一、自體神經(jīng)組織勻漿修復(fù)面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文文獻(xiàn)綜述）
戴依娜[1]（2021）在《四種冷凍保護(hù)劑玻璃化法保存人指固有神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究指明目的:評(píng)估二甲基亞砜、甘油、丙二醇、乙二醇四種冷凍保護(hù)劑在玻璃化法保存人指固有神經(jīng)中的保護(hù)效果,篩選合適的人指固有神經(jīng)冷凍保護(hù)劑,為人指固有神經(jīng)的玻璃化法保存提供一定的理論依據(jù)。方法:取2018年10月到2020年10月在遵義醫(yī)科大學(xué)第五附屬（珠海）醫(yī)院行截肢手術(shù)后病人放棄肢體的人指固有神經(jīng)共75個(gè)片段,每段1cm,將75個(gè)片段隨機(jī)分為5組（4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,1個(gè)對(duì)照組）,每組15個(gè)片段,分別為:30%二甲基亞砜組、30%甘油組、30%乙二醇組、30%丙二醇組和空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組分別添加對(duì)應(yīng)種類的冷凍保護(hù)劑使用玻璃化法于液氮（-196℃）中保存3周,空白對(duì)照組添加等體積濃度的無(wú)菌生理鹽水使用玻璃化法在液氮（-196℃）中保存3周。復(fù)溫后進(jìn)行石蠟包埋切片,運(yùn)用HE染色法觀察人指固有神經(jīng)的組織結(jié)構(gòu)變化;應(yīng)用鈣黃綠素-AM（Calcien-AM）和碘化丙啶（Propidium iodide,PI）雙染色激光共聚焦顯微鏡（Laser scanning confocal microscope,LSCM）檢測(cè)神經(jīng)組織生物活性;ELISA法檢測(cè)體外培養(yǎng)后的指固有神經(jīng)片段的神經(jīng)生長(zhǎng)因子（Nerve growth factor,NGF）表達(dá)情況,應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)各組間NGF濃度水平進(jìn)行比較,分析各組間差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1、HE染色結(jié)果:HE染色后光鏡下觀察見(jiàn),空白對(duì)照組神經(jīng)鞘膜結(jié)構(gòu)模糊,神經(jīng)纖維排列疏松、紊亂,局部有脫髓鞘改變;乙二醇組神經(jīng)鞘膜基本完整,神經(jīng)纖維排列整齊、緊湊;二甲基亞砜組神經(jīng)鞘膜相對(duì)完整,神經(jīng)纖維間存在間隙,但結(jié)構(gòu)排列整齊;甘油組神經(jīng)鞘膜偶見(jiàn)斷裂,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)較松散;丙二醇組神經(jīng)鞘膜結(jié)構(gòu)存在,完整性欠佳,神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)松散。2、激光共聚焦顯微鏡結(jié)果:Calcein-AM和PI雙染色,LSCM觀察見(jiàn):空白對(duì)照組神經(jīng)纖維綠色熒光（代表活細(xì)胞）輕度較弱,紅色熒光（代表死細(xì)胞）強(qiáng)度較強(qiáng),且廣泛分布。各實(shí)驗(yàn)組綠色熒光較空白對(duì)照組均增強(qiáng),紅色熒光強(qiáng)度均減弱;實(shí)驗(yàn)組中乙二醇組綠色熒光強(qiáng)度最強(qiáng),分布廣泛,紅色熒光最弱,分布范圍有限;二甲基亞砜組次之;甘油組及丙二醇組神經(jīng)熒光強(qiáng)度及分布情況相似,綠色熒光強(qiáng)度最弱,紅色熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。3、人NGF表達(dá)ELISA檢測(cè)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組相比較,空白對(duì)照組NGF水平最低,各實(shí)驗(yàn)組NGF水平均較空白對(duì)照組明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在實(shí)驗(yàn)組組間比較中,與乙二醇組比較,二甲基亞砜組、甘油組、丙二醇組NGF水平均較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與二甲基亞砜組相比,乙二醇組NGF水平較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,甘油組及丙二醇組NGF水平較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與甘油組相比,乙二醇組、二甲基亞砜組NGF水平較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,丙二醇組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。與丙二醇組相比,乙二醇組、二甲基亞砜組NGF水平較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論:1、乙二醇、二甲基亞砜、甘油、丙二醇對(duì)人指固有神經(jīng)的玻璃化法保存有保護(hù)作用。2、30%體積濃度下,乙二醇對(duì)人指固有神經(jīng)的玻璃化法保存的保護(hù)效果較二甲基亞砜、甘油、丙二醇好。3、30%體積濃度下,甘油與丙二醇對(duì)人指固有神經(jīng)玻璃化保存的保護(hù)效果相似。
唐安群[2]（2020）在《定向誘導(dǎo)去分化脂肪（d-DFAT）細(xì)胞對(duì)大鼠面神經(jīng)缺損的修復(fù)作用》文中研究表明面神經(jīng)損傷是口腔頜面外科臨床上一種常見(jiàn)且較為嚴(yán)重的創(chuàng)傷并發(fā)癥之一,常伴隨腮腺區(qū)域的外傷及手術(shù)相關(guān)創(chuàng)傷,進(jìn)而導(dǎo)致面神經(jīng)麻痹。繼發(fā)于面神經(jīng)損傷后引起的周圍性面神經(jīng)麻痹,是一種既影響患者面部運(yùn)動(dòng)功能（鼓腮無(wú)力,眼瞼不能閉合等）又影響美觀（口角歪斜,鼻唇溝消失等）的嚴(yán)重疾病,會(huì)給患者及家人帶來(lái)了社交、審美等心理、精神障礙。近年來(lái),隨著組織工程和再生醫(yī)學(xué)（Tissue engineering and regenerative medicine,TE/RM）飛速發(fā)展,針對(duì)長(zhǎng)間斷面神經(jīng)缺損的問(wèn)題研究出一系列組織工程神經(jīng)移植物（Tissue engineered nerve grafts,TENGs）,其包含神經(jīng)導(dǎo)管支架、支持細(xì)胞（種子細(xì)胞）、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)以及細(xì)胞粘附分子等成分,通過(guò)模擬自體神經(jīng)移植物的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特點(diǎn),建立理想的再生微環(huán)境以更好地促進(jìn)再生神經(jīng)軸突由近端向遠(yuǎn)端生長(zhǎng)并再支配靶器官。臨床上,脂肪組織可以通過(guò)反復(fù)使用安全、微創(chuàng)的吸脂術(shù)獲得,因此其成為理想的種子細(xì)胞來(lái)源。成熟脂肪細(xì)胞是脂肪組織中最豐富的細(xì)胞類型,其占脂肪組織的90%以上。從脂肪組織中分離出的成熟脂肪細(xì)胞可以通過(guò)體外去分化（天花板培養(yǎng)）為成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,稱為去分化脂肪細(xì)胞（Dedifferentiated fat cells,DFAT cells）。與傳統(tǒng)脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞——脂源性干細(xì)胞（Adipose-derived stem cells,ASCs）相比,DFAT細(xì)胞體現(xiàn)出相同的增殖活性以及多向分化的能力。DFAT細(xì)胞與ASCs雖然同樣來(lái)自于脂肪組織,但兩者來(lái)源的細(xì)胞群體不同,DFAT細(xì)胞來(lái)源于成熟的脂肪細(xì)胞,而ASCs來(lái)源于脂肪組織中基質(zhì)-血管部分（Stromal-vascular fraction,SVF）,而SVF是由一組異質(zhì)性的細(xì)胞群組成的,內(nèi)含內(nèi)皮細(xì)胞、非特征性的基質(zhì)細(xì)胞、血液細(xì)胞和組織型巨噬細(xì)胞等。通過(guò)兩者來(lái)源我們可以推測(cè)DFAT細(xì)胞具有較高的同質(zhì)性（Homogeneity）,純度遠(yuǎn)高于ASCs,并且來(lái)源于占脂肪組織90%以上的成熟脂肪細(xì)胞的它來(lái)說(shuō),初期即可獲得大量的細(xì)胞基數(shù),為快速進(jìn)行面神經(jīng)缺損修復(fù)提供可能。目的:本研究擬通過(guò)體外細(xì)胞因子誘導(dǎo),將DFAT細(xì)胞在體外定向誘導(dǎo)為類雪旺細(xì)胞樣細(xì)胞,稱為定向誘導(dǎo)分化的去分化脂肪細(xì)胞（Direction-induced dedifferentiated fat cells,d-DFAT cells）,并進(jìn)一步探討其對(duì)促進(jìn)面神經(jīng)再生的作用。利用d-DFAT細(xì)胞并復(fù)合I型膠原凝膠與硅膠導(dǎo)管構(gòu)建一種新型組織工程神經(jīng)并評(píng)價(jià)其修復(fù)面神經(jīng)缺損的效果。方法:1.分離DFAT細(xì)胞（天花板培養(yǎng)法）及ASCs（差速離心法）原代細(xì)胞,并進(jìn)行培養(yǎng)傳代。然后通過(guò)流式細(xì)胞表面抗原的鑒定、三系誘導(dǎo)分化以及細(xì)胞形態(tài)這3種方式觀察DFAT細(xì)胞是否與ASCs一樣具有“干細(xì)胞特性”。2.將第2代DFAT細(xì)胞及ASCs應(yīng)用細(xì)胞因子進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化,通過(guò)鑒定SCs的細(xì)胞表面標(biāo)志物神經(jīng)組織蛋白S-100β（Nerve tissue protein S-100β,S-100β）及膠質(zhì)纖維酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）來(lái)判斷其是否具有向SCs分化的能力。3.將種子細(xì)胞（d-DFAT細(xì)胞、d-ASCs、DFAT細(xì)胞及ASCs）與Ⅰ型膠原蛋白混合后,與硅膠導(dǎo)管共培養(yǎng)形成TENGs。將其植入到SD大鼠面神經(jīng)缺損模型中通過(guò)比較各組大鼠觸須運(yùn)動(dòng)功能、再生面神經(jīng)頰支神經(jīng)電生理評(píng)估及再生面神經(jīng)頰支形態(tài)學(xué)及組織學(xué)的情況,判斷各組對(duì)SD大鼠面神經(jīng)頰支缺損的再生能力。4.利用d-DFAT細(xì)胞構(gòu)建3D細(xì)胞聚合體,并其進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估。結(jié)果:1.DFAT細(xì)胞與ASCs細(xì)胞形態(tài)成梭形的類成纖維細(xì)胞樣;能夠進(jìn)行成骨及成脂誘導(dǎo)分化;流式細(xì)胞表面抗原鑒定顯示CD44與CD90表達(dá)陽(yáng)性而CD45表達(dá)陰性。2.DFAT細(xì)胞在神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下發(fā)生分化,形態(tài)上逐漸由梭形、扁平狀多突起星狀成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,轉(zhuǎn)變?yōu)榧忓N形、細(xì)胞雙極呈拉絲狀延伸的SCs形態(tài);免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）鑒定證實(shí)d-DFAT細(xì)胞與d-ASCs一樣,均表達(dá)SCs表面標(biāo)志物S-100β和GFAP。3.通過(guò)對(duì)SD大鼠觸須運(yùn)動(dòng)的觀察、神經(jīng)電生理的檢測(cè)以及組織學(xué)結(jié)構(gòu)（髓鞘、軸突及膠質(zhì)細(xì)胞）的評(píng)估,可知類雪旺樣細(xì)胞組（d-DFAT細(xì)胞組與d-ASCs組）面神經(jīng)功能及結(jié)構(gòu)恢復(fù)的速度及程度均要優(yōu)于干細(xì)胞組（DFAT細(xì)胞組與ASCs組）,但整體情況要略遜于自體神經(jīng)組（Autograft組）。4.d-DFAT細(xì)胞培養(yǎng)形成3D d-DFAT細(xì)胞聚合體,并通過(guò)組織學(xué)評(píng)估我們可以發(fā)現(xiàn),3D d-DFAT細(xì)胞聚合體由大量細(xì)胞組成,且細(xì)胞之間密度較高、排列較為均勻內(nèi)含有大量的膠原纖維及I型膠原蛋白,細(xì)胞之間存在大量細(xì)胞外基質(zhì)。結(jié)論:1.DFAT細(xì)胞與ASCs一樣具有“干細(xì)胞特性”。2.DFAT細(xì)胞與ASCs一樣能夠向類雪旺細(xì)胞進(jìn)行分化。3.建立了SD大鼠面神經(jīng)頰支10mm缺損的模型;利用含種子細(xì)胞（d-DFAT細(xì)胞、d-ASCs、DFAT細(xì)胞及ASCs）的TENGs對(duì)大鼠面神經(jīng)頰支缺損進(jìn)行修復(fù),通過(guò)大鼠觸須運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)電生理及再生面神經(jīng)頰支形態(tài)學(xué)及組織學(xué)的評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)d-DFAT細(xì)胞作為種子細(xì)胞與d-ASCs一樣均能夠很好的引導(dǎo)和支持軸突再生,并促進(jìn)髓鞘的形成;與單純的干細(xì)胞作為種子細(xì)胞（DFAT細(xì)胞、ASCs）進(jìn)行比較,d-DFAT細(xì)胞在面神經(jīng)頰支缺損修復(fù)的過(guò)程中具有顯著的優(yōu)勢(shì);但與自體神經(jīng)移植相比下仍然有不足。4.成功構(gòu)建3D d-DFAT細(xì)胞聚合體,通過(guò)對(duì)其進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估,發(fā)現(xiàn)其內(nèi)細(xì)胞排列均勻且富含膠原纖維及I型膠原蛋白,細(xì)胞之間存在大量細(xì)胞外基質(zhì)。
魏帥[3]（2019）在《股神經(jīng)分支基膜管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究》文中認(rèn)為目的:隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,周圍神經(jīng)損傷的發(fā)病率也在逐年升高,給患者的生活質(zhì)量和社會(huì)的和諧發(fā)展均帶來(lái)了不利影響。除了可以減張縫合的小段神經(jīng)缺損之外,自體神經(jīng)移植仍然是治療大段周圍神經(jīng)缺損的金標(biāo)準(zhǔn),但其存在著許多問(wèn)題,如來(lái)源受限、供區(qū)的二次損傷等。目前同種異體去細(xì)胞神經(jīng)移植物對(duì)于橋接周圍神經(jīng)缺損展現(xiàn)出了其良好的臨床應(yīng)用前景?；す苁侨ゼ?xì)胞神經(jīng)的主要成分,但是不同種類去細(xì)胞神經(jīng)移植物的基膜管是否存在差異,尚未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。本研究探索了大鼠股神經(jīng)皮支與肌支基膜管的差異,同時(shí)觀察其去細(xì)胞神經(jīng)移植物在修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損中是否存在作用差異,為臨床不同種類神經(jīng)移植物的選擇和3D打印組織工程神經(jīng)提供一定的參考依據(jù)。方法:（1）取健康8周齡雄性SD大鼠的新鮮股神經(jīng)的皮支與肌支,采用QAR-CAA-67抗體蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)股神經(jīng)皮支和肌支結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)情況,獲取其差異表達(dá)蛋白;同時(shí)對(duì)其超微結(jié)構(gòu)、組織學(xué)染色觀察。（2）取SD大鼠股神經(jīng)及其分支進(jìn)行化學(xué)去細(xì)胞處理,對(duì)其超微結(jié)構(gòu)、組織學(xué)和拉曼光譜特征進(jìn)行評(píng)價(jià)。（3）通過(guò)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),將股神經(jīng)皮支去細(xì)胞神經(jīng)移植物（Acellular femoral nerve cutaneous branch grafts,CBG）和肌支去細(xì)胞神經(jīng)移植物（Acellular femoral nerve muscular branch grafts,MBG）分別填充于殼聚糖空導(dǎo)管中制作用以橋接大鼠坐骨神經(jīng)缺損的（15mm）的組織工程去細(xì)胞神經(jīng)移植物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組（n=10）,分別植入CBG（CBG組）、MBG（MBG組）、殼聚糖空管（Hollow chitosan conduit,HCC組）以及自體神經(jīng)（autologous nerve grafts,ANG組）修復(fù)缺損。術(shù)后通過(guò)步態(tài)分析、形態(tài)學(xué)以及組織學(xué)等檢測(cè)方法評(píng)價(jià)其修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的效果。結(jié)果:在髓鞘和基膜管（2837nm）厚度方面,股神經(jīng)肌支均大于皮支;股神經(jīng)肌支乙酰膽堿酯酶染色陽(yáng)性部位所占比例較大,而皮支染色陰性部位所占比例較大;基因本體論富集分析顯示在細(xì)胞成分（cellular component）方面細(xì)胞外空間（extracellular space）是高度富集的,更多的相關(guān)基因在股神經(jīng)肌支中表達(dá)上調(diào);術(shù)后12周,CBG組、MBG組以及ANG組的步態(tài)分析、腓腸肌肌肉濕重恢復(fù)率及病理學(xué)觀察等檢測(cè)的結(jié)果優(yōu)于HCC組,CBG組和MBG組結(jié)果相似,組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但兩組結(jié)果均略差于ANG組,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:感覺(jué)神經(jīng)（皮支）來(lái)源和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)（肌支）來(lái)源的神經(jīng)移植物雖然在成分和基底膜結(jié)構(gòu)上存在差異,但是其體內(nèi)修復(fù)效果相似。3D打印神經(jīng)移植物時(shí)必須考慮到其內(nèi)部神經(jīng)基膜管的厚度（2837nm）和三維空間取向性結(jié)構(gòu)。
王宇強(qiáng)[4]（2019）在《透明質(zhì)酸水凝膠緩釋雪旺細(xì)胞外泌體修復(fù)坐骨神經(jīng)長(zhǎng)節(jié)段缺損的實(shí)驗(yàn)研究》文中認(rèn)為目的:（1）體外分離新生SD大鼠雪旺細(xì)胞并培養(yǎng),超速離心法提取雪旺細(xì)胞分泌的外泌體并進(jìn)行特異性蛋白鑒定。透射電鏡觀察雪旺細(xì)胞外泌體的粒徑和分布。（2）研究雪旺細(xì)胞外泌體對(duì)神經(jīng)元及雪旺細(xì)胞的生物學(xué)作用。觀察和研究透明質(zhì)酸凝膠緩釋外泌體的生物學(xué)特征參數(shù)。（3）探討透明質(zhì)酸水凝膠包裹緩釋雪旺細(xì)胞外泌體填充PCL神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)長(zhǎng)節(jié)段缺損的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)效果。方法:（1）采用0.1%Ⅳ型膠原酶消化法提取原代大鼠雪旺細(xì)胞,并采用DMEM/F12完全培養(yǎng)基培養(yǎng)和純化。采用S100和Sox10進(jìn)行純度鑒定。采用CCK-8試劑盒對(duì)雪旺細(xì)胞的增殖狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。采用超高速離心法提取雪旺細(xì)胞分泌的外泌體,利用BCA試劑盒檢測(cè)外泌體中蛋白的含量。Western blot法對(duì)雪旺細(xì)胞分泌外泌體表面標(biāo)志物CD63、TSG101、CD9、Rab5和Na+/K+ATP酶進(jìn)行鑒定。（2）構(gòu)建1%濃度的透明質(zhì)酸水凝膠,并將雪旺細(xì)胞外泌體進(jìn)行包裹。體外放置于PBS中采用BCA試劑盒檢測(cè)外泌體的緩釋曲線。應(yīng)用雪旺細(xì)胞外泌體干預(yù)雪旺細(xì)胞和神經(jīng)元,CCK-8試劑盒檢測(cè)外泌體對(duì)雪旺細(xì)胞的增殖作用,以及對(duì)兩種細(xì)胞生物活性蛋白分泌的作用。ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)第1、3、5天后,外泌體干預(yù)的雪旺細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）、腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子（BDNF）、髓鞘零蛋白（P0）、細(xì)胞極性蛋白Par-3的水平。同時(shí)ELISA法檢測(cè)外泌體干預(yù)后第1、3、5天時(shí)神經(jīng)元中生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（Growth-associatedprotein-43,GAP-43）、神經(jīng)絲蛋白-200（Neurofilament-200,NF-200）、βIII–Tubulin的表達(dá)水平。（3）靜電紡絲制備PCL神經(jīng)導(dǎo)管,并采用掃描電鏡觀察導(dǎo)管的大體形態(tài)及顯微結(jié)構(gòu),測(cè)量纖維絲的直徑。采用小量程的力學(xué)儀器檢測(cè)PCL神經(jīng)導(dǎo)管的的楊氏模量、最大應(yīng)力、最大載荷、最大斷裂張力等力學(xué)參數(shù)。采用透明質(zhì)酸水凝膠包裹雪旺細(xì)胞外泌體填充PCL神經(jīng)導(dǎo)管,制備15mm長(zhǎng)節(jié)段大鼠坐骨神經(jīng)缺損,并進(jìn)行端端吻合。采用單純透明質(zhì)酸填充PCL導(dǎo)管作為對(duì)照組,自體神經(jīng)移植組也進(jìn)行對(duì)照。在術(shù)后4、8、12周時(shí)檢測(cè)大鼠坐骨神經(jīng)指數(shù)、再生神經(jīng)電生理功能。熒光金逆行示蹤檢測(cè)大鼠神經(jīng)元胞體的存活情況及神經(jīng)再生的情況。透射電鏡觀察三組再生神經(jīng)的有髓軸突的直徑、有髓軸突的數(shù)量、再生軸突的面積。NF-200和S100對(duì)各組再生神經(jīng)的免疫熒光染色,觀察期神經(jīng)結(jié)構(gòu)再生情況。HE染色觀察三組大鼠腓腸肌肌纖維直徑的差異。結(jié)果:（1）雪旺細(xì)胞在光鏡下可以看到呈梭型,體積不大,存在雙極,細(xì)胞核在中間,比較明顯,有折光性。細(xì)胞多呈縱行排列的形態(tài)。雪旺細(xì)胞在接種2小時(shí)后,貼壁的比率約為23.5%,6小時(shí)時(shí)的貼壁比率增加到47.9%,而在12小時(shí)的時(shí)候有88.9%的細(xì)胞貼壁,在16小時(shí)以后細(xì)胞貼壁的比率均高于99%。在培養(yǎng)3天時(shí),雪旺細(xì)胞數(shù)量較最初增長(zhǎng)了3.9倍,而培養(yǎng)7天時(shí)增長(zhǎng)了11.4倍。S-100和Sox-10雙標(biāo)熒光染色對(duì)雪旺細(xì)胞鑒定的純度為97%。外泌體粒徑主要分布在100-160 nm之間,本研究測(cè)得的外泌體的平均直徑在125 nm。Western blot檢測(cè)顯示外泌體特異性蛋白CD63、TSG101、CD9在本研究所提取的雪旺細(xì)胞外泌體中均有表達(dá),而非外泌體表達(dá)蛋白R(shí)ab5和Na+/K+ATP酶則未見(jiàn)表達(dá)。（2）外泌體在透明質(zhì)酸凝膠中前3天釋放比率較大,第一天釋放比率為34%,第三天達(dá)到41%,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),釋放逐漸緩慢。在第4、5、6、8、16、32天時(shí)的累積釋放比率為43%、47%、51%、53%、75%、90%,而在第64天時(shí)候檢測(cè)得出累積釋放率為99%,幾乎完全釋放。對(duì)照組軸突數(shù)量為35.4±4.3,而外泌體刺激組為126.3±14.4（P<0.05）。在軸突生長(zhǎng)長(zhǎng)度方面,外泌體組的平均長(zhǎng)度長(zhǎng)達(dá)（1563.0±132.5）μm,顯著高于對(duì)照組的（864.3±77.4）μm（P<0.05）。外泌體干預(yù)組雪旺細(xì)胞在培養(yǎng)后的第3、5、7天時(shí)細(xì)胞增殖水平均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。外泌體刺激后的雪旺細(xì)胞分泌NGF、BDNF、髓鞘零蛋白（P0）、細(xì)胞極性蛋白Par-3的水平在培養(yǎng)后第3天和第5天較第1天時(shí)均顯著升高,而第5天的表達(dá)量也均顯著高于第3天的水平（P<0.05）。外泌體刺激后的DRG神經(jīng)元細(xì)胞分泌的標(biāo)志性蛋白進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)GAP-43、NF-200、βIII–Tubulin的水平在培養(yǎng)后第3天和第5天較第1天時(shí)均顯著升高,而第5天的表達(dá)量也均顯著高于第3天的水平（P<0.05）。（3）PCL神經(jīng)導(dǎo)管的內(nèi)孔直徑為1500μm左右,而管壁的厚度約為500μm,表面纖維絲均勻分布,纖維絲平均直徑為4.9μm。PCL神經(jīng)導(dǎo)管孔隙率為（89.7±2.6）%、最大應(yīng)力為（7.5±0.6）MPa、楊氏模量為（22.4±2.1）MPa、最大斷裂張力為（596.4±33.8）%、最大載荷為（5.6±0.8）N,符合神經(jīng)再生要求。術(shù)后第4、8、12周時(shí)PCL/HA-EXO組大鼠的再生神經(jīng)有髓軸突的直徑、有髓軸突的數(shù)量、再生軸突的面積顯著高于PCL/HA組,而G-ratio值則顯著低于PCL/HA組（P<0.05）。而三個(gè)時(shí)間點(diǎn)中,PCL/HA-EXO的有髓軸突的數(shù)量、再生軸突的面積和G-ratio值均與自體神經(jīng)移植組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。術(shù)后12周時(shí)可見(jiàn)PCL/HA-EXO組大鼠軸突沿著導(dǎo)管順行生長(zhǎng),有明顯的方向性。并且神經(jīng)軸突及雪旺細(xì)胞的表達(dá)顯著高于PCL/HA組,與自體神經(jīng)移植組差異不明顯。各組大鼠術(shù)后隨著時(shí)間的延長(zhǎng),復(fù)合肌動(dòng)作電位幅度、神經(jīng)傳導(dǎo)速度及潛伏期均有所改善,但PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)組較PCL/HA組改善更為明顯,術(shù)后4、8、12周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著高于PCL/HA組（P<0.05）。在術(shù)后第8周時(shí),PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組的神經(jīng)傳導(dǎo)速度及潛伏期均無(wú)顯著性差異,而復(fù)合肌動(dòng)作電位仍存在一些差異（P<0.05）。而術(shù)后12周時(shí),三個(gè)指標(biāo)則在PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組的SFI指數(shù)在術(shù)后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均顯著高于PCL/HA組（P<0.05）,并且在術(shù)后第8,12周時(shí)PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組的SFI指數(shù)相似,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)后12周PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組的腓腸肌纖維直徑分別為（68.4±6.2）μm和（72.3±7.6）μm,顯著高于PCL/HA組（P<0.05）,而PCL/HA-EXO組和自體神經(jīng)移植組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。結(jié)論:（1）本研究成功分離提取了新生SD大鼠雪旺細(xì)胞,純度高,滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。采用超速離心法加超濾法能夠成功提取雪旺細(xì)胞分泌的外泌體,經(jīng)鑒定是雪旺細(xì)胞分泌的外泌體,純度較高。（2）透明質(zhì)酸水凝膠能夠有效的包裹和緩釋雪旺細(xì)胞分泌的外泌體,其緩釋曲線與體內(nèi)雪旺細(xì)胞增殖遷移及神經(jīng)軸突再生的時(shí)間相似,能夠更好的在體內(nèi)應(yīng)用。雪旺細(xì)胞分泌的外泌體能夠有效的促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖,促進(jìn)雪旺細(xì)胞和神經(jīng)元特異性蛋白分泌,能夠較好的促進(jìn)神經(jīng)再生。（3）PCL/HA-EXO神經(jīng)導(dǎo)管能夠有效的促進(jìn)大鼠長(zhǎng)節(jié)段神經(jīng)缺損的運(yùn)動(dòng)功能康復(fù)及組織學(xué)及電生理學(xué)明顯改善。
梅思偉[5]（2018）在《不同修復(fù)方法對(duì)周圍神經(jīng)損傷后GAP-43蛋白及其mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究指明目的:通過(guò)不同修復(fù)方法對(duì)周圍神經(jīng)損傷后GAP-43蛋白及其m RNA表達(dá)水平的差異來(lái)探討臨床上常用的神經(jīng)修復(fù)方法,如神經(jīng)外膜端-端吻合法、膠原蛋白神經(jīng)套管套接法及自體神經(jīng)外膜小間隙吻合法修復(fù)大鼠周圍神經(jīng)損傷的效果,并對(duì)周圍神經(jīng)損傷修復(fù)的機(jī)制進(jìn)行一定的探究,以期對(duì)臨床工作中周圍神經(jīng)損傷的治療起到一定的參考價(jià)值。方法:選取兩月齡S-D大鼠90只,體重約250g300g,隨機(jī)分為3組,每組30只。分別為A、B、C三組:A組為神經(jīng)外膜端-端吻合組,B組為膠原蛋白神經(jīng)套管套接組,C組為自體神經(jīng)外膜小間隙橋接組。A組切斷大鼠左側(cè)坐骨神經(jīng)并予以原位神經(jīng)外膜原位端-端吻合,B組離斷后予以膠原蛋白神經(jīng)套管套接,C組則予以自體神經(jīng)外膜小間隙吻合。分別于術(shù)后第5、7、14、21、28天取出神經(jīng)標(biāo)本并進(jìn)行Western Blot技術(shù)及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)再生神經(jīng)組織中GAP-43蛋白及其m RNA表達(dá)情況,以比較三種不同方法修復(fù)周圍神經(jīng)損傷后再生神經(jīng)內(nèi)的GAP-43表達(dá)規(guī)律及差異。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析,p<0.05為具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。結(jié)果:三組不同修復(fù)方法修復(fù)周圍神經(jīng)損傷后再生神經(jīng)內(nèi)的GAP-43 m RNA及其蛋白表達(dá)均呈先增高后降低的趨勢(shì);其m RNA表達(dá)均在2周前后最多,而其蛋白含量在3周左右最多。人工神經(jīng)套管組及自體神經(jīng)外膜小間隙組GAP-43蛋白及m RNA的表達(dá)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均多于端-端吻合組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而神經(jīng)套管組與自體神經(jīng)外膜小間隙組相比,GAP-43蛋白及其m RNA的表達(dá)差異并不明顯。結(jié)論:膠原蛋白神經(jīng)套管套接及自體神經(jīng)外膜小間隙橋接構(gòu)建的神經(jīng)再生室相對(duì)于神經(jīng)外膜普通端-端吻合更有利于GAP-43蛋白及其m RNA的表達(dá),對(duì)損傷神經(jīng)修復(fù)具有一定的促進(jìn)作用,是修復(fù)周圍神經(jīng)損傷的一種有效的吻合方法。
劉華蔚[6]（2014）在《面神經(jīng)缺損修復(fù)及神經(jīng)周瘢痕預(yù)防的相關(guān)研究》文中指出第一部分、殼聚糖導(dǎo)管預(yù)防周圍神經(jīng)瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)一殼聚糖導(dǎo)管預(yù)防兔面神經(jīng)周瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究目的：周圍神經(jīng)解剖性損傷后，神經(jīng)周瘢痕的形成會(huì)壓迫神經(jīng)，阻礙軸突的再生，影響神經(jīng)功能的恢復(fù)。應(yīng)用可生物降解的殼聚糖導(dǎo)管作為物理屏障，觀察其對(duì)兔面神經(jīng)周瘢痕及神經(jīng)內(nèi)血運(yùn)的影響。方法：新西蘭大白兔36只，行腮腺大部切除，面神經(jīng)解剖性損傷造模。隨機(jī)分為覆蓋組、包裹組、自體對(duì)照組。于術(shù)后4、12周采用Petersen分級(jí)評(píng)估面神經(jīng)與周圍組織粘連情況，采用組織學(xué)染色方法檢測(cè)面神經(jīng)周瘢痕及神經(jīng)內(nèi)血管密度，并采用觸須運(yùn)動(dòng)、透射電鏡、神經(jīng)電生理等方法對(duì)面神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果：術(shù)后4周時(shí)petersen評(píng)分無(wú)明顯差異（P>0.05），12周時(shí)瘢痕粘連較明顯，覆蓋組與包裹組解剖時(shí)較自體對(duì)照組容易（P<0.01）；術(shù)后4周覆蓋組有髓神經(jīng)纖維直徑、髓鞘厚度、神經(jīng)纖維數(shù)量均優(yōu)于包裹組及對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；術(shù)后4、12周對(duì)照組膠原厚度大于覆蓋組與包裹組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；術(shù)后12周覆蓋組與自體對(duì)照組兩者纖維直徑較接近，排列均整齊，髓鞘壁較厚，兩組間無(wú)明顯差異（P>0.05），包裹組纖維直徑、髓鞘壁厚度、神經(jīng)內(nèi)血管密度均較小，與前兩者存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)論：殼聚糖導(dǎo)管作為物理屏障覆蓋于面神經(jīng)表面可有效減少神經(jīng)周瘢痕的形成、減輕瘢痕對(duì)面神經(jīng)功能的影響。實(shí)驗(yàn)二、殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合透明質(zhì)酸預(yù)防大鼠坐骨神經(jīng)瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究目的：觀察將殼聚糖導(dǎo)管與透明質(zhì)酸聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)1cm鉗夾性損傷后神經(jīng)功能的影響。方法：選用清潔級(jí)健康成年SD大鼠60只，坐骨神經(jīng)鉗夾損傷造模，隨機(jī)分為覆蓋組、覆蓋+透明質(zhì)酸組、鉗夾組、鉗夾+透明質(zhì)酸組，每組15只。于術(shù)后4、8、12周對(duì)坐骨神經(jīng)與周圍組織粘連、神經(jīng)周瘢痕增生情況進(jìn)行觀察，并對(duì)神經(jīng)功能進(jìn)行坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、組織學(xué)和神經(jīng)電生理檢測(cè)。結(jié)果：術(shù)后4周時(shí)坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、petersen評(píng)分、神經(jīng)纖維計(jì)數(shù)、髓鞘厚度、有髓神經(jīng)纖維平均直徑各組間均無(wú)明顯差異；術(shù)后8周、12周時(shí)，鉗夾+透明質(zhì)酸組其坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、petersen評(píng)分、神經(jīng)纖維計(jì)數(shù)、髓鞘厚度、有髓神經(jīng)纖維平均直徑等各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于對(duì)照組。術(shù)后4、8、12周時(shí)神經(jīng)外膜膠原厚度檢測(cè)各組均明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01），12周時(shí)HA組神經(jīng)外膜膠原厚度要厚于殼聚糖組及殼聚糖+HA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)論：殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合透明質(zhì)酸可以促進(jìn)鼠坐骨神經(jīng)鉗夾損傷的恢復(fù)，減少其神經(jīng)周瘢痕的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)三、殼聚糖導(dǎo)管植入對(duì)腮腺術(shù)后面神經(jīng)功能恢復(fù)的臨床效果觀察目的：觀察并比較殼聚糖導(dǎo)管應(yīng)用于腮腺手術(shù)后對(duì)術(shù)后患者面神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。方法：75例腮腺腫瘤患者接受腮腺淺葉摘除術(shù)或腮腺全切手術(shù)，分為兩組，一組應(yīng)用殼聚糖導(dǎo)管覆蓋面神經(jīng)總干及各分支，一組為常規(guī)手術(shù)作為對(duì)照。在手術(shù)后7天、1月、3月、6月和9月分別進(jìn)行超聲檢查和血常規(guī)檢查并按HB標(biāo)準(zhǔn)觀察面神經(jīng)功能。結(jié)果：隨訪時(shí)間9月-50月，平均21.7月，75名患者中50名行腮腺淺葉摘除，25名行腮腺全切術(shù)，手術(shù)后不同時(shí)間的血常規(guī)檢及超聲查顯示無(wú)論是應(yīng)用殼聚糖組還對(duì)照組，患者均無(wú)異常，表明殼聚糖導(dǎo)管植入體內(nèi)后不會(huì)引起不良反應(yīng)。術(shù)后7天即刻面癱發(fā)生率殼聚糖組（29/32，90.6%），對(duì)照組（39/43,90.7%）；永久性面癱發(fā)生率面癱發(fā)生率殼聚糖組（0/32，0%），對(duì)照組（2/43,4.7%）均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)后7天對(duì)兩組患者面神經(jīng)功能行HB評(píng)分，結(jié)果兩組患者面神經(jīng)麻痹嚴(yán)重程度無(wú)顯著性差異（P>0.05）。對(duì)患者面神經(jīng)恢復(fù)速度進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)殼聚糖組神經(jīng)恢復(fù)速度快于對(duì)照組，差異有顯著性意義（P<0.01）。結(jié)論：殼聚糖導(dǎo)管具有良好的生物相容性，植入體內(nèi)無(wú)不良反應(yīng)，在腮腺手術(shù)后應(yīng)用殼聚糖導(dǎo)管覆蓋面神經(jīng)對(duì)其功能恢復(fù)有一定促進(jìn)作用。第二部分GDNF基因慢病毒載體的構(gòu)建、病毒的包裝及MSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)染目的：構(gòu)建攜帶EGFP和GDNF的慢病毒載體，利用其轉(zhuǎn)染MSCs并對(duì)其進(jìn)行鑒定，獲得可穩(wěn)定過(guò)表達(dá)GDNF的MSCs。方法：通過(guò)PCR擴(kuò)增，BamHI和AscI雙酶酶切目的基因片段， T4DNA連接酶連接,將目的基因GDNF插入慢病毒載體pLenti6.3MCSIRES2-EGFP,構(gòu)建重組慢病毒。在lipofectamine2000介導(dǎo)下將構(gòu)建成功的慢病毒轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞系（293T），包裝生產(chǎn)慢病毒,并測(cè)定病毒滴度。將包裝好的慢病毒感染BMSCs,并對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞行病毒轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)（MOI值）測(cè)定，篩選最佳感染復(fù)數(shù)。Western、RT-PCR分別檢測(cè)轉(zhuǎn)然后GDNF蛋白和mRNA的表達(dá)情況，流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果：成功構(gòu)建攜帶EGFP和GDNF的慢病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染MSCs后96小時(shí)強(qiáng)熒光表達(dá)，當(dāng)MOI值為25時(shí)細(xì)胞熒光表達(dá)強(qiáng)且活性較好。Western和RT-PCR檢測(cè)證實(shí)GDNF在MSCs中成功表達(dá)，流式細(xì)胞儀觀察轉(zhuǎn)染效率為94.2%。結(jié)論：成功將攜帶EGFP和GDNF的慢病毒轉(zhuǎn)染MSCs，獲得過(guò)表達(dá)GDNF基因的MSCs，為后期實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。第三部分、脫細(xì)胞神經(jīng)復(fù)合GDNF轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)一、周圍神經(jīng)脫細(xì)胞方法的篩選目的：采用不同的方法對(duì)兔面神經(jīng)進(jìn)行脫細(xì)胞處理，對(duì)脫細(xì)胞神經(jīng)組織學(xué)及體內(nèi)植入進(jìn)行檢測(cè)，為面神經(jīng)脫細(xì)胞方法的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：分別采用凍融法、化學(xué)法及凍融+酶消化法處理兔面神經(jīng)，對(duì)處理的神經(jīng)進(jìn)行HE染色、掃描電鏡觀察和透射電鏡觀察其組織學(xué)結(jié)構(gòu)；并將不同方法處理的神經(jīng)進(jìn)行兔背部皮下植入，于2、4周處死動(dòng)物，行大體觀察及組織學(xué)觀察。結(jié)果：組織學(xué)觀察見(jiàn)化學(xué)法（Hudson法）、凍融+酶消化法處理的神經(jīng)其髓鞘清除較徹底，只有部分區(qū)域可見(jiàn)極少量髓鞘殘留，凍融法處理的神經(jīng)內(nèi)可見(jiàn)髓鞘皺縮、變形但有較多殘留。皮下埋植實(shí)驗(yàn)觀察見(jiàn)單純凍融法處理的神經(jīng)內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)稍多，主要分布在神經(jīng)束周邊的基底膜間隙中，Hudson法、凍融+酶消化法處理的神經(jīng)未見(jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：凍融+酶消化法處理方法簡(jiǎn)單、神經(jīng)支架結(jié)構(gòu)保存完整，神經(jīng)內(nèi)髓鞘等抗原成分去除較徹底，是一種良好的去細(xì)胞方法，為后期實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)二、脫細(xì)胞神經(jīng)復(fù)合GDNF轉(zhuǎn)染的MSCs修復(fù)兔面神經(jīng)缺損目的：以脫細(xì)胞面神經(jīng)為支架，復(fù)合GDNF轉(zhuǎn)染的MSCs修復(fù)兔面神經(jīng)多分支缺損，觀察其對(duì)面神經(jīng)再生及對(duì)面神經(jīng)元存活的作用。方法：新西蘭大白兔60只，面神經(jīng)解剖性損傷造模。完全隨機(jī)分為：脫細(xì)胞同種異體神經(jīng)移植組（ANA），脫細(xì)胞異體神經(jīng)+間充質(zhì)干細(xì)胞組（AN-MSCs），脫細(xì)胞異體神經(jīng)+GDNF轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細(xì)胞（AN-G-MSCs），自體神經(jīng)移植組（Control）。于術(shù)后4、12、24周時(shí)取材，對(duì)動(dòng)物行大體觀察并采用觸須運(yùn)動(dòng)、神經(jīng)電生理等方法對(duì)面神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)估，分別對(duì)移植神經(jīng)的近端及遠(yuǎn)端行甲苯暗藍(lán)染色、透射電鏡觀察其再生軸突的變化。結(jié)果：對(duì)面神經(jīng)總干處神經(jīng)軸突形態(tài)計(jì)量學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)后4周時(shí)脫細(xì)胞神經(jīng)移植組其神經(jīng)軸突計(jì)數(shù)、髓鞘厚度、髓鞘直徑均明顯低于其他三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后12、24周時(shí)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。面神經(jīng)移植物遠(yuǎn)端術(shù)后12周時(shí)面神經(jīng)各分支檢測(cè)脫細(xì)胞神經(jīng)移植與MSCs組神經(jīng)軸突計(jì)數(shù)、髓鞘厚度、髓鞘直徑均明顯低于GDNF組與自體神經(jīng)移植組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后24周時(shí)脫細(xì)胞神經(jīng)移植各項(xiàng)指標(biāo)均低于其他三組.結(jié)論：將脫細(xì)胞神經(jīng)與GDNF轉(zhuǎn)染的MSCs聯(lián)合應(yīng)用可成功修復(fù)兔面神經(jīng)多分支缺損，其修復(fù)效果優(yōu)于單純應(yīng)用脫細(xì)胞神經(jīng)，且可以一定程度上保護(hù)面神經(jīng)元的存活。實(shí)驗(yàn)三同種異體神經(jīng)移植修復(fù)面神經(jīng)缺損的長(zhǎng)期隨訪觀察目的：臨床應(yīng)用脫細(xì)胞神經(jīng)移植修復(fù)面神經(jīng)缺損，并進(jìn)行長(zhǎng)期的隨訪，觀察其修復(fù)效果及安全性。方法：2004年7月至2013年7月，因外傷或腮腺惡性腫瘤侵襲術(shù)中切除導(dǎo)致的面神經(jīng)缺損44例，最終共有35例神經(jīng)缺損修復(fù)患者完成隨訪觀察，其中自體神經(jīng)移植20例，脫細(xì)胞神經(jīng)移植15例。術(shù)后最短隨訪時(shí)間為9個(gè)月，隨訪時(shí)分別進(jìn)行局部超聲檢查和血常規(guī)檢查，并按HB標(biāo)準(zhǔn)觀察面神經(jīng)功能。結(jié)果：隨訪時(shí)間9月-9年，面神經(jīng)缺損長(zhǎng)度10mm-50mm，其中術(shù)中一期缺損修復(fù)26例，二期手術(shù)移植9例，二期手術(shù)距損傷時(shí)間2天-3個(gè)月。術(shù)后隨訪時(shí)的血常規(guī)檢及超聲查均未發(fā)現(xiàn)無(wú)異常，表明脫細(xì)胞神經(jīng)植入體內(nèi)后未引起明顯的不良反應(yīng)。最終自體神經(jīng)移植組與脫細(xì)胞神經(jīng)移植組有意義的功能恢復(fù)分別為85%（17/20）和80%（12/15），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；術(shù)后HB分級(jí)比較發(fā)現(xiàn)脫細(xì)胞神經(jīng)移植神經(jīng)功能恢復(fù)情況稍弱于自體神經(jīng)移植，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：采用脫細(xì)胞神經(jīng)在臨床上修復(fù)面神經(jīng)缺損并進(jìn)行長(zhǎng)期的隨訪觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脫細(xì)胞神經(jīng)可以修復(fù)面神經(jīng)缺損，長(zhǎng)期隨訪未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，其修復(fù)與自體神經(jīng)移植接近。脫細(xì)胞神經(jīng)移植可成為臨床面神經(jīng)缺損修復(fù)的一種選擇。
劉華蔚[7]（2011）在《殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合NGF緩釋微球修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究》文中指出目的：研制神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor, NGF）緩釋微球,通過(guò)微球復(fù)合殼聚糖導(dǎo)管修復(fù)兔面神經(jīng)缺損,從而觀察持續(xù)釋放的NGF在相對(duì)穩(wěn)態(tài)的殼聚糖導(dǎo)管中對(duì)面神經(jīng)生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。方法：（1）采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法（W/O/W）及聚合物合金法與乳化-溶劑揮發(fā)法（S/O/W）結(jié)合制備NGF緩釋微球,對(duì)所制微球一般性質(zhì)及體外釋藥性能進(jìn)行檢測(cè),掃描電鏡觀察微球的形態(tài)、粒徑,NGF含量采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISSA）法測(cè)定,釋放液中NGF活性采用PC12細(xì)胞測(cè)定。（2）選擇2.5-3kg的新西蘭大白兔36只,無(wú)菌條件下切斷右側(cè)面神經(jīng)頰支,制成10mm的兔面神經(jīng)頰支缺損模型。完全隨機(jī)分組方法分成四組（每組9只）：A：殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合NGF緩釋微球（10mg）組、B：殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合單純NGF（5μg）組、C：殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合生理鹽水組、D：自體神經(jīng)移植組。每組隨機(jī)分為三個(gè)亞組（每個(gè)亞組3只）,分別于術(shù)后1個(gè)月,2個(gè)月,3個(gè)月行大體觀察、神經(jīng)直徑測(cè)量、神經(jīng)電生理檢測(cè)、組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)和電鏡觀察。結(jié)果：傳統(tǒng)復(fù)乳法NGF緩釋微球包封率（23.74%）,聚合物合金法NGF緩釋微球包封率（49.46%）,傳統(tǒng)復(fù)乳法可持續(xù)釋放有活性NGF達(dá)60d以上,聚合物合金法可持續(xù)釋放有活性NGF達(dá)90天。術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月A組在神經(jīng)傳導(dǎo)速度及形態(tài)學(xué)中的有髓神經(jīng)纖維數(shù)、髓鞘厚度等均優(yōu)于B及C組,和D組的結(jié)果基本相似。結(jié)論：聚合物合金法較傳統(tǒng)復(fù)乳法制備的NGF緩釋微球包封率高,體外試驗(yàn)其性質(zhì)穩(wěn)定,釋放有活性的NGF時(shí)間長(zhǎng)。聚合物合金法制備的微球與殼聚糖導(dǎo)管聯(lián)合應(yīng)用修復(fù)兔面神經(jīng)缺損效果明顯,與自體移植組效果相近,明顯優(yōu)于對(duì)照組。因此殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合NGF緩釋微球?qū)ν妹嫔窠?jīng)缺損的修復(fù)有明顯的促進(jìn)作用。
寧麗娜,熊杰[8]（2011）在《神經(jīng)組織工程支架或異種神經(jīng)移植在面神經(jīng)缺損中的應(yīng)用》文中研究說(shuō)明背景:了解面神經(jīng)損傷的修復(fù)方法,以及各種組織支架的特性與優(yōu)勢(shì),對(duì)于修復(fù)方法與材料的合理選擇是十分必要的。目的:總結(jié)神經(jīng)組織工程支架或異種神經(jīng)移植在面神經(jīng)缺損中的應(yīng)用進(jìn)展。方法:應(yīng)用計(jì)算機(jī)檢索PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)及CNKI數(shù)據(jù)庫(kù),在標(biāo)題和摘要中以"組織工程支架,神經(jīng)移植,面神經(jīng),修復(fù)"或"tissue engineering scaffolds,nerve trans plantation,facial,repair"為檢索詞進(jìn)行檢索。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)選擇21篇文獻(xiàn)進(jìn)行綜述。結(jié)果與結(jié)論:面神經(jīng)缺損后立即直接縫合神經(jīng)的斷端是最好的修復(fù)方法。自體神經(jīng)移植受神經(jīng)移植體來(lái)源之限,常造成供區(qū)失神經(jīng)支配;以及產(chǎn)生束外有髓和無(wú)髓軸突無(wú)規(guī)則生長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)纖維錯(cuò)向再生,造成嚴(yán)重的聯(lián)帶運(yùn)動(dòng)的不足。異體或異種神經(jīng)移植法雖然取得了一定的效果,但仍處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究階段,尚難以應(yīng)用于臨床。
劉華蔚,溫偉生[9]（2010）在《神經(jīng)組織支架材料修復(fù)面神經(jīng)缺損的研究進(jìn)展》文中提出利用組織工程技術(shù)修復(fù)面神經(jīng)缺損成為面神經(jīng)缺損修復(fù)的新的治療方法。其中,神經(jīng)組織支架材料成為主要研究熱點(diǎn)?，F(xiàn)就神經(jīng)組織支架材料在面神經(jīng)修復(fù)的中的研究進(jìn)展作一綜述。
李清華[10]（2008）在《復(fù)合橋與他克莫司修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究》文中研究說(shuō)明【目的】觀察異種去細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)復(fù)合自體翻轉(zhuǎn)靜脈修復(fù)兔長(zhǎng)距離面神經(jīng)缺損的修復(fù)效果及全身應(yīng)用他克莫司時(shí)的神經(jīng)再生情況,分析他克莫司在長(zhǎng)距離面神經(jīng)缺損修復(fù)過(guò)程中的作用,探討異種去細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)復(fù)合自體翻轉(zhuǎn)靜脈的復(fù)合橋在兔長(zhǎng)距離面神經(jīng)缺損修復(fù)過(guò)程中的作用機(jī)制,為臨床修復(fù)長(zhǎng)距離面神經(jīng)缺損、促進(jìn)面神經(jīng)再生提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！痉椒ā繉?0只新西蘭大白兔按隨機(jī)分配原則,分為三組。實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組各10只。實(shí)驗(yàn)組Ⅰ左側(cè)面神經(jīng)缺損以面神經(jīng)同位移植修復(fù),實(shí)驗(yàn)組Ⅱ左側(cè)面神經(jīng)缺損修復(fù)方法同Ⅰ組,并全身應(yīng)用他克莫司,實(shí)驗(yàn)組Ⅲ左側(cè)面神經(jīng)以復(fù)合橋修復(fù)左側(cè)面神經(jīng)缺損并全身應(yīng)用他克莫司;實(shí)驗(yàn)組Ⅰ右側(cè)面神經(jīng)不做任何處理,用做正常對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ右側(cè)面神經(jīng)均留作缺損對(duì)照。于術(shù)后16周進(jìn)行大體觀察、神經(jīng)電生理檢測(cè),并處死30只動(dòng)物,取材行HE染色、Masson三色法染色觀察神經(jīng)再生情況,采用圖像分析軟件量化計(jì)算神經(jīng)再生量并評(píng)價(jià)神經(jīng)再生質(zhì)量?！窘Y(jié)果】（1）復(fù)合橋修復(fù)組其翻轉(zhuǎn)靜脈在面神經(jīng)再生過(guò)程中吸收明顯且無(wú)異物反應(yīng),能有效抑制神經(jīng)纖維瘤的形成,可為神經(jīng)再生提供良好的微環(huán)境。（2）神經(jīng)電生理檢測(cè)結(jié)果顯示異種去細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)復(fù)合自體翻轉(zhuǎn)靜脈修復(fù)面神經(jīng)缺損后神經(jīng)肌肉功能恢復(fù)良好,雖然再生軸突成熟度和有髓神經(jīng)面積恢復(fù)率略低于正常,但是與原位吻合組相似,而且功能也與神經(jīng)原位吻合相似。（3）再生神經(jīng)組織學(xué)觀察顯示全身應(yīng)用他克莫司組的再生軸突成熟度優(yōu)于非他克莫司組,但是在本實(shí)驗(yàn)的觀察時(shí)間內(nèi)兩組神經(jīng)傳導(dǎo)功能沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?！窘Y(jié)論】（1）異種去細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)有效消除了細(xì)胞等抗原成分,保留了基底膜管,具有天然的三維立體結(jié)構(gòu),是理想的神經(jīng)再生支架材料;（2）異種去細(xì)胞神經(jīng)基質(zhì)和自體翻轉(zhuǎn)靜脈聯(lián)合應(yīng)用,具有明顯的協(xié)同作用,可以提供大量有助于神經(jīng)再生的種子細(xì)胞并有助于形成適合神經(jīng)再生的微環(huán)境,有利于長(zhǎng)距離面神經(jīng)缺損的修復(fù);（3）他克莫司能有效抑制面神經(jīng)損傷后引起的免疫反應(yīng),可能對(duì)面神經(jīng)損傷后再生有積極作用;除免疫抑制作用外,他克莫司還能通過(guò)其他機(jī)制,如神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、干預(yù)細(xì)胞凋亡等促進(jìn)面神經(jīng)損傷后再生,加快面神經(jīng)軸突成熟。充分明確他克莫司的這一作用還有待做進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究。
二、自體神經(jīng)組織勻漿修復(fù)面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文開(kāi)題報(bào)告）
（1）論文研究背景及目的
此處內(nèi)容要求：
首先簡(jiǎn)單簡(jiǎn)介論文所研究問(wèn)題的基本概念和背景，再而簡(jiǎn)單明了地指出論文所要研究解決的具體問(wèn)題，并提出你的論文準(zhǔn)備的觀點(diǎn)或解決方法。
寫法范例：
本文主要提出一款精簡(jiǎn)64位RISC處理器存儲(chǔ)管理單元結(jié)構(gòu)并詳細(xì)分析其設(shè)計(jì)過(guò)程。在該MMU結(jié)構(gòu)中,TLB采用叁個(gè)分離的TLB,TLB采用基于內(nèi)容查找的相聯(lián)存儲(chǔ)器并行查找,支持粗粒度為64KB和細(xì)粒度為4KB兩種頁(yè)面大小,采用多級(jí)分層頁(yè)表結(jié)構(gòu)映射地址空間,并詳細(xì)論述了四級(jí)頁(yè)表轉(zhuǎn)換過(guò)程,TLB結(jié)構(gòu)組織等。該MMU結(jié)構(gòu)將作為該處理器存儲(chǔ)系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的一個(gè)重要組成部分。
（2）本文研究方法
調(diào)查法：該方法是有目的、有系統(tǒng)的搜集有關(guān)研究對(duì)象的具體信息。
觀察法：用自己的感官和輔助工具直接觀察研究對(duì)象從而得到有關(guān)信息。
實(shí)驗(yàn)法：通過(guò)主支變革、控制研究對(duì)象來(lái)發(fā)現(xiàn)與確認(rèn)事物間的因果關(guān)系。
文獻(xiàn)研究法：通過(guò)調(diào)查文獻(xiàn)來(lái)獲得資料，從而全面的、正確的了解掌握研究方法。
實(shí)證研究法：依據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)理論和實(shí)踐的需要提出設(shè)計(jì)。
定性分析法：對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行“質(zhì)”的方面的研究，這個(gè)方法需要計(jì)算的數(shù)據(jù)較少。
定量分析法：通過(guò)具體的數(shù)字，使人們對(duì)研究對(duì)象的認(rèn)識(shí)進(jìn)一步精確化。
跨學(xué)科研究法：運(yùn)用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對(duì)某一課題進(jìn)行研究。
功能分析法：這是社會(huì)科學(xué)用來(lái)分析社會(huì)現(xiàn)象的一種方法，從某一功能出發(fā)研究多個(gè)方面的影響。
模擬法：通過(guò)創(chuàng)設(shè)一個(gè)與原型相似的模型來(lái)間接研究原型某種特性的一種形容方法。
三、自體神經(jīng)組織勻漿修復(fù)面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
（1）四種冷凍保護(hù)劑玻璃化法保存人指固有神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中英文縮略詞表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 同種異體神經(jīng)移植修復(fù)周圍神經(jīng)損傷的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 作者簡(jiǎn)介 |
（2）定向誘導(dǎo)去分化脂肪（d-DFAT）細(xì)胞對(duì)大鼠面神經(jīng)缺損的修復(fù)作用（論文提綱范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 DFAT細(xì)胞和ASCs的分離、培養(yǎng)及鑒定 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 材料與方法 |
| 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 1.2.3 實(shí)驗(yàn)器械 |
| 1.2.4 相關(guān)試劑 |
| 1.2.5 方法 |
| 1.3 結(jié)果 |
| 1.3.1 DFAT細(xì)胞及ASCs的體外培養(yǎng)及傳代 |
| 1.3.2 DFAT細(xì)胞及ASCs成骨、成脂誘導(dǎo)結(jié)果 |
| 1.3.3 DFAT細(xì)胞及ASCs圖像流式鑒定結(jié)果 |
| 1.4 討論 |
| 1.5 結(jié)論 |
| 第2章 脂肪來(lái)源干細(xì)胞誘導(dǎo)成類雪旺樣細(xì)胞 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 材料與方法 |
| 2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 2.2.2 實(shí)驗(yàn)器械 |
| 2.2.3 相關(guān)試劑 |
| 2.2.4 方法 |
| 2.3 結(jié)果 |
| 2.3.1 DFAT細(xì)胞及ASCs誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)變化 |
| 2.3.2 類雪旺樣細(xì)胞(d-DFAT細(xì)胞、d-ASCs)的鑒定 |
| 2.4 討論 |
| 2.5 結(jié)論 |
| 第3部分 脂肪組織來(lái)源種子細(xì)胞與生物凝膠復(fù)合神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠面神經(jīng)頰支缺損的研究 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 材料與方法 |
| 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 3.2.3 實(shí)驗(yàn)器械 |
| 3.2.4 相關(guān)試劑 |
| 3.2.5 方法 |
| 3.3 結(jié)果 |
| 3.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物情況 |
| 3.3.2 觸須運(yùn)動(dòng)評(píng)估 |
| 3.3.3 神經(jīng)電生理評(píng)估 |
| 3.3.4 甲苯胺藍(lán)染色 |
| 3.3.5 NF-200+GFAP+β-TubulinⅢ染色 |
| 3.4 討論 |
| 3.5 結(jié)論 |
| 第4部分 構(gòu)建3D定向誘導(dǎo)去分化脂肪(d-DFAT)細(xì)胞聚合體 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 材料與方法 |
| 4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑 |
| 4.2.2 實(shí)驗(yàn)器械 |
| 4.2.3 相關(guān)試劑 |
| 4.2.4 方法 |
| 4.3 結(jié)果 |
| 4.3.1 3D d-DFAT細(xì)胞聚合體形成情況 |
| 4.3.2 3D d-DFAT細(xì)胞聚合體的組織學(xué)評(píng)估 |
| 4.4 討論 |
| 4.5 結(jié)論 |
| 總結(jié)與展望 |
| 致謝 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 攻讀學(xué)位期間的研究成果 |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
（3）股神經(jīng)分支基膜管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文縮略語(yǔ)表 |
| 前言 |
| 材料與方法 |
| 1 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 |
| 1.2 實(shí)驗(yàn)器材與試劑 |
| 1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 |
| 2 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 大鼠股神經(jīng)及其分支的獲取 |
| 2.2 應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)股神經(jīng)分支差異蛋白的表達(dá) |
| 2.3 使用透射電鏡對(duì)股神經(jīng)分支基底膜和髓鞘的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察 |
| 2.4 對(duì)神經(jīng)進(jìn)行化學(xué)去細(xì)胞處理 |
| 2.5 組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 2.6 DNA含量測(cè)定 |
| 2.7 使用掃描電子顯微鏡對(duì)股神經(jīng)分支的表面微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察 |
| 2.8 拉曼光譜分析 |
| 2.9 兩種神經(jīng)移植物的構(gòu)建 |
| 2.10 大鼠坐骨神經(jīng)缺損動(dòng)物模型的建立 |
| 2.11 坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)評(píng)價(jià) |
| 2.12 再生坐骨神經(jīng)的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 2.13 坐骨神經(jīng)靶器官的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 2.14 技術(shù)路線圖 |
| 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1 大鼠股神經(jīng)的獲取 |
| 2 差異表達(dá)蛋白的獲取及生物信息學(xué)分析 |
| 3 蛋白芯片驗(yàn)證的免疫熒光驗(yàn)證 |
| 4 股神經(jīng)組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)評(píng)價(jià) |
| 5 去細(xì)胞股神經(jīng)分支的評(píng)價(jià) |
| 6 坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)評(píng)價(jià) |
| 7 再生坐骨神經(jīng)的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 8 運(yùn)動(dòng)靶器官(腓腸肌)的組織學(xué)評(píng)價(jià) |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 文獻(xiàn)綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)介 |
| 石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 |
（4）透明質(zhì)酸水凝膠緩釋雪旺細(xì)胞外泌體修復(fù)坐骨神經(jīng)長(zhǎng)節(jié)段缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明 |
| 前言 |
| 研究現(xiàn)狀、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、外泌體的分離與鑒定 |
| 1.1 材料與方法 |
| 1.1.1 主要材料與試劑 |
| 1.1.2 主要儀器和設(shè)備 |
| 1.1.3 主要試劑配置方法 |
| 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 1.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 1.2 結(jié)果 |
| 1.2.1 雪旺細(xì)胞的形態(tài) |
| 1.2.2 雪旺細(xì)胞在體外的貼壁和增殖活性 |
| 1.2.3 雪旺細(xì)胞體外培養(yǎng)純度鑒定 |
| 1.2.4 雪旺細(xì)胞分泌的外泌體的形態(tài)和粒徑鑒定 |
| 1.2.5 雪旺細(xì)胞分泌的外泌體表面標(biāo)志物的鑒定 |
| 1.3 討論 |
| 1.4 小結(jié) |
| 二、外泌體的體外生物學(xué)功能及體外緩釋研究 |
| 2.1 材料與方法 |
| 2.1.1 主要材料與試劑 |
| 2.1.2 主要儀器和設(shè)備 |
| 2.1.3 主要試劑配置方法 |
| 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 |
| 2.2 結(jié)果 |
| 2.2.1 透明質(zhì)酸水凝膠包裹雪旺細(xì)胞外泌體及體外緩釋曲線 |
| 2.2.2 雪旺細(xì)胞外泌體促進(jìn)DRG組織軸突生長(zhǎng) |
| 2.2.3 雪旺細(xì)胞外泌體對(duì)雪旺細(xì)胞增殖的影響 |
| 2.2.4 雪旺細(xì)胞外泌體對(duì)雪旺細(xì)胞生物活性物質(zhì)表達(dá)的影響 |
| 2.2.5 雪旺細(xì)胞外泌體對(duì)DRG神經(jīng)元的生物活性物質(zhì)表達(dá)影響 |
| 2.3 討論 |
| 2.4 小結(jié) |
| 三、雪旺細(xì)胞外泌體促進(jìn)大鼠長(zhǎng)節(jié)段坐骨神經(jīng)缺損修復(fù) |
| 3.1 材料與方法 |
| 3.1.1 主要材料和試劑 |
| 3.1.2 主要儀器和設(shè)備 |
| 3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 |
| 3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 3.2 結(jié)果 |
| 3.2.1 掃描電鏡觀察電紡PCL導(dǎo)管大體及微細(xì)結(jié)構(gòu) |
| 3.2.2 靜電紡絲PCL神經(jīng)導(dǎo)管的力學(xué)參數(shù)和孔隙率 |
| 3.2.3 雪旺細(xì)胞外泌體促進(jìn)神經(jīng)軸突再生 |
| 3.2.4 NF-200和S100 對(duì)各組再生神經(jīng)的免疫熒光染色 |
| 3.2.5 三組大鼠坐骨神經(jīng)電生理參數(shù)比較 |
| 3.2.6 三組大鼠坐骨神經(jīng)指數(shù)比較 |
| 3.2.7 三組大鼠熒光金逆行示蹤 |
| 3.2.8 三組大鼠腓腸肌HE染色分析 |
| 3.3 討論 |
| 3.4 小結(jié) |
| 全文結(jié)論 |
| 論文創(chuàng)新點(diǎn) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明 |
| 附錄 |
| 綜述 外周神經(jīng)損傷修復(fù)的材料與治療進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)歷 |
（5）不同修復(fù)方法對(duì)周圍神經(jīng)損傷后GAP-43蛋白及其mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 1. 實(shí)驗(yàn)材料 |
| 1.1 主要試劑與材料 |
| 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 |
| 1.3 常用溶液的配制 |
| 2. 實(shí)驗(yàn)方法 |
| 2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹谱?/td> |
| 2.2 神經(jīng)標(biāo)本的制備 |
| 2.3 定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)GAP 43 在不同實(shí)驗(yàn)組中的mRNA表達(dá)量 |
| 2.4 蛋白質(zhì)印跡（Western blot，WB） |
| 3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 |
| 結(jié)果 |
| 1. 成功構(gòu)建大鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/td> |
| 2. 定量PCR檢測(cè)GAP-43 在不同實(shí)驗(yàn)組中的MRNA表達(dá)量 |
| 3. WESTERN BLOT法檢測(cè)再生神經(jīng)GAP-43 蛋白表達(dá)在不同實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)量 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 周圍神經(jīng)損傷的治療現(xiàn)狀及發(fā)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 中英文對(duì)照縮略詞匯表 |
| 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文 |
| 致謝 |
（6）面神經(jīng)缺損修復(fù)及神經(jīng)周瘢痕預(yù)防的相關(guān)研究（論文提綱范文）
| 目錄 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 殼聚糖導(dǎo)管預(yù)防周圍神經(jīng)瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 實(shí)驗(yàn)一 殼聚糖導(dǎo)管預(yù)防兔面神經(jīng)周瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)二 殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合透明質(zhì)酸預(yù)防大鼠坐骨神經(jīng)瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)三、殼聚糖導(dǎo)管植入對(duì)腮腺術(shù)后面神經(jīng)功能恢復(fù)的臨床效果觀察 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 第一部分 小結(jié) |
| 第二部分 GDNF 基因慢病毒載體的構(gòu)建、病毒的包裝及細(xì)胞轉(zhuǎn)染 |
| 實(shí)驗(yàn)一 GDNF 基因慢病毒載體的構(gòu)建及慢病毒的包裝 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)二、兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)鑒定 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)三、攜帶 EGFP 和 GDNF 的慢病毒轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 第二部分 小結(jié) |
| 第三部分 脫細(xì)胞神經(jīng)復(fù)合 GDNF 轉(zhuǎn)染的間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 實(shí)驗(yàn)一 周圍神經(jīng)脫細(xì)胞方法的改良 |
| 1 材料和方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)二、脫細(xì)胞神經(jīng)復(fù)合 GDNF 轉(zhuǎn)染的 MSCs 修復(fù)兔面神經(jīng)缺損 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 討論 |
| 4 小結(jié) |
| 附圖 |
| 實(shí)驗(yàn)三 同種異體神經(jīng)移植修復(fù)面神經(jīng)缺損的長(zhǎng)期隨訪觀察 |
| 1 材料與方法 |
| 2 結(jié)果 |
| 3 典型病例介紹 |
| 4 討論 |
| 5 小結(jié) |
| 附圖 |
| 第三部分小結(jié) |
| 全文總結(jié) |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述一 周圍神經(jīng)瘢痕的研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述二 脫細(xì)胞神經(jīng)移植研究進(jìn)展 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 英文縮略語(yǔ)詞表 |
| 個(gè)人簡(jiǎn)介 |
| 博士期間發(fā)表論文情況 |
| 致謝 |
（7）殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合NGF緩釋微球修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 NGF微球的制備及特性的研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 結(jié)果 |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 第二部分 殼聚糖導(dǎo)管復(fù)NGF緩釋微球修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 結(jié)果 |
| 3. 討論 |
| 4. 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 英文縮略語(yǔ)詞表 |
| 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況 |
| 致謝 |
（8）神經(jīng)組織工程支架或異種神經(jīng)移植在面神經(jīng)缺損中的應(yīng)用（論文提綱范文）
| 0 引言 |
| 1 資料和方法 |
| 1.1 資料來(lái)源 |
| 1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) |
| 1.3 資料提取 |
| 1.4 質(zhì)量評(píng)價(jià) |
| 2 結(jié)果 |
| 2.1 自體組織 |
| 2.2 異種移植物 |
| 2.3.1 導(dǎo)管支架 |
| 2.3.2 干細(xì)胞 |
| 2.3.3 許旺細(xì)胞 |
| 2.4 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 |
| 3 小結(jié) |
（9）神經(jīng)組織支架材料修復(fù)面神經(jīng)缺損的研究進(jìn)展（論文提綱范文）
| 1. 神經(jīng)組織支架材料 |
| 1.1 天然材料 |
| 1.2 合成材料 |
| 2. 支架材料與種子細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用 |
| 2.1 Sch w ann細(xì)胞 |
| 2.2 干細(xì)胞 |
| 3. 支架材料與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的聯(lián)合應(yīng)用 |
| 4. 其它 |
| 5. 問(wèn)題與展望 |
（10）復(fù)合橋與他克莫司修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文提綱范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符號(hào)說(shuō)明 |
| 引言 |
| 材料與方法 |
| 結(jié)果 |
| 討論 |
| 結(jié)論 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 綜述 |
| 致謝 |
四、自體神經(jīng)組織勻漿修復(fù)面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究（論文參考文獻(xiàn)）
- [1]四種冷凍保護(hù)劑玻璃化法保存人指固有神經(jīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 戴依娜. 遵義醫(yī)科大學(xué), 2021(01)
- [2]定向誘導(dǎo)去分化脂肪（d-DFAT）細(xì)胞對(duì)大鼠面神經(jīng)缺損的修復(fù)作用[D]. 唐安群. 南昌大學(xué), 2020(08)
- [3]股神經(jīng)分支基膜管修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 魏帥. 石河子大學(xué), 2019(01)
- [4]透明質(zhì)酸水凝膠緩釋雪旺細(xì)胞外泌體修復(fù)坐骨神經(jīng)長(zhǎng)節(jié)段缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王宇強(qiáng). 天津醫(yī)科大學(xué), 2019(02)
- [5]不同修復(fù)方法對(duì)周圍神經(jīng)損傷后GAP-43蛋白及其mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 梅思偉. 蘇州大學(xué), 2018(01)
- [6]面神經(jīng)缺損修復(fù)及神經(jīng)周瘢痕預(yù)防的相關(guān)研究[D]. 劉華蔚. 中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院, 2014(03)
- [7]殼聚糖導(dǎo)管復(fù)合NGF緩釋微球修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 劉華蔚. 中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院, 2011(10)
- [8]神經(jīng)組織工程支架或異種神經(jīng)移植在面神經(jīng)缺損中的應(yīng)用[J]. 寧麗娜,熊杰. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù), 2011(21)
- [9]神經(jīng)組織支架材料修復(fù)面神經(jīng)缺損的研究進(jìn)展[J]. 劉華蔚,溫偉生. 口腔頜面修復(fù)學(xué)雜志, 2010(02)
- [10]復(fù)合橋與他克莫司修復(fù)兔面神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 李清華. 昆明醫(yī)學(xué)院, 2008(10)
標(biāo)簽：面神經(jīng)論文; 殼聚糖論文;