一、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（論文文獻綜述）
郝攀,張春麗,馬超,馬歡,陳雪琪,殷雷,閆平,王榮福[1]（2015）在《131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究》文中研究表明[目的]用131I標(biāo)記人膀胱癌特異性單克隆抗體BDI-1,探討其在荷瘤裸鼠體內(nèi)的生物分布及藥代動力學(xué)參數(shù),為其作為膀胱癌診斷和治療的新型靶向藥物提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。[方法]用Ch-T法進行BDI-1的131I標(biāo)記,標(biāo)記完成后,采用Sephadex G-25分離純化,用紙層析法測定標(biāo)記產(chǎn)物的放化純度,經(jīng)尾靜脈注入到荷人膀胱癌裸鼠體內(nèi),在不同時間處死裸鼠,測定裸鼠體內(nèi)生物分布,采用DAS 2.0軟件計算藥代動力學(xué)參數(shù)。[結(jié)果]靜注后,131IBDI-1主要分布于荷瘤裸鼠肝臟、脾臟、腎臟和腫瘤等組織。血液藥—時曲線符合開放性二房室分布模型,其中分布相半衰期[t1/2（α）]為0.1693h,消除相半衰期[t1/2（β）]為69.315h,峰值時間tmax為0.033h,平均血漿清除率為67.154L/（h·kg）,曲線下面積AUC0-t為904.006mg/L·h-1;藥物在腫瘤中攝取的峰時為72h。[結(jié)論]131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠中具有特異的腫瘤攝取,其在血液中清除較快,而在腫瘤中具有較快的吸收半衰期及較長的清除半衰期,適合作為一種腫瘤的靶向診斷與治療藥物。
安萌[2]（2013）在《抗人CD86單鏈抗體的研制及生物學(xué)功能研究》文中研究指明CD86（又稱B7-2）是表達在抗原提呈細(xì)胞（antigen-presenting cell，APC）表面的重要共刺激分子，其受體是表達在T細(xì)胞表面的CD28分子。CD86與CD28結(jié)合轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號，對T細(xì)胞的活化、增殖與功能發(fā)揮起著重要作用。CD86的編碼基因為1120bp，由306個氨基酸組成，屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白。單鏈抗體（single chainvariable fragment，scFv）是一種新型重組抗體，是將抗體重鏈可變區(qū)（VH）和輕鏈可變區(qū)（VL）用一條彈性短肽連接而成的小分子抗體片段，此類抗體的優(yōu)點是分子量小、免疫原性弱、滲透性強、并具有藥物導(dǎo)向及中和毒素等功能。本研究在成功制備了鼠抗人CD86單克隆抗體及其相應(yīng)人-鼠嵌合抗體的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了抗人CD86-scFv的真核表達載體并在CHO細(xì)胞中得到穩(wěn)定表達，進而對該抗體的生物學(xué)功能進行了初步研究。第一部分抗人CD86單鏈抗體（CD86-scFv）的構(gòu)建及表達目的：構(gòu)建抗人CD86-scFv基因并在CHO細(xì)胞中表達，篩選穩(wěn)定表達該抗體的細(xì)胞株。方法：采用RT-PCR從分泌鼠抗人CD86單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株（克隆號：1D1）中克隆VH及VL基因。重疊延伸拼接PCR（gene splicing by overlap extensionPCR，SOE-PCR）方法構(gòu)建具有前導(dǎo)肽的L-VH-Linker-VL單鏈抗體基因，并克隆至真核表達載體pIRES2-EGFP。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染至中華倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO），G418加壓篩選，采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定出穩(wěn)定表達抗人CD86-scFv的細(xì)胞株。結(jié)果：構(gòu)建的抗人CD86-scFv基因全長為780bp，測序后經(jīng)BLAST比對，證明該序列為鼠源親本抗體的可變區(qū)基因，并含有信號肽、連接肽以及His標(biāo)簽。轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，G418加壓篩選后獲得了穩(wěn)定表達抗人CD86-scFv的細(xì)胞株，命名為SA-IV。培養(yǎng)上清與L929-CD86細(xì)胞的陽性結(jié)合率為64.8%。結(jié)論：成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達抗人CD86-scFv的細(xì)胞株SA-IV，為進一步研究該抗體的生物學(xué)活性提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。第二部分抗人CD86-scFv的生物學(xué)功能研究目的：制備抗人CD86-scFv，分析其與不同人源細(xì)胞株膜型CD86分子的結(jié)合特性及介導(dǎo)的生物學(xué)功能。方法：大批量培養(yǎng)細(xì)胞株SA-IV，收集上清，ProfinityTMIMAC鎳預(yù)裝柱分離純化CD86-scFv。采用流式細(xì)胞術(shù)分析CD86-scFv對基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株L929-CD86以及天然表達CD86分子的人B系淋巴瘤細(xì)胞Raji和Daudi膜型CD86分子的識別。競爭抑制實驗分析該抗體與鼠源親本抗體1D1競爭結(jié)合相應(yīng)抗原的能力。在Raji細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入不同濃度的CD86-scFv，MTT法分析CD86-scFv對Raji細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)分析該抗體誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡的作用。CD86-scFv與Raji細(xì)胞共孵育后接種BABL/c裸鼠，觀察抗體對腫瘤細(xì)胞成瘤性的影響。結(jié)果：經(jīng)大量培養(yǎng)SA-IV并收集培養(yǎng)上清，鎳預(yù)裝柱分離純化CD86-scFv的得率為4.2mg/L。CD86-scFv能特異性識別L929-CD86、Raji以及Daudi細(xì)胞表面的CD86分子，陽性結(jié)合率分別為67.0%、72.3%及80.5%。該抗體對鼠源親本抗體1D1具有競爭結(jié)合能力。在Raji細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入CD86-scFv，細(xì)胞生長抑制率為28.3%，凋亡率為11.2%。Raji細(xì)胞與CD86-scFv共孵育后接種BALA/c裸鼠，成瘤（直徑4-5mm）時間較對照組推遲6-8天，在60天的觀察期內(nèi)，抗體處理組腫瘤的平均體積較對照組小30%。結(jié)論：研制的抗人CD86-scFv能夠與相應(yīng)抗原分子結(jié)合，體內(nèi)、外對高表達CD86分子的腫瘤細(xì)胞均具有生長抑制作用。
晁開,黃華梁,郭靄光[3]（2009）在《高親和力抗膀胱癌單鏈抗體篩選及親和力測定》文中研究說明以膀胱癌細(xì)胞系BIU-87膜抗原為親和底物,從抗膀胱癌噬菌體人源化單鏈抗體庫中篩選出4個高親和力改形單鏈抗體.ELISA結(jié)果和NH4SCN洗脫法數(shù)據(jù)顯示,它們對膀胱癌細(xì)胞膜抗原的親和活性顯著高于鼠源單鏈抗體.同時以多種蛋白檢驗了其親和作用的特異性.
張文娟[4]（2009）在《REV囊膜糖蛋白env基因的原核表達及單克隆抗體的制備與應(yīng)用》文中進行了進一步梳理以禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（REV）前病毒全基因cDNA克隆質(zhì)粒DNA（pB101）為模板,采用PCR擴增技術(shù),擴增出1200bp大小的env基因片段,并將其克隆到PGEX-4T-3表達載體上,經(jīng)測序鑒定結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了PGEX-4T-3-env表達質(zhì)粒。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,通過IPTG誘導(dǎo)、SDS-PAGE檢測結(jié)果顯示,env基因在大腸桿菌中以包涵體的形式進行了高效表達。以尿素溶解液洗滌并溶解包涵體蛋白,4℃復(fù)性后用GST融合蛋白純化試劑盒純化;將純化產(chǎn)物用牛凝血酶酶解切除GST標(biāo)簽蛋白便獲得了純env基因囊膜糖蛋白,用Western blot對該蛋白進行檢測分析結(jié)果表明,env基因表達的蛋白具有良好的反應(yīng)原性,能夠很好的識別REV抗體。用純化的env蛋白為包被抗原,建立了檢測抗REV抗體的間接ELISA（ienv-ELISA）。經(jīng)對ienv-ELISA的最佳工作條件測定結(jié)果表明,抗原最佳包被濃度為10mg/ml、血清的最佳稀釋度為1:500,二抗的最佳稀釋度為1:5000,最佳包被液為TB,最佳顯色時間為15min。經(jīng)重復(fù)性試驗、特異性試驗和對比試驗結(jié)果顯示,建立的ienv-ELISA方法有良好的可重復(fù)性,標(biāo)準(zhǔn)差均小于15%;與雞IBDV MDV NDV AIV等病毒陽性抗體均無交叉反應(yīng);與全病毒ELISA（REV-ELISA）和IFA準(zhǔn)確性符合率均超過90%。用純化的env蛋白免疫Babl/c小鼠,用聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)Babl/c小鼠脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合。經(jīng)選擇性培養(yǎng)、有限稀釋法克隆化和純化的env蛋白進行篩選,獲得了16株能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株（分別命名為: 0.5-2E12、3-2A11、3-2B3、3-2F3、1-2E3、3D2、1-2D8、1-2E9、1-1A4、1-2B5、1-2B4、1-2C1、1-2C2、1-2D1、1-2D11、1-2H8）。Western blot分析表明,16株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體均能特異性的識別env蛋白;間接免疫熒光試驗（IFA）檢測結(jié)果顯示,有6株（0.5-2E12、3-2B3、1-2E3、3D2、1-2D8、1-2H8）雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體能特異性的識別REV全病毒。將6株雜交瘤細(xì)胞注射Balb/c小鼠制備腹水,間接ELISA檢測其腹水的抗體效價均超過105;將腹水蛋白進行濃縮、純化,測定其濃度為8mg/ml。用純化單抗建立檢測REV的雙抗體夾心ELISA方法,通過對該方法進行最佳工作條件優(yōu)化結(jié)果表明,單抗、多抗和二抗的最佳工作濃度分別為1:1600、1:8000和1:5000、最佳包被液為CB。用該方法與幾種常見的雞的傳染病病毒（IBDV MDV NDV AIV）進行特異性試驗,結(jié)果均未發(fā)生交叉反應(yīng),說明該方法對REV檢測具有高度特異性。重復(fù)性試驗結(jié)果顯示該方法具有良好的可重復(fù)性。
周麗君,王欲曉,王琰[5]（2008）在《CDR3導(dǎo)向抗體庫法人源化抗膀胱癌Fab的鑒定》文中研究說明目的:對通過CDR3導(dǎo)向抗體庫法篩選到的3株人源化膀胱癌噬菌體抗體進行進一步分析鑒定。方法:用ELISA方法對篩選特異性克隆進行特異性鑒定、抗原表位的核實;采用硫氰酸鹽洗脫ELISA法評估其親和力;選用活性較高的克隆進行膀胱癌組織的免疫組化實驗。結(jié)果:3株陽性克隆可溶性表達后能夠與膀胱癌EJ細(xì)胞特異性結(jié)合;與鼠源噬菌體抗體（BDI）相比,2株克隆的親和指數(shù)比較低,均為0.25mol/L,1株克隆的親和指數(shù)為0.7mol/L,略低于鼠源的親和指數(shù)（0.9mol/L）的水平。選擇活性較高的克隆進行膀胱癌組織的免疫組化實驗,顯示該克隆能夠與癌組織特異性結(jié)合。結(jié)論:用CDR3導(dǎo)向庫法獲得的人源抗體片段基本保持了原鼠源單克隆抗體（mAb）BDI的特性。
翁偉平[6]（2008）在《GST-LRF融合蛋白純化及單克隆抗體的制備》文中研究指明Luman募集因子（Luman-recruiting factor,LRF）是堿性亮氨酸拉鏈蛋白轉(zhuǎn)錄因子,是Luman活化過程中必需的輔助因子,募集Luman進入特定的亞核區(qū),促進有活性的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成。目前,對于LRF的生理功能尚不清楚,獲得其單克隆抗體對于研究LRF的生理功能有非常重要的意義。本研究測定分析了GST-LRF融合蛋白在E.coli BL21（DE3）中高效表達的條件,以純化的目的蛋白作為抗原,免疫BALB/C小鼠,制備單克隆抗體并進行鑒定。獲得以下結(jié)果:1 GST-LRF融合蛋白（glutathione S-transferase,GST）在E.coli BL21（DE3）中高效表達的條件為:37℃、0.1 mmol/L IPTG、誘導(dǎo)表達5 h。電洗脫法純化得到了高純度的目的蛋白。2確定了檢測抗GST-LRF融合蛋白抗體的間接ELISA的最佳作用條件:辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG （酶標(biāo)二抗）的工作濃度為1:1 200;包被抗原為10μg/mL;包被液為pH 9.6,0.05 M碳酸鹽緩沖液;包被條件選擇37℃作用2 h或4℃過夜;封閉液為1.0%明膠,封閉條件為37℃作用1 h。3用間接ELISA篩選陽性孔,通過有限稀釋法篩選出3株分泌抗GST-LRF單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株:A2E4、B2G6、D2F5。4采用腹水誘生法制備了A2E4、B2G6、D2F5 3株雜交瘤細(xì)胞的單克隆抗體,間接ELISA測定腹水抗體效價均為1:10 000,交叉性試驗表明制備的單抗具有特異性,ELISA測定抗體的相對親和力分別為:0.773μg/mL、0.800μg/mL和0.355μg/mL。
潘雪娜[7]（2007）在《抗人膀胱癌單抗BDI-1的制備、鑒定及～（99m）Tc-標(biāo)記的放射免疫顯像實驗研究》文中研究指明膀胱癌是我國男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,目前對膀胱癌的診斷和治療手段很多,利用單克隆抗體導(dǎo)向診斷和治療膀胱癌也是其中較有應(yīng)用前景的方法之一。本實驗采用雜交瘤細(xì)胞接種小鼠誘生腹水的方法制備單克隆抗體BDI-1,用親和層析法提純抗體,運用氯化亞錫還原法完成99mTc對BDI-1的標(biāo)記,并以99mTc-免疫球蛋白作為對照,進行荷人膀胱癌裸鼠的放射免疫顯像研究。實驗研究結(jié)果表明:雜交瘤誘生腹水法可制備大量抗體,親和層析法可以提純較高效價的抗體。SPECT顯像結(jié)果可見,裸鼠尾靜脈注射99mTc-BDI-1 6h后抗體能夠濃聚在腫瘤組織中,并隨時間的延長T/NT增加,24小時后可以達到22.7,BDI-1顯示了良好的免疫活性和良好的腫瘤導(dǎo)向定位的特性,有望成有膀胱癌早期診斷和治療的良好載體。
周麗君,王欲曉,白銀,余莉章,王琰[8]（2006）在《抗膀胱癌人-鼠嵌合抗體分離純化及生物性能的測定》文中研究表明膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率近年來呈明顯上升趨勢,嚴(yán)重威脅著人類健康。目前臨床上常規(guī)采用的方法包括腫瘤的部分切除及輔助BCG或化療藥物的膀胱灌注治療到膀胱全切除,但從根本上還不能夠完全消除腫瘤的復(fù)發(fā)、進展和轉(zhuǎn)移。單克隆抗體為其的診斷和治療提供了一個新方法。近年來,隨著基因工程技術(shù)
張春麗,王榮福[9]（2005）在《膀胱癌的放射免疫顯像與放射免疫治療》文中研究說明
安懷杰,劉志剛,俞煒源[10]（2004）在《治療性全抗體的表達及其研究進展》文中進行了進一步梳理治療性全抗體是一類前景良好的治療藥物,具有潛在的巨大市場。截至2003年6月,美國FDA批準(zhǔn)的治療性全抗體有20種。全抗體表達是抗體工程的研究重點之一,本文對全抗體的表達及其研究進展進行了闡述。
二、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（論文開題報告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡單簡介論文所研究問題的基本概念和背景，再而簡單明了地指出論文所要研究解決的具體問題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡64位RISC處理器存儲管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計過程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁面大小,采用多級分層頁表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級頁表轉(zhuǎn)換過程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲系統(tǒng)實現(xiàn)的一個重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對象從而得到有關(guān)信息。
實驗法：通過主支變革、控制研究對象來發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻研究法：通過調(diào)查文獻來獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實踐的需要提出設(shè)計。
定性分析法：對研究對象進行“質(zhì)”的方面的研究，這個方法需要計算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過具體的數(shù)字，使人們對研究對象的認(rèn)識進一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進行研究。
功能分析法：這是社會科學(xué)用來分析社會現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個方面的影響。
模擬法：通過創(chuàng)設(shè)一個與原型相似的模型來間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（論文提綱范文）
（1）131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究（論文提綱范文）
| 1材料與方法 |
| 1.1主要材料 |
| 1.2方法 |
| 1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和裸鼠模型的建立 |
| 1.2.2131I-BDI-1的制備 |
| 1.2.3131I-BDI-1的純化 |
| 1.2.4荷瘤裸鼠生物學(xué)分布 |
| 1.2.5藥代動力學(xué)參數(shù)計算 |
| 2結(jié)果 |
| 2.1131I-BDI-1在組織中的生物分布曲線 |
| 2.2131I-BDI-1血液藥代動力學(xué)參數(shù) |
| 3討論 |
（2）抗人CD86單鏈抗體的研制及生物學(xué)功能研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 研究背景 |
| 1. B7 分子的結(jié)構(gòu)及表達 |
| 2. 基因工程抗體的表達 |
| 3. B7 分子與疾病 |
| 4. 基因工程抗體的研制及應(yīng)用研究 |
| 參考文獻 |
| 第一部分 抗人 CD86 單鏈抗體（scFv）的構(gòu)建及表達 |
| 1. 材料和試劑 |
| 2. 方法 |
| 3. 結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 參考文獻 |
| 第二部分：抗人 CD86-scFv 的生物學(xué)功能研究 |
| 1. 試劑和材料 |
| 2. 實驗方法 |
| 3 實驗結(jié)果 |
| 4. 討論 |
| 參考文獻 |
| 全文總結(jié)與展望 |
| 綜述：基因工程小分子抗體的研制及應(yīng)用研究 |
| 參考文獻 |
| 本研究所獲得的基金資助 |
| 碩士研究生期間發(fā)表的論文 |
| 縮略詞 |
| 致謝 |
（3）高親和力抗膀胱癌單鏈抗體篩選及親和力測定（論文提綱范文）
| 1 實驗部分 |
| 1.1 材料與試劑 |
| 1.2 方法 |
| (1) 噬菌體原庫的制備 |
| (2) 高親和力單鏈抗體序列篩選 |
| (3) 單鏈抗體親和力判定 |
| (4) 相對親和力指數(shù)測定 |
| (5) 親和特異性檢驗 |
| 2 實驗及結(jié)果 |
| 2.1 人源化改形單鏈抗體庫的篩選 |
| 2.2 親和力判定 |
| 2.3 親和力指數(shù)測定 |
| 2.4 親和特異性檢測 |
| 2.5 4個單鏈抗體序列比較 |
| 3 討論 |
（4）REV囊膜糖蛋白env基因的原核表達及單克隆抗體的制備與應(yīng)用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥 |
| 1.1 病原學(xué) |
| 1.2 流行病學(xué) |
| 1.3 發(fā)病機理 |
| 1.4 臨床癥狀及病理變化 |
| 1.5 診斷 |
| 1.6 防制 |
| 2、單克隆抗體技術(shù) |
| 2.1 單抗技術(shù)的基本原理 |
| 2.2 單克隆抗體的特點 |
| 2.3 單克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用 |
| 2.4 單克隆抗體技術(shù)展望 |
| 3、本試驗的目的意義 |
| 試驗一 REV 囊膜糖蛋白 env 基因的原核表達及純化 |
| 1.材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 PGEX-4T-3-env 原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定 |
| 1.2.2 Env 基因表達 |
| 1.2.3 重組蛋白的提取、純化 |
| 1.2.4 Eev 蛋白特異性測定 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 PCR 擴增env 基因 |
| 2.2 重組質(zhì)粒的鑒定 |
| 2.3 重組原核表達質(zhì)粒的序列測定 |
| 2.4 Env 蛋白表達 |
| 2.5 重組蛋白的酶解 |
| 2.6 蛋白的 Western blot 分析 |
| 3 討論 |
| 試驗二 檢測抗 REV 抗體間接 ELISA 法的建立 |
| 1. 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Ienv-ELISA 方法的建立 |
| 1.2.2 特異性實驗 |
| 1.2.3 重復(fù)性試驗 |
| 1.2.4 Ienv-ELISA 與iREV-ELISA 比較 |
| 1.2.5 Ienv-ELISA 與 IFA 比較 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 Ienv-ELISA 方法的建立 |
| 2.1.1 Ienv-ELISA 試驗條件的優(yōu)化 |
| 2.1.2 臨界值的確定 |
| 2.1.3 重復(fù)性試驗 |
| 2.1.4 特異性試驗 |
| 2.2 Ienv-ELISA 與iREV-ELISA 比較 |
| 2.3 Ienv-ELISA 與IFA 比較 |
| 3 討論 |
| 試驗三 抗 env 蛋白單克隆抗體的制備 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 動物免疫 |
| 1.2.2 細(xì)胞融合 |
| 1.2.4 雜交瘤細(xì)胞的篩選 |
| 1.2.5 雜交瘤細(xì)胞的克隆化 |
| 1.2.6 單克隆抗體腹水的制備 |
| 1.2.7 單克隆抗體的初步鑒定 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 細(xì)胞融合與篩選 |
| 2.2 單克隆抗體的鑒定 |
| 3 討論 |
| 試驗四 檢測REV抗原雙抗體夾心ELISA方法的建立 |
| 1 材料與方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 腹水型單抗的純化 |
| 1.2.2 夾心 ELISA 方法的建立 |
| 1.2.3 重復(fù)性實驗 |
| 1.2.4 特異性交叉試驗 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 單克隆抗體純化結(jié)果 |
| 2.2 夾心 ELISA 方法的建立 |
| 2.2.1 多抗和單抗最佳稀釋度的確定 |
| 2.2.2 包被液種類的選擇 |
| 2.2.3 酶標(biāo)二抗最佳稀釋度的確定 |
| 2.2.4 臨界值的確定 |
| 2.2.5 特異性試驗 |
| 2.2.6 重復(fù)性試驗 |
| 3 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 致謝 |
| 個人簡歷 |
| 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文 |
（5）CDR3導(dǎo)向抗體庫法人源化抗膀胱癌Fab的鑒定（論文提綱范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 可溶性Fab抗體的表達及檢測 |
| 1.2.2 相對親和力的測定 |
| 1.2.3 免疫組化實驗 |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 可溶性Fab抗體的表達及檢測 |
| 2.2 相對親和力的測定 |
| 2.3 腫瘤組織免疫組化實驗 |
| 3 討論 |
（6）GST-LRF融合蛋白純化及單克隆抗體的制備（論文提綱范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 LUMAN 募集因子和融合蛋白純化及單克隆抗體的研究進展 |
| 1.1 LUMAN 募集因子的研究現(xiàn)狀 |
| 1.1.1 LUMAN 募集因子的發(fā)現(xiàn)及功能 |
| 1.1.2 LRF 與未折疊蛋白反應(yīng)（UNFOLDED PROTEIN RESPONSE, UPR） |
| 1.2 融合蛋白純化 |
| 1.2.1 包涵體的形成機制 |
| 1.2.2 包涵體蛋白的處理 |
| 1.3 單克隆抗體的發(fā)展與應(yīng)用 |
| 1.3.1 單抗技術(shù)的基本原理 |
| 1.3.2 單克隆抗體在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用 |
| 1.3.3 單克隆抗體技術(shù)的研究進展 |
| 第二章 GST-LRF 融合蛋白在大腸桿菌中表達條件的優(yōu)化及純化 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.1.3 融合蛋白的純化 |
| 2.2 試驗結(jié)果 |
| 2.2.1 溫度對蛋白表達的影響 |
| 2.2.2 誘導(dǎo)劑濃度對蛋白表達的影響 |
| 2.2.3 誘導(dǎo)時間對蛋白表達的影響 |
| 2.2.4 重組蛋白可溶性分析 |
| 2.2.5 GLUTATHIONE SEPHAROSE 48 親和層析柱法和電洗脫法純化GST-LRF 融合蛋白的比較 |
| 2.2.6 蛋白濃度測定 |
| 2.3 討論 |
| 第三章 間接ELISA 法檢測GST-LRF 融合蛋白抗體效價方法的建立 |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 主要試劑 |
| 3.1.2 儀器 |
| 3.1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）使用試劑的配制 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.2 結(jié)果與分析 |
| 3.2.1 酶標(biāo)二抗工作濃度的選擇 |
| 3.2.2 最佳包被條件及封閉條件的選擇 |
| 3.2.3 最佳包被液的選擇 |
| 3.2.4 包被時間和包被溫度的選擇 |
| 3.2.5 封閉液封閉時間的選擇 |
| 3.2.6 ELISA 操作程序的最佳條件的確定 |
| 3.3 討論 |
| 第四章 抗GST-LRF 融合蛋白雜交瘤細(xì)胞株的建立 |
| 4.1 材料與方法 |
| 4.1.1 主要試劑 |
| 4.1.2 主要儀器 |
| 4.1.3 實驗動物及瘤細(xì)胞 |
| 4.1.4 方法 |
| 4.2 結(jié)果與分析 |
| 4.2.1 SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng) |
| 4.2.2 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備 |
| 4.2.3 細(xì)胞融合 |
| 4.2.4 雜交瘤細(xì)胞株的篩選 |
| 4.3 討論 |
| 4.3.1 飼養(yǎng)層細(xì)胞 |
| 4.3.2 雜交瘤細(xì)胞的篩選及克隆 |
| 4.3.3 細(xì)胞融合 |
| 4.4 小結(jié) |
| 第五章 抗GST-LRF 融合蛋白單克隆抗體的制備及性質(zhì)分析 |
| 5.1 材料與方法 |
| 5.1.1 主要試劑 |
| 5.1.2 主要儀器 |
| 5.1.3 試驗動物及細(xì)胞 |
| 5.1.4 方法 |
| 5.2 結(jié)果 |
| 5.2.1 抗GST-LRF 融合蛋白單克隆抗體效價的測定 |
| 5.2.2 單克隆抗體與LUMAN、ZHANGFEI 等蛋白的交叉反應(yīng) |
| 5.2.3 單克隆抗體親和性的測定 |
| 5.2.4 腹水中抗體蛋白含量的測定 |
| 5.3 討論 |
| 5.3.1 單克隆抗體制備與純化 |
| 5.3.2 單克隆抗體的特異性 |
| 5.3.3 單克隆抗體親和性的測定 |
| 5.4 小結(jié) |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 附錄 |
| 致謝 |
| 作者簡介 |
（7）抗人膀胱癌單抗BDI-1的制備、鑒定及～（99m）Tc-標(biāo)記的放射免疫顯像實驗研究（論文提綱范文）
| 提要 |
| 英文縮略表 |
| 第一部分文獻綜述 |
| 一、膀胱癌 |
| 二、BIU-87 細(xì)胞系 |
| 三、雜交瘤技術(shù)原理 |
| 四、單克隆抗體 |
| 五、腫瘤放射性核素顯像的進展 |
| 六、立題依據(jù) |
| 第二部分 實驗研究 |
| 一、材料與方法 |
| （一） 主要試劑 |
| （二） 主要器材及儀器 |
| （三） 細(xì)胞株 |
| （四） 實驗動物 |
| （五） 實驗方法 |
| （六） 動物模型的建立 |
| （七） ~(99m)Tc-BDI-1 的制備 |
| （八） 皮下荷瘤裸鼠~(99m)Tc-BDI-1 顯像研究 |
| （九） 皮下荷瘤裸鼠~(99m)Tc-球蛋白液體顯像研究 |
| （十） 統(tǒng)計學(xué)方法 |
| 二、結(jié)果 |
| （一） 細(xì)胞實驗結(jié)果 |
| （二） AKTA 層析儀收集抗體峰結(jié)果 |
| （三） SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果 |
| （四） 免疫熒光結(jié)果 |
| （五） 點印跡結(jié)果 |
| （六） ELISA 結(jié)果 |
| （七） ~(99m)Tc-BDI-1 和~(99m)Tc-球蛋白的物理性狀和放化純度結(jié)果 |
| （八） 動物模型建立結(jié)果 |
| （九） 動物實驗結(jié)果 |
| 三、討論 |
| （一） ~(99m)Tc-BDI-1的制備及標(biāo)記 |
| （二） ~(99m)Tc-BDI-1和~(99m)Tc-球蛋白荷瘤裸鼠顯像研究 |
| 四、結(jié)論 |
| 參考文獻 |
| 博士期間發(fā)表文章 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致謝 |
（9）膀胱癌的放射免疫顯像與放射免疫治療（論文提綱范文）
| 1 膀胱癌的放射免疫顯像與放射免疫治療的方法 |
| 1.1 靜脈給藥法 |
| 1.2 膀胱灌注法[5] |
| 2 單克隆抗體及其在膀胱癌放射免疫顯像與放射免疫治療中的應(yīng)用 |
| 2.1 抗粘蛋白MCU1的單克隆抗體 |
| 2.1.1 C595 (又稱為NCRC48) |
| 2.1.2 AUA1 |
| 2.1.3 HMFG |
| 2.2 抗皮質(zhì)生長因子受體 (EGFR) 的單克隆抗體 |
| 2.3 直接針對膀胱癌細(xì)胞制備的單克隆抗體 |
| 2.3.1 BLCA-38, BLCA-8與C1-137 |
| 2.3.2 BDI-1 BDI-1是針對人膀胱癌細(xì)胞系BIU-87制備的單克隆抗體。 |
| 2.4 其他 |
| 2.4.1 抗癌胚抗原CEA單克隆抗體 |
| 2.4.2 針對cytokeratin8的單克隆抗體 |
| 3 存在問題與進展 |
（10）治療性全抗體的表達及其研究進展（論文提綱范文）
| 1 全抗體的分τ結(jié)構(gòu)和功能 |
| 2 表達系統(tǒng) |
| 2.1 在哺乳動物細(xì)胞中的表達 |
| 2.2 在植物中的表達 |
| 2.3 在細(xì)菌中的表達 |
| 2.4 在動物乳腺細(xì)胞中的表達 |
四、CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF A HUMAN-MOUSE CHIMERIC ANTIBODY AGAINST HUMAN BLADDER CANCER（論文參考文獻）
- [1]131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究[J]. 郝攀,張春麗,馬超,馬歡,陳雪琪,殷雷,閆平,王榮福. 腫瘤學(xué)雜志, 2015(04)
- [2]抗人CD86單鏈抗體的研制及生物學(xué)功能研究[D]. 安萌. 蘇州大學(xué), 2013(11)
- [3]高親和力抗膀胱癌單鏈抗體篩選及親和力測定[J]. 晁開,黃華梁,郭靄光. 甘肅科學(xué)學(xué)報, 2009(02)
- [4]REV囊膜糖蛋白env基因的原核表達及單克隆抗體的制備與應(yīng)用[D]. 張文娟. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2009(03)
- [5]CDR3導(dǎo)向抗體庫法人源化抗膀胱癌Fab的鑒定[J]. 周麗君,王欲曉,王琰. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2008(04)
- [6]GST-LRF融合蛋白純化及單克隆抗體的制備[D]. 翁偉平. 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2008(11)
- [7]抗人膀胱癌單抗BDI-1的制備、鑒定及～（99m）Tc-標(biāo)記的放射免疫顯像實驗研究[D]. 潘雪娜. 吉林大學(xué), 2007(03)
- [8]抗膀胱癌人-鼠嵌合抗體分離純化及生物性能的測定[A]. 周麗君,王欲曉,白銀,余莉章,王琰. 第九屆全國腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會議論文集, 2006
- [9]膀胱癌的放射免疫顯像與放射免疫治療[J]. 張春麗,王榮福. 標(biāo)記免疫分析與臨床, 2005(03)
- [10]治療性全抗體的表達及其研究進展[J]. 安懷杰,劉志剛,俞煒源. 生物技術(shù)通訊, 2004(03)
標(biāo)簽：抗體論文; elisa論文; 融合蛋白論文; 單克隆抗體技術(shù)論文; 細(xì)胞免疫論文;