(fā)作頻率,血清炎癥因子,心電圖改善,心臟收縮功能和藥物不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果:觀察組患者的心絞痛治療總有效率為92.5%,療效明顯高于對(duì)照組（72.5%）,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.039）;治療1個(gè)月后,與對(duì)照組相比,觀察組患者的血清炎癥因子IL-6（18.58±2.69pg/mL vs 24.08±3.27 pg/mL）和TNF-α水平（129.75±21.68pg/mL vs 180.38±25.19pg/mL）明顯降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;治療1個(gè)月后,與對(duì)照組相比,觀察組患者的心絞痛持續(xù)時(shí)間（5.7±1.3min/次vs 2.9±0.8 min/次）和發(fā)作頻率（10.8±2.4次/周vs 2.5±0.6次/周）明顯減少,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;在心電圖改善方面,觀察組患者明顯優(yōu)于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（90.0%vs 70.0%,P<0.05）;在心臟功能方面,觀察組患者左室舒張末期內(nèi)徑（LVDD）明顯小于對(duì)照組（52.07±5.46mmvs 54.77±5.69mm,P<0.05）,左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）顯著高于對(duì)照組（69.27%±6.05%vs 64.79%±5.75%,P<0.05）,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在總不良反應(yīng)發(fā)生率方面,兩組患者之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:心梗前應(yīng)用二甲雙胍能夠使PCI手術(shù)治療冠心病心絞痛療效顯著,并且不良反應(yīng)少,能夠改善心功能以及降低IL-6和TNF-a表達(dá)水平。
韓雪[7]（2019）在《基于TLR4/MAPKs/NF-κB信號(hào)通路和鈣通道的6-姜酚心肌保護(hù)作用及機(jī)制研究》文中指出氧化應(yīng)激、免疫炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和鈣離子超載等是導(dǎo)致心肌損傷的重要生物學(xué)事件。心肌缺血損傷時(shí),Toll樣受體4/核因子кB（TLR4/NF-кB）信號(hào)通路激活,氧自由基和細(xì)胞炎性因子大量釋放,絲裂原活化蛋白激酶族（MAPKs）信號(hào)被激活,使轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞蛋白磷酸化,加劇炎癥反應(yīng),誘發(fā)細(xì)胞凋亡,引起細(xì)胞壞死。因此,TLR4/MAPKs/NF-кB信號(hào)通路與心肌損傷密切相關(guān)。鈣超載參與心肌損傷的發(fā)病機(jī)制,可能與引起心律失常、細(xì)胞過(guò)度攣縮、線粒體Ca2+積累有關(guān)。外源性Ca2+主要通過(guò)L-型鈣通道進(jìn)入細(xì)胞,L-型鈣通道阻滯劑能夠通過(guò)抑制鈣通道來(lái)保護(hù)心肌缺血損傷。因此,可以削弱L-型Ca2+電流(ICa-L)的藥物有望用于心肌保護(hù)。生姜中有效成分6-姜酚（6-Gingerol,6-Gin）具有抗炎、降血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化等藥理活性,在心血管疾病中發(fā)揮重要作用,但是6-Gin心肌保護(hù)作用分子機(jī)制尚未可知。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn),基于TLR4/MAPKs/NF-кB信號(hào)通路和鈣通道對(duì)6-Gin心肌保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。第一部分6-Gin對(duì)心肌纖維化小鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究目的:基于TLR4/MAPKs/NF-кB信號(hào)通路探討6-Gin對(duì)心肌纖維化（MF）小鼠的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:50只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（Con）、異丙腎上腺素模型組（ISO）、6-Gin低劑量組（L-6-Gin）、6-Gin高劑量組（H-6-Gin）、普萘洛爾組（Pro）5組,每組10只。Con組小鼠灌胃、同時(shí)皮下注射生理鹽水,ISO組小鼠灌胃生理鹽水,同時(shí)皮下注射ISO（10 mg/kg/d）。L-6-Gin組和H-6-Gin組灌服6-Gin（10,20 mg/kg/d）,同時(shí)皮下注射ISO（10 mg/kg/d）,Pro組腹腔注射Pro（40 mg/kg/d）,同時(shí)皮下注射ISO（10 mg/kg/d）,連續(xù)14天。比色法、免疫組化方法、TUNEL染色和Western blot等方法觀察6-Gin對(duì)ISO致心肌纖維化小鼠氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及TLR4/MAPKs/NF-кB信號(hào)通路的影響。結(jié)果:1.6-Gin能顯著降低ISO誘導(dǎo)的MF小鼠心率和J點(diǎn)的抬高。2.6-Gin能顯著降低ISO誘導(dǎo)的MF小鼠心臟重量指數(shù)（CWI）和左心室重量指數(shù)（LVWI）。3.6-Gin能顯著降低ISO誘導(dǎo)的MF小鼠血清肌酸激酶（CK）和乳酸脫氫酶（LDH）水平。4.HE染色和天狼星紅染色結(jié)果顯示6-Gin能改善MF小鼠心肌纖維化程度。5.6-Gin能顯著升高M(jìn)F小鼠心肌組織超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）活性,降低丙二醛（MDA）含量和鈣離子含量。6.免疫組化結(jié)果顯示,6-Gin能降低MF小鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、c-fos和c-jun的表達(dá)。7.TUNEL結(jié)果顯示,6-Gin能降低MF小鼠凋亡細(xì)胞數(shù)量;Western blot結(jié)果顯示6-Gin能降低MF小鼠心肌組織Bax和Caspase-3表達(dá),升高Bcl-2表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡。8.Western blot結(jié)果顯示,6-Gin能降低MF小鼠TLR4、p38分裂原活化蛋白激酶（p38）、p-p38、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK1/2）、p-ERK1/2、c-Jun氨基端激酶（JNK）、p-JNK、NF-kB蛋白表達(dá)。第二部分6-Gin對(duì)H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究目的:基于p38/NF-кB信號(hào)通路探討6-Gin對(duì)氯化鈷（CoCl2）致H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。方法:H9c2心肌細(xì)胞分為4組:1)Con組;2)CoCl2組:400μmol/L（μM）的CoCl2處理;3)L-6-Gin組:20μM的6-Gin孵育12小時(shí)+400μM的CoCl2孵育22小時(shí);4)H-6-Gin組:40μM的6-Gin孵育12小時(shí)+400μM的CoCl2孵育22小時(shí)。利用比色法、Elisa法、流式細(xì)胞技術(shù)和Western blot等方法觀察6-Gin對(duì)CoCl2致H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及對(duì)p38/NF-кB信號(hào)通路的影響。結(jié)果:1.CoCl2對(duì)H9c2心肌細(xì)胞存活率影響的實(shí)驗(yàn)表明,200,300,400,500和600μM的CoCl2分別處理H9c2心肌細(xì)胞22小時(shí),存活率明顯降低,400μM的CoCl2處理細(xì)胞存活率下降50%左右,因此選擇400μM的CoCl2作為低氧損傷濃度。2.6-Gin對(duì)H9c2心肌細(xì)胞存活率影響的實(shí)驗(yàn)表明,10,20,30,40,50和60μM的6-Gin分別處理H9c2心肌細(xì)胞12小時(shí),對(duì)細(xì)胞存活率沒(méi)有影響,參考相關(guān)文獻(xiàn)選擇20和40μM的6-Gin作為干預(yù)濃度。3.6-Gin能顯著降低細(xì)胞上清液中CK和LDH釋放量。4.6-Gin能顯著降低細(xì)胞活性氧（ROS）的生成,降低細(xì)胞內(nèi)鈣含量和MDA含量,升高SOD、CAT和GSH水平。5.Elisa檢測(cè)結(jié)果顯示,6-Gin能顯著降低細(xì)胞TNF-α和IL-6的含量。6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,6-Gin能顯著降低細(xì)胞凋亡率。7.Western blot結(jié)果顯示,6-Gin能顯著降低p38和NF-kB的蛋白表達(dá),升高Nrf2、HIF-1a和HO-1蛋白表達(dá)。第三部分6-Gin對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道、收縮力及鈣瞬變的影響目的:通過(guò)觀察6-Gin對(duì)大鼠心肌細(xì)胞ICa-L、收縮力和鈣瞬變的影響,探討其心肌保護(hù)作用分子機(jī)制。方法:利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)、心肌細(xì)胞收縮及離子濃度同步測(cè)量系統(tǒng)觀察6-Gin對(duì)大鼠心肌細(xì)胞ICa-L、收縮力和鈣瞬變的影響。結(jié)果:1.300μM的6-Gin可以顯著地抑制正常心肌細(xì)胞和缺血心肌細(xì)胞的ICa-L,抑制率分別為58.17±1.04%和55.22±1.34%,且在給予細(xì)胞外液后,鈣電流可部分恢復(fù)到給藥前水平。2.6-Gin以濃度依賴性方式抑制ICa-L,3,10,30,100和300μM的6-Gin的抑制率分別為8.71±0.60%,16.2±0.80%,32.67±0.76%,54.33±1.89%和58.17±1.04%。3.3,30和300μM的6-Gin可在激活電位和峰電位保持不變的情況下顯著上移I-V關(guān)系曲線。4.6-Gin對(duì)ICa-L的穩(wěn)態(tài)激活和失活無(wú)顯著性作用。5.300μM的6-Gin能夠顯著抑制心肌細(xì)胞收縮幅度,抑制率為48.87±5.44%,鈣瞬變的峰值下降42.5±9.79%。6.300μM的6-Gin能顯著抑制心肌細(xì)胞收縮達(dá)峰時(shí)間的50%（Tp50）及恢復(fù)基線水平時(shí)間的50%（Tr50）,降低細(xì)胞收縮和舒張的最大速率（±dL/dt）。結(jié)論:1.6-Gin對(duì)ISO致心肌纖維化小鼠的保護(hù)作用機(jī)制與抑制TLR4/MAPKs/NF-kB信號(hào)通路,抑制氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡有關(guān)。2.6-Gin對(duì)CoCl2致H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用機(jī)制與抑制p38/NF-kB通路,激活Nrf2通路,升高HIF-1a和HO-1表達(dá),進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激、炎性因子釋放和細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.6-Gin能顯著抑制心肌細(xì)胞ICa-L,減少鈣離子內(nèi)流,從而抑制心肌細(xì)胞[Ca2+]i和收縮力,這可能是其心肌保護(hù)的分子機(jī)制之一。
田毅[8]（2010）在《異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究》文中研究說(shuō)明目的建立缺血再灌注模型,觀察異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔缺血再灌注的心肌保護(hù)作用。方法健康新西蘭大白兔,采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支法制備心肌缺血再灌注模型。隨機(jī)分成6組：假手術(shù)組（S組）：僅開(kāi)胸并分離冠狀動(dòng)脈左前降支,但不阻斷血流；缺血再灌注組（I/R組）：缺血30min,再灌注120 mim缺血預(yù)處理組（IPC組）：缺血5 min,再灌注5 min,重復(fù)3次后同I/R處理；異氟醚預(yù)處理組（I組）：給予1.1%異氟醚持續(xù)吸入30min,洗脫15min,之后處理同I/R組；卡托普利預(yù)處理組（C組）：給予喂飼卡托普利片25 mg-kg-1,24h后處理同I/R組；異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理組（I+C組）：給予喂飼卡托普利片25 mg·kg-1,24h后處理同I組。記錄缺血再灌注前后不同時(shí)間點(diǎn)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)：阻斷前（T0）,阻斷30min（T1）,再灌注30min（T2）,再灌注60min（T3）,再灌注120min（T4）；記錄心律失常發(fā)生率；取動(dòng)脈血檢測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CK）、肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（cTnI）濃度；再灌注結(jié)束后檢測(cè)血清丙二醛（MDA）濃度及超氧化物歧化酶（SOD）活性；觀察各組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果1.T0-T2 I組與I+C組HR相對(duì)高于其它各組,T0-T4 I組、C組與I+C組MAP與RPP相對(duì)較低并依次遞減（P<0.05,或P<0.01）,IPC組、I組、C組再灌注期間心律失常發(fā)生率（37.5%、50%、50%）低于I/R組（62.5%）,但高于I+C組（25%,P<0.05）。2.心肌酶變化：與S組比,各組心肌酶學(xué)指標(biāo)從T1至T4均較T0有所升高（P<0.05或P<0.01）,但I(xiàn)PC組、I組、C組和I+C組增高程度低于I/R（P<0.05）,IPC組和I+C組又較I組和C組低（P<0.05）。3.生化指標(biāo)變化：與S組比,各組MDA均增高,SOD降低（P<0.01）,但與I/R組比,各處理組MDA降低,SOD較高（P<0.01）。IPC組和I+C組MDA和SOD分別較I組和C組降低和升高（P<0.05）。4.心肌超微結(jié)構(gòu)變化：預(yù)處理組心肌細(xì)胞損傷輕于I/R組。結(jié)論異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)缺血再灌注兔心肌有保護(hù)作用,較單獨(dú)應(yīng)用異氟醚、卡托普利預(yù)處理的保護(hù)作用增強(qiáng),其效果與缺血預(yù)處理相似。目的建立缺血再灌注模型,觀察異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法健康新西蘭大白兔,采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支法制備心肌缺血再灌注模型。隨機(jī)分成6組：假手術(shù)組（S組）：僅開(kāi)胸并分離冠狀動(dòng)脈左前降支,但不阻斷血流；缺血再灌注組（I/R組）：缺血30min,再灌注120 min；缺血預(yù)處理組（IPC組）：缺血5 min,再灌注5 min,重復(fù)3次后處理同I/R組；異氟醚預(yù)處理組（I組）：給予1.1%異氟醚持續(xù)吸入30min,洗脫15min,之后處理同I/R組；卡托普利預(yù)處理組（C組）：給予喂飼卡托普利片25 mg·kg-1,24h后處理同I/R組；異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理組（I+C組）：給予喂飼卡托普利片25 mg·kg-1,24h后處理同I組。再灌注結(jié)束后采用伊文思藍(lán)和TTC染色法檢測(cè)心肌梗死面積,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果1.心肌梗死面積：IPC組、I組、C組和I+C組心肌梗死面積（33.6±3.8%、39.8±5.7%、39.6±3.4%、33.9±5.9%）均小于I/R組（60.7±6.0）（P<0.01）,IPC、I+C組心肌梗死面積均小于I組、C組（P<0.05）。2.細(xì)胞凋亡：與S組比較各組凋亡指數(shù)明顯增高（P＜0.01）；與I/R組相比各預(yù)處理組細(xì)胞凋亡指數(shù)均有所降低（P<0.01）；I組和C組較IPC組和I+C組細(xì)胞凋亡指數(shù)有所增加（P<0.05）。但I(xiàn)PC組和I+C組之間,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論1.異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理可明顯減少心肌缺血再灌注的梗死面積以及降低細(xì)胞凋亡,較單獨(dú)藥物預(yù)處理組作用增強(qiáng),與缺血預(yù)處理的作用相似。2.異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷產(chǎn)生了協(xié)同的抗細(xì)胞凋亡保護(hù)作用。目的建立缺血再灌注模型,初步探討異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)凋亡相關(guān)基因的影響,以及對(duì)凋亡通路的作用機(jī)制。方法健康新西蘭大白兔,采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支法制備心肌缺血再灌注模型。隨機(jī)分成6組：假手術(shù)組（S組）：僅開(kāi)胸并分離冠狀動(dòng)脈左前降支,但不阻斷血流；缺血再灌注組（I/R組）：缺血30min,再灌注120 mim缺血預(yù)處理組（IPC組）：缺血5 min,再灌注5 min,重復(fù)3次后處理同I/R組；異氟醚預(yù)處理組（I組）：給予1.1%異氟醚持續(xù)吸入30min,洗脫15min,之后處理同I/R組；卡托普利預(yù)處理組（C組）：給予喂飼卡托普利片25mg·kg-1,24h后處理同I/R組；異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理組（I+C組）：給予喂飼卡托普利片25mg·kg-1,24h后處理同I組。再灌注結(jié)束后采用免疫印跡法（Western-Blot）檢測(cè)各組心肌凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果1.各組心肌Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的變化：與I/R組比較,各預(yù)處理組Bcl-2表達(dá)明顯增加,Bax表達(dá)降低,Bcl-2/Bax比值明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與I組和C組相比,IPC組和I+C組Bcl-2/Bax比值明顯增高（P<0.01）,IPC組和I+C組之間比值沒(méi)有差異（P>0.05）。2.各組心肌凋亡通路蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表達(dá)的變化：與I/R組比較各預(yù)處理組Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表達(dá)明顯降低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與I組和C組相比,IPC組Caspase-3蛋白表達(dá)較低（P<0.01）,但與I+C組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；各藥物預(yù)處理組Caspase-8蛋白表達(dá)與IPC組相比均較低（P<0.05或P<0.01）；I+C組Caspase-8蛋白的表達(dá)量也低于I組和C組（P<0.01）；與各藥物預(yù)處理組相比,IPC組的Caspase-9蛋白表達(dá)較低（P<0.01）；I+C組與I組和C組相比,Caspase-9蛋白的表達(dá)量也有差異（P<0.05）。3.細(xì)胞凋亡：與I/R組相比,各預(yù)處理組細(xì)胞凋亡指數(shù)均有所降低（P<0.01）,I+C組凋亡指數(shù)低于I組和C組（P<0.05）,但與IPC組無(wú)差異（P>0.05）結(jié)論1.異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理組通過(guò)上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá),下調(diào)Bax蛋白表達(dá),增加Bcl-2/Bax比值,對(duì)缺血再灌注兔心肌產(chǎn)生保護(hù)作用。2.異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理組降低心肌缺血再灌注后Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的蛋白表達(dá),抑制凋亡通路信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),減少心肌細(xì)胞的凋亡。3.異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)凋亡的死亡受體通路和線粒體通路具有抑制作用,但主要是通過(guò)死亡受體通路發(fā)揮抗凋亡作用。
常超[9]（2007）在《粉防己堿對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注和缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究》文中研究表明第一部分粉防己堿預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用及其與表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯比較研究目的:通過(guò)大鼠在體心肌缺血再灌注模型,觀察粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷心肌的保護(hù)作用。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯具有抗心肌缺血再灌注損傷和心肌細(xì)胞凋亡的作用,與表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯進(jìn)行比較,觀察粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷心肌的保護(hù)作用。方法:建立在體大鼠心臟I/R損傷模型,將96只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（Sham組, n=16）、I/R損傷組（I/R組, n=20）、粉防己堿1組（TET1組, n=20）、粉防己堿2組（TET2組,n=20）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯組（EGCG組,n=20）;各組均測(cè)定大鼠心肌I/R損傷后血清乳酸脫氫酶（LDH）、心肌組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,采用HE染色及電鏡觀察各組心肌的病理變化。各組均測(cè)定心肌梗死范圍（IS/AAR%,TTC法）,比較各組間差異。結(jié)果:與Sham組比較,I/R組中MDA值、LDH值、IS/AAR %明顯升高,SOD顯著降低。與I/R組比較,TET1組、TET2組、EGCG組可顯著降低IS/AAR%值[（23.28±4.38）%, （19.96±4.38）%, （24.86±4.67）% vs. （43.76±6.30）% ,均P﹤0.01]; LDH [（1329.54±250.21）U/L, （1305.76±266.44）U/L,（1418.62±276.17）U/L,vs. （2016.97±371.95） U/L,均P﹤0.01)]、MDA [（3.16±0.21） nmol/mg prot,（2.98±0.38） nmol/mg prot,（3.39±0.52）nmol /mg prot vs. （5.33±0.51） nmol/mg prot,均P﹤0.01)]均明顯降低,而SOD值明顯增高[（138.45±20.74）U/mg prot, （146.38±24.41）U/mg prot, （135.46±20.98） U/mg prot vs. （ 98.69±15.41） U/mg prot,均P﹤0.01)]。TET1組、TET2組、EGCG組可以顯著減輕心肌缺血再灌注損傷的病理改變。與EGCG組比較,TET1、TET2、EGCG三組間MDA、LDH和SOD值無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)論:大鼠心肌缺血再灌注損傷可導(dǎo)致LDH值、MDA值升高、SOD降低,引起心肌病理改變及IS/AAR %升高,與EGCG比較,粉防己堿預(yù)處理可以抗心肌缺血再灌注損傷,保護(hù)心肌,其保護(hù)效果與EGCG相似。第二部分粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和CytC的影響目的:觀察粉防己堿對(duì)缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡的影響及其對(duì)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)和線粒體中細(xì)胞色素C釋放的影響,并觀察粉防己堿對(duì)心肌細(xì)胞caspase-3變化的影響,初步探討粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的作用。方法:建立在體大鼠心臟I/R損傷模型,將143只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（Sham組,n=23）、I/R損傷組（I/R組,n=30）、粉防己堿1組（TET1組,n=30）、粉防己堿2組（TET2組,n=30）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯組（EGCG組,n=30）;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用原位末端標(biāo)記法（TUNEL）和DNA梯帶法（DNA Ladder）檢測(cè)細(xì)胞凋亡,用免疫組化法檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)和Western-blotting法檢測(cè)胞漿細(xì)胞色素C表達(dá),用RT-RCR法檢測(cè)心肌細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá),并觀察caspase-3活性變化,比較各組間差異。結(jié)果:與I/R組相比,TET1組、TET2組、EGCG組明顯抑制心肌細(xì)胞凋亡,AI明顯降低[（8.62±2.45）%,（7.95±2.28）%,（10.62±3.09）% vs. （19.36±5.28）%,均P﹤0.01];與I/R組相比,TET1組、TET2組、EGCG組Bcl-2表達(dá)明顯增加,Bax明顯減少,且Bcl-2/ Bax值顯著高于I/R組（P<0.01）;I/R組心肌細(xì)胞胞漿細(xì)胞色素C顯著增多（P<0.01）,經(jīng)TET1、TET2和EGCG預(yù)處理后,可明顯抑制細(xì)胞色素C從線粒體向胞漿的釋放（P<0.01）;TET1、TET2和EGCG預(yù)處理后,可明顯減少心肌細(xì)胞caspase-3的表達(dá)和活性（P<0.01）。結(jié)論:粉防己堿可通過(guò)抑制缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡來(lái)參與缺血再灌注心肌損傷的保護(hù),粉防己堿抗心肌細(xì)胞凋亡可能與上調(diào)Bcl-2蛋白、下調(diào)Bax蛋白表達(dá),升高Bcl-2/ Bax比值,抑制Cyt C從線粒體的釋放,減少caspase-3在心肌組織中表達(dá)和活性有關(guān)。第三部分粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡影響及其機(jī)制研究第一節(jié)新生大鼠體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)和缺氧/復(fù)氧模型建立目的:通過(guò)體外培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞,構(gòu)建新生大鼠心肌缺氧/復(fù)氧損傷模型,在細(xì)胞水平模擬大鼠心肌缺血再灌注（SI/R）損傷,為研究粉防己堿對(duì)新生大鼠缺氧/復(fù)氧損傷影響提供平臺(tái)。方法:分離新生1-3天的乳鼠心室肌,在培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-4天后,行缺氧2h/復(fù)氧24h,建立缺氧/復(fù)氧（anoxia/reoxygenation）心肌細(xì)胞損傷模型。在缺氧前、缺氧2h末期和復(fù)氧24h末期利用2,4二硝基苯肼顯色法檢測(cè)乳酸脫氫酶（LDH）活性,硫代巴比妥酸顯色法檢測(cè)丙二醛（MDA）及黃嘌呤氧化酶法（羥胺法）檢測(cè)超氧化物歧化酶（SOD）含量并進(jìn)行比較,以證實(shí)缺氧/復(fù)氧損傷模型構(gòu)建成功。結(jié)果:新生1-3天的乳鼠心室肌,在培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-4天后,在倒置顯微鏡下可觀察到有搏動(dòng)的心肌細(xì)胞。培養(yǎng)3-4天的心肌細(xì)胞在實(shí)施缺氧期2h后,LDH和MDA均較缺氧前有所升高,SOD降低（P<0.01）;而給予復(fù)氧期24h后,LDH和MDA明顯高于缺氧期,而SOD進(jìn)一步降低（P<0.01）,對(duì)照組的上述指標(biāo)在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)明顯改變（P>0.05）。結(jié)論:通過(guò)給新生大鼠體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞行缺氧2h/復(fù)氧24h后,可明顯造成心肌細(xì)胞損傷,以此模擬大鼠心肌缺血再灌注損傷。第二節(jié)粉防己堿對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞凋亡、PKC表達(dá)的影響及機(jī)制研究目的:通過(guò)建立的乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型,觀察粉防己堿對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及PKC的影響,探討粉防己堿抑制心肌細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法:通過(guò)給原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞行缺氧2h/復(fù)氧24h ,建立缺氧/復(fù)氧（anoxia/reoxygenation）心肌細(xì)胞損傷模型。將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞分為正常對(duì)照（CON）組、缺氧/復(fù)氧（A/R）組、缺氧預(yù)處理（AP）組、粉防己堿預(yù)處理（TET）組、缺氧預(yù)處理+PKC抑制劑chelerythrin（eAP+CHE）組、粉防己堿+PKC抑制劑chelerythrine（TET+CHE）組,共6組。于復(fù)氧24h后,檢測(cè)LDH活性和心肌細(xì)胞MDA、SOD含量,采用原位末端標(biāo)記法（TUNEL）和DNA梯帶法（DNA Ladder）標(biāo)測(cè)心肌細(xì)胞凋亡,檢測(cè)心肌細(xì)胞PKC mRNA的表達(dá)量及PKC活性,用免疫印跡法（Western blotting）檢測(cè)胞漿CytC表達(dá),并檢測(cè)心肌細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)量及活性,比較各組間差異。結(jié)果:與A/R組相比,AP組、TET組中LDH活性、MDA含量、凋亡指數(shù)（AI）顯著降低,SOD顯著升高（P<0.01）;PKC的mRNA的表達(dá)量和活性顯著增加,心肌細(xì)胞胞漿中CytC減少,心肌細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)量減少、caspase-3活性降低有顯著性差異（P<0.01）;經(jīng)chelerythrine處理后,再給予AP或TET預(yù)處理,則PKC的mRNA的表達(dá)量和PKC活性顯著下降,可見(jiàn)胞漿中CytC增加,心肌細(xì)胞caspase-3 mRNA表達(dá)量增加,caspase-3活性增強(qiáng),凋亡指數(shù)（AI）增加（P<0.01）。結(jié)論:粉防己堿預(yù)處理可減少缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,PKC抑制劑chelerythrine處理后,可顯著降低粉防己堿的保護(hù)作用,因此PKC的信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能是粉防己堿抑制缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
李榮[10]（2007）在《延胡索堿及延胡索復(fù)方抗冠心病室性心律失常的實(shí)驗(yàn)與臨床研究》文中指出研究背景當(dāng)今，冠心病已成為人類三大死亡原因之一，我國(guó)冠心病的發(fā)病率正逐年上升。冠心病的基本病理生理就是心肌缺血，要挽救缺血心肌就必須及時(shí)、有效地恢復(fù)缺血心肌的再灌注。但是缺血心肌在恢復(fù)血流灌注后，往往引起缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion iniury，IRI）。如何防治心肌缺血再灌注損傷已成為心臟病學(xué)基礎(chǔ)應(yīng)用研究中的一個(gè)重要領(lǐng)域。1986年Murry等發(fā)現(xiàn)缺血預(yù)處理可減輕IRI，但由于缺血預(yù)處理本身是一種損傷性因素，很難在臨床推廣應(yīng)用，因此尋找安全有效的藥物作為藥物預(yù)處理手段防治IRI具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。1988年，美國(guó)著名的CAST試驗(yàn)結(jié)果表明：抗心律失常藥物有潛在致心律失常作用的危險(xiǎn)性。這種危險(xiǎn)性給發(fā)展中藥預(yù)處理防治IRI，特別是抗再灌注心律失常帶來(lái)了機(jī)遇和挑戰(zhàn)。近來(lái)在心血管疾病的防治研究中，特別是在治療缺血性心臟病和抗心律失常方面，許多復(fù)方都選用了延胡索。延胡索是一種活血化瘀中藥，現(xiàn)代藥理研究表明，其具有增加冠脈流量、擴(kuò)張血管、改善心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量及抗心律失常等作用。但是應(yīng)用延胡索堿預(yù)處理抗心肌缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究及運(yùn)用延胡索復(fù)方桃仁紅花煎治療冠心病室性心律失常的臨床研究卻未見(jiàn)報(bào)道。本課題即打算在此領(lǐng)域作些有益的探索。實(shí)驗(yàn)研究【目的】通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，比較藥物預(yù)處理與缺血預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注損傷的作用效果，評(píng)價(jià)延胡索堿預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其藥理作用機(jī)制。【方法與內(nèi)容】采用SD大鼠，隨機(jī)分為6組：假手術(shù)組、模型組、缺血預(yù)處理組、延胡索堿低、中、高劑量組。建立大鼠心肌缺血再灌注模型，運(yùn)用膜片鉗技術(shù)、流式細(xì)胞儀技術(shù)、免疫組化、電鏡酶細(xì)胞化學(xué)和分子生物學(xué)等方法，從整體、細(xì)胞乃至分子基因水平探討延胡索堿預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其藥理作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)共分為六個(gè)部分。實(shí)驗(yàn)一：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影響。實(shí)驗(yàn)二：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)三：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌Ca2+-ATPase及Na+-K+-ATPase活性的影響。實(shí)驗(yàn)四：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)單個(gè)心肌細(xì)胞膜上L-型鈣通道動(dòng)力學(xué)的影響。實(shí)驗(yàn)五：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度的影響。實(shí)驗(yàn)六：觀察延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌梗死范圍的影響。【結(jié)果】1．室性心律失常發(fā)生率比較：延胡索堿中、高劑量組的室速（VT）和室顫（VF）的發(fā)生率顯著降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），延胡索堿低劑量組上述指標(biāo)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與缺血預(yù)處理組比較，延胡索堿中、高劑量組的VT和VF的發(fā)生率變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組對(duì)室性早博（VPB）發(fā)生率的影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。2．心律失常發(fā)生時(shí)間比較：延胡索堿低、中、高劑量組的心律失常出現(xiàn)時(shí)間明顯推遲、持續(xù)時(shí)間明顯縮短，與模型組比較差異有顯著性（P＜0.01）。與缺血預(yù)處理組比較，延胡索堿預(yù)處理雖也能推遲心律失常出現(xiàn)時(shí)間、縮短心律失常持續(xù)時(shí)間，但作用較之減弱（P＜0.01）。3．ST段抬高程度比較：在心肌缺血30min，再灌注20min和60min時(shí)間點(diǎn)時(shí)，假手術(shù)組ST段抬高程度無(wú)明顯改變，模型組ST段則明顯抬高；與模型組比較，缺血預(yù)處理組和延胡索堿預(yù)處理各劑量組ST段抬高幅度雖有所降低，但差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。心率變化比較：與模型組比較，延胡索堿低、中、高劑量組，以及缺血預(yù)處理組均能明顯減慢心率，差異有顯著性（P＜0.01）；與缺血預(yù)處理組比較，延胡索低、中劑量組減慢心率的作用較之減弱（P＜0.01），延胡索堿高劑量組則較之增強(qiáng)（P＜0.05）。4．原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)大鼠心肌細(xì)胞凋亡結(jié)果：假手術(shù)組心肌僅偶見(jiàn)細(xì)胞凋亡發(fā)生，模型組可見(jiàn)大量胞核呈深淺不一棕褐色的凋亡心肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）；缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組凋亡心肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均較模型組明顯減少（P＜0.01）；而缺血預(yù)處理組和延胡索堿高劑量組間差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。5．心肌細(xì)胞bcl-2基因蛋白表達(dá)變化：與假手術(shù)組比較，抑凋亡基因bcl-2在缺血再灌注后表達(dá)明顯減少，心肌細(xì)胞bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)（PEI）明顯低于假手術(shù)組（P＜0.01）；缺血預(yù)處理及用藥后bcl-2表達(dá)增高，缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)（PEI）均較模型組組明顯增高（P＜0.05）。而缺血預(yù)處理組和延胡索堿高劑量組比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。6．心肌細(xì)胞Fas基因蛋白表達(dá)變化：假手術(shù)組極少數(shù)心肌細(xì)胞Fas基因蛋白表達(dá)陽(yáng)性；與假手術(shù)組比較，缺血再灌注后Fas基因蛋白表達(dá)明顯加強(qiáng)，心肌細(xì)胞Fas蛋白陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)（PEI）明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01）；缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組Fas蛋白陽(yáng)性表達(dá)指數(shù)（PEI）均較模型組明顯減少（P＜0.05）；而缺血預(yù)處理組和延胡索堿高劑量組比較，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。7．心肌細(xì)胞Na+，K+-ATP酶活力分析：與假手術(shù)組比較，心肌缺血再灌注損傷后，心肌細(xì)胞Na+，K+-ATP酶活力顯著下降（P＜0.01）。與模型組比較，除低劑量組（P＞0.05）外，缺血預(yù)處理組和延胡索堿中、高劑量組的心肌細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活力都明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與缺血預(yù)處理組比較，延胡索堿中、高劑量組心肌細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活力差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。8．心肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力分析：與假手術(shù)組比較，心肌缺血再灌注損傷后，心肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力顯著下降（P＜0.01）。與模型組比較，除低、中劑量組（P＞0.05）外，缺血預(yù)處理組和延胡索堿高劑量組的心肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力都明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與缺血預(yù)處理組比較，延胡索堿高劑量組心肌細(xì)胞Ca2+-ATP酶活力差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。9．單個(gè)心肌細(xì)胞膜上L-型鈣通道動(dòng)力學(xué)變化（1）L-型鈣離子通道平均開(kāi)放概率比較：與假手術(shù)組比較，模型組L-型鈣離子通道平均開(kāi)放概率明顯提高（P＜0.01）；與模型組比較，缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組心肌細(xì)胞的L-型鈣離子通道平均開(kāi)放概率明顯降低（P＜0.01）；而且缺血預(yù)處理組與延胡索堿高、中、低劑量組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。（2）L-型鈣離子通道平均開(kāi)放時(shí)間比較：與假手術(shù)組比較，模型組心肌細(xì)胞L-型鈣離子通道平均開(kāi)放時(shí)間明顯縮短（P＜0.05）；與模型組比較，缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組平均開(kāi)放時(shí)間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。（3）L-型鈣離子通道平均電流幅值比較：與假手術(shù)組比較，模型組平均電流幅值明顯增高（P＜0.05）；與模型組比較，延胡索堿低、中劑量組可減弱L-型鈣通道平均電流幅度值（P＜0.05），但缺血預(yù)處理組和延胡索堿高劑量組反而增強(qiáng)L-型鈣通道電流幅度值（P＜0.05）。10．心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度比較：與假手術(shù)組比較，模型組心肌細(xì)胞內(nèi)平均鈣離子熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)（P＜0.01）；與模型組比較，缺血預(yù)處理組與延胡索堿高、中、低劑量組平均鈣離子熒光強(qiáng)度減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；缺血預(yù)處理與延胡索堿高劑量組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。11．心肌缺血、梗死面積比較（1）心肌缺血面積比較：與模型組比較，除低劑量組（P＞0.05）外，其余各組心肌缺血面積均有減少（P＜0.01或P＜0.05）；與缺血預(yù)處理組比較，除低劑量組（P＜0.05）外，延胡索堿高、中劑量組心肌缺血面積與其相當(dāng)，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。（2）心肌梗死面積比較：與模型組比較，缺血預(yù)處理組和延胡索堿高、中、低劑量組梗死面積均縮?。≒＜0.05）；與缺血預(yù)處理組比較，除低劑量組（P＜0.01）外，延胡索堿高、中劑量組心肌梗死面積與其相當(dāng)，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。【結(jié)論】1．對(duì)大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常而言，延胡索堿預(yù)處理不僅可推遲其出現(xiàn)時(shí)間，縮短其持續(xù)時(shí)間，而且還可降低室速（VT）和室顫（VF）的發(fā)生率，減慢大鼠心肌缺血再灌注損傷后心率的增快。說(shuō)明延胡索堿預(yù)處理具有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。2．延胡索堿預(yù)處理可通過(guò)上調(diào)缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表達(dá)和下調(diào)促凋亡基因Fas的蛋白表達(dá)，從而抑制心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生，保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺血及缺血再灌注的損傷，從而保護(hù)心臟功能，具有類似于缺血預(yù)處理的內(nèi)源性抗凋亡保護(hù)機(jī)制。3．延胡索堿預(yù)處理能顯著提高心肌細(xì)胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性，通過(guò)肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶（肌漿網(wǎng)鈣泵）、Na+-Ca2+交換體系、肌膜Ca2+-ATPas等途徑將細(xì)胞內(nèi)Ca2+運(yùn)出細(xì)胞外，從而減輕心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和鈣超載，起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。4．延胡索堿預(yù)處理可降低心肌細(xì)胞膜上L-型鈣通道平均開(kāi)放概率，并顯著減弱心肌細(xì)胞膜上L-型鈣通道平均電流幅度值，從而阻斷心肌細(xì)胞膜L-型鈣通道開(kāi)放，減少“外鈣內(nèi)流”、“內(nèi)鈣釋放”，降低心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的濃度，避免了細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載，發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。5．延胡索堿預(yù)處理與經(jīng)典缺血預(yù)處理一樣，可顯著縮小大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面積，對(duì)缺血再灌注心肌損傷有保護(hù)作用。臨床研究【目的】觀察延胡索復(fù)方桃仁紅花煎對(duì)冠心病頻發(fā)室性早博患者的臨床療效。【方法與內(nèi)容】采用前瞻性試驗(yàn)性設(shè)計(jì)方案。遵循隨機(jī)、對(duì)照、單盲原則進(jìn)行研究。將60例冠心病頻發(fā)室性早博患者按為1∶1隨機(jī)分為試驗(yàn)組與對(duì)照組。試驗(yàn)組采用冠心病西醫(yī)基礎(chǔ)治療加上延胡索復(fù)方桃仁紅花煎治療，對(duì)照組僅采用單純西醫(yī)基礎(chǔ)治療，不用中醫(yī)中藥治療。通過(guò)觀察治療前后室性早博次數(shù)的變化以及中醫(yī)證候、癥狀的改變，比較試驗(yàn)組與對(duì)照組二者間的臨床療效?！窘Y(jié)果】1．治療后兩組患者室性早搏療效比較：試驗(yàn)組總有效率85％，對(duì)照組75％，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明兩組患者的療效相當(dāng)。2．兩組患者治療前后24h室性早博次數(shù)的比較：試驗(yàn)組和對(duì)照組治療前后自身比較，P＜0.01，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組患者治療前后24h室性早博次數(shù)差值比較，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3．兩組患者中醫(yī)證候療效比較：試驗(yàn)組總有效率90％，對(duì)照組70％，經(jīng)X2檢驗(yàn)P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4．兩組患者中醫(yī)癥狀積分比較：治療前后自身比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。試驗(yàn)組患者治療前后癥狀積分差值明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。5．兩組患者中醫(yī)癥狀療效比較：試驗(yàn)組心悸中醫(yī)癥狀總有效率為89.7％，對(duì)照組為66.7％，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組胸悶中醫(yī)癥狀總有效率為76.9％％，對(duì)照組為45.8％，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；余各中醫(yī)癥狀療效差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?！窘Y(jié)論】通過(guò)臨床小樣本觀察，我們發(fā)現(xiàn)西醫(yī)基礎(chǔ)治療結(jié)合中藥延胡索復(fù)方（桃仁紅花煎）治療，在減少冠心病頻發(fā)室性早搏次數(shù)方面與單純西藥治療療效相當(dāng)；但是在改善冠心病頻發(fā)室性早搏的中醫(yī)證候及中醫(yī)癥狀特別是心悸、胸悶等方面療效優(yōu)于單純西藥治療，而且副作用少，沒(méi)發(fā)現(xiàn)有任何致心律失常作用，值得在臨床上推廣應(yīng)用。結(jié)語(yǔ)1．延胡索堿預(yù)處理不僅可推遲大鼠心肌缺血再灌注室性心律失出現(xiàn)時(shí)間，縮短其持續(xù)時(shí)間，而且還可降低室速（VT）和室顫（VF）的發(fā)生率，減慢大鼠再灌注損傷后心率的增快。說(shuō)明延胡索堿預(yù)處理有抗大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的作用。2．延胡索堿預(yù)處理可通過(guò)上調(diào)缺血再灌注心肌抑凋亡基因bcl-2的蛋白表達(dá)和下調(diào)促凋亡基因Fas的蛋白表達(dá)，從而抑制心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生，保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺血及缺血再灌注的損傷，具有類似于缺血預(yù)處理的內(nèi)源性抗凋亡保護(hù)機(jī)制。3．延胡索堿預(yù)處理能顯著提高心肌細(xì)胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性，通過(guò)肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶（肌漿網(wǎng)鈣泵）、Na+-Ca2+交換體系、肌膜Ca2+-ATPas等途徑將細(xì)胞內(nèi)Ca2+運(yùn)出細(xì)胞外，從而減輕心肌細(xì)胞內(nèi)鈣濃度和鈣超載，起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。4．延胡索堿預(yù)處理可降低心肌細(xì)胞膜上L-型鈣通道平均開(kāi)放概率和平均電流幅值，從而阻斷心肌細(xì)胞膜L-型鈣通道，減少“外鈣內(nèi)流”、“內(nèi)鈣釋放”，降低心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度，避免了細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載，起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。5．延胡索堿預(yù)處理與經(jīng)典缺血預(yù)處理一樣，可顯著縮小心肌缺血再灌注損傷大鼠的心肌梗死面積，對(duì)缺血再灌注損傷心肌有保護(hù)作用。6．通過(guò)臨床觀察，我們發(fā)現(xiàn)西醫(yī)基礎(chǔ)治療結(jié)合延胡索復(fù)方（桃仁紅花煎）治療，在減少冠心病頻發(fā)室性早搏次數(shù)、抗冠心病心律失常方面與單純西藥治療療效相當(dāng)；但是在改善冠心病頻發(fā)室性早搏的中醫(yī)證候及中醫(yī)癥狀特別是心悸、胸悶等方面療效優(yōu)于單純西藥治療，而且副作用少，沒(méi)發(fā)現(xiàn)有任何致心律失常作用，值得在臨床上推廣應(yīng)用。
二、肉堿對(duì)再灌注所致心肌細(xì)胞凋亡的影響──與缺血預(yù)處理作用比較（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、肉堿對(duì)再灌注所致心肌細(xì)胞凋亡的影響──與缺血預(yù)處理作用比較（論文提綱范文）
（1）基于PI3K/AKT信號(hào)通路探討糖心平膠囊治療糖尿病心肌病藥效及機(jī)制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略詞表 |
| 第一部分 綜述 |
| 綜述一 糖尿病心肌病的中醫(yī)認(rèn)識(shí) |
| 1 糖尿病心肌病中醫(yī)病名 |
| 2 糖尿病心肌病中醫(yī)病因 |
| 3 糖尿病心肌病中醫(yī)病機(jī) |
| 4 糖尿病心肌病治則 |
| 5 糖尿病心肌病論治 |
| 6 小結(jié)與展望 |
| 綜述二 糖尿病心肌病現(xiàn)代研究進(jìn)展 |
| 1 糖尿病心肌病流行現(xiàn)狀 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理機(jī)制 |
| 4 糖尿病心肌病診斷策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干預(yù)策略 |
| 6 小結(jié)和展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 糖心平膠囊網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究 |
| 1 資料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 前言 |
| 實(shí)驗(yàn)一 糖心平膠囊對(duì)DCM的保護(hù)作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)二 糖心平干預(yù)后大鼠心功能及對(duì)抗急性心肌缺血能力評(píng)價(jià) |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)三 基于PI3K/AKT信號(hào)通路糖心平膠囊藥效機(jī)制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 創(chuàng)新點(diǎn)與不足之處 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
| 附件 |
（2）參附湯對(duì)腦缺血后血腦屏障保護(hù)的協(xié)同增效作用以及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 文獻(xiàn)綜述 中醫(yī)藥對(duì)缺血性中風(fēng)后血腦屏障保護(hù)作用的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 前言 |
| 第一部分 參附湯對(duì)缺血性中風(fēng)后血腦屏障保護(hù)的協(xié)同增效作用研究 |
| 一 通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討參附湯協(xié)同增效作用 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4. 小結(jié) |
| 5. 討論 |
| 二 體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證參附湯的血腦屏障保護(hù)作用 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4. 小結(jié) |
| 5. 討論 |
| 第二部分 FAO機(jī)制在參附湯保護(hù)缺血性中風(fēng)后血腦屏障中的作用研究 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4. 小結(jié) |
| 5. 討論 |
| 結(jié)果與討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 展望 |
| 致謝 |
| 在學(xué)期間主要研究成果 |
（3）苦碟子注射液與臨床常用藥物配伍應(yīng)用的可行性研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文縮略詞表 |
| 前言 |
| 實(shí)驗(yàn)一 苦碟子注射液與常用藥物配伍的化學(xué)穩(wěn)定性研究 |
| 一 苦碟子注射液與兩種溶媒及頭孢替安配伍的化學(xué)穩(wěn)定性研究 |
| 1 儀器與材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 二 苦碟子注射液與鹽酸川芎嗪注射液配伍的化學(xué)穩(wěn)定性研究 |
| 1 儀器與材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)二 基于代謝組學(xué)的苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血作用機(jī)制研究 |
| 一 苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血的心臟代謝組學(xué)研究 |
| 1 儀器與試劑 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 二 苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血的血漿代謝組學(xué)研究 |
| 1 儀器與試劑 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 實(shí)驗(yàn)三 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的苦碟子注射液配伍鹽酸川芎嗪預(yù)防心肌缺血作用機(jī)制研究 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 中藥注射液防治心腦血管疾病的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（4）基于Akt-FoxO1通路研究T1AM在心肌缺血再灌注損傷中抑制細(xì)胞代謝和凋亡的作用機(jī)制（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文縮略詞表 |
| 0 引言 |
| 第一部分 T1AM對(duì)大鼠心臟缺血再灌注損傷的調(diào)控作用 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第二部分 基于RNA-Seq技術(shù)篩選T1AM緩解缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞的差異表達(dá)基因 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 第三部分 基于Akt/Foxo1 通路研究T1AM緩解缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞損傷的機(jī)制 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 治療性低體溫對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 作者簡(jiǎn)歷 |
| 致謝 |
| 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集 |
（5）游離肉堿與急性心肌損傷的相關(guān)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 資料和方法 |
| 1.研究對(duì)象 |
| 2.方法 |
| 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 研究不足及展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 急性心肌損傷患者的游離肉堿的相關(guān)研究現(xiàn)狀 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
（6）二甲雙胍保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 二甲雙胍保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用研究 |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷中心肌細(xì)胞凋亡的影響研究 |
| 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌細(xì)胞自噬功能的作用研究 |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第四部分 二甲雙胍對(duì)急性心肌梗死患者行PCI術(shù)后損傷的保護(hù)作用 |
| 引言 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 二甲雙胍對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究進(jìn)展 |
| 1 概述 |
| 2 抗高糖作用的機(jī)制 |
| 3 糖尿病心肌病 |
| 4 二甲雙胍的多效性 |
| 5 缺血再灌注對(duì)心臟的影響 |
| 6 二甲雙胍的心臟保護(hù)作用機(jī)制 |
| 7 總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 中英文縮略詞表 |
| 攻讀博士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（7）基于TLR4/MAPKs/NF-κB信號(hào)通路和鈣通道的6-姜酚心肌保護(hù)作用及機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文縮寫 |
| 引言 |
| 第一部分 6-姜酚對(duì)心肌纖維化小鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 附表 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 6-姜酚對(duì)H9c2心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 6-姜酚對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣通道、收縮力及鈣瞬變的影響 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 附圖 |
| 討論 |
| 小結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 結(jié)論 |
| 綜述一 生姜活性成分及藥理作用研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述二 抗心肌缺血中藥有效成分研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（8）異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章:異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料與方法 |
| 1.2.1 材料 |
| 1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 |
| 1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 1.3.1 血流動(dòng)力學(xué) |
| 1.3.2 心律失常 |
| 1.3.3 心肌酶學(xué)及心肌肌鈣蛋白Ⅰ |
| 1.3.4 血清MDA濃度、SOD活性的檢測(cè) |
| 1.3.5 心肌組織形態(tài)學(xué)觀察(光鏡,電鏡) |
| 1.4 討論 |
| 1.4.1 心肌缺血再滋注損傷與心肌保護(hù) |
| 1.4.2 異氟醚、卡托普利預(yù)處理對(duì)兔血流動(dòng)力學(xué)的影響 |
| 1.4.3 異氟醚、卡托普利預(yù)處理對(duì)兔心肌組織的影響 |
| 1.4.4 異氟醚、卡托普利預(yù)處理抗氧化效應(yīng) |
| 1.5 結(jié)論 |
| 1.6 進(jìn)一步研究方向 |
| 第二章:異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的影響 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 |
| 2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 |
| 2.3.1 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物心肌缺血區(qū)與梗死區(qū)面積 |
| 2.3.2 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡指數(shù) |
| 2.4 討論 |
| 2.4.1 心肌缺血再灌注損傷與細(xì)胞凋亡 |
| 2.4.2 異氟醚、卡托普利預(yù)處理對(duì)兔心梗面積的影響 |
| 2.4.3 異氟醚、卡托普利預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的作用 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 2.6 進(jìn)一步研究方向 |
| 第三章:異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及凋亡通路的影響 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 |
| 3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.3.1 各組兔心肌組織Bcl-2蛋白表達(dá)的結(jié)果比較 |
| 3.3.2 各組兔心肌組織Bax蛋白表達(dá)的結(jié)果比較 |
| 3.3.3 各組兔心肌組織Bcl-2/Bax比值的比較 |
| 3.3.4 各組兔心肌組織caspase-3蛋白表達(dá)的結(jié)果比較 |
| 3.3.5 各組兔心肌組織caspase-8蛋白表達(dá)的結(jié)果比較 |
| 3.3.6 各組兔心肌組織caspase-9蛋白表達(dá)的結(jié)果比較 |
| 3.3.7 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血再灌注后的細(xì)胞凋亡指數(shù) |
| 3.4 討論 |
| 3.4.1 心肌缺血再灌注細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)基因和凋亡通路 |
| 3.4.2 異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)缺血再灌注中細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)基因Bcl-2、Bax的影響 |
| 3.4.3 異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)凋亡通路蛋白的影響 |
| 3.4.4 異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)細(xì)胞凋亡可能的機(jī)制 |
| 3.5 結(jié)論 |
| 3.6 進(jìn)一步的研究方向 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述一 |
| 綜述二 |
| 致謝 |
| 攻讀學(xué)位期間主要的研究成果 |
（9）粉防己堿對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注和缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第一部分 粉防己堿預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用及其與表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯比較研究 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二部分 粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白BAX、BCL-2、CASPASE-3 和CYTC的影響 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第三部分 粉防己堿預(yù)處理對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡影響及其機(jī)制研究 |
| 第一節(jié) 新生大鼠體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)和缺氧/復(fù)氧模型建立 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 第二節(jié) 粉防己堿對(duì)缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞凋亡、PKC表達(dá)的影響及機(jī)制研究 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 全文總結(jié) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄一 英文縮略詞表 |
| 附錄二 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（10）延胡索堿及延胡索復(fù)方抗冠心病室性心律失常的實(shí)驗(yàn)與臨床研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文獻(xiàn)研究 |
| 第一節(jié) 中醫(yī)藥治療心律失常的進(jìn)展 |
| 第二節(jié) 心律失常的西醫(yī)治療進(jìn)展 |
| 第三節(jié) 冠心病室性心律失常的研治現(xiàn)狀 |
| 第四節(jié) 心肌缺血再灌注損傷的研究現(xiàn)狀 |
| 第五節(jié) 心肌缺血預(yù)處理和藥物預(yù)處理的研究現(xiàn)狀 |
| 第六節(jié) 延胡索和延胡索堿的研究現(xiàn)狀 |
| 第七節(jié) 膜片鉗技術(shù)簡(jiǎn)介 |
| 第二章 實(shí)驗(yàn)研究 |
| 第一節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第二節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第三節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌鈣泵及鈉鉀泵活性的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第四節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)心肌細(xì)胞膜L-型鈣通道動(dòng)力學(xué)的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第五節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第六節(jié) 延胡索堿預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌梗塞范圍的影響 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 材料與方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 第三章 臨床研究 |
| 第一節(jié) 研究目的 |
| 第二節(jié) 研究對(duì)象和方法 |
| 第三節(jié) 結(jié)果 |
| 第四節(jié) 討論 |
| 第四章 結(jié)語(yǔ) |
| 第五章 問(wèn)題與展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 附錄 |
| 致謝 |
四、肉堿對(duì)再灌注所致心肌細(xì)胞凋亡的影響──與缺血預(yù)處理作用比較（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]基于PI3K/AKT信號(hào)通路探討糖心平膠囊治療糖尿病心肌病藥效及機(jī)制[D]. 李曉文. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院, 2021(02)
- [2]參附湯對(duì)腦缺血后血腦屏障保護(hù)的協(xié)同增效作用以及機(jī)制研究[D]. 張偉. 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2021(08)
- [3]苦碟子注射液與臨床常用藥物配伍應(yīng)用的可行性研究[D]. 李瑛. 天津中醫(yī)藥大學(xué), 2020(04)
- [4]基于Akt-FoxO1通路研究T1AM在心肌缺血再灌注損傷中抑制細(xì)胞代謝和凋亡的作用機(jī)制[D]. 周海燕. 貴州醫(yī)科大學(xué), 2020(04)
- [5]游離肉堿與急性心肌損傷的相關(guān)研究[D]. 潘有梅. 大連醫(yī)科大學(xué), 2020(03)
- [6]二甲雙胍保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制研究[D]. 方曉玲. 蘇州大學(xué), 2019(04)
- [7]基于TLR4/MAPKs/NF-κB信號(hào)通路和鈣通道的6-姜酚心肌保護(hù)作用及機(jī)制研究[D]. 韓雪. 河北中醫(yī)學(xué)院, 2019(01)
- [8]異氟醚、卡托普利聯(lián)合預(yù)處理對(duì)兔心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[D]. 田毅. 中南大學(xué), 2010(11)
- [9]粉防己堿對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注和缺氧/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究[D]. 常超. 華中科技大學(xué), 2007(05)
- [10]延胡索堿及延胡索復(fù)方抗冠心病室性心律失常的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[D]. 李榮. 廣州中醫(yī)藥大學(xué), 2007(02)
標(biāo)簽：心肌細(xì)胞論文; 心肌缺血論文; 參附湯論文; 缺血再灌注損傷論文; 心肌損傷論文;